大蒜根尖诱导微核实验

一、 实验目的

1．了解细胞微核形成的机理及其形态特点。

2．学习植物根尖细胞的微核检测技术。

二、实验原理

微核是间期细胞的细胞质中一个或多个圆形或杏仁状结构，是有丝分裂后期丧失着丝粒的落后的染色体片段形成。微核是染色体畸变的一种表现方式。许多能引起染色体断裂的理化因素，如辐射、化学诱变剂等，均可作用于分裂细胞而产生微核。目前研究表明，微核发生率同作用因子的剂量呈正相关，微核发生率来反映诱变物质对生物的遗传危害程度。

微核试验是一种建立在细胞水平上分析DNA 损伤的技术。该技术以其经济、简便、快速、敏感、特异、准确等特点，成为检测致突变剂和环境污染物等经典的短期试验方法。目前许多国家和国际组织将其规定为新药、食品添加剂、农药、化妆品等毒理性安全性评价的必做试验并用于染色体遗传疾病和癌症前期诊断等各个方面。

本试验采用大蒜作为试验材料，具有许多优点：① 用鳞茎进行无性增殖，避免了有性生殖过程中的遗传性变异，具有遗传背景稳定的优势；② 分布广、材料易得，不受地区和季节的限制；③ 培养方便，操作简单，蒜瓣去皮后将基部浸入净水中即可萌生新根，无需其他条件，且蒜瓣体积较小，萌生新根的数目较多；④ 价格低廉，对诱变剂敏感，是一种理想的试验材料。

本次实验中采用叠氮化钠和水处理的大蒜作为对照组，以四种常用的洗护用品作为实验组。目前在大学生群体，尤其是女生群体中，各种洗护化妆品已经成为必备品，那么经常使用的这些洗护化妆物质是否会对人体造成危害呢？本次实验目的即在于鉴定洗护化妆品的毒理安全性。

三、 实验用品

实验器具：显微镜、解剖针、盖玻片、载玻片、培养皿

实验试剂：改良苯酚品红染液、1M 盐酸、叠氮化钠、水、花露水、海昌护理

液、黄瓜水、卸甲水

实验材料：大蒜根尖

四、 实验步骤

1、 将大蒜去皮，在培养板上每个孔中放入2~3瓣，25℃培养24h 。

2、 在培养板的六个孔中分别加入叠氮化钠、水、六神驱蚊花露水、海昌、黄

瓜水、卸甲水，没过大蒜根部为宜，25℃继续培养24h 。

3、 剪下各孔内约1cm

长的大蒜根，置于离心管中加入固定液（乙醇：冰醋酸

微核

=3：1），固定24h以上。

4、取出固定好的大蒜根，切取1~2mm根尖，用1mol/LHCl解离10min。

5、吸干解离液，用蒸馏水清洗3次。

6、吸干蒸馏水，用苯酚品红染色15min。

7、压片，镜检，计算微核率

注意事项：

1.诱变前培养的大蒜不要让根长得太长。以1cm左右进行诱变最为适宜。

2.固定时，要保证固定液可以充分浸润每条根。

3.染色时最好轻轻将根尖压开一点，有利于中间的细胞着色。

4.压片时要尽量是细胞分散成单层，但也不可分散太过，不利于找到分生区和

伸长区进行对比观察。

五、实验结果

图（1）生理盐水处理的大蒜根尖 10*40 图（2）黄瓜水处理的大蒜根尖 10*40

图（3）六神驱蚊花露水处理的大蒜根尖10*40图（4）海昌眼镜护理液处理的大蒜根尖10*40

图（5）卸甲水处理的大蒜根尖10*40图（6）叠氮化钠处理的大蒜根尖10*40

结果分析：

本次实验结果显示，在各处理组和对照组中均没有发现微核。叠氮化钠对照组没有发现微核的原因可能是加入少量的叠氮化钠后，处理液的浓度太低。其他实验组没有看到微核，说明其他溶液中的有害物质含量较低，有很小的可能性造成细胞染色体的突变。

微核千分率的计算：

微核千分率（MCN‰）=检出的微核数/检测细胞总数*1000‰

（统计微核数时候，应随机数1000个细胞，计数其中的产生微核的细胞数量。一个细胞核周围若出现了多个微核，算为一个微核。）

在10‰以下时，无污染；

10-18‰时，有轻度污染；

18-30‰时，有中度污染；

＞30‰，有重度污染

根据叠氮化钠在1000个细胞中检测出的微核数量为50，计算出来微核千分率为50‰。为重度污染，致突变性很高。

六、实验反思

1、实验选用的实验材料的浓度最好保持原水平，即不要被稀释，这样处理的结果才能反应物质在生活使用状态中的真实毒理特征。

2、当鉴定某种浓度可变的物质对染色体的影响时，可以适当的设置浓度梯度实验，根据实验结果判断此物质的毒理安全浓度。在一般情况下，有害物质浓度越高，微核率越高。可以根

