ELISA法检测乙肝五项干扰因素和防控措施的探讨

ＥＬＩＳＡ法检测乙肝五项干扰因素和防控措施的探讨

【摘要】目的:探讨临床检验中固相酶联免疫法检测乙肝五项的干扰因素和防控措施。方法:通过临床检验找出问题,查询资料,分析原因,及时找出最佳处理方法。结果:标本因素包括应将标本充分凝固再分离血清,标本应防止溶血、细菌污染、乳糜血等,标本最好当天测定;患者因素包括患者体内存在非特异性干扰物质,患者输血后或抗病毒治疗过程中;操作因素包括操作者的责任心以及操作过程中的育温、洗板和显色;另外还与质量控制以及试剂因素有关。结论:及时纠正各种因素带来的干扰,认真操作,将准确可靠的检验结果交给临床医生和病人,以指导临床治疗工作。

【关键词】ELISA法;乙肝五项;干扰因素;防控措施

1标本因素

1.1标本采集应用标本速凝管使其充分凝固(37℃水浴箱20min以上)再分离血清,以保证血清中不含有纤维蛋白原,影响血清量,以防造成假阳性结果。

1.2标本应防止溶血,细菌污染,乳糜血等现象的出现因溶血标本和乳糜血标本均会造成错误的结果。被细菌污染的标本,因菌体中可能含有辣根过氧化物酶,会在测定中导致非特异性显色。

1.3采集标本最好当天测定,不要在冰箱保存过久因为IgG可聚合成多聚体,造成假阳性结果。另外标本在冰箱内放置过久,抗原、抗体的免疫活性减弱,可造成假阴性结果。如果不能立即测定,应放置在4～8℃冰箱保存,但不能超过3d;检测时,取出后标本必须置室温平衡至室温,再进行操作。

2患者因素

有些患者由于病理的关系,身体内存在一些非特异性干扰物质,较常见的有嗜异性抗体、补体、类风湿因子、胶原组织病变等。在乙肝五项测定中,这些物质均能与酶标的第二抗体Fc段结合,从而导致假阳性结果。在平时的检验工作中,这些内在的因素不可能将所有的阳性标本拿来证明它是否有这些物质的存在,所以克服起来很难。但检验人员应积极与临床沟通,了解患者病情,尽量找出原因,排除和克服这些因素。

有些乙肝患者输血后或抗病毒治疗过程中,存在许多干扰因素可影响乙肝酶标五项的检测结果。因为输入正常人的血液,可能含有高浓度抗体,中和了乙肝患者的抗原,可使检测结果出现低浓度甚或阴性结果等现象。抗病毒药物能抑制病毒在细胞内复制,增强体内NK细胞活性,可使T、B细胞功能明显增强,促进吞噬细胞的作用,并抑制DNA的合成及HBV的增殖,易使HBV病毒耐受与变异,给检测结果带来困难。

ELISA检测方法有哪些

ELISA检测方法有哪些？ 酶联免疫吸附测定（Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay，ELISA）是研究蛋白抗体的重要方法。它是采用抗原与抗体的特异结合将被测物质与酶标抗体进行直接或间接结合，然后通过标记酶与底物产生颜色反应进行定性和定量分析。那么，它与其它检测方法的灵敏度及您了解吗？跟着小编往下看 ELISA通常分为四种类型：直接法、间接法、竞争法、夹心法等，直接上图： 直接法（Direct ELISA）仅需要抗原和酶标一抗，操作简便，可避免交叉反应，然而该方法要求酶标一抗有较高的特异性要求，同时也并非所有的一抗适合标记处理。直接法在实际运用中并不多见，它并不能对样本中抗体进行定量分析，因为样本中抗体是非酶标抗体，无法进行后续显色，但是该法经过改进就是竞争性ELISA方法，见后文。 间接法（Indirect ELISA）使用了二抗增加信号强度，也使抗体的选择多样化，然而间接法容易产生交叉反应。间接法只能用于测定抗体，主要用于疾病的诊断，其优点是只需要改变包被抗原，酶标抗体是通用的。 夹心法（Sandwich ELISA）分为双抗体夹心法和双抗原夹心法： 双抗体夹心法中抗原被两个抗体——捕捉抗体和检测抗体，结合于不同位点。捕捉抗体固定于载体上，检测抗体通过结合抗原进行显色分析。应用于双抗体夹心法检测的抗体需是单抗，而且对同一抗原结合位点不同，如此才能避免交叉反应或两种抗体竞争性结合同一位点。夹心法具有高灵敏度、高专一性的优势，但该法只适用于有多个结合位点的抗原检测，主要用于检测各种大分子抗原——例如在医学检测中测定HBsAg、HBeAg、AFP等。由于双抗体夹心法特异性高，在检测过程中有时会将样本和酶标抗体同时加入进行反应（一步法），此时如果样本中抗原含量过高会导致其与固相抗体和酶标抗体均有结合而不形成“夹心复合物”，

影响血常规检验的因素

尿钠测定正常人体钠40％存在于骨骼中，其余分布于体液中。每天人体钠摄入量与排出量相当，钠可由消化道、皮肤及肾脏排出。肾脏排钠受醛固酮及身体对钠需要的调解，并伴随着氯化物一起排泄。 【参考值】 130～260mmol/24h尿(间接离子选择性电极法) 【临床意义】 1．临床检测尿钠浓度主要用于肾上腺皮质功能和原发性醛固酮症的评价。 2．尿钠增高见于酮症酸中毒、失盐性肾炎、慢性肾盂肾炎、间质性肾炎及多囊肾等肾小管功能缺陷、尿崩症、使用利尿药及输注大量盐液等。 3．尿钠降低见于皮质醇增多症、原发性醛固酮症、肾前性少尿、充血性心力衰竭及长期低盐饮食、腹泻、严重呕吐、大面积烧伤等。 【注意事项】 测定标本为24小时尿。 二尿钾测定 人体内总钾量为50mmol/kg，完全从食物中供给，经肠道吸收，主要由肾脏排泄。钾由肾小球滤过后，大部分由近曲小管及髓襻重吸收，仅有10％的滤过量经肾远曲小管在此处受醛固酮调节钾的排泄量。体液酸碱平衡的改变也影响肾脏对钾的排泄。血钾无肾阈，不能阻止钾的排泄，即使不进含钾食物或低血钾时，机体每天仍要排钾1.5g。 【参考值】 25～100mmol/24h尿(间接离子选择性电极法) 【临床意义】 1．尿钾增加见于①内分泌紊乱，如原发性醛固酮症、肾素瘤、长期使用ACTH与肾

