安捷伦1260型高效液相色谱仪确认报告

安捷伦1260型高效液相色谱仪

确认方案

验证方案批准

验证小组人员名单

目录

1 液相色谱仪概述

2 确认目的

3 确认范围

4 确认参考文件

5 计划及进度

6 设计确认

7 安装确认

8 运行确认

9 性能确认

10 确认周期

1.液相色谱仪概述

Agilent1260液相色谱仪是公司用于检测原料、成品、中间品的检测设备。设备由输液泵，自动进样器，柱温箱，紫外检测器，色谱工作站组成。由高压输液泵将规定的流动相泵入色谱柱，自动进样器注入供试品，由流动相带入色谱柱内，各组分在柱内被分离，并依次进入检测器，由色谱工作站软件记录和处理色谱信号。

2.确认目的

确认Agilent1260液相色谱仪能符合GMP标准及设计要求，所制定的标准及文件符合GMP要求，确保液相色谱检查法的准确性。

3.确认范围

本验证方案适用于公司的Agilent1260液相色谱仪，该设备安装于质量部质量控制室的精密仪器室内。

验证内容包括对Agilent1260液相色谱仪进行设计确认、安装确认、运行确认、性能确认。

4.确认参考文件

本方案以国家药品监督管理局颁布的《药品生产质量管理规范》、由国家食品药品监督管理局组织编写的《药品生产验证指南》、中国药典2010年版为依据，制定了高效液相色谱仪的验证方案。