据微核率判断环境中含有有害物质的浓度。

3、本次实验都是测量化学物质对微核率的影响，可以设计实验判断物理现象对于微核率的影响，比如电子产品辐射，预计微核率可能与辐射的强度和时长呈正相关。

关于微核诱导实验

洗洁精蚕豆根尖细胞的 微核诱导及检测 摘要根据微核诱导的原理，以未受污染的蚕豆和洗洁精为材料，测定洗洁精对 根尖细胞的影响。结果表明，洗洁精会诱导微核的产生。说明洗洁精在超过一定浓度内对生物细胞是有害的。 关键字：蚕豆、洗洁精、微核、诱导 Abstract According to the principle of micronucleus induced by unpolluted fava beans and a detergent, detergent effect on root tip cells. The results show that the detergent will not induce micronucleus. Detergent in a certain concentration in biological cells are harmless. Key words: beans, detergent, microkernel, induction 一、实验原理 微核简称(MCN)，是真核生物细胞中的一种异常结构，往往是细胞经辐射或化学药物的作用而产生。 在细胞间期微核呈圆形或椭圆形，游离于主核之外、大小应在主核1/3以下。微核的折光率及细胞化学反应性质和主核一样。 一般认为微核是由有丝分裂后期丧失着丝粒的断片产生的，但有些实验也证明整条的染色体或多条染色体也能形成微核。这些断片或染色体在细胞分裂末期被两个子细胞核所排斥便形成了第三个核块。 已经证实微核率的大小是和用药的剂量或辐射累积效应呈正相关，这一点和染色体畸变的情况一样。所以可用简易的间期微核计数来代替繁杂的中期畸变染色体计数。 由于大量新的化合物的合成，原子能应用，各种各样工业废物的排出，使人们需要有一套高度灵敏、技术简单的测试系统来监视环境的变化。 只有真核的测试系统更能直接推测诱变物质对人类或其它高等生物的遗传危害，在这方面，微核测试是一种比较理想的方法。 且有研究显示以植物进行微核测试与以动物进行的一致率可达99%以上。 目前，微核测试已经广泛应用于辐射损伤、辐射防护、化学诱变剂、新药试验、染色体遗传疾病及癌症前期诊断等各方面。 利用蚕豆根尖作为实验材料进行微核测试，可准确显示各种处理诱发畸变的效果，并可用于污染程度的监测。 本组选择了洗洁精来做微核实验，因为随着我们生活水平的不断提高，各类洗涤剂相继问世,其使用范围变得越来越广，渗透到我们生活的好多方面。人工合成的洗涤剂成本低、去污力强、种类多，主要分为阳离子型、阴离子型和非离子型3 类(其中阴离子型表面活性剂使用频率最高)。但是洗涤剂可通过皮肤渗透到血液中,导致人体血液中Ca2+含量下降以及细胞染色体畸变。此外,含合成洗涤剂的废水排入水体后,将影响水生生物的生长,并致水体富营养化,从而破坏水环

微核

遗传学实验小论文 题目：染发剂对大蒜根尖产生微核的浓度研究班级：10生本班 学号：2010061107 姓名：郑兴艳 指导老师：高坚强 日期：2012-10-20

染发剂对大蒜根尖产生微核的浓度研究 摘要： 大蒜根尖细胞微核技术是一种以染色体损伤及纺锤丝毒性等为测试终点的植物体细胞检测方法,因具有材料方便,培养简单、技术容易掌握、准确、快速、有明显剂量-效应等优点。测定大蒜根尖细胞中出现的微核率,以此分析染发剂的诱变性,从而判断其对遗传物质是否有毒性效应。我们用不同浓度的染发剂处理大蒜根尖细胞，统计微核千分率（微核细胞率）。对统计结果进行单因素分析得：染发剂对大蒜染色体是有显著影响的。 关键词：染发剂;大蒜根尖;微核; 正文: 微核是真核细胞中的一种异常结构，是由落后染色体形成的核形小块，游离于主核外，大小是主核的1/3以下[1]，它的折光率及细胞化学反应性质与主核一样，也具有合成DNA的能力[2]，已经证实，微核率的大小是和用药剂量或辐射累积效应呈正相关，所以微核测可用于化学物质的遗传毒性研究[3]。 随着人们生活水平的不断提高，美发护发已普遍为广大公众所接受，目前作为美发的主要产品之一的染发剂使用相当普及，使用范围几乎包括男女老少，主要以青年以上各年龄段为消费主体。为了了解其潜在的危害性并评价其安全性，我们按1999年卫生部卫生法制与监督司制定的《化妆品卫生规范》的要求进行[4]。选用了市场上常见的染发剂，以大蒜为材料，探索染发剂对大蒜根尖细胞微核的诱变效应。 微核的形成机理 据陈宝伟的研究分析[8]，微核的形成主要有三种方式：一是化学毒性物质导致，包括染色体断裂剂和非整倍体剂。前者可诱发染色体发生断裂的遗传毒性物质，后者可以使染色体和纺锤体联结发生障碍或纺锤体功能受损；二是核体出芽，即间期的细胞核向外形成瘤状突起，形成芽体最后脱离主核形成微核；三是放射线导致，放射线可以引起DNA损伤，产生错误修复的双链断裂，导致微核出现。 材料与方法

环磷酰胺诱导的小鼠骨髓细胞微核率的时间_剂量_效应观察

文章编号:1006-446X(2006)08-0027-05 环磷酰胺诱导的小鼠骨髓细胞微核率的 时间、剂量-效应观察 王文蔚方芳李春明 (温州医学院公共卫生学院,浙江温州325035) 摘要:为研究环磷酰胺(CP)诱导的小鼠骨髓细胞微核率的时间-效应关系和剂量-反应关系, 给小鼠一次腹腔注射不同剂量(按体质量计)CP(0、30、60、90mg/kg)后,于不同时间(给药后12、 24、36、48、60h)、不同部位(胸骨与股骨)取材来观察小鼠骨髓细胞微核率的变化。结果表明,高、 中、低三个剂量组的小鼠骨髓细胞微核率与0mg/kg组相比较,其差异具有统计学意义(P< 0101),且4个剂量组之间两两比较也均有统计学意义(P<0105),并表现出明显的剂量-反应关 系;不同取样时间对小鼠骨髓细胞微核率的影响具有统计学意义(P<0105),在36~48h这个时 间段能够观察到更高的微核率,通过线性回归的曲线拟合分析,以41h取材最佳;胸骨取材与股 骨取材之间的微核率差异无统计学意义(P>0105)。环磷酰胺可作为诱导小鼠骨髓细胞微核的阳 性对照,在一定范围内,具有剂量-反应关系和时间-效应关系。给小鼠一次腹腔注射量(按体质量 计)60~90mg/kg后36~48h胸骨取材可取得较高微核率,结果满意。 关键词:微核;环磷酰胺;骨髓;小鼠 中图分类号:R446119文献标识码:A 微核试验是反映染色体损伤的一种重要试验方法,它具有简易、快速、灵敏、准确的特点,因而得到广泛的应用,在食品、药品、农药、环境等多领域的化合物毒理学安全性评价中起到重要作用,是必做的试验之一[1]。本实验以环磷酰胺为诱变剂,观察给药剂量、取材时间及取材部位对小鼠骨髓细胞微核率的影响,为微核试验的标准化和最佳实验方案提供依据。 1材料与方法 111材料、仪器与试剂 环磷酰胺(上海华联制药有限公司,批号:041103),用生理盐水配制;小牛血清(中美合资兰州民海生物工程有限公司,批号:20031219),灭活后使用。 显微镜(Leica),普通离心机。 甲醇(分析纯),pH618的磷酸盐缓冲液,1B9Giemsa染色液。 112动物分组与处理 选用ICR小鼠80只(温州医学院实验动物中心提供,合格证号SYXK(浙)2005-0061),体质量18~25g,雌雄各半。称质量,编号,随机分为4组(剂量均按体质量计):零剂量组(0mg/kg,也可称阴性对照组),低剂量组(30mg/kg),中剂量组(60m g/kg),高剂量组(90mg/kg),每组20只, 收稿日期:2006-04-20

