细胞核内参PCNA抗体

核内参PCNA抗体-用于细胞核内参的PCNA单抗

增殖细胞核抗原（Proliferating Cell Nuclear Antigen简称PCNA）由Miyachi等于1978年在SLE（系统性红斑狼疮）患者的血清中首次发现并命名，因其只存在于正常增殖细胞及肿瘤细胞内而得名。PCNA是一种分子量为36KD的蛋白质，在细胞核内合成，并存在于细胞核内，为DNA聚合酶的辅助蛋白。由于其在细胞核内稳定表达，因此其抗体被广泛应用于细胞核蛋白的内参抗体。

如何选择合适的细胞核内参抗体？

常用的细胞总蛋白质内参有GAPDH和细胞骨架蛋白β-Actin或β-Tubulin等。对于一些植物的样本，则需要特别的植物Actin 蛋白作为内参。当实验样品中只是核蛋白，而不是细胞总蛋白提取液时，可以用组蛋白H（Histone H），或者增殖细胞核抗原（PCNA）等为核内参抗体。除了这些，其它常见的核蛋白内参还有K70, K80, Lamin A和B，在一些文献报道中，Erk2、TATA binding protein （TBP）以及c-Jun、c-Fos等都有使用。但是需要注意的问题是核蛋白内参的选择需要考虑实际的试验环境，比如在涉及细胞增殖相关试验中，c-Jun由于自身表达变化就不适合做内参；而在凋亡实验时，TBP、Lamin等也不适合作为内参。

另外，我们还需要根据目的蛋白的大小选择合适的核内参，我们推荐内参要与检测的目的蛋白的分子量最好相差5KD以上，因此你需要根据你目的检测蛋白的分子量来选择合适的内参。PCNA的检测分子量大约在28kD，而Histone H3的检测条带大约在18kD，因此PCNA比较适合用于检测目标蛋白在较大的WB实验，而Histone H3则不适合用于13kD-23kD大小的目的蛋白内参。另外，虽然PCNA是最合适的核内参抗体之一，但是在某些条件下，一些影响增殖的因素会导致样品间PCNA含量的变化，就不适合作为内参。

一开始购买Abbkine的PCNA抗体是用来做WB的，效价挺高的。后来我们使用了组织块作为样品做共定位，我尝试使用该抗体对PCNA做定位，做免疫组织化学，WB和IHC效果都很不错。——中南民族大学生科院一客户

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高中生物复习第5讲 细胞膜与细胞核

第5讲细胞膜与细胞核 测控导航表 知识点题号 1.细胞膜的制备、成分、结构和功能1,2,3,4,5,13,15 2.细胞核的结构和功能6,7,8,9,14 3.细胞膜和细胞核的相关实验10,11,12 一、选择题 1.(2018·湖北宜昌期中)下列有关细胞膜制备及观察的叙述,正确的是( C ) A.家鸡的红细胞是最佳的实验材料 B.若选用洋葱鳞片叶表皮细胞应先用镊子去除细胞壁 C.制备细胞膜应先利用吸水涨破法,再利用离心法获取 D.可以利用显微镜的高倍镜直接观察 解析:哺乳动物的红细胞没有细胞核和众多的细胞器,是制备细胞膜的最佳材料,家鸡的红细胞、洋葱鳞片叶表皮细胞具有细胞核和各种细胞器不是最佳选材;哺乳动物的红细胞吸水涨破,然后用离心法分离即可得到纯净的细胞膜;显微镜观察时应先用低倍镜再转换成高倍镜,不能用高倍镜直接观察。 2.下列关于细胞膜的叙述,错误的是( D ) A.细胞膜是一种选择透过性膜 B.磷脂分子的亲水端朝向外侧,亲脂端朝向内侧

C.细胞膜中的磷脂和大多数蛋白质都具有流动性 D.糖蛋白主要位于膜外侧,载体蛋白主要位于膜内侧 解析:细胞膜能够控制物质进出细胞,是一种选择透过性膜;磷脂分子的亲水端朝向外侧,与细胞质或细胞外液接触,亲脂端朝向内侧;构成细胞膜的磷脂分子和大多数蛋白质分子都具有流动性,使得细胞膜具有一定的流动性;糖蛋白位于细胞膜的外侧,载体蛋白主要位于膜的磷脂双分子层中。 3.(2014·全国Ⅰ卷)关于细胞膜结构和功能的叙述,错误的是( C ) A.脂质和蛋白质是组成细胞膜的主要物质 B.当细胞衰老时,其细胞膜的通透性会发生改变 C.甘油是极性分子,所以不能以自由扩散的方式通过细胞膜 D.细胞产生的激素与靶细胞膜上相应受体的结合可实现细胞间的信息传递 解析:脂质约占细胞膜总量的50%,蛋白质约占40%,脂质和蛋白质是组成细胞膜的主要物质。细胞衰老时,细胞膜通透性改变,使物质运输能力降低。甘油可以以自由扩散的方式通过细胞膜。细胞产生的激素与靶细胞膜上的相应受体结合,从而调节细胞的代谢,实现了细胞之间的信息传递。 4.下图为细胞膜结构的模式图,下列叙述错误的是( D )

