SDS-PAGE蛋白电泳标准操作规程

SDS-PAGE蛋白电泳标准操作规程

----(纯度检测)一.目的：

检测蛋白质的纯度是否达到生产抗体的要求。

二.依据：

《分子克隆手册》，Ab-mart公司内部标准。

三. 职责：

质量控制部。

四.试剂与水：

所有试剂为分析纯（AR）；水为蒸馏水或超纯水。

五. 器皿与耗品：

所有玻璃器皿使用前用玻璃清洁剂清洗, 80℃烤干。

tube、tip一次性使用。

六. 仪器设备：

电泳仪（电源1--300V）

电泳槽

灌胶模具

染色具

凝胶扫描仪

七. 环境要求：

相对洁净环境，室温。

八. 溶液的配置：

1.A液：1.5MTris·HCl pH8.8

称取18.15gTris碱(分析纯)加适量的超纯水溶解,用浓盐酸(分析纯)调pH值至8.8,加超纯水定容至100 ml。贴上标贴，4℃保存。此溶液有效使用期限为三个月。（溶液配置台帐见附件）

2.B液: 1MTris·HCl pH6.8

称取12.1gTris碱(分析纯)加适量的超纯水溶解,用浓盐酸(分析纯)调pH值至6.8,加超纯水定容至100 ml。贴上标贴，4℃保存。此溶液有效使用期限为三个月。（溶液配置台帐见附件）

3.C液: 30%丙烯酰胺

称取29.2g丙烯酰胺(分析纯),0.8gN,N’-甲叉双丙烯酰胺(分析纯), 加适量的超纯水溶解,再定容至100 ml,用滤纸过滤,。贴上标贴，避光4℃保存。此溶液有效使用期限为三个月。（溶液配置台帐见附件）

4.D液:10%SDS

称取10gSDS(分析纯),用超纯水溶解至100 ml.贴上标贴，室温储存。此溶液有效使用期限为三个月。（溶液配置台帐见附件）

5.E液:10%过硫酸胺

称取10g过硫酸胺(分析纯), 用超纯水溶解至100 ml。贴上标贴，-20℃保存。此溶液有效使用期限为三个月。（溶液配置台帐见附件）

6.F液:TEMED(amersco)

7.电泳缓冲液(10X)

称取60.57g Tris碱(分析纯),288.268g甘氨酸(分析纯),20gSDS(分析纯),加超纯水定容至2000ml，临用前加超纯水稀释10倍，贴上标贴，室温储存。此溶液有效使用期限为三个月。（溶液配置台帐见附件）

8.2X样品缓冲液（还原性）

称取4gSDS(分析纯)，0.2g溴酚蓝(分析纯)，加20ml甘油(分析纯)，10ml 1MTris·HCl pH6.8，10mlβ-巯基乙醇(分析纯)，加超纯水溶解至100ml，贴上标贴，室温储存。此溶液有效使用期限为三个月。（溶液配置台帐见附件）

9.考马氏亮蓝染色液

称取1g考马氏亮蓝R－250(分析纯)，200 ml甲醇(分析纯)，50ml冰醋酸(分析纯)，加超纯水至溶解至500ml, 贴上标贴，室温储存。此溶液有效使用期限为三个月。（溶液

配置台帐见附件）

10.考马氏亮蓝脱色液

量取2250ml乙醇(分析纯)，500ml冰醋酸(分析纯)，加超纯水溶解至5000ml, 贴上标贴，室温储存。此溶液有效使用期限为三个月。（溶液配置台帐见附件）

11.6X样品缓冲液（还原性）

称取12gSDS(分析纯)，0.6g溴酚蓝(分析纯)，加40ml甘油(分析纯)，10ml 3MTris·HCl pH6.8，30mlβ-巯基乙醇(分析纯)，加超纯水溶解至100ml，贴上标贴，室温储存。此溶液有效使用期限为三个月。（溶液配置台帐见附件）(-20?C储存,有效期可能会更长)

12.银染试剂

a)固定液：量取250ml甲醇(分析纯)，60 ml冰醋酸(分析纯)，加超纯水至500 ml, 贴

上标贴，室温储存。此溶液有效使用期限为三个月。（溶液配置台帐见附件）

b)漂洗液：量取100 ml乙醇(分析纯)，50 ml冰醋酸(分析纯)，加超纯水至1000 ml, 贴

上标贴，室温储存。此溶液有效使用期限为三个月。（溶液配置台帐见附件）

c)辅染液：称取10g重铬酸钾(分析纯)，2 ml硝酸(分析纯)加适量超纯水溶解，定容

至200 ml。用前40倍稀释。贴上标贴，室温储存。此溶液有效使用期限为三个

月。（溶液配置台帐见附件）

d)银染液：称取2.04g硝酸银(分析纯)加超纯水溶解至1000ml , 贴上标贴，室温储存。

此溶液有效使用期限为三个月。（溶液配置台帐见附件）

e)显色液：量取0.5ml 甲醛(分析纯),30g碳酸钠(分析纯)加适量的超纯水,定容至

1000ml, 贴上标贴，室温储存。此溶液有效使用期限为三个月。（溶液配置台帐见

附件）

f)终止液：量取10ml冰醋酸(分析纯)加超纯水至1000ml, 贴上标贴，室温储存。此

溶液有效使用期限为三个月。（溶液配置台帐见附件）

九. 标准品（or 对照品）：

标准品:Fermentas公司蛋白质分子量标准品＃sm0671、＃sm0441,4℃保存。(为什么不保存在-20?C?)