5.计划及进度

整个验证活动分四个阶段完成：

设计确认：从_____年_ _月_ _日至_____年___月___日；

安装确认：从_____年___月__ 日至_____年__ 月__ 日；

运行确认：从_____年___月__ 日至_____年__ 月__ 日；

性能确认：从_____年___月_ _日至_____年__ 月__ 日。

6.设计确认

6.1 供应商的资格和服务

6.1.1 设备供应商应有良好的生产运营情况，没有与国家法规或地方法规相违背的生产状况。

6.1.2 安装时能提供现场指导或培训的技术人员数量、资格，并且将来在日常

使用中能提供维修。

6.2 设备

6.2.1 设备情况

6.2.1.1 设备部件完好，无破损；

6.2.1.2 内外表面光滑、平整、容易清洁；

6.2.1.3 易拆卸、易维护。

6.2.2 设备特征：液相色谱仪由输液泵，自动进样器，柱温箱，紫外检测器，色谱工作站组成。

6.3 可接受标准，如表1。

表1 可接受标准

7 安装确认

7.1 概述

Agilent1260液相色谱仪由安捷伦仪器有限公司提供，安装于质量部质量控制室的精密仪器室，用于原料、成品、中间样品的含量和有关物质检测。

安装确认目的：证实所供应的设备规格符合要求,设备所应备有的技术资料

齐全。开箱验收应合格，并确认安装条件（或场所）及整个安装过程符合设计要求。

7.2 安装确认内容

7.2.1 基本资料检查：检查是否有各种必需的书面资料，如表2。

表2 资料检查

确认人：复核人：日期：

7.2.2 设备所需外部环境确认

目的：确认设备的安装是否符合原设计的条件，如表3。

表3 外部环境确认

确认人：复核人：日期：

7.2.3 设备型号确认

目的：确认设备各部件的型号，保证其与订单和装箱单所描述的一致，如表4。

表4 设备型号确认

确认人：复核人：日期：

7.2.4 公用设施确认

目的：确认公用设施，使其满足设计要求，如表5。

表5 公用设施确认

确认人：复核人：日期：

7.2.5 软件版本确认

目的：确认安装的软件与系统备份和维护的软件版本是相同的，安装的软件符合系统和应用要求。

操作系统

当前的操作系统与系统备份和维护的操作系统版本相同。

源版本: __________________________________________

备份版本：________________________________________

软件版本

当前应用软件与系统备份和维护的软件版本相同。

源版本：__________________________________________

备份版本：________________________________________

确认人：复核人：日期：

7.2.6 硬件环境与安装确认

目的：根据生产商硬件和系统设计规格标准，确认仪器和控制器工作区域符合要求，如表6。

表6 硬件环境与安装确认

确认人：复核人：日期：

7.2.7 软件配置确认

目的：确认安装的应用软件符合计算机系统和外围设备的要求，如表7。

表7 软件配置确认

确认人：复核人：日期：

7.2.8 部件清单

目的：确认仪器日常维护和操作所需要的消耗品和备用品，如表8。

表8 部件清单

确认人：复核人：日期：

7.2.9 维修服务确认

目的：确认仪器出现故障后能及时的处理，不影响操作。

每本操作手册上都有简单的维护方法，经过仪器培训的操作人员可以根据说明书进行简单的维修和零部件的更换。

如果有其它比较大的问题，用户不能解决的，可以电话通知厂家的维修工程师。

维修电话：

确认人：复核人：日期：

7.3 安装确认结果说明

说明此确认过程中是否依草案计划进行。如有偏差或变更应根据“偏差管理规程”对此给予说明并对是否通过或需补充的内容加以说明。

8 运行确认

8.1 目的：证明液相色谱仪的软硬件功能运行正常，并且达到设计要求及检测要求。

8.2 运行确认的内容

8.2.1 噪音和漂移的确认

8.2.1.1 方法：检查条件：选用C18柱，以100%甲醇为流动相，流速为1.0ml/min, 紫外检测器的波长选在254nm。开机预热，待仪器稳定后记录基线60min,测得1min内基线波动幅度作为基线噪音，用检测器自身的物理量（Au）作单位表示，基线漂移用20min内基线偏离原点的值（Au/20min）作单位表示。检查方法：监视界面，根据PC计算机、记录仪60分钟图谱计算结果。

8.2.1.2 可接受标准

基线漂移：＜0.005AU/20min

基线噪音：＜0.0001AU

8.2.1.3 测试记录

检测人： 复核人： 日期： 8.2.2 流速的确认

8.2.2.1 方法：以100%甲醇为流动相，将流速设定在1.0ml/min ，待流速稳定后，用一称重过的10ml 容量瓶接收流动相并用秒表开始计时，当流动相接收时间到5min 时停泵，并计算流速。做三次，按以下公式计算流速的设定值误差，流速的稳定性误差。

%100?=

设定流速设定流速

—平均流速设定值误差

%100?=

平均流速

最小流速

—最大流速稳定性误差

8.2.3.2 可接受标准

设定值误差：±2% 稳定性误差：2% 8.2.3.3 测试记录

流动相：100%甲醇，密度0.7915g/cm 3

检测人： 复核人： 日期： 8.2.4 柱温的确认

8.2.4.1 方法：设定柱温箱的温度分别为30℃，40℃，将已校正过的温度巡检仪探头放在柱温箱内，待仪器稳定2小时后，每隔0.5h 观察温度巡检仪读数，

连续观察三次。温度探头在柱温箱内分布见图1。

图1 温度探头在柱温箱内的分布

8.2.4.2 可接受标准

柱温箱设定值误差（℃）：不超过±2℃

柱温箱稳定性（℃）：不超过1℃

8.2.4.3 测试记录

检测人：复核人：日期：

8.3 运行确认结果说明

说明此确认过程中是否依草案计划进行。如有偏差或变更应根据“偏差管理规程”对此给予说明并对是否通过或需补充的内容加以说明。

9 性能确认

9.1 目的：仪器的运行确认完成以后，在其功能试验符合要求的情况下，应用标准品或对照品、或检测的样品进行性能确认，以确认仪器符合使用要求。9.2 性能确认的内容

9.2.1 重现性

9.2.1.1 方法：选用一根C18柱，4.6mm×250mm,5μm。流动相:纯甲醇；流速:1.0ml/min；进样量:20ul；检测波长:254nm。开启检测器电源,将工作波长设置为254nm，预热，开启泵的电源开关,流量设置为1.0ml/min(100%甲醇做流动相)，等待色谱柱充分平衡且检测器基线稳定,噪声和基线应符合规定的要求,进萘-甲醇标准品溶液1.00×10-4g/ml 20ul，进样六次。