上腺皮质激素等；②糖尿病酮症、代谢性碱中毒、使用排钾利尿药、含高钾的食物等；③肾小管功能不全，如肾小管酸中毒、慢性肾炎、肾盂肾炎等。 2．尿钾减少见于艾迪生病、肾衰竭、酸中毒、选择性醛固酮缺乏症、使用保钾利尿药等。 【注意事项】 同尿Na测定。 三尿氯化物测定 氯离子是细胞外液的主要阴离子，构成盐酸作为胃酸基本成分。氯化物以氯化钠形式存在，由食物和食盐供给，80％随尿排出，5％随粪便排出，其余经皮肤排出。氯可自由地经肾小球滤过，99％被肾小管重吸收，1％从尿中排出。 【参考值】 110～250 mmol/24h尿(间接离子选择性电极法) 【临床意义】 1．尿氯化物增高见于肾小管损害、肾上腺皮质功能不全、糖尿病酮症、碱中毒、使用利尿药及氯化物摄入过多等。 2．尿氯化物降低见于醛固酮症、高氯性酸中毒、肾病晚期少尿、肾上腺皮质功能亢进、使用肾上腺皮质激素、肺炎、烧伤及大量出汗、呕吐、腹泻等。 【注意事项】 同尿Na测定。 四尿钙测定 成人体内钙总量为400～800g，99％的钙分布在骨骼和牙齿上。人体每天排出的钙80％经肠道排出，20％经肾脏由尿液排出。每天由肾小球滤出10g钙，其中一半在近曲小管被重吸收，其余在髓襻、远曲小管及集合管中被吸收，尿中排钙量只占滤过量的15％

HIV实验室ELISA检测方法

人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂盒（酶联免疫法） 1 试剂信息 试剂厂家：北京万泰生物药业股份有限公司 2 样本要求 2.1 本试剂使用样品为人血清或血浆，含有EDTA、柠檬酸钠或肝素等抗凝剂的样品可用于本实验。 2.2 不能检测含悬浮纤维蛋白或聚集物，重度溶血的样品。 2.3 样品中应无微生物，可在2-8℃储存1周，长期储存应低温冻存，避免反复冻融。 2.4 使用前请将样品室温平衡30分钟以上，冷冻样品实验前需混匀。 3 检测步骤 3.1 配液：将浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水20倍稀释。 3.2 编号：将样品对应微孔板按序编号，每板应设阴性对照3孔，阳性对照1型、2型各1孔、空白对照1孔。 3.3 加样：分别在相应孔中加入待测样品或阴、阳性对照100μL。 3.4 温育：用封板膜封板后，置37±1℃温育60±2分钟。 3.5 洗板：小心揭掉封板膜，用洗板机洗涤5遍，最后一次尽量扣干。 3.6 加酶：每孔加入酶标试剂100μL，空白孔除外。 3.7 温育：用封板膜封板后，置37±1℃温育60±2分钟。 3.8 洗板：操作同步骤5。 3.9 显色：每孔加入显色剂A、B液各50μL，轻轻震荡混匀，37±1℃避光显色30±1分钟。 3.10 测定：每孔加入终止液50μL，轻轻振荡混匀，10分钟内测定结果。 4 参考值 临界值（CUTOFF）计算：临界值=阴性对照A均值+0.12. 5 检验结果的解释 5.1 阴性对照孔A值≦0.10，阳性对照A值≧0.80，否则试验无效。 5.2 若有1孔阴性对照A值大于0.1应舍弃，若两孔或两孔以上阴性对照A值大于0.1，应重复试验。

5.3 阴性判定：样品A值<临界值（CUTOFF）者为HIV抗体阴性。 5.4 阳性判定：样品A值≧临界值（CUTOFF）者为HIV抗体阳性。（注意：初试阳性应重新取样双孔复试。复试阳性者应按《全国艾滋病检测技术规范》送HIV确证实验室进行确证实验。）

血常规检验的质量控制流程

血常规检验的质量控制流程 1目标 使血常规检验的受到全程质量控制，确保检测结果准确性。 2质量控制 血常规检验质量控制分为：分析前、分析中和分析后3个方面。 2.1血常规检验分析前的质量控制 2.1.1检验单的申请：检验申请单中应包含足够的信息，如患者的姓名、年龄、性别、住院科室、床号、疾病的诊断，可能干扰实验结果的服药史、特殊的病理变化，与血常规检验有关的既往史等患者信息，以便检验人员查对。申请的检验项目应准确无误，如需特殊检验应注明。 2.1.2患者的准备：许多生理因素可引起血细胞数的改变，如剧烈运动、饱餐、饥饿、紧张等，常使白细胞数增加，所以在采血前应尽量避免这些生理因素的影响。在采血前患者应把自己的生理状态、病理状态告知医生，以便确定最佳的采血时间。 2.1.3标本的制备：高质量的标本是保证检验结果准确、可靠的前提，其最基本的要求是保证血液标本中各项细胞形态的完整。 2.1.4标本的采集 2.1.4.1详见《检验科标本采集手册》 2.1.4.2抗凝剂：血常规标本必须经抗凝剂抗凝处理。 2.143标本采集后，立即将抗凝标本轻轻180度混匀8-10次。最后再次核对 病人姓名和号码。 2.1.5标本的运输和储存：采血完成后应尽快检测，，尽量减少运输和储存的时间。因为标本储存过程中，血细胞的代谢活动、蒸发作用和升华作用、化学反应、微生物降解等因素会直接影响标本的质量。如不能及时送检的标本，应在4-8 C 低温保存，但不要超过4小时。 3血常规检验分析中的质量控制 3.1测定时间对标本的影响 3.1.1标本取好后，放置的时间长短会对标本的质量产生影响。有研究表明，用EDTA抗凝的静脉血标本,在标本收集后的8h内（室温）检测,可以得到最佳的检测

