骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化的研究进展

３７８陕西中医２０１０年第３１卷第３期

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（收稿２００９—１２—１０；修回２０１０－０１—２４）

骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化的研究进展’秦安清刘黎青△于娜◇周盛年△▲山东中医药大学基础医学院（济南２５０３５５）

【中图分类号】Ｑ２５【文献标识码】Ａ【文章编号】ｌＯＯＯ一７３６９（２０１０）０３～０３７８—０３

＊山东省科技攻关课题（ＮＯ：２００７ＧＧｌ０００２０１７）；山东省中医药管理局资助课题（ＮＯ：２００７—００６）

△通讯作者：刘黎青周盛年

▲山东大学齐鲁医院神经内科（济南２０００１２）

◇山东省昌乐县中医院（昌乐２６２４００）

骨髓问充质干细胞（ＢｏｎｅＭａｒｒｏｗＭｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓ，ＢＭＳＣｓ）又称骨髓基质干细胞，是骨髓细胞中除去造血干细胞（非粘附细胞）之外的细胞部分，作为成体干细胞之一，具有多项分化潜能，能向骨、软骨、肌肉、神经、角膜上皮细胞等中胚层或外胚层组织细胞分化，是组织工程中重要的种子细胞之一，并且具有取材方便，扩增迅速，可自体移植等特点，因

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陕西中医２０１０年第３１卷第３期３７９

此，具有广泛的应用前景［１６］。

１骨髓间充质千细胞定义、识另ｑ、表型鉴定

１．１骨髓问充质干细胞的定义骨髓间充质干细胞（ＢＭＳＣｓ）是存在于骨髓中的一种具有成骨潜能的细胞，在相差显微镜下，显示出成纤维细胞的外观，其主要形态是梭形，核纺锤形，体积较大；透射电镜下大部分表现为椭圆形。核大，染色质分布稀疏，电子密度较低，含１个至多个核仁不等，胞质内细胞器少，相邻细胞问可见缝隙连接。因其呈成纤维细胞样生长，既往被称为集落形成单位成纤维细胞（ｃｌｏｎｙｆｏｒｍｉｎｇｕｎｉｔｓｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓＣＦｕ—Ｆ），骨髓基质成纤维细胞（ｂｏｎｅｍａｒｒｏｗｓｔｒｏｍａｌｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ），１９９１年Ｃａｐｌａｎ等将其命名为骨髓间充质干细胞（ｂｏｎｅｍａｒｒｏｗｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓＢＭＳＣｓ）［“。研究表明，骨髓间充质干细胞具有多向分化潜能，具有向骨、软骨、韧带、肌腱等中胚层组织及神经外胚层组织分化的能力，甚至还有研究表明ＢＭＳＣｓ可以分化为肝细胞和胰岛样细胞ＣＴ－ｓ］。ＢＭＳＣｓ固有的优势和特性，使其成为组织工程理想的种子细胞，在骨组织工程、软骨组织工程、神经组织修复及其他组织修复中得到广泛应用。

１．２骨髓问充质千细胞的分离纯化骨髓中的ＢＭＳＣｓ含量较低，约占有核细胞的０．００１％～Ｏ．０１％，因此如何分离纯化ＢＭＳＣｓ极为重要，目前主要有以下四种方法：贴壁法、密度梯度离心法、流式细胞仪分离法和免疫磁珠法［９。…，其中贴壁法根据ＢＭＳＣｓ具有在塑料培养瓶中贴壁生长，而血细胞和造血干细胞悬浮生长的特性对其进行分离，具有较为简单、易于掌握、不易发生污染等优点，比较适合于初次培养者Ｉ密度梯度法较为复杂，其原理是根据骨髓中各细胞成分的比重不同而分离ＢＭＳＣｓ，运用ＰｅｒｃｏＵ液（１．０７３９／ｍＬ）或者Ｆｉｅｏｌｌ液（１．０７７９／ｍＬ）对骨髓进行梯度离心，去除骨髓中的血液成分，获取界面的有核细胞进行培养，经密度梯度法离心后得到的细胞纯度较高；流式细胞仪法（ＦＡＣＳ）和免疫磁珠法（ＭＡＣＳ）的原理是根据细胞体积不同和细胞表面的一些特殊标志，用特异性抗体结合磁性进行细胞分选，由于目前尚未发现特异性很强的表面标志分子，因此很难应用于分离培养，此外，这两种方法对细胞活性有一定的影响。

１．３表型鉴定方法ＢＭＳＣｓ的表型不一，具有间充质细胞、上皮细胞和内皮细胞的特点，因此一直没有发现ＢＭＳＣｓ的特异性表面标志物，大多数实验室通过ＢＭＳＣｓ不表达造血干细胞标记物（如ＣＤｌｌ、ＣＤ３ｌ、ＣＤ。５等），而表达ＣＤ．‘’ＣＤ，１、ＣＤ９０、ＣＤ。。。等标志来进行ＢＭＳＣｓ的初步鉴定。此外，Ｇａｎｇ［１１１等发现阶段特异性胚胎干细胞抗原４（ｓｔａｇｅ—ｓｐｅｃｉｆｉｃｅｍｂｙｒｏｎｉｃａｎｔｉｇｅｎ４）可用于鉴定ＢＭＳＣｓ。ＭａｒｔｉｎｅｚＩｈｚ］等通过ＲＴ—ＰＣＲ检测神经节苷脂ＧＤ２（ｎｅｕｒａｌｇａｎｇｌｉｏｓｉｄｅＧＤ２）合成酶表达的方法证实ＧＤｚ是区别ＢＭＳＣｓ和其他骨髓细胞的特异性标志物，从而提高了ＢＭＳＣｓ鉴定的效率和特异性。目前比较公认的具有相对特异性的ＢＭＳＣｓ标记物包括ＣＤ。ＣＤ，。及ＣＤ。。抗原。

２骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化的实验研究目前，体外诱导ＢＭＳＣｓ分化为神经样细胞的方法主要有３种：ｗｏｏｄｂｕｒｙ［１３］等ＤＭＥＭ培养体系、Ｓａａｃｈｅｚ［“］等神经营养因子为基础的培养体系以及ＤｅｎｇＥｌ５］等的黄嘌呤和环腺苷酸的诱导方法。这些实验都有诱导剂，根据诱导剂的不同可分为中药制剂诱导剂和化学诱导剂。

２．１中药制剂诱导的实验研究伴随科技的进步，中药提纯技术不断提高，中药制剂作为诱导剂的研究得到了可喜的进展，其中多数为抗氧化性中药或中药制剂，如麝香、丹参、天麻、黄芩、刺五加、当归、肌萎灵等。刘金保［１６］等用当归注射液做为诱导剂，成功体外诱导大鼠ＢＭＳＣｓ分化为神经细胞；董晓先［１７３等运用天麻诱导大鼠ＢＭＳＣｓ分化为神经元样细胞；王嫒［１８］等运用刺五加注射液体外诱导大鼠ＢＭＳＣｓ分化为神经元样细胞。中药作为诱导剂不仅能够成功的达到试验效果，而且具有某些方面的优势，如毒副作用小，可应用于人体移植等，一些研究表明ｐ巯基乙醇等诱导剂在诱导细胞的同时，存在细胞损伤从而使细胞的存活率降低，难以达到临床移植应用的大量缅胞要求，王继明ｎ们等入运用中药制剂肌萎灵注射液诱导入骨髓基质干细胞，发现中药肌萎灵不仅促进骨髓基质千细胞的增殖，而且能够促进骨髓基质干细胞向神经细胞的分化，同时又避免了一些常用诱导剂的副作用，从而有利于提高临床ＢＭＳＣｓ移植治疗中枢神经系统疾病的疗效和安全。