9.2.1.2 可接受标准

定性测量重现性（RSD）：≤1.0%

定量测量重现性（RSD）：≤1.0%

9.2.1.3 测试记录

保留时间：

峰面积:

检测人：复核人：日期：

9.3 性能确认结论：

评价人：日期：

10 确认结果评定及建议

评价人：日期：

11 再确认

正常生产阶段，规定每年进行一次定期再验证。

安捷伦1260高效液相色谱仪操作规程资料

安捷伦1260高效液相色谱仪操作规程

安捷伦1260高效液相色谱仪操作规程一、开机 （1）打开计算机，登陆windows操作系统。 （2）打开主机各模块电源（从上至下），待各模块完成自检后，再双击桌面“仪器1联机”图标，进入化学工作站，从视图菜单中选择“方法和运行控制”画面。 （3）进行仪器配置，点仪器-仪器配置-选择所需模块-自动配置-输入IP地址：192.168.254.11。把各流动相放入相应的溶剂瓶中。 （4）编辑方法。方法-新建方法-方法-编辑完整方法-编辑各项（四元泵、TCC、VWD、仪器曲线参数设定，仪器参数默认），完成后，文件→方法另存为→编辑名称，保存方法。 （5）排气。旋开排气阀（逆时针），右单击“四元泵”图标出现快捷键，点击“方法”设置泵流速，排气可设置1.2ml/min，l流量梯度100，也可 5ml/min，流量梯度10。一般冲洗3-5min，注意倾斜储液瓶使过滤头处 的气体进入管道才可使气体排出，观察管路中气体位置，以其排净为目的。关泵，关闭排气阀（顺时针）。（注意：先开排气阀，再开泵，先关泵，后关排气阀）。 （6）在让液体进入柱子之前应将甁填充设置为实际值，谨防空进。将泵流速设置1ml/min,用过渡液即缓冲液冲洗色谱柱20—30分钟。 （7）换流动相，待柱前压力基本稳定后，打开检测器，视图，在线信号，选择信号，观察基线情况。 二、数据采集信息编辑及进样

（1）编辑样品信息：点“单次样品”小瓶，或点击运行信息-单次进样，设定操作者姓名，样品数据文件名，进样量等。 （2）编辑好样品信息后方可进样。 三、数据处理 （1）打开桌面“仪器1脱机”，单击“数据分析”进入数据分析画面。 （2）从“文件”菜单中选择调用信号，选择您的数据文件名，单击确定。（3）谱图优化。从“图形”菜单中选择“信号选项”从范围中选择“自动量程”及合适的显示时间，或选择“自定义量程”调整，反复进行，直到图比例合适 为止。 （4）积分。从“积分”中选择“自动积分”，若积分结果不理想，从菜单中选“积分事件”，更改数据为合适的“斜率灵敏度、峰宽、最小峰面积、最小峰 高”，从“积分”中选择积分选项，则数据被积分，如积分结果不理想则修改相应的积分参数直到满意为止。单击左边图标将积分参数存入方法。（5）校正表设计。点击“校正”菜单中的“校正设置”给出各个参数，点击确定，调出建立校正表所需的谱图并对谱图进行图形优化和积分优化。点击校正→新建校正表，选择自动设定→确定，在校正表中给出正确的“化合物名”和“含量”如需增加校正点数，校正→添加级别，给出第二校正点的含量，以此类推。校正表建立完成后点击“确定”点击“保存图标”将校正表存入方法中，或点击文件-方法另存为-找到对应文件夹，编辑日期及前缀 存入。