ELISA检测

ELISA检测 ----- 固相捕获法测IgM抗体 在病原体急性感染的诊断中，通常需检测IgM抗体，如急性甲型肝炎诊断的血清抗HAVIgM检测、急性乙型肝炎病毒感染的血清抗HBc lgM检测和TORCH项目的系列IgM检测等。IgM抗体也有使用间接法测定的，如目前在市场上可见到的有些TORCH系列的IgM检测试剂盒。在使用间接法测IgM抗体时，由于临床血清样本中含有高浓度的IgG抗体，其中部分特异IgG抗体将与IgM抗体竞争与固相抗原结合，从而干扰IgM抗体的检测。 因此，在使用间接法测定IgM抗体时，通常须将血清样本用抗人IgG抗体或SPA预处理，以去除IgG的干扰。这样不但测定较为繁琐，而且影响测定的特异性和灵敏度。目前，常用的IgM抗体检测方法为捕获法，即以抗人IgM抗体(抗人u链)作为固相抗体，当加入血清标本时，其中的IgM类抗体(特异的和非特异的)即可被固相抗体捕获，再加入特异抗原，其与固相上捕获的IgM抗体结合后，加入酶标抗特异抗原的抗体，最后加入底物显色。具体操作步骤如下： 1．首先将抗人IgMbt链抗体于碳酸盐缓冲液中40c下过夜包被聚苯乙烯等固相，形成固相抗体，洗涤去除未与固相结合或结合不紧的抗体后，用小牛血清或牛血清白蛋白等封闭，洗涤去除未结合的部分及杂质。 2．加入含待测IgM抗体的临床样本如血清等，温育一定时间后洗板；此时，待测样本中的IgM抗体就会与固相上的抗P链抗体反应而吸附于固相上。 3．加入特异的抗原如HAV抗原、HBcAg等，温育一定时间后洗板；此时，特异抗原就会与固相上的特异IgM抗体发生反应。 4．加入酶标记的抗特异抗原的抗体，温育一定时间后洗板；此时，在固相上即形成相应的抗原抗体复合物。 5．加入酶底物，温育显色测定 本方法要着重注意的是RF(1gM类)及其他非特异IgM的干扰。RF(1gM类)由于其能与固相抗人u 链抗体结合，并可与随后加入的酶标抗体(动物IgG)反应，从而导致假阳性反应。而非特异IgM由于其

ELISA检测方法

ELISA（酶联免疫吸附测定，enzyme linked immunosorbent assay）指将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上，利用抗原抗体结合专一性进行免疫反应的定性和定量检测方法。 基本原理： ①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。 ②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。 ③在测定时，把受检标本（测定其中的抗体或抗原）和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。 ④加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅有无定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，故可极大地放大反应效果，从而使测定方法达到很高的敏感度。 双抗夹心法 夹心法常用于检测大分子抗原，一般的操作步骤为: ①将具有专一性的抗体固著于塑胶孔盘上，完成后洗去多余抗体； ②加入待测检体，检体中若含有待测的抗原，则其会与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结； ③洗去多余待测检体，加入另一种对抗原专一的一次抗体，与待测抗原进行键结； ④洗去多余未键结一次抗体，加入带有酶的二次抗体，与一次抗体键结； ⑤洗去多余未键结二次抗体，加入酶底物使酵素呈色，以肉眼或仪器读取呈色结果。 间接法 间接法常用于检测抗体，一般的操作步骤为： ①将已知的抗原固著于塑胶孔盘上，完成后洗去多余的抗原。

②加入待测检体，检体中若含有待测的一次抗体，则其会与塑胶孔盘上的抗原进行专一性键结。 ③洗去多余待测检体，加入带有酶的二次抗体，与待测的一次抗体键结。 ④洗去多余未键结二次抗体，加入酶底物使酶呈色，藉仪器（ELISA reader）测定塑胶盘中的吸光值（OD值），以评估有色终产物的含量即可测量待测抗体的含量。 竞争法 竞争法是一种较少用到的ELISA检测机制，一般用于检测小分子抗原，其操作步骤为： ①将具有专一性的抗体固著于塑胶孔盘上，完成后洗去多余抗体； ②加入待测检体，使检体中的待测抗原与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结； ③加入带有酶的抗原，此抗原也可与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结，由于塑胶孔盘上固著的抗体数量有限，因此当检体中抗原的量越多，则带有酶的抗原可键结的固著抗体就越少，亦即，两种抗原皆竞相与塑胶孔盘上抗体键结，即所谓竞争法之由来。 ④洗去检体与带有酶的抗原，加入酶底物使酶呈色，当检体中抗原量越多，代表塑胶孔盘内留下之带有酶的抗原越少，显色也就越浅。 注：当需要侦测无法获得两种以上单一性抗体的抗原，或是不易得到足够的纯化抗体以固著于孔盘上时，一般会考虑使用竞争法ELISA。