western内参GAPDH

刚开始接触western，看了很多和内参有关的资料，越来越迷惑。 请教园子里的高手：1 内参的主要作用是什么，是必须的吗? 2 内参是和样品一起加，还是单独加，抗体孵育时是分着加，还是一起，条件一致吗？3 单是证明是否样品中存在某蛋白，不用内参可以吗？ 请赐教！ 1、在实验中，可能存在总蛋白浓度测定不准确；或者蛋白质样品在电泳前上样时产生的样品间的 操作误差；这些误差需要通过测定每个样品中实际转到膜上的GAPDH 的含量来进行校正，所以一般的western实验都需要进行内参设置。具体校正的方法就是将每个样品测得的目的蛋白含量与本样品的GAPDH 含量相除，得到每个样品目的蛋白的相对含量。然后才进行样品与样品之间的比较。 所以有时候要用内参 2、和一抗一起加，按照内参的比例加 3、可以不用加内参 1.内参是样品中本身就有的，有其一定的分子量。一抗.二抗时得分开孵育。 2.只是定性的话不需要加内参 Western Blot除了能证明某样品中含有某种蛋白之外，其最为重要的作用是比较不同条件下或者不同组织中，目的蛋白表达量的相对多少。即为蛋白表达水平最直接的证据。 要衡量蛋白的表达水平，前提条件就是等量的上样量。内参的意义就是保证上样量的一致。内参即是内部参照（Internal Control），对于哺乳动物细胞来说一般是指由管家基因编码表达的蛋白(Housekeeping Proteins)，它们在各组织和细胞中的表达相对恒定，在检测蛋白的表达水平变化时常用它来做参照物。如果内参的条带亮度基本一致，那么就可以认为上样量也基本一致。 常用的蛋白质内参有GAPDH（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase）和细胞骨架蛋白beta-actin或beta-tubulin。最近发现tubulin的表达水平比其它看家基因更加恒定。因此人们越来越多的使用tubulin做为内参。 在Western Blotting实验过程中使用内参的方法有： 一、超级简便的标记内参使用法：只要在二抗孵育时加入HRP标记内参抗体，按照正常操作即可。 二、普通内参：当目的蛋白的分子量大小与选用的内参蛋白分子量相差不大时，可以先进行目的蛋白的抗体温育显色和检测。然后使用Strip缓冲液洗掉膜上的抗体，重新进行内参蛋白的抗体温育、显色检测。 三、（也是我们实验室用的方法）当目的蛋白的分子量大小与选用的内参蛋白分子量大小相差比较明显情况下，可以在转膜后预染，根据蛋白质Marker的大小将膜剪为大分子量和小分子量两部分，使内参蛋白与目的蛋白分开。然后两块膜分别与内参蛋白抗体以及目的蛋白抗体进行温育，二抗温育以及显色。 很感谢大家的帮助，现在总算明白了一些

【精品】自身抗体检查

自身抗体检查1。抗脉络膜抗体 【正常值】血凝法：为阴性。 【临床意义】阳性，主要见于交感性眼炎、脉络膜炎。 2。抗脑组织抗体 【正常值】血凝法和补体结合法：均为阴性。 【临床意义】阳性,见于多发性硬化病、多发性神经炎、接种后及感染后脑炎。 3.抗甲状腺球蛋白抗体(ATGA） 【正常值】间接免疫荧光法：小于1：10为阴性；滴金法:为阴性；酶联免疫吸附试验：为阴性。 【临床意义】血清ATGA是诊断甲状腺自身免疫性疾病的一个特异性指标,80％～90%的慢性甲状腺炎病人及60％的甲状腺功能亢进病人此值可呈强阳性.甲状腺功能亢进病人在治疗过程中，会发生一过性的甲状腺功能低下，此情况的发生，与ATGA密切相关。ATGA可作为甲状腺肿块鉴别诊断的指标，其阳性一般考虑为慢性淋巴细胞性甲状腺炎，而非甲状腺肿块。正常妇女，随着年龄的增长，ATGA阳性检出率增加，40岁以上可达18％,这可能是自身免疫性甲状腺疾病的早期反应。ATGA阳性，还见于原发性甲状腺功能减退、某些肝脏病、各种胶原性疾病、重症肌无力等。 4。抗甲状腺微粒抗体(ATM)

【正常值】阴性(〈15％)。 【临床意义】ATM阳性，主要见于慢性淋巴细胞性甲状腺炎与甲状腺功能亢进，其阳性率可达60%~90%；还有甲状腺肿瘤、亚急性甲状腺炎、系统性红斑狼疮等也呈阳性。 5.抗甲状腺过氧化物酶抗体（ATPO） 【正常值】间接免疫荧光法:〈1：10为阴性；滴金法:为阴性;酶联免疫吸附试验：为阴性。 【临床意义】阳性，主要见于慢性淋巴细胞性甲状腺炎、甲状腺功能亢进、原发性甲状腺功能减低。某些病人抗甲状腺球蛋白抗体（ATG）阴性，但ATPO 阳性，因而两种抗体同时检测,可提高抗甲状腺自身抗体阳性的检出率，并可作为临床诊断和鉴别诊断自身免疫性甲状腺炎的重要依据. 6。抗肾上腺抗体 【正常值】荧光抗体法:为阴性. 【临床意义】阳性，主要见于艾迪生病。 7。抗肾上腺皮质抗体 【正常值】免疫荧光法：为阴性。 【临床意义】阳性，常见于慢性肾上腺皮质功能减退,阳性率为50%左右,滴度为1:64。

