多糖检测方法

多糖的检测方法

关于多糖含量测定，业内有两种评价方法。

一种是狭义上严格的多糖测定，即水提取多糖后，以凝胶色谱柱分离、洗脱提纯粗多糖得到较单一分子量的多糖，再水解成各种单糖，以HPLC法分离测定各单糖，即可得到比较严格意义上的多糖含量及其组成。这种方法是科研级的多糖测定。

另一种评价方法一般是生产企业用于质控的多糖测定：一般过程是水提醇沉粗多糖后，以葡萄糖作为相比较的物质，加入特定显色剂后比色测定粗多糖的含量。注意，这种方法测得的是以葡萄糖作为折算的多糖含量。但这种评价方法简单实用，能反映一定的质量指标，作为质控之用可以的了。包括中国药典和一些国标、行标都采用此方法评价多糖含量，方法大同小异，如硫酸-苯酚法，硫酸-蒽酮法。但根据不少实际检验人的反映，要想检测结果有很好的重现性，还是有很多细节问题要注意的。

粗多糖测定

多糖的测定方法，目前有碱性酒石酸铜滴定法、比色法（蒽酮比色法、硫酸-苯酚法）。一般说来，比色法的优点是灵敏度高，样品用量少；但缺点是一般做常规检测时使用葡萄糖作标准品，误差较大，应以被测物的纯品作对照品，以求出换算因子，但要制备被测物的纯品并非每个实验室所能做到的，而且保健食品中往往是多种中草药的提取物作为原料而制成，所含多糖是不同相对分子量多糖的混合体，这就给提取纯品增加了难度。所以当成品中多糖含量大于1%（质量浓度）时，最好选用碱性酒石酸铜滴定。

滴定法

1.样品预处理

取本品适量，精密称定，置于250ml磨口烧瓶中，精密加水50ml，称定重量，置沸水

浴回流2小时，放置至室温，用水补足减失重量，混匀，滤过，精密吸取续滤液15ml于100ml 离心管中，加无水乙醇75ml，混匀，以4000r/min离心10min，并小心弃去上清液,再加15ml 热水(温度＞90℃)冲洗离心管中沉淀物,重复一次后再以4000r/min离心30min，弃去上清液，沉淀用乙醇液（水：乙醇=15：75）洗涤两次，离心，弃去洗涤液。

2.样品水解

将离心管中醇析物用50ml热水（温度＞90℃)少量多次转移至250ml磨口三角瓶中，加入15ml浓盐酸，开启冷凝管，在沸水浴中回流2h，冷却，先用40％的氢氧化钠（约15ml）粗调Ph值，后用稀的氢氧化钠溶液细调，再置于PH计上调整pH在6.8～7.2之间。将中和的酸解液移置至100ml容量瓶中，加水定容至刻度，摇匀,过滤，滤液供滴定用。

3.碱性酒石酸钾钠铜溶液标定

3.1精密吸取碱性酒石酸铜甲、乙液各5ml于150ml的锥形瓶中，加10ml蒸馏水及2

粒玻璃珠，用滴定管加入9.0ml葡萄糖标准溶液于锥形瓶中。

3.2将锥形瓶置电炉上迅速加热，务必在2分钟内至沸，并保持溶液在微沸状态下再用标准葡萄糖溶液滴定，以每2秒1滴的速度滴定至蓝色刚好褪去为终点，记录消耗葡萄糖标准溶液的总体积。同法平行操作三份，取其平均值（V1）。

3.3样品溶液预测和测定。

3.3.1 样品溶液的预测

精密吸取碱性酒石酸铜甲、乙液各5ml于150ml的锥形瓶中，精密加入10ml蒸馏水及2粒玻璃珠，控制在2分钟内加热至沸，保持溶液在微沸状态下以先快后慢的速度，从滴定管中滴加样品水解液液进行滴定，直至溶液蓝色刚好褪去为终点，记录葡萄糖标准溶液消耗体积。

3.3.2样品溶液的测定

精密吸取碱性酒石酸铜甲液与乙液各5.0ml，置于150ml锥形瓶中，精密加入蒸馏水10ml 及玻璃珠2粒，从滴定管滴加比预测体积少1ml的样品水解液，将锥形瓶置电炉上迅速加热，务必在2分钟内至沸，并保持溶液在微沸状态下再用样品水解液滴定，以每2秒1滴的速度滴定至蓝色刚好褪去为终点，记录消耗葡萄糖标准溶液的总体积。同法平行操作三份，得出平均消耗体积（V2）。

最后计算结果乘以0.9，此为葡萄糖换算成粗多糖的细数。

硫酸-苯酚比色法

1、方法提要

食品中相对分子质量>1×104的高分子物质在80%乙醇溶液中沉淀，与水溶液中单糖和低聚糖分离，用碱性二价铜试剂选择性地从其他高分子物质中沉淀具有葡聚糖结构的多糖，用苯酚-硫酸反应以碳水化合物形式比色测定其含量，其显色强度与粗多糖中葡聚糖的含量成正比，以此计算食品中粗多糖含量。方法原理：粗多糖在硫酸的作用下，水解成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，与苯酚缩合成有色化合物，用分光光度法测定样品在粗多糖含量。

2、主要仪器

（1）分光光度计；

（2）离心机（3000r/min）；

（3）旋转混匀器。

3、试剂

本方法所用试剂除特殊注明外，均为分析纯；所用水为去离子水或同等纯度蒸馏水。

（1）乙醇溶液（80%）：20mL水中加入无水乙醇80mL，混匀。

（2）氢氧化钠溶液（100g/L）：称取100g氢氧化钠，加水溶解并稀释至1L，加入固体无水硫酸钠至饱和，备用。

（3）铜试剂储备液：称取3.0gCuSO4?5H2O，30.0g柠檬酸钠，加水溶解并稀释至1L，混匀，备用。

（4）铜试剂溶液：取铜试剂储备液50mL，加水50mL，混匀后加入固体无水硫酸钠12.5g 并使其溶解。临用新配。

（5）洗涤剂：取水50mL，加入10mL铜试剂溶液、10mL氢氧化钠溶液，混匀。

（6）硫酸溶液（10%）：取100mL浓硫酸加入到800mL左右水中，混匀，冷却后稀释至1L。

（7）苯酚溶液（50g/L）：称取精制苯酚5.0g，加水溶解并稀释至100mL，混匀。溶液置冰箱中可保存1个月。

（8）葡聚糖标准储备液：准确称取相对分子质量5×105已干燥至恒重的葡聚糖标准品0.5000g，加水溶解，并定容至50mL，混匀，置冰箱中保存。此溶液1 mL含10.0mg葡聚糖。

（9）葡聚糖标准使用液：吸取葡聚糖标准储备液1.0mL，置于100mL容量瓶中，加水至刻度，混匀，置冰箱中保存。此溶液1mL含葡聚糖0.10mg。

4、测定步骤

（1）样品处理：

a、沉淀粗多糖：准确吸取液体样品5.0mL，置于50mL离心管中，加入无水乙醇20mL，混匀5min后，以3000r/min离心5min，弃去上清液，反复操作3~4次。残渣用水溶解并定容至5.0mL，混匀后，供沉淀葡聚糖。

b、沉淀葡聚糖：准确吸取b项终溶液2mL置于20mL离心管中，加入100g/L氢氧化钠溶液2.0mL铜试剂溶液2.0mL，沸水浴中煮沸2min，冷却，以3000r/min离心5min，弃去上清液。残渣用洗涤液数毫升洗涤，离心后弃去上清液，反复操作3次，残渣用10%（体积分数）硫酸溶液2.0mL溶液并转移至50mL容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀。此溶液为样品测定液。

