鸡内金蛋白质类成分的提取与测定
实验采用大孔吸附树脂法制备鞣酸精制品,其鞣酸
含量≥98%,没食子酸含量≤0.2%,同时具有稳定的T LC 图谱及HP LC 指纹图谱。将其作为鞣酸对照品,用于含量测定的方法学研究,取得较好效果。文中所用比色法与药典皮粉法比较,具有快速、准确、精密度高、重复性好、适用性广(可用于药材、提取物半成品及制剂的鞣酸定量)的特点,为五倍子鞣酸的质量控制提供了新的检测方法和标准。
参考文献:
[1] 扬云,冯卫生.中药化学成分提取分离手册[M].北京:中国中
医药出版社,1998172
[2] 谢道刚,徐廷翰.含鞣酸成分粉针剂的制备方法[P].北京:知
识产权出版社,2001,17(48).CN1323582A
[3] 谢道刚,张庭燕.“多叶咽宁口含液”中鞣酸含量测定方法的探
讨[J ].华西药学杂志,1995,10(3):138
[4] 中华人民共和国国家药典委员会1中国药典[S].一部.北京:
化学工业出版社,20001附录63
收稿日期:2003-09
作者简介:刘其凤(1969-),女,山东东营,硕士,主管药师,从事多糖类药物的研究。
鸡内金蛋白质类成分的提取与测定
刘其凤,任慧霞
(山东大学药学院生化与生物技术药物研究所,山东济南250012)
摘要:目的 优化鸡内金蛋白质类成分的提取工艺进行,并对提取物进行分析。方法 用碱提取鸡内金蛋白质类成分,并用紫外分光光度法、氨基酸自动分析仪、柱层析等对提取物进行理化性质的分析。结果 经碱提取可获得产率较高的鸡内金提取物;其分子量均一,并含有一定量的必需氨基酸。结论 提取工艺简单易行,其提取物是一种很有前途的糖蛋白。关键词:鸡内金;蛋白质类成分;分析中图分类号:R284
文献标识码:A
文章编号:1006-0103(2004)04-0281-02
Extraction and determination of protein components from Endothelium corneum
LI U Qi -feng ,RE N Hui -xia
(Institute o f Biochemical and Biotechnological Drug ,School o f Pharmacy ,Shandong Univer sity ,Jinan 250012,China )
Abstract :OBJECTIVE T o optimize the extraction techniques of protein com ponents from Endothelium corneum .METH ODS Protein com 2ponents of Endothelium Corneum were extracted by alkali.The physico 2chemical properties of the extractives are assayed by Ultraviolet spec 2trometry ,automatic amino 2acid analyzer ,gel chromatography ,and s o on.RESU LTS The yield of extractives was high via alkaline extraction method.There were s ome essential amino acids in the extractive and the m olecular weight of the extractive is uniform.CONC L USION The extraction techniques is sim ple.M oreover the extractive is a promising glycoprotein.K ey w ords :Endothelium Corneum ;Protein com ponents ;Analysis C LC number :R284
Document code :A
Article I D :1006-0103(2004)04-0281-02
鸡内金为雉科(Phasianidae )家禽多种鸡Gallus
gallus domesticus Briss on 的干燥胃内壁皮层,是一常用中药。临床上主要用于治疗消化不良、小儿遗尿等。有关鸡内金有效成分的提取、分析还未见报道。现就其有效成分的提取进行了研究,并对提取物进行了鉴定和分析。
1 实验部分
111 仪器与试剂
DR -HW -1型水浴锅(北京西城区医疗器械
厂);LX J -Ⅱ离心机(上海医用分析仪器厂);日立
835-50型氨基酸自动分析仪(日本);8453型紫外
检测仪(美国Agilent 公司);LK B11300Ultriograd 层析系统(瑞典)。Sephadex G -75(进口分装);HCl 、NaOH (药用标准);其他试剂均为分析纯。112 方法和结果
