分子生物学技术在中药作用机理研究中的应用

分子生物学主要研究内容

分子生物学主要研究内容 1. 核酸的分子生物学。 核酸的分子生物学研究 核酸的结构及其功能。由于 核酸的主要作用是携带和传 递遗传信息，因此分子遗传 学是其主要组成部分。由于 50年代以来的迅速发展，该 领域已形成了比较完整的理 论体系和研究技术，是目前分子生物学内容最丰富的一个领域。研究内容包括核酸/基因组的结构、遗传信息的复制、转录与翻译，核酸存储的信息修复与突变，基因表达调控和基因工程技术的发展和应用等。遗传信息传递的中心法则是其理论体系的核心。 2. 蛋白质的分子生物学。 蛋白质的分子生物学研究执行各种生命功能的主要大分子──蛋白质的结构与功能。尽管人类对蛋白质的研究比对核酸研究的历史要长得多，但由于其研究难度较大，与核酸分子生物学相比发展较慢。近年来虽然在认识蛋白质的结构及其与功能关系方面取得了一些进展，但是对其基本规律的认识尚缺乏突破性的进展。 3.细胞信号转导的分子生物学。 细胞信号转导的分子生物学研究细胞内、细胞间信息传递的分子基础。构成生物体的每一个细胞的分裂与分化及其它各种功能的完成均依赖于外界环境所赋予的各种指示信号。在这些外源信号的刺激下，细胞可以将这些信号转变为一系列的生物化学变化，例如蛋白质构象的转变、蛋白质分子的磷酸化以及蛋白与蛋白相互作用的变化等，从而使其增殖、分化及分泌状态等发生改变以适应内外环境的需要。信号转导研究的目标是阐明这些变化的分子机理，明确每一种信号转导与传递的途径及参与该途径的所有分子的作用和调节方式以及认识各种途径间的网络控制系统。信号转导机理的研究在理论和技术方面与上述核酸及蛋白质分子有着紧密的联系，是当前分子生物学发展最迅速的领域之一。 4.癌基因与抑癌基因、肽类生长因子、细胞周期及其调控的分子机理等。 从基因调控的角度研究细胞癌变也已经取得不少进展。分子生物学将为人类最终征服癌症做出重要的贡献。

《中药药理学》答案

《中药药理学》辅导资料 一、选择题 A型题 1．枳实有效成分中具有α-受体兴奋作用的是 A．柚皮甙 B．忍冬甙 C．新橙皮甙D．对羟福林 E．右旋柠檬烯 2．解表药解热作用主要通过哪些作用产生？ A．发汗或促进发汗 B．抗菌抗病毒 C．抗炎D．以上均是 E．与上述作用均无关3．目前认为黄芩抗过敏作用机理为 A．抗组胺和乙酰胆碱 B．直接松弛肠平滑肌 C．抑制过敏递质的释放 D．A和C E．A、B和C 4．天麻中枢抑制作用不包括 A．镇痛 B．镇静 C．解热 D．抗惊厥 E.以上均不是 5．大多数收涩药含有以下成分 A．生物碱 B．挥发油 C．无机盐D．皂甙 E．鞣质、有机酸 6．采用注射给药可导致药效产生质的变化的药物是 A．人参 B．当归 C．附子 D．枳壳 E．白术 7．茵陈抗菌作用的有效成分是 A．茵陈炔酮 B．β-蒎烯 C．6、7-二甲氧基香豆素 D．茵陈黄酮 E．绿原酸 8．川芎扩张冠脉的有效成分是 A. 蒿本内酯 B.川芎哚 C.川芎挥发油 D. 阿魏酸E．川芎嗪 9．温里药对缓慢型心律失常的治疗作用表现在 A．改善房室传导 B．恢复窦性心律 C．加快心率 D．降低异博定中毒死亡率 E．以上均有 10．使血管收缩而产生止血作用的止血药是。 A．白芨 B．艾叶 C．三七 D．仙鹤草 E．茜草 11.中药药理学的基本概念是 A．以中医药理论为指导 B．用现代医学方法研究中药对机体的作用和作用原理 C．以药物的选择性作用作为分类依据 D．A和B E．A、B和C 12.妊娠忌服药大多是 A．有致畸作用 B．毒性较强 C．药性峻烈 D．A和B E．A、B和C13．秦艽碱甲对糖代谢的影响表现在 A．血糖 B．血脂 C．肝糖元 D．A和C E．B和C 14.温里药不具备下列哪种作用？ A．改善胃粘膜血液循环 B．抗胃溃疡 C．刺激消化液分泌 D．镇吐 E．增加胃肠蠕动，排出胃肠胀气 15．泽泻的利尿作用与采收季节的关系是 A．春季采收作用强 B．夏季采收作用强 C．秋季采收作用强 D．冬季采收作用强 E．一年四季采收作用相同 16.能增加血液中凝血酶活性而止血的止血药是 A．三七 B．白芨 C．紫珠草 D．地榆 E．仙鹤草 17.酸枣仁的药理作用不包括

中药治病原理是怎样的呢

中药治病原理是怎样的呢 随着我们对于中药的深入了解，人们越来越能够发现到中药的神奇之处，我们不但可以采用中药来起到预防疾病和治疗疾病的作用而且还可以采用中药来起到美容养颜和减肥瘦身等功效，所以中药深受人们的喜欢，很多朋友在吃到中药的时候往往有一个疑问，那就是中药治病原理是怎样的。 中医是我们中国的瑰宝，已经了历经数千年岁月，是中国人在长久的岁月中形成的一套完善而系统的保护和修复理论。它将宇宙、四时与人体的平衡结合起来，涉及养生、疾病诸方面，构成了一个博大精深的系统。 一直以来，中药的治病原理都是一个众说纷纭的谜题。古人认为，任何疾病的发生发展过程都是由于致病因素作用于人体，引起机体阴阳偏盛偏衰，脏腑经络机能失常的结果。而中药的治病原理正在于中药材为天地所生，含天地之气，故能够调节人体的阴阳，补人出生后五脏所弱之气，泻五脏所赢之气，以平衡五脏阴阳虚实及后天六邪致病，使之达到“阴平阳密，精神乃治”的目的，这也正是中药治病的根本法则。清朝医家徐灵胎曾说：“凡药之用，或取其气，或取其味……各以其所偏胜而即资之疗疾，故能补偏救弊，调和脏腑，深求其理，可自得之。”