（2）标准曲线的绘制：准确吸取葡聚糖标准使用液0、0.10、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00mL（相当于葡聚糖0、0.01、0.02、0.04、0.06、0.08、0.10mg）分别置于25mL比色管中，准确补充水至2.0mL，加入50g/L苯酚溶液1.0mL，在旋转混匀器上混匀，小心加入浓硫酸10.0mL，于旋转混匀器上小心混匀，置沸水浴中煮沸2min，冷却后用分光光度计在485nm波长处以试剂空白溶液为参比，1cm比色皿测定吸光度值。以葡聚糖浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。

（3）样品测定：准确吸取样品测定液2.0mL置于25ml比色管中，加入50g/L苯酚溶液1.0mL，在旋转混匀器上混匀，小心加入浓硫酸10.0mL于旋转混匀器上小心混匀，置沸水浴中煮沸2min，冷却至室温，用分光光度计在485nm波长处，以试剂空白为参比，1cm比色皿测定吸光度值。从标准曲线上查出葡聚糖含量，计算样品中粗多糖含量。同时做样品空白

实验。

5、结果计算

X= [(m1-m2)×V1×V3×V5]/[m3×V2×V4×V6]

式中

X—样品中粗多糖含量（以葡聚糖计）（mg/g）；m1—样品测定液中葡聚糖的质量（mg）；

m2—样品空白液中葡聚糖质量（mg）；m3—样品质量（g）；

V1 —样品提取液总体积（mL）；V2—沉淀粗多糖所用样品提取液体积（mL）；

V3 —粗多糖溶液体积（mL）；V4—沉淀葡聚糖所用粗多糖溶液体积（mL）；

V5—样品测定液总体积（mL）；V6—测定用样品测定溶液体积（mL）。

6、准确度与精密度在不同食品中进行不同浓度的加标回收实验，回收率为

87.8%~110.87%，不同实验室对同一样品进行10次测定结果的相对标准偏差为5.8%。

中药总多糖含量测定（苯酚-硫酸比色法）

供试品溶液的制备：①提取上清液：精密称取样品细粉2.2g（约相当于多糖0.22g），

置烧瓶中，加水100ml置电炉上加热回流提取1.5h，放冷至室温，3000～4000rpm离心10min，收集上清液，用少量水分次洗涤烧瓶及离心管，同样离心收集上清液。

②提取多糖沉淀：合并全部上清液置蒸发皿中，置电炉上小心加热（避免焦化）浓缩到约15ml，放冷至室温，加乙醇100ml，搅匀，放置使其沉淀15分钟。转移此溶液连同沉淀于离心管中，继续用少量80%乙醇以玻棒充分刮洗蒸发皿，洗液和沉淀同样转移至离心管中，以3000～4000rpm速度离心15min，弃去上清液，在离心管中加入少量80%乙醇，轻轻洗涤，同样离心弃去上清液（保留沉淀物）。

然后将离心管（连同沉淀物）于50℃烘箱挥干乙醇（不能见到任何液体），然后加热水溶解沉淀，转移至250ml量瓶中，继续用热水以玻棒充分刮洗离心管，洗液同样转移至250ml 量瓶中，放冷至室温，用水定容至刻度，摇匀，精密量取5ml置100ml量瓶中，用水定容

至刻度，摇匀即得供试品溶液。

标准曲线的制作：精密称取105℃干燥至恒重的无水葡萄糖适量，加水配制成0.85mg/ml 的贮备液。精密吸取1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 ml分别置于50ml量瓶中加水定容至刻度，摇匀得葡萄糖稀释液。再分别精密量取上述各稀释液2 ml置具塞试管中，同时精密量取水2.0 ml置另一具塞试管中，各管分别加5%苯酚溶液（新制）1 ml，摇匀，然后迅速加入浓硫酸5.0ml，立即摇匀，于40℃水浴中保温30min，取出，置冰水浴中5 min。以上述2.0ml水所制得的空白溶液做参比，于489nm波长处测定各溶液吸收度，以葡萄糖稀释液的浓度（μg/ml）为横坐标，吸收度为纵坐标，绘制标准曲线。备注：在准确度要求不很高时，可用对照品一点法代替标准曲线，即对照品只做一个点（精密取5.0ml葡萄糖贮备液稀释至100ml得葡萄糖稀释液，然后进行苯酚-硫酸反应，测定吸收度）。

样品测定：取供试品溶液2.0ml置具塞试管中，按“标准曲线的制作”项下同法加苯酚溶液和浓硫酸，测定吸收度。根据样品吸收度从标准曲线上读取葡萄糖浓度，再计算出样品中总多糖的含量（以葡萄糖计）。备注：如果采用对照品一点法，则根据吸收度比值计算样品中总多糖的含量。

多糖检测方法(保健品)

A.2 粗多糖的测量 A.2.1 方法 本方法参照《保健食品功效成分检测方法》（王光亚主编，中国轻工业出版社2002年出版）中“粗多糖的测定方法”中“（一）碱性酒石酸铜滴定法”制订。 A.2.2原理 样品中多糖经乙醇沉淀分离后，加酸、加热、回流水解成单糖，以次甲基蓝作指示剂，在加热条件下，滴定经标定过的碱性酒石酸钾钠铜溶液，根据样品液消耗体积，计算其含量。 A.2.3仪器与试剂 A.2.3.1全玻璃标准磨口回流装置(500ml)，水解用； A.2.3.2碱性酒石酸铜甲液 称取15g硫酸铜(CuSO4·5H2O)，及0.05g次甲基蓝，溶于水并稀释至1000ml。 A.2.3.3碱性酒石酸铜乙液 称取50g酒石酸钾钠及75g氢氧化钠，溶于水中，再加入4g亚铁氰化钾，完全溶解后，用水稀释至1000ml，储存于橡胶塞玻璃瓶内。 A.2.3.4葡萄糖标准溶液 准确称取1.0000g 经过98~100℃干燥至恒重的分析纯葡萄糖，加水溶解后，并以水稀释至1000ml此溶液1ml含1mg葡萄糖，现配现用。 A.2.4 操作方法 A.2.4.1 样品处理 准确称取均匀研碎的样品粉末2.0g，置于250ml的磨口烧瓶中，精密加入50ml水，称定重量，至沸水浴中加热回流2h，冷却至室温，用水补足减失重量，混匀，滤过，精密吸取续滤液15ml加75ml无水乙醇搅拌均匀，在离心机中以4000r/min离心10min，并小心弃去上清液，再加15ml热水（温度>90℃），冲洗离心瓶中沉淀物，重复一次后再以4000r/min离心30min，小心用吸管将上层液体吸去。 用离心瓶中醇析物用50ml热水（温度>90℃）少量多次转移至250ml磨口三角瓶中，加入15ml浓盐酸，开启冷凝管，在沸水浴中加热2h，冷却，然后先用40%的氢氧化钠溶液（约15ml）粗调pH值，后用稀的氢氧化钠溶液细调，再置于pH计上调整pH在6.8~7.2之间，（不要用pH试纸调）。将已中和的酸解