大蒜根尖微核试验

大蒜根尖微核试验 摘要 微核简称(MCN)，是真核生物细胞中的一种异常结构，往往是细胞经辐射或化学药物的作用而产生。本实验我们用生活中和实验室里的多种诱变剂来处理大蒜根尖细胞，通过压片镜检来观察统计大蒜分生区细胞内微核的数目，检测不同诱变剂的诱变强度。 前言 微核简称(MCN)，是真核生物细胞中的一种异常结构，往往是细胞经辐射或化学药物的作用而产生。在细胞间期微核呈圆形或椭圆形，游离于主核之外、大小应在主核1／3以下。微核的折光率及细胞化学反应性质和主核一样。一般认为微核是由有丝分裂后期丧失着丝粒的断片产生的，但有些实验也证明整条的染色体或多条染色体也能形成微核。这些断片或染色体在细胞分裂末期被两个子细胞核所排斥便形成了第三个核块。已经证实微核率的大小是和用药的剂量或辐射累积效应呈正相关，这一点和染色体畸变的情况一样。所以可用简易的间期微核计数来代替繁杂的中期畸变染色体计数。由于大量新的化合物的合成，原子能应用，各种各样工业废物的排出，使人们很需要有一套高度灵敏，技术简单的测试系统来监视环境的变化。只有真核的测试系统更能直接推测诱变物质对人类或其它高等生物的遗传危害，在这方面，微核测试是一种比较理想的方法。且有研究显示以植物进行微核测试与以动物进行的一致率可达99%以上。目前微核测试已经广泛应用于辐射损伤、辐射防护、化学诱变剂、新药试验、染色体遗传疾病及癌症前期诊断等各方面。 材料与方法 材料 1实验器具：显微镜、解剖针、盖玻片、载玻片、培养皿 2实验试剂：改良苯酚品红染液、浓盐酸、叠氮化钠、清水、2%迪彩防干枯洗发液、2%驱蚊剂、0.2%NaNO2、1%氧氟沙星 3实验材料：大蒜根尖 方法 1将大蒜浸水催根 将剥皮的大蒜放入培养皿中，倒入清水使大蒜根部没入水中，置于25℃下培养24小时，待初生根长出1-2cm左右，根毛发育良好，即可用来检测。 2处理 将培养皿中的清水倒出，将事先准备好的4种诱变剂及阴性（清水）、阳性（叠氮化钠）对照倒入培养皿中，注意标记准确，使各种诱变剂完全浸泡根尖。大蒜根尖处理24h后，将诱变剂及阴性、阳性对照换成清水后恢复培养24h。 3固定根尖细胞 将恢复后的大蒜从根尖顶端切下1cm长的幼根放入离心管中，以卡纳氏固定液进行固定2-24h后，保存于70%乙醇溶液中。 4压片 将离心管中的液体倒出，加入足够的浓盐酸解离3-5min，再用蒸馏水洗涤3次（每次1-2min）。从根尖处切下约0.5mm置于载玻片上，滴加苯酚品红染色15min后，盖上盖玻片，包两层滤纸，用镊子钝部按压至根尖散成云雾状。 5镜检

咖啡及伴侣对细胞的微核诱导

诱变物质的微核检测技 摘要：本实验以大蒜为实验材料，研究咖啡和咖啡伴侣能否诱发细胞产生微核，以及咖啡和咖啡伴侣的毒性是否有叠加效应。实验中将咖啡和咖啡伴侣配置为不同浓度梯度的溶液，对大蒜进行诱发培养24小时，并观察检测微核的诱发率。 前言：由于大量新的化合物的合成，原子能应用，各种各样工业废物的排出，使人们很需要有一套高度灵敏，技术简单的测试系统来监视环境的变化。只有真核的测试系统更能直接推测诱变物质对人类或其它高等生物的遗传危害，在这方面，微核测试是一种比较理想的方法。 微核是真核生物细胞中的一种异常结构，往往是细胞经辐射或化学药物的作用而产生。在细胞间期微核呈圆形或椭圆形，游离于主核之外、大小应在主核1／3以下。微核的折光率及细胞化学反应性质和主核一样。一般认为微核是由有丝分裂后期丧失着丝粒的断片产生的，但有些实验也证明整条的染色体或多条染色体也能形成微核。这些断片或染色体在细胞分裂末期被两个子细胞核所排斥便形成了第三个核块。已经证实微核率的大小是和用药的剂量或辐射累积效应呈正相关，这一点和染色体畸变的情况一样。所以可用简易的间期微核计数来代替繁杂的中期畸变染色体计数。 咖啡和咖啡伴侣为现代人们经常选用的饮用品。而咖啡中的咖啡因之类的物质和咖啡伴侣中植物末（奶精）对人体的健康有没有危害呢？为此我们用大蒜作为材料研究咖啡和咖啡伴侣对细胞染色体畸变的影响，实验主要通过检测细胞微核诱发率，得到咖啡或咖啡因对细胞的影响程度。 1、材料与方法 1.1材料 1.1.1 材料：大蒜雀巢速溶咖啡雀巢速溶咖啡伴侣 1.1.2 试剂： NaN3 HCL 卡诺固定液 70%乙醇改良苯酚品红 1.1.3 仪器：培养皿量筒烧杯玻璃棒电子天平手套离心管 单面刀片盖玻片载玻片显微镜 1.2方法 1.2.1 取材：将大蒜置于24 ℃水中浸泡24 h,选择根长整齐一致，不定根长约0.5 －1cm左右的大蒜随机分组。

大蒜根尖染色体观察实验.

