液相色谱柱的使用与维护

２００６年第３期分析仪器５３

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液相色谱柱的使用与维护

崔莹

（华东师范大学河口海岸学国家重点实验室，上海，２０００６２）

摘要色谱柱是液相色谱分离的核心部件。为了得到良好的分离效果和延长色谱柱的使用寿命，本文针对液相色谱柱使用过程中容易发生的问题，介绍液相色谱柱的正确使用和保养方法。

关键词液相色谱柱使用维护

１前言

液相色谱的分离原理是，在色谱柱流动相中样品的不同组分与固定相发生吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和等作用，由于作用力的大小、强弱不同，各种组分在固定相中滞留的时间也不同，因而先后从固定相中流出而得到分离。因此液相色谱分离的关键之一是色谱柱中的固定相。柱效的好坏直接影响目标化合物的分析和检测。但在液相色谱运行过程中，色谱柱极易发生问题，因此掌握正确使用和维护色谱柱的知识非常必要。

色谱柱使用过程中容易发生柱堵塞引起系统压力过高；柱效低引起峰拖尾、变宽；柱污染、损坏导致鬼峰等问题。引起这些问题的内在原因有：

（１）硅羟基的死吸附。色谱柱的基材硅胶粒子表面存在硅胶羟基。任何物质在色谱柱中都存在双分配效应，即在流动相与固定相之间进行分配，又在流动相与硅羟基之间进行分配。被分析物质被硅羟基吸附称为非特异性吸附，或称死吸附。当硅羟基对被分析物质的吸附趋近于饱和状态时，色谱柱柱效下降，峰形出现拖尾、变宽。

（２）重金属。色谱柱的基材硅胶粒子无论纯度多高，无论怎样处理，都会有不少于５×１０。６的重金属以金属氧化物的形式残存在硅胶粒子的表面，这些金属氧化物很容易与其它化合物形成螯合物，使其被氧化，产生不对称峰或拖尾峰。例如儿茶素和大多数中药，因含有多酚结构，极易被金属氧化物氧化，影响其分离效果。

（３）碳流失。固定相经长期使用，会有部分碳链被流动相洗脱下来，随流动相一起流出色谱柱外，造成碳流失。

（４）缓冲液中盐的析出。在做色谱分析时，有时流动相中会含有缓冲盐溶液。分析结束后，如果没有先用含一定配比的水相流动相冲洗，而直接用纯有机相冲洗，瞬间柱子中的微环境是高有机相、低水相。这时流动相中的缓冲盐溶液极易析出盐，将柱子堵塞，使柱压升高，柱效下降。

（５）色谱柱变干。如果对色谱柱保存不当，使色谱柱中的保存液全部挥发，柱子内部变干，造成色谱柱的损伤，影响分离效果。

２色谱柱的使用

新柱使用前应先检查产品包装、外观是否完好。认真阅读说明书及性能测试报告，了解新柱子的最佳性能指标，如某色谱条件下的柱压、柱效等。有时分析用的流动相与柱子的保存试剂不同，故在分析样品之前，应使用合适的试剂将柱子中的保存试剂清洗出来。要注意清洗用的流动相与保存溶剂的相

作者简介：崔莹，女，１９８０年２月出生，毕业于上海水产大学，获理学硕士学位，主要从事高效液相色谱检测技术的研究。

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