Western Blotting中使用内参

要检测一个基因的表达产物是否正确，或者比较表达产物量的相对变化，首选方法是Western Blot。因为Western Blot操作相对简单方便，既可以定*分析表达产物，同时还可以指示目的蛋白量的相对变化。虽然，顺利的时候Western Blot做起来很简单，可不顺的时候也很令人心烦――做不出结果啦、假阳*啦、结果出现多条带啦、到底是一抗有问题还是二抗有问题啦……毕竟，作为一种有活*的生物大分子，抗体和抗原的反应毕竟不象1+1那么明确，而用这种不确定的试剂来测定同样知之甚少的表达产物，确实是有一定的不确定*的。所以，严谨的Western Blot实验设计中要求有良好的参照体系，对实验结果分析是非常有用。特别是当实验出现问题时，借助参照体系很容易就可以查出问题所在，而不必抓耳挠腮怨天尤人。良好的参照体系通常包括分子量Marker（用来确定蛋白条带对应的分子量大小），空白载体对照（如果是诱导表达体系还应该有诱导前的对照），已知量标准产物的正对照；另外还有内参。可是由于经费限制或者偷懒的原因，国内的不少人做Western Blot往往省略参照，导致结果出现问题时无法分析结果――即便有结果也可能影响结果的分析。 内参是最容易被忽略的一项。我们知道，要用Western Blot比较不同条件下或者不同组织中，目的蛋白表达量的相对多少，前提条件是等量的细胞上样，才有比较的基础。特别表达量不高时，上样量的差别就很可能影响结果的分析。所以你需要内参。 内参即是内部参照（Internal Control），对于哺乳动物细胞表达来说一般是指由管家基因编码表达的蛋白(Housekeeping Proteins)，它们在各组织和细胞中的表达相对恒定，在检测蛋白的表达水平变化时常用它来做参照物。在Western Blotting 实验中，除了需要进行蛋白抽提、蛋白定量、等量蛋白上样电泳、转膜、靶蛋白抗体孵育、显色等步骤以外，还需要进行内参的检测，以校正蛋白质定量、上样过程中存在的实验误差，保证实验结果的准确*。 在国外发表的文章中，Western Blotting 实验结果须进行内参校正已成为一种惯例。但是，国内仍有不少科研人员在Western Blotting实验中忽略了内参的使用，将蛋白浓度测定作为规范需相互比较的各种样品间上样量等同的唯一方法。然而各种蛋白质浓度定量方法，都存在局限*，不能完全准确的确定各种样品的准确蛋白浓度。如UV法直接定量，适合测试较纯净、成分相对单一的蛋白质，相对于比色法来说，操作简单，但是容易受到平行物质的干扰，如DNA的干扰；且敏感度低，要求蛋白的浓度较高。比色法测定蛋白浓度一般有BCA，Bradford，Lowry 等几种方法。BCA法与Lowry法都容易受到蛋白质之间以及去污剂的干扰。Bradford 法敏感度最高，且与一系列干扰Lowry，BCA 反应的还原剂（如DTT，巯基乙醇）相容。但是对于去污剂依然是敏感的，其最主要的缺点是不同的标准品会导致同一样品的结果差异较大，无可比*。另外，蛋白质定量以后进行电泳时需要等量上样，此步骤也存在操作误差。在Western blotting 实验时使用内参，即可简便地对定量和上样步骤产生的误差进行校正。 在Western Blotting中使用内参其实就是在WB过程中的另外用内参对应的抗体检测内参，这样在检测目的产物的同时可以检测内参的表达，由于内参在各组织和细胞中的表达相对恒定，借助检测每个样品内参的量就可以用于校正上样误差，这样半定量的结果才更为可信。此外使用内参可以作为空白对照，检测蛋白转膜情况是否完全、整个Western Blot显色或者发光体系是否正常。 实验结果分析其实很简单：如果样品蛋白量有限，只够进行一次电泳转膜实验时，分别检测样品的内参量和目的蛋白量。将各样品目的蛋白量分别除以其内参含量，得到的数值即为内参校正后的各样品中目的蛋白相对含量，再用此数值进行样品间的比较和分析，得到目的蛋白含量在不同样品间的实际变化结果。如果样品量充分，可以先检测内参，观测样品间内参显色条带是否一致，根据差异大小调整各样品的上样量重新进行Western Blotting实验，至内参量一致为止；若内参一致，即可进行不同样品间目的蛋白表达变化分析。这样虽然麻烦一点，但是可以保证结果更有说服力，更可信。毕竟我们的实验是一种严谨的工作。

内参基因βActin简介

内参基因βA c t i n简介标准化管理部编码-[99968T-6889628-J68568-1689N]

内参基因β-Actin简介 日期：2012-05-03来源：未知作者：周慕云点击：次 β-Actin 内参即是内部参照，它们在各组织和细胞中的表达相对恒定，在检测基因的表达水平变化时常用它来做参照物。常用的PCR内参有GAPDH 、β- actin 、18sRNA、28sRNA 、B2M、ACTB、SDHA、HPRT1、ARBP内参基因等。 β-Actin简介 Actin即“肌动蛋白”，是细胞的一种重要骨架蛋白。同时Actin在细胞分泌、吞噬、移动、胞质流动和胞质分离等过程中起重要作用。Actin在不同物种之间高度保守，以至于很难获得较好的针对actin的抗血清。Actin大致可分为六种，其中四种是不同肌肉组织特异性的，包括α-skeletal muscle actin，α-cardiac muscle actin，α-smooth muscle actin，和γ-smooth muscle actin; 其余两种广泛分布于各种组织中，包括β-actin(β-non-muscle)和γ-non-muscle actin。不同的actin之间同源性大于90%，但在N-terminal同源性仅50%-60%，因此N-terminal常被用作actin的抗原。β-Actin是横纹肌肌纤维中的一种主要蛋白质成分，也是肌肉细丝及细胞骨架微丝的主要成分。具有收缩功能，分布广泛。 β-Actin用途 β-Actin是PCR常用的内参，β-Actin抗体是Western Blot很好的内参指数。内参即是内部参照(Internal Control)，对于哺乳动物细胞表达来说一般是指由管家基因编码表达的蛋白。它们在各组织和细胞中的表达相对恒定，在检测蛋白的表达水平变化时常用它来做参照物。常用的蛋白质内参有细胞骨架蛋白beta-actin或beta-tubulin和GAPDH(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase)等。因此β-Actin

细胞膜与细胞核

第1讲细胞膜与细胞核(含生物膜的流动镶嵌模型) 知识点一细胞膜的成分、功能和制备 知识点二生物膜的结构 1．对生物膜结构的探索历程(连线) 2．生物膜的流动镶嵌模型

知识点三细胞核的结构和功能 1．结构 2．功能 1．巧记细胞膜的“一、二、三” 2．必记细胞膜的三个关键点 (1)不同种类的细胞，细胞膜的成分及含量不完全相同。如动物细胞膜中含有一定量的胆固醇，而植物细胞膜中含量很少或没有。 (2)细胞膜的组分并不是不可变的。如细胞癌变过程中，细胞膜组成成分发生变化，糖蛋白含量下降，产生甲胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)等物质。 (3)糖蛋白具有识别作用，分布于细胞膜外侧，据此可判断细胞的内外侧。

