AOAC Method 996.14
17.10.07
AOAC Official Method996.14
Detection of Listeria monocytogenes and Related Listeria Species in Selected Foods and from Environmental Surfaces
Assurance Polyclonal Enzyme Immunoassay(EIA)
First Action1996
Revised First Action1999
Final Action2001
Revised2001
(Applicable to detection of Listeria monocytogenes and related Listeria species in dairy foods,red meats,pork,poultry and poultry products,seafood,fruits,vegetables,nutmeats,pasta,chocolate, eggs,bone meal,and from environmental surfaces.)
Caution:L.monocytogenes infections can cause fetal death.It is recommended that pregnant women avoid handling this
organism.Sterilize contaminated equipment and media
before disposal or reuse.
See Table996.14for the results of the interlaboratory study sup-porting acceptance of the method.
A.Principle
P r o p r i e t a r y a n t i b o d i e s w i t h a h i g h s p e c i f i c i t y t o L.monocytogenes and related Listeria species antigens are bound to microwell plates.Enriched test portions and positive controls are added to the plate.Any antigens that are present bind to the microwells,forming antibody-antigen complexes.Nonreactive ma-terial is washed away.Listeria-specific antibody is added,and the incubation and wash procedures are repeated.Alkaline phosphatase conjugate is then added to bind enzyme to Listeria antigens.After incubation,unbound conjugate is washed away.The substrate, p-nitrophenylphosphate,is added,and the absorbance of the result-ing colored product is read spectrophotometrically at405–410nm. Readings above cutoff value indicate a presumptive positive;con-firm by culture method.
B.Media and Reagents
(a)Wash solution concentrate.—2%Polyoxyethylene 20sorbitan monolaurate(Tween20)in water.
(b)Liquid substrate.—p-Nitrophenylphosphate solution,
4.33mM;1.6mg disodium salt/mL.
(c)Positive control.—Stabilized,inactivated Listeria antigen.
(d)Antibody solution.—Highly purified antibodies reactive with Listeria antigen.
(e)Conjugate solution.—Alkaline phosphatase-antibody conjugate.
(f)Stop solution.—20%Ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA)in water.
(g)Antibody-coated microwells.—Microwell strips,each well coated with Listeria antibody,96-well holder,and plastic cover.
(h)Modified Fraser broth(mFB)with lithium chloride(mFB+ LiCl).—Suspend55g commercial Fraser broth base in1L water. Stir until completely dissolved.If necessary,warm to dissolve pow-der but do not overheat.Only after powder has completely dissolved, add4g LiCl and stir until completely dissolved.Autoclave at121°C for15min.Do not overheat.Do not add ferric ammonium citrate ad-ditive to broth.Alternatively,prepare a45%(w/v)LiCl solution by dissolving45g LiCl in enough water for final volume of100mL. Filter sterilize the solution through a0.2μm filter.Add2mL sterile LiCl stock to225mL presterilized mFB.If using a commercially prepared8M LiCl stock solution(Sigma),add2.65mL per225mL sterilized mFB.
(i)Buffered Listeria enrichment broth(BLEB).—Suspend36.1g commercial Listeria enrichment broth in1L water.Add8.5g 3-(N-morpholino)propanesulfonic acid(MOPS)and13.7g MOPS–Na salt.Mix well and heat to dissolve if necessary.Dispense in9mL aliquots.Sterilize by autoclaving at121°C for15min. Items(a)–(g)are available as Assurance Listeria Enzyme Immunoassay(EIA)test kit from BioControl Systems,Inc.(12822 SE32nd St,Bellevue WA98005USA).
C.Apparatus
(a)Incubators.—Maintaining30–32°C and35–37°C.
(b)Water bath.—Maintaining100°C.Alternatively,flowing steam autoclave set at100°C or a dry heat block may be used. (c)Microplate washer or plastic squeeze bottle.—For washing microwell strips.
(d)Microplate reader.—Photometer with405–410nm filter, reading microwell plates.May include optional printer.
(e)Micropipets.—Accurately dispensing0.1and1.0mL.
(f)Vortex mixer.—For mixing test portions.