大蒜根尖染色体实验报告 一、 实验目的与实验要求 1、掌握洋葱培养的方法，掌握利用秋水仙素诱导植物多倍体的方法。 2、掌握洋葱根尖制片的方法，复习染色、压片的基本操作。 3、通过对于有丝分裂相的观察，统计洋葱染色体数目，加深对于细胞有丝分裂过程的理解。 4、对比进行多倍体诱导前后的洋葱根尖，理解四倍体与二倍体的区别，认识微核和植物细胞分裂期的各形态特征。 5、体验开放式实验教学，培养生物实验意识，提高学习的主动性、获取实验知识的能力和撰写实验报告水平。 二、 实验方案 1、实验仪器 显微镜、载玻片、盖玻片、试管、烧杯、小塑料管、滤纸、刀片、解剖针、滤纸等 2、实验药品 新鲜、健康的洋葱鳞茎一个；0.02%秋水仙素、1mol/L HCl、醋酸洋红染液、卡诺氏固定液，碱性品红、乙酸，乙醇等。 3、实验原理 (1 洋葱的根尖 洋葱根尖的整体结构如右图，其中只有分生区的初生分生组织由于细胞始终处于持久而强烈的有丝分裂之中而作为我们的观察对象，其余部分在制片时都应当尽量剔除来保证观察效果。 (2 多倍体的诱导

多倍体的诱导使用秋水仙素，秋水仙素可以阻止微管蛋白的聚合，从而使有丝分裂中期纺锤体不能正常形成，但是姐妹染色单体照常想成，只是没有被拉向两级，于是染色体数目加倍。 各步骤的作用：固定液可以迅速杀死细胞，保持细胞形态在有丝分裂相。解离可以破坏细胞的胞间层（果胶），使细胞之间的联系变松散，有利于压片和染色。漂洗可以洗去过量的盐酸，防止解离过度 破坏细胞结构或影响染色效果（盐酸是酸性，而醋酸洋红是碱性染料）。 (3 有丝分裂 完整的有丝分裂相包括G1期（合成前期）、S 期（合成期）、G2期（合成后期）和M 期（分裂期），其中G1期、S 期和G2期合称间期，细胞完成DNA 的复制以及有丝分裂的准备，而M 期又可以分为前期、中期、后期和末期，为了形态观察的方便，本实验采用后一种分法。如表一。 表一植物有丝分裂各时期特点 4、实验步骤 (1 将大蒜剥皮后放进垫了滤纸的培养基中，加入清水，放进25℃恒温

微核试验报告

方便面面饼液对蚕豆根尖微核率的影响 专业年级:2012级生物工程 成员:王浩楠 王绍伟 谢帅

一、摘要 用蚕豆根尖细胞微核技术检测不同种类方便面面饼液微核的诱变效果。设置了阴性对照：自来水处理组，实验组：小浣熊、康师傅、统一、五谷道场、幸运五组饼液分别处理蚕豆根尖，阳性对照：用0.02g/L的醋酸铅溶液处理。发现方便面面饼液在诱导微核产生方面影响明显，醋酸铅溶液具有诱导微核产生的作用。 关键字：蚕豆根尖，方便面面饼，微核千分率，污染指数 二、实验背景和目的 随着现代社会的发展，越来越多的化学物质运用到人们的日常生活之中，如种类繁多的食品添加剂。而其中有些物质具有较强的危害，如致畸，致癌，致突变性。为了检测已存在或潜在的危害，各种检测技术应运而生。微核试验是检测染色体或有丝分裂器损伤的一种遗传毒性试验方法。无着丝粒的染色体片段或因纺锤体受损而丢失的整个染色体，在细胞分裂后期仍留在子细胞的胞质内成为微核。用微核试验来评价药物、放射线、有毒物质等对人体细胞或体外培养细胞遗传学损伤仍是一个直观有效可行的方法,在遗传毒理、医学、食品、药物、环境等诸多方面得到了广泛的应用。微核计数经济,迅速,简便,不需要特殊技能,可以统计更多的细胞并实现计算机自动计数。我们采用蚕豆作为实验材料，采用植物微核技术来检测方便面面饼中添加剂对人体是否产生危害。 方便面是日常生活中经常接触到的食品，其市场占据快餐食品的大壁江山，在超市中油炸方便面与非油炸方便面占到快餐食品的60%

到70%。另一方面，在各媒体的报道中，经常出现有关方便面的食用危害，而且很有争议，所以这也是我们进行本实验的一个原因。三、实验原理 微核是间期细胞中在细胞核之外存在的一个或多个圆形或杏仁状结构，大小在主核的1/3以下，是有丝分裂后期丧失着丝粒的落后的染色体片段形成。20世纪70年代初，Matter和Schmid等首先用动物骨髓细胞微核率来测定怀疑具有诱变活力的化合物，并称之为微核。许多能引起染色体断裂的理化因素，如辐射、化学诱变剂等，均可作用于分裂细胞而产生微核。 在有丝分裂的后期，断裂的染色体片段或完整的染色体落后于其他染色体，当大部分染色体到达细胞两极并重新被核膜包裹时，这些落后的染色体或染色体片段不能进入主核，便形成了独立于主核之外的核质物团，并在间期时浓缩成小核。含微核的细胞数占观察细胞总数的比率称为微核细胞率，简称微核率，可以用来反映遗传物质受伤的程度。在一定范围内，微核率与环境因子的剂量呈正相关，因此，人们常用微核率来反映环境中有害物质的污染程度。 不同厂家生产的面饼化学成分不一，用微核作为面饼材料是否含有有害人体健康物质的手段之一。 四、实验用品 材料：蚕豆种子，小浣熊、康师傅、统一、五谷道场、幸运五个品种方便面 器材：镊子4把，解剖针4支，显微镜，水浴锅，大托盘、培养皿7

