临床检验技师-微生物检验(2019)讲义第三十章_细菌对药物的敏感试验-(994)

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第三十章细菌对药物的敏感试验本章内容

一、药敏试验中抗菌药物的选用

二、细菌对药物的敏感试验

扩散法（ K-B 法）

稀释法

杀菌试验

体外联合药物敏感试验

厌氧菌、结核分枝杆菌及酵母样真菌的体外抗菌药物敏感试验

体内抗菌药物的活性与浓度测定

三、细菌的耐药性和产生机制

细菌耐药的机制

细菌耐药性表型的检测

药敏试验中抗菌药物的选用

原则：

·按临床需要选用抗菌药物的种类

·同类抗菌药物仅选一个作为代表

·根据测定细菌的种属和感染部位进行选药

1. 青霉素类：青霉素与青霉素结合蛋白（PBP ）结合，抑制细菌细胞壁合成。

作用于不产青霉素酶的革兰阳性球菌、革兰阴性球菌、厌氧菌；产青霉素酶的葡萄球菌；大部分大肠

埃希菌、奇异变形杆菌、流感嗜血杆菌等革兰阴性杆菌；产β - 内酰胺酶肠杆菌科细菌和假单胞菌等。

2.头孢菌素类：头孢菌素与青霉素结合蛋白结合，发挥抑菌和杀菌效果。

随着代次增加对于革兰阳性球菌的抗菌效果减弱，对革兰阴性杆菌的作用增强。第四代头孢菌素对阳

性球菌与阴性杆菌作用几乎相同，并具有抗假单胞菌的作用。

3.其他β - 内酰胺类

（1）单环类：氨曲南等。对 G －菌作用强，如脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌、流感嗜血杆菌、铜绿假单胞菌。

对 G＋和厌氧菌无作用。

（2）拉氧头孢类：对 G ＋菌有较好的抗菌活性，对厌氧菌有高度抗菌活性，但对非发酵菌无效。

（3）碳青霉素类：除了嗜麦芽窄食单胞菌、耐甲氧西林葡萄球菌、尿肠球菌和某些脆弱类杆菌耐药外，

对几乎所用的由质粒或染色体介导的β- 内酰胺稳定。

（4）β- 内酰胺酶抑制剂的复合制剂：与β- 内酰胺类抗菌药物联用能增强后者的抗菌活性，如克拉维酸、舒巴坦和他唑巴坦。

4. 氨基苷类：吸附作用造成膜的损伤；核糖体30S 小亚基。

氨基苷类抗菌药物对需氧革兰阴性杆菌有较强的抗菌活性，对阳性球菌有一定的活性。

5. 喹诺酮类：通过外膜空蛋白和磷脂渗透进入细菌细胞；作用于DNA 旋转酶，干扰细菌DNA 合成。第二代喹诺酮类对革兰阴性和阳性细菌均有作用；

第三代喹诺酮类对革兰阳性菌作用高于第二代的4～8 倍，对厌氧菌亦有作用。

6.大环内酯类：细菌核糖体50S 大亚基；肺部浓度较血清浓度高；新一代具有免疫调节功能。

对流感嗜血杆菌、军团菌、支原体、衣原体等具有强大的抗菌作用。

＋－＋－

G 球菌G 球菌G 杆菌G 杆菌厌氧菌四体真菌

青霉素青霉素青霉素青霉素

两性霉素 B

头孢菌素头孢菌素

5－氟胞嘧啶

碳青霉素

吡咯类

拉氧头孢拉氧头孢拉氧头孢

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单环类单环类

氨基苷氨基苷

喹诺酮喹诺酮三代喹诺酮

大环内酯大环内酯

细菌对药物的敏感试验

细菌对抗菌药物的敏感试验（药敏试验）是指在体外测定药物抑制或杀死细菌能力的试验。主要用于：

①选择效果最佳的药物治疗；

②了解耐药性变迁；

③某些细菌的鉴定；

④流行耐药菌的防治。

扩散法（ K-B 法）

纸片琼脂扩散法：半定量；标准方法。

·原理

将含有定量抗菌药物的纸片（药敏纸片）贴在已接种待检菌的琼脂平板表面特定部位，形成递减的梯

度浓度，在纸片周围抑菌浓度范围内的细菌生长被抑制，形成透明的抑菌圈。

抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度，并与该药对待检菌的最低抑菌浓度（MIC）呈负相关，即抑菌圈愈大， MIC 愈小。

·方法

1. 培养基：水解酪蛋白（Mueller-Hinton，M-H）琼脂；链球菌属等细菌须在M-H 琼脂中加入5% 的脱纤维羊血。嗜血杆菌属细菌需补充1%血红蛋白（含V 因子）和1%X 因子复合物。

2. 抗菌药物纸片：专用药敏纸片；纸片应贴得均匀，各纸片中心距离不小于24mm ，纸片距平板内缘应

大于 15mm 。

3. 菌液：以无菌棉拭蘸取已制备好的菌液，并在管壁上拧压一次，均匀涂布接种于M-H 琼脂表面，涂

布三次。

4.培养平板室温放置 15min 再倒放于 35 ℃培养 16 ～ 18h 后阅读结

果。·结果判读：

敏感（S ）：常规剂量的测定药物在体内所达到的浓度能抑制或杀灭待测菌。

中介度（ I ）

耐药（ R ）：常规剂量的测定药物在体内达到有效浓度时不能抑制检测菌生长。

稀释法：定量

·原理

根据稀释培养基的不同，分为肉汤稀释法和琼脂稀释法。琼脂稀释法是细菌药敏试验的金标准。肉汤稀释法是以水解酪蛋白（M-H ）液体培养基将抗菌药作不同浓度的稀释，然后接种待测菌。

稀释法所测得的某抗菌药物抑制待测菌生长的最低浓度为最低（或最小）抑菌浓度（MIC ），稀释法也可测定最小杀菌浓度（MBC ）。

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