安捷伦1260高效液相色谱仪再确认方案

安捷伦12600高效液相色谱仪再确认方案 文件编码发放编号 颁发部门总工室 起草人日期年月日 审核人日期年月日 审核人日期年月日 批准人日期年月日 执行日期年月日 历次修订的原因、目的： 分发部门 厂长室[ ] 总工室[ ] 综合办[ ] 生产部[ ] 质量部[ ] 储运组[ ] 工程部[ ] 制剂车间[ ] 前提车间[ ] 外包车间[ ] G M P 办[ ] 检测中心[ ] 集采中心[ ]

5.内容 5.1安装确认 5.1.1仪器基本信息的确认（见表1） 表1 仪器基本信息确认记录 仪器基本信息 仪器名称Agilent1260高效液相色谱仪仪器编号制造商检测器型号检测器序列号购入时间安装时间安装地点

维修服务 单位名称联系电话 地址联系人 备件供应单位联系电话 技术资料检查 名称确认结果备注 Agilent1260高效液相色谱仪说明书□有□无 Agilent1260高效液相色谱仪采购合同□有□无 装箱单□有□无 计量检定证书（应在计量检定周期内）□有□无再确认时应具备 Agilent1260高效液相色谱仪SOP □有□无再确认时应具备 按采购合同对装箱单所列内容进行确认 品名型号及序列号数量确认结果 □有□无 □有□无 □有□无 □有□无 □有□无 □有□无 □有□无 □有□无 □有□无 检查人：日期：年月日 5.1.2安装环境条件的确认 表2 安装环境条件的确认记录 环境条件要求检查结果 □符合□不符合位置应清洁无尘，无易燃、易爆和腐蚀性气体， 排风良好 台面仪器应平稳地放在工作台上，周围无强烈机械震动□符合□不符合

和电磁干扰源，仪器接地良好。 环境温度15-30℃□符合□不符合湿度室内湿度在20%一85% RH范围内。□符合□不符合空调有温湿度控制措施□符合□不符合 排风通风良好□符合□不符合电路电源电源电压为(220士22)V，频率为(50土0.5)Hz □符合□不符合接地□符合□不符合 不间断电源□符合□不符合 检查人：日期：年月日5.2运行确认 严格按《Agilent-1260高效液相色谱仪标准操作规程》进行操作，对仪器进行运行试验，确认其运转性能，并将检查结果填于下表3 表3 运行确认记录 操作步骤合格标准检查结果 开机进入系统□符合□不符合系统值设置□符合□不符合打印机□符合□不符合退出系统关机□符合□不符合 检查人：日期：年月日 5.3性能确认 5.3.1试验条件的确认 表4 试验条件的确认记录 品名要求确认结果 电子分析天平最大称量不小于100g，最小分度不大于1mg。计量检定。□符合□不符合容量瓶校验□符合□不符合

Agilent1260液相色谱仪验证方案

Agilent1260液相色谱仪 验 证 方 案 方案编号：STP-VP-013-00

方案制定 方案审核 方案批准

验证小组人员名单

目录 1 液相色谱仪概述 2 验证目的 3 验证范围 4 验证参考文件 5 计划及进度 6 设计确认 7 安装确认 8 运行确认 9 性能确认 10 验证周期

1 液相色谱仪概述 液相色谱仪是常茂生物化学工程股份有限公司用于检测成品，原料，中间品的检测设备。设备由输液泵，自动进样器，柱温箱，紫外检测器，色谱工作站组成。由高压输液泵将规定的流动相泵入色谱柱，自动进样器注入供试品，由流动相带入色谱柱内，各组分在柱内被分离，并依次进入检测器，由色谱工作站软件记录和处理色谱信号。 2 验证目的 确认Agilent1260液相色谱仪能符合GMP标准及设计要求，所制定的标准及文件符合GMP要求，确保液相色谱检查法的准确性。 3 验证范围 本验证方案适用于常茂生物化学工程股份有限公司的Agilent1260液相色谱仪，该设备安装于质量部质量控制室的仪器室内。 验证内容包括对Agilent1260液相色谱仪进行设计确认、安装确认、运行确认、性能确认。 4 验证参考文件 本方案以国家药品监督管理局颁布的《药品生产质量管理规范》、由国家食品药品监督管理局组织编写的《药品生产验证指南》、中国药典2010年版为依据，制定了高效液相色谱仪的验证方案。 5 计划及进度 整个验证活动分四个阶段完成： 设计确认：从_____年_ _月_ _日至_____年___月___日； 安装确认：从_____年___月__ 日至_____年__ 月__ 日； 运行确认：从_____年___月__ 日至_____年__ 月__ 日； 性能确认：从_____年___月_ _日至_____年__ 月__ 日。 6 设计确认 6.1 供应商的资格和服务 6.1.1 设备供应商应有良好的生产运营情况，没有与国家法规或地方法规相违背的生产状况。 6.1.2 安装时能提供现场指导或培训的技术人员数量、资格，并且将来在日常使