《枸杞多糖》行业标准简要编制说明

《枸杞多糖》行业标准简要编制说明 一、工作简况 （一）任务来源 根据工业和信息化部行业标准制修订计划（工信厅科[2014]114号），《枸杞多糖》列入2014年轻工行业标准计划，项目编号2014-0881T-QB，由全国食品发酵标准化中心提出并归口。主要起草单位：略；主要起草人：略。 （二）简要起草过程 标准任务下达后，中国食品发酵工业研究院针对制定枸杞多糖行业标准的具体工作进行了认真研究，确定了总体工作方案，于2015年2月发文征集起草单位并于同年5月组建了标准起草工作组，同时开展了相关技术资料的查询及收集。在上述工作的基础上，2015年6月，中国食品发酵工业研究院将拟定的标准草稿下发至各起草工作组成员。根据意见反馈情况，提出标准文本讨论一稿，并于2015年10月在北京召开标准研讨会，对标准中的技术指标、检测方法等内容进行了认真研究和讨论，会后形成标准文本讨论二稿。2015年12月～2016年1月完成样品征集、分发、测定及数据收集汇总工作。2015年4月，经进一步讨论沟通，起草组对标准中涉及的关键性技术内容达成共识，形成标准行业征求意见稿。 二、指标依据和对主要条款的说明 1 标准属性 本标准为推荐性标准 2 制标原则 a)确保食品安全； b)具有科学性、先进性和可操作性； c)结合国情和产品特点； d)与相关标准法规协调一致； e)促进行业健康发展与技术进步。 3 主要条款的说明 本标准规定了枸杞多糖的术语和定义、要求、试验方法、检验规则、标志、包装、运输及贮存，包括上述各部分内容以及范围、规范性引用文件等七个部分。各部分说明如下 （1）范围：描述了本标准的主要技术内容和适用情况。 （2）规范性引用文件：描述了本标准中引用的标准文件。 （3）术语和定义：对枸杞多糖进行了定义 （4）感官要求：根据本产品的实际性状，确定了本产品的感官指标描述。

(完整版)粗多糖的测定方法

粗多糖的测定方法(1) 1. 原理 分子量大于10，000道尔顿的多糖经80%乙醇沉淀后，加入碱性铜试剂，选择性地从其他高分子物质中沉淀出葡聚糖，沉淀部分与苯酚-H2SO4反应，生成有色物质，在485nm条件下，有色物质的吸光度值与葡聚糖浓度成正比。 2. 适用范围 参照AOAC方法。适用于检测含有分子量大于10，000道尔顿葡聚糖的样品。 3.仪器 （1）分光光度计 （2）离心机 （3）旋转混匀器 （4）恒温水浴锅 4.试剂 除特殊说明外，实验用水为蒸馏水，试剂为分析纯。 （1）80%乙醇：800ml无水乙醇加水200ml。 （2）2.5 mol/L NaOH溶液：100 g NaOH加蒸馏水稀释至1 L，加入固体无水硫酸钠至饱和。（3）铜贮存液：称取3.0 g CuSO4 ·5H2O，30.0 g柠檬酸钠加水溶解至1 L。溶液可贮存2周。 （4）铜应用溶液：取铜贮存液50 ml，加水50 ml混匀后加入无水硫酸钠12.5 g，临用新配。 （5）洗涤液：取水50 ml，加入10 ml铜应用溶液，10 ml 2.5 mol/L NaOH溶液，混匀。（6）1.8 mol/L H2SO4：取100ml浓硫酸用水稀释至1L。 （7）20 g/L苯酚溶液：称取2.0g苯酚，加水溶解并稀释至100ml，混匀备用。 （8）葡聚糖标准液：称取500mg葡聚糖（分子量500,000D）于称量皿中，105℃干燥4h 至恒重，置于装有干燥硅胶的干燥器中冷却。准确称取100mg干燥后的葡聚糖，用水定容至100ml，葡聚糖标准浓度为1.0 mg/ml。 （9）葡聚糖标准应用液：吸取葡聚糖标准液10ml，用水稀释10倍，葡聚糖终浓度为0.1mg/ml。 粗多糖的测定方法(2) 5. 操作方法 5.1 样品处理 （1）样品提取：称取样品1～5g，加水100ml，沸水浴加热2h，冷却至室温，定容至200ml （V1），混匀后过滤，弃初滤液，收集余下滤液。 （2）沉淀高分子物质：准确吸取上述滤液100ml （V2），置于烧杯中，加热浓缩至10ml，冷却后，加入无水乙醇40ml，将溶液转至离心管中以3000rpm离心5min，弃上清液，残渣用80%乙醇洗涤3次，残渣供沉淀葡聚糖之用。 （3）沉淀葡聚糖：上述残渣用水溶解，并定容至50ml （V3），混匀后过滤，弃初始滤液后，取滤液2.0ml （V4），加入2.5mol/L NaOH 2.0ml，Cu应用溶液2.0ml，沸水浴中煮沸2mim，冷却后以3000rpm离心5min，弃上清液，残渣用洗涤液洗涤3次，残渣供测定葡聚糖之用。 （4）测定葡聚糖：上述残渣用2.0mL 1.8mol/L H2SO4溶解，用水定容至100mL（V5）。准确吸取2.0ml（V6），置于25ml比色管中，加入1.0ml苯酚溶液，10ml浓硫酸，沸水浴煮沸2分钟，冷却比色。从标准曲线上查得相应含量，计算粗多糖含量。 5.2 标准曲线制备：

枸杞多糖分离纯化及性质研究

第25卷　第3期 2008年6月 黑龙江大学自然科学学报JOURNAL OF NAT URAL SC I E NCE OF HE I L ONGJ I A NG UN I V ERSI TY Vol 125No 13 June,2008 枸杞多糖分离纯化及性质研究 张　晶1,2,　韩喜江1,　李艳波2 (1.哈尔滨工业大学化学系,哈尔滨150001;2.哈尔滨学院生化学院,哈尔滨150080) 摘　要:对东北枸杞中提取的多糖,通过DEAE -cellul ose (OH -)色谱柱和Sephadex G -100 凝胶色谱柱进行了分离纯化,通过凝胶色谱和液相色谱对其纯度进行了鉴定,并通过红外光谱初步分析了其基团构成。 关键词:枸杞多糖;分离纯化;纯度鉴定 中图分类号:R28412,TS244文献标志码:A 文章编号:1001-7011(2008)03-0377-04 收稿日期:2008-01-16 作者简介:张　晶(1973-),女,实验师,硕士,主要研究方向:应用化学、食品化学 0　引　言 枸杞是一种食药两用植物,具有多种药理作用和生理功能。枸杞多糖是枸杞中的主要活性成分之一,其中有关枸杞多糖的化学、药理与临床研究十分瞩目,已有不少研究报道枸杞多糖具有增强免疫力、抗癌、防衰 老、抗疲劳、降血压、降血糖、抑制肿瘤生长和细胞突变等作用[1-2]。鉴于枸杞多糖具有多种药理作用和生理 功能,因此,对其提取分离方法及纯化的研究显得尤为重要[3]。本文重点对牡丹江地区枸杞多糖的分离纯 化及组成结构作了初步探讨。 1　实验材料和方法 111　材料与仪器 牡丹江地区枸杞子;其它试剂均为分析纯。自动部分收集器,台式干燥箱,紫外分光光度计,Perkin -El 2mer 红外光谱仪,Aglilent 1100液相色谱仪等。 112　枸杞多糖提取 称取100g 枸杞子60℃烘干,放置干燥器18h 后粉碎,称取10g 干燥的枸杞粉,用氯仿-甲醇(2∶1)300mL,用索氏回流装置于60℃回流脱脂。残渣风干后,加入适量水,在100℃,料水比1∶15条件下水浴提取4h,抽滤,将滤液蒸发浓缩为原体积的1/4后,将浓缩液滴入3倍体积的95%乙醇中,静置,抽滤,固形物 分别用95%乙醇、无水乙醇、丙酮洗涤,水浴加热干燥得枸杞粗多糖[4]。 113　枸杞多糖分离纯化 11311　DEAE -cellul ose (OH -)色谱柱层析 将分离提取的枸杞粗多糖110g 溶于水,上DEAE -cellul ose (OH -)色谱柱,梯度洗脱法洗脱各级分,洗 脱液分别为蒸馏水、011mo1?L -1,0125mol ?L -1和015mol ?L -1NaCl,011mol ?L -1Na OH 各100mL,流 速为30滴每分钟,自动部分收集器收集洗脱液,将收集到的样品溶液分别在280nm 波长下比色,然后用硫 酸一蒽酮法测定总糖含量。以试管数目为横坐标,以吸光度为纵坐标作DE AE -cellul ose (OH -)色谱柱洗脱 曲线图。分别合并各主峰溶液,浓缩,流水透析,冷冻干燥,得LBP -1,LBP -2,LBP -3和LBP -4.11312　Sephadex G -100凝胶色谱柱。 收集多糖含量最多的组分,进行凝胶色谱分离。流速为013mL ?m in -1,每支试管接收3mL 洗脱液,硫 酸一蒽酮法检测多糖洗脱状况。以洗脱管数为横坐标,吸光值为纵坐标作流出曲线,合并主峰溶液,浓缩,流水透析,冷冻干燥。

