文献翻译1

检测细胞中泛素的连接

摘要：

蛋白质泛素化对细胞很多不同的决定性功能有重要的作用。尽管我们已经知道:蛋白质和泛素接合的结果是他们被蛋白酶体降解。最近这已明显特指蛋白质泛素化，特别是单一泛素化。在细胞中起调控作用,和细胞内的蛋白质磷酸化作用相似。最强大最灵敏的检测方法是凝胶电泳后免疫沉淀反应后的蛋白的抗泛素化免疫印迹。抗体识别泛素化的蛋白现已可行，泛素化免疫印迹法已成为一种实用的方法在研究尤其是翻译后蛋白质的突变等等许多不同的方面。在这里,我们详细描述它的步骤,为了确定一个特定的蛋白质是否很有可能别被泛素化或去泛素化,我们提出有关在抗泛素化免疫印迹法中避免困难的警告。

1、介绍：

在最近几年，我们理解的泛素蛋白酶体通道已不仅仅是描述的“垃圾桶”或“降解机器”，而是已经暗示蛋白质泛素化以及蛋白酶体的主要功能是完成细胞的基本生理功能代谢调节。现在意识到泛素化是具有非常高的通用性和关键性的调节蛋白质改性的作用，这作用好比一个公司的执行官而不是搞卫生的工程师。

除了它在清理细胞中摺叠错误,突变,或化学损坏的蛋白质方面的重要作用,

泛素结合参与不同类型的作用例如作为抗原表达、细胞周期调控、内吞作用、信号传导、细胞凋亡、DNA损伤修复、转录调控、生育、调制染色质结构、甚至逆转录病毒传染性。

大部分蛋白质包括短周期和长周期的在某种程度上都容易受泛素化影响。因此，这个过程恰恰能够被协调的结合起来通过小集团的E2泛素结合酶和至少五类的E3泛素连接酶，每一个都有独特结合域，由两个主要的去泛素化酶也就是泛素后处理酶和泛素C-ter-minal 水解酶进行平衡。详细的有关泛素化和去泛素实验的酶学在其他章节中。因此，蛋白酶体通道应被视为一个极其复杂，多任务管理机制的重要细胞功能组织。显然我们对蛋白质泛素化丰富多彩的功能的进一步认识，将会涉及到生物化学和细胞生物学的其他方面。

因为泛素化对细胞工作的正常进行有重要的作用，当事情出错，有严重的后果。有缺陷的蛋白质泛素化在人类神经性疾病的发病机理中扮演着重要角色，例如帕金森氏症、阿兹海默症、亨廷顿症，在肌肉萎缩造成的恶病质，以及癌症中，例如致癌人乳头瘤病毒引起的宫颈癌和遗传Hippel-Lindau癌症综合症。因此，研究蛋白质泛素化最终能鉴定出新的治疗策略，即利用与治疗这些和其他人类疾病。

这一章中，我们将提供详细的通过免疫印迹的方法（Western blotting）来测定蛋白质的泛素化,最初是由将近二十年前的Haas和Bright发明的。如今，免疫印迹法由于它较高的特异性和灵敏度以及泛素化的蛋白质能被相对简单的检测出来仍然是测量蛋白质泛素化的首选技术。

2、材料

2.1样品处理

1、TNESV细胞溶解缓冲剂：50mM Tri-HCl，Ph7.5,1%v/v Nonidet P-40 detergent（润湿剂）, 2 mM EDTA,100 mM NaCl, 10 mM sodium orthovanadate（正

钒酸钠，是一种常用的磷酸酯酶抑制剂）,再加1 mM phenyl-methylsulfonyl fluoride （苯甲基磺酰氟）, 10 μg/mL of leupeptin（亮抑蛋白酶肽）, and 10 μg/mL of aprotinin （抑肽酶）or preprepared protease inhibitor （蛋白酶抑制剂）cocktail （混合物）tablets (Roche Molecular Biochemicals, Indianapolis,

IN).N-Acetyl-leucyl-leucyl-norleucinal (ALLnL) (100 mM) or other inexpensive proteasome inhibitor（蛋白酶体抑制剂）可以加入防止通过蛋白酶体的分解代谢后泛素化蛋白的减少and 10 mM iodoacetamide（碘乙酰胺）or 10 mM

N-ethylmaleimide（N顺丁二烯酰胺亚胺）can be included to inactivate

ubiquitin-cleaving isopeptidases (see Notes 1 and 2).

2、PBS：溶解8.0 g of NaCl, 0.2 g of KCl, 1.44 g of Na2HPO4,and 0.24 g of

KH2PO4 于大约800 mL 超纯水中, 用Hcl调节它的PH至7.4，然后加水至1L。

3、Reducing凝胶电泳上样缓冲液: 100 mM dithiothreitol (DTT), 50 mM Tris-HCl, pH 6.8,10% (w/v) sodium dodecyl sulfate (SDS), 10% (v/v) 丙三醇, 0.1% (w/v) (一小撮) 溴酚蓝染料. 在37°C水浴中加热and轻轻摇动以溶解SDS.

2.2免疫沉淀反应

1、抗体的选择：通过抗泛素（antiubiquitin）抗体来免疫共沉淀一种特定的泛素化蛋白是不切实际的，因为有丰富的自由的泛素分子。在多数情况下，这种蛋白将自动免疫沉淀以及凝胶电泳后的免疫印迹技术将会用来探索一种抗泛素（antiubiquitin）抗体。幸运的是，从商业资源方面现在大规模的从大量的不同物种中选择筛选单克隆抗体是可以的。大多数用于我们实验室的抗泛素化（antiubiquitin）抗体是做的不错的。

2、抗体复原缓冲液：无菌的PBS包含0.1%w/v 叠氮化钠做防腐剂，如果抗体不是已经溶解的话。

3、Protein A-coated Sepharose microbeads（琼脂糖蛋白A）：rehydra te Protein A-immobilized Sepharose（再水化凝胶固定化蛋白质A）CL-4B be ads (1.5 g) (Pharmacia Biotechnology, Piscataway, NJ, USA)，在50ml包含1%（w/v）牛血清蛋白的TNESV缓冲液中封闭过夜，4度保存并摇动保证小颗粒悬浮。用离心机离心beads 1000g 5min，然后用相同的缓冲液洗涤两次并且离心。20ug兔抗鼠免疫球蛋白加入到处理过的样品中。让他们在4度下再次摇动反应2个小时。最后用TNESV洗涤三次并4度下保存。

4、在共沉淀过程中，将混合物垂直安装在旋转器上。

2.3凝胶电泳

1、全尺寸的或微型凝胶电泳室和电力供应。

2、10%聚丙烯酰胺凝胶电泳：mix 10 mL of 30% (w/v) 丙烯酰胺0.8% (w/v)N, N’-methylene–bis-acrylamide mixture (ProtoGel, National Diagnostics, Atlanta,

GA),7.5 mL of 1.5 M Tris 缓冲液, pH 8.8, 12.5 mL of water, 0.3 mL of 10% w/v SDS, 0.1 mLof 10 % (w/v) 过硫酸铵溶液, and 20 μL of N, N, N',

N'-tetramethyl-ethylenediamine (TEMED) (Bio-Rad, Hercules, CA, USA), in this order. Precast gels arealso available from commercial suppliers (see Note 4).

3、饱和正丁醇溶液

4、Whatman3毫米纸

5、聚丙烯酰胺凝胶：mix 1.5 mL of 30% (w/v) acrylamide 0.8% (w/v)

bis-acrylamide mixture, 2.5 mL of 0.5 M Tris-HCl, pH 6.8, 6.0 mL of deionized water,0.1 mL of 10% (w/v) SDS, 0.1 mL of 10% (w/v) ammonium persulfate, and 8

μL of TEMED.