安捷伦 仪器参数1260

安捷伦1260高效液相色谱仪技术参数 1 梯度泵 *1.1 串联双柱塞往复泵，齿轮传动，20ul-100ul自动连续可变冲程设计； 1.2 四元梯度泵可设置的流速范围：0.001–10 mL/min，0.001 mL/min步进； 1.3 流速精密度：±0.07%RSD； 1.4 整个系统耐压：不小于400bar； 1.5 混合精度：< 0.2 % RSD 或< 0.04 min SD，流速1 mL/min； 1.6 含柱塞清洗附件。 2 集成在线真空脱气机 2.1 在线真空膜过滤技术，内置真空泵，压力传感器，实时监控真空腔压力变化； 2.2 4个通道，最大流速每个通道：10 mL/min。 3 自动进样器 3.1 进样精度：< 0.25% RSD； 3.2 交叉污染：≦0.05%； *3.3 进样瓶容量：不小于100位（2ml样品瓶），可配置扩展样品盘，实现无人值守自动扔瓶功能； 3.4 进样范围：0.1 - 100μL，增量为0.1μL； 3.5 计量工具：高压流路中采用计量泵； *3.6 具有样品柱前衍生、振荡稀释、复杂程序进样等功能。 *3.7操作压力：不小于600bar 4 柱温箱 4.1 半导体控温模式，控温范围：室温下10℃ - 80℃，带降温功能； 4.2 控温精度：±0.15℃； 4.3 控温准确度：±0.5℃； *4.4 柱容量：3根30cm色谱柱 4.5色谱柱识别模块，用于GLP记录色谱柱类型，可监测柱子使用情况。 5 高灵敏度可变波长紫外检测器 5.1 类型：双光束光路设计 5.2光源：氘灯； *5.3最大采样速率：80 Hz； 5.4 噪声：在230 nm 处，<±0.25×10-5 AU； 5.5 漂移：在230 nm 处，< 1×10-4 AU/小时；

Agilent1260高效液相色谱仪确认方案概要

安捷伦1260高效液相色谱仪确认方案Verification Protocol for the Agilent 1260 HPLC

目录 1.目的 (3) 2.确认范围 (3) 3.背景 (3) 4.职责 (3) 5.预确认 (3) 6.运行确认 (4) 7.性能确认 (4) 8.偏差与变更 (10) 9.再确认周期 (10) 10.参考文献 (10) 11.历史 (10) 12.附录 (10)

1. 目的 通过建立Agilent 1260 HPLC的确认方案，以运行确认主要检查Agilent 1260 HPLC各单元的性能及整机运行是否达到供货单位设计要求；性能确认主要检查Agilent 1260 HPLC 四元泵、进样器、柱温箱、检测器的性能符合设计要求，保证仪器在后续运行检测的准确性。 2. 确认范围 本方案适用于位于制剂厂区质量管理部三楼仪器室固定资产编号为F02-QC00014的 Agilent 1260型高效液相液谱仪的确认。 3. 背景 可变波长检测器（VWD）联用，主要用于实验室日常检测。与示差折光检测器(RID)联用，主要用于依诺肝素钠原料药及注射液等分子量及分子量分布的检测。 4. 职责 5. 预确认 5.1. 参与测试人员培训确认 根据确认方案内容涉及的文件、仪器、人员的情况，以检查参与确认方案的人员是否都参加过相关文件、仪器及本方案的培训，记录培训号和相关的培训内容于附录1“测试人员培训记录”中。 接受标准：参与仪器确认的人员均应参加过方案涉及的文件、仪器、方案的培训。 5.2. 测试用试剂、试液确认 检查确认中使用到的标准品、试剂、计量容器信息，可用于仪器确认。 检查内容包括如下：