枸杞子中多糖含量的测定(1)

枸杞子中多糖含量的测定 柳婷，胡浩斌 (陇东学院化学化工学院，甘肃庆阳745000) 摘要：本文是用分光光度法测定枸杞子中的含糖量[1]。先用80%乙醇提取以除去单糖、低聚糖、生物碱等干扰成分，然后用蒸馏水提取其中所含的多糖类成分。多糖在硫酸作用下，水解成单糖，并迅速脱水生成糠醛衍生物，与苯酚缩合成有色化合物。用紫外分光光度法[2]测定其枸杞子多糖含量，本法简便，显色稳定，灵敏度高重现性好。 关键词:枸杞子；多糖；紫外分光光度计 Detection of Polysaccharide in Lycium barbarum Liu Ting, Hu Hao-Bin (College of Chemistry & Chemical Engineering, Longdong University, Qingyang 74500, China) Abstract:This paper is utilized spectrophotometry to detect Polysaccharide in Lycium barbarum..First,use 80% ethanol to remove simple sugars, oligosaccharides, alkaloids etc interference ingredients, and then extracted the ingredients. Of polysaccharose with distilled water. In Sulfuric acid condition, polysaccharide hydrolysis into monosaccharides, and rapidly dehydrated to furfural derivatives, then condense with phenol into colored compounds. Using spectrophotometry to detect polysaccharide in Lycium barbarum,the method is simple, color stability, high sensitivity and good reproducibility. Key words:Lycium barbarum; polysaccharose; spectrophotometry 枸杞子（Lycium barbarum是我国传统的中药材和重要经济作物，性状呈类纺锤形，略扁，长6～21 mm,直径3～10 mm。表面鲜红色或暗红色，顶端有小凸起状的花柱痕，基部有白色的果梗痕，果皮柔韧，皱缩，果肉肉质，柔润而有粘性，种子多数，类肾形，无臭，味甜，微酸，具有滋肾补肝、润肺明目等功能。 近年来，人们对枸杞子的药理作用进行了深人研究，发现枸杞子能增强机体免疫力[3]、抗肿瘤、抗辐射[4]、抗疲劳[5]、防衰老、增加造血功能等。临床医学研究还表明，枸杞子对糖尿病[6]、高血压[7]、视神经萎缩、肾炎、肝炎[8]等有显著疗效。对于枸杞子的上述功能的重要作用因子，一般认为与枸杞子中存在的枸杞多糖有关。因此，开始研究枸杞多糖，测定枸杞多糖的含量就显的非常重要。 鉴于枸杞多糖的分离纯化[9]困难,有关结构性质方面的研究报道甚少,枸杞多糖的生理活性,还必需从分离纯化、结构特征及药理作用3方面展开深入研究。这样,医学临床应用与保健型枸杞饮品[10]的开发才有坚实的理论基础。本试验主要完成枸杞多糖的分离与提纯，并对

灵芝多糖检测方法

灵芝多糖检测方法 1、蒽酮-硫酸法 该法为《中国人民共和国药典》规定方法，其原理是糖类遇浓硫酸脱水生成糠醛或其衍生物，可与蒽酮试剂缩合而显色，其显色的深浅与灵芝多糖含量呈线性关系。 【对照品溶液的制备】精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖对照品适量，加水制成每1ml含0.1mg的溶液，即得。 【标准曲线的制备】分布精密吸取对照品溶液0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml、和1.2ml，置于10ml具塞试管中，加水至2.0ml，精密加入硫酸蒽酮溶液（精密称取蒽酮0.1g，加80%的硫酸溶液100ml使溶解、摇匀）6ml，摇匀，置水浴中加热15分钟，取出，放入冰浴中冷却15分钟，以相应的试剂为白色，在紫外-可见分光光度计上，于625nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。 【供试品溶液的制备】精确称定灵芝粉末1g，置蒸馏瓶中，加水40ml，沸水回流提取1小时，重复1次，两次提取液均转移至100ml容量瓶中，定容，摇匀。取40ml加200ml无水乙醇沉淀，过夜。4000rpm离心20分钟。沉淀定容至50ml，摇匀。 【样品测定】精确量取供试品溶液2ml，置10ml具塞试管中，照标准曲线制备项下的方法，自“精密加入硫酸蒽酮溶液6ml”起，依法测定吸光度。 【换算因子的测定】精密称取GL-pp10.3mg与10.4mg，分别置于100ml 容量瓶中加蒸馏水定容至刻度，作为多糖供试液。精密吸取2ml，按照标准曲线项下的方法测定吸光度，计算出多糖溶液中葡萄糖含量的平均值，并计算出换算因子：f=W/CD，式中W为多糖量（ug），C为多糖溶液中葡萄糖含量，D 为多糖的稀释因素。 测定结果为f=2.0428（n=6） 【计算】S=f×n/N×100% S—灵芝子实体中多糖百分含量； n—从标准曲线上读出供试品溶液中多糖浓度（以标准葡萄糖计）； N—供试品溶液浓度； f—换算因子； 2、苯酚-硫酸法

枸杞子多糖含量的测定实验报告

竭诚为您提供优质文档/双击可除枸杞子多糖含量的测定实验报告 篇一：实验三多糖含量的测定 实验三多糖含量的测定 一、实验目的 1、分光光度法测多糖的原理和方法 2、用officeexcel作标准曲线 二、仪器与试剂 1、仪器：7200分光光度计、水浴锅、电子天平 2、试剂：1水葡萄糖、5%苯酚溶液、浓h2so4、dh2o 3、器皿：50ml容量瓶、10ml量筒、玻棒、洗耳球、烧杯、试管 三、步骤 1、标准曲线的绘制 ①取1水葡萄糖0.551g于50ml容量瓶，加入蒸馏水溶解并小心稀释至刻度，再取5ml于50ml容量瓶，加蒸馏水稀释,即1.0mg/ml。 ②分别量取0.25ml,0.5ml,1.0ml,1.5ml,2.0ml,2.5ml

分别置于已编号的50ml容量瓶，加蒸馏水定容。 ③分别吸取上述溶液各2.0ml,再加入5%苯酚1ml,摇匀后迅速加入5ml浓h2so4，摇匀后，室温5min，90oc水浴15min，冷却至室温。 空白对照：2ml蒸馏水+1ml5%苯酚+5ml浓硫酸 吸光度A得浓度c与吸光度的线性方程y=ax+b ④准确量取多糖溶液（待测）2.0ml于50ml容量瓶中，加蒸馏水定容，方法同上述。 四结果 ①计算浓度（待测液） 本组所测得多糖溶液（待测）的吸光度为的0.385，代入根据吸光度A得浓度c与吸光度的线性方程 y=14.255x+0.0309，可得待测液的浓度为 0.025*25=0.625mg/ml.。②实验主要步骤（记录） 步骤记录： Ⅰ首先配制浓度分别为0.005mg/ml、0.01mg/ml、 0.02mg/ml、0.03mg/ml、0.04mg/ml、0.05mg/ml的葡萄糖溶液；然后取配好的溶液各2.0ml,再加入5%苯酚1ml,摇匀后迅速加入5ml浓h2so4，；不断震荡，溶液逐渐变为褐色，放出热量，且随着葡萄糖浓度的增加，溶液的颜色也不断变深；室温5min，90oc水浴15min，反应更为充分，溶液颜色有稍微加深，冷却至室温；最后用7200分光光度计一一测量其