植物染色体结构变异的诱导及鉴定

植物染色体结构变异的诱导及鉴定 10农生一班第一组卢** 摘要用物理因素（X射线，γ射线和快中子等）和化学药剂等处理植物材料，染色体的断裂频率会大大增加。在染色体移向两极时无着丝粒染色体由于没有着色粒而不受纺锤丝的牵引而随机地停留在细胞的各个部位，称为染色体断片。细胞分裂末期或二分体时期或四分体时期，染色体断片形成核状的结构，称为微核或拟核。 关键词物理因素、化学因素、染色体、微核 引言本文利用植物根尖作为材料，用不同的诱导剂经行处理，利用细胞生物学方法观察其微、核率来表示动植物受遗传损伤程度的一种方法.微核的形成是细胞受诱变剂作用后的一种遗传学终点。此实验可以应用于寻找最佳诱变剂,和环境敏感型植物,最终用来指导实际生活中的环保工作,其中包括预测实际环境可能引起污染的因素,进行环境监测的科学方法,可用于环境监测的敏感型植物.从而让科学研究真正服务于人类事业. 1材料及方法 1.1验材料及器具 1.1.1验材料洋葱和大蒜根尖 1.1.2验器具恒温培养箱、显微镜、计数器、镊子、载玻片、盖玻片、烧杯、白瓷盘、紫外灯(长为365nm 10W) 、吸水纸 1.1.3验试剂 CuSO4浓度(0、0.1、0.2、0.5、1.0、5.0和10.0 mg/L) ；实验室常用XX 牌子的洗手液，分别稀释25，50，75，100，200倍，并用稀盐酸调节酸碱度，使pH为7-8；卡诺固定液(95%酒精:冰醋酸3:l), 70%乙醇, 1mol/LHCl, 95%酒精和浓盐酸,卡宝品红染色液 1.2 步骤 1.2.1发根： 选取大小均匀，无病害的大蒜鳞茎，洋葱鳞茎，置于铺好含充分的纱布的培养皿中，并将培养皿放进25℃的恒温箱中2~3d。在此过程中要不断加水，保证植物生根所需水分。在根长至2cm时，即根细胞分裂高峰期取出。 1.2.2诱变处理 重金属处理：取出若干个处理组大蒜，每组至少需要15个植株,分别用硫酸铜溶液浓度(0、0.1、0.2、0.5、1.0、5.0和10.0 mg/L)，每个浓度梯度下分别处理其根尖24小时。诱变处理后，用清水冲洗根表面的溶液，用蒸馏水继续培养24h。 紫外线处理：取出6个处理组大蒜，洋葱，每组至少需要15个植株，在细胞分裂高峰期，用10 W紫外灯距离分别，26cm照射，分别照射0min,20 min,25 min,30 min,35 min。并在照射后的3d分别取根尖制片观察微核数，处理时的水温，气温均为24。C，空气相对湿度80%.

植物细胞的微核检测技术-

设计性实验 化生院生物科学教研室

一、实验目的 ?1、了解细胞微核形成的机理及其形态特点；?2、学习植物根尖细胞的微核检测技术。?3、小组合作，掌握设计实验的基本能力。

二、实验原理 ?微核(micronuclei)简称MCN，是真核类生物细胞中的一种异常结构，往往是细胞经辐射或化学药物的作用而产生的。在细胞间期，微核呈圆形或椭圆形，游离于主核之外，大小应在主核1/3以下。微核的折光率及细胞化学反应性质和主核一样，也具合成DNA的能力。 ?一般认为微核是由有丝分裂后期丧失着丝粒的染色体断片产生的，在有丝分裂后期不能向两极移动，所以游离于细胞质中，在间期细胞核形成时，即可在它附近看到一到几个很小的圆形结构，直径大约是细胞直径的1/20 ~1/5，这就是微核。

?微核率的大小是和用药的剂量或辐射累积效应呈正相关，因此，微核是常用的遗传毒理学指标之一，指示染色体或纺锤体的损伤。微核测试已用于辐射损伤、辐射防护、化学诱变剂、新药试验、染色体遗传疾病及癌症前期诊断等各方面。

三、实验材料： 大蒜、大豆、蚕豆等。 四、实验仪器设备： 显微镜、恒温培养箱、恒温水浴锅、镊子、 载玻片及盖玻片。

五、实验步骤： 1、幼根的培养：提前3~5天进行培养，将大蒜瓣剥去外边膜 质枯皮，下端可见许多微微凸起的根原体，将蒜瓣架在烧杯（大小与蒜瓣适宜）口上，杯中盛满清水，使蒜瓣的下部浸入水中，置培养箱中，注意每天换水，经3~5天后，即可长出1-2cm的嫩根。 2、处理根尖：阳性检测采用1.0~2.5M CrO3，0.5~ 1.5M NaN3，150250mM EMS，对照用自来水处理， 处理时间24h。 3、恢复培养：处理后的根尖用自来水浸洗3次，每次 2-3min，洗净后在水中恢复培养24h。

3--蚕豆根尖微核实验

蚕豆根尖微核实验（诱导与检测部分） 一、实验目的 1、了解环境诱变物对微核产生的原理。 2、掌握微核试验技术。 3、了解毒理遗传学在环境监测中的应用及意义 二、实验原理 微核是无着丝点的染色体断片，在有丝分裂后期由于不能向两极移动而游离于细胞质中，在间期细胞核形成时，可在它附近看到若干个圆形的结构，直径大约是细胞直径的1/20到1/5，这就是微核。 微核简称(MCN)，是真核生物细胞中的一种异常结构，往往是细胞经辐射或化学药物的作用而产生。在细胞间期微核呈圆形或椭圆形，游离于主核之外、大小应在主核1/3以下。微核的折光率及细胞化学反应性质和主核一样。一般认为微核是由有丝分裂后期丧失着丝粒的断片产生的，但有些实验也证明整条的染色体或多条染色体也能形成微核。这些断片或染色体在细胞分裂末期被两个子细胞核所排斥便形成了第三个核块。已经证实微核率的大小是和用药的剂量或辐射累积效应呈正相关，这一点和染色体畸变的情况一样。所以可用简易的间期微核计数来代替繁杂的中期畸变染色体计数。 由于大量新的化合物的合成，原子能应用，各种各样工业废物的排出，使人们需要有一套高度灵敏、技术简单的测试系统来监视环境的变化。只有真核的测试系统更能直接推测诱变物质对人类或其它高等生物的遗传危害，在这方面，微核测试是一种比较理想的方法。且有研究显示以植物进行微核测试与以动物进行的一致率可达99%以上。目前微核测试已经广泛应用于辐射损伤、辐射防护、化学诱变剂、新药试验、染色体遗传疾病及癌症前期诊断等各方面。 利用蚕豆根尖作为实验材料进行微核测试，可准确的显示各种处理诱发畸变的效果，并可用于污染程度的监测。 微核产生的概率可与诱变因子的剂量成正比，因此可以用微核出现的频率来评价环境诱变因子对生物遗传物质的损伤程度。 三、实验器具、药品 1、实验材料 蚕豆种子 2、实验器材 光学显微镜、试管（10ml）、蚕豆发芽盒、镊子、手术刀、载玻片、盖玻片、滤纸等。 3、试剂 1）NaN3(叠氮钠) 2）卡诺氏固定液（乙醇和冰醋酸按照体积比3：1混合配制） 4）6mol/L盐酸： 配制：取49.5ml 37.5%的盐酸，再加入50.5ml水稀释至100ml容量瓶. 四、实验步骤 1、种子处理：

毒理学大蒜根尖染色体观察.