安捷伦1260型高效液相色谱仪详细操作规程

1.目的：规范Agilent 1260高效液相色谱仪维修、保养、校正操作。 2.适用范围：本公司化验室Agilent 1260高效液相色谱仪的维修、保养。 3.有关责任：化验室精密仪器室 4.引用标准：仪器说明书及Agilent化学工作者现场操作培训教材 5.规程内容： 5.1开机前准备 5.1.1根据实验要求配制流动相，须经0.45μm滤膜过滤，之后再进行脱气处理，使用前必须用超声波振荡l0-15min，按无机相和有机相分开别装入溶剂瓶A（装有洗盐装置，最好固定盛放无机盐水相）、B中；对照品和样品溶液进样前要经0.45μm滤膜过滤。 5.1.2若流动相中含有缓冲盐,则必须以每分钟2～3滴的速度虹吸10%的异丙醇水冲洗seal-wash，以防有盐结晶在泵头产生而损坏泵头。 5.2.采样前准备 5.2.1打开计算机,进入 Windows 系统, 从上到下依次打开各模块电源。5.2.2待各模块自检完成后，双击桌面上的“仪器1联机”图标，将自动进入化学工作站画面。 5.2.3从“视图”菜单中选择“方法和运行控制”画面,也可单击工作站画面左侧的“方法和运行控制”项，进入方法和运行控制窗口。 5.2.4打开Purge阀（逆时针），右击“泵”图标出现参数设定菜单单击“设定泵”选项进入泵编辑画面。 5.2.5设“流量”逐步增大流速至5ml/min ，A通道设到100%，单击“确

定

”。 5.2.6单击“泵”图标，出现参数设定菜单，单击“泵控制“选项选中“开”单击“确定”则系统开始Purge，直到管路内由溶剂瓶A到泵入口无气泡为止；切换B通道(B通道设到100%)继续Purge直到所有通道管路内均无气泡为止。(查看柱前压力，若大于10Bar，则应更换排气阀内滤芯/过滤白头。) 5.2.7将泵的流量设到0.5ml/min，若使用双泵则应设定溶剂配比，如A=80%，B=20%；关闭排气阀（顺时针）；再将流量设到0.8ml/min，2分钟后设定至方法所需流速，冲洗色谱柱20-30min。 5.2.8单击泵下面的瓶图标，输入溶剂瓶A、B内流动相的实际体积（为保护泵和色谱柱，请按实际体积输入）和停泵的体积单击“确定”，如果各溶剂瓶溶剂体积小于停泵体积，泵将自动停止。 5.2.9把缓冲液（用于柱子过渡的，与流动相等比例的乙腈/水、甲醇/水或10%的水溶液）换成流动相，排气后，逐步增加至所需流速，待柱压基本稳定后，打开检测器等，观察基线情况。 5.3.数据采集 5.3.1采集方法编辑 5.3.1.1编辑完整方法：从“方法”菜单中选择“编辑完整方法”项，选中除“数据分析”外的三项，单击“确定”进入下一画面。 5.3.1.2方法信息：在“方法注释”栏中加入（如方法的用途等），单击“确定”进入下一画面。