(g)Top loading balance.—For weighing test portions,measur-ing up to1000g,sensitivy of±0.1g.
(h)Blender or stomacher.—For homogenizing test portions. D.General Instructions
Store all reagents at2–8°C when not in use.Let reagents equilibrate to room temperature before use.Include duplicate posi-tive and one blank test wells with each run of test https://www.sodocs.net/doc/db11833632.html,e sepa-rate pipets for each test suspension and reagent to avoid https://www.sodocs.net/doc/db11833632.html,e reagents and components as an integrated unit and do not mix with components from other manufacturing batches or https://www.sodocs.net/doc/db11833632.html,e dedicated trough or glassware for each re-agent to avoid cross-contamination.Do not use reagents beyond stated expiration date.Do not reuse microwells.Store unused microwells in sealed foil pouch.
E.Preparation of Test Suspensions
(a)Primary enrichment.—Food products.—Aseptically weigh 25g test portion or pipet a25mL aliquot into225mL mFB+LiCl, B(h).Blend or stomach food to homogenize test portion. Environmental monitoring.—For environmental sponges,ensure that the sponge is in a horizontal position in the bag and add60mL mFB+LiCl,B(h),to sponge bag.If using a swab,add swab to10mL mFB+LiCl,B(h).
Mix well via stomacher or vortex mixer.Incubate28±2h at30°C.
(b)Secondary enrichment.—Transfer1mL incubated mFB+ LiCl to9mL BLEB,B(i).For powdered milk products,transfer 0.1mL incubated mFB+LiCl into10mL BLEB,B(i).Vortex tubes and incubate at30°C for24±2h.
(c)Inactivation.—Vortex mix incubated BLEB tubes and trans-fer1.0mL to a clean tube.Inactivate microorganisms at100°C for 15min.Cool tubes to25–37°C before testing.Inactivated broths can be stored at2–8°C up to4days prior to testing.Store remaining BLEB enrichment broths at2–8°C to confirm presumptive positives.Note:Test tubes that have been stored must be mixed thor-oughly before addition of test suspension to microwell.
?2002AOAC INTERNATIONAL
F.Enzyme Immunoassay Procedure
(1)Prepare wash solutions by adding1.0mL wash solution con-centrate,B(a),to100mL water(sufficient to wash48wells).Label container.Wash solution is stable for30days stored at2–8°C.
(2)Install a405–410nm filter in microwell plate reader.
(3)Fit required number of microwells,B(g),into holder.Reseal unused microwells.In addition to test wells,allow3extra wells for2 positive controls and1blank.Carefully record positions of positive controls,blank,and tests in holder.
(4)Mix inactivated test suspensions,E(c),and positive control, B(c),separately on vortex mixer before https://www.sodocs.net/doc/db11833632.html,e a new pipet tip for each test portion.Pipet100μL aliquot of test suspension into each well.Also pipet100μL aliquot of positive control into each positive control well.Leave blank well empty.
(5)Cover microplate with plastic cover provided and incubate 30min at35–37°C.Do not stack anything on top of microwell holder during incubation.Do not agitate plate during any incubation step.
(6)Following incubation,wash each well3times using either(a) or(b)as follows:(a)Washing procedure.—Completely remove contents of well with a microwell washer.Immediately fill wells completely with250μL of wash solution,F(1).Note:Effective washing is critical to obtain accurate data.Avoid overfilling wells to prevent antigen carryover to adjacent nonreactive wells.Avoid underfilling wells to prevent ineffective washing.(b)Alternative washing procedure.—Remove contents of well by inverting and vigorously tapping https://www.sodocs.net/doc/db11833632.html,pletely fill each well with wash solu-tion,F(1),using a clean wash bottle.Repeat twice for a total of3as-piration/wash cycles per step.
(7)Immediately following removal of the last wash,mix anti-body solution,B(d),by gently inverting the bottle several times. Add100μL antibody solution to each well,including the control and blank wells.Cover plate with plastic cover and incubate30min at 35–37°C.
(8)Following incubation,wash each well3times.Refer to wash-ing procedure instructions,F(6).