十. 标准品验证：

1.对不同批次的标准品进行各条带迁移率的验证。

a)将上一批合格的标准品与新一批标准品一起电泳判断各条带的迁移率是否一致。

十一．程序：

1.制胶

1.1配胶装板：

1.1.1以一块塑料片、一块厚玻板、一块薄玻板的顺序装入制胶器各装12块（装

板都往左上方向按）

1.1.2装上盖子，对称拧紧螺母

1.2制备分离胶：（100ml，12块凝胶的量）

注：分离胶浓度与分离范围关系：

1.3灌入分离胶后，再灌入无水乙醇(不是水?)至液面平，避免气泡。

1.4待分离胶聚合（约45min）后，倒去无水乙醇并用纯水冲洗，用滤纸吸去残留的纯

水，再加入浓缩胶（配方见上表），根据需要插入样品梳，避免气泡出现。

1.530min后待浓缩胶聚合后便可使用（如果暂时不使用装入密封袋加入适量的1×电

泳缓冲液于4℃保存，最长保存一周，下次使用时取出胶室温平衡30min后方可

使用）

2电泳装板：

2.1拔出样品梳

2.2将薄板装入铂金丝装入电泳槽。

2.3将1×电泳缓冲液倒入电泳槽（阴极液的液面应高于进样孔，阳极液的

液面应在槽的2/5的高度）。

3.样品处理：

3.1将样品放在振荡混匀器上混匀30s，如果混不匀的应使用200ul移液枪将样品反复

吹打直至充分混匀。（如有难溶沉淀,12000rpm/min 5min离心取上清）

3.2根据之前蛋白含量检测结果，蛋白浓度>0.8mg/ml的50ul样品加入50ul 2×还原缓

冲液，蛋白浓度<0.8mg/ml的50ul样品加入10ul 6×还原缓冲液

3.3将样品放在振荡混匀器上混匀10s,放入100℃水浴锅10min

3.412000rpm/min离心5min

4.加样：在加样孔中加入处理好的样品加样量以及加样顺序如下：

点样顺序&浓度要求：（以三个样品为例）

M 1 2 3 1 2 3 bsa bsa bsa

2ug 10ug 1ug 5ug 10ug

注：分子量检测上样量为2～3ug/孔，纯度检测上样量为>10ug/孔

5.电泳：接通电源，先恒压100V开始电泳，30min后将电压调至1500V(!!!)，（让溴芬蓝

跑到，但不能跑出去）

6.染色：

6.1考马氏亮蓝法（一块胶的量）

6.1.1染色：

6.1.2将跑完电泳的胶拨下泡入200ml考马氏亮蓝染色液

6.1.3放入微波炉高火加热1min

6.1.4放在摇床上以25rpm/min染色30min

6.1.5脱色：

6.1.6倒去染色液倒入150ml脱色液

6.1.7放入微波炉高火加热1min

6.1.8再放在摇床上以25rpm/min脱色30min

6.1.9倒去脱色液再重新倒入150ml新鲜脱色液，继续脱色1h

6.1.10倒去脱色液再重新倒入150ml新鲜脱色液，继续脱色1h

6.1.11倒去脱色液让胶保存在水中。

6.2银染：（一块胶的量）

6.1.1固定：将做完电泳的凝胶取下用超纯水漂洗２秒,再将凝胶浸入固定液中,在

摇床上缓慢摇动5min,使胶泛白．

6.1.2辅染：将固定完的胶用超纯水漂洗２秒，倒去水加入辅染液在摇床上缓慢摇

动１０min．

6.1.3清洗：倒去辅染液，用超纯水清洗３次，每次５min．（洗去有机物与盐，使

胶与水有一种融合的感觉．）

6.1.4银染：倒去超纯水，加入银染液在摇床上缓慢摇动１０min．

6.1.5清洗：倒去银染液用超纯水漂洗２秒．

6.1.6显色：将胶浸入显影液中显色１０min．

6.1.7终止：加入终止液终止。

十二. 结果计算与分析：

电泳凝胶经扫描交于相关负责人进行纯度、分子量分析,纯度应大于90%，分子量应为理论值的±10％才能制备抗体。

十三. 注意事项：

1. 样品：样品上样应吸取处理后的上清，避免吸底部的沉淀物。

2. 拖尾,纹理现象:需离心或降低胶浓度；

3. 蛋白带过宽:上样量过多。

4. 丙稀酰胺有毒性,配胶时需戴手套；

5. 蛋白质与SDS(浓度>1mmol/L)结合重量比1:1.4,为充分结合重量比为1:4或1:3，

B-ME终浓度为4-5%。

6. 因为丙烯酰胺具有溶胀性的特点故溶解时须加入少量的水待溶解后定容。配置时应充分搅拌并避光。

7.银染注意点：

7.1 配置溶液用水与实验清洗用水，均使用电阻率≥１８.２MΩ/CM的超纯水．

7.2实验用器具，试剂剂瓶均用电阻率≥１８.２MΩ/CM的超纯水洗过．

7.3辅染液中的戊二醛，显影液中的甲醛应临用前加．

7.4银染液应新鲜配置．

7.5银染时因避免强光照射．

7.6请严格按照实验步骤操作，特别是清洗时间与反应时间应严格控制．

7.7实验时禁止用手直接触凝胶，否则会留下手印，应用干净的镊子接触胶．

血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳及其定量 实验报告

生物化学实验报告 姓名： 学号: 专业年级: 组别: 生物化学与分子生物学实验教学中心 实验名称血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳及其定量 实验日期实验地点 合作者指导老师 评分教师签名批改日期 一、实验目得 1、１、学习醋酸纤维薄膜电泳得基本原理与操作方法； 1、2、了解电泳技术得一般原理； １、3、掌握电泳分离血清蛋白质及其定性定量得方法。 二、实验原理 2、1、血清中各种蛋白质得等电点不同，一般都低于pＨ７、4。它们在pH8、6得缓冲液中均解离带负电荷，在电场中向正极移动.由于血清中各种蛋白质分子大小、形状及所带得电荷量不同，在醋酸纤维素薄膜上电泳得速度也不同。因此可以将它们分离

为清蛋白(Ａlbumin）、α1-球蛋白、α2-球蛋白、β－球蛋白、γ-球蛋白5条区带. 2、2、血清中不同蛋白质得等电点、分子量及含量 血清蛋白质等电点分子量占总蛋白 得% 清蛋白4、64６9，0０0 57~72 α1－球蛋白5、０6 2００，0０0 2～５ α2—球蛋白 5、06 3０0,000 4～9 β－球蛋白 5、12 ９0，000～１5０，０00 6、5～１２ γ—球蛋白 6、８5～7、３ 1５６,000~950，000 12~2０ 缓冲液ｐH=8、6，ｐI＜pH. 血清蛋白带负电荷,在电场中向正极移动。 预测血清蛋白电泳区带图 血清蛋白依次分为清蛋白，球蛋白得α１、α2、β、γ五个区带 2、3、①膜条经过氨基黑1０B染色后显出清晰色带;②各色带蛋白质含量与染料结 合量基本成正比；③可将各色带剪开，分别溶于碱性溶液中；④用分光光度法计算各种 蛋白质得百分数。

三、材料与方法： 3、1、实验材料： 3、1、1、实验试剂：①样品:健康人血清（新鲜、无溶血);②巴比妥—巴比妥钠缓冲液（pH8、６,离子强度０、０6mol/L）;③氨基黑１0Ｂ染色液;④漂洗液;⑤洗脱液：0、4mol/NaOH溶液。 ３、１、2、实验器材：①Ｖ－１100分光光度计(×1）；②恒温水浴箱(×１）; ③试管(×6)、试管架(×1）；④1000μL加样枪(×1)、加样枪架(×1);⑤醋酸纤维薄膜（2cm*8ｃm,厚度１20μm）；⑥培养皿(×5)；⑦点样器或载玻片(×１）；⑧平头镊子(×2）;⑨剪刀（×1）;⑩电泳槽（×１)；?直流稳压电泳仪（×１) 3、2、实验步骤

血清总蛋白测定标准操作规程

血清总蛋白测定标准操作规程 1 检验申请 单独检验项目申请：血清总蛋白测定(缩写TP)；组合项目申请：血生化中肝功能测定项目组合。临床医生根据需要提出检验申请。 2 标本采集与处理 2.1标本采集 2.1.1常规静脉采血约2ml，不抗凝，置普通试管中。或采用含分离胶的真空采血管。 2.1.2检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。 2.1.3急诊标本采集后，在检验申请单上填写标本采集时间。 2.1.4标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。 2.1.5下列标本为不合格标本 2.1.5.1标本量不足：少于0.3ml的全血标本，或少于0.1ml的血清或血浆。 2.1.5.2对反应吸光度有干扰的标本，包括严重溶血、严重浑浊的标本。 2.1.5.3无法确认标本与申请单对应关系的。 2.1.5.4其他如标识涂改、标本试管破裂等。 2.2标本保存 2.2.1接收标本后在30min内将标本离心分离出血清。 2.2.2标本保存时间：室温（15～25℃）下可稳定一周，普通冰箱中（2～8℃）稳定一个月。为避免标本中水分挥发使血清浓缩，对保存时间超过1天的标本均加塞密闭或覆盖湿巾。 2.2.3已完成测试的标本保持完整的识别号，置4～8℃冰箱内保存7天。 2.3标本采集的注意事项 2.3.1采血前使受检者保持平静、松弛和空腹状态。 2.3.2不建议采集抗凝血标本，如果必须使用血浆，推荐的抗凝剂是肝素。 3 方法原理 蛋白质是由许多氨基酸通过肽键相互结合而成的，肽键在碱性溶液中，能与铜离子作用产生紫红色络合物，在540nm有吸收峰，并与蛋白含量成正比。通过与同样处理的标准蛋白比较可求出血清总蛋白