安捷伦1260型高效液相色谱仪操作规程

一、开机 1、开机前准备：流动相使用前必须过0.45um的滤膜（有机相的流动相必须为色谱纯；水相必须用新鲜注射用水，不能使用超过3天的注射用水，以防止长菌或长藻类）；把流动相放入溶剂瓶中。A瓶：为水相B瓶：为有机相。 2、打开电脑，选Win 2000，进入Win 2000界面。 3、双击CAG Boodp server图标，放大CAG Boodp server小图标，出现窗口，5min 内打开液相各部件电源开关，等待1100广播信息后，表示通讯成功连接，关闭CAG Boodp serve窗口。 4、双击online图标，仪器自检，进入工作站。 该页面主要由以下几部分组成： ——最上方为命令栏，依次为File，Run Control，Instrumen…等； ——命令栏下方为快捷操作图标，如多个样品连续进行分析、单个样品进样分析、调用文件保存文件……等； ——中部为工作站各部件的工作流程示意图；依次为进样器-输液泵-柱温箱-检测器-数据处理-报告； ——中下部为动态监测信号； ——右下部为色谱工作参数：进样体积、流速、分析停止时间、流动相比例、柱温、检测波长等。 4、从“View”菜单中选择“Method and control”画面。 二、编辑参数及方法 1、开始编辑完整方法： 从“Method”菜单中选择“New method”，出现DEF-LC.M，从“Method”菜单中选择“Edit entire method”，选择方法信息、仪器参数及收集参数、数据分析参数和运行时间表等各项，单击OK，进入下一画面。 2、方法信息： 在“Method Comments”中加入方法的信息，如方法的用途等。单击OK，进入下一画面。 3、泵参数设定： 进入“Setup pump”画面，在“Flow” 处输入流量，如1ml/min；在“Solvent B”处输入有机相的比例如70.0，（A=100-B），也可在Insert 一行“Timetable”，编辑梯度；输入保留时间；在“Pressure Limits Max”处输入柱子的最大耐高压，以保护柱子。单击OK，进入下一画面。 4、DAD检测器参数设定： 进入“DAD signals”画面，输入样品波长及其带宽、参比波长及其带宽（参比波长带宽默认值为100nm）；选择Stoptime：as Pupm； 在“Spectrum”中输入采集光谱方式“store”：选All；如只进行正常检测，则可选None；范围Range：可选范围为190~950nm；步长Step可选2.0nm； 阀值：选择需要的灯； Peak width（Response time）即响应值应尽可能接近要测的窄峰峰宽，可选“2s”或4s； Slit-：狭窄缝，光谱分辨率高；宽时，噪音低。可选4nm

Agilent1260高效液相色谱仪操作规程

四川中安检测有限公司 作业指导书 Agilent1260高效液相色谱仪 操作规程 文件编号ZAJC-3T-001 批准人 批准日期 编制人 编制日期

1.目的 正确使用仪器，确保化验结果的准确度、精密度，延长仪器使用寿命。2.范围 适用于Agilent1260高效液相色谱仪及色谱数据工作站的操作。 3.职责 3.1操作人员：按照本操作规程操作仪器，对仪器进行自检，作使用登记。 3.2负责人：负责监督仪器操作是否符合规程，对仪器进行定期自检、仪器综合管理。 4.要求 4.1开机 4.1.1溶剂准备 按要求准备所需流动相，每瓶均超声10min排气，将原来浸泡在甲醇中的滤头取出对应放在各个流动相中（A：二次蒸馏水；D:缓冲溶液；B:色谱纯甲醇C：色谱纯乙腈）。 4.1.2开启工作站 4.1.2.1启动计算机 打开计算机电源，登陆windows 操作系统。 4.1.2.2启动工作站 打开Agilent 1260 各模块电源，待Agilent 1260 各模块自检完成后(各模块右上角指示灯为黄色或者无色)，点击屏幕桌面图标“HPLC -1260（联机）”，则进入工作界面。 模块右上角状态灯颜色说明： 无色：未开电源或者模块准备就绪； 黄色：模块未准备就； 绿色：正在进样分析；