血常规检查的影响因素分析

血常规检查的影响因素分析 发表时间：2015-10-13T10:21:44.730Z 来源：《河南中医》2015年5月供稿作者：谢莉 [导读] 射洪县人民医院四川根据相关文献记载，患者的生理因素、试剂因素、仪器因素、人为因素等对血常规检验结果的影响很大。谢莉 （射洪县人民医院四川遂宁 629200） 【摘要】目的：探讨血常规检查的影响因素，提高检验结果的准确性和可靠性。方法：采集80例健康志愿者的静脉血和末梢血，比较检验结果；同进在血样中加入EDTA-K2抗凝剂，在室温下分别于即刻、30 min、2 h、6 h采用全自动血细胞分析仪进行分析，比较各参数差异有无统计学意义，总结影响血常规检查的因素。结果：静脉血与末梢血WBC、RBC、HB、PLT的数值差异均有统计学意义（P＜ 0.05）；2 h内血样各指标变化差异无统计学意义（P＞0.05），6 h血样指标与即刻测定的指标差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：采血部位不同、静置时间不同会对血常规检查结果有一定影响，如条件允许应以静脉血检测血常规、2 h以内检测为宜。【关键词】血液常规；影响因素；采血部位；时间 【中图分类号】R446.1 【文献标识码】B 【文章编号】1003-5028（2015）5-0190-01 【Abstract】Objective:To explore the influence factors of blood routine examination, to improve the accuracy and the reliability of the test results. Methods :Tcollect 80 cases of healthy volunteers with venous blood and peripheral blood, sums up the impact factors ofblood check. Results:Of the numerical difference in venous blood and peripheral blood WBC, a statistically significantdifference of 6 blood indexes and H indexes were measured immediately (P < 0.05).Conclusion :blood sampling sites of different standing time, blood routine examination within 2 h testing is appropriate. 【Keywords】blood routine; influencing factors; blood collecting location;time 根据相关文献记载，患者的生理因素、试剂因素、仪器因素、人为因素等对血常规检验结果的影响很大[1]。为探讨血常规检查的影响因素，将80例健康志愿者的血常规检验结果进行分析，现报告如下。 1 资料与方法 1.1 一般资料：选择8例健康志愿者，其中男48例，女32例，年龄20～42岁，平均（33.8±5.6）岁。体温（腋窝温度）＜37.2℃，血压90～130/60～90 mm Hg，平素体健，无慢性疾病史。计数仪使用Backman Counter血液细胞计数仪，EDTA-K2抗凝剂。 1.2 方法：80例健康志愿者同时采集静脉血和末梢血，静脉血采自肘部，末梢血采自食指或无名指内侧面，由专人操作，严格按照程序进行。血样分为2份，其中一份立即检测，用于比较静脉血与末梢血指标是否存在差异，另一份加入EDTA-K2抗凝剂，在室温下分别于即刻、30 min、2 h、6 h采用全自动血细胞分析仪进行分析。 1.3 统计学方法：计量资料以均数±标准差表示，应用SPSS 11.0软件进行统计分析，组间差异的比较采用t检验，率的比较采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。 2 结果 2.1 不同采血部位对血常规结果的影响：静脉血与末梢血WBC、RBC、HB、PLT的数值差异均有统计学意义（P＜0.05），80例健康志愿者静脉血与末梢血检验结果见表1。 ①注：与即刻进行血常规检查的数据比较，①P＜0.05 3 讨论 根据相关文献记载，患者的生理因素、试剂因素、仪器因素、人为因素等对血常规检验结果的影响很大[2]。血液分析仪没有进行校准或使用一些不规范的血细胞分析仪也会影响检验的结果[3]。如选择患者状态良好的采血时机，定期对血液分析仪进行校验，加强对采血员的培训等可以有效的避免血液常规检查中的误差[4]。结果静脉血与末梢血WBC、RBC、HB、PLT的数值差异均有统计学意义（P＜0.05）；2 h内血样各指标变化差异无统计学意义（P＞0.05），6 h血样指标与即刻测定的指标差异有统计学意义（P＜0.05）。通过以上研究，我们在临床工作中如条件允许应以静脉血检测血常规、2 h以内检测为宜。 参考文献： [1]杨昌明.血液常规检查影响因素的分析探讨[J].中国药物经济学,2012,10(5): 39-40 . [2]张红梅,阮朝良.血液常规检查的影响因素研究[J].中国保健营养（下旬刊）2013,54(9): 753. [3]张璐靓,赵宪文.血液常规检查的影响因素研究[J].中国医药指南, 2012,?10(10):57. [4]张春兰.血常规检查的影响因素分析[J].吉林医学,2011,32(9):56.