蒽酮-硫酸比色法测定多糖含量

蒽酮-硫酸比色法测定多糖含量 一. 实验原理 糖类在较高温度下可被浓硫酸作用而脱水生成糠醛或羟甲基糖醛后，与蒽酮(C14H10O)脱水缩合，形成糠醛的衍生物呈蓝绿色。该物质在620 nm处有最大吸收，在150 μg/mL范围内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。该法有很高的灵敏度，糖含量在30 μg左右就能进行测定。 二. 试剂器材 蒽酮试剂：精密称取0.1g蒽酮，加80%浓H2SO4100 mL使溶解，摇匀。当日配制使用； 葡萄糖标准液：将无水葡萄糖置于五氧化二磷干燥器中，12hr后精密称取100mg，用蒸馏水定容至100ml； 其他器材：分析天平、分光光度计、容量瓶(100ml、50ml、10ml)、烧杯、具塞试管、移液器、移液器吸头、涡旋振荡器和废液缸等。 三. 操作步骤 葡萄糖标准曲线的制作 取7支具塞试管，按下表数据精密配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液，每个浓度做2-3个重复： 管号0 1 2 3 4 5 6 标准葡萄糖溶液/mL 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 蒸馏水/mL 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 0.8 在每支试管中立即加入蒽酮试剂6mL，振荡混匀，各管加完后一起置于沸水浴中加热15min。取出，迅速浸于冰水浴中冷却15min。 在625nm波长下以第1管为空白，迅速测定其余各管吸光值。

以标准葡萄糖含量( g)为横坐标，以吸光值为纵坐标，绘制标准曲线。 样品的测定 将样品溶液糖浓度调整到测定范围，精确吸取2mL置于干燥洁净试管中，在每支试管中立即加入蒽酮试剂6mL，振荡混匀，各管加完后一起置于沸水浴中加热15min。取出，迅速浸于冰水浴中冷却15min，每个浓度做2-3个重复。 在625nm波长下迅速测定各管吸光值。根据葡萄糖含量的标准曲线，由样品溶液吸光值计算各样品溶液中糖的浓度，并计算其糖含量。 四. 注意事项 该法的特点是几乎可测定所有的碳水化合物，不但可测定戊糖与已糖，且可测所有寡糖类和多糖类，包括淀粉、纤维素等（因为反应液中的浓硫酸可把多糖水解成单糖而发生反应），所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。 在没有必要细致划分各种碳水化合物的情况下，用蒽酮法可以一次测出总量，省去许多麻烦，因此，有特殊的应用价值，但在测定水溶性碳水化合物时，则应注意切勿将样品的未溶解残渣加入反应液中，否则会因为细胞壁中的纤维素、半纤维素等与蒽酮试剂发生反应而增加了测定误差。 不同的糖类与蒽酮试剂的显色深度不同，果糖显色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖较浅，五碳糖显色更浅，故测定糖的混合物时，常因不同糖类的比例不同造成误差，但测定单一糖类时则可避免此种误差。

多糖化学结构鉴定方案总结..-共22页

经过分级纯化的多糖在测定结构前须检查其纯度及测定分子量。 检查纯度最常用的判断方法： （1）用G C 、HPLC测定组成多糖的单糖的摩尔比是否恒定。 用不同的柱型测定结果更为可靠。 （2）电泳只出现一条带。 如可用聚丙烯酰胺凝胶电泳、乙酸纤维素薄膜电泳及玻璃纤维纸电泳。对于中性多糖可采用高压电泳，以硼酸盐为缓冲液，可增大其迁移速度。 （3）凝胶柱层析图呈现对称的单峰。若有“拖尾”现象，说明其均一性不够好。 阴离子交换层析纯化 用DEAE一纤维素52(2.6x100cm)柱层析,0.lmol/LNaCl洗脱,流速6ml/h,按2ml一管分部收集,苯酚一硫酸法逐管检测,绘制收集体积与糖含量之间的关系曲线。看是否有单一对称峰。 按照Ye等报道,采用DEAE一52一纤维素交换柱层析法(2.6x30cm)对鲍氏层孔菌菌丝体粗多糖进行初步分离。DEAE一纤维素凝胶预处理:称取DEAE一52一纤维素凝胶干粉,加入约10倍体积质量比(ml/g)的0.5mol/LNa0H溶液浸泡30分钟,倒出上清液,用大量去离子水反复浸洗至pH值近中性;再用相同体积的0.5mol/LHCI溶液浸泡30分钟,倒出上清液,用大量去离子水反复浸洗至pH值近中性;最后用相同体积的0.5mol/lNaOH溶液再浸泡30分钟,用大量去离子水反复浸洗至pH值中性。处理完毕后,进行湿法装柱,用去离子水0.5mol/LNaCl溶液,去离子水依次分别平衡(流速1.0ml/min)2一3个柱体积备用. 糖样100mg溶于5ml的去离子水中,离心除去不溶物,上样于DEAE一52一纤维素阴离子层析柱(2.6x30cm,Cl-1型),分别采用去离子水0.1和0.3mol/LNaCI溶液进行分段梯度洗脱,流速1.0ml/min,自动收集器分部收集(10ml/管),每梯度20管。用硫酸一苯酚法跟踪检测各管多糖含量(490nm处吸收值),以收集的管数为横坐标。吸光值(490nm)为纵坐标绘制DEAE 一52一纤维素色谱柱洗脱曲线。依据洗脱峰型,合并相同组分,50℃旋转蒸发浓缩,对去离子水透析48h以去除NaCI及小分子杂质,最后将透析内液冷冻干燥,得初步纯化产品。 初步纯化多糖得率计算公式: 多糖得率(%)=纯化多糖质量/粗多糖质量x100% 葡聚糖凝胶层析纯化 采用Sephadex G-100凝胶层析法对DEAE-52一纤维素初步纯化的不同组分的多糖样品进一步纯化。葡聚糖凝胶(sephadexG一100)的预处理:称取sephadexG一100凝胶干粉,加入30倍体积质量比(ml/g )的去离子水,沸水浴5小时使其溶胀。冷却后用去离子水反复浸洗,减压脱气后进行湿法装柱,用0.1MNa2SO4;溶液平衡(流速0.25ml/min)2一3个柱体积备用。