血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳实验报告

血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳实验报告 实验名称血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳及其定量 实验日期实验地点xx实验室 合作者xxx 指导老师xxx 评分教师签名批改日期 一、实验目的 1.1.学习醋酸纤维薄膜电泳的基本原理和操作方法； 1.2.了解电泳技术的一般原理； 1.3.掌握电泳分离血清蛋白质及其定性定量的方法。 二、实验原理 2.1.血清中各种蛋白质的等电点不同，一般都低于pH7.4。它们在pH8.6的缓冲液中均解离带负电荷，在电场中向正极移动。由于血清中各种蛋白质分子大小、形状及所带的电荷量不同，在醋酸纤维素薄膜上电泳的速度也不同。 血清蛋白质等电点分子量占总蛋白的％ 清蛋白 4.64 69,000 57～72 α1－球蛋白 5.06 200,000 2～5 α2－球蛋白 5.06 300,000 4～9 β－球蛋白 5.12 90,000～150,000 6.5～12 γ－球蛋白 6.85～7.3 156,000～950,000 12～20 缓冲液pH=8.6，pI＜pH。

血清蛋白带负电荷，在电场中向正极移动。 预测血清蛋白电泳区带图 血清蛋白依次分为清蛋白，球蛋白的α1、α2、β、γ五个区带 2.3.①膜条经过氨基黑10B染色后显出清晰色带；②各色带蛋白质含量与染料结合量基本成正比；③可将各色带剪开，分别溶于碱性溶液中；④用分光光度法计算各种蛋白质的百分数。 三、材料与方法： 3.1.实验材料： 3.1.1.实验试剂：①样品：健康人血清（新鲜、无溶血）；②巴比妥-巴比妥钠缓冲液（pH8.6，离子强度0.06mol/L）；③氨基黑10B染色液；④漂洗液；⑤洗脱液：0.4mol/NaOH溶液。 3.1.2.实验器材：①V-1100分光光度计（×1）；②恒温水浴箱（×1）；③试管（×6）、试管架（×1）；④1000μL加样枪（×1）、加样枪架（×1）；⑤醋酸纤维薄膜（2cm*8cm，厚度120μm）；⑥培养皿（×5）；⑦点样器或载玻片（×1）；⑧平头镊子（×2）；⑨剪刀（×1）；⑩电泳槽（×1）；?直流稳压电泳仪（×1） 3.2.实验步骤 1．准备与点样：①取2×8cm的膜条；②亚光面距一端1.5cm处取一点样线；③充分浸透在巴比妥缓冲液中；④取出膜条，用滤纸吸去多余的缓冲液；⑤点样器下端粘上薄层血清；⑥垂直点样。 点样示意图：

正确分析血清蛋白电泳扫描图

正确分析血清蛋白电泳扫描图 苏洁平,张晓静 (吉林大学中日联谊医院,吉林长春130031) 血清蛋白电泳虽然是一个传统的检验项目,但目前在临床上对一些疾病的诊断(如对肝病、肾病、多发性骨髓瘤,以及一些自身免疫性疾病等)仍起着不可替代的作用。血清蛋白电泳就是根据血清中各组分蛋白质分子量的不同,将各组分蛋白质分离开, 分子大的泳动慢、分子小的泳动快,依次分为白蛋白、α12球蛋白、α22球蛋白、β2球蛋白(有时可出现前β2球蛋白带区属正常)和γ2球蛋白5个带区(或6个带区)[1,2]。常见几种疾病的蛋白电泳变化见表1。 表1　几种常见疾病的血清蛋白电泳扫描图的变化特征 病名白蛋白 球蛋白 α 12球蛋白α22球蛋白β2球蛋白γ2球蛋白 肾病↓↓↑↑↑↑↓弥慢性肝损伤↓↓↑↓↓↑肝硬化↓↓↓↓β2γ桥原发性肝癌↓↓AFP↑多发性骨髓瘤↓↓↑↑↑慢性炎症↓↑↑↑妊娠↓↑↓无丙种球蛋白血症↓↓双血蛋白血症双峰 注:↑轻度增高,↑↑明显增高,↓轻度降低,↓↓明显降低 下面对几种血清蛋白电泳扫描图作简要说明[3,4]。 1　图1:为正常人血清蛋白电泳扫描图,由左至右为白蛋白峰、α12球蛋白峰、α22球蛋白峰、β2球蛋白峰、γ2球蛋白峰。其含量分别为52%～63%,4%～5%, 6%～9%,9%～12%,15%～23%。 2　图2及图3:见增高的γ2球蛋白峰。肝病患者病程较长,当白蛋白和α12球蛋白降低,γ2球蛋白增高,提示病情较重。当肝细胞严重受损时,β2球蛋白可降低,重症肝炎转为肝坏死后γ2球蛋白增高。 3　图4:可见β区到γ区连续一片,难以分开,是由于IgA、IgM、IgG同时增高所致,称β2γ桥。β2γ桥为肝硬化所独有的特点。如伴有α12球蛋白、α22球蛋白降低即可诊断肝硬化。若治疗后白蛋白回升,标志治疗有效。 4　图5:见明显增高的α22球蛋白峰,β2球蛋白峰同时增高,而白蛋白峰明显减低。由于肾病患者长期丢失白蛋白,故血清中的蛋白明显减少。肾病综合征时高血脂症的发生与肝脏合成脂蛋白增加及脂蛋白分解减少有关,参与脂类分解代谢的某些酶的辅助因子从尿中丢失以致脂蛋白分解减弱,血中胆固醇、甘油三酯明显增高。α22球蛋白、β2球蛋白均是脂蛋白运输载体,为脂蛋白的主要成分。所以肾病患者血清蛋白电泳会出现白蛋白峰减低,α22球蛋白、β2球蛋白峰增高现象。 5　图6及图7:为典型的M峰。由于多发性骨髓瘤患者浆细胞浸润,血清IgM显著增多。γ2球蛋白的主要组成为免疫球蛋白、抗体、补体等,所以在β2球蛋白区和γ2球蛋白区有一明显M带。在扫描图上出现M峰,可分为β型和γ型两种。为多发性骨髓瘤的一项重要诊断指标。 6　图8:见明显降低的γ2球蛋白峰,主要见于体液免疫功能低下患者。 7　其它异常区带: — 2 5 3 —Chin J Lab Diagn,August,2003,V ol7,N o14

-生物化学实验--聚丙烯酰胺凝胶电泳法分离血清蛋白质

-生物化学实验--聚丙烯酰胺凝胶电泳法分离血清蛋白质

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聚丙烯酰胺凝胶电泳法分离血清蛋白质 【目的】 1 ．掌握圆盘电泳分离血清蛋白的操作技术。 2 ．熟悉聚丙烯酰胺凝胶电泳的原理。 【原理】 带电粒子在电场中向着与其自身电荷方向相反的电极移动，称为电泳。聚丙烯酰胺凝胶电泳（ PAGE ）就是以聚丙烯酰胺凝胶作为电泳介质的电泳。在电泳时，蛋白质在介质中的移动速率与其分子的大小，形状和所带的电荷量有关。 聚丙烯酰胺凝胶是一种人工合成的凝胶，是由丙烯酰胺（ Acr ）单体和少量交联剂 N,N- 亚甲基双丙烯酰胺（ Bis ）在催化剂过硫酸铵（ Ap ）和加速剂四甲基乙二胺（ TEMED ）的作用下发生聚合反应而制得的（其化学结构式见第 2 篇第 1 章）。 聚丙烯酰胺凝胶具有网状结构，其网眼的孔径大小可用改变凝胶液中单体的浓度或单体与交联剂的比例来加以控制。根据血清蛋白分子量的大小，学生实验一般选用 7 ％聚丙烯酰胺凝胶分离血清蛋白质。 不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳利用浓缩效应、分子筛效应和电荷效应的三重作用分离物质（见第 2 篇第 1 章），使样品分离效果好，分辨率较高。一般醋酸纤维薄膜电泳只能把血清蛋白质分离出 5 ～ 7 条带，而聚丙烯酰胺凝胶电泳却能分离出十几条到几十条来（图 3-4 ），是目前较好的支持介质，应用十分广泛。