ELISA 直接法与间接法的区别

ELISA可用于测定抗原,也可用于测定抗体.在这种测定方法中有三个必要的试剂1)固相的抗菌素原或抗体,即"免疫吸附剂"(immunosorbent);(2)酶标记的抗原或抗体,称为"结合物"(conjugate);(3)酶反应的底物.根据试剂的来源和标本的情况以及检测的具体条件,可设计出各种不类型的检测方法. ELISA可分类是根据抗原抗体的结合情况来分类的。 主要有以下几种类型:（直接法也称一步法） 1 双抗体夹心法测抗原 双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法,操作步骤如下: 1) 将特异性抗体与固相载体联结,形成固相抗体.洗涤除去未结合的抗体及杂质. 2) 加受检标本,保温反应.标本中的抗原与固相抗体结合,形成固相抗原抗体复合物.洗涤除去其他未结合物质. 3) 加酶标抗体,保温反应.固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合.彻底洗涤未结合的酶标抗体.此时固相载体上带有的酶量与标本中受检抗原的量相关. 4) 加底物显色.固相上的酶催化底物成为有色产物.通过比色,测知标本中抗原的量.在临床检验中,此法适用于检验各种蛋白质等大分子抗原,例如HBsAg,HBeAg,AFP,hCG等.只要获得针对受检抗原的异性抗体,就可用于包被固相载体和制备酶结合物而建立此法.如抗体的来源为抗血清,包被和酶标用的抗体最好分别取自不同种属的动物.如应用单克隆抗体,一般选择两个针对抗原上不同决定簇的单抗,分别用于包被固相载体和制备酶结合物.这种双位点夹心法具有很高的特异性,而且可以将受检标本和酶标抗体一起保温反应,作一步检测. 在一步法测定中,当标本中受检抗原的含量很高时,过量抗原分别和固相抗体及酶标抗体结合,而不再形成"夹心复合物".类同于沉淀反应中抗原过剩的后带现象,此时反应后显色的吸光值(位于抗原过剩带上)与标准曲线(位于抗体过剩带上)某一抗原浓度的吸光值相同(参见 1.3.2,图1-4),如按常法测读,所得结果将低于实际的含量,这种现象被称为钩状效应(hook effect),因为标准曲线到达高峰后呈钩状弯落.钩状效应严重时,反应甚至可不显色而出现假阴性结果.因此在使用一步法试剂测定标本中含量可异常增高的物质(例如血清中HBsAg,AFP和尿液hCG等)时,应注意可测范围的最高值.用高亲和力的单克隆抗体制备此类试剂可削弱钩状效应. 假使在被测分子的不同位点上含有多个相同的决定簇,例如HBsAg的a决定簇,也可用针对此决定的同一单抗分别包被固相和制备酶结合物.但在HBsAg的检测中应注意亚型问题,HBsAg有adr,adw,ayr,ayw4个亚型,虽然每种亚型均有相同的a决定簇的反应性,这也是用单抗作夹心法应注意的问题. 双抗体夹心法测抗原的另一注意点是类风湿因子(RF)的干扰.RF是一种自身抗体,多为IgM型,能和多种动物IgG的Fc段结合.用作双抗体夹心法检测的血清标本中如含有RF,它可充当抗原成份,同时与固相抗体和酶标抗体结合,表现出假阳性反应.采用F(ab')或Fab片段作酶结合物的试剂,由于去除了Fc段,从而消除RF的干扰.双抗体夹心法ELISA试剂是否受RF的影响,已被列为这类试剂的一项考核指标。 双抗体夹心法适用于测定二价或二价以上的大分子抗原,但不适用于测定半抗原及小分子单价抗原,因其不能形成两位点夹心. 2 双抗原夹心法测抗体 反应模式与双抗体夹心法类似.用特异性抗原进行包被和制备酶结合物,以检测相应的抗体.与间接法测抗体的不同之处为以酶标抗原代替酶标抗抗体.此法中受检标本不需稀释,可直接用于测定,因此其敏感度相对高于间接法.乙肝标志物中抗HBs的检测常采用本法.本法关键在于酶标抗原的制备,应根据抗原结构的不同,寻找合适的标记方法. 3 间接法测抗体 间接法是检测抗体常用的方法.其原理为利用酶标记的抗抗体(抗人免疫球蛋白抗体)以检测与固

影响血液检测结果的八大因素

影响血液检测结果的八大因素 1 运动: 肌肉活动的影响可分短暂性的和持续性的两类,短暂性影响为血浆脂肪酸含量,可因运动而暂时减少,而后渐渐增加而恢复。丙氨酸可因运动暂时增加达180%,而乳酸则可增加至300%。受到持续性影响的主要是一些肌肉有关酶,如肌酸激酶、醛缩酶、乳酸脱氢酶等。据称,一场60分钟的手球训练赛后11小时,肌酸激酶活性比赛前仍增加达125%,长期坚持体育锻炼还会提高性激素水平,因此采血前宜安静,不进行过大的活动。 2 食物: 进餐后血浆脂肪、蛋白质、糖类均有所增加。有人研究:高脂餐后2~4小时采血,多数人碱性磷酸酶含量增高,主要来自肠源性同工酶,且与血型有密切关系,O型或B型增高更明显。一般认为高蛋白质餐使血浆尿素、血氨增加,但不影响肌酐含量,高比例的不饱和脂肪酸食物,可减低胆固醇含量;香蕉、菠萝、番茄可使尿液5-羟色胺增加数倍;含咖啡因饮料,可使血浆游离脂肪酸增加,并使肾上腺和脑组织释放儿茶酚胺。食物如含有动物血液,可引起粪隐血假阳性。故在做相应检验时,应对食物有一定的控制。 3 过度空腹: 一般血液生化检验要求病人晚餐后禁食,至次日晨采血,空腹约12~14小时。但过度空腹,若达24小时以上,对某些检验项目有较大影响,例如血清胆红素可因空腹48小时而增加240%;血糖可因空腹过长而减少为低血糖;血脂空腹过度,甘油三酯、甘油、游离脂肪酸反有增加,而胆固醇无明显改变。故空腹并非越长越好,近年国外有人主张胆固醇单项检验,不必空腹抽血。 4 饮酒: 饮酒后使血浆乳酸、尿酸盐、己醛、乙酸盐增加。长期饮酒者高密度脂蛋白胆固醇偏高,平

均红细胞体积增加,谷氨酰转肽酶(GGT)亦较不饮酒的人为高,甚至可以将这项作为嗜酒者的筛选检查。 5 吸烟: 吸烟瘾大的人,血液一氧化碳血红蛋白含量可达8%,而不吸烟者含量在1%以下。此外儿茶酚胺、血清可的松亦较不吸烟者为多。血液学方面亦有变化,白细胞数增加,嗜酸粒细胞减少,中性粒细胞及单核细胞增多,血红蛋白偏高,平均红细胞体积偏高。 6 药物: 药物对检验的影响非常复杂,1.5万多种药物对检验有干扰作用。众所周知,抗结核药、抗生素、抗白血病制剂、磺胺类药物,对肝功能均有不同程度的影响,甚至几片常用药物可以引起严重的药物反应。故在采样检查之前,暂停各种药物是上策,如不可停用,则应了解可能对检验结果产生的影响。 7 体位: 体位影响血液循环,由于血浆和组织间液因体位不同而平衡改变,则细胞成分和大分子物质的改变较为明显,例如由卧位改为站位,血浆白蛋白可因此而浓度增大,总蛋白、酶、钙、胆红素、胆固醇及甘油三酯等亦因站位而浓度增加;血红蛋白、血细胞比容、红细胞计数亦于站位时增加。由于体位的因素,不要让病人自己到检验科来采血做血常规,或复查红、白细胞计数,以免体位引入的误差。 8 其他: 病人准备还应考虑病人的生物钟规律,因此复查以在大体相同的时间采样为好。采血时压脉带结扎过久,也是一种误差因素,如以结扎1min的样品结果为基数,则结扎3min,可使血