(9)Immediately following removal of the last wash,mix conju-gate solution,B(e),by gently inverting the bottle several times.Add 100μL conjugate solution to each well,including control and blank wells.Cover plate with plastic cover and incubate30min at 35–37°C.
(10)Following incubation,wash each well3times.Refer to washing procedure instructions,F(6).
(11)Immediately following removal of the last wash,add100μL substrate,B(b),to each well,including control and blank wells. Cover plate with plastic cover and incubate30min at35–37°C.Af-ter incubation do not wash wells.Proceed directly to G.If reading will be delayed,add50μL stop solution,B(f),to each well.Read within1h.
G.Reading
Read control and test well absorbancies(A)at405–410nm.To obtain valid results,calibrate the microwell plate reader against the blank well before reading test and control wells.Standardize reader by reading the blank well and adjusting absorbance to zero.Read the absorbance of each well,starting with the2positive controls,with a microwell plate reader at405or410nm.Note:When reader is stan-dardized to blank well,certain test wells may read less than zero. This is not uncommon and indicates a negative result.
H.Interpretation of Test Results
Positive control value.—The positive control absorbance read-ings should be>0.8A units.Absorbance readings below this value may indicate problems with the washing procedure.Contact BioControl Technical Services for more information.
Cutoff value.—Calculate the average value of the2positive con-trol absorbance readings(in A units)and multiply by0.25to estab-lish the cutoff value:
(PC1PC2)
2
0.25cutoff value
where PC=positive control absorbance reading(in A units).Repeat positive controls for each test run.Note:Microwell plate reader lin-ear range is variable depending on manufacturer’s specifications.If PC is reported as“over”or a numerical value over2.5,use2.5A for calculation purposes.
Negative results.—Test wells with A readings less than the cutoff value are negative.
I.Confirmation of Positive EIA Test Portions