6、laemmli 样品凝胶负载缓冲液：80 mM Tri-HCl, adjusted to pH 6.8, 100 mM DTT,10% (w/v) SDS, 10% (v/v) glycerol, with a small amount (a pinch) of bromphenol blueindicator dye (~0.2% w/v)

7、Tris-glycine-SDS gel-running buffer: 25 mM Tris base, 192 mM glycine, 0.1% (w/v)SDS. Do not adjust the final pH, which should be approx 8.3.

8、预染的蛋白质的标准：分子量标准都可以从多种不同类型的商业的供应商。我们用预染的广泛蛋白的标准从250到10kDa明显的分子量。

2.4泛素化蛋白质电泳后转移到膜

1、垂直凝胶湿传递箱

2、采用PVDF膜的选择。

3、Towbin 湿转移缓冲液: 25 mM Tris, 0.15% (w/v) SDS，0.2 M 甘氨酸, and20% (v/v) 甲醇. 不用调节pH. For an alternative transfer buffer that isuseful for transferring free ubiquitin, as well as ubiquitinated proteins, use CAPS buffer:25 mM cyclohexylaminopropanesulfonic acid, pH 10.0, and 20% (v/v) methanol.

4、湿凝胶缓冲液：63 mM Tris base, pH 6.8, 2.3% (w/v) SDS, and 5% (v/v)

2-mercaptoethanol.

2.5泛素化蛋白质的高温活化

1、蒸压或热板烧开水

2、玻璃盘

2.6膜的封闭和探索泛素化蛋白的免疫印迹

1、封闭液：5% (w/v) 脱脂奶粉10 mM Tris-HCl, pH 7.5, 50 mM NaCl,2.5 mM 磷酸氢二钠EDTA with 0.1% (v/v) Tween-20 洗涤剂去污剂

2、TNE洗涤液：10 mM Tris-HCl, pH 7.5, 2.5 mM disodium EDTA, 50 mM NaClwith 0.05% (v/v) Tween-20 detergent

3、抗体稀释液：2.5% (w/v) 脱脂奶粉in TNE wash solution

4、HRP二抗可以来自几个商业生产厂家，记住HRP二抗必须与原抗体特异性结合。

5、Whatman 3毫米纸（滤纸？）

6、Luminol-based化学发光免疫印迹发展工具包

7、高质量胶片

8、胶片暗盒

9、漆黑的房间里,显影或一个自动开发者化学发光成像系统。

3、研究方法

大多数的调查人员研究细胞内蛋白质泛素化都依靠抗泛素免疫印迹检测泛素蛋白结合物。这里描述的免疫印迹的方法和变化都已经被修改，从最初的被Hass和Bright描述的免疫化学的泛素结合，被Wilkinson进行改进，检测特定蛋白基质的泛素化的第一次免疫沉淀反应的完成是来源于细胞裂解物的目标泛素化蛋白通过使用抗体针对个别蛋白质研究。另一种方法是（vector-generated）使用的表达载体产生抗原表位标记的泛素，例如：FLAG–ubiquitin, 血凝素

-ubiquitin or even Myc-ubiquitin，他们都是通过抗体免疫共沉淀，能够有效地辨认出抗原表位标记的泛素-substrate complex。

免疫沉淀样品进行SDS -聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS - PAGE）（10%或4–20%梯度凝胶），蛋白质经过电泳后被转移到硝酸纤维素或聚偏氟乙烯（PVDF）膜上。泛素化蛋白印迹后用抗泛素抗体孵育，与具有较高分子量形式的蛋白质进行免疫反应，位于印迹上方的底物蛋白，这些代表蛋白质的泛素化形式。泛素的表达在抗原表位标记的情况下，辨别泛素标记的抗体是用来作为主要探测。种匹配的HRP偶联的二抗与一抗进行反应，泛素化的蛋白和HRP偶联后条带可视，基于鲁米诺的化学发光反应。

3.1 样品准备

蛋白的聚泛素化很显著的缩短他们的半衰期是由于他们标记后被蛋白酶体快速消化，又或者，一些单泛素化细胞表面受体蛋白被溶酶体的蛋白水解酶吞噬并消化掉。此外，直线型或分支型的泛素链与蛋白的连接对于丰富的泛素化裂解同工肽酶很敏感。理论上整个蛋白泛素化的过程是可逆的，如组蛋白H2A和H2B 的单泛素化。所以，需要采取集中防范措施来保护泛素与蛋白在样品准备阶段不被意外断裂。这是很容易可以完成通过加入一些混合了几种蛋白酶抑制剂以及蛋白酶体抑制剂和巯基化的药物的细胞缓冲液去降低去泛素化的酶活的工作，（详见注释1、2）。

1．举例，细胞快要长满培养皿或培养瓶时，用冰凉的PBS轻轻的洗两遍，然后加入0.5-1ml加入了抑制剂的TNESV裂解液，放在冰上裂解20分钟。哺乳动物的悬浮细胞应该在生长中期通过离心分离，用PBS清洗两次并将离心管放在冰上裂解20min。在吸取了含有悬浮的细胞的PBS之后加入裂解液并充分混合，大约10秒。酵母菌可以直接放入加入了50mMN-ethylmaleimid e的纯乙醇中，加入玻璃珠充分混合几分钟。

2.裂解的细胞用刮刀从塑料表面刮掉（或从离心管中移出）并移入塑料小瓶中用离心机14000g离心20分钟。许多细胞质基质和从细胞内出来的泛素化蛋白可以在上层清夜中找到。那些底层的沉淀大多是染色质、细胞膜、细胞骨架蛋白、核基质和不能溶解的蛋白的综合。一些较大的泛素化蛋白可能会聚集到不能被温和型裂解液溶解，之后沉淀到下层沉淀中（23）。

3. 在分析蛋白并用电泳分离泛素化蛋白之前，应洗涤不溶性颗粒通过在裂解液中超声波破碎或通过机械乳化之后使其悬浮。当样品被加热后聚集的泛素化蛋白将会溶解可以减小其在电泳缓冲液中的阻力，如果要用单独的细胞膜碎片，也应该用超声波破碎（注释5）。

3.2 免疫沉淀反应

在进行免疫沉淀之前，首先要测定样品中的蛋白浓度。

1. 样品蛋白可以用1.5ml一次性带盖子离心管存放。所有的操作都是在冰上进

行的，并会用的冷藏离心机。或者，整个过程要在4摄氏度的环境下进行。

2. 分装到预先编号的管裂解。如果免疫印迹探测的是有针对性的定向蛋白，而

不是泛素的。由于只有小部分的特征蛋白在研究中被泛素化了，与正常被用到的蛋白相比极大量的蛋白将会被免疫沉淀。例如，50微克细胞裂解蛋白是足以免疫沉淀表皮生长因子受体在A431肿瘤细胞裂解物之前，表皮生长因子（EGF）受体免疫