２．２化学诱导荆的实验研究骨髓问充质干细胞具有旺盛的分裂增生能力和多向分化潜能。体外培养的骨髓间充质干细胞在不同的诱导因素下可以向不同的谱系分化。体外诱导ＢＭＳＣｓ分化神经元细胞采用的诱导剂主要是抗氧化剂和生长因子。如ｐ巯基乙醇、二甲基亚砜、丁化羟基苯甲醚，表皮生长因子、脑源性营养因子与视黄酸等。ＳａｎｃｈｅｚＲａｍｏｓ［１４］等用神经营养因子及ＡＴＲＡ为诱导剂建立了体外诱导ＢＭＳＣｓ向神经细胞分化的培养体系，但是神经元样细胞的阳性转化率仅为０．５％；Ｄｅｎｇ［１５１等用ＩＢＭＸ／ｄｂＣＡＭＰ诱导ＢＭＳＣｓ向神经元样细胞分化的阳性率为２５％；Ｗｏｏｄｂｕｒｙ［１妇等用ｐ巯基乙醇、二甲基亚砜和丁化羟基苯甲醚等一些抗氧化剂成功诱导骨髓间充质干细胞分化为神经元，诱导后７８％的骨髓间充质干细胞表达神经元特有的标记如ＮＦ、ＮＳＥ、Ｎｅｓｔｉｎ等。２００７年，吴晓牧［２０］等在Ｗｏｏｄｂｕｒｙ的基础上进行改造，联合运用ＥＧＦ、ＢＮＥ和ＡＴＲＡ作为诱导剂成功诱导ＢＭＳＣｓ分化为具有典型的神经元形体的细胞，其中７７％的细胞ＮＳＥ（神经元烯醇化酶）表达阳性，５０％的细胞Ｎｓｅｔｉｎ表达阳性，所有细胞ＧＦＡＰ均表达阴性。近些年来的研究发现骨髓间充质干细胞可以被诱导分化为特征类型的神经元。２００５年，Ｇｕｏ等口日用载有ＧＤＮＦ、ＩＬ一１、脑神经胶质细胞等条件培养，经体外诱导骨髓间充质干细胞可以分化成为多巴胺能神经元样细胞。

３ＢＭＳＣｓ分化为神经元的可能机制ＢＭＳＣｓ是一种多能分化的细胞，可在一定条件下增分化为多种细胞。随着研究的深入，人们对于骨髓间充质干细胞诱导分化的机制产生了浓厚的兴趣，不同的研究者对于骨髓间充质干细胞的分化机制提出了不同的假说，但是尚不明确，王相利乜纠采用Ｌ—ＤＥＭ、｝巯基乙醇诱导大鼠骨髓间充质干细胞，通过ＲＴ—ＰＣＲ法检测神经生长因子、神经生长因子受体ＴｒｋＡｍＲＮＡ表达变化后发现，神经生长因子在诱导分化前后稳定表达，神经生长因子受体ＴｒｋＡ在分化诱导后表达减少，因此认为神经生长因子／ＴｒｋＡ信号途径可能在骨髓间充质干细胞诱导分化为神经细胞

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的过程中起作用｝其实，ＢＭＳＣｓ可以分泌多种细胞因子，包括ＩＬ、ＮＧＦ、ＥＰＯ、ＬＩＦ、ＣＳＦ２１、ＢＤＮＦ、ＶＥＧＦ等。这些因子均可调节神经细胞的生长、增殖、分化。此外，骨髓间充质干细胞还有促进内源性神经干细胞的增殖、分化、促进轴突再生、再髓鞘化的作用。

４展望ＢＭＳＣｓ具有体外扩增培养及自我更新的能力，转入外源基因后不影响其特性，因此成为基因修饰以治疗缺陷性疾病的理想的靶细胞；其极高的分化潜能、复制能力和免疫抑制功能及横向分化能力使其在修复再生缺陷组织、治疗中风、外伤及Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’Ｓ病方面具有广阔的前景，但是其中也存在许多问题，如ＢＭＳＣｓ在组织修复的同时可能定植于肿瘤组织，为肿瘤细胞的生长提供合适的微环境、外源性转染ＢＭＳＣｓ效率较低、如何获得高纯度的ＢＭＳＣｓ、ＢＭＳＣｓ是否会基因突变及有效控制其定向分化［２引、ＢＭＳＣｓ分化的神经细胞是否具有神经细胞的功能，能否与周围神经细胞有效整合、建立神经通路等。因此，探索分离有效成分的新方法。建立一套完整有效的体外培养、扩增、鉴定、定向分化诱导体系，在不改变其干细胞特性的前提下，实现快速大规模的扩增。为基础和临床研究提供充足的细胞来源成为亟待解决的问题。

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骨髓间充质干细胞研究进展(一)