微核试验 一、研究的目的与意义： 1：知道微核产生的原理。 2：学会识别微核以及计算微核率。 3：学用微核试验来评价药物、放射线、有毒物质等对人体细胞或体外培养细胞遗传学损伤。 4：了解不同化学试剂对细胞各个分裂期的影响。 由于大量新的化合物的合成，原子能应用，各种各样工业废物的排出，使人们很需要有一套高度灵敏，技术简单的测试系统来监视环境的变化。真核测试系统能直接推测诱变物质对人类或其它高等生物的遗传危害。利用微核实验这种遗传毒性试验方法可以检测检测染色体或者有丝分裂器损伤，计数细胞的微核率。检测已存在或潜在的危害。 二、研究内容与技术路线 2.1 研究内容： 通过观察不同浓度的1,2,4-三氯苯和铬以及它们的交互作用对大蒜根尖细胞微核率以及不同分裂期细胞的比例的影响，来判断其遗传毒性。 2.2 技术路线：冷冻保存 24h 孚尔根染液配制 三、实验方法 3.1实验材料

大蒜、甲醇、冰乙酸、碱性品红、偏重亚硫酸钠、比重 1.18 的浓盐酸、蒸馏水、酒精、重铬酸钾、氯苯、丙酮、显微镜、载玻片、盖玻片、定性滤纸、烧杯、100毫升容量瓶、200 毫升容量瓶、镊子、刀片、纱布、青霉素小瓶、移液管、试管 3.2试剂准备： 1、1mol/LHCl ：用10mL 移液管量取8.69mL 浓盐酸加入100mL 容量瓶，用在蒸馏水定容至100mL 。 2、50mg/L、100mg/L、：称取170mg重铬酸钾，加水溶解，在200mL容量瓶中定容，配制300mg/L的Gr 6+母液，然后稀释到50mg/L、100mg/L。 3、卡诺式固定液：将甲醇：冰乙酸按3:1 比例混合配制 5、Schiff 氏试剂：称取0.5g 碱性品红加入到100mL 煮沸的蒸馏水中，时时振荡，继续煮5min，使碱性品红充分溶解。冷却致50C，用滤纸过滤，滤液中加入 10ml1mol/LHCI，冷却致25C，加入1.5g偏重亚硫酸钠，充分振荡，塞紧瓶塞，在室温暗处静置至少24h ，用粗滤纸过滤于棕色瓶中，封瓶塞，外包黑纸。贮存于冷暗处（4C冰箱中）备用。 3.3实验过程： 3.3.1、材料准备： 将大蒜剥皮后放进垫了滤纸的培养基中，加入清水，放进25°C恒温培养箱中 2~3天，催化大蒜生根。 选择根长0.5~1cm 且不定根生长情况差不多的大蒜分为10 组 3.3.2、Schiff 氏试剂检验：

微核实验-毒理学-洋葱根尖染色体观察

微核试验 摘要：利用大蒜根尖细胞微核染色与计数技术测定不同浓度6价铬和1.2,4-三氯苯以及它们的不同浓度混合液对大蒜根尖分生区细胞微核率和细胞分裂各期的影响。以蒸馏水为对照组，设置的实验组为3组不同浓度的6价铬和三氯苯以及它们的混合液。用孚尔根染液法对不同试剂及各浓度的处理的根尖进行染色。在显微镜下观察各试剂各浓度处理下的微核率以及不同分裂期细胞的比例。 关键字：孚尔根染色法、微核、微核率、分裂期细胞 Abstract:Use of garlic root tip cell micronucleus dyeing and counting technology . Different concentrations of chromium 6 and 1,2, 4 - t hree hlorobenzene as well as their different concentration mixture to garlic root tip meristematic cells in the areas of micronucleus rate and the influence of each stage of cell division.With distilled water as control group, the group set up for the three groups of different concentrations of chromium 6 and 3 chlorobenzene and their https://www.sodocs.net/doc/c615940853.html,efu's root dye solution for different reagent and the concentration of the treatment of root tip for dyeing. Under the microscope to observe the reagent concentration under the treatment of micronucleus rate and different proportion of split phase cells Key Words：Fu's root staining method、micronucleus、Micronucleus rate、Split phase cells 一、研究的目的与意义： 1：知道微核产生的原理。 2：学会识别微核以及计算微核率。 3：学用微核试验来评价药物、放射线、有毒物质等对人体细胞或体外培养细胞遗传学损伤。 4：了解不同化学试剂对细胞各个分裂期的影响。 由于大量新的化合物的合成，原子能应用，各种各样工业废物的排出，使人们很需要有一套高度灵敏，技术简单的测试系统来监视环境的变化。真核测试系统能直接推测诱变物质对人类或其它高等生物的遗传危害。利用微核实验这种遗传毒性试验方法可以检测检测染色体或者有丝分裂器损伤，计数细胞的微核率。检测已存在或潜在的危害。 二、研究进展 微核( micronucleus, 简称MCN) , 是真核生物细胞中的一种异常结构, 是染色体畸变在间期细胞中的一种表现形式。一般认为, 微核是由有丝分裂后期丧失着丝粒的染色体片断产生的。在细胞有丝分裂时, 受到有害理化因子的损伤, 染 色体发生断裂, 在下一次分裂后期, 丧失着丝粒的染色体片断行动滞后, 不能进