3. 在样品中加入基本的免疫抗体，轻轻的上下倒置混合在冰上放置两小时以上。

这一步经常放置过夜。虽然抗体的最佳浓度取决于使用特定抗体的效率，通常1毫克的样品蛋白加入4—5ug的一抗就足够最大限度的降低泛素化的蛋白。

4. 在样品中加入二次免疫沉淀抗体，二次抗体通常是连接到一个支持诸如蛋白A或蛋

白质G-涂层树脂微球，抗体是针对同一物种和子同型作为一抗体。如果一抗体已从免疫兔血清被纯化，抗体抗原复合物，将直接绑定到蛋白A-琼脂糖凝胶而不需要辅助树脂抗体。每毫升细胞裂解液通常50–100μl抗体珠在一个1 : 1（珠悬浮液：PBS或裂解缓冲液）中，是足够的收集基本上所有的主要抗体–抗原复合物.当然、这取决于样品中抗体的数量。一些主要的抗体是可以重复连接到支持珠上，消除了二次抗体的需要而完成免疫沉淀。

5. 在免疫沉淀反应时，样品应不断地对垂直旋转机械搅拌，防止抗体结合沉淀

成珠。

6. 在4°C下离心1分钟得到球珠。

7. 仔细使用注射器和钝针头，吸管，或类似的装置吸取珠子上方的上清液体。

留下少量上清液而不吸走球珠。

8. 用1毫升混合好的的裂解液洗涤沉淀珠并且再次离心1分钟（10000g）。洗

涤缓冲液中包含的蛋白酶或蛋白酶抑制剂是可选的，通常没有必要，因为蛋白酶将会随着吸走的溶解液而流失。

9. 重复洗涤过程三次，共有四个清洗三次。

10. 洗脱免疫沉淀的蛋白免疫复合物从球珠洗至50–100μL，减少凝胶缓或样品

缓冲。

11. 涡旋混合样品，放入沸水浴或加热块中95°C，5分钟，然后冰上冷却10分

钟。

12. 离心样品1分钟在10000 g从洗脱的免疫沉淀蛋白中得到沉淀珠。

13. 通过凝胶电泳用电泳加样吸嘴吸取上清液。然后把所有样品或只有部分转移

到凝胶孔中。

3.3凝胶电泳

泛素化蛋白通常可以用（8％或10％的聚丙烯酰胺凝胶剂和Tris-甘氨酸-SDS凝胶缓冲液）标准单维SDS-PAGE分离。梯度凝胶被使用和分离超高分子量泛素蛋白。

1.免疫沉淀蛋白质从免疫沉淀抗体复合物中必须被释放，热变性和SDS-PAGE之前的线

性的mmli（Laemmli缓冲液系统）样品上样缓冲液。

2.商业，预制minigels（见注4）或常规14厘米14厘米1.5毫米凝胶在实验

室可以用来分离泛素化蛋白。10%分离胶，混合10ml30%（W/V）丙烯酰胺

0.8%（w/v），N,N’-亚甲基双丙烯酰胺混合，7.5ml 1.5M缓冲液PH=8.8，

12.5ml水，0.3ml 10%（w/v）SDS，0.1ml 10%（w/v）过硫酸铵溶液，和

20ulTEMED，按照顺序。灌胶至高度约为11.5cm，轻轻地将一层的饱和正丁醇（约0.5ml）加入到分离胶上面打破泡沫和排除氧气，这将减缓凝胶聚合。在凝胶固后（约1小时），吸取正丁醇，用去离子清洗凝胶，使用部分惠特曼毫米纸吸墨纸吸附任何剩余的水。插入一个梳在玻璃板之间形成孔，在分离胶上面倒2.5厘米4.5%浓缩胶。浓缩胶制备混合有1.5ml30%（w/v）丙烯酰胺0.8%（w/v）双丙烯酰胺混合，2.5毫升的缓冲液，PH值6.8，6l 去离子水，0.1ml10%（w/v），0.1ml10%（w/v）硫酸铵，8ulTEMED。浓缩胶聚合1小时或以上之后才可拆卸梳子，然后从里之外加入1*的电泳缓冲液。

3.给凝胶盒里加入凝胶电泳缓冲液约三分之一到二分之一，插入凝胶到盒子里，用电泳缓

冲液填补了上层缓冲液槽没过短板。

4. 使用电泳加样吸嘴小心加入免疫沉淀样品到底部的孔里。在一个孔内加上部

分的预染色的分子量标准品，监测电泳的进程，为随后的免疫印迹中检测抗Ub信号的样品跑道分子量提供参考估计。

5.对于10％minigels，使用恒压100-125v约1-1.5h;较大的传统的10％凝胶，

使用40-50v约12-14h过夜。过高的电压将会加热凝胶，并可能使条带扭曲。

电压越高（电泳速度越快），可以通过热交换设备制造循环的冷水使凝胶缓冲液变冷。

3.4 泛素蛋白转膜

根据经验，泛素化蛋白通过半干法从SDS聚丙烯酰胺凝胶上转移到硝酸纤维素膜通常不令人满意。这可能是因为聚泛素化蛋白分子量达到了300-400kd，并且它们不容易从高百分比的凝胶中洗提（elute）。我们强烈建议泛素化蛋白的从

凝胶上的转移通过用tris-glycine-SDS-methanol缓冲液的湿法转移（wettransfer），最初由Towbin介绍的。

1. 硝酸纤维素膜或聚偏二氟乙烯膜应该用1X的转移缓冲液或去离子水水化

1-2h。这将有助于最大限度的将泛素化蛋白固定在膜上。注意在浸泡PVDF 膜之前首先必须用甲醇湿润10s。

2. 全尺寸的凝胶应该在Towbin湿法转移缓冲液中用40-50V（通常~300mA）

的电流点转移16-20h（过夜）置于4摄氏度的冷藏盒或冷室中。Ub蛋白的从凝胶转移到膜上需要很少的时间，但是，还是应该转移过夜。

3. Ub蛋白从SDS聚丙烯酰胺凝胶上电转移效果可以被30min之前浸透了

2.3%SDS，5%2-巯基乙醇，63mmtris-HCl，pH 6.8加强。此步可选（见注

意6）。

3.5泛素化蛋白在免疫印迹上的热激活

这是很重要的一步当在用特定的抗泛素抗体时。在免疫印迹技术中蛋白的检测可以被显著的增强通过用去离子水高压灭菌30-40min的膜。膜上的泛素化蛋白也可以通过用75摄氏度烘箱加热被印记的膜被激活，通过煮沸的去离子水蒸印迹。或者通过在胍变性缓冲液中孵化膜

3.6 封闭和检测免疫印迹

1. 当膜已经被高压蒸汽热激活以后，它应该放入室温的去离子水冷却几分钟。

2. 室温下在托盘中轻轻地摇动膜2h，用足够的脱脂奶粉去封闭膜表面。膜可以

再冰箱里里封闭过夜。

3. 在室温下用一抗抗泛素抗体稀溶液孵化膜1-2h。把膜置于一抗溶液中在冷室

过夜并以恒定频率摇动（见注意3,8和9）。

4. 用1XTNE（三羟甲基氨基甲烷氯化钠EDTA缓冲剂）清洗缓冲液洗膜30min 洗五次。如果膜洗的时间更长一点的话没什么问题。

5. 用适当的HRP偶联的二抗稀释液孵化膜，在“抗体稀释液”轻轻摇动1-2h。

6. 重复在第四步中描述的清洗步骤。

7.从洗液中取出膜并用双叶的3mm的绘图纸将膜夹住，轻轻地吸取少量的多余

的清洗缓冲液几秒钟。

8、免疫印迹膜沉浸在一个小体积的新鲜鲁米诺的化学发光显影剂中，柔和的摇

摆1分钟。根据制造商的指示混合同等体积的试剂A和试剂B 。

9、用钝钳取出膜，使过剩的溶液流10–15s，用绘图纸吸干印迹过剩试剂，把膜

密封在一个透明塑料袋或塑料包装里。

10、把保护膜粘在胶片的下面在黑暗的房间进行曝光免疫印迹。第一次曝光应

为5或10秒；然后时间较长或较短，取决于第一次的好坏。

11、泛素化形式的蛋白比未转化的目标蛋白通过凝胶迁移更为缓慢，最好间隔约

为8KDa相对于上一位置，经过科学研究，反应的是泛素分子的连续。在许多情况下，然而，泛素化蛋白，特别是如果他们在多个位点被泛素化，将可视化作为一个涂片向上延伸到凝胶顶部。