图 3-4 血清蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱 根据凝胶支持物的形状不同，分为垂直板电泳和盘状电泳两种，二者原理相同。本实验采用的盘状电泳是在直立的玻璃管中，以孔径大小不同的聚丙烯酰胺凝胶作为支持物，采用电泳基质的不连续体系，使样品在不连续的两相间积聚浓缩（浓缩效应）成厚度为 10 -2 cm 的起始区带，然后再利用分子筛效应和电荷效应的双重作用在分离胶中进行电泳分离。 【器材】 1 ．电泳仪 直流稳压电源，电压 400 ～ 500V ，电流 50mA 。 2 ．垂直管型圆盘电泳装置 目前这类装置的种类很多，可根据不同的实验要求选择其中的一种。这类装置均由两个基本的部分组成，一部分为载胶玻璃管，须选用内径均匀（ 5 ～ 6mm ） , 外径 7 ～ 8mm ，长 80 ～ 100mm 的玻璃管作为材料，也可以使用更细的玻璃管。另一部分为电泳液槽，可分为上下两槽。电泳时，上下两槽通过凝胶柱沟通电流（图 3-5 ）。 图 3-5 聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳示意图 (A 为正面， B 为剖面 ) 3 ．大号试管和中号试管 4 ．微量移液器 5 ． 5ml 注射器和 9 号注射针头 6 ．洗耳球、滤纸条、封口膜等

血清蛋白电泳操作规程

血清蛋白电泳 一．项目名称 血清蛋白电泳（HYDRAGEL PROTEIN） 二．检验方法名称 琼脂糖凝胶区带电泳 三．方法学原理 蛋白电泳是临床实验室中一种常用的蛋白质剖析技术。它可以对血清或其他体液中的异常蛋白质进行筛选。它是以区带电泳为基础在一种合适的支持介质—琼脂糖上进行的电泳。血清蛋白质在给定的PH条件下主要根据其所带电荷数将其分离成五种片段：白蛋白,α1球蛋白,α2球蛋白,β球蛋白,γ球蛋白，每一区带含有一种或多种血清蛋白质。 四．方法学溯源 自1930年由Tiselius发现了移界电泳（moving boundary eectrophoresis），而后，这种技术的各种局限性已逐渐被区带电泳（zone elecrrophoresis）所克服，区带电泳的条件和支持介质的选择是电泳成败的关键。血清蛋白区带电泳是在临床实验室中常用的技术之一，可定性和/或半定量各条正常或异常蛋白区带。 五．仪器 （一）型号：SEBIA HYDRASYS (PN1210) （二）分析和计算参数： 1．处理量：约162个样本/小时 2．所需样本量：10ul 3．检验时间：约半小时 4．重复性：有良好的批内和批间重复性 5．电泳参数：电压0－300V（可选至3000V） 电流0－500mA 功率0－100W 六．试剂及配套品 （一）试剂 1．HYDRAGEL 7 PROTEIN(E)试剂盒 HYDRAGEL 15 PROTEIN(E)试剂盒 HYDRAGEL 30 PROTEIN(E)试剂盒 （1）商标：SEBIA （2）包装规格：70测试/150测试/300测试 （3）货号：PN4100/ PN4120/ PN4140 2．脱色液 （1）商标：SEBIA （2）包装规格：Pack for 10×100ml （3）货号：PN4540 (4) 成分：柠檬酸

尿蛋白电泳操作规程

尿蛋白电泳操作规程 一．项目名称 尿蛋白电泳（HYDRAGEL PROTEINURIE） 二．检验方法名称 SDS－琼脂糖凝胶区带电泳 三．方法学原理 在含有多量的阴离子去垢剂十二烷基磺酸钠（SDS）液体中，蛋白质可与其连接，形成SDS —蛋白质复合物。这种复合物蛋白本身的构造已经破坏，他们都表现出相同的构造和相同的负电荷。当这种SDS—蛋白质复合物在具有适当筛选功能的介质中电泳时，如在含高浓度琼脂糖的HYDRAGEL 5 PROTEINURIE凝胶上电泳时，蛋白质按它们的分子量大小进行分离。 在HYDRAGEL 5 PROTEINURIE凝胶上能清楚分离来源于肾小管（分子量＜65-70Kda)还是来源于肾小球（分子量＞65-70KDa）的蛋白质，因此尿蛋白不仅能被检测到，而且能对蛋白来源进行分类（肾小球，肾小管性和混合性）。 四．方法学溯源 自1930年由Tiselius发现了移界电泳（moving boundary eectrophoresis），而后，这种技术的各种局限性已逐渐被区带电泳（zone elecrrophoresis）所克服，区带电泳的条件和支持介质的选择是电泳成败的关键。 五．仪器 （一）型号：SEBIA HYDRASYS (PN1210) （二）分析和计算参数： 1．处理量：约14个样本/小时 2．所需样本量：5ul 3．检验时间：约50分钟 4．重复性：有良好的批内和批间重复性 5．电泳参数：电压0－300V（可选至3000V） 电流0－500mA 功率0－100W 六．试剂及配套品 （一）试剂 1．HYDRAGEL 5 PROTEINURIE试剂盒 （1）商标：SEBIA （2）包装规格：50测试 （3）货号：PN4115 2．脱色液 （1）商标：SEBIA （2）包装规格：Pack for 10×100ml

血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验

血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验 一．实验原理 1、电泳是指带电质点在电场中向本身所带电荷相反的电极移动的现象。在一定pH条件下，不同的质点由于具有不同的等电点而带不同性质的电荷，因而在一定的电场中它们的移动方向和移动速度也不同，即它们的电泳迁移率不同，因此，可使它们分离。 2、影响电泳迁移率的外界因素：电场强度、溶液的pH值、溶液的离子强度和电渗现象。 3、影响电泳迁移率的内在因素：质点所带净电荷的量、质点的大小和形状。 4、采用醋酸纤维薄膜作为支持物的电泳方法称为醋酸纤维素薄膜电泳。醋酸纤维素薄膜电泳具有微量、快速、简便、分辨力高，对样品无拖尾和吸附现象等优点。 5、醋酸纤维素是纤维素的羟基乙酰化所形成的纤维素醋酸酯，将它溶于有机溶剂（如：丙酮、氯仿、氯乙烯、乙酸乙酯等）后，涂抹成均匀的薄膜则成为醋酸纤维素薄膜。该膜具有均一的泡沫状的结构，厚度约为120 μm，有很强的通透性，对分子移动阻力很小。 6、本实验以醋酸纤维素为电泳支持物，分离各种血清蛋白。血清中含有清蛋白、α-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白和各种脂蛋白等。各种蛋白质由于氨基酸组成、分子量、等电点及形状不同，在电场中的迁移速度不同。以醋酸纤维素薄膜为支持物，正常人血清在pH8.6的缓冲体系中电泳，染色后可显示5条区带。其中清蛋白的泳动速度最快，其余依次为α1-、α2-、β-及γ-球蛋白。 二．实验仪器和试剂 ?器材 醋酸纤维素薄膜（3×8cm），培养皿，载玻片，电泳仪，电泳槽，粗滤纸，镊子 ?材料 新鲜血清（未溶血） ?试剂 1、巴比妥缓冲液（pH 8.6，离子强度0.06）： 巴比妥1.66g, 巴比妥钠12.76g，加水至1000ml。置4℃冰箱保存，备用。（已配置） 2、染色液：氨基黑10B 0.5g, 甲醇50ml, 冰醋酸10ml，蒸馏 水40ml，混匀。 3、漂洗液：含95％乙醇45ml，冰醋酸5ml，蒸馏水50ml，混匀。 4、NaOH溶液：称取NaOH 16g，定容至1000ml。 三．实验过程 一.准备与点样 1.将薄膜剪成3×8cm的小条，在薄膜无光泽面距一端1.5cm处用铅笔轻轻划一条直线，表示点样位置。