《景岳全书，类经》中也记载：药以治病，因毒为能。所谓毒者，以气味之偏也。盖气之正者，谷食之属是也，所以养人之正气。气味之偏者，药饵之属是也，所以去人之邪气。其为故也，正以人为病，病在阴阳偏胜耳，欲救其偏，则气味之偏者能之，正者不及也……是凡可避邪安正者，均可称为毒药，故曰毒药改邪也。”也就是说，药物各有其偏(毒)性，通过这一特性，可以 纠正疾病所表现的阴阳偏盛或偏衰的病理现象，杀灭或抑制细菌的生长繁殖，促进人体新陈代谢功能，恢复或重建脏腑功能的协调，从而达到祛病之功效。 而实际上，中药治病的方法大概可归为两类——扶正与祛邪。内伤疾病多用扶正法，外感疾病多用祛邪法。祛邪去因，扶正固本，协调脏腑经络机能，进而纠正阴阳偏盛偏衰，使机体恢复到阴平阳秘的正常状态。 到了科技发展的今天，人们开始运用科技方法研究中药治病的原理。人们对药物进行了详细的理化分析，并将其所含的各种化学物质概括为有效成分、辅助成分和无效成分三大类。其中，有效成分能调节人体机能，辅助成分则可促进人体对药物的吸收和药物之间成分的转化，进而达到治病的效果。

抗菌中药的作用机理研究进展

抗菌中药的作用机理研究进展 孙　健,吴国娟 (北京农学院动物科学技术系,北京昌平102206) 中图分类号:S853.7 文献标识码:A 文章编号:0529-6005(2007)02-0042-02 中药在防治疾病上作用,是以调动机体一切有利因素,调动机体的反应性、提高免疫功能和防御功能而法除病邪,康复机体[1]。抗菌中药作用机理也是如此,少数是其有效成分直接作用于菌体,大多数抗菌机理是激发调动动物机体内在的抗菌积极因素,以及降低细菌毒力和减轻细菌对组织细胞的破坏作用等途径起到抗菌作用。 1　对病原菌的抑制和杀灭作用 1.1　直接抑制和杀灭病原微生物　许多抗菌天然物中草药是直接作用于细菌的结构和代谢而达到抗菌。如黄连的有效成分小檗碱,对金黄色葡萄球菌的抑制作用机理为抑制金黄色葡萄球菌代谢的各个环节,包括细菌的呼吸、糖及糖代谢中间产物的氧化和脱氢过程以及蛋白质及核酸合成的抑制;小檗碱抑制福氏痢疾杆菌的抗菌机制为抑制痢疾杆菌的呼吸,特别是抑制天冬氨酸和琥珀酸钠的氧化过程。大蒜的抗菌作用机制为大蒜辣素分子中的氧原子与细菌生长繁殖所必需的半胱氨酸分子中的巯基结合,使后者变为非活性物质,干扰了细菌代谢,而抑制细菌的生长和繁殖[2]。此外在对一些中药的研究中发现,清热解毒药、补虚药、理血药、泻下药等类中的大部分药物均对畜禽的一些病原体有直接抑制和杀灭作用,如板蓝根、野菊花、连翘、藿香、蒲公英、金银花、鱼腥草、黄芪、党参、白芍、大黄等。 1.2　增强网状内皮系统的活性　生物体中的网状内皮系统具有吞噬、排除老化细胞和异物及病原体的作用。从三七根中分离出的多糖可显著增强网状内皮系统的活性,并增加小鼠、绵羊红细胞抗体的生成[3]。田庚元等(1995)报道,从防风中分离出的酸性多糖,以50m g/kg剂量给药,可显著的激活网状内皮系统的吞噬功能。 1.3　对自然杀伤细胞(NKC)的促进作用　自然杀伤细胞是机体参与免疫反应的淋巴细胞的一种,能在体内外杀伤肿瘤细胞和病毒感染的细胞,起到免疫监视和抗感染作用。余上才等(1995)报道,牛膝多糖50、100mg/kg,每天1次,共用5天,可显著增强NK 细胞的活性,可对抗环磷酰胺对NK细胞的抑制作用[4]。张崇泉等(1990)报道,绞股蓝总甙400mg/kg 给小鼠灌胃10天,能显著提高因环磷酰胺引起的脾NKC活性低下。此外,生地、熟地、山药、补骨脂、仙灵脾均能使老龄机体NKC活性明显升高[5]。 收稿日期:2004-11-21 基金项目:北京市自然科学基金资助项目(6053025) 作者简介:孙健(1980-),男,硕士生,研究方向为中药药理与兽药残留。E-mail:su nj1030@https://www.sodocs.net/doc/d83629144.html, 通讯作者:吴国娟1.4　激活补体系统　补体是体液中正常存在的一类具有酶原活性的蛋白质,被激活后可以产生多种生物活性物质,发挥溶菌、杀菌、灭活病毒、溶解靶细胞等作用[6]。研究发现许多中药的多糖均有激活补体作用。徐红薇等(1992)报道,黄芪水煎剂能促进氢化可的松所致的小鼠免疫复合物溶解,并使降低的总补体水平回升[4]。谭官屏指出雷公藤茎、叶、花均能显著提高小鼠血清总补体含量[7]。此外,从当归、艾叶、薏苡仁、柴胡、紫草中提取的多糖都与补体系统的激活关系重大[3]。 1.5　提高血清溶菌酶的活力　溶菌酶是一种低分子量不耐热的碱性蛋白,主要来源于吞噬细胞,广泛分布于血清及泪液、唾液、乳汁、肠液和鼻涕等分泌物中。它作用于革兰氏阳性菌细胞壁的肽聚糖,切断连接N-乙酰葡糖胺和N-乙酰胞壁酸的聚糖链,使细胞壁丧失其韧性,使细菌发生低渗性裂解,从而杀伤细菌,革兰氏阴性菌因肽聚糖外面有脂蛋白、脂多糖等包围一般不受溶菌酶的影响[6]。能提高血清溶菌酶活力的中药有枸杞子、黄芪等[1]。 1.6　增加血清备解素的含量　备解素是血清中一种高分子蛋白成分,参与补体结合反应,可在补体的协同下杀灭细菌和病毒[1]。能增加血清备解素含量的中药有鱼腥草等[1]。 2　增强机体的免疫力 2.1　促进免疫器官的发育　机体的免疫器官包括胸腺、法氏囊等中枢免疫器官和脾脏、淋巴结等外周免疫器官。许多中药均含有多种营养成分和免疫活性物质,能促进正常和免疫低下的免疫器官的发育,激活免疫器官的免疫功能。方德新等(1987)报道,北沙参多糖给小鼠腹腔注射32m g/kg,用药7天,可使小鼠胸腺重量明显增加,对脾重量亦有增加趋向[4]。骆和生(1986)报道,牡丹皮中的成分丹皮酚25m g/kg小鼠腹腔注射,连用6天能明显增加脾重,且能对抗可的松、环磷酰胺等免疫抑制剂所致的脾重减轻[4]。此外,麦冬、黄芪、当归、五味子、何首乌、肉苁蓉、淫羊藿、肉桂、青蒿、刺五加等均能促进免疫器官的发育。 2.2　增强机体的细胞免疫　细胞免疫是T细胞介导的机体的一种重要的免疫反应,可以抵抗细胞内微生物如病毒和宿主细胞内增生的细菌感染。可促进在细胞内将微生物破坏或溶解的感染细胞。丁雁等报道,淫羊藿多糖可促进小鼠胸腺成熟细胞的释放,并直接增强了T细胞的增殖和分化[5]。王超英研究指出,黄芪、党参、白术、淫羊藿、女贞子、猪苓等对鸡淋巴细胞花环(ERFC)形成率、外周血淋巴细胞转化率有促进作用[7]。此外,柴胡、黄连、黄芩、金银花、蒲公英、黄芪、夏枯草、当归、薏苡仁等均可增强 42中国兽医杂志2007年(第43卷)第2期 Ch ines e Journal of Veterinary M edicine