(4)功能越复杂的细胞膜，蛋白质的种类和数量越多，蛋白质决定了细胞膜的功能特性。 3．巧记细胞核结构和功能的“二、二、五” 4．理清关于细胞核认识的五个误区 (1)物质进出细胞核并非都通过核孔： ①核孔是蛋白质、RNA等大分子进出细胞核的通道，且该过程需要消耗能量。 ②小分子物质可通过核膜进出细胞核。 (2)并不是所有物质都能进出核孔： 核孔是由多种蛋白质构成的复合结构，表现出明显的选择性，如细胞核中的DNA不能通过核孔进入细胞质。 (3)核仁不是遗传物质的储存场所： 核仁参与rRNA的合成及核糖体的形成，细胞核中的遗传物质分布于染色体(染色质)上。 (4)原核细胞没有成形的细胞核，没有核仁和染色体，其核糖体的形成与核仁没有关系。 (5)误认为核孔的数量和核仁大小是固定的： 核孔的数量、核仁的大小与细胞代谢有关，如代谢旺盛、蛋白质合成量大的细胞，核孔数量多，核仁较大。 细胞膜的组成、结构与功能 [过程体验] 如图为细胞膜的结构模型，据此完成(1)～(4)题 (1)图中[a]是糖蛋白，具有细胞识别、保护、润滑等作用。根据a 可以判断细胞膜的内外侧，糖蛋白只分布于细胞膜的外表面。 (2)图中[b]是磷脂双分子层，其疏水性“尾部”相对，亲水性“头 部”向外，构成膜的基本支架。 (3)图中[c]是蛋白质，以镶在表面、嵌入、贯穿形式镶嵌在膜的基本支架上。 (4)不同细胞膜中的蛋白质种类和数量不同，功能越复杂的细胞中，其细胞膜上蛋白质

Western Blot内参选择

Western Blot内参选择 要检测一个基因的表达产物是否正确，或者比较表达产物量的相对变化，首选方法是Western Blot。因为Western Blot操作相对简单方便，既可以定性分析表达产物，同时还可以指示目的蛋白量的相对变化。 虽然，顺利的时候Western Blot做起来很简单，可不顺的时候也很令人心烦――做不出结果啦、假阳性啦、结果出现多条带啦、到底是一抗有问题还是二抗有问题啦……毕竟，作为一种有活性的生物大分子，抗体和抗原的反应不象1+1那么明确，而用这种不确定的试剂来测定同样知之甚少的表达产物，确实是有一定的不确定性的。所以，严谨的Western Blot实验设计中要求有良好的参照体系，对实验结果分析是非常有用。特别是当实验出现问题时，借助参照体系很容易就可以查出问题所在，而不必抓耳挠腮怨天尤人。 良好的参照体系通常包括分子量Marker(用来确定蛋白条带对应的分子量大小)、空白载体对照(如果是诱导表达体系还应该有诱导前的对照)、已知量标准产物的正对照，另外还有内参。可是由于经费限制或者偷懒的原因，国内的不少人做Western Blot往往省略参照，导致结果出现问题时无法分析结果，即便有结果也可能影响结果的分析。 内参即是内部参照(Internal Control)，对于哺乳动物细胞表达来说一般是指由管家基因编码表达的蛋白(Housekeeping Proteins)，它们在各组织和细胞中的表达相对恒定，在检测蛋白的表达水平变化时常用它来做参照物。在Western Blotting 实验中，除了需要进行蛋白抽提、蛋白定量、等量蛋白上样电泳、转膜、靶蛋白抗体孵育、显色等步骤以外，还需要进行内参的检测，以校正蛋白质定量、上样过程中存在的实验误差，保证实验结果的准确性。 实际上内参是最容易被忽略的一项。我们知道，要用Western Blot 比较不同条件下或者不同组织中，目的蛋白表达量的相对多少，前提条件是等量的细胞上样，才有比较的基础，特别表达量不高时，上样量的差别就很可能影响结果的分析，所以需要内参。在国外发表的文章中，Western Blotting 实验结果须进行内参校正已成为一种惯例。但是，国内仍有不少科研人员在Western Blotting实验中忽略了内参的使用，将蛋白浓度测定作为规范需相互比较的各种样品间上样量等同的唯一方法。

常见内参基因

β-A c t i n Actin即“肌动蛋白”，是细胞的一种重要骨架蛋白。同时Actin在细胞分泌、吞噬、 β-Actin 移动、胞质流动和胞质分离等过程中起重要作用。Actin在不同物种之间高度保守，以至于很难获得较好的针对actin的抗血清。Actin大致可分为六种，其中四种是不同肌肉组织特异性的，包括α-skeletalmuscleactin，α-cardiacmuscleactin，α-smoothmuscleactin，和 γ-smoothmuscleactin；其余两种广泛分布于各种组织中，包括β-actin(β-non-muscle)和 γ-non-muscleactin。不同的actin之间同源性大于90%，但在N-terminal同源性仅50%-60%，因此N-terminal常被用作actin的抗原。β-Actin是横纹肌肌纤维中的一种主要蛋白质成分，也是肌肉细丝及细胞骨架微丝的主要成分。具有收缩功能，分布广泛。 β-Actin用途 β-Actin是PCR常用的内参，β-Actin抗体是WesternBlot很好的内参指数。内参即是内部参照（InternalControl），对于哺乳动物细胞表达来说一般是指由管家基因编码表达的蛋白。它们在各组织和细胞中的表达相对恒定，在检测蛋白的表达水平变化时常用它来做参照物。常用的蛋白质内参有细胞骨架蛋白beta-actin或beta-tubulin和GAPDH （glyceraldehyde-3-phosphatedehydrogenase）等。因此β-Actin抗体、β-Tubulin抗体以及GAPDH抗体成为最常见的三个动物细胞内参抗体。β-Actin作为内参是得到了公认的，这是针对大多数组织和细胞来说的，它广泛分布于细胞浆内，表达量非常丰富。Beta-actin 由375个氨基酸组成，分子量大小为42-43kDa左右。 β-actin的蛋白水平通常不会发生改变，因此被广泛用于Western时上样量是否一致的参照，也常被用于免疫染色观察细胞的微丝结构。在用作Western的参照时，Actin抗体和Tubulin抗体的主要不同之处在于两者所识别蛋白的分子量不同，这样可以选择合适的参照在同一块胶同一张膜上实现同时检测目标蛋白和参照蛋白。 GAPDH GAPDH或G3PDH是甘油醛-3-磷酸脱氢酶 （glyceraldehyde-3-phosphatedehydrogenase）的英文缩写。该酶是糖酵解反应中的一个酶，由4个30－40kDa的亚基组成，分子量146kDa。该酶基因为管家（housekeeping）基因，几乎在所有组织中都高水平表达，在同种细胞或者组织中的蛋白质表达量一般是恒定的，且不受含有的部分识别位点、佛波脂等的诱导物质的影响而保持恒定，故被广泛用作抽提totalRNA，poly(A)+RNA，Westernblot等实验操作的标准化的内参。 GAPDH结构图