八大因素影响血液检测结果

八大因素影响血液检测结果 验血是发现、诊断和治疗及预防疾病的基本手段。由于血液检测也会出现偏差，所以检测结果的准确性非常重要。受检者的准备是血液检验结果准确的重要环节之一。由于受检者受到各种内在和外界的影响，可使检验结果产生或 验血是发现、诊断和治疗及预防疾病的基本手段。由于血液检测也会出现偏差，所以检测结果的准确性非常重要。受检者的准备是血液检验结果准确的重要环节之一。由于受检者受到各种内在和外界的影响，可使检验结果产生或大或小的误差，为此检验前病人须作适当准备，可减少随机分析误差。病人准备除了特殊检验有专门规定外，一般要求病人处于安静状态，生活饮食处于日常状态，目前已公认过度空腹、饮食、饮酒、吸烟及姿势体位等可影响某些检验结果。 1. 运动： 肌肉活动的影响可分短暂性的和持续性的两类，短暂性影响为血浆脂肪酸含量，可因运动而暂时减少，而后渐渐增加而恢复。丙氨酸可因运动暂时增加达180%，而乳酸则可增加至300%。受到持续性影响的主要是一些肌肉有关酶，如肌酸激酶、醛缩酶、乳酸脱氢酶等。据称，一场60分钟的手球训练赛后11小时，肌酸激酶活性比赛前仍增加达125%，长期坚持体育锻炼还会提高性激素水平，因此采血前宜安静，不进行过大的活动。 2. 食物： 进餐后血浆脂肪、蛋白质、糖类有所增加。有人研究：高脂餐后2~4小时采血，多数人碱性磷酸酶含量增高，主要来自肠源性同工酶，且与血型有密切关系，O型或B型增高更明显。一般认为高蛋白质餐使血浆尿素、血氨增加，但不影响肌酐含量，高比例的不饱和脂肪酸食物，可减低胆固醇含量；香蕉、菠萝、番茄可使尿液5-羟色胺增加数倍；含咖啡因饮料，可使血浆游离脂肪酸增加，并使肾上腺和脑组织释放儿茶酚胺。食物如含有动物血液，可引起粪隐血假阳性。故在做相应检验时，应对食物有一定的控制。 3. 过度空腹： 一般血液生化检验要求病人晚餐后禁食，至次日晨采血，空腹约12~14小时。但过度空腹，若达24小时以上，某些检验会有异常结果。例如血清胆红素可因空腹48小时而增加240%；血糖可因空腹过长而减少为低血糖；血脂空腹过度，甘油三酯、甘油、游离脂肪酸反有增加，而胆固醇无明显改变。故空腹并非越长越好，近年国外有人主张胆固醇单项检验，不必空腹抽血。 4. 饮酒： 饮酒后使血浆乳酸、尿酸盐、己醛、乙酸盐增加。长期饮酒者高密度脂蛋白胆固醇偏高，平均红细胞体积增加，谷氨酰转肽酶（GGT）亦较不饮酒的人为高，甚至可以将这项作为嗜酒者的筛选检查。

影响血常规检验结果的常见因素及预防措施分析 张磊

影响血常规检验结果的常见因素及预防措施分析张磊 发表时间：2018-10-01T20:23:11.563Z 来源：《世界复合医学》2018年第07期作者：张磊1 徐秀丽（通讯作者）[导读] 在血常规检验中，影响血常规检验结果的因素主要为采血部位不同、血样检验时间等因素。 1牡丹江市骨科医院 157000 *鹤岗市中心血站 154100摘要：目的：分析探讨影响血常规常规检验结果的有关因素及预防措施。方法：收集2017年3月至2018年3月期间我院收治的50例血常规检 验存在一定误差患者的有关资料，对影响血常规常规检验结果的有关因素分析研究。结果：在白细胞、红细胞及血红蛋白计数的检验结果中，静脉血比手指血数值低，静脉血血小板计数结果比手指血高。在对患者采血后检验时间的影响分析中，其中采血后及时进行血样检验，采血后六小时内进行血样检验的患者血样检验差异不显著（P>0.01）不具有统计学意义，而采血后超过六小时进行血样检验的患者血样差异十分显著（P<0.01）具有统计学意义。结论：在血常规检验中，影响血常规检验结果的因素主要为采血部位不同、血样检验时间等因素。关键词：血常规检查；预防措施；影响因素Analysis of common factors affecting blood routine test results and preventive measures Abstract: Objective: To analyze the relevant factors and preventive measures that affect the routine blood test results. Methods: The data of 50 patients with certain errors in blood routine examination admitted to our hospital from March 2017 to March 2018 were collected, and the relevant factors affecting routine blood test results were analyzed. RESULTS: In the test results of white blood cells, red blood cells and hemoglobin counts, venous blood was lower than finger blood, and venous blood platelet counts were higher than finger blood. In the analysis of the influence of the test time after blood collection, the blood sample test was performed in time after blood collection, and the blood sample test of the blood sample test within 6 hours after blood collection was not significant (P>0.01), which was not statistically significant, but exceeded after blood collection. The blood samples of the patients who were tested for blood samples for six hours were very significant (P < 0.01). Conclusion: In the routine blood test, the factors affecting the blood test results are mainly the factors such as different blood collection sites and blood test time. Key words: blood routine examination; preventive measures; influencing factors 血液是人体血液循环的主要载体，人类很多疾病都能够对血液环境造成影响，使得血液特征与正常情况有所差别，因此对于入院病人来说，血常规检查为必要的检查。血常规检验在临床中是一种最基本的医学检验方法，一般来说，血液中存在血浆，血细胞以及其他成分，血常规检验主要检验血液中的血细胞。血细胞主要包括白细胞、红细胞、血小板等3种不同功能细胞，对其形态分布和数量变化分别进行观察，已成为医生在临床诊断中的一种常用辅助方法。但血常规检验由于受到一些因素的影响，使得检验结果出现一定程度的误差，并增大疾病诊断的难度，甚至导致患者被误诊，基于此应对影响血常规检验的因素进行分析，以便有针对性地采取相应措施进行干预，使检验结果提高准确性。本研究收集2017年3月至2018年3月期间我院收治的50例血常规检验存在一定误差患者的有关资料进行分析，现将有关情况总结如下。 1.资料与方法1.1一般资料 收集2017年3月至2018年3月期间我院收治的50例血常规检验存在一定误差患者的有关资料，其中有34例男患者，16例女患者，患者年龄在26至68岁之间，平均年龄（46.2±2.6）岁。23例患者采取静脉采血方法，27例患者采取末梢毛细血管采血方法。采血后13例患者及时进行检验，19例患者采血未超过6小时检验，18例患者采血超过6小时检验。 1.2方法 使用全自动血细胞计数仪及稀释液，对采取部位不同的血液标本进行分析研究，并对不同部位采血的影响进行观察比较。 2.结果 在白细胞、红细胞及血红蛋白计数的检验结果中，静脉血比手指血数值低，静脉血血小板计数结果比手指血高，患者之间存在的差异具有统计意义（P<0.05），如下表所示。 在对患者采血后检验时间的影响分析中，其中采血后及时进行血样检验，采血后六小时内进行血样检验的患者血样检验差异不显著（P>0.01）不具有统计学意义，而采血后超过六小时进行血样检验的患者血样差异十分显著（P<0.01）具有统计学意义。 3.讨论