中药熏蒸原理与作用

中药熏蒸原理与作用 中药熏蒸机是根据中医理论，利用中医中药与现代高科技熏蒸器的完美结合，借热力和药力的双向作用，实现“皮肤吃药”的物理疗法。用热的药液蒸气熏蒸人体肌肤，使之发汗，扩张毛孔，将深伏于关节、经络、骨骱的瘀血、痰浊等病邪从毛孔透出体外，使药物从毛孔渗入体内，帮助机体恢复功能，药借热力，热助药力，相得益彰，促使腠理疏通，脉络调和，调节脏腑，平衡阴阳，祛风散寒,气血流畅，排毒养颜，提高人体的免疫力。 由于湿润的热气能加速皮肤对药物的吸收，同时皮肤温度的升高，可导致皮肤微小血管扩张，增加汗腺的分泌，促进血液和淋巴液的循环，因此有利于症状的缓解和病灶的消失。又由于熏疗过程中角质层吸收水份变得疏松，而药物成份还有一定的溶解角质层的作用，使药物成份更易透过皮肤屏障而发挥治疗作用。此外，角化细胞亦能贮存某些药物，这种“库存效应”能够使贮存的药物成份被缓慢吸收。所以短时间的熏疗可以发挥长时间的疗效，仅用小剂量的中药熏蒸就能产生显著的效果。 中药熏疗治疗的康复机理 1、药物直接穿透肌肤吸收

皮肤是人体最大的器官，除有抵御外邪侵袭的保护作用外，还有分泌、吸收、渗透、排泄、感觉等多种功能，其次，皮肤的吸收渗透与湿度有关，药汽体中含有水分子，湿度又有增强皮肤吸收渗透效果。中药熏疗法是利用皮肤这一生理特性，配用不同药方的药物与物理湿热双重作用融为一体产生的汽体，在物理温热作用下，使皮肤血管扩张，使药物通过多途径转运进入血液循环，并加快药物利用度，药物吸收过程较匀速、稳定扩散，剂量均匀递增，浓度相对恒定辐射深入腠理、脏腑发挥药效。 2、调节神经 中药熏疗汽体中所含芳香化浊、辛香走窜等药物离子作用于全身皮肤、腧穴后，通过神经体液装置系统而调节高级神经中枢、内分泌、免疫系统的刺激效应，达到迅速调整人体脏腑气血和免疫功能，治愈疾病，改善全身生理过程等作用。对松驰骨骼肌、镇痛、改善关节功能、提高基础代谢率，加强物质代谢过程，能使糖、脂肪、蛋白代谢增强、睡眠显著改善。 3、药物与物理温热双重作用,温热能加速新陈代谢及增加组织再生能力 中药汽化是在物理温热作用下产生的，其一，有药物离子特性作用于皮肤，又有温热作用，使皮肤附属器汗腺、毛囊、皮脂腺开放，促使炎性致病介质和代谢产物排出，增加药物穿透、吸收的通道，加速提高中药导入功效，迅速消除或改善临床症状；其二，药物与温热双重作用于全身皮肤组织温度升高，促使毛细血管扩张，血流加快，

分子生物学常用技术 习题

第五章常用分子生物学技术的原理及其应用习题（引自网络精品课程） 一、选择题 （一）A型题 1 ．分子杂交实验不能用于 A ．单链 DNA 与 RNA 分子之间的杂交 B ．双链 DNA 与 RNA 分子之间的杂交 C ．单链 RNA 分子之间的杂交 D ．单链 DNA 分子之间的杂交 E ．抗原与抗体分子之间的杂交 2 ．关于探针叙述错误的是 A ．带有特殊标记 B ．具有特定序列 C ．必须是双链的核酸片段 D ．可以是基因组 DNA 片段 E ．可以是抗体 3 ．下列哪种物质不能用作探针 A ． DNA 片段 B ． cDNA C ．蛋白质 D ．氨基酸 E ． RNA 片段 4 ．印迹技术可以分为 A ． DNA 印迹 B ． RNA 印迹 C ．蛋白质印迹 D ．斑点印迹 E ．以上都对 5 ． PCR 实验延伸温度一般是 A ．90 ℃ B ．72 ℃ C ．80 ℃ D ．95 ℃ E ．60 ℃ 6 ． Western blot 中的探针是 A ． RNA B ．单链 DNA C ． cDNA D ．抗体 E ．双链 DNA 7 ． Northern blotting 与 Southern blotting 不同的是 A ．基本原理不同 B ．无需进行限制性内切酶消化 C ．探针必须是 RNA D ．探针必须是 DNA E ．靠毛细作用进行转移 8 ．可以不经电泳分离而直接点样在 NC 膜上进行杂交分析的是 A ．斑点印迹 B ．原位杂交 C ． RNA 印迹 D ． DNA 芯片技术 E ． DNA 印迹 9 ．下列哪种物质在 PCR 反应中不能作为模板 A ． RNA B ．单链 DNA C ． cDNA D ．蛋白质 E ．双链 DNA 10 ． RT-PCR 中不涉及的是 A ．探针 B ． cDNA C ．逆转录酶 D ． RNA E ． dNTP 11 ．关于 PCR 的基本成分叙述错误的是 A ．特异性引物 B ．耐热性 DNA 聚合酶 C ． dNTP D ．含有 Zn 2+ 的缓冲液 E ．模板 12 ． DNA 链末端合成终止法不需要 A ． ddNTP B ． dNTP C ．引物标记 D ． DNA 聚合酶 E ．模板 13 ． cDNA 文库构建不需要 A ．提取 mRNA B ．限制性内切酶裂解 mRNA C ．逆转录合成 cDNA D ．将 cDNA 克隆入质粒或噬菌体 E ．重组载体转化宿主细胞 14 ．标签蛋白沉淀是 A ．研究蛋白质相互作用的技术 B ．基于亲和色谱原理 C ．常用标签是 GST D ．也可以是 6 组氨酸标签 E ．以上都对 15 ．研究蛋白质与 DNA 在染色质环境下相互作用的技术是 A ．标签蛋白沉淀 B ．酵母双杂交 C ．凝胶迁移变动实验 D ．染色质免疫沉淀法 E ．噬菌体显示筛选系统 16 ．动物整体克隆技术又称为