GAPDH内参抗体,抗GAPDH单抗,GAPDH小鼠源单克隆抗体

https://www.sodocs.net/doc/cc18717659.html, GAPDH内参抗体，抗GAPDH单抗，GAPDH小鼠源单克隆抗体 Anti-GAPDH Mouse Monoclonal Antibody （ 2B5） 在Western Bloting实验中，可能存在总蛋白浓度测定不准确，或者蛋白质样品在电泳前上样时产生的样品间的操作误差；这些误差可以通过测定每个样品中实际转到膜上的内参，比如内参GAPDH的含量来进行校正。GAPDH（甘油醛-3-磷酸脱氢酶）是参与糖酵解的一种关键酶，由4个30-40kDa的亚基组成，分子量146kDa，检测条带大约在36kDa。 GAPDH基因几乎在所有组织中都高水平表达，广泛用作Western blot蛋白质标准化的内参。 应用类型：WB（1:1000-1:10,000）、IHC（1:100-1:800） Fig.Western blot analysis (1:10,000) of GAPDH expression in Rat brain (lane A), HeLa cell lysate (lane B), Mouse brain (lane C), Rabbit muscle (lane D), Chicken muscle (lane E) and Pig heart (lane F) with Anti-GAPDH mouse monoclonal antibody (2B5).

https://www.sodocs.net/doc/cc18717659.html, 免疫原：KLH偶联的GAPDH部分多肽序列 来源宿主：小鼠 反应性：该GAPDH内参抗体可识别人、小鼠、兔、大鼠、猴、狗、鸡、猪和绵羊等种属的GAPDH蛋白。 保存建议：能在-20℃保存1年。为最大限度的避免损失，请在打开管盖之前融化抗体并离心。建议使用前分装以避免反复冻融，分装后可在4℃保存1个月。 GAPDH（甘油醛-3-磷酸脱氢酶）是参与糖酵解的一种关键酶，由4个30-40kDa的亚基组成，分子量146kDa，检测条带大约在36kDa。GAPDH基因几乎在所有组织中都高水平表达，广泛用作Western blot蛋白质标准化的内参。因为GAPDH 作为看家基因在同种细胞或者组织中的蛋白质表达量一般是恒定的，因此在使用GAPDH内参抗体时，将每个样品测得的目的蛋白含量与本样品的GAPDH含量相除，得到每个样品目的蛋白的相对含量，然后才进行样品与样品之间的比较。 如何选择合适的GAPDH抗体？ 内参抗体虽然选择较多，但是也需要遵循一定的原则，并契合实际的应用要求。首先，需要考虑目的蛋白的大小，我们推荐内参要与检测的目的蛋白的分子量最好相差5KD以上，因此你需要根据你目的检测蛋白的分子量来选择合适的内参，由于GAPDH的检测分子量大约在36kD，因此该内参抗体不是很适合用于检测30kD-40kD大小目标蛋白的WB实验中。另外，不同的组织来源的样本在选择内参时还有一定的区别。比如某些细胞中，由于组织缺氧、糖尿病等因素会导致GAPDH的表达增高，不适合做内参。

第4讲 细胞膜与细胞核 2021版高考生物(重庆)一轮复习

第2单元细胞的基本结构和物质的运输第4讲细胞膜与细胞核 单科命题 考试要点命题趋势备考指南 (1)细胞膜系统的结构和功能 题型内容:细胞膜与细胞核 的结构与功能 考查形式:多以图像分析形 式考查 (1)通过细胞膜与细胞核的亚 显微结构模式图,理解各部分 结构与功能 (2)通过模型建构,理解细胞 间的信息交流 (2)细胞核的结构和功能 考点一细胞膜的结构和功能 1.细胞膜的成分 (1)细胞膜的制备 (2)细胞膜的成分 2.细胞膜的流动镶嵌模型

(1)生物膜结构的探索历程(连线) (2)流动镶嵌模型 ①模式图 ②结构特点{ 特点:具有一定的流动性 原因: 组成膜的磷脂分子 和 大多数蛋白质分子 都是可以运动的 3.细胞膜的三大功能 4.细胞膜的结构特点和功能特性的比较

项目 内容 原因 实例 影响因素 结构 特点 一定 的流 动性 构成细胞膜的磷脂分子和大多数蛋白质分子不是静止的,而是可以运动的 变形虫的变形运动、细胞融合、胞吞、胞吐 温度(在一定范围内,温度越高,细胞膜的流动性越强) 功能 特性 选择 透过 性 遗传特性 载体种类、数量 选择透过性 植物对离子的选择性吸收、神经细胞对K +的吸收和对Na +的排出 (1)内因:细胞膜上载体蛋白的种类和数量 (2)外因:温度、pH 、O 2等影响细胞呼吸的因素 两者 关系 流动性是选择透过性的基础,膜只有具有流动性,才能实现选择透过性 1.构成细胞膜的磷脂分子是不断运动的,而蛋白质是静止不动的。(?) 2.糖类在细胞膜上以糖脂和糖蛋白的形式存在,且糖蛋白只分布在膜外侧。(√) 3.磷脂分子以亲水性头部相对的方式构成磷脂双分子层。(?) 4.植物相邻细胞之间可通过细胞之间的直接接触进行信息交流。(?) 5.各种膜所含蛋白质与脂质的比例与膜的功能有关。(√) 6.吞噬细胞的吞噬作用体现了细胞膜的功能特点。(?) 7.胰岛B 细胞分泌胰岛素依赖于细胞膜的流动性。(√) 8.同一生物体的细胞膜中蛋白质的种类和数量相同。(?) 观察下列图示,写出三个图的信息交流类型,请思考: (1)图1~3分别通过何种方式实现信息交流 ?