12、如果单体泛素被测量，应注意预防当它在SDS-PAGE电泳迁移时从凝胶电

泳流失作为好像它是一个5-或6-KDa的蛋白。

13、如果我们研究的蛋白质之前没有被泛素化，利用一或两种抗体最好是不同

源的，检验阳性反应是个不错的想法。

抗泛素化免疫印迹。在（A），MCF-7人类肿瘤细胞用蛋白酶抑制剂处理过，硼替佐米（PS-341）50nM在不同时期的。蛋白酶抑制剂，细胞裂解到TNESV裂解液（蛋白分解抑制剂）中和20ug澄清的细胞裂解液受到SDS-PAGE电泳，电转移到硝酸纤维素膜上并且进行免疫印迹。泛素化急剧增加的蛋白，通常会被蛋白酶体清除。（B）的A431人类肿瘤细胞经5uM格尔德霉素（GA）或5μmolGA和10μM的乳胞素（LC）处理24小时（见注14）。细胞被裂解后和表皮生长因子受体从1.0mg裂解蛋白（使用抗表皮生长因子受体的抗体）免疫沉淀出来，电泳，转膜免疫印迹检测泛素。在这两种免疫印迹，都是通过化学发光来显影。

结论：

在过去几年中有关蛋白质泛素化的初级的研究论文和评论出版物的里量程指数级增长。例如，在泛素连接酶与他们底物的配对方面取得了很大的进展。然而，尽管众所周知，VHL—基因合成泛素Hif-1a，泛素MDM2和CbI泛素化EGF的受体有几百个泛素与未知的基质连接。其他重要的激动人心的发现推动蛋白质泛素化到了一个意料之外的和不可预测的新领域：（1）泛素化在逆转录病毒的传染性方面扮演了一个很重要的角色，包括HIV病毒；（2）泛素化可以在无论有没有蛋白质水解的作用下激活以及失活某些逆转录因子；（3）转接蛋白质通过泛素连接到规范的单一泛素的细胞膜受体上；（4）组蛋白H2B单一泛素信号补充一个甲基转移酶来给出到甲醇化物组蛋白H3和端粒沉默。鉴于这些发现，未来发现泛素化蛋白质参与其他新的细胞功能就不会显得很让人惊讶。

就与泛素化有关的疾病，试图通过以野性型或突变的结合的泛素E2和E3酶小分子为目标可能很快会有新的有效地治疗恶性肿瘤或蛋白质错误折叠导致的疾

病。另一方面，现在通过使用蛋白酶体抑制剂来阻止泛素化蛋白质的退化对于多发性骨髓瘤癌和可能的其他癌症来说使用一种新的疗法。通过免疫印迹法测定蛋白质泛素化的优点是将继续为研究者提供一些结果去回答一些重要的问题，这也可能会促进有效治疗人类疾病方法的产生。

4. 注释

1. 在细胞裂解物阻碍酶促脱泛素。包含肽醛蛋白酶抑制剂例如

N-acetyl-leucyl-leucyl-norleucinal (ALLnL)或Z-leucylleucyl-leucyl-CHO

(MG132)样品准备期间在细胞中50 υM细胞裂解液将会排除不必要的蛋白酶体对泛素化蛋白的消化。虽然clasto-lactacystin会更有效并是不可逆转的蛋白酶体抑制剂，但是实际应用太过昂贵。细胞同样包含两种主要的特异的泛素硫醇蛋白酶家族，一种叫Ubp（泛素处理蛋白酶）和Uch（泛素C端水解酶）。

这些酶可以将细胞中和细胞裂解物正的泛素和蛋白裂解开。包含硫醇反应的N-ethylmaleimide或碘乙酸的10mm裂解液将阻止去泛素化酶通过烷基化它们的活性位点半胱氨酸残基。已经报道这种酶也对锰离子敏感，并且在试管里加入5mm锰离子将抑制它们的去泛素化反应。泛素醛，可以通过商业途径得到的，是另一种有效的去泛素化抑制剂，经常被用在防止意外的去泛素化。

冷却所有的缓冲液和细胞裂解物并将小瓶放在冰上同样是为了抑制去泛素化酶的反应。

2. 用蛋白酶体抑制剂来促进细胞对泛素化蛋白的积累。细胞中的蛋白媒体抑制

使通常通过泛素蛋白酶体通道快速裂解的蛋白稳定。蛋白酶体的抑制是绝对必要的对检验几种存在时间极短的蛋白。100umALLnL，50umMG132，或10 υM clastolactacystin在培养中对通过细胞质膜和保护泛素化蛋白不被蛋白酶体裂解是很有效的。因为ALLnL除了抑制蛋白酶之外同样抑制钙激活酶

（calpains），由于N-acetyl-Leu-Leu-Met-H peptide 抑制组织蛋白酶和钙激活酶的反应，但没有抑制蛋白酶体，所以被用作负控制以排除参与蛋白质水解的两个通道之一。最近，

13.泛素化的确认。当第一次检验蛋白是否泛素化时，通过利用一或两种其他抗泛素化抗体检验分离的免疫印迹来验证首次的结果是个好的想法。最好抗体来自不同物种，因为被认为有不同的泛素结合位点。另一种确认的方法是用含有温度敏感突变的E1泛素激活酶的细胞，使这些细胞表达在研究中的特定的蛋白。当温度敏感突变E1细胞，如ts-20或ts-85，加热温度有许可温度33度到非许可温度39，那么E1酶将变得不稳定并不再激活泛素，蛋白泛素化的第一步。在研究中的蛋白泛素化已经被证明，通过观察在非许可温度下温度敏感细胞温浴4h后的免疫印迹中蛋白泛素化的严重减少证明。

1外文文献翻译原文及译文汇总

华北电力大学科技学院 毕业设计（论文）附件 外文文献翻译 学号：121912020115姓名：彭钰钊 所在系别：动力工程系专业班级：测控技术与仪器12K1指导教师：李冰 原文标题：Infrared Remote Control System Abstract 2016 年 4 月 19 日

红外遥控系统 摘要 红外数据通信技术是目前在世界范围内被广泛使用的一种无线连接技术，被众多的硬件和软件平台所支持。红外收发器产品具有成本低，小型化，传输速率快，点对点安全传输，不受电磁干扰等特点，可以实现信息在不同产品之间快速、方便、安全地交换与传送，在短距离无线传输方面拥有十分明显的优势。红外遥控收发系统的设计在具有很高的实用价值，目前红外收发器产品在可携式产品中的应用潜力很大。全世界约有1亿5千万台设备采用红外技术，在电子产品和工业设备、医疗设备等领域广泛使用。绝大多数笔记本电脑和手机都配置红外收发器接口。随着红外数据传输技术更加成熟、成本下降，红外收发器在短距离通讯领域必将得到更广泛的应用。 本系统的设计目的是用红外线作为传输媒质来传输用户的操作信息并由接收电路解调出原始信号，主要用到编码芯片和解码芯片对信号进行调制与解调，其中编码芯片用的是台湾生产的PT2262，解码芯片是PT2272。主要工作原理是：利用编码键盘可以为PT2262提供的输入信息，PT2262对输入的信息进行编码并加载到38KHZ的载波上并调制红外发射二极管并辐射到空间，然后再由接收系统接收到发射的信号并解调出原始信息，由PT2272对原信号进行解码以驱动相应的电路完成用户的操作要求。 关键字：红外线；编码；解码；LM386；红外收发器。 1 绪论