分子生物学技术

分子生物学技术 近年来，心血管疾病的发病率和死亡率急剧增加，已成为危害我国人民群众生命和健康的重大疾病。人们逐渐认识到,包括心血管疾病在内的许多疾病的生理、病理机制的本质问题是相关基因的表达及其调控。随着研究的深入, 心血管疾病的研究已深入到分子生物学水平。人们寻找疾病相关基因, 研究其表达调控机制, 希望在分子水平阐明疾病发生机制, 以期更有效地进行疾病的诊断、治疗。相应地, 很多分子生物学研究技术也应用到对心血管疾病的研究中来, 成为不可或缺的基本手段, 如分子杂交技术、聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction，PCR）技术、反义核酸技术、DNA微阵列、转基因技术等等。分子诊断学是以分子生物学理论为基础，利用分子生物学的技术和方法研究人体内源性或外源性生物大分子和大分子体系的存在、结构或表达调控的变化，为疾病的预防、预测、诊断、治疗和转归提供信息和决策依据的一门学科。1953年Watson & Crich发现DNA 双螺旋结构, 标志着分子生物学时代的到来。随着研究的进展, 人们对心血管疾病的研究也逐步深入到分子水平, 很多分子生物学的研究技术也在疾病机理、药物机理的研究中广泛应用, 成为基本的研究手段。人类基因组计划完成后, 生命科学研究进入后基因组时代, 进行功能基因组学、蛋白质组学的研究, 相应的实验技术也广泛应用并不断发展。 在过去的短短的10余年中,检验医学发展日新月异、发展迅猛,临床实验室的实验设备已高度自动化及网络化，“实验室全自动化”（Total Laboratory Automation,TLA）、分子诊断（MolecularDiagnostics）、床旁检验（Point of Care Tests,POCT）、循证检验医学（Evidence basedlaboratory medicine,EBLM）的兴起为心血管疾病的诊疗提供了极大帮助。 一、分子生物学技术 由于分子生物学技术的快速发展,以及人类基因组序列认识的逐渐完善,以PCR为代表的体外核酸扩增技术已在临床基因诊断中得以较为广泛的应用,如病毒、细菌的基因快速检测,遗传性疾病的诊断,肿瘤的基因诊断等。实时荧光定量PCR技术的应用,不仅使临床基因检测更加快速,而且使基因检测进入定量阶段,这特别有利于某些疾病治疗效果的评价。免疫检验中的放射免疫分析（Radioimmunoassay，RIA）,酶免疫分析（Enzyme Iimrrmnoassay，EIA）,金标记免疫分析,荧光免疫分析（Fluoroimmunoassay，FIA）,时间分辨荧光免疫分析（Time-resolved Fluoroimmunoassay，TRFIA）,化学发光免疫分析（Chemiluminescence Immunoassay，CLI A）,电化学发光免疫分析（Electro-Chemiluminescence Immunoassay ，ECLI）技术的临床应用不仅拓宽了免疫学检测的领域,同时提高了免疫学检测的灵敏度,促进了免疫检测的自动化。特别是化学发光免疫分析、电化学发光免疫分析技术的诞生,使得免疫学检验进入了一个新的时代,检测灵敏度可达pg水平,其检测速度、分析自动化程度及分