内参基因1

内参基因 内参即是内部参照，它们在各组织和细胞中的表达相对恒定，在检测基因的表达 水平变化时常用它来做参照物。其作用是校正上样量、上样过程中存在的实验误差， 保证实验结果的准确性。借助检测每个样品内参的量就可以用于校正上样误差，这样 半定量的结果才更为可信。一般要选择一个在处理因素作用的条件下不会发生表达改 变的基因作内参。 在进行基因研究的过程中,实时反转录 PCR也和传统的mRNA定量方法如 Northern b lot技术等一样, 要求使用参照基因以校正转录效率和 cDNA用量, 弥补制备过程中样本 纯度和浓度的差别, 使不同样本之间目的基因的比较成为可能,以期获得真实可靠的结果。大多数分析方法中这些差别可通过与内参照比较处理消除。最普通的内参照是内 源性参照基因,也叫管家基因。 管家基因：又称持家基因(house-keeping genes)生物体各类细胞中都表达，其产物 是对维持细胞基本生命活动所必需的蛋白质编码的基因。如微管蛋白基因、糖酵解 酶系基因与核糖体蛋白基因等。是为维持细胞基本生命活动所需而时刻都在表达的 基因。 管家基因表达水平受环境因素影响较小，而是在个体各个生长阶段的大多数、 或几乎全部组织中持续表达，或变化很小。它的表达只受启动序列或启动子与RNA 聚合酶相互作用的影响，而不受其他机制调节。管家基因高度保守并且在大多数 情况下持续表达，因此管家基因常被用于分子技术--多位点基因分析。 内参基因通常是各种看家基因，在细胞内组成稳定性表达，有助于保持细胞的 功能。理想的内参基因应该满足以下条件：1, 不存在假基因（Pseudogene），以 避免基因 DNA的扩增； 2,高度或中度表达，排除低表达； 3,稳定表达于不同类型 的细胞和组织（如正常细胞和癌细胞），而且其表达量是近似的，无显着性差别； 4,表达水平与细胞周期以及细胞是否活化无关；5, 其稳定的表达水平与目标基因 相似；6, 不受任何内源性或外源性因素的影响，如不受任何实验处理措施的影响. 近年来的研究发现：这些常用内参基因均存在缺陷，在不同类型的细胞和组织 细胞增殖和器官发育的不同阶段体外培养各种实验条件等情况下它们的表达量通 常变异较大。正确的选择内参基因, 很大程度上依赖所研究的细胞或组织, 不同的试验 需要寻找适合各自试验体系的特异性稳定表达的内参基因。然而,合适内参基因的选择, 需要在各种类型的细胞或组织和各种试验条件下进行比较选择。理想的内参基因应在 各种试验条件下,各种类型的组织和细胞中均恒定表达,而且其表达量是近似的,无显着 性差别。另外要求不存在假基因以避免基因组的扩增。

内参基因

何为内参基因 1、我记得常用的就是[color=magenta]GAPDH[/color]（3-磷酸甘油醛脱氢酶）和actin，至于什么是内参，可以打个比方，比如我们要比较两个不一样大的西瓜的含糖量，不好直接比较，那就找他们都有的东西来比较，就拿西瓜子嘛，假设西瓜子是均匀分布的，而且随着西瓜的变大，糖分的增多，西瓜子也变多，那么这个西瓜子就可以作为内参了！ 不知比方准确否，请高手指教，共同进步！ 2、内参基因一般会选管家基因，是维持细胞基本代谢活动所必须的基因，在各组织和细胞中的表达相对恒定，如：GAPDH、Actin、18S rRNA等 3、内参基因,表达稳定，通常用的有GAPDH,beta-actin，18s rRNA等 内参即是内部参照，它们在各组织和细胞中的表达相对恒定，在检测基因的表达水平变化时常用它来做参照物。其作用是校正上样量、上样过程中存在的实验误差，保证实验结果的准确性。 借助检测每个样品内参的量就可以用于校正上样误差，这样半定量的结果才更为可信。 一般要选择一个在处理因素作用的条件下不会发生表达改变的基因作内参。 4、半定量RT-PCR和qPCR都需要内参，简单的说内参就是在你的那个培养条件下恒定表达的某个基因。做内参就是以内参引物PCR扩增该内参基因，看在你选定的几个时间点是不是都恒定表达，如果恒定才能说明你做PCR选的RNA（一部发RT-PCR）或cDNA(两步法RT-PCR)的量是等量的，这样比较你的目的基因的丰度才有意义。 内参是相对的，不是绝对的，因为内参基因有时会受到影响。 量PCR问题--绝对定量与相对定量有什么区别？ 绝对定量的目的是测定目的基因在样本中的分子数目，即通常所说的拷贝数。相对定量的目的是测定目的基因在两个或多个样本中的含量的相对比例，而不需要知道它们在每个样本中的拷贝数。举例来说，如果研究项目中包括处理过的和未经处理的对照样本，通常可以将未经处理的样本指定为基准，规定其目的基因浓度为100%，将经处理的样本的定量结果除以对照样品的定量结果，就可以计算各个处理样本的基因含量相对于未处理样品的百分比。 绝对定量实验必须使用已知拷贝数的绝对标准品，必须做标准曲线。相对定量可以做标准曲线，也可以不做标准曲线。 相对定量实验有两种方法：标准曲线法和CT值比较法。如果使用标准曲线法，可以使用绝对标准品，也可以使用相对标准品，而且相对标准品在实验操作上更为简便易行。相对标准品是只知道样品中DNA或RNA的稀释比例而不需要知道其分子数目的标准品，典型的做法是将一个已知pg数的样品做一系列梯度稀释。 CT值比较法是利用CT值与起始DNA浓度的对数成反比的数学关系，来计算不同样本之间的相对百分比，其计算公式是 绝对定量的数据易于理解，但是绝对标准品的制备和测定其DNA含量比较困难。有许多商业性的标准品试剂盒供选购，可以解决这种困难。相对定量的标准品容易在实验室里自己制备，但是数据处理比较麻烦，对实验数据的解释有一定难度。