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中等分辨率制备分离的 快速色谱技术 W. Clark Still,* Michael K a h n , and Abhijit Mitra Departm(7nt o/ Chemistry, Columbia Uniuersity,1Veu York, Neu; York 10027 ReceiLied January 26, 1978 我们希望找到一种简单的吸附色谱技术用于有机化合物的常规净化。这种技术是适于传统的有机物大规模制备分离，该技术需使用长柱色谱法。尽管这种技术得到的效果非常好，但是其需要消耗大量的时间，并且由于频带拖尾经常出现低复原率。当分离的样本剂量大于1或者2g时，这些问题显得更加突出。近年来，几种制备系统已经进行了改进，能将分离时间减少到1-3h，并允许各成分的分辨率ΔR f≥（使用薄层色谱分析进行分析）。在这些方法中，在我们的实验室中，媒介压力色谱法1和短柱色谱法2是最成功的。最近，我们发现一种可以将分离速度大幅度提升的技术，可用于反应产物的常规提纯，我们将这种技术称为急骤色谱法。虽然这种技术的分辨率只是中等（ΔR f≥），而且构建这个系统花费非常低，并且能在10-15min内分离重量在的样本。4 急骤色谱法是以空气压力驱动的混合介质压力以及短柱色谱法为基础，专门针对快速分离，介质压力以及短柱色谱已经进行了优化。优化实验是在一组标准条件5下进行的，优化实验使用苯甲醇作为样本，放在一个20mm*5in.的硅胶柱60内，使用Tracor 970紫外检测器监测圆柱的输出。分辨率通过持续时间（r）和峰宽（w,w/2）的比率进行测定的（Figure 1），结果如图2-4所示，图2-4分别放映分辨率随着硅胶颗粒大小、洗脱液流速和样本大小的变化。

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避免空化 正如14 页所讲的,当控制阀中压力比XF小于所有工况下相应的XFZ值时，空化得到避免。如果操作压力比XF可以通过巧妙的设备布置保持较小的值，那么控制阀的选择决定了是否压力比XF

许控制。蝶阀和旋塞阀略胜一筹，而线性阀在没有任何空化甚至在旋塞设计合理的高压力比情况下允许控制。 为减少(图16)气蚀和多级轴向插头控制阀可配备防空蚀设计 (图17)在这里特别提一下。 如图16所示的系统。是一个阀座和阀芯设计，该设计是为了空化发生的的多种情况和现有阀门专门开发和设计的。设计经过一系列的流程模拟分析和密集的测试被进行了优化。旋塞在阀体内双向引导，以防止机械振动。旋塞的轮廓被设计成了更好的流动特性。阀座直径没有减少是为了保持液压直径尽可能小。结合阀座和旋塞的特殊形状，这是特别有效的。此外，四个衰减板中最大的一个可集成到阀座，另外增加高负荷阀[18] XFZ值。

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外文文献及翻译 题目：利用固定化过氧化氢酶 回收纺织品漂染的废水 专业食品科学与工程 学生姓名梁金龙 班级B食品072 学号0710308119 指导教师郑清

利用固定化过氧化氢酶回收纺织品漂染的废水 Silgia A. Costa1, Tzanko Tzanov1, Filipa Carneiro1, Georg M. Gübitz2 &Artur Cavaco-Paulo1,? 1纺织工程系, 米尼奥大学, 4810吉马尔, 葡萄牙 2环境生物技术系, 格拉茨技术大学, 8010格拉茨, 奥地利 ?作者联系方式(Fax: +351 253 510293; E-mail: artur@det.uminho.pt) 关键词：过氧化氢酶的固定化，酶稳定，过氧化氢，纺织印染 摘要 过氧化氢酶固定在氧化铝载体上并用戊二醛交联，在再循环塔反应器和CSTR反应器中研究贮存稳定性，温度和pH值对酶的活性。固定化酶的在的活性维持在44％，pH值11（30?C），对照组是活性为90％，pH值7（80?C），过氧化氢酶固定化的半衰期时间被提高到2小时（pH12，60?C）。用过氧化氢漂白织物后，洗涤过程中的残留水被固定化酶处理，可以用于再次印染时，记录实验数据。 1 序言 由于新的法规的出台，从生态经济的角度来看（Dickinson1984年），对于纺织行业中存在的成本和剩余水域的污染问题，必须给予更多的关注。过氧化氢是一种漂白剂，广泛应用于工业纺织工艺（Spiro & Griffith1997年）。在去除H2O2时，会消耗大量的水和能源（Weck 1991, St?hr & Petry 1995），以避免对氧气敏感的染料（Jensen 2000）产生后续问题。过氧化氢酶可用于降低过氧化氢的含量（Vasudevan & Thakur 1994, Emerson et al. 1996），从而减少水分消耗或方便回收印染洗涤液。过氧化氢酶的使用主要问题出在漂白时温度和清洗液碱度过高。以前，我们试图通过筛选新的嗜热嗜碱的微生物（Paar et al. 2001）或使用不同的酶稳定剂（Costa et al. 2001）来解决此问题。但是染料与蛋白质之间的潜在相互作用（Tzanov et al. 2001a, b）表明，可溶性过氧化氢酶的使用是不恰当的。固定化过氧化氢酶的使用还有一种选择(Costa et al. 2001, Amar et al. 2000)。在这项研究中，我们对氧化铝进行共价固定并使用戊二醛作为交联剂，这种方法在商业中得到验证。本项研究的目的就是探讨过氧化氢酶的固定化动力学，及其稳定性和工艺条件，这将使我们能够应用此系统，以处理可能被用于清洗染色的反复使用的酒。 2 材料和方法 2.1 酶 Terminox（EC1.11.1.6），50L以上，由AQUITEX- Maia提供，葡萄牙产。 2.2 过氧化氢酶的固定化 取Al2O3颗粒或薄片（Aldrich），直径分别为3和7毫米，在45摄氏度下，先经浓度4%的γ-氨丙基三乙氧基硅烷(Sigma)烷基化，再放入丙酮中浸泡24小时。用蒸馏水洗涤硅烷化载体后，放入浓度为2％戊二醛水溶液中室温下浸泡2小时（Aldrich），重复清洗一次并在60?C下干燥1小时。取五克的烷基化载体，室温24?C下浸泡在25毫升粗酶制剂中（Costa et al. 2001）。得出，每克Al2O3

英文文献译文word版

资产重估或减值准备：了解占固定资产在Release 12 布赖恩·刘易斯 eprentise 介绍 显著的变化在财务报告的要求已经改变的固定资产核算框架公司。国际财务报告准则（IFRS）要求的固定资产进行初步按成本入账，但有两种会计模式-成本模式计量的重估模式。那么，有什么区别，当你应该考虑升值与减值？没有R12带给固定资产哪些重要变化？ 国际财务报告准则和美国公认会计准则报告的甲骨文?电子商务套件但很显然，美国证券交易委员会（SEC）将不会要求美国公司使用国际财务报告准则在不久的将来，大多数玩家在资本市场倾向于认为它是不可避免的，将国际财务报告准则最终成为美国的财务报告环境的更显著的部分。这实际上是对发生的程度，超过400基于在美国以外的全球企业都被允许提交美国证券交易所（SEC）的财务报告（10K和10Q -通常被称为年度/季度财务报告）。为海外谁也不在美国的证券交易委员会提交的公司，国际财务报告准则正在成为金融世界标准报 告。对于谁住在多个资本市场运作的公司，有可能实际上是一个双重报告要求国际财务报告准则和美国公认会计原则（公认会计原则）的财务报表。与11i版，随后与12版时，Ora cle?电子商务套件（EBS）添加功能让用户生活在两个国际财务报告准则和美国公认会计准则的世界。这两个报告之间的差异框架是广泛的，但对于本白皮书的目的，我们将专注于固定资产中核算EBS -特别是资产重估或减值。