中药抗病毒的作用机理_马加福

兽药誄 目前对病毒病的防治方法主要有疫苗，抗病毒的化学合成药物及外源性细胞因子治疗等。疫苗防治为常用的方法，但病毒种属多，血清型多，为疫苗的应用带来困难。抗病毒的西药数量较少，临床效果不理想，且多年来一直没有新的抗病毒合成药物产生。医用外源性干扰素、白细胞介素-2能抑制病毒复制，提高机体细胞免疫功能，治疗前景良好，但费用昂贵，目前仍停留在基础研究和临床试验阶段。而中医药临床防治毒副作用小，药源丰富，价格低廉，能调节整体免疫功能，抑制病毒复制，阻止病毒致细胞病变，改善临床症状，在治疗病毒感染性疾病方面显示出了独特的优势。 1直接抗病毒作用 直接杀灭是指药物对病毒侵入细胞前的杀灭作用。据报道，大黄醇提取液中的蒽醌类对病毒有直接杀灭作用。有人研究甘草甜素对带状疱疹病毒具有直接杀灭作用，板蓝根对疱疹病毒有杀灭作用而非抑制作用。 阻止病毒对细胞的吸附和穿入。如中药抗病毒活性成分中的黄酮类，多糖及其衍生物，三萜类化合物及其衍生物（如甘草甜素衍生物）、生物碱及苷类等，都是阻止病毒颗粒对宿主细胞的吸附过程，而发挥抗病毒作用。 抑制病毒的复制。有人研究发现，甘草对艾滋病病毒有较强的抑制增殖作用。如1毫升感染艾滋病病毒的细胞，加入0.25毫升甘草甜素，或者等剂量静脉注射，就可使感染艾滋病病毒的细胞全部死亡，且无任何毒副作用。据报道，中药中的多酚类物质，可以抑制流感病毒蛋白质和RNA的合成，同时也可以抑制流感病毒的吸附作用。 阻止病毒由感染细胞向未感染细胞浸染。有人报道，带状疱疹病毒体外感染细胞16小时后加入甘草甜素，可抑制病毒从感染细胞向未感染细胞扩散。硫酸葡聚糖和硫酸戊聚糖能够抑制合胞体的形成和抑制病原向培养液的释放，从而阻止病毒由感染细胞向未感染细胞的侵染。 2间接抗病毒作用 促进免疫器官的发育。机体的免疫器官包括胸腺、腔上囊中枢免疫器官和脾脏、淋巴结外周免疫器官，他们的状况直接影响机体的免疫力。有人发现黄芪和淫羊藿、红花合剂可以显著提高小公鸡的腔上囊重量。黄芪多糖和香菇多糖均能促进脾脏、胸腺等免疫器官的发育。 增强吞噬细胞的吞噬能力。有人报道，“玉屏风散”（主要成分为防风、黄芪、白朮等）不仅可显著性地增强正常小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬能力，而且对环磷酰胺所造成的腹腔巨噬细胞吞噬功能抑制也有明显的激活作用。据报道，“白虎汤”（主要成分为知母、石膏、甘草等）中的钙离子可以增强家兔细胞肺泡巨噬细胞对葡萄球菌的吞噬能力，并能促进巨噬细胞的成熟，“白虎汤”对肺泡巨噬细胞具有激活作用。牡丹皮 中的芍药苷、氧化芍药苷在体外亦能增强小鼠腹腔巨噬细胞对乳液的吞噬功能。丹皮酚的雾化吸入还能提高肺部巨噬细胞的吞噬率。 增强强机体的体液免疫。抗体是抗病毒体液免疫的主要因素，分泌型IgA可防止病毒的局部入侵，IgG、IgM可中断已入侵的病毒通过血液循环扩散。据报道，给小鼠每天腹腔注射“参芪注射液”（每毫升含生药、党参、黄芪各0.5克），连续5天。结果使体液免疫反应明显增强，血清抗体效价提高。此外，白朮、淫羊藿、枸杞子均能增强机体的体液免疫，使血清中IgG、IgA、IgM水平提高。 增强机体的细胞免疫。细胞免疫是T细胞介导的机体重要的免疫反应，可以抵抗细胞内微生物如病毒和宿主细胞内增生的细菌感染。因为抗体不能进入受感染的细胞，细胞内病毒的消灭主要依靠细胞免疫。有人报道，淫羊藿多糖可促进小鼠胸腺成熟细胞的释放，并直接增强了T细胞的增殖和分化。据报道，“小柴胡汤”（主要成分为柴胡、黄芩、人参等）对细胞免疫、体液免疫及巨噬细胞的吞噬功能均有显著的增强作用。 诱导产生干扰素（IFN）。干扰素是天然的非特异免疫防御系统，具有广谱抗病毒作用，在入侵部位的细胞产生的干扰素可渗透到临近细胞而限制病毒向四周扩散。干扰素本身对病毒无灭活作用，主要是作用于正常的细胞，使之产生抗病毒蛋白和抑制病毒高分子生物合成，使细胞获得抗病毒能力。现代研究证实，中药中有许多具有内源性IFN诱生作用或促诱生作用的药物，如从香菇中提取的香菇素在小鼠中能诱导血清IFN，有人从甘草中提取的甘草甜素及甘草次酸制剂能诱生Ⅱ型IFN，对细胞免疫功能有增强作用。据报道，青蒿中的青蒿琥酯在体内能诱生耐酸不耐热的干扰素。 增强自然杀伤细胞（NKC）的活性。自然杀伤细胞是机体参与免疫反应的淋巴细胞，能在体内杀伤肿瘤细胞和病毒感染的细胞，起到免疫监视和抗感染作用。据报道，绞股蓝总苷每天400毫克/千克，给小鼠灌胃10天，能显著提高因环磷酰胺引起的NKC活性低下。此外生地、熟地、山药、补骨脂、仙灵脾均能使老龄机体NKC活性明显升高。 改善病毒所致机体的不良反应和病变。有人给小鼠经鼻腔内接种流感病毒，“葛根汤”（主要成分为葛根、升麻、秦艽等）口服给药。结果发现，“葛根汤”可推迟小鼠体重下降，并能拮抗肺的变性，同时具有解热作用。有人报道，给小鼠灌胃“正柴胡饮”（主要成分为柴胡、陈皮、防风等），能显著抑制流感病毒在鼠肺内的增殖及由病毒引起的肺部炎症，并呈明显的量效关系。同时，能降低病毒感染小鼠的死亡率，延长存活时间。苦参中的苦参碱可减轻乙肝病毒所致的肝细胞的变性、坏死，促进肝细胞的再生和修复，具有明显的保肝作用。 中药抗病毒的作用机理 马加福（黑龙江省龙江县兽医卫生监督所161100） 觽訉訚訝 养殖技术顾问2011.5

分子生物学前沿技术教材

激光捕获显微切割Laser capture microdissection (LCM) technology是在不破坏组织结构，保存要捕获的细胞和其周围组织形态完整的前提下，直接从冰冻或石蜡包埋组织切片中获取目标细胞，通常用于从组织中精确地分离一个单一的细胞。 背景：机体组织包含有上百种不同的细胞，这些细胞各自与周围的细胞、基质、血管、腺体、炎症细胞或免疫细胞相互粘附。在正常或发育中的组织器官内，细胞内信号、相邻细胞的信号以及体液刺激作用于特定的细胞，使这些细胞表达不同的基因并且发生复杂的分子变化。在病理状态下，如果同一类型的细胞发生了相同的分子改变，则这种分子改变对于疾病的发生可能起着关键性的作用。然而，发生相同分子改变的细胞可能只占组织总体积的很小一部分；同时，研究的目标细胞往往被其它组织成分所环绕。为了对疾病发生过程中的组织损害进行分子水平分析，分离出纯净的目标细胞就显得非常必要。1996年，美国国立卫生院（NIH）国家肿瘤研究所的[2]开发出激光捕获显微切割技术（Laser capture microdissection ，LCM ），次年，美国Arcturus Engineering公司成功研制激光捕获显微切割系统，并实现商品化销售。应用该技术可以在显微镜直视下快速、准确获取所需的单一细胞亚群，甚至单个细胞，从而成功解决了组织中细胞异质性问题。这项技术现已成为美国“肿瘤基因组解剖计划”的一项支撑技术[1]。 原理：LCM的基本原理是通过一低能红外激光脉冲激活热塑膜———乙烯乙酸乙烯酯（ethylene vinylacetate，EVA）膜（其最大吸收峰