骨髓间充质干细胞研究进展(一) 【摘要】骨髓间充质干细胞是干细胞领域的研究热点之一。虽然近几年来有关间充质干细胞的研究已取得了很大进展，但仍有很多问题有待进一步解决。本文主要对间充质干细胞的生物学特性、以及免疫耐受性、分化和促修复、间充质干细胞的标记等问题进行综述。 【关键词】骨髓间充质干细胞分化标记 骨髓间充质干细胞，BMSCs)是骨髓内除造血干细胞(hematopoieticstemcells，HSC)之外的另一类干细胞，是骨髓造血微环境的重要组成部分，在体内外均具有支持和调控造血的作用。因其比较容易贴壁和形成成纤维样的克隆，因此也称成纤维细胞集落形成单位(Colonyformingunitfibroblast，。又由于它们来自骨髓的支持结构，并作为滋养层支持造血干细胞的生长，因此也有人称其为骨髓基质细胞(Bonemarrowstromalcells，BMSCs)。 1骨髓MSCs的生物学特性 不同物种的BMSCs体外培养的形态学特征大致相同，主要表现为梭形、纺锤形，少数为多角形。目前，BMSCs的分离方法主要有以下几种：(1)全骨髓培养，是将无菌抽取的骨髓加入培养液制成细胞悬液并培养，原代培养培养物以造血细胞成分居多，为利于BMSCs的贴壁生长，可采用DMEM和胎牛血清培养。BMSCs对营养要求高，胎牛血清终浓度为10％～20％，有人认为红细胞会随着换液而逐渐被自然去除，对BMSCs影响不大。细胞融合后以1:2比例传代，3～4天换液一次〔1〕；(2)离心培养法，是根据骨髓中细胞成分比重的不同，采用离心分离法提取单核细胞进行培养。在新鲜无菌的骨髓抽取物中加入抗凝培养液稀释1500～2000r／min离心20～30min，采集交界处的单核细胞层，PBS洗涤2～3次后，加入培养液接种培养；(3)细胞表面分子标记分选法，主要是根据BMSCs的细胞表面分子特征来分离。一般采用流式细胞仪、免疫磁珠或免疫沉积法来进行分选。但由于目前仍未找到BMSCs 特异性的细胞表面标记物〔2〕该法较少采用。影响BMSCs扩增的主要因素：(1)血清：血清对大量扩增BMSCs起着重要的作用，不同浓度的血清对培养BMScs纯度的影响亦较大，常用1０%～20%的胎牛血清培养BMSCs;(2)接种密度：BMSCs的体外扩增速度与其接种密度也有关，一般认为较低密度种植有益于增殖。高密度接种后细胞生长较慢其原因可能是由于细胞间的接触抑制，或细胞释放到培养基中的因子影响了BMSCs的生长;(3)细胞因子：一些细胞因子对于维持BMSCs增殖和未分化状态亦十分重要;(4)动物种属：一般认为BMSCs的生长特性相似，但也有资料显示BMSCs生长特点有种属差异〔3〕。 2间充质干细胞移植后的免疫耐受性 在移植治疗中，一般情况下，移植物会引起宿主的免疫排斥反应。但对于间充质干细胞来说却不是这样。实验表明间充质干细胞可以抑制T细胞的增殖从而导致免疫耐受〔4～7〕。T 细胞与其它细胞的相互作用可以通过混和淋巴细胞反应来观察。被标记的T细胞与其它细胞混合后，如果可以引起T细胞的免疫反应，则可以观察到T细胞的增殖现象。但当把间充质干细胞与T细胞混合后却观察不到T细胞的增殖反应，而且这种现象并不是由于T细胞凋亡或其它的有害作用引起的。因为在去除间充质干细胞后，这些T细胞仍然可以对其它物质进行反应。此外，使用趋化膜将两种细胞分隔开培养后，间充质干细胞对T细胞的抑制作用依然存在，表明这种抑制作用可能通过某种可溶性的小分子起作用。另外，除了未分化的间充质干细胞可以抑制T细胞的增殖外，实验也表明，随着干细胞的分化，其抗原性并没有随之增加〔8〕。总之，间充质干细胞可以通过某种机制抑制T细胞的成熟来逃避免疫系统的清除。也暗示间充质干细胞可能在机体免疫系统的调节及骨髓中各种干细胞未分化状态的维持方面起作用。 3促组织修复和细胞分化 骨髓间充质干细胞(BMSCs)是存在于骨髓组织中的一类成体干细胞(adultstemcells，AS)，在一

人脐带间充质干细胞分离培养及向脂肪与成骨细胞的分化

中国组织工程研究与临床康复 第14卷 第14期 2010–04–02出版 Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research April 2, 2010 Vol.14, No.14 P .O. Box 1200, Shenyang 110004 https://www.sodocs.net/doc/d83866401.html, 2492 1 Biomedicine Research and Development Centre of Jinan University, Guangzhou 510632, Guangdong Province, China; 2 Guangzhou (Jinan)-Hong Kong Joint Laboratory of Cell Engineering, Guangzhou 510632, Guangdong Province, China; 3 Asia-Pacific Stem Cell Research Centre Co., Ltd., Hong Kong 999077, China; 4 Department of Obstetrics and Gynecology, First Affiliated Hospital of Jinan University, Guangzhou 510632, Guangdong Province, China; 5 Department of Bioengineering, Clemson University, Clemson, SC 29634-0905, USA He Shao-qing ★, Studying for master’s degree, Biomedicine Research and Development Centre of Jinan University, Guangzhou 510632, Guangdong Province, China; Guangzhou (Jinan)-Hong Kong Joint Laboratory of Cell Engineering, Guangzhou 510632, Guangdong Province, China heshq106@https://www.sodocs.net/doc/d83866401.html, 人脐带间充质干细胞分离培养及向脂肪与成骨细胞的分化**★△○ 何绍清1， 2，罗振宇1， 2，刘秋英1， 2，周向荣△2， 3，邓铭权△2， 3，罗 新4，姚润斯4，高 志5，王一飞○1， 2 Isolation of human umbilical cord mesenchymal stem cells and differentiation into adipocytes and osteblasts He Shao-qing 1, 2, Luo Zhen-yu 1, 2, Liu Qiu-ying 1, 2, Zhou Xiang-rong 2, 3, Deng Ming-quan 2, 3, Luo Xin 4, Yao Run-si 4, Gao Zhi 5, Wang Yi-fei 1, 2 Abstract He SQ, Luo ZY, Liu QY, Zhou XR, Deng MQ, Luo X, Yao RS, Gao Z, Wang YF. Isolation of human umbilical cord mesenchymal stem cells and differentiation into adipocytes and osteblasts. Zhongguo Zuzhi Gongcheng Yanjiu yu Linchuang Kangfu. 2010;14(14): 2492-2496. [https://www.sodocs.net/doc/d83866401.html, https://www.sodocs.net/doc/d83866401.html,] 摘要 何绍清，罗振宇，刘秋英，周向荣，邓铭权，罗新，姚润斯，高志，王一飞.人脐带间充质干细胞分离培养及向脂肪与成骨细胞的分化[J].中国组织工程研究与临床康复，2010，14(14):2492-2496. [https://www.sodocs.net/doc/d83866401.html, https://www.sodocs.net/doc/d83866401.html,] 0 引言 间充质干细胞具有自我更新能力，能分化成为成骨、软骨、肌肉和脂肪细胞等间质组织细胞[1-3]，甚至能分化为心肌、神经胶质和神经细胞[4-6]。近年来因其在组织工程和细胞替代治疗的临床前研究而备受关注。间充质干细胞分布在体内骨髓和其他组织与器官中，如脂肪组织、脐血，甚至外周血也发现有间充质干细胞 [7-10] 。 目前，骨髓间充质干细胞是最常用的种子细胞，但其数量和分化潜能随着年龄的增长显著减少 和降低[11-13]，并且取材时易对供体造成身体伤害。因此，非常有必要寻找新的自体和异体移植的细胞来源。这种新的细胞除了必须具备骨 髓间充质干细胞有更强的增殖力和多向分化潜能的特点外，还必须取材便利，不易造成病毒污染，且不受伦理道德限制等。 脐带由中胚层发育而来，是胎儿时期连接胎儿和母体的索状结构，外由羊膜包被，内有两条动脉和一条静脉及血管周围富含蛋白多糖和黏多糖的组织组成[14]。分娩后的脐带一直都被当废弃物丢弃，近年来因寻求更多来源的成体干细胞而受到关注。自Mitchell 等[15]提出