根据美国公认会计准则，固定资产乃按历史成本，然后以折旧出售或剩余价值。如果有某些迹象表明固定资产的变现价值造成负面改变，则该资产写下来，损失记录。这被称为减值。根据国际财务报告准则，财务报表发行人有权选择成本模式（这是大多数方面的选项类似美国公认会计原则机型）或重估模式（其中有没有下的并行报告美国公认会计原则）。根据重估模式，固定资产可定期写入，以反映公平市场价值- 这是专门美国公认会计原则和美国证券交易委员会的权威所禁止的东西。本白皮书的平衡都将与美国公认会计原则下，专注于固定资产重估及减值国际财务报告准则。在此之前潜水深入到这个问题，它通过R12的与固定的新特性列表来运行是非常有用的资产。 在12版的新功能和变更功能的固定资产 神谕 ? 电子商务套件（EBS）R12有许多有用的新功能，其中许多以固定发了言资产，包括： ? 明细分类账会计（SLA）的体系结构- Oracle资产管理系统完全与SLA 集成，允许 为一个单一的交易或商业活动的多个会计交涉。

外文文献翻译助手

五分钟搞定5000字－外文文献翻译 在科研过程中阅读翻译外文文献是一个非常重要的环节，许多领域高水平的文献都是外文文献，借鉴一些外文文献翻译的经验是非常必要的。由于特殊原因我翻译外文文献的机会比较多，慢慢地就发现了外文文献翻译过程中的三大利器：Google“翻译”频道、金山词霸（完整版本）和CNKI“翻译助手"。 具体操作过程如下： 1.先打开金山词霸自动取词功能，然后阅读文献； 2.遇到无法理解的长句时，可以交给Google处理，处理后的结果猛一看，不堪入目，可是经过大脑的再处理后句子的意思基本就明了了； 3.如果通过Google仍然无法理解，感觉就是不同，那肯定是对其中某个“常用单词”理解有误，因为某些单词看似很简单，但是在文献中有特殊的意思，这时就可以通过CNKI的“翻译助手”来查询相关单词的意思，由于CNKI的单词意思都是来源与大量的文献，所以它的吻合率很高。 另外，在翻译过程中最好以“段落”或者“长句”作为翻译的基本单位，这样才不会造成“只见树木，不见森林”的误导。 注： 1、Google翻译：https://www.sodocs.net/doc/f12228836.html,/language_tools google，众所周知，谷歌里面的英文文献和资料还算是比较详实的。我利用它是这样的。一方面可以用它查询英文论文，当然这方面的帖子很多，大家可以搜索，在此不赘述。回到我自己说的翻译上来。下面给大家举个例子来说明如何用吧 比如说“电磁感应透明效应”这个词汇你不知道他怎么翻译， 首先你可以在CNKI里查中文的，根据它们的关键词中英文对照来做，一般比较准确。

在此主要是说在google里怎么知道这个翻译意思。大家应该都有词典吧，按中国人的办法，把一个一个词分着查出来，敲到google里，你的这种翻译一般不太准，当然你需要验证是否准确了，这下看着吧，把你的那支离破碎的翻译在google里搜索，你能看到许多相关的文献或资料，大家都不是笨蛋，看看，也就能找到最精确的翻译了，纯西式的！我就是这么用的。 2、CNKI翻译：https://www.sodocs.net/doc/f12228836.html, CNKI翻译助手，这个网站不需要介绍太多，可能有些人也知道的。主要说说它的有点，你进去看看就能发现：搜索的肯定是专业词汇，而且它翻译结果下面有文章与之对应（因为它是CNKI检索提供的，它的翻译是从文献里抽出来的），很实用的一个网站。估计别的写文章的人不是傻子吧，它们的东西我们可以直接拿来用，当然省事了。网址告诉大家，有兴趣的进去看看，你们就会发现其乐无穷！还是很值得用的。https://www.sodocs.net/doc/f12228836.html, 3、网路版金山词霸（不到1M）：https://www.sodocs.net/doc/f12228836.html,/6946901637944806 翻译时的速度： 这里我谈的是电子版和打印版的翻译速度，按个人翻译速度看，打印版的快些，因为看电子版本一是费眼睛，二是如果我们用电脑，可能还经常时不时玩点游戏，或者整点别的，导致最终SPPEED变慢，再之电脑上一些词典（金山词霸等）在专业翻译方面也不是特别好，所以翻译效果不佳。在此本人建议大家购买清华大学编写的好像是国防工业出版社的那本《英汉科学技术词典》，基本上挺好用。再加上网站如：google CNKI翻译助手，这样我们的翻译速度会提高不少。 具体翻译时的一些技巧（主要是写论文和看论文方面） 大家大概都应预先清楚明白自己专业方向的国内牛人，在这里我强烈建议大家仔

文献翻译

基于结合倾斜光纤光栅的细芯光纤模式转换的反射液位传 感器 Bobo Gu, Wenliang Qi, Yanyan Zhou, Zhifang Wu, Perry Ping Shum ,and Feng Luan 摘要 提出并实验证明基于结合倾斜光纤光栅的细芯光纤模式转换的简单反光液位传感器。一块细芯光纤包含了一个倾斜光纤光栅，保证纤芯模和包层模之间的模式转换。外部液体可诱导包层模式转换为辐射模式，导致收集到的包层模能量的衰减，即可通过测量包层模式能量测得液位。对模式转换的提出结构进行理论上的分析。实验结果显示，提出的传感器具备很高的液位灵敏度且耐温性好，它的重大优点在于它的测量范围不受倾斜光纤光栅本身长度的限制。 OCIS代码：(060.2310) Fiber optics; (060.2370) Fiber optics sensors; (060.3735) Fiber Bragg gratings 参考文献 1. K. O. Hill and G. Meltz, “Fiber Bragg grating technology fundamentals and overview,” J. Lightwave Technol.15(8), 1263–1276 (1997). 2. J. Albert, L. Y. Shao, and C. Caucheteur, “Tilted fiber Bragg grating sensors,” Laser Photonics Rev. 7(1), 83–108 (2013). 3. B. Gu, W. Qi, J. Zheng, Y. Zhou, P. P. Shum, and F. Luan, “Simple and compact reflective refractometer based on tilted fiber Bragg grating inscribed in thin-core fiber,” Opt. Lett. 39(1), 22–25 (2014). 4. L. Rindorf, J. B. Jensen, M. Dufva, L. H. Pedersen, P. E. H?iby, and O. Bang, “Photonic crystal fiber long-period gratings for biochemical sensing,” Opt. Express 14(18), 8224–8231 (2006). 5. G. F. Yan, A. P. Zhang, G. Y. Ma, B. H. Wang, B. Kim, J. Im, S. L. He, and Y. Chung, “Fiber-optic acetylene gas sensor based on microstructured optical fiber Bragg gratings,” IEEE Photonics Technol. Lett. 23(21), 1588–1590 (2011). 6. B. Gu, M. J. Yin, A. P. Zhang, J. W. Qian, and S. L. He, “Optical fiber relative humidity sensor based on FBG incorporated thin-core fiber modal interferometer,” Opt. Express 19(5), 4140–4146 (2011). 7. B. F. Yun, N. Chen, and Y. P. Cui, “Highly sensitive liquid-level sensor based on etched fiber Bragg grating,”IEEE Photonics Technol. Le tt. 19(21), 1747–1749 (2007). 8. T. Guo, Q. D. Zhao, Q. Y. Dou, H. Zhang, L. F. Xue, G. L. Huang, and X. Y. Dong, “Temperature-insensitive fiber Bragg grating liquid-level sensor based on bending cantilever beam,” IEEE Photonics Technol. Lett.17(11), 2400–2402 (2005). 9. S. Khaliq, S. W. James, and R. P. Tatam, “Fiber-optic liquid-level sensor using a long-period grating,” Opt. Lett.26(16), 1224–1226 (2001).