11211 逐步提取法提取鸡内金 称取一定量的鸡
内金,用水浸泡,然后将其绞碎,用40%NaOH 调pH 12,在70℃水浴中加热3h ,过滤;滤渣照此方法处理,过滤;滤液用2m ol ?L -1HCl 调pH 410,过滤,离心,得沉淀。沉淀再用乙醚、无水乙醇脱水,室温(25±015℃
)自然干燥48h 得成品,测其含水量为华西药学杂志
W C J ?P S
2004,19(4):281～282
8195%。扣除水分,收率可达到38197%。
11212 一次提取法提取鸡内金及提取物的溶解性 称取一定量的鸡内金,用水浸泡,然后将其绞碎,用HCl浸泡2h;过滤,滤渣加10倍量的40%NaOH,室温搅拌2h;过滤,滤液用2m ol?L-1HCl调pH 410,过滤,离心,得沉淀。沉淀再用乙醚、无水乙醇脱水,自然干燥48h得成品,测其含水量为8193%。扣除水分,收率可达到42137%。根据文献[1]检测鸡内金提取物的溶解性。提取物不溶于水和稀酸,可溶解于稀碱中。
11213 紫外扫描 将提取物用10%NaOH配成100
g?ml-1的溶液,在200～400nm扫描,结果在224nm
和290nm处有吸收,说明提取物中含有蛋白质。11214 氨基酸的分析 将鸡内金提取物酸解后,用氨基酸自动分析仪进行氨基酸分析,其氨基酸总量为59117g?(100g)-1,其中必需氨基酸19176g、碱性氨基酸3114g、酸性氨基酸21197g,其蛋白含量占样品总量的59117%1。
表1 鸡内金提取物所含有的氨基酸
T able1 The amino acids in the extract from Endothelium corneum
Amin o acids C ontents/mg?(100g)-1Amin o acids C ontents/mg?(100g)-1
谷氨酸G lu13177129丝氨酸S er2388119
门东氨酸As p8797170苏氨酸Thr2240198
亮氨酸Leu6201156蛋氨酸Met1970131
丙氨酸Ala4787192异亮氨酸Ile1625102
酪氨酸T yr4250154赖氨酸Lys1237106
苯丙氨酸Phe3462194胱氨酸Cys363190
缬氨酸Val3019165组氨酸His201143
精氨酸Arg2700126乌氨酸Orn125122
甘氨酸G ly2617144
11215 多糖的鉴定 鸡内金提取物与碱性酒石酸铜试液反应,显蓝紫色;与浓硫酸和蒽酮反应,溶液呈蓝绿色。说明提取物中含多糖。
11216 分子量的分布 以pH8的2%尿素为流动
相,Sephadex G-75为柱填料(116cm×80cm),流速为40ml?h-1,在波长275nm处进行层析。结果:逐步提取法获得的鸡内金提取物分子量比较集中,而一步提取法获得的鸡内金提取物分子量比较分散。
11217 天青A法测多糖的含量[2] 将鸡内金提取物015g用蒸馏水配成1%的浓度,用天青A法测其黏多糖的含量,扣除提取物中所含水分,1mg样品相当于肝素01093u。
11218 苯酚-硫酸法测糖的含量[3] 将鸡内金提取物酸解17h后,用苯酚-硫酸法测其含糖量。其中,氨基己糖含量为0172%,葡萄糖醛酸为0190%,其他糖含量未测。将牛血清白蛋白加入,用此方法测定糖含量,结果表明蛋白质对测定无影响。11219 鸡内金提取物中还原性物质的测定 参照卫生部药品标准生化药品分册的规定,对还原性物质进行测定,测得鸡内金提取物中还原性物质相当于葡萄糖的315%。
2 讨论
鸡内金原名里黄皮[4],始载于《神农本草经》,“主泻利”。与鸡肠合用可益肾健脾、合胃、补肾虚、温摄下元,用于遗尿的治疗。表1结果表明鸡内金碱提取物含蛋白质约60%,并含有多种氨基酸。呈现氨基糖的阳性反应,其含量在10%左右。因此,初步认为鸡内金的有效成分可能主要是糖蛋白类物质。用碱逐步提取的物质,其分子量分布较集中;而用高浓度碱一次提取物中含有一些较小分子量的物质。两种方法获得的提取物收率差异不大,但用高浓度碱能够缩短反应时间,二者各有利弊。
参考文献:
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业出版社,2000
[2] 王凤山.生化药物分析与检验[M].济南:山东医学院,1984185
[3] 张惟杰.糖复合物生化研究技术[M].第2版1杭州:浙江大学
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[4] 黄志杰,姚昌绶,俞小平.神农本草经[M].北京:科学技术出
版社,1999.455
收稿日期:2003-12
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