2019人教版高中生物必修一第3章《细胞膜和细胞核》习题(含答案)语文

细胞的基本结构 一选择题（每个小题3分，共39分） 1．细胞膜将细胞与外界环境分隔开，起到的作用不正确的是() A．保障了细胞内部环境的相对稳定 B．将生命物质与外界环境分隔开 C．使细胞成为相对独立的系统 D．使细胞内物质不能流失到细胞外，细胞外物质不能进入细胞 2．下列细胞结构中，不能用光学显微镜直接观察的是() A．细胞壁B．细胞膜C．大液泡D．细胞核 3．下列生物中不属于真核生物的是() ①噬菌体②颤藻③酵母菌④水绵 A．①②B．①③C．②③D．③④ 4．多细胞生物体内实现各个细胞间的功能协调依赖于() A．细胞间的物质和能量交换B．细胞间的信息交流 C．细胞间的物质交换D．A和B两项 5．下列过程主要与细胞膜的功能有关的是() A．保障细胞内部环境的相对稳定B．合成与分泌激素 C．红细胞运输氧气D．激素在血液中的运输 6．细胞内有双层膜结构的一组细胞器是() A．线粒体和叶绿体B．线粒体和高尔基体 C．叶绿体和内质网D．中心体和核糖体 7．下列对线粒体的分布和数量的叙述中，不确切的是() A．普遍存在于一切生物的体内 B．动物细胞比绿色植物细胞的线粒体数量多 C．细胞内需能的部位线粒体比较集中 D．生长和代谢活动旺盛的细胞线粒体数量多 8．下列关于使用高倍物镜的叙述中，正确的是() A．因为藓类的叶片大，在高倍镜下容易找到，所以可以直接使用高倍物镜观察 B．在低倍镜下找到叶片细胞，即可换高倍物镜观察 C．换用高倍物镜后，必须先用粗准焦螺旋调焦，再用细准焦螺旋调至物像最清晰 D．为了使高倍镜下的视野亮一些，可使用最大的光圈或凹面反光镜 9．下图表示的是某动物细胞内三种细胞器生物膜结构在某过程前与后的面积变化，那么该过程产生的物质很可能是下列哪一项()

核内参PCNA抗体

核内参PCNA抗体-用于细胞核内参的PCNA单抗 增殖细胞核抗原（Proliferating Cell Nuclear Antigen简称PCNA）由Miyachi等于1978年在SLE（系统性红斑狼疮）患者的血清中首次发现并命名，因其只存在于正常增殖细胞及肿瘤细胞内而得名。PCNA是一种分子量为36KD的蛋白质，在细胞核内合成，并存在于细胞核内，为DNA聚合酶的辅助蛋白。由于其在细胞核内稳定表达，因此其抗体被广泛应用于细胞核蛋白的内参抗体。 如何选择合适的细胞核内参抗体？ 常用的细胞总蛋白质内参有GAPDH和细胞骨架蛋白β-Actin或β-Tubulin等。对于一些植物的样本，则需要特别的植物Actin蛋白作为内参。当实验样品中只是核蛋白，而不是细胞总蛋白提取液时，可以用组蛋白H（Histone H），或者增殖细胞核抗原（PCNA）等为核内参抗体。除了这些，其它常见的核蛋白内参还有K70, K80, Lamin A和B，在一些文献报道中，Erk2、TATA binding protein（TBP）以及c-Jun、c-Fos等都有使用。但是需要注意的问题是核蛋白内参的选择需要考虑实际的试验环境，比如在涉及细胞增殖相关试验中，c-Jun由于自身表达变化就不适合做内参；而在凋亡实验时，TBP、Lamin等也不适合作为内参。 另外，我们还需要根据目的蛋白的大小选择合适的核内参，我们推荐内参要与检测的目的蛋白的分子量最好相差5KD以上，因此你需要根据你目的检测蛋白的分子量来选择合适的内参。PCNA的检测分子量大约在28kD，而Histone H3的检测条带大约在18kD，因此PCNA比较适合用于检测目标蛋白在较大的WB实验，而Histone H3则不适合用于13kD-23kD大小的目的蛋白内参。另外，虽然PCNA是最合适的核内参抗体之一，但是在某些条件下，一些影响增殖的因素会导致样品间PCNA含量的变化，就不适合作为内参。

内参基因的概念

内参即是内部参照，它们在各组织和细胞中的表达相对恒定，在检测基因的表达水平变化时常用它 来做参照物。其作用是校正上样量、上样过程中存在的实验误差，保证实验结果的准确性。借助检测每 个样品内参的量就可以用于校正上样误差，这样半定量的结果才更为可信。一般要选择一个在处理因素 作用的条件下不会发生表达改变的基因作内参。 在进行基因研究的过程中,实时反转录 PCR也和传统的mRNA定量方法如 Northern b lot技术等一样, 要求使用参照基因以校正转录效率和 cDNA用量, 弥补制备过程中样本纯度和浓度的差别, 使不同样本之间目的基因的比较成为可能,以期获得真实可靠的结果。大多数分析方法中这些差别可通过与内 参照比较处理消除。最普通的内参照是内源性参照基因,也叫管家基因。 管家基因：又称持家基因(house-keeping genes)生物体各类细胞中都表达，其产物是对维持细胞基 本生命活动所必需的蛋白质编码的基因。如微管蛋白基因、糖酵解酶系基因与核糖体蛋白基因等。是 为维持细胞基本生命活动所需而时刻都在表达的基因。 管家基因表达水平受环境因素影响较小，而是在个体各个生长阶段的大多数、或几乎全部组织中持 续表达，或变化很小。它的表达只受启动序列或启动子与RNA聚合酶相互作用的影响，而不受其他机制 调节。管家基因高度保守并且在大多数情况下持续表达，因此管家基因常被用于分子技术--多位点基因分析。 内参基因通常是各种看家基因，在细胞内组成稳定性表达，有助于保持细胞的功能。理想的内参基 因应该满足以下条件：1, 不存在假基因(Pseudogene)，以避免基因 DNA的扩增; 2,高度或中度表达， 排除低表达; 3,稳定表达于不同类型的细胞和组织(如正常细胞和癌细胞)，而且其表达量是近似的，无 显着性差别; 4,表达水平与细胞周期以及细胞是否活化无关;5, 其稳定的表达水平与目标基因相似;6, 不受任何内源性或外源性因素的影响，如不受任何实验处理措施的影响. 近年来的研究发现：这些常用内参基因均存在缺陷，在不同类型的细胞和组织细胞增殖和器官发 育的不同阶段体外培养各种实验条件等情况下它们的表达量通常变异较大。正确的选择内参基因, 很大程度上依赖所研究的细胞或组织, 不同的试验需要寻找适合各自试验体系的特异性稳定表达的内参基 因。然而,合适内参基因的选择,需要在各种类型的细胞或组织和各种试验条件下进行比较选择。理想的内参基因应在各种试验条件下,各种类型的组织和细胞中均恒定表达,而且其表达量是近似的,无显着性差别。另外要求不存在假基因以避免基因组的扩增。 常用的内参基因包括GAPDH 、β- actin(BETA-actin) 、18sRNA、28sRNA 、B2M、ACTB、SDHA、HPRT1、ARBP内参基因等。