血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳实验报告

血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳实验报告 一、实验目的 1.1.学习醋酸纤维薄膜电泳的基本原理和操作方法； 1.2.了解电泳技术的一般原理； 1.3.掌握电泳分离血清蛋白质及其定性定量的方法。 二、实验原理 2.1.血清中各种蛋白质的等电点不同，一般都低于pH7.4。它们在pH8.6的缓冲液中均解离带负电荷，在电场中向正极移动。由于血清中各种蛋白质分子大小、形状及所带的电荷量不同，在醋酸纤维素薄膜上电泳的速度也不同。因此可以将它们分离为清蛋白（Albumin)、α1-球蛋白、α2-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白5条区带。 2.2.①膜条经过氨基黑10B染色后显出清晰色带；②各色带蛋白质含量与染料结合量基本成正比；③可将各色带剪开，分别溶于碱性溶液中；④用分光光度法计算各种蛋白质的百分数。 三、材料与方法： 3.1.实验材料： 3.1.1.实验试剂：①样品：健康人血清（新鲜、无溶血）； ②巴比妥-巴比妥钠缓冲液（pH8.6，离子强度0.06mol/L）； ③氨基黑10B染色液；④漂洗液；⑤洗脱液：0.4mol/NaOH

溶液。 3.1.2.实验器材：①V-1100分光光度计（×1）；②恒温水浴箱（×1）；③试管（×6）、试管架（×1）；④1000μL 加样枪（×1）、加样枪架（×1）；⑤醋酸纤维薄膜（2cm*8cm，厚度120μm）；⑥培养皿（×5）；⑦点样器或载玻片（×1）； ⑧平头镊子（×2）；⑨剪刀（×1）；⑩电泳槽（×1）；?直流稳压电泳仪（×1）四、结果与讨论条 4.1.结果分析本次实验得到的图谱只能够清晰的看出清蛋白和γ－球蛋白的区带，其余无法区别。原因可能如下：①醋酸纤维薄膜质量不足。②薄膜过湿，样品扩散迅速，导致样品分离不成区带。③点样太少，区带显色不明显。④电泳时间不足。 ⑤薄膜在缓冲液中浸泡的时间不足。⑤取出电泳后的薄膜过程中曾不慎将薄膜掉到地上。⑥染色时，因为现场混乱，可能导致醋酸纤维薄膜不是一张一张放入染色液的，在染色固定前，薄膜与薄膜之间重叠，造成薄膜上还未固定的血清蛋白彼此粘连。 四、结果与讨论 4.2.课后思考题 1.电泳时，点样端置于电场的正极还是负极？为什么？ 答：点样端置于电场的负极。因为人体血清的蛋白质会因电槽中溶质呈碱性而带负电，要成功分离出各类各类蛋白质，理应将点样端置于电场的负极。

血清蛋白电泳学习

异常血清蛋白电泳图形 1. 正常血清电泳图形 通常从正极到负极为Alb，α1-球蛋白，α2-球蛋白，β-球蛋白及γ-球蛋白五个区带。β包括β1和β2，β2主要是C3成分。AFP位于Alb和α1-球蛋白之间。若样品为血浆，则纤维蛋白原泳动在β和γ之间。 由于各实验室的条件不同，应建立相应的正常参考范围。影响因素包括采血部位、时间、季节等；个体间的差异；操作技术等。 2.急性炎症及应激型：当机体受到各种损伤或炎症刺激时的病理现象。 主要特征：Alb减少或正常，α1、α2-球蛋白增高，γ-球蛋白增高不明显，当炎症转为慢性时，可明显增加。 病理生理：Alb下降主要是由于蛋白分解亢进所致,α1和α2-球蛋白增加与急性时相反应蛋白α1糖蛋白增加有关，β区带减少是由于转铁蛋白分解代谢增加所致。新生儿由于结合珠蛋白合成功能不完全，当有炎症病灶时，α2区带无明显增高，而α1区带可明显增高。 3.肾病型：由于肾小球受损引起低蛋白血症，蛋白尿，高脂血症以及全身性水肿。 主要特征：Alb明显降低，α1-球蛋白轻度增加，α2-球蛋白明显增加，γ-球蛋白降低、正常或增高。小儿类脂样肾病时，γ-球蛋白可降低，有时可降低至零；成人肾病综合症时，γ-球蛋白通常增加，特别是狼疮性肾病。 病理生理：Alb降低是由于肾小球滤过增加所致。α1-球蛋白增加，主要是小分子量的α1糖蛋白增加，可能是为了补偿由于Alb降低引起的低渗透压，虽然α1糖蛋白也大量丢失于尿中，但体内合成量超过排泄量，故仍可增高。α2-球蛋白明显增加是由于α2-球蛋白和低密度脂蛋白相对增加所致。β球蛋白降低主要是分子量小的转铁蛋白排泄于尿中所致。γ-球蛋白降低主要是由于漏出于尿中及体内分解亢进所造成，而慢性肾炎、狼疮性肾炎等γ-球蛋白增加，可能是由于免疫刺激，使IgG增加所致。 4. 弥漫性肝损伤型 主要特征：Alb明显降低, α1-球蛋白在轻度时可略增加，但肝细胞破坏严重时，则α1、α2和β球蛋白通常均降低，在胆汁郁积性肝炎时，α2和β球蛋白可增高，γ-球蛋白轻度或中度增高。 病理生理：Alb虽合成减少，但其半衰期长，其浓度减少多出现于发病后十天，随病情恢复而至正常,若为慢性则逐渐减少,其减少程度与肝炎的严重程度相一致。α1-球蛋白在肝炎初期，作为急性期反应物质常增加，而肝损伤严重时则降低，在致命的肝功能衰竭时，α1-球蛋白可降低到很低水平。α2-球蛋白的降低，可能是由于结合珠蛋白合成降低所致，但胆汁郁积性肝炎时，由于脂蛋白增加，可见到α2-球蛋白部位增高，当急性肝坏死时，α2-球蛋白则明显减少。β球蛋白在肝炎早期几乎无变化，当肝细胞损伤严重时合成减少。几乎所