枸杞多糖的生化和降血糖活性讲解

枸杞多糖的生化分析和降血糖活性 摘要：本实验研究了枸杞多糖的纯化，表性特征和降血糖活性。通过超滤膜分离获得水溶性多糖（LBP），并通过DEAE纤维素柱和Sephadex的色谱法进一步纯化G-150得到LBP3a和LBP3b。分析表明LBP3b的平均分子量（Mw）为4.92kDa。单糖组成分析显示，LBP3b由摩尔比为5.52：5.11：28.06：1.00：1.70的甘露糖，鼠李糖，葡萄糖，半乳糖和木糖组成。并通过UV，FTIR，NMR和SEM研究了LBP3b的初步结构特征。体外细胞实验显示，LBP3b以剂量依赖的方式显著抑制葡萄糖的吸收。研究表明LBP3b具有作为抗糖尿病药物的潜在用途。 1.引言 糖尿病（DM）是指具有异常高水平的血糖的慢性代谢病，已经成为世界上主要的健康问题。它是由胰岛素分泌缺乏或器官对胰岛素的反应减弱引起的。包括1型和2型在内的DM在全球发病率急剧增加，到2030年估计超过4亿。许多口服降糖药，如双胍类和磺酰脲类可用于治疗糖尿病，但这些药物是化学合成的，缺乏多剂量方案，且高成本，具有不良副作用和毒性。因此，研究和发现新型更安全和更有效的替代品是至关重要的，其中传统的食用和药用资源已成为研究低血糖活性的焦点]。 枸杞，属于茄科，是中国著名的草药，已使用了2300多年。目前，枸杞受欢迎的功能食品已被广泛使用，其具有很大功效，如减少血糖和血清脂质，滋养眼睛，肾脏和肝脏，抗辐射，提高免疫力，抗衰老，抗癌，抗疲劳，增强血细胞生成，改善男性不育。据报道，枸杞果干中有胡萝卜素，氨基酸，微量矿物质，维生素，脂肪酸，多糖和甜菜碱与健康相关的生物活性成分。 在枸杞的这些化学成分中，最好研究的组分是水溶性的多糖（LBP）估计占干果的5-8％。许多关于药理学和光化学的研究已经证明LBP是以上的生物活性的主要成分之一[15-17]。然而，由于LBP的结构复杂性，不同的提取和纯化方法得到的LBP具有不同组分，结构和功能。而每种LBP的结构和功能从未进行过全面和深入的讨论。

粗多糖含量测定方法学验证

粗多糖含量测定方法学研究资料 一、仪器与试药 (1) 二、方法的研究 (2) 1.检测波长的测定 (2) 2.样品及对照制备方法 (2) 三、方法学验证 (3) 1.线性 (3) 2.精密度实验 (4) 3.稳定性实验 (4) 4.重复性试验 (5) 5.中间精密度实验 (5) 6.准确度试验 (6)

芪参颗粒粗多糖含量测定方法起草说明 标志性成分粗多糖含量测定的方法来源于《保健食品功效成分检测方法》白鸿主编（中国中医药出版社)的第二法，该方法的原理是：多糖经乙醇沉淀分离后，去除其他可溶性糖及杂质的干扰，糖与硫酸在沸水浴中加热脱水生成羟甲基呋喃甲醛（羟甲基呋喃糠醛），再与蒽酮缩合成蓝绿色化合物，其显色强度与溶液中糖的浓度成正比，在625nm波长下比色测定。 主要研究资料如下： 一、仪器与试药 1、仪器 (1) 离心机（湘南湘仪实验室仪器开发有限公司，型号TD25-WS）； (2) 离心管：50ml； (3) 水浴锅（上海精宏实验设备有限公司，型号 DK-S26）； (4) 旋涡混合器（DioCote，SA8）； (5) SHIMADZU UV-1800 紫外可见光分光光度计； (6) JB760-68 石英比色皿（宜兴市伟鑫仪器有限公司）； (7) TU-1901 双光束紫外可见光分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）； 2、试药 (1) 葡萄糖：广州化学试剂厂，分析纯，批号为-1； (2) 无水乙醇：西陇化学股份有限公司，分析纯，批号为160802 1； (3) 蒽酮：国药集团化学试剂有限公司，分析纯，批号为； (4) 硫酸：广州化学试剂厂，分析纯，批号为-1； (5) 葡萄糖标准液：标准称取干燥恒重的分析纯级葡萄糖，加水溶解，并定容至50ml，此溶液1ml含10mg葡萄糖，用前稀释100倍为使用液（ml）。 (6) %蒽酮硫酸溶液（W/V）：准确称取蒽酮置于烧杯中，缓缓加入100ml 80%硫酸溶解，溶解后呈黄色透明溶液。现用现配。 3、试样

多糖的测定

第九章多糖的测定 第一节淀粉的测定 ●一、测定淀粉含量对于决定用途具有重要意义： ●1、淀粉是供给人体热量的主要来源。 ●2、淀粉在食品中的作用是作为增稠剂、胶体生成剂、保潮剂、乳化剂、粘合剂等。 ●二、淀粉的测定方法： ●（一）淀粉的物理检验法：淀粉因其品种不同，淀粉的大小和形状也不同。用显微 镜分析法可鉴别不同品种的淀粉。 ●（二）淀粉含量的测定方法： ●1、酶水解法： ●（1）概念：淀粉用麦芽淀粉酶水解成二糖，再用酸将二糖水解为单糖，然后测定由 水解所得到的单糖。（还原糖） ●（2）常用于液化的淀粉酶是麦芽淀粉酶。它是?—淀粉酶和?—淀粉酶的混合物。 ●（3）酸直接水解法：淀粉的测定方法也可采用酸直接水解法，但酸水解法不仅是淀 粉水解，而且也能分解半纤维素，结果产生了具有还原力的木糖、阿拉伯糖等单糖，使淀粉测定所得的结果较实际含量偏高。 ●（4）酶水解法的优点：在一定条件下，用?—淀粉酶处理样品，则能使淀粉与半纤 维素等某些多糖分开来。因为?—淀粉酶具有严格的选择性，它只使淀粉液化变成低分子糊精和可溶性糖分，而对半纤维素不起作用。在用?—淀粉酶液化淀粉除去半纤维素等不溶性残留物后，再用酸水解使生成葡萄糖，所得结果比较准确。这种酶水解作用，叫作选择性水解。 ●（5）酶水解法测定淀粉的具体步骤： ●a:样品的处理：将磨碎样品置漏斗中，用乙醚50ml分数次洗涤，除去脂肪，再用10% 乙醇洗去可溶性糖分，先5次。 ●b:酶水解：将滤纸上残留物用水移至烧杯内，水浴加热直到淀粉糊化。冷却至60℃， 加麦芽汁20ml在60℃保温1小时，再重复加热冷却，保温冷却过滤，将滤液定容250ml。 ●c:酸水解，吸取滤液加入1：4硫酸，放在120—130℃油浴中保持沸腾5—6min用 40%NaOH 滴定至碱性。 ●d:用非林氏试剂测定葡萄糖含量，同时做空白试验。 ●e:计算：淀粉=[（A-B）*0.9*100]/[W*(50/250)*(V/100)*100] A:样品中淀粉相当于还原糖重量（mg) B:空白相当于还原糖的重量0.9：还原糖换算为淀粉因数 V/100：样液酸解后稀释100ml取Vml W：样品重量（g） 第二节纤维的测定 ●植物性食品内含有粗纤维，它集中存在于谷类的麸、糠、果蔬的表皮及其纤维样组 织之中。从现代营养学的观点来看，我们膳食中每天需要摄入一定数量的纤维（称为膳食纤维），它可防止包括阑尾炎、心脏病和结肠癌等多种疾病，所以，深入了解膳食纤维的特性及其分析方法更具有迫切的现实意义。此外，粗纤维的含量是果蔬制品的一项质量指标，借此可以鉴定果蔬的鲜嫩度。例如：青豌豆按其鲜嫩程度分为三级，其粗纤维含量分别为：一级1.8%左右，二级2.2%左右，三级2.5%左右。 ●一、概念： ●粗纤维：指动物饲料中那些对稀酸、稀碱难溶的，家畜（特别是反刍动物）不容易

