组织病理切片以及HE染色

组织病理切片以及HE染色

（一）实验原理：苏木素-伊红染色（hematoxylin-eosin staining ，HE 染色）能较好地显示组织结构和细胞形态，可用于观察、描述正

常和病变组织的形态学，而且HE切片可较长时间保存，被称为常规染色方法。

（二）实验步骤：

一、制作切片

1、取材、固定：取小鼠肾脏组织适当大小，并且放入盛有固定液的小瓶中保存。

2、组织的脱水、透明、浸蜡与包埋

组织固定后还需经过脱水、透明、浸蜡等过程才能制成蜡块，进行石蜡切片。脱水是指用某些溶媒置换组织内水分的过程。组织脱水后，必须经过一种既能与酒精相混合又能溶解石蜡的溶剂，通过这种溶剂的媒介作用，使石蜡浸入组织块。在此过程中，因组织块中的水分被溶剂所取代，组织块变得透亮，因此称之为透明。组织染色后也要进行透明。最常用的透明剂为二甲苯，处理时间为30min 左右。

组织经透明后在溶化的石蜡内浸渍的过程称浸蜡。用其他浸透剂（如火棉胶、碳蜡和明胶等）渗入组织内部的过程称为浸透或透入。为使石蜡充分渗入组织块中，常需经过3 小时的浸渍，期间需更换3 次石蜡。一般用于浸蜡的石蜡熔点为52-56 C o

组织块经过浸蜡或浸透，用包埋剂（石蜡、火棉胶、碳蜡和树脂等）包起的过程称包埋，包埋后便制成含组织的块。这种包埋块可使

组织达到一定的硬度和韧度，有利于切成薄片。石蜡包埋是病理日常

工作中最常用的包埋方法。用于包埋的石蜡熔点一般为60C左右。

但在有些情况下，如某些酶染色时，则需采用低温石蜡包埋，以保存组织内酶的活性。

3、切片、制片石蜡切片常用的切片机有轮转式切片机和平推式切片机，以前者为多用。切片厚度一般为3-5卩m切片时先将组织片平摊于一块玻璃上，迅速滴加30%的酒精水溶液使组织片完全展开，再移入40C

恒温热水器中。也可直接将组织切片移入40C的恒温热水器中，待

组织片完全展开后将其贴附于载玻片上，经56-60C烤片30-60min

后即可进行染色。

二、HE染色

1.二甲苯脱蜡2X 10 min ;

2.无水乙醇洗去二甲苯2X5min;

3.95 %、80%乙醇各l0 min ，自来水洗l min （不要让急水直接冲至载

玻片上的组织），蒸馏水洗1min;

4.苏木素染色4 min ，自来水洗2 min ;

5.1 %盐酸酒精分化20 s （镜下控制），自来水洗2 min ;

6.1%稀氨水返蓝30s（镜下控制），自来水洗2分钟，蒸馏水洗1min;

7.伊红染色90s;

8.80 %乙醇脱水10s, 95%酒精10s，无水乙醇5min;

9.无水乙醇10min;

10.二甲苯2X 10 min ;

11.中性树胶或加拿大树胶封片

（三）实验结果：细胞核呈蓝色；细胞浆、肌肉、结缔组织、红细胞和嗜伊红颗粒呈不同程度的红色。钙盐和各种微生物也可染成蓝色或紫蓝色。

（四）实验分析：HE染色时病理学中常用的一种诊断方法，通

常将病理切片染色后再在显微镜下观察组织的病理学变化，从而做出病理学诊断。