间充质干细胞研究进展及其临床应用前景

?２２８?生国篮旦匡煎！Ｑ塑生！！旦笠！鲞筮丝塑￡！ｉ塑旦墼丛鲤：堕！！！Ｑ嫂：Ｙ丛：堡：些！：１２ 病情持久不愈，气血郁滞，经脉失畅，化湿生痰，痰血瘀结而致。根据其病机，选用小金丸治疗，取得较好疗效，值得推广。５治疗乳腺囊性增生病悼３ 将５００例乳腺囊性增生病患者随机分为治疗组和对照组各２５０例，对照组单用三苯氧胺治疗，治疗组在对照组相同治疗的基础上加用小金丸治疗。结果：治疗组总有效率为９２．０％，对照组总有效率为６７．６％，两组有非常显著性差异（Ｐ＜０．０１）。乳腺囊性增生病系内分泌障碍性增生病，一是体内女性激素代谢障碍，尤其是雌孕激素比例失调，使乳腺实质增生过度和复旧不全；二是部分乳腺实质成分中女性激素受体的质和量的异常，使乳房各部分增生程度参差不齐。三苯氧胺与此激素竞争受体，阻断过高的雌激素作用于乳腺组织，但部分患者临床效果甚微，或服药期间疗效较好，停药后复发。小金丸的药理实验证实对乳腺泡和导管增生有明显抑制作用，同时能抑制纤维母细胞摄取１４．甘氨酸减少胶原纤维合成，又能促进细胞吞噬胶原纤维及其断片，增强细胞溶酶体释放组织蛋白水解胶原纤维，从而消降纤维细胞的增生、粘连，疗效肯定，不良反应小，但疗程较长。中医学认为乳腺增生病主要是气机郁滞，痰瘀互结，冲任失调所致，治当理气化瘀散结，活血祛瘀为原则。小金丸方中麝香走窜通络，散结开壅，枫香脂调气血，土鳖消肿定痛，地龙通络，制草乌祛风湿，温经散寒，当归活血，香墨消肿化瘀，五灵脂、乳香、没药活血化瘀、消肿定痛。诸药合用有温通、活血、消壅、散结之效。可使气旺络通，痰散结消。配合三苯氧胺治疗乳腺增生病，标本兼治，故能取得较好疗效。 ６治疗慢性盆腔炎包块怕１ 将６０例患者（疾湿疥阻兼脾肾两虚型）分为２组各３０例，治疗组口服小金丸和血宝胶囊配合宫颈湿敷血竭粉治疗。对照组用西医抗炎治疗。治疗前后Ｂ超测量盆腔包块的大小、检测雌激素水平、观察临床症状消失的情况。结果：总有效率治疗组８６．６７％，对照组为６３．３３％，２组比较，差异有显著性意义（Ｐ＜０．０５）；随访半年复发率，治疗组为２３．０８％，对照组为６３．１５％，２组比较，差异有非常显著性意义（Ｐ＜０．０１）；雌激素水平治疗前后比较及治疗后组问比较，差异均无显著性意义（Ｐ＞０．０５）。慢性盆腔炎包快属中医学瘢瘕范畴，多起于经行产后，胞脉胞络空虚，血室正开，痰湿之邪乘虚而入，蕴结胞宫；失治误治，余邪未净，迁延１３久，病及血分，致瘀积胞中，积聚成瘾。小金丸功能散结消肿，化瘀止痛，原用于痰气凝滞所致的瘰疬、瘿瘤、乳岩、乳癖，用于此药治疗盆腔炎包块属异病同治，有异曲同工之妙。现代药理研究表明小金丸具有抗炎、消肿、抗肿瘤和镇痛作用。血宝胶囊具有益肾健脾、补阴培阳之效。血宝既可助小金丸化痰散结、活血消ｊ｝毂之力，又可防止小金丸攻邪太过损伤正气。廊竭粉是伤科活血疗伤之圣药，取其破散瘾积宿血之功。内服外用双管齐下，共奏化痰散结、化瘀消瘕之功，使邪去而不伤正。本研究表明，用中成药扶正消瘾法治疗慢性盆腔炎包块具有无创性、服用简便、疗效好，复发率低的优点。 ７治疗结节性筋膜炎ｏ¨ ５例结节性筋膜炎患者，内服小金丸０．６ｇ，２次／ｄ。局部服用黄金膏（金黄散＋凡士林）＋四虎散（由生草乌、生半夏、生南星、狼毒组成）外敷，方法：根据肿块大小，先用金黄膏涂布于纱布上，再掺加四虎散，外面用单层纱布包裹，最后在药物表面撒少量蒸馏水，敷贴患处，每２ｄ换１次。结果５例均治愈。最短治愈时间２６ｄ，最长治愈时间３５ｄ，平均治愈时间３０．８ｄ。结节性筋膜炎又称为假肉瘤性筋膜炎，是一种发生于浅筋膜的良性增生性病变。小金丸具有消痰化坚、活血止痛、消结散毒的作用；金黄散清热、解毒、消肿、定痛；四虎散化痰散结止痛。内外治结合，共奏解毒化肿、化痰散结、活血止痛之效，故用于治疗本病能取得较满意的疗效。 参考文献 ［１］秦树光，等．小金丸联合甲状腺素片治疗甲状腺肿的ｌ｜缶床分析．现代中西医结合杂志，２００５，１４（８）：１０１８． ［２］屈江宁．小金丸治疗良性前列腺增生８０例．世界中医药，２００８，３（５）：２７７． ［３］马宝华，等．小金丸治疗带状疱疹后遗神经痛４４例．中国中医急诊，２００３，１２（５）：４７３． ［４］余勇．小金丸治疗聚合性痤疮２４例．医药导报，２０００，１９（３）：２６３． ［５］杨玉国，等．小金丸与三苯氧胺合用治疗乳腺囊性增生病２５０例分析．实用中医药杂志，２００５，２１（５）：２６１． ［６］邱明英，等．小金丸为主治疗慢性盆腔炎包块的临床研究．新中医，２００８，４０（４）：５５ ［７］吴亚旭．中药治疗结节性筋膜炎５例．江苏中医药，２００５，２６（１１）：２７． 间充质干细胞研究进展及其临床应用前景李玲玲李晶 【关键词】骨髓间充质干细胞；多向分化；组织工程 间充质干细胞（ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓ，ＭＳＣｓ）通常是指从骨髓或其他组织中分离到的在体外具有多向分化潜能的一类细胞。自Ｆｒｉｅｄｅｎｓｔｅｉｎ等首次报道骨髓中有少量细胞在培养过程中能贴壁分化形成类似骨、软骨的集落后，人们对这些细胞产生了浓厚兴趣。随后从鼠、兔、犬、人等多种动物的骨髓中均分离到了这种贴壁细胞。它们具有多向分化潜能， 作者单位：１３００２１吉林省前卫医院（李玲玲）；吉林省人民医院中西医结合科（李晶）在体外不同诱导条件下可分化为成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞及神经细胞…。 与软骨细胞、骨髓基质细胞、胚胎干细胞等相比，ＭＳＣｓ具有强大的增殖力、较强的多向分化潜能，而且具有取材方便、便于自体移植、便于外源基因转染及表达调控等诸多优点。最近。还发现ＭＳＣｓ具有免疫调节功能嵋ｏ。因此，ＭＳＣｓ是组织工程的一种新的理想种子细胞。目前，已知ＭＳＣｓ是源于中胚层的具有高度自我更新能力和多向分化潜能的成体干细胞，广泛存在于全身结缔组织和器官间质中¨１。本文就ＭＳＣｓ 万方数据