A reading greater than or equal to the cutoff value indicates a pre-sumptive positive test result.See chapter on Listeria confirmation in the current edition of Bacteriological Analytical Manual,AOAC INTERNATIONAL,Gaithersburg,MD20877,USA,or Microbiol-ogy Laboratory Guidebook,U.S.Department of Agriculture-Food Safety Inspection Services,Athens,GA30604,USA.Isolate from previously enriched BLE
B tubes.
References:J.AOAC Int.80,775(1997);(future issue).
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协同创新体系研究综述_赵志娟
浙江省科技信息研究院赵志娟吴磊琦俞云峰 协同创新体系研究综述 摘要：协同创新是当今科技创新的新范式，是提升产业竞争力、区域创新能力的新模式，也是目前国内外学者的研究热点。通过对协同创新的理论内涵、体系建设、存在问题以及学者 提出的对策建议等研究进行综述，全面了解协同创新体系的理论研究和实践应用现状。 关键词：协同创新；模式；体系；综述 引言 创新已经从早期的技术驱动的创新，发展为目 前开放创新的阶段。在开放创新的时代，企业的创 新活动离不开外部创新资源的参与。协同创新是当 今科技创新的新范式，是提升产业竞争力、区域创新 能力的新模式，也是目前国内外学者的研究热点。 当前，我国正处于经济转型升级，加快创新驱动发展 战略的关键时期。对协同创新的理论、体系建设、存 在问题和对策建议进行综述研究，将对实施协同创 新举措加快产业转型升级、提升企业创新能力、解决 科技与经济两张皮等，具有重要的指导和借鉴意义。 一、协同创新的内涵研究 “协同创新”一词最早是由国外学者彼得.葛洛 (Peter Gloor)给出明确的定义，他认为协同创新是 由一组人员组成网络小组，借助网络交流思想、信息 和技术等进行合作，实现共同目标。Aokimasahi在 对协同创新进行定义时，认为协同创新是高等院校、 科研机构与企业等处于不同行业领域的主体通过相 互合作影响产生的一种协同作用，从而可以实现提 升各自发展潜能，实现1+1>2的合作过程。 国内学者徐莉等认为协同创新是企业、高校与 科研机构以资源共享为前提条件，以资源融合、成果 互惠、利益分配以及风险分担为准则形成的分工合 作契约[1]。周正等认为,基于主体间优势资源互补 与整合的产学研协同创新活动本质是彼此间核心能 力的互补与融合[2]。魏奇锋,顾新从知识流动的角 度分析,认为产学研协同创新过程是知识跨组织流 动从而产生的知识增值过程，即协同创新主体从知 识共享、知识创造到知识优势形成的过程[3]。 二、协同创新体系建设研究 协同创新体系的应用领域广泛，根据文献梳理， 国内外已创建的协同创新体系可以分为以政府为主 的宏观协同创新、以产业为主的中观协同创新、以高 校或企业为主的微观协同创新三个层次。相应的创 新研究模型分别对应于国外学者Segarra-BlascoA 的多主体间的协同创新模型，Elzkowita的企业、产 业和政府三螺旋模型和Kuen-Hung&Wang的中小企 业协同创新模型。根据文献研究，国内外学者主要 从协同创新模式分类、协同创新体系建构、产业应用 研究等角度进行协同创新体系研究。 1.协同创新模式研究 基于协同创新模式分类的视角，目前主要有要 素协同创新模式和主体协同创新模式。要素协同创 新模式又可以分为机构内部的要素协同或者要素整 合平台，基于要素整合的平台为主的协同创新模式 一般由政府为主导推动。主体协同创新模式又可以 分为纵向协同创新模式和横向协同创新模式：纵向 协同模式一般是基于产业价值链，与产业价值链上 的相关企业建立联盟，互补长短，获取规模经济效 益。何勇等从供应商、客户等主体角度研究了纵向 协同创新模式；横向协同创新主要指围绕某一主题， 不同创新主体间的协同，一般包括企业、高校、科研 院所、政府等创新主体[4]。彭华涛,马龙指出在横向 协同创新中各创新主体因为目标不同、利益交叉以 及信息不对称等因素，很难形成合力，需要政府发挥 主导作用，统一协同主体的步调[5]。 研究与探讨
产学研协同创新能力提升对策研究