细胞膜和细胞核测试题(附解析)

细胞膜和细胞核测试题（附解析） 一、选择题 1．下列有关细胞膜结构与功能的叙述，正确的是( ) A．升高温度可增加细胞膜的流动性加快物质运输 B．病原体侵入宿主细胞体现了细胞膜的选择透过性 C．蛋白质、脂肪是构成细胞膜的主要成分 D．哺乳动物成熟红细胞在清水中涨破后，可通过离心获得细胞膜 解析：选D 构成细胞膜的磷脂分子和大多数蛋白质分子都是可以运动的，升高温度可增加细胞膜的流动性，但是不一定加快物质运输；病原体侵入宿主细胞为胞吞作用，体现了细胞膜的流动性；蛋白质和磷脂是构成细胞膜的主要成分；哺乳动物成熟的红细胞没有细胞核和多种细胞器，没有膜内结构的干扰，适于作制备细胞膜的材料。将哺乳动物成熟红细胞放在蒸馏水中，使其吸水涨破，释放出内容物，通过离心分离，可获得较为纯净的细胞膜。 2．下列有关细胞膜上膜蛋白功能的叙述错误的是( ) A．图1表明膜蛋白具有控制物质进出细胞的功能，该方式为主动运输 B．图2说明膜蛋白能够催化膜表面的代谢反应 C．图3表明膜蛋白有利于细胞接收膜表面的化学信息 D．三个图都能够说明细胞膜能将细胞与外界环境分隔开 解析：选A 图1表示细胞膜通过载体蛋白转运物质，不消耗能量，该运输方式为协助扩散。 3．细胞核是遗传信息库，是细胞代谢和遗传的控制中心，下列相关叙述正确的是( ) A．真核细胞通常只有一个细胞核，但也有多核细胞和无核细胞 B．光学显微镜下观察可见细胞核内有核仁和染色体 C．染色体作为遗传物质的主要载体，主要分布在细胞核，少量分布于细胞质 D．无丝分裂过程中核膜、核仁会发生周期性的消失与重现 解析：选A 真核细胞通常只有一个细胞核，有的细胞有多个细胞核如骨骼肌细胞，有的没有细胞核如哺乳动物成熟的红细胞；光学显微镜下看不到核仁；染色体作为遗传物质的主要载体，分布在细胞核，细胞质内无染色体；无丝分裂过程中，没有核膜、核仁的消失。 4．细胞膜上分布有载体蛋白和受体蛋白等功能蛋白，载体蛋白和受体蛋白的共同特点

PH1498 Western Blot一抗二抗去除液实验使用方法与步骤

PH1498|Western Blot一抗二抗去除液（中性） Western Blot Stripping Buffer（Neutral） Catalog No：PH1498Size：?250mL Store at4℃ 去除液简介 Western Blot一抗二抗去除液（Stripping buffer）可以充分去除结合在印迹膜上的一抗和二抗，使同一张膜可进行多次抗体检测，无需反复电泳和转膜，节省样品和时间，适用于使用NC或PVDF膜进行Western Blot检测时条件的优化或同一样品不同蛋白的检测。 本品经过多个抗体的检测试验，通常可以重复利用3次，每次大约只需15-30min，并且在室温条件下就可以进行。 本类型Western一抗二抗去除液主要在去除结合的一抗二抗的原理方面略有不同。分别依靠去垢剂、酸性、碱性、还原剂、螯合剂、盐浓度以及一些特殊试剂等的不同组合来解除一抗二抗的结合，同时又不会导致转移到膜上的蛋白的损失。 试剂保存 4℃保存，一年有效，如长期不用请放置-20℃保存。 使用参考 1.在完成Western化学发光检测后，用蒸馏水或TBST缓冲液漂洗5-10min。 2.弃蒸馏水，加入适量的Western一抗二抗去除液（中性），至少需把膜完全覆盖。在摇床上室温缓慢漂洗25min左右（漂洗时间应根据不同的目的蛋白来调整：比如内参抗体等表达量较高的蛋白，可以延长漂洗时间至30min）。 3.弃Western一抗二抗去除液，用蒸馏水或TBST缓冲液洗膜3次，每次10min，室温振摇。 4.剥脱后的膜加入封闭液进行封闭，进行下一轮的WB实验。 注意事项 1、用辣根过氧化物酶(HRP)，任何一次封闭(blocking)都应当使用5%脱脂牛奶，如果使用碱性磷酸酯酶，任何一次封闭都应当使用酪蛋白(casein)。 2、本Western一抗二抗去除液仅适用于PVDF膜。用于硝酸纤维素膜时会导致转移到膜上的蛋白有非常显著的损失。 3、使用ECL等类似的化学发光试剂进行的Western检测适用本试剂。使用非化学发光试剂进行的Western检测，例如DAB，NBT/BCIP，不适用于本试剂。 4、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 孵育内参抗体GAPDH后用ECL发光液曝光20s。用本试剂剥脱25min后孵育内参抗体β-actin,ECL发光液曝光20s