血清蛋白电泳在蛋白质代谢异常的检查及临床意义

血清蛋白电泳：醋酸纤维薄膜和琼脂糖凝胶是目前最常采用的两大介质。蛋白质在碱性条件下带不同量的负电荷，在电场中由阴极向阳极泳动。由于白蛋白等电点的差异，电泳后由正极到负极可分为，白蛋白、α1-球蛋白、α2-球蛋白、β球蛋白和γ球蛋白五个区带，血清蛋白电泳初步了解血清白蛋白中主要组分的一种技术方法，通过血清蛋白电泳来反映肝细胞损伤程度和病变范围。也可用于其他疾病时有关白蛋白代谢的观察。参考值：琼脂糖法：白蛋白48％～64％，α1-球蛋白2.5％～5.4％，α2-球蛋白8.3％～l4％，β-球蛋白8.7％～l5％，γ-球蛋白12％～l5％。临床意义：血清白蛋白减少与γ球蛋白增加是肝病患者血清蛋白电泳的共同特征，其减少与增加的程度与肝实质损伤程度相关。①肝炎：急性肝炎早期或病变较轻时，电泳结果可无异常或前白蛋白减少。但随病情加重和时间延长，电泳图形可改变，白蛋白、α及β球蛋白减少，γ-球蛋白增高。因为受损肝细胞作为自身抗原刺激淋巴系统，使γ-球蛋白增生。A／G比值的倒置，提示肝功能损伤到一定程度。②肝硬化：血清蛋白电泳可有明显的变化，白蛋白中度或高度减少，α1、α2和β球蛋白百分比也有降低倾向，γ-球蛋白明显增加。并可出现β-γ桥，即从β区到γ区连成一片难以分开，或两区间仅见一浅凹，如同时有α1、α2-球蛋白减少，首先要考虑肝硬化。β-γ桥出现的原因系由IgA、M、G同时增加，而IgA和IgM在电泳上位于β区和γ区之间所致，肝硬化时常有多克隆免疫球蛋白升高，特别当IgA明显升高时，便使0区与y区融合一片，出现了β－γ桥。③肝癌：此类患者血清蛋白电泳均有改变，α1、α2－球蛋白明显增高，有时可见于白蛋白和α1－球蛋白的区带之间出现一条甲胎蛋白区带，具有诊断意义。④肝外疾患：肾病综合征时，由于尿中排出大量白蛋白而使血清中自蛋白明显下降，α2及β－球蛋白升高；多发性骨髓瘤、华氏巨球蛋白血症、良性单克隆免疫球蛋白增生症时血清β、γ区带处出现一特殊单克隆区带，称为M蛋白质；系统性红斑狼疮、风湿性关节炎等自身免疫性患者可有不同程度的白蛋白下降及γ－球蛋白升高。

醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白实验报告_0

醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白实验报告 前言 血清蛋白: 血清蛋白是血液中脂肪酸的载体当身体需要能量或建筑材料时，脂肪细胞将脂肪酸释放到血液中，脂肪酸被血清蛋白捕获并运送到所需的位置 牛血清白蛋白的相对分子质量是10的四次方，这是不确定的，但是是一种聚合物，并且在一些地方测量到70，000，这是一个数据。它将用于聚合酶链反应 牛血清蛋白是血液的主要成分，分子量为68kD。等电点4.8氮含量16%，糖含量0.08%只含有己糖和己糖胺，脂肪含量仅为0.2%白蛋白由581个氨基酸残基组成，其中35个半胱氨酸残基形成17个二硫键，在肽链的第34位有一个游离巯基白蛋白可以与各种阳离子、阴离子和其他小分子物质结合血液中的白蛋白主要起维持渗透压、缓冲液、载体和营养的作用。在动物细胞的无血清培养中，白蛋白的加入可以起到生理和机械的保护作用和载体作用。 醋酸纤维素薄膜电泳: 醋酸纤维素薄膜电泳以醋酸纤维素薄膜为载体它是纤维素的乙酸酯，由纤维素的羟基乙酰化而成。它溶解在有机溶液如丙酮中，并可被涂覆成厚度为0.1毫米-0.15毫米的均匀微孔膜太稠，吸水性差，分离效果差；如果它太薄，如果它缺乏应有的机械强度，膜就会变脆。

醋酸纤维素薄膜电泳操作简单、快速、廉价。它已广泛应用于血清蛋白、血红蛋白、球蛋白、脂蛋白、糖白蛋白、甲胎蛋白、类固醇激素和同工酶等的分离和分析。虽然其分辨率低于聚丙烯酰胺凝胶电泳，但具有简单、快速的优点。功能: 1。(1)醋酸纤维素膜对蛋白质样品的吸附很少，没有“拖尾”现象。染色后，背景可以完全脱色，各种蛋白染色带可以清晰分离，提高了测定的准确性。 (2)快速节省时间醋酸纤维素膜的亲水性比滤纸差，膜中含有的缓冲溶液少，电渗少，电泳时大部分电流由样品传导，分离速度快，电泳时间短。一般来说，电泳时间只有45-60分钟。染色和脱色后，整个电泳过程只需约90分钟。 (3)灵敏度高，样品消耗少。血清蛋白仅需要2μl血清，即使样品体积小至0.1μl，对于仅含5μg蛋白的样品也可获得清晰的分离带。临床医学检查用它来检测病理条件下微量异常蛋白的变化。(4)应用广泛有些蛋白质不容易用纸电泳分离，如胎儿α球蛋白、溶菌酶、胰岛素、组蛋白等。醋酸纤维素膜电泳可以更好地分离。(5)电泳染色后，醋酸纤维素膜可浸泡在冰醋酸、乙醇混合溶液或其他溶液中，形成透明的干板，有利于扫描定量和长期保存。2.与聚丙烯酰胺凝胶电泳相比，醋酸纤维素薄膜电泳操作简单，但分离效果不是很好。例如，在醋酸纤维素薄膜电泳中，只有5-6条带能与白蛋白分离，而在聚丙烯酰胺凝胶电泳中，只有10条带能与白蛋白分离。 1。实验目的

血清白蛋白测定标准操作规程

血清白蛋白测定标准操作规程 1 检验申请 单独检验项目申请：血清白蛋白测定(缩写ALB)；组合项目申请：血生化中肝功能测定项目组合。临床医生根据需要提出检验申请。 2 标本采集与处理 2.1标本采集 2.1.1常规静脉采血约2ml，不抗凝，置普通试管中。或采用含分离胶的真空采血管。 2.1.2检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。 2.1.3急诊标本采集后，在检验申请单上填写标本采集时间。 2.1.4标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。 2.1.5下列标本为不合格标本 2.1.5.1标本量不足：少于0.3ml的全血标本，或少于0.1ml的血清或血浆。 2.1.5.2对反应吸光度有干扰的标本，包括严重溶血、严重浑浊的标本。 2.1.5.3无法确认标本与申请单对应关系的。 2.1.5.4其他如标识涂改、标本试管破裂等。 2.2标本保存 2.2.1接收标本后在30min内将标本离心分离出血清。 2.2.2标本保存时间：室温（15～25℃）下可稳定一周，普通冰箱中（2～8℃）稳定一个月。为避免标本中水分挥发使血清浓缩，对保存时间超过1天的标本均加塞密闭或覆盖湿巾。

2.2.3已完成测试的标本保持完整的识别号，置4～8℃冰箱内保存7天。 2.3标本采集的注意事项 2.3.1采血前使受检者保持平静、松弛和空腹状态。 2.3.2不建议采集抗凝血标本，如果必须使用血浆，推荐的抗凝剂是肝素。 3 方法原理 血清中的白蛋白与溴甲酚绿在PH=4.2的条件下结合生成绿色复合物，溶液由黄色变为绿色，其颜色深浅与白蛋白浓度成正比，通过在630nm处测定其吸光度可得出白蛋白的含量。 PH=4.2 白蛋白 + 溴甲酚绿 --------------- 绿色复合物 4 试剂及其他用品 4.1试剂：溴甲酚绿法测定白蛋白试剂盒，由北京利德曼生化技术有限公司出品。 4.2试剂盒保存：保存于2～8℃，不开盖情况下至标签的失效期。开盖后放于仪器的冰箱中至少稳定14天。开盖后避免污染。变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染，不能继续使用。 4.3试剂盒准备：液态单试剂型，即开即用，无特殊准备 4.4试剂盒主要成分：缓冲液（pH 4.2）50 mmol/L，溴甲酚绿0.25 mmol/L，其中含有稳定剂与保护剂＜0.1%。 5 校准品与校准模式 5.1校准品: Beckman-Coulter SYNCHRON LX MULTI 校准液（P/N 442600），其白蛋白浓度值可溯源至美国国家标准技术研究所（NIST）标准参考材料。 5.2校准类型和校准点数目：线性模式，1个校准点。