产学研协同创新能力提升对策研究 摘要：目前，我国存在着科技成果闲置、科技工作与人才培养没有形成良性互动、企业缺少关键核心技术等问题。如何有效聚集创新资源、推进创新主体合作、促进科技成果转化，更好为创新型国家的建设服务，这是实现自主创新的新思考。文章对我国产学研现状进行剖析，并依据国家对创新能力的要求提出了提高产学研协同创新能力的对策建议。 关键词：科技；产学研；创新能力 协同创新指创新资源和要素有效汇聚，通过突破创新主体间的壁垒，充分释放彼此间“人才、资本、信息、技术”等创新要素活力而实现深度合作。在科技经济全球的背景下，能有效提高创新效率的重要途径，既为开放、合作、共享的协同创新模式，这是因为协同创新是以大学、企业、研究机构为核心要素，以政府、金融机构、中介组织、创新平台、非营利性组织等为辅助要素的多元主体协同互动的网络创新模式，通过资源整合达到1+1+1>3的非线性效用，并能有效促进大学、企业、研究机构发挥各自的能力优势，实现优势互补，加快推动技术产业化。因此，如何充分调动大学、企业、研究机构等各类创新主体的积极性与创造性，如何加快不同领域、不同行业以及创新链个环节间的技术融合与扩散，这对实现知识创造主体与技术创新主体间的深入合作与资源整合显得及其重要。本文将从我国产学研协同创新发展现状、存在的问题、对策建议三个方面对如何提升我国产学研协同创新能力进行探讨。 1我国产学研协同创新发展现状 1.1取得的成果 党的十五大报告首次明确提出“产学研”，随后在2006年国家颁布的《规划纲要》、2007年十七大报告、2012年十八大报告逐步确立了通过强化企业的创新主体地位，以市场为导向，构建产学研技术创新体系，不断增强国家自主创新能力建设。清华大学建校100周年胡锦涛总书记的讲话强调了产学研工作对人才培养、科学研究能力、服务经济社会发展的重要性，特别是高校在推动协同创新过程中起到的重要作用。在这一时代背景下，我国取得了相当的协同创新成功经验，例如中关村协同创新计划，它以产业链为基础，打造高新技术产业集群的企业标准联盟、技术联盟和产业联盟，引导和支持各类主体的协同创新活动，呈现出政府引导调控下外部需求驱动、参与各方内在利益驱动的两大运作模式。为进一步深化高校的机制体制改革，转变高校创新方式，我国于2012年5月7日推进“2011计划”，更使得国内一批高等院校从重大前瞻性科学问题、行业产业共性技术问题，及区域经济与社会发展的关键问题出发，发挥了高校多学科、多功能的综合优势，融合多渠道资源，为建设创新型国家作出积极贡献。目前我国共培育了167个协同创新中心，由高校牵头，联合了科研院所、行业企业、地方政府等优势资源，吸纳了超过200亿元的社会资金，其中14个中心成为首批国家协同创新中心，包括由北京大学、清华大学、中科院物理所等组成的量子物质科学协同创新中心，河南农业大学、河南工业大学、河南省农科院等组成的河南粮食作物
产学研协同创新发展现状及对策研究
产学研协同创新发展现状及对策研究 [摘要]产学研协同创新作为提升国家产业技术能力的基本途径，是创新体系建设中的重要内容。国家鼓励高校与科研机构、企业开展深度合作，推进产学研协同创新。本文以创新型国家建设为研究背景，以协同创新理论在产学研合作中的应用和发展为研究对象，介绍了协同创新理论，分析了产学研协同创新发展现状和当前存在的主要问题，并有针对性地提出了对策建议。 【关键词】产学研合作；协同创新；现状；对策建议 引言 产学研合作作为一种促进社会技术创新模式，综合了企业、高校和科研机构等单位的优势资源。通过产学研合作，可以促进高校院所科研成果转化、提高科研水平，带来经济和社会效益，同时促进高校院所、企业和地方政府等相关各方的协同创新和发展，提升全社会的创新创造能力。2006年，党中央、国务院作出了《关于实施科技规划纲要增强自主创新能力的决定》，国务院颁布实施《国家中长期科学和技术发展规划纲要（2006-2020年）》，明确提出，把建立以企业为主体、产学研结合的技术创新体系作为国家创新体系建设的突破口。此外，党的十七大报告明确指出，要“加快建立以企业为主体、市场为导向、产学研相结合的技术创新体系”。鉴于产学研合作涉及政、产、学、研、金、用等多个单元，必须多方协同并进，才能推动产学研协同创新，促进创新型国家建设。 一、协同创新理论介绍 协同创新（Collaborative Innovation）理论，美国麻省理工学院斯隆中心（MIT Sloan’s Center for Collective Intelligence）研究员彼得·葛洛（Peter Gloor）最早将其定义为“由自我激励的人员所组成的网络小组形成集体愿景，借助网络交流思路、信息及工作状况，合作实现共同的目标。”[1]国内以许庆瑞为首的浙江大学创新管理研究团队，先后采用理论推导、案例研究、统计实证等方法，以全面创新管理为中心，连续、系统地对协同创新进行了多角度、不断深入的研究，从技术、组织与文化的协同创新，技术—市场创新的协同与管理，企业技术与制度创新协同及其动态演化过程，技术与非技术要素协同创新，各创新要素全面协同程度与企业特质的关系等方面开展研究。 协同创新不同于原始创新的协调合作，有别于集成创新、引进消化再创新的产品技术要素整合，其本质是管理创新，打破部门、领域、行业、区域、国别界限，实现创新要素的最大限度整合。随着科技与经济结合的不断加速，协同创新重要性日益凸显，协同创新思想已经成为当今创新理论最重要的核心理念，协同创新理论已经发展成为一种新的“技术——经济”范式，主要表现拥有组织内部形成的知识分享机制，拥有共同的目标、内在动力，可以便捷地直接沟通；依靠现代信息技术构建资源平台；开展多方位交流和多样化合作[2]。