英文文献及中文翻译

毕业设计说明书 英文文献及中文翻译 学院：专 2011年6月 电子与计算机科学技术软件工程

https://www.sodocs.net/doc/f12228836.html, Overview https://www.sodocs.net/doc/f12228836.html, is a unified Web development model that includes the services necessary for you to build enterprise-class Web applications with a minimum of https://www.sodocs.net/doc/f12228836.html, is part of https://www.sodocs.net/doc/f12228836.html, Framework,and when coding https://www.sodocs.net/doc/f12228836.html, applications you have access to classes in https://www.sodocs.net/doc/f12228836.html, Framework.You can code your applications in any language compatible with the common language runtime(CLR), including Microsoft Visual Basic and C#.These languages enable you to develop https://www.sodocs.net/doc/f12228836.html, applications that benefit from the common language runtime,type safety, inheritance,and so on. If you want to try https://www.sodocs.net/doc/f12228836.html,,you can install Visual Web Developer Express using the Microsoft Web Platform Installer,which is a free tool that makes it simple to download,install,and service components of the Microsoft Web Platform.These components include Visual Web Developer Express,Internet Information Services (IIS),SQL Server Express,and https://www.sodocs.net/doc/f12228836.html, Framework.All of these are tools that you use to create https://www.sodocs.net/doc/f12228836.html, Web applications.You can also use the Microsoft Web Platform Installer to install open-source https://www.sodocs.net/doc/f12228836.html, and PHP Web applications. Visual Web Developer Visual Web Developer is a full-featured development environment for creating https://www.sodocs.net/doc/f12228836.html, Web applications.Visual Web Developer provides an ideal environment in which to build Web sites and then publish them to a hosting https://www.sodocs.net/doc/f12228836.html,ing the development tools in Visual Web Developer,you can develop https://www.sodocs.net/doc/f12228836.html, Web pages on your own computer.Visual Web Developer includes a local Web server that provides all the features you need to test and debug https://www.sodocs.net/doc/f12228836.html, Web pages,without requiring Internet Information Services(IIS)to be installed. Visual Web Developer provides an ideal environment in which to build Web sites and then publish them to a hosting https://www.sodocs.net/doc/f12228836.html,ing the development tools in Visual Web Developer,you can develop https://www.sodocs.net/doc/f12228836.html, Web pages on your own computer.

快速外文文献翻译

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英文文献及其翻译

步进电机的知识 什么是步进电机： 步进电机是一种把电脉冲转化为角位移的执行机构。通俗的说：当驱动程序收到一个步进脉冲信号，将驱动步进电机轴旋转一个固定的角度（步进角）。您可以通过控制脉冲个数来控制角位移，从而达到准确定位的目的;同时，你可以通过控制脉冲频率来控制电机的旋转速度和加速度，实现速度控制的目的。 步进电机的种类： 步进电机分为三种：永磁式（PM），反应式（VR）和混合式（HR）永磁式步进电机一般为两相，转矩和体积较小，步进角一步7.5度或15度;反应式一般有三相可以实现大转矩输出，步进角一般是1.5度，但噪声和振动大。在欧洲和美洲80个国家已被淘汰;混合式步进是混合了永磁式和反应的优势。它由两相和五相：一般两相的步距角是1.8度，而的五相步距角为0.72度。是使用最广泛的的步进电机。 步进电机允许的最高表面温度 步进电机温度过高首先会的磁性材料退磁，导致转矩降低甚至失步，电机表面温度允许的最大值取决于的磁性材料退磁点;一般来说，磁性材料退磁点在摄氏130度以上有些材料甚至高达摄氏200度高，所以步进电机表面温度在摄氏80-90度是正常的。 步进电机精度为多少？是否累积 一般步进电机的精度为步进角的3-5%，且不累积 如何确定步进电机驱动器直流电源 A.电压确定 混合式步进电机驱动器的电源电压范围较广（比如IM483的供电电压12?48VDC），电源电压通常根据电机的转速和响应要求来选择。如果要求较快的运行速度较高的响应速度就选用较高的电压，但注意电源电压的峰值不能超过驱动器的最大输入电压，否则可能会损坏驱动器。 B.电流确定 电源电流一般根据输出相电流I来确定。如果采用线性电源，电源电流一般可取I的1.1?1.3倍;如果采用开关电源，电源电流一般可取I的1.5?2.0倍。 步进电机的主要特性 在步进电机关机时要确保没有脉冲信号，当电机运行时 如果加入适当的脉冲信号，它会转过一定的角度（称为步距角是）。转速与脉冲频率成正比。 2龙式步进电机步距角7.5度，旋转360度，需要48个脉冲来完成。 3步进电机具有快速启动和停止的优良特性。 4只要改变脉冲，可以很容易地改变电机轴旋转的方向。 因此，目前的打印机，绘图仪，机器人设备以步进电机作为动力核心。 步进电机控制的例子 我们以四相单极步进电机为例： 四个相绕组引出四个相和两个公共线（连接到正极）。一相接地。会被激发，。我们使用四相八拍控制，即第1阶段第2阶段交替反过来，会提高分辨率。步距角0.9°，可以转移到控制电机励磁是为了转移如下： 如果电机反转的要求，传输的激励信号可以逆转的。2控制方案 控制系统框图如下

英文文献1 翻译

目录 1.理论............................................... - 2 - 2.实施............................................... - 3 - 3. 范例.............................................. - 4 - 4.变化和扩展......................................... - 6 - 4.1 利用梯度方向，以减少参数...................... - 6 - 4.2 Hough变换的内核............................... - 6 - 4.3Hough曲线变换与广义Hough变换.................. - 6 - 4.4 三维物体检测（平面和圆柱）.................... - 6 - 4.5 基于加权特征.................................. - 7 - 4.6 选取的参数空间................................ - 7 - 4.6.1 算法实现一种高效椭圆检测................ - 8 - 5.局限性............................................. - 8 - 6. 参见.............................................. - 8 - 参考文献............................................. - 9 - 附件: ............................................... - 10 -

