植物总酚(TP)含量检测试剂盒说明书 微量法

植物总酚（TP）含量检测试剂盒说明书微量法

注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。

货号：BC1345

规格：100T/48S

产品内容：

提取液：60%乙醇，自备。

试剂一：液体5mL×1瓶，4℃保存。

试剂二：液体8mL×1瓶，4℃保存。

标准品：液体1mL×1支，4℃保存。1mg/mL单宁酸标准溶液。

产品说明：

植物酚类物质具有清除自由基，抗氧化抗衰老的作用，具有较高的营养价值和医疗保健作用而广泛应用于化妆品、食品、医药等领域。

在碱性条件下，酚类物质将钨钼酸还原，产生蓝色化合物，在760nm处有特征吸收峰，测760nm处的吸光值，即可得样品总酚含量。

自备实验用品及仪器：

天平、烘箱、粉碎仪、筛子、超声破碎仪、60%乙醇、离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、蒸馏水。

操作步骤：

一、总酚提取：

将样本烘干至恒重，粉碎，过40目筛之后，称取约0.1g，加入2.5mL提取液，用超声提取法进行提取，超声功率300W，破碎5s，间歇8s，60℃，提取30min。12000rpm，25℃，离心10min，取上清，用提取液定容至2.5mL，待测。

二、标准品制备：

将1mg/mL单宁酸标准溶液二倍稀释至0.625、0.3125、0.1562、0.0781、0.0391、0.0195、0.0098、

0.0049、0.0024、0.0012mg/mL，待测。

三、测定操作表：

1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至760nm，蒸馏水调零。

2、操作表

对照管测定管标准管空白管样本待测液（μL）1010-标准液（μL）10

蒸馏水（μL）10

试剂一（μL）505050

混匀，室温静置2min

试剂二（μL）50505050

蒸馏水（μL）140909090

混匀，室温静置10min，于微量玻璃比色皿/96孔板中测定760nm处的吸光值。空白管只测一次。

四、总酚含量计算

1、标准曲线绘制：

以不同浓度的单宁酸为x轴，ΔA（A标准-A空白）为y轴绘制标准曲线y=kx+b。

2、植物总酚含量计算：

将ΔA=A测定-A对照带入标准曲线，求x（mg/mL）。

（1）按样本鲜重计算

总酚含量（mg/g鲜重）=x×V提取÷W= 2.5x÷W

（2）按样本蛋白浓度计算

总酚含量（mg/mg prot）=x×V提取÷（V提取×Cpr）=x÷Cpr

V提取：加入提取液体积，2.5mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样品质量，g。注意事项：

1.OD值大于0.8，样品适当稀释再测定，注意计算公式里乘以稀释倍数。

2.试剂一对皮肤有一定的刺激性，请操作时做好防护措施。