间充质干细胞临床研究进展

---------------------------------------------------------------最新资料推荐------------------------------------------------------ 间充质干细胞临床研究进展 间充质干细胞临床研究进展自 1867 年德国病理学家Cohnheim 在研究伤口愈合过程时，首次提出成纤维细胞可能来源于骨髓，即骨髓可能含有非造血干细胞的观点。 1869年，Goujon 发现自体红骨髓异位移植后具有成骨作用，也证实了骨髓具有成骨能力。 但直到 1976 年，Friedenstein 和 Petrakova 首先报道，通过帖壁培养的方法分离得到间充质干细胞（MSCs）。 1987 年，Friedenstein 等将骨髓放置在塑料培养皿中培养，发现骨髓单个核细胞在一定条件下可分化为成骨细胞、成软骨细胞、脂肪细胞和成肌细胞，由于能分化为多种中胚层来源的间充质细胞，因此被称之为间充质干细胞。 1991 年 Caplan 把骨髓中具有黏附于塑料培养皿表面、在体外能高度扩增、并可多向分化的细胞群命名为骨髓间充质干细胞。 1999 年，Pittenger 等在《Science》（科学）杂志上发表文章，对从骨髓标本中分离得到 MSC，应用流式细胞分析术分析 MSC，结果表明分离的细胞群体表型单一，在体外不同分化条件诱导下，可以形成成骨细胞、成软骨细胞或脂肪细胞，而且克隆化得到的细胞具有类似的分化特性，这充分证明骨髓基质中的间充质干细胞是多能干细胞。 一系列的研究已经证明 MSC 可以分化为神经、心脏、肝脏、 1 / 4

骨髓间充质干细胞体外诱导分化与标记(一)

骨髓间充质干细胞体外诱导分化与标记(一) 作者：吴晓林,李冬民,马德茂,张晓田,黄石,宋天保 【关键词】骨髓 【Abstract】AIM:Tostudythedifferentiationcharacteristicsandtheoptimaldosageandtimingforbromodeoxyuridi ne(Brdu)labelingofratbonemarrowderivedmesenchymalstemcells(MSCs)invitro.METHODS:Therat marrowstemcellsisolatedbyusingPercoll(1.073kg/L)wereculturedandproliferated.Thethirdpassage cellswereinducedwithdexamethasome,βglycerophosphate,ascorbicacid2phosphate,IGF1andinsuli n.Onday21,thecellswereanalyzedbyimmunohistochemistryfortypeⅠcollagenandbyhistochemistry foralkalinephosphatase(AKP).ThepurifiedMSCswereincubatedwithBrduatdifferentconcentrations( 5,10and15μmol/L)fordifferenttimeperiods(12，24，48，72and96h),followedbyimmunohistochemistryforBrdutoidentifytheoptimalBrduconcentrationandi ncubationtimeperiod.RESULTS:Afterincubationfor21dforinduceddifferentiationintoosteoblasts,ty peⅠcollagenandAKPwerepositivelyexpressed.Theincubationwith10μmol/LBrdufor72hachievedov er98%ofthelabelingratewithoutproducingobviouscelldamages.CONCLUSION:MSCscanbeinducedt odifferentiateintoosteoblastsundercertainconditionsinvitro.TheoptimalBrdulabelingconcentration andtimeperiodare10μmol/Land72h,respectively. 【Keywords】MSCs;induceddifferentiation;osteoblast;Brdu 【摘要】目的：探讨骨髓间充质干细胞（MSCs）在体外的诱导分化及5溴脱氧尿嘧啶核苷(Brdu)标记MSCs的可行性.方法：利用密度为1.073kg/L的percoll分离骨髓的单个核细胞，体外培养与扩增MSCs；取生长良好的第3代细胞，用成骨细胞分化培养液培养21d，Ⅰ型胶原免疫组化染色和碱性磷酸酶（AKP）组化染色；分别以浓度为5，10和15μmol/L的Brdu溶液标记MSCs，孵育12，24，48，72和96h后免疫组化检测Brdu，确定最佳标记量和最佳标记时间.结果：诱导分化第21日,AKP染色呈强阳色,Ⅰ型胶原免疫染色呈阳性.10μmol/LBrdu 标记MSCs的效果最好，随着孵育时间的延长，Brdu标记率逐渐增高，标记72h后标记率在90%以上.结论：MSCs在体外一定条件下可定向诱导分化为成骨细胞，用Brdu标记MSCs的最佳浓度为10μmol/L，最佳时间是72h. 【关键词】骨髓间充质干细胞；诱导分化；成骨细胞；5溴脱氧尿嘧啶核苷 0引言 骨髓间充质干细胞(mesenchymalstemcells，MSCs)是一类具有多向分化潜能的组织干细胞.因MSCs取材方便、对机体的损伤小、具有较强的传代增殖能力和免疫耐受性等特点而受到越来越多的关注.本实验的目的是利用MSCs具有分化潜能的特点，在体外诱导该细胞定向分化为成骨细胞.并用Brdu标记连续传代的MSCs，观察最佳标记时间及标记剂量，从而为追踪Brdu标记的MSCs移植入体内后的存活、生长及分化奠定基础. 1材料和方法 1.1材料健康雄性SD大鼠，体质量55～70g.由西安交通大学医学院实验动物中心提供. 1.2方法 1.2.1大鼠骨髓MSCs的体外分离培养将大鼠引颈处死后置于750mL/L乙醇浸泡约5min，无菌条件下分离出大鼠的股骨和胫骨.用PBS冲洗出骨髓细胞，经5mL针管反复吹打制成单细胞悬液，用200目的不锈钢网过滤，收集滤液.在密度为1.073kg/L的percoll（Phamacia）分离液上缓慢加入收集的滤液，2500r/min离心20min，收集滤液与分离液之间的白膜层细胞，用DMEM（Gibco）洗涤两次，1000r/min离心5min.用加有100mL/L胎牛血清（杭州四季青公司）的DMEM重悬细胞，1×108个/L种于两个直径为6cm的培养皿中培养，2d后更换培养液，加入完全培养基.并将吸出的旧培养液分别移入另两个平皿中继续培养，再过2d更换