Bio-Rad电泳仪操作规程

Bio-rad小电泳槽及电泳仪操作规程 一．目的 为规范Bio-rad小电泳槽及电泳仪的基本操作、维护保养、异常处理程序，防止人为操作失误，确保Bio-rad小电泳槽及电泳仪正常运转，特制定本程序。 二．适用范围 本程序适用于Bio-rad小电泳槽及电泳仪。 三．责任 1. 本程序的实施者为Bio-rad小电泳槽及电泳仪操作者，各实验室负责人 对本程序的实施情况进行监督。 2. 日常运行及维护、定期维护、定期点检及保养由Bio-rad小电泳槽及电 泳仪操作者负责。 四．内容 1.灌胶 a、取出灌胶模具，打开封底盘至完全开放的状态，松开两侧螺丝，向外侧打开夹子。 ` b、取长方形和带凹槽的长玻板各一块，从内到外依次按带凹槽玻板及长方形玻板的顺序排列，形成gel sandwich。注意正确排列以防漏胶。 c、短玻板朝外将sandwich放入模具中，检测sandwich的底是否紧靠底面。旋紧螺丝。将封底盘锁至密闭状态。 d、将模具放在桌面上准备灌胶。 e、根据需要配制一定浓度的胶。 1、分离胶的灌制：用加样枪慢慢将胶加入sandwich中，注意不要有气泡。其上加%SDS封顶. 2、浓缩胶的灌制：待分离胶凝后弃去SDS，开始灌浓缩胶，最后轻轻插入梳子。

f、待胶聚合后，拔出梳子，用电泳缓冲液清洗加样槽，去除未聚合的胶。 g、模具放入电泳槽中。 2.电泳 a、加适量的电泳缓冲液 b、准备样品，加样。 c、盖上电泳槽的盖子，注意红色对正极，黑色对负极。打开电源，开始电泳。初始电压100V, 15分钟后改为120v。 ' d、直至指示剂距前沿1cm处结束电泳，拔掉电源，小心取出胶，根据需要进行染色或转膜，回收电泳缓冲液（可重复利用3次）。 五．注意事项： a、每次用完后，立即清洗电泳槽，灌胶模具，玻璃板（先用自来水洗干净，再用蒸馏水冲一遍后放在架子上晾干）。 b、扣紧或打开灌胶模具时要用力均匀，以免压坏玻璃板。 c、盖上电泳槽的盖子时，务必注意正负极不要接反。

免疫固定电泳操作规程

免疫固定电泳操作规程 项目名称 免疫固定电泳( HYDRAGEL IMMUNOFIXATION) 检验方法名称 琼脂糖凝胶免疫固定电泳 方法学原理 血清蛋白电泳中岀现的异常条带主要存在于B -球蛋白和丫 -球蛋白区域，通常疑为单克隆蛋 白质并且提示丙球蛋白血症。为鉴别异常条带，可运用免疫固定技术。免疫固定电泳是一种简单的技术，电泳后的蛋白质与相应抗体形成复合物和被固定在相应的位置上，通过下列四个步骤： 1．蛋白质在琼脂糖凝胶内进行电泳分离。 2．电泳后已分离的蛋白质被固定并产生免疫沉淀：应用固定剂和抗血清加于凝胶表面的泳道上，并让固定剂和抗血清在凝胶内渗透扩散。 3．使用吸水纸和清洗将未沉淀的蛋白质去除，已被沉淀的蛋白质贮留在凝胶内。 4．将蛋白质染色，并将这些免疫沉淀区带的位置与蛋白质经电泳后观察到的异常蛋白区带进行比较。 为了精确识别单克隆区带，样品同时在六条泳道上进行测试。经电泳后，ELP作为参考泳道 以显示电泳后的蛋白质。其余五条泳道用于鉴定单克隆成分。通过它(们)与抗血清，丫 (IgG)、 a (IgA)、卩(IgM)重链和K、入轻链(游离和非游离)反应与否进行鉴别。该技术简单、快速、图象清晰，易于解释结果。 方法学溯源 自 1930 年由 Tiselius 发现了移界电泳( moving boundary eectrophoresis )，而后，这种技术的各种局限性已逐渐被区带电泳( zone elecrrophoresis )所克服，区带电泳的条件和支持介质的选择是电泳成败的关键。通过免疫化学手段观察其电泳特性及抗原特性是鉴定某一蛋白成分最好的方法，免疫固定电泳技术是目前应用最广泛的方法之一。 仪器 型号： SEBIA HYDRASYS (PN1210) 分析和计算参数： 处理量：约 18 个样本 / 小时 所需样本量： 10ul 检验时间：约 55 分钟 重复性：有良好的批内和批间重复性 电泳参数：电压 0 — 300V (可选至 3000V) 电流 0－ 500mA 功率 0— 100W

血清蛋白电泳

肝病患者血清蛋白电泳(SPE)与总胆红素（TBIL）的测定 本文针对血清蛋白电泳(SPE)和总胆红素（TBIL）两指标进行测定。通过对正常人与肝病患者测定结果的比较，说明肝病患者肝脏损害的程度。已知急性肝炎早期或病变较轻时，电泳结果可无异常。但随病情加重和时间延长，电泳图形可改变，白蛋白、α及β球蛋白减少，γ-球蛋白增高。传染性肝炎患者血清白蛋白轻度下降，α2球蛋白增高并伴有γ球蛋白增高；因为受损肝细胞作为自身抗原刺激淋巴系统，使γ-球蛋白增生。急性肝坏死时，白蛋白明显下降，球蛋白显著升高，出现A/G比值的倒置，提示肝功能损伤比较严重。肝硬化血清蛋白电泳可有明显的变化，白蛋白中度或高度减少，α1、α2百分比降低，γ-球蛋白明显增加。肝癌：此类患者血清蛋白电泳均有改变，α1，α2-球蛋白明显增高，有时可见于白蛋白、α1-球蛋白的区带之间出现一条甲胎蛋白区带，具有诊断意义【1】，而血清总胆红素（TBIL）主要用来诊断是否有肝脏疾病，可以根据TBIL值判断有无黄疸及黄疸的程度，TBIL 17.1-34.2μmol/L可视为隐性黄疸；34.2-170μmol/L之间为轻度黄疸；170-342μmol/L为中度黄疸;大于342μmol/L则为重度黄疸【2】，通过对不同程度的肝病患者的血清蛋白电泳(SPE)与总胆红素（TBIL）进行测定，并且通过统计学的方法证实具有统计学意义（P<0.05）。 1.临床资料与研究方法 1.1.临床资料 1.1.1 正常对照组共92例，为健康捡者，肝功能正常，无肝病，各型肝炎病毒标志物均为阴性其中男58例，女34例。 1.1.2 肝病组共223例，患者诊断均合2000年全国病毒性肝炎学术会议修订的诊断标准【3】。男性126例，女性97例，年龄21~72岁。其中急性肝炎89例（黄疸型39例，无黄疸型50例），慢性肝炎77例，肝硬化38例，肝癌17例。 1.1.3 两组性别、年龄差异无统计学意义（P>0.05） 1.2研究方法 1.2.1 仪器与试剂：血清蛋白电泳(SPE) 采用醋酸纤维薄膜蛋白电泳法，所用仪器为北京金桑特医用仪器有限公司生产的SH-2020全自动琼脂糖电泳系统。试剂由北京中生生物工程高技术公司提供。总胆红素（TBIL）采用酶法，所用试剂为罗氏P800公司产品，严格按照说明书操作。 1.2.2 血清：空腹抽取静脉血3ml，使用Hydragel Protein套件分离血清。 x±表示，组间比较采1.2.3 统计学方法：所有数据采用SPSS统计软件处理，计量资料以s 用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。 2.检测结果