土木工程类外文文献翻译

外文文献翻译 1 中文翻译 1.1钢筋混凝土 素混凝土是由水泥、水、细骨料、粗骨料（碎石或；卵石）、空气，通常还有其他外加剂等经过凝固硬化而成。将可塑的混凝土拌合物注入到模板内，并将其捣实，然后进行养护，以加速水泥与水的水化反应，最后获得硬化的混凝土。其最终制成品具有较高的抗压强度和较低的抗拉强度。其抗拉强度约为抗压强度的十分之一。因此，截面的受拉区必须配置抗拉钢筋和抗剪钢筋以增加钢筋混凝土构件中较弱的受拉区的强度。 由于钢筋混凝土截面在均质性上与标准的木材或钢的截面存在着差异，因此，需要对结构设计的基本原理进行修改。将钢筋混凝土这种非均质截面的两种组成部分按一定比例适当布置，可以最好的利用这两种材料。这一要求是可以达到的。因混凝土由配料搅拌成湿拌合物，经过振捣并凝固硬化，可以做成任何一种需要的形状。如果拌制混凝土的各种材料配合比恰当，则混凝土制成品的强度较高，经久耐用，配置钢筋后，可以作为任何结构体系的主要构件。 浇筑混凝土所需要的技术取决于即将浇筑的构件类型，诸如：柱、梁、墙、板、基础，大体积混凝土水坝或者继续延长已浇筑完毕并且已经凝固的混凝土等。对于梁、柱、墙等构件，当模板清理干净后应该在其上涂油，钢筋表面的锈及其他有害物质也应该被清除干净。浇筑基础前，应将坑底土夯实并用水浸湿6英寸，以免土壤从新浇的混凝土中吸收水分。一般情况下，除使用混凝土泵浇筑外，混凝土都应在水平方向分层浇筑，并使用插入式或表面式高频电动振捣器捣实。必须记住，过分的振捣将导致骨料离析和混凝土泌浆等现象，因而是有害的。 水泥的水化作用发生在有水分存在，而且气温在50°F以上的条件下。为了保证水泥的水化作用得以进行，必须具备上述条件。如果干燥过快则会出现表面裂缝，这将有损与混凝土的强度，同时也会影响到水泥水化作用的充分进行。 设计钢筋混凝土构件时显然需要处理大量的参数，诸如宽度、高度等几何尺寸，配筋的面积，钢筋的应变和混凝土的应变，钢筋的应力等等。因此，在选择混凝土截面时需要进行试算并作调整，根据施工现场条件、混凝土原材料的供应情况、业主提出的特殊要求、对建筑和净空高度的要求、所用的设计规范以及建筑物周围环

数字信号处理英文文献及翻译

数字信号处理 一、导论 数字信号处理（DSP）是由一系列的数字或符号来表示这些信号的处理的过程的。数字信号处理与模拟信号处理属于信号处理领域。DSP包括子域的音频和语音信号处理，雷达和声纳信号处理，传感器阵列处理，谱估计，统计信号处理，数字图像处理，通信信号处理，生物医学信号处理，地震数据处理等。 由于DSP的目标通常是对连续的真实世界的模拟信号进行测量或滤波，第一步通常是通过使用一个模拟到数字的转换器将信号从模拟信号转化到数字信号。通常，所需的输出信号却是一个模拟输出信号，因此这就需要一个数字到模拟的转换器。即使这个过程比模拟处理更复杂的和而且具有离散值，由于数字信号处理的错误检测和校正不易受噪声影响，它的稳定性使得它优于许多模拟信号处理的应用（虽然不是全部）。 DSP算法一直是运行在标准的计算机，被称为数字信号处理器（DSP）的专用处理器或在专用硬件如特殊应用集成电路（ASIC）。目前有用于数字信号处理的附加技术包括更强大的通用微处理器，现场可编程门阵列（FPGA），数字信号控制器（大多为工业应用，如电机控制）和流处理器和其他相关技术。 在数字信号处理过程中，工程师通常研究数字信号的以下领域：时间域（一维信号），空间域（多维信号），频率域，域和小波域的自相关。他们选择在哪个领域过程中的一个信号，做一个明智的猜测（或通过尝试不同的可能性）作为该域的最佳代表的信号的本质特征。从测量装置对样品序列产生一个时间或空间域表示，而离散傅立叶变换产生的频谱的频率域信息。自相关的定义是互相关的信号本身在不同时间间隔的时间或空间的相关情况。 二、信号采样 随着计算机的应用越来越多地使用，数字信号处理的需要也增加了。为了在计算机上使用一个模拟信号的计算机，它上面必须使用模拟到数字的转换器（ADC）使其数字化。采样通常分两阶段进行，离散化和量化。在离散化阶段，信号的空间被划分成等价类和量化是通过一组有限的具有代表性的信号值来代替信号近似值。 奈奎斯特-香农采样定理指出，如果样本的取样频率大于两倍的信号的最高频率，一个信号可以准确地重建它的样本。在实践中，采样频率往往大大超过所需的带宽的两倍。 数字模拟转换器（DAC）用于将数字信号转化到模拟信号。数字计算机的使用是数字控制系统中的一个关键因素。 三、时间域和空间域 在时间或空间域中最常见的处理方法是对输入信号进行一种称为滤波的操作。滤波通常包括对一些周边样本的输入或输出信号电流采样进行一些改造。现在有各种不同的方法来表征的滤波器，例如： 一个线性滤波器的输入样本的线性变换；其他的过滤器都是“非线性”。线性滤波器满足叠加条件，即如果一个输入不同的信号的加权线性组合，输出的是一个同样加权线性组合所对应的输出信号。

英文文献及翻译

Research Article Mechanical Properties of Fiber Reinforced Lightweight Concrete Containing Surfactant Y oo-Jae Kim, Jiong Hu, Soon-Jae Lee, and Byung-Hee Y ou Department of Engineering Technology, Texas State University, San Marcos, TX 78666, USA Correspondence should be addressed to Y oo-Jae Kim, yk10@https://www.sodocs.net/doc/f12228836.html, Received 21 June 2010; Accepted 24 November 2010 Academic Editor: Tarun Kant Copyright ? 2010 Y oo-Jae Kim et al. This is an open access article distributed under the Creative Commons Attribution License, which permits unrestricted use, distribution, and reproduction in any medium, provided the original work is properly cited. Fiber reinforced aerated lightweight concrete (FALC) was developed to reduce concrete’s density and to improve its fire resistance, thermal conductivity, and energy absorption. Compression tests were performed to determine basic properties of FALC. The primary independent variables were the types and volume fraction of fibers, and the amount of air in the concrete. Polypropylene and carbon fibers were investigated at 0, 1, 2, 3, and 4% volume ratios. The lightweight aggregate used was made of expanded clay. A self-compaction agent was used to reduce the water-cement ratio and keep good workability. A surfactant was also added to introduce air into the concrete. This study provides basic information regarding the mechanical properties of FALC and compares FALC with fiber reinforced lightweight concrete. The properties investigated include the unit weight, uniaxial compressive strength, modulus of elasticity, and toughness index. Based on the properties, a stress-strain prediction model was proposed. It was demonstrated that the proposed model accurately predicts the stress-strain behavior of FALC. 1. Introduction In the last three decades, prefabrication has been applied to small housing and tall building construction, and precast concrete panels have become one of the widely used materials in construction system. Recently, much attention has been directed toward the use of lightweight concrete for precast concrete to improve the performances, such as dead load reduction, fire resistance, and thermal conductivity, of the buildings. Additionally, the structure of a precast building should be able to resist impact loading cases, particularly earthquakes, since resisting earthquakes of these buildings under the performances is becoming an important consideration [1, 2].Many efforts have been applied toward developing high performance concrete for building structures with enhanced performance and safety. V arious types of precast concrete products, such as autoclaved aerated lightweight concrete (AALC), fiber reinforced concrete (FRC), and lightweight concrete, have been developed and experimentally verified. A number of them have been applied in full-scale build-ing structures. AALC is well known and widely accepted, but its small size and weak strength limit its use instructural elements [3]. Lightweight aggregate concretes offer strength, deadload reduction, and thermal conductivity,