枸杞多糖提取论文

第一章综述 1前言 1.1枸杞 1.1.1枸杞的自然属性 枸杞(Lycium barbarum)别名苟起子、甜菜子、地骨子等，是茄科植物枸杞(Lycium chinense Miller)的成熟果实。是我国重要的药用植物资源，是我国受原产地保护的药食两用的药材和传统出口创汇产品。早在2000多年前，人们已经开始了对枸杞的利用。《诗经》记载“陟彼北山，言采其杞”。宋?苏轼《小圃?五咏》赞枸杞曰“根茎与花实，收拾无弃物”。《本草纲目》中记：“久服杞子，坚筋骨，轻身不老，耐寒暑”。《本草汇言》记“枸杞能使气可充，血可补，阳可生，阴可长，火可降，风湿可去，有十全之妙焉”。《保寿堂方》载“春枸杞叶，名天精草；夏采花，名长生草；秋采子，名枸杞子；冬采根，名地骨皮”。根据《郭案驼种树书》记载，大约在1200多年前，我国就开始栽种枸杞了。此外，《神农本草经》、《食疗本草》、《本草纲目》和《本草备要》等古书中都有关于枸杞的记载。 枸杞具有滋补肝肾,益精明目的作用。作为我国常用中药，枸杞被广泛应用于临床，主治肝肾阴亏，头晕目眩，腰膝酸软，消渴遗精，目昏多泪，虚劳咳嗽。枸杞子又作为“药食同源”的植物性平补保健食品，被广泛用于泡酒、泡茶、泡水、煲汤、煮粥等。大量研究表明枸杞中含有多种可被利用的生物活性成分，其中最具有提取利用价值的是枸杞多糖，其次是枸杞色素和枸杞籽油。 枸杞的生长状况 枸杞属约有80个种，多数分布在南、北美洲。以美国的亚利桑娜州和阿根廷形成两个分布中心，南美洲种类最多。欧亚大陆约有10个种。约在17世纪中叶引到法国，后来在欧洲，地中海国家，韩国以及北美洲国家都有栽种。我国有7个种和3个变种，多数分布在西北和华北。目前我国人工栽培的构祀有宁夏枸杞及北方枸杞。枸杞原产我国北方，河北、内蒙古、山西、陕西、甘肃、宁夏、新疆和青海等省都有野生，而中心分布区域在甘肃河西走廊、青海柴达木盆地以及青海至山西的黄河沿岸地带。常生于土层深厚的沟岸、山坡、田埂和宅旁。据统计我国枸杞种植区面积已经由1996年的45万亩迅速增加到100万亩，年产量达3000万公斤以上，其中新疆、宁夏、内蒙古、河北等省地区的枸杞种植面积和产量居全国前列。有500多年栽培历史的宁夏，所产枸杞以粒大、皮薄、肉厚、营养丰富、药用价值高而享誉国内外，远销港澳、东南亚、西欧及北美等地区和国家。2001年，宁夏省枸杞种植面积达25万亩，占全国枸杞种植面积的17%，年产量达115.5万公斤，全区枸杞干果产量和出口量分别占全

粗多糖检测方法(葡萄糖)

多糖的检测方法 粗多糖的苯酚-硫酸分光光度测定法 1.方法提要 多糖经乙醇沉淀分离后，去除其他可溶性糖及杂质的干扰，再与苯酚- 硫酸作用成橙红色化合物，其呈色强度与溶液中糖的浓度成正比，在485nm波长下比色定量。 2.仪器 （1）离心机：4000r/min。 （2）离心管：50ml或具塞15ml。 （3）分光光度计。 （4）水浴锅。 （5）旋涡混合器。 3.试剂 实验用水为双蒸水，所用试剂为分析纯级。 (1) 无水乙醇。 (2) 80%（v/v）乙醇溶液。 (3) 葡萄糖标准液：准确称取干燥恒重的分析纯葡萄糖0.5000g加水溶解，并定容至50ml，此溶液1ml含10mg葡萄糖，用前稀释100倍为使用液（0.1mg/ml）。 (4) 5%苯酚溶液（W/V）：称取精制苯酚5.0g，加水溶解并稀释至100ml，混匀。溶液置冰箱中可保存1个月。 (5) 浓硫酸（比重1.84）。 (6) 0.2mol/L磷酸盐缓冲液（pH6.5）：31.5ml（0.2mol/L）磷酸氢二钠与68.5ml（0.2mol/L）磷酸二氢钠混合。 4.测定步骤 （1）样品提取：称取混合均匀的固体样品1.0~2.0g，置于100ml容量瓶中，加水80ml 左右，于沸水浴中加热1小时（如保健食品添加的已是多糖提取物，则加热15min），冷却至室温后补加水至刻度（v1）,混匀后过滤，弃去初滤液，收集余下滤液供沉淀粗多糖。 (2)沉淀粗多糖：准确吸取上滤液（或液体样品）5.0ml（V2），置于50ml离心管中（或2.0ml于15ml具塞离心管中），加入无水乙醇20ml（或8ml），混匀，于4℃冰箱静置4小时以上，以4000r/min离心5min，弃去上清液，残渣用80%（V/V）乙醇溶液数毫升洗涤，离心后弃去上清液，反复操作3次。残渣用水溶解并定容至10~25ml（V3）（根据糖浓度而定）。 (3)标准曲线的绘制：准确吸取葡萄糖标准使用液0ml、0.10ml、0.20ml、0.40ml、0.60ml、0.80ml、1.00ml（相当于葡萄糖0mg、0.01mg、0.02mg、0.04mg、0.06mg、0.08mg、0.10mg）置于25ml比色管中，补加水至2.0ml，加入5%苯酚溶液1.0ml，在旋涡混合器上混匀，小心加入浓硫酸10ml，在旋涡混合器上小心混匀，置沸水浴中2min，冷却至室温，用分光光度计在485nm波长处以试剂空白为参比，1cm比色皿测定吸光度值。以葡萄糖质量为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。 (4)样品测定：准确吸取上液适量（V4）（含糖0.02~0.08mg）置于25ml比色管中，补加水至2.0ml，然后按（3）法测定吸光度值。从标准曲线上查出葡萄糖含量，计算样品中粗多糖含量。

枸杞多糖含量的准确检测

申请科研资助项目申报书 项目或课题名称：枸杞多糖含量的准确检测 申请单位：宁夏瑞碧枸杞产业有限公司 联系者姓名： 联系者电话： 宁夏瑞碧枸杞产业有限公司 二00八年二月

一、申请单位的基本情况： 宁夏瑞碧枸杞产业有限公司是由陕西方舟健康产业集团投资，以枸杞汁﹑枸杞干果﹑枸杞冻干粉﹑枸杞提取物等枸杞系列产品为主的专业供应商。目前，公司在宁夏枸杞原汁产业中属龙头企业。公司注册资本1800万，员工63人，与南梁农场等通过有机认证的基地建立了稳定的鲜果原料供应关系，并建成目前国内最大的枸杞原汁加工线，每榨季产量可达2000吨以上。公司严抓质量管理，已通过ISO 认证﹑HACCP认证及Kosher认证。 为加强公司技术力量，我们先后与中国科学院上海有机化学研究所、陕西师范大学生命科学院﹑北京食品研究所、西北大学生命科学学院、西安理工大学理学院、第四军医大学等建立了密切的合作关系，在科研开发上不断精进，以增强公司核心竞争力。 二、课题研究的目的及意义： 国内一些大专院校科研单位的科技工作者近几年来从事宁夏枸杞有效成份分析，认为枸杞多糖是宁夏枸杞最主要的生物活性物质。科学试验证明，枸杞里的一种特有成份能使P—24抗体测值增加，促进T淋巴细胞增高。所谓的一种特有成份就是指枸杞多糖(LBP)。研究表明，枸杞多糖是由阿拉伯糖、鼠李糖、术糖、甘露糖、半乳糖、葡萄糖及半乳糖醛酸组成的酸性杂多糖的糖链与蛋白质的肽链以共价键的形式结合的含肽链多糖，分子量均大于1万。 北京医科大学、华中农业大学和中科院上海有机化学研究所等单位对枸杞多糖进行了分离纯化，并且对分子量、结构、基本性质进行

粗多糖检测方法(蒽酮比色法)