血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳及其定量 实验报告

生物化学实验报告 姓名: 学号: 专业年级: 组别: 生物化学与分子生物学实验教学中心 实验名称血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳及其定量 实验日期实验地点 合作者指导老师 评分教师签名批改日期 一、实验目的 1、1、学习醋酸纤维薄膜电泳的基本原理与操作方法; 1、2、了解电泳技术的一般原理; 1、3、掌握电泳分离血清蛋白质及其定性定量的方法。 二、实验原理 2、1、血清中各种蛋白质的等电点不同,一般都低于pH7、4。它们在pH8、6的缓冲液中均解离带负电荷,在电场中向正极移动。由于血清中各种蛋白质分子大小、形状及所带的电荷量不同,在醋酸纤维素薄膜上电泳的速度也不同。因此可以将它们分离为清

蛋白(Albumin)、α1-球蛋白、α2-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白5条区带。 2、2、血清中不同蛋白质的等电点、分子量及含量 血清蛋白质等电点分子量占总蛋白的％ 清蛋白 4、64 69,000 57～72 α1－球蛋白 5、06 200,000 2～5 α2－球蛋白 5、06 300,000 4～9 β－球蛋白 5、12 90,000～150,000 6、5～12 γ－球蛋白 6、85～7、3 156,000～950,000 12～20 缓冲液pH=8、6,pI＜pH。 血清蛋白带负电荷,在电场中向正极移动。 预测血清蛋白电泳区带图 血清蛋白依次分为清蛋白,球蛋白的α1、α2、β、γ五个区带 2、3、①膜条经过氨基黑10B染色后显出清晰色带;②各色带蛋白质含量与染料结合量基本成正比;③可将各色带剪开,分别溶于碱性溶液中;④用分光光度法计算各种蛋白质的百分数。 三、材料与方法: 3、1、实验材料: 3、1、1、实验试剂:①样品:健康人血清(新鲜、无溶血);②巴比妥-巴比妥钠缓冲液(pH8、6,离子强度0、06mol/L);③氨基黑10B染色液;④漂洗液;⑤洗脱液:0、4mol/NaOH溶液。

常见血清蛋白电泳扫描及图谱

常见血清蛋白电泳扫描及图谱 网络 仪器：Sebia Hydrasys LC、Hyrys 方法：琼脂凝胶电泳 染料：氨基黑 一.正常血清： HYDRAGEL 7, 15 HYDRAGEL 7 PROTEIN(E)

HYDRAGEL PROTEIN(E) 15 正常参考值： Alb:57%-68% α1:1.0%-5.7% α2:4.9%-11.2% β:7%-13% γ:9.8%-18.2% 各组分构成： Alb：白蛋白 α1：α1酸性糖蛋白；α1抗胰蛋白酶；

α2：HP；CP；α2巨球蛋白；α脂蛋白； β：转铁蛋白；补体系统；β脂蛋白 γ：IgG；IgM；IgA；IgD；IgE 二.双白蛋白血症型： 主要特征：在白蛋白部位有两个区带，光密度计扫描出现双峰，呈剪刀状。 产生原因：双白蛋白血症分为持久型和暂时型两种。持久型主要是家族性血清蛋白异常的疾病，极少见，为常染色体不完全显性遗传；而暂时型主要是指肾功能不全的 在治疗期间使用大剂量的β-内酰胺类抗生素，可形成快泳动性的白蛋白成分，治疗中断即逐渐消失。 三.先天性白蛋白缺陷型： 主要特征：由于血清白蛋白的显著降低，血清总蛋白也随之降低，α1、α2球蛋白明显增高，γ球蛋白也增高。严重无白蛋白血症时，白蛋白有时可降为零。 产生原因：本病是极少见的先天性疾病，可能由于肝细胞内白 蛋白合成功能遗传性缺陷或明显低下所致。该病患 者的白蛋白含量尽管只有正常人的0.05%，而其血 浆胶渗透压仍为正常人水平的 1/2左右，

是由于 球蛋白代偿性增加所致，如传铁蛋白为正常人的 2 -3倍，α1巨球蛋白为正常人的3.5倍，β脂蛋白为3 倍，IgM为3倍，这时血清白蛋白的半衰期也明显延 长，可为正常人的3-4倍，对维持血浆胶体渗透压 均有一定作用。 Could not connect: Can't connect to MySQL server on '192.168.0.109' (10060)

血清白蛋白测定标准操作规程

. .. . . 血清白蛋白测定标准操作规程 1 检验申请 单独检验项目申请：血清白蛋白测定(缩写ALB)；组合项目申请：血生化中肝功能测定项目组合。临床医生根据需要提出检验申请。 2 标本采集与处理 2.1标本采集 2.1.1常规静脉采血约2ml，不抗凝，置普通试管中。或采用含分离胶的真空采血管。 2.1.2检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。 2.1.3急诊标本采集后，在检验申请单上填写标本采集时间。 2.1.4标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。 2.1.5下列标本为不合格标本 2.1.5.1标本量不足：少于0.3ml的全血标本，或少于0.1ml的血清或血浆。 2.1.5.2对反应吸光度有干扰的标本，包括严重溶血、严重浑浊的标本。 2.1.5.3无法确认标本与申请单对应关系的。 2.1.5.4其他如标识涂改、标本试管破裂等。 2.2标本保存 2.2.1接收标本后在30min内将标本离心分离出血清。 2.2.2标本保存时间：室温（15～25℃）下可稳定一周，普通冰箱中（2～8℃）稳定一个月。为避免标本中水分挥发使血清浓缩，对保存时间超过1天的标本均加塞密闭或覆盖湿巾。 2.2.3已完成测试的标本保持完整的识别号，置4～8℃冰箱内保存7天。 2.3标本采集的注意事项 2.3.1采血前使受检者保持平静、松弛和空腹状态。

2.3.2不建议采集抗凝血标本，如果必须使用血浆，推荐的抗凝剂是肝素。 3 方法原理 血清中的白蛋白与溴甲酚绿在PH=4.2的条件下结合生成绿色复合物，溶液由黄色变为绿色，其颜色深浅与白蛋白浓度成正比，通过在630nm处测定其吸光度可得出白蛋白的含量。 PH=4.2 白蛋白 + 溴甲酚绿 --------------- 绿色复合物 4 试剂及其他用品 4.1试剂：溴甲酚绿法测定白蛋白试剂盒，由北京利德曼生化技术有限公司出品。 4.2试剂盒保存：保存于2～8℃，不开盖情况下至标签的失效期。开盖后放于仪器的冰箱中至少稳定14天。开盖后避免污染。变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染，不能继续使用。 4.3试剂盒准备：液态单试剂型，即开即用，无特殊准备 4.4试剂盒主要成分：缓冲液（pH 4.2）50 mmol/L，溴甲酚绿0.25 mmol/L，其中含有稳定剂与保护剂＜0.1%。 5 校准品与校准模式 5.1校准品: Beckman-Coulter SYNCHRON LX MULTI 校准液（P/N 442600），其白蛋白浓度值可溯源至美国国家标准技术研究所（NIST）标准参考材料。 5.2校准类型和校准点数目：线性模式，1个校准点。 5.3校准周期：校准间隔时间不限。但在：①更换试剂批号或出现质控漂移时；②仪器进行全面保养后；③仪器的重要零件更换后；均须进行一次校准。 5.4校准液重建方法：Beckman-Coulter SYNCHRON LX MULTI 校准液即开即用，无需特