接近红外激光波长），在直视下选择性地将目标细胞或组织碎片粘到该膜上[2]。LCM 系统包括倒置显微镜、固态红外激光二极管、激光控制装置、控制显微镜载物台（固定载玻片）的操纵杆、电耦合相机及彩色显示器。用于捕获目标细胞的热塑膜直径通常为6mm，覆在透明的塑料帽上，后者恰与后继实验所用的标准 0.5ml离心管相匹配。 机械臂悬挂控制覆有热塑膜的塑料帽，放到脱水组织切片上的目标部位。显微镜直视下选择目标细胞，发射激光脉冲，瞬间升温使EVA膜局部熔化。熔化的EVA膜渗透到切片上极微小的组织间隙中，并在几毫秒内迅速凝固。组织与膜的粘合力超过了其与载玻片间的粘合力，从而可以选择性地转移目标细胞。激光脉冲通常持续0.5~5.0毫秒，并且可在整个塑料帽表面进行多次重复，从而可以迅速分离大量的目标细胞。将塑料帽盖在装有缓冲液的离心管上，将所选择的细胞转移至离心管中，从而可以分离出感兴趣的分子进行实验[3]。 EVA膜约100~200μm厚，能够吸收激光产生的绝大部分能量，在瞬间将激光束照射区域的温度提高到90°C，保持数毫秒后又迅速冷却，保证了生物大分子不受损害。采用低能量红外激光的同时也可避免损伤性光化学反应的发生。 优缺点：LCM最显著的优点在于其迅速、准确和多用途的特性。结合组织结构特点以及所需的切割精确度，通过选择激光束的直径大小，可以迅速获取大量的目标细胞。LCM与以显微操作仪为基础的显微切割技术相比[4]，具有以下优点：(1)分离细胞速度快，无需精巧的操作技能；(2)捕获细胞和剩余组织的形态学特征均保持完好，可以较

第十二章 常用分子生物学技术的原理及其应用

第十二章常用分子生物学技术的原理及其应用 一、选择题 A型题 1、用来分析蛋白质的技术是 A、Northern blotting B、Southern blotting C、Western blotting D、亲和层析 E、离子交换层析 2、用来分析DNA的技术是： A、Northern blotting B、Southern blotting C、Western blotting D、亲和层析 E、离子交换层析 3、下列哪一种不是核酸探针的标记 A、同位素标记 B、非同位素标记 C、地高辛标记 D、生物素标记 E、辣根过氧化物酶标记 4、当双链DNA经加热变性后，按下列哪种方式放置可获得单链DNA？ A、37℃水浴 B、室温 C、4℃冰箱 D、冰水或颗粒冰内 E、100℃水浴 5、与Southern blotting比较，核酸的Dot blotting中可省略的步骤是 A、电泳 B、核酸样品固定于NC膜 C、杂交信号检测 D、标记探针 E、制备样本核酸 6、原位杂交是指 A、在NC膜上进行杂交分析 B、在组织切片或细胞涂片上进行杂交分析 C、直接将核酸点在NC膜上进行杂交分析 D、在PVDF膜上进行杂交分析 E、在凝胶电泳中进行杂交分析 7、关于PCR引物的选择，下列哪项是错误的？ A、由于变性温度在95℃，故可选择具有二级结构的引物 B、尽可能选择(G+C)含量在50%左右并随机分配的引物 C、避免连续的多聚嘌呤顺序 D、反应过程中，每种引物的浓度一般在0、1 – 0、5 mol/L E、应避免两引物末端重叠形成二聚体 8、有关DNA链末端终止法的不正确说法是 A、需要dNTP B、需要ddNMP C、需要ddNTP D、dNTP:ddNTP的比例要合适 E、需要放射线同位素和荧光染料 9、用PCR技术完成对某一遗传病的疾病基因纯合性缺失的研究过程中不需要的 步骤为： A、受检者血白细胞的分离 B、白细胞DNA的制备 C、配制PCR反应体系 D、PCR反应及其产物的琼脂糖电泳 E、反应产物的SSCP分析 10、在DNA测序的化学裂解法中需要

分子生物学研究技术

:分子生物学研究技术 文库 文库，代表了生物体某一器官或组织中所有的或绝大部分的遗传信息。其构建过程总共有个步骤（项技术）：、总的提取；、的纯化；、的合成；、文库构建；、基因文库筛选。 详细： 、总的提取：目前常用的提取方法是异硫氰酸胍苯酚提取法（提取法），提取步骤：（）首先用液氮研磨材料成匀浆，加入试剂，进一步破碎并溶解细胞；（）加入氯仿抽提，离心，收集含有的水相；（）用异丙醇沉淀，初步纯化，获得样品用于下一步的纯化；（：实验中还常将含有的细胞破碎物液通过硅胶膜纯化柱后，再通过低盐浓度下从硅胶膜上直接洗脱，获得纯度较高的总）； 总的浓度、纯度测定：通过分光光度计测其和值，为时相当于总量为μ；而的比值如果在之间，则表示所提取的纯度较好。 、的纯化：纯化原理，将真核细胞的分子具有‘端帽子（）和’端（）尾巴的特征结构，作为提取时的选择性标记。纯化提取方法：常用寡纤维素柱层析法获，该方法利用‘末端的（）尾巴的特点，当流经寡纤维柱时，在高盐缓冲液的作用下，或特异性结合到柱子上，之后再用低盐溶液洗脱，经过两次层析后可获得较高纯度的。 、的合成：利用技术，常以（）为引物，甲基化的（保证新合成的链被甲基化，防止构架克隆时被限制性内切酶切割）。合成基本过程：以为模板链，在逆转录酶的催化下以甲基化为原料合成第一条链；之后再以第一条链为模板，在聚合酶催化下合成第二条（常用切割杂链中的序列所产生的小片段为引物合成的第二条片段，再同过连接酶的作用连接成完整的链。（：最后，两端应加上不同内切酶所识别的接头序列，保证所获得的具有方向性）、文库的构建：由于的长度一般为，所以常用质粒载体和噬菌体类的载体便能用于承载。基本过程：将合成的连接到特定的载体上，然后将载体转入宿主细胞（一般为大肠杆菌），然后筛选阳性克隆，最终获得文库。 ：一般而言，文库的载体选择要根据文库的用途来确定，例如载体是一种噬菌粒载体，具备噬菌体的高效性和质粒载体系统可利用蓝白斑筛选的便利，可容纳片段插入。 、基因文库筛选：是指通过某种特殊方法从基因文库中鉴定出含有所需要的重组分子的特定克隆的过程。目前主要的筛选方法有：核酸杂交法、筛选法和免疫筛选法。 核酸杂交法（最常用的筛选方法之一）：（）将圆形硝酸纤维素膜放在含有琼脂培养基的培养皿表面，将待筛选的菌落从其生长的平板上转移到硝酸纤维素膜上，后进行适当的温育（同时保留原菌板作为对照。）（）取出已长有菌落的硝酸纤维素膜，用碱液处理，裂解细菌并使变性；（）接着用蛋白酶处理硝酸纤维素膜上的蛋白质，形成菌落印迹；（）℃烘烤滤膜，将固定在膜上；（）将滤膜与放射性同位素标记的或探针杂交，通过放射自显影显示杂交结果。（射线底片上显黑色斑点的就是试验中寻找的目的克隆）（）通过比对显影的结果，可在对应的原菌板上获得相对应的克隆。 筛选法：使用前提，已知足够的序列信息并获得基因特异性引物。基本过程：（）将整个文库（以质粒或菌落的形式均可）保存到多孔培养板上；（）用设计好的目的基因探针对每个样孔进行筛选，鉴定出阳性孔；（）把每个阳性孔中的克隆在稀释到次级多孔板中进行筛选。重复以上程序，直到鉴定出于目的基因对应的单个克隆为止。 免疫筛选法：基本步骤与核酸杂交检测类似，主要过程：先将菌落或噬菌斑影印到硝酸纤维