Elisa常见类型及实验标准操作方法与常见问题

Elisa常见类型及实验标准操作方法与常见问题 酶联免疫吸附试验（ELISA）是一种实验室常用的检测方法，广泛应用于测量溶液中的分析物（抗体或抗原）的浓度。与其他基于抗体的检测方法不同的是，酶联免疫吸附试验或酶免疫测定（EIA）通过与固相支持物的结合和系列洗涤步骤，实现特异性和非特异性相互作用的分离，并可通过最终有色产物的形成，定量分析原始样品中分析物的含量。 ELISA 实验通常以细胞培养上清液、血清、血浆以及组织裂解物等为样品。该实验必备三种试剂：固相的抗原或抗体；酶标记的抗原或抗体；酶作用的底物。根据样品的性质、检测的实验条件、试剂的来源，可设计出不同类型的ELISA 检测方法。 该实验可迅速分析大量平行样品，在基础研究和临床诊断实践中广泛使用。 一、直接ELISA 原理：将抗原与固相载体连接，洗涤除去未结合的抗原及杂质。加酶标抗体进行孵育。固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗体。此时固相上带有的酶量与标本中受检抗原的量相关。加底物反应。直接法主要用于测定抗原。 优点：操作流程简短，实验步骤少；无需使用二抗，避免了交叉反应；实验步骤少，操作不易出错。 缺点：实验中的一抗需要直接用酶标记，成本相对较高。 二、间接法ELISA

原理：将抗原与固相载体相连结，形成固相抗原。洗涤除去未结合的抗原及杂质。加入特异性一抗与固相抗原相结合，形成固相抗原抗体复合物。经洗涤后，加酶标二抗。固相免疫复合物中的抗体与酶标二抗结合，从而间接地标记上酶。洗涤后，加底物显色。 优点：酶标二抗可加强信号，提高灵敏度；灵活性更大，同一酶标二抗可应用于多种不同的一抗；不直标一抗，可保留更多的免疫反应性；成本更低，使用标记抗体更少。 缺点：交叉反应几率升高。 三、双抗夹心法ELISA 原理：双抗体夹心法适用于测定二价或二价以上的大分子，但不适用于小分子抗原。将特异性抗体（捕获抗体）与固相载体连接，形成固相抗体。洗涤除去未结合的抗体及杂质。加入待检样品，保温孵育。样品中的特异性抗原与固相抗体结合，形成固相抗原抗体复合物。洗涤除去其他未结合物质。加酶标抗体（检测抗体）保温孵育。固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗体。加底物反应。 双抗原夹心法测抗体的反应模式与测抗原相似，用特异性抗原进行包被和制备酶结合物，以检测相应的抗体。