_骨髓间充质干细胞在骨科中的应用

第9卷第18期·总第122期 2011年09月·下半月刊 87骨髓间充质干细胞在骨科中的应用※ 陈亮1陈跃平1,2* 摘要：骨髓间充质干细胞（BMSC）是一种来自中胚层发育的早期干细胞，具有多向分化潜能的特性，可分化为骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞等。临床上还运用BMSC治疗骨科疾病大量的体外实验已获成功。 关键词：骨髓间充质干细胞；骨科学；文献综述 doi：10.3969/j.issn.1672-2779.2011.18.055 文章编号：1672-2779（2011）-18-0087-03 骨髓中含有2类干细胞，①造血干细胞，它为循环血液提供前体细胞；②非造血性干细胞，它是骨髓中造血结构性和功能性支持细胞，在调节造血干细胞的长期存活，生长分化中起重要作用。早期分离培养时，发现其形状呈成纤维细胞样而称其为“成纤维细胞集落形成单位”或“骨髓基质成纤维细胞”。随着研究的深入，人们发现其对骨髓造血干细胞起支持诱导作用，又因其来自于骨髓基质，因而称其为“骨髓基质细胞”。因其在不同的诱导条件下，有向中胚层组织细胞分化的能力，又称其为“骨髓间充质干细胞”。 1 骨髓间充质干细胞多向分化特性 多向分化潜能被认为是BMSC最重要的生物学特征。大量体外实验证明，在不同诱导条件下，BMSC可以向多种中胚层来源的组织细胞分化，如成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞等。 1.1 BMSC向成骨细胞的定向诱导分化BMSC在体外培养中，通过地塞米松、β磷酸甘油和抗坏血酸等的诱导，能够分化为成骨细胞。Ouyang等[1]在培养基内加入抗坏血酸后BMSC排列紧密呈片状生长，将BMSC片与去除矿物质的移植骨片结合植入受损部位，3周后形态学、组织学、免疫组织化学观察显示，植入物的结构与正常骨膜相似，并向成骨、软骨分化。 1.2 BMSC向软骨细胞的定向诱导分化BMSC向软骨细胞的定向诱导分化将此分离的BMSC加入无血清培养体系中培养，培养体系中加入转化生长因子β、软骨来源形态形成蛋白及整合素可促使BMSC向软骨细胞分化。舒朝锋等[2]实验证明，在单层诱导培养条件下，人骨髓BMSC能分泌软骨细胞特征性细胞外基质如Ⅱ型胶原、糖胺多糖等，具有作为软骨组织工程种子细胞来源的可能。 1.3 BMSC向脂肪细胞的定向诱导分化 1999年，Pittenger等[3]人的BMSC培养体系中加入甲基异丁基黄嘌呤、地塞米松、胰岛素和茚甲新等，结果成功地诱导出脂肪细胞，细胞内聚集脂滴，并表达过氧化物酶体增殖物激活受体，脂蛋白脂酶和脂肪酸结合蛋白aP2。在这种培养条件下，约95%的细胞向此系分化，细胞内的脂质小泡持续增加直至充满细胞，这些物质可被油红染成红色。 ※基金项目：广西壮族自治区科技厅自然基金[No：2010GXNSFA013223] 作者单位：1 广西中医学院附属瑞康医院骨科（南宁530011） 2 南方医科大学在读博士（南宁530011） *通讯作者 2 骨髓间充质干细胞的分离方法 骨髓中BMSC含量很少，仅占骨髓内单个核细胞总数的0. 001%～0.01%，并随年龄的增加而减少，因此，必须实现其体外分离培养、扩增。目前BMSC的分离方法主要以下几种：①密度梯度离心法：主要根据骨髓中细胞成分的比重不同，清除红细胞，分离提取骨髓单个核细胞进行贴壁培养。目前较常用Percoll 液（1.073 g/ml）和Ficoll 液（1.077 g/ml）进行密度梯度离心。值得注意的是，不同密度的分离液对BMSC的纯度影响极大。这种方法分离培养的BMSC大小均匀，纯度较高，Pittenger等[4]在过密度梯度离心法分离培养的BMSC在第1代纯度可达95%，第2代达98%。因此该法被广泛采用。②贴壁筛选法：即全骨髓法，是根据BMSC贴壁生长而造血系细胞悬浮生长的特性，通过定期换液除去不贴壁细胞，收集贴壁生长BMSC，其纯度可达95%。目前多用这两种方法，细胞的粘附特性仍是分离和纯化BMSC的最基本原则，物理性富集后塑料器皿内的贴壁培养仍是分离BMSC的最基本方法，更好的分离方法还有待于进一步的探索。 3 BMSC的表面标志及鉴定 3.1 表面标志到目前为止，BMSC的表面抗原具有非专一性，它表达了间质细胞、内皮细胞和表皮细胞的表面标志。主要包括：①粘附分子，如CD166、CD54、CD102、CD44、CD106等。②生长因子和细胞因子受体，如IL-1受体、IL-3受体、IL-4受体、IL-6受体、IL-7受体、干扰素γ受体、肿瘤坏死因子α等。③整合素家族成员，包括CD49a、CD49b、CD49c、CD29、CD104等。④其它，如CD90、CD105等。不表达造血细胞的表面标志，如CD34、CD45、CD14、CD3、CD4、CD8等，也不表达与人白细胞抗原识别有关的共刺激分子B721、B722及主要组织兼容性复合物Ⅱ类分子如人白细胞DR 抗原等[5,6]。此外，BMSC自身还能产生一些造血及非造血的生长因子、白细胞介素和化学激动因子，但除细胞因子是持续性产生外，其它的仅仅在受到刺激后表达，BMSC还能产生一系列的基质分子，包括纤维连接素、胶原、蛋白聚糖，还能表达基质2细胞，细胞2细胞等相互作用的反受体，其中特别有关的是对CD44强表达，CD44是多种配体的受体，其分别在骨、骨髓中对细胞外基质构建起着重要的作用[7,8 ]。 3.2 鉴定对BMSC进行鉴定可联合细胞化学和流式细胞分析方法[9]。细胞化学方法，BMSC具有独特的代谢特点，几乎所有细胞酸性萘酚酸酯酶及糖原阳性，酸

骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化的研究进展

３７８陕西中医２０１０年第３１卷第３期 药杂志，２００４，３２（３）：１８０—１８２， ［７３金静愉，郁仁存．乳腺癌中西医结合诊治方案口］．中国肿瘤，１９９５，４（５）：７－１０。 ［８］刘胜，吴雪卿，陈前军．４０７乳腺癌术后患者辨证分型规律探析口］．辽宁中医杂志，１９９９，２６（９）：３８７—３８８．［９］唐汉钧，高尚璞，郑勇．中医药治疗乳腺癌术后２８８例临床观察口］．上海中医药大学报，２００２，１６（３）：２３．［１０］刘燕珠，王泳，吴丹红，等．中西医结合治疗乳腺癌６８例［Ｊ］．福建中医药，２０００。３１（３）：３０—３１． ［ｎｌ万华，吴雪卿，陆德铭．扶正祛邪在治疗乳腺癌中的运用［Ｊ］．上海中医药大学学报，２００２，１６（１）：３０—３１．［１２］朱华宇，司徒红林．林毅辨治乳腺癌经验撷菁［Ｊ］．辽宁中医杂志，２００７，３４（４）：３９５—３９６． ［１３３武自力．金静愉治疗乳腺癌经验［Ｊ］．四川中医，２００７，２５（８）５—６． ［１４］刘胜，赵倩，刘佳，等．乳腺癌术后方对乳腺癌术后５年复发转移率的影响［Ｊ１．中西医结合学报，２００８，６（１０）：１０００—１００４． ［１５］刘胜，花勇强，孙平，等．乳移平抗乳腺癌术后复发转移的临床研究［Ｊ］．中西医结合学报，２００７，５（２）：１４７—１４９． ［１６］卓斌．乳康汤治疗３６例乳腺癌术后或放、化疗后的临床观察口］．湖南中医学院学报，１９９５，１５（２）：２３． ［１７］陈英．益气养血、清热解毒治疗乳癌术后４１例［Ｊ］．浙江中医学院学报，１９９９，２３（６）：３０１． ［１８］李增战，陈捷，苗文红，等．鹿仙散结汤治疗晚期乳腺癌３０例［Ｊ］．陕西中医，２００７，２８（５）：５２６—５２７． ［１９］喻伟国，程进明．抗癌汤结合化疗治疗肿瘤术后４８例总结口］．湖南中医杂志，２００３，１９（１）：１１—１３． ［２０］李景鹏，贾英杰．贾英杰治疗乳腺癌术后的经验［Ｊ］．湖北中医杂志，２００７，２９（７）：２３． ［２１］黄智芬，刘俊波，陈强松，等．健脾消积汤联合化疗对晚期乳腺癌患者生活质量及免疫功能的影响［Ｊ］．新中医，２００７，３９（５）：８８—８９． ［２２］樊淳理．中药治疗乳腺癌术后化疗患者４１例［Ｊ］．中医杂志，２００６，４７（３）：２２６． ［２３］张卫红．卞卫和教授治疗乳腺癌经验举隅［Ｊ］．南京中医药大学学报，２００７，２３（２）：１２６－１２８． ［２４１黄梅，杨海燕．益气活血汤改善脾虚挟瘀型乳腺癌患者化疗毒副作用的临床研究口］．湖北中医杂志，２００５，２７（７）：９－１０。 ［２５］周明，吴勇华，刘永达．中西医结合治疗晚期乳腺癌１４例分析口］．中国中西医结合杂志，１９９５，１５（４）：２３７．［２６］罗雪冰．益气祛邪汤治疗乳腺癌术后７６例疗效观察［Ｊ］．华夏医学，２００７，（２）：２４７—２４８． ［２７］沈哗华，宋明志，黄雯霰．中西医结合治疗７１例乳腺癌术后患者的疗效分析［Ｊ］．中西医结合学报，２００３，１（１）：３０－３１． ［２８１向丽萍，欧阳恒，肖毅良．菊藻丸抗乳腺癌术后复发转移的临床观察［Ｊ］．中国临床药理学与治疗学，２００２，７（１）：６３—６４． ［２９］王义程，丁凌，鲁志诚．三苯氧胺加中成药治疗绝经后晚期乳腺癌［Ｊ］．肿瘤研究与临床，１９９６，８（４）：２６５．［３０］ＣｏｈｅｎＩ，ＴａｇｌｉａｆｅｒｒｉＭ，ＴｒｉｐａｔｈｙＤ．ＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅｍｅｄｉｃｉｎｅｉｎｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒ口］．ＳｅｍｉｎＯｎｃ０１．２００２，２９（６）：５６３—５６４． ［３１］ＣｕｉＹ，ＳｈｕＸＯ，ＧａｏＹ，ｅｔａｌ．ＵｓｅｏｆｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｙａｎｄａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅｍｅｄｉｃｉｎｅｂｙＣｈｉｎｅｓｅｗｏｍｅｎｗｉｔｈｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒ口］，ＢｒｅａｓｔＣａｎｃｅｒＲｅｓＴｒｅａｔ．２００４，８５（３）：２６３—２７０． ［３２］刘叙仪，孟松娘．杨敬贤，等．中药Ｒ３对耐阿霉素人乳腺癌细胞ＭＣＦＴａｄｒ多药耐药的逆转ｉ－Ｊ］．中国肿瘤临床，１９９７，２４（５）：３２５—３３０ ［３３１姜晓峰，甄永苏．大黄素逆转肿瘤细胞多药抗药性的作用［Ｊ］．药学学报，１９９９，３４（３）：１６４—１６７． ［３４］ＷａｎｇＬ．ＹａｎｇＣＨ，ＨｏｒｗｉｔｚＳＢ，ｅｔａｌ．Ｒｅｖｅｒｓａｌｏｆｔｈｅｂｕｍａｎｍｕｒｉｎｅｍｕｌｔｉｄｒｕｇ—ｒｅｓｉｓｔａｐｃｅｐｈｅｎｏｔｙｐｅｗｉｔｈｍｅｇｅｓｔｒｏｌａｃｅｔａｔｅ［Ｊ］．Ｃａｎｃｅｒ．ＣｈｅｍｏｔｈｅｒｐｈａｒｍＡｃｏｌ，１９９４，３４：９６． ［３５３李忠．临床中医肿瘤学［Ｍ］．辽宁科学技术出版社，２００２，１２４—１２５． （收稿２００９—１２—１０；修回２０１０－０１—２４） 骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化的研究进展’秦安清刘黎青△于娜◇周盛年△▲山东中医药大学基础医学院（济南２５０３５５） 【中图分类号】Ｑ２５【文献标识码】Ａ【文章编号】ｌＯＯＯ一７３６９（２０１０）０３～０３７８—０３ ＊山东省科技攻关课题（ＮＯ：２００７ＧＧｌ０００２０１７）；山东省中医药管理局资助课题（ＮＯ：２００７—００６） △通讯作者：刘黎青周盛年 ▲山东大学齐鲁医院神经内科（济南２０００１２） ◇山东省昌乐县中医院（昌乐２６２４００） 骨髓问充质干细胞（ＢｏｎｅＭａｒｒｏｗＭｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓ，ＢＭＳＣｓ）又称骨髓基质干细胞，是骨髓细胞中除去造血干细胞（非粘附细胞）之外的细胞部分，作为成体干细胞之一，具有多项分化潜能，能向骨、软骨、肌肉、神经、角膜上皮细胞等中胚层或外胚层组织细胞分化，是组织工程中重要的种子细胞之一，并且具有取材方便，扩增迅速，可自体移植等特点，因 万方数据

间充质干细胞分化为心肌细胞的研究进展

间充质干细胞分化为心肌细胞的研究进展 【摘要】心肌梗死等缺血性心脏病严重威胁人类生存和生活质量,组织工程技术为根治心肌梗死等心脏病提供了一种新的方法,近年来,心肌组织工程有了较大的进展,但在种子细胞等方面的难题还远没有解决。本文对关于间充质干细胞分化为心肌细胞的研究作了一下综述,为细胞替代治疗的研究提供一定的参考。 【Abstract】Ischemic heart disease such as myocardial infarction endanger human health and life,cardiac tissue engineering is one of the new radical therapy for myocardial infarction.In recent years,researchers have made great progress in cardiac tissue engineering,but the problems of seed cells and scaffold materials are far from resolved.This paper reviews research advances of mesenchymal stem cells induced into cardiomyocyets so that it may contribute to Cell therapy. 【Key words】 Mesenchymal Stem Cells;Cardiomyocyets;Cell therapy 在成人肌肉组织中,心肌细胞(Cardiomyocytes,CMs)属于终末分化期永久性细胞,不具有再生能力[1],其对有丝分裂信号作出的反应是细胞肥大[2]而不是再生,致使损伤后心肌再生和修复严重受限,由于心肌损伤后无法通过自身的增殖、分化进行修复,坏死的心肌则由纤维疤痕组织取代[3,4]。研究发现心肌中也含有干细胞[5-7],在心肌梗死(Myocardial infarction,MI)后这些细胞会发生分裂增生,但数量极少,增殖能力太小,不能完整地修复心肌组织,更不能满足心肌组织再生的需求,致使具有收缩功能的CMs减少,最终发展成充血性心力衰竭、死亡,严重影响患者的生活质量。临床上缺乏对病变冠状动脉的再造和梗死心肌的再生、重建的根本治疗方法,而细胞替代治疗通过移植功能细胞,替代、修复或加强受损的组织或器官的细胞的生物学功能已成为治疗多种组织坏死性疾病的新策略。 1 心肌细胞和间充质干细胞的特点 心肌细胞在出生后就进入了有丝分裂的后期,基本丧失了增生和再生的能力,不再进入细胞周期,而目前尚无证据支持心肌中含有干细胞[1]。成人骨髓中含有造血细胞和非造血细胞,非造血细胞与细胞外基质一起形成了支持造血的骨髓微环境(Bone marrow microenvironment,BMME)[8]。骨髓微环境中的细胞成分包括网状内皮细胞、巨噬细胞、脂肪细胞、成纤维样细胞[9],这些细胞通过分泌各种细胞因子、生长因子、以及自身细胞表面受体的表达,对造血细胞的附着、分化、自我更新起到了重要作用[10]。目前,普遍认为,在骨髓中至少存在两种干细胞群即造血干细胞(Haematopoietic stem cells,HSCs)和MSCs,前者是所有造血细胞的祖细胞[11,12],后者则是中胚层发育的早期细胞,这类细胞可以通过体外贴壁培养加以分离,不仅能分化为造血实质和基质细胞等,还分化为多种造血以外的组织,