常用的分子生物学基本技术

常用的分子生物学基本技术 核酸分子杂交技术 由于核酸分子杂交的高度特异性及检测方法的灵敏性，它已成为分子生物学中最常用的基本技术，被广泛应用于基因克隆的筛选，酶切图谱的制作，基因序列的定量和定性分析及基因突变的检测等。其基本原理是具有一定同源性的原条核酸单链在一定的条件下（适宜的温室度及离子强度等）可按碱基互补原成双链。杂交的双方是待测核酸序列及探针（probe）,待测核酸序列可以是克隆的基因征段，也可以是未克隆化的基因组DNA和细胞总RNA。核酸探针是指用放射性核素、生物素或其他活性物质标记的，能与特定的核酸序列发生特异性互补的已知DNA或RNA片段。根据其来源和性质可分为cDNA探针、基因组探针、寡核苷酸探针、RNA探针等。 固相杂交 固相杂交（solid-phase hybridization）是将变性的DNA固定于固体基质（硝酸纤维素膜或尼龙滤膜）上，再与探针进行杂交，故也称为膜上印迹杂交。 斑步杂交（dot hybridization） 是道先将被测的DNA或RNA变性后固定在滤膜上然后加入过量的标记好的DNA或RNA探针进行杂交。该法的特点是操作简单，事先不用限制性内切酶消化或凝胶电永分离核酸样品，可在同一张膜上同时进行多个样品的检测；根据斑点杂并的结果，可以推算出杂交阳性的拷贝数。该法的缺点是不能鉴定所测基因的相对分子质量，而且特异性较差，有一定比例的假阳性。 印迹杂交（blotting hybridization） Southern印迹杂交：凝胶电离经限制性内切酶消化的DNA片段，将凝胶上的DNA变性并在原位将单链DNA片段转移至硝基纤维素膜或其他固相支持物上，经干烤固定，再与相对应结构的已标记的探针进行那时交反应，用放射性自显影或酶反应显色，检测特定大小分子的含量。可进行克隆基因的酶切图谱分析、基因组基因的定性及定量分析、基因突变分析及限制性长度多态性分析（RELP）等。 Northern印迹杂交:由Southerm印杂交法演变而来，其被测样品是RNA。经甲醛或聚乙二醛变性及电泳分离后，转移到固相支持物上，进行杂交反应，以鉴定基中特定mRNA分子的量与大小。该法是研究基因表达常用的方法，可推臬出癌基因的表达程度。 差异杂交（differential hybridization） 是将基因组文库的重组噬菌体DNA转移至硝酸纤维素膜上，用两种混合的不同cDNA探针（如：转移性和非转移性癌组织的mRNA逆转录后的cDNA）分别与滤膜上的DNA杂交，分析两张滤膜上对应位置杂交信息以分离差异表达的基因。适用于基因组不太复杂的真核生物（如酵母）表达基因的比较，假阳性率较低。但对基因组非常复杂的盐酸核生物（如人），则因工作量太大，表达的序列所占百分比较低（仅5％左右），价值不大。