高校协同创新的现状与对策研究
高校协同创新的现状与对策研究 进入新世纪以来，创新逐渐成为经济社会发展的主要驱动力，特别是知识创新成为国家竞争力的核心要素。在这种大背景下，创新已经成为我国加快转变经济发展方式、推动科学发展、促进社会和谐的重要政策选择。但是，与发达国家相比，我国科学技术总体水平还有较大差距，体制机制还存在不少弊端，高校尚未完全实现其服务于国家，服务于人民，服务于科学，服务于地方，服务于行业，服务于企业的总体目标；企业尚未真正成为技术创新的主体，自主创新能力不强；各方面科技力量自成体系、分散重复，整体效率不高。因此，亟需加强协同创新，推动高校科技管理从研发管理转向创新管理，不断提升高校科技创新能力。 第一章高校协同创新的内涵 2011年4月24日，胡锦涛总书记在庆祝清华大学建校100周年大会上发表讲话，指出，推动经济社会又好又快发展，实现中华民族伟大复兴，科技是关键，人才是核心，教育是基础。着重阐述了“协同创新”的重要思想及其重要性，强调“创新能力提升”是提高高等教育质量的灵魂和关键。指出高等学校特别是研究型大学，既是高层次创新人才培养的重要基地，又是基础研究和高技术领域创新成果的重要源泉。要积极推动协同创新，要通过体制机制创新和政策项目引导，鼓励高校与科研机构、企业开展深度合作，建立协同创新的战略联盟，促进资源共享，联合开展重大科研项目攻关，在关键领域取得实质性成果，努力为建设创新型国家作出积极贡献。 协同创新（Collaborative Innovation）由美国麻省理工学院斯隆中心（MIT Sloan's Center for Collective Intelligence）的研究员彼得·葛洛（Peter Gloor）最早给出定义，即“由自我激励的人员所组成的网络小组形成集体愿景，借助网络交流思路、信息及工作状况，合作实现共同的目标”。高校协同创新是指高校内部各学科之间、不同高校各学科之间以及高校与科研机构和企业之间，高校教师、科研机构研究者、企业生产者以及管理者之间，围绕国家重大战略需求、重大科技项目、解决行业关键和共性技术以及生产实际中的重大问题，投入各自的优势资源和能力，在政府、科技服务中介机构、金融机构等相关主体的协同支持下，合作攻关，从而力求在科学研究、技术开发上取得重大进展和突破的创新活动。具体来说，在学科上，更注重多学科交叉荣融合；在社会发展上，科
协同创新运行机制探析
协同创新运行机制探析 ——基于高校创新主体的视角 摘要：通过协同创新内涵和要素等的综合分析，探讨高校主导的协同创新运行机制的基本内涵；分析我国高校主导的协同创新动力机制中在思想、利益分配方式和评价指标体系上存在的问题，以及高校协同创新内部跨学科研究和外部协同创新的几种具体运行方式的优缺点、特点及适用范围等；提出了完善高校主导的协同创新运行机制的对策建议。 关键词：协同创新，运行机制，创新人才培养，高校 胡锦涛总书记在清华大学百年校庆的讲话中，首次将协同创新提高到国家战略地位。讲话要求“积极推动协同创新，通过体制机制创新和政策项目引导，鼓励高校同科研机构、企业开展深度合作”。为落实胡锦涛总书记的指示，教育部、财政部联合启动实施“高等学校创新能力提升计划”（简称“2011计划”）。“2011计划”是继“211工程”、“985工程”之后，我国高等教育发展的又一重大战略部署，对积极推进政府、高校、科研院所、企业以及地区间的协同创新，对提高高等教育质量、建设世界一流大学、建设创新型国家等均具有重要战略意义。高等学校特别是研究型大学，既是高层次创新人才培养的重要基地，又是基础研究和高技术领域创新成果的重要源泉，是国家创新战略体系的重要组成部分。因此，深入研究高校主导的协同创新运行机制等相关问题，对于全面提高高等教育质量，贯彻落实高等学校创新能力提升计划，促进协同创新又好又快发展，尤其是推动高校主导的协同创新机制化、常态化等具有重要意义。 一、协同创新运行机制的基本内涵 协同创新的理论基础可追溯到协同学理论。协同学作为自组织领域的一个理论分支，发源于自组织又不同于自组织。自组织理论是探讨系统演化中协同过程和机理的理论，耗散结构理论、超循环理论和协同学是研究自组织过程的系统科