植物染色体毒理实验 蚕豆根尖微核实验

蚕豆根尖微核实验 摘要：本实验用洗发水诱导蚕豆根尖发生畸变，通过固定、酸解、，染色、压片、镜检等一系列过程观察蚕豆根尖细胞核及微核，通过微核的数量判断洗发水对人体毒害作用的大小。由于产生的微核数量与外界诱变因子的强弱成正比，因此可用微核实验来评价各种诱变因子对生物遗传物质的影响程度。 关键词：蚕豆根尖微核卡诺固定液吉姆萨染液 前言：随着相关研究人员的一系列实验表明：日常用品中的一些物质会对植物细胞尤其是分生组织细胞产生明显影响，它们会破坏细胞中的遗传物质——染色体，导致微核的产生，破坏细胞正常的生命活动。 微核（micronucleus,简称MCN），也叫卫星核，是真核类生物细胞中的一种异常结构，是染色体畸变在间期细胞中的一种表现形式。在细胞间期，微核呈圆形或椭圆形，游离于主核之外，大小应在主核1/3以下，着色与主核一致或稍浅，呈圆形或椭圆形。蚕豆根尖细胞的微核是由于根尖细胞在分裂时受到外界诱变因子作用，形成的不随细胞分裂进入细胞核的染色体片段。 以观察细胞中微核的形成来检测遗传毒物，称为微核实验。利用蚕豆根尖作为实验材料进行微核测试，可准确的显示各种处理诱发畸变的效果，并可用于污染程度的监测。目前微核测试已经广泛应用于辐射损伤、辐射防护、化学诱变剂、新药试验、染色体遗传疾病及癌症前期诊断等各方面。 1．材料 1.1实验材料： 蚕豆（根尖细胞的染色体大，DNA含量高，对诱变因子反应敏感）

1.2实验药品： 1mol/L盐酸、固定液（乙醇、冰醋酸3：1配制）、吉姆萨染液 1.3实验用具： 显微镜、镊子、载玻片、盖玻片、盆、纱布、烧杯、水浴锅等 2．步骤 2.1 浸种催芽 将试验所用适量蚕豆放入盛水烧杯盆中，在室温下浸泡1d。种 子吸胀后，用温润纱布松散包裹蚕豆置盆中，保持温度催芽2d，此时根长出将近约1.5cm。 2.2 毒性处理 选取根生长良好，根长一致的种子，分成两组，一组放入盛有被测洗发水的盆中，被测液浸没根尖即可。另一组放入盛有自来水的盆中培养，做对照组。两组均处理1d。 2.3恢复培养 处理后的种子用自来水浸洗，洗净后再置入盛有自来水的盆中， 恢复培养1d。 2.4 固定 将恢复后的种子，从根尖顶端切下1cm长的幼根，用卡诺固定液 固定5-6h。 2.5 酸解 用蒸馏水浸洗干净固定好的幼根，吸净蒸馏水，加入1mol/L盐酸将幼根浸没，60℃酸解15分钟，幼根软化即可。 2.6 染色

微核诱导实验论文

河北师范大学生命科学学院2011级 生物科学专业 细胞生物学实验论文 题目：洗洁精、甲醛对蚕豆根尖细胞的微核诱导及检 测 班级： 2011级生科3班 小组成员：肖祖文郭志雷赵怡璇谷维佳 指导老师：赵红桃尚建秀 时间：2013-11-23

目录 摘要：.................................................................................................... - 3 - 1、背景与研究目的 ............................................................................. - 3 - 2、材料与方法： ................................................................................. - 4 - 2.1材料............................................................................................ - 4 - 2.2方法............................................................................................ - 4 - 2.2.1材料准备： ...................................................................... - 4 - 2.2.3染毒处理： ...................................................................... - 4 - 2.2.4恢复培养：...................................................................... - 4 - 2.2.5根尖处理： ...................................................................... - 4 - 2.2.6染色、压片和镜检计数: ................................................. - 5 - 2.2.7预期结果 .......................................................................... - 5 - 3、结果及分析...................................................................................... - 5 - 4.讨论..................................................................................................... - 6 - 4．1实验结果分析 ........................................................................ - 6 - 4.2下一步实验改进 ....................................................................... - 7 - 4.3心得体会： ............................................................................... - 7 - 参考文献................................................................................................ - 8 -

大蒜根尖染色体观察实验

大蒜根尖染色体实验报告 一、实验目的与实验要求 1、掌握洋葱培养的方法，掌握利用秋水仙素诱导植物多倍体的方法。 2、掌握洋葱根尖制片的方法，复习染色、压片的基本操作。 3、通过对于有丝分裂相的观察，统计洋葱染色体数目，加深对于细胞有丝 分裂过程的理解。 4、对比进行多倍体诱导前后的洋葱根尖，理解四倍体与二倍体的区别，认 识微核和植物细胞分裂期的各形态特征。 5、体验开放式实验教学，培养生物实验意识，提高学习的主动性、获取实 验知识的能力和撰写实验报告水平。 二、实验方案 1、实验仪器 显微镜、载玻片、盖玻片、试管、烧杯、小塑料管、滤纸、刀片、解剖 针、滤纸等 2、实验药品 新鲜、健康的洋葱鳞茎一个；0.02%秋水仙素、1mol/L HCl、醋酸洋红染 液、卡诺氏固定液，碱性品红、乙酸，乙醇等。 3、实验原理 (1)洋葱的根尖 洋葱根尖的整体结构如右图，其中只有分生区的初生分生组织由于细胞始终处于持久而强烈的有丝分裂之中而作为我们的观察对象， 其余部分在制片时都应当尽量剔除来保证观察效果。 (2)多倍体的诱导 多倍体的诱导使用秋水仙素，秋水仙素可以阻止微管蛋白的聚合，从而使有丝分裂中期纺锤体不能正常形成，但是姐妹染色单体照常想 成，只是没有被拉向两级，于是染色体数目加倍。 各步骤的作用：固定液可以迅速杀死细胞，保持细胞形态在有丝分裂相。解离可以破坏细胞的胞间层（果胶），使细胞之间的联系变 松散，有利于压片和染色。漂洗可以洗去过量的盐酸，防止解离过度