间充质干细胞向成骨细胞分化中的Wnt信号通路

中国组织工程研究 第17卷 第40期 2013–10–01出版 Chinese Journal of Tissue Engineering Research October 1, 2013 Vol.17, No.40 doi:10.3969/j.issn.2095-4344.2013.40.019 [https://www.sodocs.net/doc/d83866401.html,] 潘京华，黄浩，查振刚. 间充质干细胞向成骨细胞分化中的Wnt 信号通路[J].中国组织工程研究，2013，17(40):7144-7149. P .O. Box 1200, Shenyang 110004 https://www.sodocs.net/doc/d83866401.html, 7144 www.CRTER .org 间充质干细胞向成骨细胞分化中的Wnt 信号通路*★ 潘京华1，黄 浩1，查振刚2 (1暨南大学第一临床医学院，广东省广州市 510000；2暨南大学附属第一医院，广东省广州市 510632) 文章亮点： 1 此问题的已知信息：在间充质干细胞向成骨细胞分化增殖的过程中，转化生长因子β/骨形态发生蛋白、MAPK 和Wnt 等信号传导通路途径在整个成骨细胞分化中起着重要的作用。 潘京华★，男，1988年生，广东省阳江市人，汉族，暨南大学在读硕士，主要从事骨关节的研究。 394805331@https://www.sodocs.net/doc/d83866401.html, 2 文章增加的新信息：文章从Wnt 蛋白、Wnt 信号传导通路、Wnt 信号通路的调控、Wnt 参与间充质干细胞自我增殖及wnt 信号传导通路与骨生成等方面进行了详细叙述。研究已经证明了经典Wnt 信号传导通路与非经典Wnt 信号传导通路能联合调控人间充质干细胞的多向性分化，其中Wnt 信号传导通路在参与在间充质干细胞向成骨分化的过程中，Wnt11，FZD6，sFRP2，sFRP3和Ror2等因子的表达升高，而Wnt9a 和FZD7的表达下降。 通讯作者：查振刚，博士，教授，博士生导师，暨南大学附属第一医院，广东省广州市 510632 3 临床应用的意义：经典Wnt 信号、非经典Wnt 信号以及其内部多中因子都参与间充质干细胞增殖和分化的调控。 中图分类号:R318 关键词： 干细胞；干细胞综述；Wnt 蛋白质；间充质干细胞；Wnt 信号通路；成骨细胞分化；经典Wnt 信号传导通路；非经典Wnt 信号传导通路；省级基金 文献标识码:A 文章编号:2095-4344 (2013)40-07144-06 收稿日期：2013-04-11 修回日期：2013-05-30 (2 01304127/W ·W) Pan Jing-hua ★, Studying for master’s degree, First Clinical College of Jinan University, Guangzhou 510000, Guangdong Province, China 394805331@https://www.sodocs.net/doc/d83866401.html, Corresponding author: Zha Zhen-gang, M.D., Professor, Doctoral supervisor, First Affiliated Hospital of Jinan University, Guangzhou 510632, Guangdong Province, China Received: 2013-04-11 Accepted: 2013-05-30 主题词： WNT 蛋白质类；间质干细胞；成骨细胞；细胞分化 基金资助： 广东省科技计划(2011B050300013)* 摘要 背景：研究表明Wnt 信号通路在间充质干细胞向成骨分化中具有重要作用。 目的：归纳总结Wnt 信号通路的机制、调控以及其参与间充质干细胞成骨分化的作用。 方法：应用计算机检索Pubmed 和CNKI 数据库中1998年9月至2013年3月相关文献，在标题和摘要中以“Wnt ，间充质干细胞，Wnt 信号通路，成骨细胞分化，经典Wnt 信号传导通路，非经典Wnt 信号传导通路”或“Wnt ，Mesenchymal stem cells ，Wnt signaling pathways ，osteoblastic differentiation ，canonical Wnt signaling ，non-canonical Wnt signaling ”为检索关键词进行检索。最后选择31篇符合标准的文献进行综述。 结果与结论：Wnt 信号传导通路在间充质干细胞向成骨细胞中充当着关键的角色，包括经典Wnt 信号、非经典Wnt 信号以及其内部多种因子都参与间充质干细胞增殖和分化的调控。经典Wnt 信号传导通路与非经典Wnt 信号传导通路能联合调控人间充质干细胞的多向性分化，其中Wnt 信号传导通路在参与在间充质干细胞向成骨分化的过程中，Wnt11，FZD6，sFRP2，sFRP3和Ror2等因子的表达升高，而Wnt9a 和FZD7的表达下降。但Wnt 信号的各因子如何相互影响，如何利用Wnt 信号的机制促使间充质干细胞更快、更准确地分化值得更进一步探讨与研究。 Wnt signaling pathways in osteogenic differentiation of mesenchymal stem cells Pan Jing-hua 1, Huang Hao 1, Zha Zhen-gang 2 (1First Clinical College of Jinan University, Guangzhou 510000, Guangdong Province, China; 2First Affiliated Hospital of Jinan University, Guangzhou 510632, Guangdong Province, China) Abstract BACKGROUND: Studies have shown that Wnt signaling pathways play an important role in the osteogenic differentiation of mesenchymal stem cells. OBJECTIVE: To review the mechanism and regulation of the Wnt signaling pathways, as well as Wnt signaling pathway effects on osteogenic differentiation of mesenchymal stem cells. METHODS: A computer-based search of PuMed database and CNKI database from September 1998 to March 2013 was performed to search related articles. The key words of “Wnt, mesenchymal stem cells, Wnt signaling pathways, osteoblastic differentiation, canonical wnt signaling pathway, non-canonical signaling pathway” in English or Chinese were used to search the articles in the title and the abstract. A total of 31 articles were included to review. RESULTS AND CONCLUSION: Wnt signaling pathways play a critical role in the osteogenic differentiation of mesenchymal stem cells. Canonical Wnt signaling pathway, non-canonical Wnt signaling pathway, and their