粗多糖检测方法（蒽酮比色法）： 1 主要仪器 （1）离心机（ 4000r/min ）。 （2）离心瓶容量 100ml 或具盖 10ml 离心管。 （3）分光光度计。 （4）水浴锅。 2 试剂 实验用水为双蒸水；所用试剂为分析纯级。 （1）葡萄糖标准液：准确称取I.OOOOg经过98?100 C干燥至恒重的分析纯葡萄糖，加水溶解后以水稀释至 1000ml ，此溶液 1ml 含 1mg 葡萄糖，用前稀 释10倍（0.1mg/ml ），现用现配。 （2） 0.2%蒽酮硫酸溶液：称取0.2g蒽酮置于烧杯中，缓慢加入100ml浓硫酸（分析纯），溶解后呈黄色透明溶液，现用现配。 3 测定步骤 （1）样品处理：准确称取样品 1?2g 按上法用乙醇沉淀多糖，然后用热水分次溶解沉淀并稀释定容至 100?250ml （使样液含糖量在 0.02? 0.05mg/ml 间）。过滤，弃去初滤液即为待测液。 （2）标准曲线的绘制：准确吸取葡萄糖标准液（ 0.1mg/ml ） 0、0.1、0.2、 0.4、0.6、0.8、1.0ml 于 10ml 具塞比色管中，加水至 1.0ml ，加入蒽酮 试剂 5ml 充分混匀，在沸水浴中加热 10min ，取出在流水中冷却 20min 后，在 620nm 波长下，以试剂空白调零，测定各管的吸收值绘制标准曲(3) 样品测定：准确吸取样品待测液10ml (含糖20?80⑷)按标准曲线绘 制步骤于 620nm 波长下测定吸光度值并求出样品含糖量。

4 结果计算： m1 X= --------------- x F x n x 100% m x 1000 式中 X—样品中粗多糖含量(以葡萄糖计)(%)； m1 —由标准曲线查得样品液含糖质量( mg )； m —样品质量( g )； n —稀释倍数； F—换算因子。 换算因子的测定：准确称取被测物质的纯品 20mg 置 100ml 容量瓶中，加蒸馏水溶解并稀释至刻度，吸取 0.2 ?0.4ml 于 10ml 具塞比色管中，加水至 1.0ml 按上法测定。从标准曲线中查出供试液中相当于标准葡萄糖的质量 (mg ) m F = ————— m1x n 式中 m —多糖纯品的质量( mg )； m1 —多糖纯品供试液中相当于标准葡萄糖的质量( mg )； n —供试液的稀释倍数；

枸杞多糖测定

枸杞多糖测定 稀释至刻度，备用。 2.6 样品中多糖的测定 吸取适量样品液，加蒸馏水至2 ml，按标准曲线下的方法测吸光度A为0.2343，查标准曲线得样品液中葡萄糖含量4.69（μg/ml）。 2.7 结果计算 多糖含量%=p?D?F?100 m 式中：p：样液葡萄糖浓度（μg/ml）； D：样品液稀释因素； F：换算因素； m：样品质量（μg）。 测量结果代入得：多糖含量%=12.51% 3 实验讨论 （1）苯酚-硫酸比色法测定枸杞多糖的原理是枸杞多糖成分在H2SO4的作用下，水解成单糖，并迅速脱水生成糠醛衍生物，与苯酚缩合成有色化合物，再用分光光度法测定其枸杞多糖含量。本法操作简单，显色稳定，灵敏度高，重现性好，可作为枸杞及其它多糖含量的测定方法。（2）枸杞子水提物中含有单糖、低聚糖等杂质, 且呈红色, 因此在测定之前要先用乙醇除去单糖、低聚糖等杂质并以

丙酮-石油醚脱脂脱色, 才不至于对测定产生干扰。 （3）试验中发现，浓硫酸的加入方式对实验的结果影响较大，采取移液管悬空，垂直加入浓硫酸，立即摇匀的方式，显色反应充分，且显色结果稳定。 （4）各种单糖的标准曲线均只在0～30 μg含量范围内呈较好的线形关系，因此制作标准曲线时，单糖浓度不宜太大。 （5）本法采用精制的枸杞多糖作为对照品，计算出枸杞多糖与葡萄糖的换算因子，再乘以用硫酸-苯酚法显色测出多糖相当于葡萄糖的含量，这样可避免直接用葡萄糖作为标准引起的系统误差，结果更准确。 (6) 多糖提取工艺以及分离、纯化方法决定了产品的纯度, 另外枸杞子产地的不同也可能对研究结果有影响。由于目前市场枸杞多糖产品主要作为保健产品,需较高的收率和较低的成本。而采用乙醇沉淀法提取的枸杞多糖含量较高,收率可达8%左右,并且乙醇可回收,既使成本进一步降低,又减少了对环境的污染，且取得了很好的经济效益。本实验所测得枸杞含糖量高，实验材料为上好的宁夏枸杞。

紫外分光光度法测定枸杞中多糖含量

紫外分光光度法测定枸杞中多糖含量 摘要:目的：提供一种测定枸杞制品中功效成分多糖的方法，同时合理筛选枸杞品种。方法：运用苯酚-硫酸紫外分光光度法测定3种枸杞品种中多糖的含量。结果：宁夏枸杞中的多糖含量为4.01%，新疆枸杞中的多糖含量为3.85%，青海枸杞中的多糖含量为4.01%；同时发现使用紫外分光光度法测定精密度好、重复性好、方法简便。结论：宁夏枸杞中多糖含量明显高于新疆枸杞和青海枸杞，差异达到显著水平；紫外分光光度法是一种测定枸杞多糖质量分数的理想方法，亦可为其它类多糖质量分数的测定提供依据。 关键词：苯酚-硫酸；紫外分光光度法；枸杞；多糖 枸杞(Lycium Barbrum L.)属茄科枸杞，为落叶灌木植物干燥成熟果实。近年的医学研究表明，枸杞含有多种营养成分和微量元素，其有效成分枸杞多糖(LBP)具有广泛的药理学作用，可促进造血、降血脂、保肝及治疗神经衰弱等。枸杞多糖(LBP)是由多个单糖或衍生物聚合而成的大分子活性化合物，是枸杞生物学作用的主要有效成分之一，其结构按LBP-Ⅰ、LBP-Ⅱ、LBP-Ⅲ、LBP-Ⅳ的顺序水溶性依次递减，不溶于乙醇、丙酮等有机溶剂。枸杞多糖对机体具有非特异性免疫调解功能，可调节机体免疫力、抑制肿瘤生长和细胞突变、延缓衰老、提高适应能力，并具有抗疲劳和加速消除疲劳的作用，已成为保健食品中的一种重要功能性添加剂，显示出良好的应用前景。为了进一步开发新疆黑枸杞的药用价值，本文采用紫外分光光度法测定了几种枸杞叶中的多糖含量。 1 材料与方法 1.1 原理 多糖在80%乙醇溶液中沉淀，与单糖和低聚糖及甙类物质分离。沉淀用水溶解后，再用碱性二阶铜试剂选择性地从其它高分子物质中沉淀出具有葡聚糖结构的多糖。苯酚-硫酸可与其中的多糖起显色反应，生成橙黄色化合物，可于485nm 处比色，定量。 1.2 材料与仪器 TU-1901型紫外-可见分光光度计(北京普析通用)、岛津CS-9301PC薄层扫描仪、定量毛细管(美国Dummond)、手动点样仪(CAMAGIII型)、硅胶G(青岛海洋化工集团公司)自制板；D-无水葡萄糖对照品(中国药品生物制品检定所生产，批号110833200302)；试剂：所用试剂均为分析纯。3种枸杞子分别购于药店、药材集市等，经药品检验所侯惠婵主任药师鉴定，分别编号为枸杞1、枸杞2、枸杞3。 1.3 标准曲线的绘制