破坏细胞结构或影响染色效果（盐酸是酸性，而醋酸洋红是碱性染料）。 (3)有丝分裂 完整的有丝分裂相包括G1期（合成前期）、S期（合成期）、G2期（合成后期）和M期（分裂期），其中G1期、S期和G2期合称间 期，细胞完成DNA的复制以及有丝分裂的准备，而M期又可以分为 前期、中期、后期和末期，为了形态观察的方便，本实验采用后一种 分法。如表一。 表一植物有丝分裂各时期特点 4、实验步骤 (1)将大蒜剥皮后放进垫了滤纸的培养基中，加入清水，放进25℃恒温 培养箱中2~3天，催化大蒜生根。 (2)选择根长0.5~1cm且不定根生长情况差不多的大蒜分为10组。 (3)在大蒜生根之后，先选取一些根尖放进卡诺式固定液中固定3个小时， 用Schiff氏试剂染色，镜检，观察染色体是否能染上色以及染色效果。 若染色效果不行，则重新配制Schiff氏试剂，直至染色效果良好，然 后将其贮存于4℃冰箱中准备使用。 (4)将分好组的大蒜分别用清水、50mg/L Gr6+、100mg/L Gr6+、150mg/L Gr6+、30 mg/L 1,2,4-三氯苯、40 mg/L 1,2,4-三氯苯、50 mg/L 1,2,4-三 氯苯、浓度分别为50mg/L Gr6+和30 mg/L 1,2,4-三氯苯的混合液、 100mg/L Gr6+和40 mg/L 1,2,4-三氯苯的混合液、150mg/L Gr6+和50 mg/L 1,2,4-三氯苯的混合液培养24小时。清水组为对照组。

微核试验报告

基础生物学实验自主设计性实验 实验名称：方便面面饼液对蚕豆根尖微核率的影响专业年级：2008级生物科学类 成员: 指导教师： 起止时间：2010年10月-2010年12 月 一、摘要

用蚕豆根尖细胞微核技术检测不同种类方便面面饼液微核的诱变效果。设置了阴性对照：自来水处理组，实验组：小浣熊、康师傅、统一、五谷道场、幸运五组饼液分别处理蚕豆根尖，阳性对照：用0.02g/L的醋酸铅溶液处理。发现方便面面饼液在诱导微核产生方面影响明显，醋酸铅溶液具有诱导微核产生的作用。 关键字：蚕豆根尖，方便面面饼，微核千分率，污染指数 二、实验背景和目的 随着现代社会的发展，越来越多的化学物质运用到人们的日常生活之中，如种类繁多的食品添加剂。而其中有些物质具有较强的危害，如致畸，致癌，致突变性。为了检测已存在或潜在的危害，各种检测技术应运而生。微核试验是检测染色体或有丝分裂器损伤的一种遗传毒性试验方法。无着丝粒的染色体片段或因纺锤体受损而丢失的整个染色体，在细胞分裂后期仍留在子细胞的胞质内成为微核。用微核试验来评价药物、放射线、有毒物质等对人体细胞或体外培养细胞遗传学损伤仍是一个直观有效可行的方法,在遗传毒理、医学、食品、药物、环境等诸多方面得到了广泛的应用。微核计数经济,迅速,简便,不需要特殊技能,可以统计更多的细胞并实现计算机自动计数。我们采用蚕豆作为实验材料，采用植物微核技术来检测方便面面饼中添加剂对人体是否产生危害。 方便面是日常生活中经常接触到的食品，其市场占据快餐食品的大壁江山，在超市中油炸方便面与非油炸方便面占到快餐食品的60%到70%。另一方面，在各媒体的报道中，经常出现有关方便面的食用

洋葱根尖染色体观察教学教材

洋葱根尖染色体观察

大蒜根尖多倍体诱导与染色体观察 实验目的： 1、了解利用秋水仙素诱导植物多倍体的方法。 2、掌握大蒜根尖制片的方法。 3、通过对玻片的观察，统计染色体数目。 4、对比不同的大蒜根尖染色体数目，理解二倍体和四倍体的区别。 实验原理： 1.有丝分裂 完整的有丝分裂相包括G1期（合成前期）、S期（合成期）、G2期（合成后期）和M期（分裂期），其中G1期、S期和G2期合称间期，细胞完成DNA 的复制以及有丝分裂的准备，而M期又可以分为前期、中期、后期和末期，为了形态观察的方便，本实验采用后一种分法。观察有丝分裂，重点在于观察染色体的形态。在细胞分裂前期，细胞核解体，染色质凝聚显现出染色体的形态；在前中期，染色体散乱地分布于细胞的中部；在中期，纺锤体形成，染色体受到微管的牵引，着丝粒成行排列于赤道板上；在后期，染色体受到动粒微管的牵引，向细胞两级运动；在末期，染色体重新解螺旋，细胞核重新形成。细胞染色体过程示意图见图1. 仅供学习与交流，如有侵权请联系网站删除谢谢2

图1：细胞有丝分裂过程示意图 2.大蒜的根尖 大蒜根尖的整体结构如图2，其中只有分生区的初生分生组织由于细胞始终处于持久而强烈的有丝分裂之中而作为我们的观察对象，其余部分在制片时都应当尽量剔除来保证观察效果。 仅供学习与交流，如有侵权请联系网站删除谢谢3

图2：大蒜根尖结构示意图 3.多倍体诱导 秋水仙素易溶于冷水、不易溶于热水、有毒、针状结晶或淡黄色粉末，是诱导多倍体的一种常用试剂，其是从百合科植物秋水仙的鳞茎和种子中提取出来的一种生物碱。它的作用机理是与微管蛋白单体结合，抑制微管的形成，进一步抑制纺锤体的形成，使染色单体分离受阻，形成同源多倍体。因此，秋水仙素作用于正在分裂的细胞，如生长点才能产生作用，诱导多倍体的形成。秋水仙素诱导多倍体在蔬菜和观赏植物的应用非常广泛，但是在大蒜方面的报道却很 少。 图3：秋水仙素的化学结构式 实验器材： 实验材料：经秋水仙素处理过的大蒜根。（秋水仙素溶液配制取秋水仙素1g （先用少量95%乙醇助溶），溶于250～500ml蒸馏水中，配成浓度为0.2～0.4%的溶液，冰箱中保存。将大蒜架在盛水的烧杯中进行水培。待根尖长到 1cm时，将大蒜盛在0.4%秋水仙素溶液的瓶盖或小烧杯上，避光处理24小时，然后再水培24小时加倍后根尖很肥大。） 实验试剂：1mol/L的HCl溶液，改良苯酚品红溶液。 实验器材：刀片，镊子，双目显微镜，载玻片，盖玻片，烧杯，滤纸。 实验步骤： 1、取材：取大蒜发根至0.5-1cm，然后转入盛有0.15%秋水仙素水溶 液的培养皿中继续培养24小时到30小时，待观察到根部有膨大时 取出固定。（一般植物细胞周期17-18小时） 2、固定：在卡诺固定液中固定24小时，移至70%乙醇中保存或者备 用。 仅供学习与交流，如有侵权请联系网站删除谢谢4