影响血液检测结果的因素

影响血液检测结果的因素 验血是发现、诊断和治疗及预防疾病的基本手段。由于血液检测也会出现偏差，所以检测结果的准确性非常重要。受检者的准备是血液检验结果准确的重要环节之一。由于受检者受到各种内在和外界的影响，可使检验结果产生或大或小的误差，为此检验前病人须作适当准备，可减少随机分析误差。病人准备除了特殊检验有专门规定外，一般要求病人处于安静状态，生活饮食处于日常状态，目前已公认过度空腹、饮食、饮酒、吸烟及姿势体位等可影响某些检验结果。 1. 运动： 肌肉活动的影响可分短暂性的和持续性的两类，短暂性影响为血浆脂肪酸含量，可因运动而暂时减少，而后渐渐增加而恢复。丙氨酸可因运动暂时增加达180%，而乳酸则可增加至300%。受到持续性影响的主要是一些肌肉有关酶，如肌酸激酶、醛缩酶、乳酸脱氢酶等。据称，一场60分钟的手球训练赛后11小时，肌酸激酶活性比赛前仍增加达125%，长期坚持体育锻炼还会提高性激素水平，因此采血前宜安静，不进行过大的活动。 2. 食物： 进餐后血浆脂肪、蛋白质、糖类有所增加。有人研究：高脂餐后2~4小时采血，多数人碱性磷酸酶含量增高，主要来自肠源性同工酶，且与血型有密切关系，O 型或B型增高更明显。一般认为高蛋白质餐使血浆尿素、血氨增加，但不影响肌酐含量，高比例的不饱和脂肪酸食物，可减低胆固醇含量；香蕉、菠萝、番茄可使尿液5-羟色胺增加数倍；含咖啡因饮料，可使血浆游离脂肪酸增加，并使肾上腺和脑组织释放儿茶酚胺。食物如含有动物血液，可引起粪隐血假阳性。故在做相应检验时，应对食物有一定的控制。 https://www.sodocs.net/doc/c710076905.html, 3. 过度空腹： 一般血液生化检验要求病人晚餐后禁食，至次日晨采血，空腹约12~14小时。但过度空腹，若达24小时以上，某些检验会有异常结果。例如血清胆红素可因空腹48小时而增加240%；血糖可因空腹过长而减少为低血糖；血脂空腹过度，甘油三酯、甘油、游离脂肪酸反有增加，而胆固醇无明显改变。故空腹并非越长越好，近年国外有人主张胆固醇单项检验，不必空腹抽血。 4. 饮酒： 饮酒后使血浆乳酸、尿酸盐、己醛、乙酸盐增加。长期饮酒者高密度脂蛋白胆固醇偏高，平均红细胞体积增加，谷氨酰转肽酶（GGT）亦较不饮酒的人为高，甚至可以将这项作为嗜酒者的筛选检查。 5. 吸烟：

ELISA方法的基本原理和操作步骤

ELISA方法的基本原理和操作步骤 基本原理 1971年Engvall和Perlmann发表了酶联免疫吸附剂测定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）用于IgG定量测定的文章，使得1966年开始用于抗原定位的酶标抗体技术发展成液体标本中微量物质的测定方法。这一方法的基本原理是：①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在测定时，把受检标本（测定其中的抗体或抗原）和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅刊物定性或定量分析。由于酶的催化频率很高，故可极大地地放大反应效果，从而使测定方法达到很高的敏感度。 方法类型和操作步骤 ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。在这种测定方法中有3种必要的试剂：①固相的抗原或抗体，②酶标记的抗原或抗体，③酶作用的底物。根据试剂的来源和标本的性状以及检测的具备条件，可设计出各种不同类型的检测方法。 （一）双抗体夹心法 双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法，操作步骤如下：

（1）将特异性抗体与固相载体连接，形成固相抗体：洗涤除去未结合的抗体及杂质。 （2）加受检标本：使之与固相抗体接触反应一段时间，让标本中的抗原与固相载体上的抗体结合，形成固相抗原复合物。洗涤除去其他未结合的物质。 （3）加酶标抗体：使固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗体。此时固相载体上带有的酶量与标本中受检物质的量正相关。 （4）加底物：夹心式复合物中的酶催化底物成为有色产物。根据颜色反应的程度进行该抗原的定性或定量。 根据同样原理，将大分子抗原分别制备固相抗原和酶标抗原结合物，即可用双抗原夹心法测定标本中的抗体。 （二）双位点一步法 在双抗体夹心法测定抗原时，如应用针对抗原分子上两个不同抗原决定簇的单克隆抗体分别作为固相抗体和酶标抗体，则在测定时可使标本的加入和酶标抗体的加入两步并作一步（图15-5）。这种双位点一步不但简化了操作，缩短了反应时间，如应用高亲和力的单克隆抗体，测定的敏感性和特异性也显著提高。单克隆抗体的应用使测定抗原的ELIS 在一步法测定中，应注意钩状效应（hookeffect），类同于沉淀反应中抗原过剩的后带现象。当标本中待测抗原浓度相当高时，过量抗原分别和固相抗体及酶标抗体结合，而不再形成夹心复合物，所得结果将低于实际含量。钩状效应严重时甚至可出现假阴性结果。 （三）间接法测抗体

影响血常规检验结果的多种因素

影响血常规检验结果的多种因素 【摘要】血常规检验是诊断各种病的主要依据，要想获得准确的、能真实反映患者实际情况的检测数据，除了日常工作中要做到正常的工作以外。检验还要充分考虑影响血常规检验的多种影响因素并严格加以控制。 【关键词】血常规；检验；影响因素 血细胞检验是指对血液中红细胞(RBC)、血红蛋白(HGB)、血小板(PLT)、白细胞(wBc)及白细胞分类的相关数据的进行计数检测分析，也称血常规检验。血常规检验主要用于帮助和鉴别诊断、病情观察和预后判断，还用于某些治疗的监护，是临床以血液检验应用范围最广，利用率最高，最常用、最重要的基本内容之一。随着高科学技术的应用，用进行血细胞手工分析已经被血液细胞分析仪所取代，随着实验室管理水平提高，自动化应用和深入，血常规的检查质量工作趋于标准化、规范化，然而临床工作中仍发现一些结果与临床资料不相符，研究发现这种误差多数来自分析前的标本质量，少部分来自分析过程中引起的，因此从制标本到贮存、运送到分析得出结果，其间的任何一个环节都很关键不容忽视。 1．可影响血常规的检验结果的一些因素 1．1 标本的收集时间。 某些生理因素，如进食、运动和情绪激动等，均可影响血液成分，甚至在一天之内，自细胞计数和嗜酸粒细胞计数也有一定的波动，因此，采血应尽可能在一定时间和一定生理条件下进行，以资比较和进行动态分析，那么实验室工作人员、医生、护士就有需要对病人何时采血进行指导。药物也是影响结果的一个重要因素，许多药物由于其药理学或毒理学的影响，进入人体后可引起人体生理、和病理方面的复杂变化(这些变化并非原发病所致)，从而影响临床检验结果；这不仅影响了检验的准确性和可靠性，而且会以致误导了医师的诊断，因此最好在服药前采血。如激素类药物雌激素类药物能影响并可引起血小板和红细胞量的减少，