分子生物学常用实验技术

分子生物学常用实验技术 第一章质粒DNA的分离、纯化和鉴定 第二章 DNA酶切及凝胶电泳 第三章大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 第四章 RNA的提取和cDNA合成 第五章重组质粒的连接、转化及筛选 第六章基因组DNA的提取 第七章 RFLP和RAPD技术 第八章聚合酶链式反应(PCR)扩增和扩增产物克隆 第九章分子杂交技术 第十章测序技术 第一章质粒DNA的分离、纯化和鉴定 第一节概述 把一个有用的目的DNA片段通过重组DNA技术,送进受体细胞中去进行繁殖和表达的工具叫载体(Vector)。细菌质粒是重组DNA技术中常用的载体。 质粒(Plasmid)是一种染色体外的稳定遗传因子,大小从1-200kb不等,为双链、闭环的DNA分子,并以超螺旋状态存在于宿主细胞中。质粒主要发现于细菌、放线菌和真菌细胞中，它具有自主复制和转录能力,能在子代细胞中保持恒定的拷贝数,并表达所携带的遗传信息。质粒的复制和转录要依赖于宿主细胞编码的某些酶和蛋白质，如离开宿主细胞则不能存活,而宿主即使没有它们也可以正常存活。质粒的存在使宿主具有一些额外的特性,如对抗生素的抗性等。F质粒(又称F因子或性质粒)、R质粒(抗药性因子)和Col质粒(产大肠杆菌素因子)等都是常见的天然质粒。 质粒在细胞内的复制一般有两种类型:紧密控制型(Stringent control)和松驰控制型(Relaxed control)。前者只在细胞周期的一定阶段进行复制,当染色体不复制时,它也不能复制,通常每个细胞内只含有1个或几个质粒分子,如F因子。后者的质粒在整个细胞周期中随时可以复制,在每个细胞中有许多拷贝,一般在20个以上,如Col E1质粒。在使用蛋白质合成抑制剂-氯霉素时,细胞内蛋白质合成、染色体DNA复制和细胞分裂均受到抑制,紧密型质粒复制停止,而松驰型质粒继续复制,质粒拷贝数可由原来20多个扩增至1000-3000个,此时质粒DNA占总DNA的含量可由原来的2%增加至40-50%。 利用同一复制系统的不同质粒不能在同一宿主细胞中共同存在,当两种质粒同时导入同一细胞时,它们在复制及随后分配到子细胞的过程中彼此竞争,在一些细胞中,一种质粒占优势,而在另一些细胞中另一种质粒却占上风。当细胞生长几代后,占少数的质粒将会丢失,因而在细胞后代中只有两种质粒的一种，这种现象称质粒的不相容性(Incompatibility)。但利用不同复制系统的质粒则可以稳定地共存于同一宿主细胞中。 质粒通常含有编码某些酶的基因,其表型包括对抗生素的抗性,产生某些抗生素,降解复杂有机物,产生大肠杆菌素和肠毒素及某些限制性内切酶与修饰酶等。 质粒载体是在天然质粒的基础上为适应实验室操作而进行人工构建的。与天然质粒相比,质粒载体通常带有一个或一个以上的选择性标记基因(如抗生素抗性基因)和一个人工合成的含有多个限制性内切酶识别位点的多克隆位点序列,并去掉了大部分非必需序列,使分子量尽可能减少,以便于基因工程操作。大多质粒载体带有一些多用途的辅助序列,这些用途包括通过组织化学方法肉眼鉴定重组克隆、产生用于序列测定的单链DNA、体外转录外源DNA序列、鉴定片段的插入方向、外源基因的大量表达等。一个理想的克隆载体大致应有下列一些特性：（1）分子量小、多拷贝、松驰控制型；（2）具有多种常用的限制性内切酶的单切点；（3）能插入较大的外源DNA片段；（4）具有容易操作的检

常用的分子生物学基本技术

常用的分子生物学基本技术?核酸分子杂交技术 ?由于核酸分子杂交的高度特异性及检测方法的灵敏性,它已成为分子生物学中最常用的基本技术,被广泛应用于基因克隆的筛选，酶切图谱的制作，基因序列的定量和定性分析及基因突变的检测等。其基本原理是具有一定同源性的原条核酸单链在一定的条件下（适宜的温室度及离子强度等）可按碱基互补原成双链。杂交的双方是待测核酸序列及探针（ｐrｏbe),待测核酸序列可以是克隆的基因征段,也可以是未克隆化的基因组DＮA和细胞总RNＡ。核酸探针是指用放射性核素、生物素或其他活性物质标记的,能与特定的核酸序列发生特异性互补的已知DNA或ＲNA片段。根据其来源和性质可分为cDNA探针、基因组探针、寡核苷酸探针、RNA探针等。? 固相杂交 ?固相杂交（soｌｉd－phase ｈｙbｒｉdizatｉon)是将变性的DNＡ固定于固体基质(硝酸纤维素膜或尼龙滤膜）上,再与探针进行杂交，故也称为膜上印迹杂交。? 斑步杂交(dot hyｂrｉｄizａtｉoｎ）??是道先将被测的DNA或RNA变性后固定在滤膜上然后加入过量的标记好的DNA或ＲNA探针进行杂交。该法的特点是操作简单,事先不用限制性内切酶消化或凝胶电永分离核酸样品,可在同一张膜上同时进行多个样品的检测;根据斑点杂并的结果，可以推算出杂交阳性的拷贝数。该法的缺点是不能鉴定所测基因的相对分子质量,而且特异性较差，有一定比例的假阳性。 印迹杂交(blｏttｉng hybridizatioｎ） ?Southｅrn印迹杂交：凝胶电离经限制性内切酶消化的ＤNA片段，将凝胶上的DＮA变性并在原位将单链ＤNA片段转移至硝基纤维素膜或其他固相支持物上,经干烤固定，再与相对应结构的已标记的探针进行那时交反应，用放射性自显影或酶反应显色,检测特定大小分子的含量。可进行克隆基因的酶切图谱分析、基因组基因的定性及定量分析、基因突变分析及限制性长度多态性分析(ＲELP)等。 ?Ｎortｈeｒn印迹杂交:由Southeｒm印杂交法演变而来，其被测样品是RNA。经甲醛或聚乙二醛变性及电泳分离后,转移到固相支持物上，进行杂交反应,以鉴定基中特定mRＮＡ分子的量与大小。该法是研究基因表达常用的方法,可推臬出癌基因的表达程度。? 差异杂交(differential hybridｉzatｉon) ?是将基因组文库的重组噬菌体DNA转移至硝酸纤维素膜上,用两种混合的不同ｃDNA探针(如:转移性和非转移性癌组织的mRNＡ逆转录后的ｃDNA)分别与滤膜上的DNA杂交，分析两张滤膜上对应位置杂交信息以分离差异表达的基因。适用于基因组不太复杂的真核生物（如酵母）表达基因的比较，假阳性率较低。但对基因组非常复杂的盐酸核生物(如人),则因工作量太大,表达的序列所占百分比较低（仅5％左右),价值不大。 ?cDＮA微点隈杂交（cDＮＡmiｃroａｒray hybriｄizａtion）? 是指将cDNA克隆或cDNA的ＰCR产物以高度的列阵形式排布并结合于固相支持物上(如:尼龙膜或活化的载玻片)以微点阵,然后用混合的不同DNＡ探针与微点阵上的DNA进行杂交。再利用荧光、化学发光、共聚焦显微镜等技术扫描微点阵上的杂交信息。它比差异杂交技术的效率高、速度快、成本低，适用于大规模的分析。已成商品问世。其缺点是无法克服保守的同源序列及重序对杂交信息的干扰。??寡核苷酸微点隈杂交(oligonucleotｉｄｅmicｒoarraｙhybridizatiｏn)? 是在特殊的固相支持物上原位合成寡核苷酸,使它共价结合于支持物表面，与平均长度为20-50nt的混合RNA或cDNA探针进行杂交，以提高杂交的特异性和灵敏度。应用共聚焦显微镜可检测跨越三个数量级的杂交信息。适用于低丰度mRNA的检测,以区分基因家族不同成员的差异表达特征，或鉴定同一转录在不同组织和细胞中的选择性剪接。但有工作量较大、