红色：模块出错； 所有模块红色：仪器有漏液 工作站图形颜色说明： 绿色：模块准备就绪； 黄色：模块未准备就绪； 蓝色：正在进样分析； 红色：出错或者不能联机； 灰色：此模块没启用。 将鼠标移至系统或各个模块的状态指示栏，系统会自动显示未就绪或出错的原因。 4.1.3冲洗流动相管路 反时针旋开泵模块上的溶液排空阀，右键单击泵视图的空白处，选择“方法”，设置“流速”为5ml/min。将实验中需要的各个通道分别设置“溶剂”为100%，点击确定开始冲洗，每个通道冲洗3-5分钟，若冲洗通道时压力显示超过10 bar，则可换过滤白头。 4.1.4平衡柱子 冲洗完柱子，按要求调整流动相速率及流动相比例，顺时针旋转排空阀，关闭溶液排空阀(确认泵流量为1ml/min)，然后右键点击需用检测器模块视图的空白处，选择“方法”进入检测器的参数设置界面，按要求设置参数（停止时间与泵一致），后点击右键，选择“控制”，在弹出的窗口选择打开，开始平衡柱子，监视信号基线和压力，等待平稳后即可进样（若用缓冲溶液和有机相作为流动相，先用水和有机相平衡30 min，比例与所要求的缓冲溶液和有机相比例一致），待基线平稳后换用所要求的缓冲溶液和有机相按比例混合平衡柱子30 min）。 4.1.5保存方法 将编辑好的方法保存起来。 4.2进样分析 在每个样品进样前，从“运行控制”菜单中点击“样品信息”，编辑好数据的保存路径。进样时，逆时针旋动进样器六通阀旋钮，进样完毕立即顺时针旋回该旋

(完整版)Agilent1260液相色谱系统操作规程

1目的 规范Agile nt 1260系列高效液相色谱的日常使用和维护保养，保证仪器的正常运转，确保检测工作的顺利进行。 2适用范围 适用于Agile nt 1260系列高效液相色谱系统的日常使用和维护。 3职责 实验室分析人员负责Agile nt 1260系列高效液相色谱系统的日常使用和维护。 4系统组成 4.1 Agile nt 1260 系列四元泵（G1311C）和脱气机； 4.2可变波长紫外检测器（VWD G1314F ； 4.3 Chemstation A.01.04 色谱工作站 4.4国产柱温箱（AT-550）色谱柱； 4.5电脑、打印机等辅助设备。 5定义 无 6操作程序 6.1开机前的准备 6.1.1检查仪器校验标识，确认仪器处于校验周期内。 6.1.2检查上次《实验室仪器设备使用记录表》和仪器状态，确认仪器处于正常状态； 6.1.3流动相的制备： 6.1.3.1按《高效液相色谱法流动相配制标准操作规程》配制需要的流动相。 6.1.3.2用前超声脱气（一般10?20min）。 6.1.4更换流动相： 6.1.4.1将泵的吸滤器从旧流动相中取出，用新流动相冲洗后放入新流动相的储液瓶中，并盖好瓶盖； 6.1.4.2将排液管的出口端放入废液瓶中，并盖好瓶盖。 6.1.5供试溶液的配制：

6.1.5.1供试品用规定溶剂配制成供试品溶液。 6.1.5.2定量测定时，对照品溶液和供试品溶液均应分别配制 2份。 6.1.5.2如有必要，样品需预处理，如过滤等，以免对色谱系统产生污染和色谱干扰。 6.1.6选择色谱柱： 6.1.6.1根据待检供试品的检测方法确定所需的色谱柱； 6.1.6.2检查仪器上安装的色谱柱是否与其相同，若不同则需进行更换。 6.1.7更换色谱柱 6.1. 7.1拆卸原色谱柱： 先握住色谱柱，再松动色谱柱出口端螺帽，取下出口端的管线； 松动色谱柱入口端螺帽，取下入口端的管线； 用止动塞将色谱柱的进出口塞住拧紧后，将色谱柱放回原专用包装盒内 6.1. 7.2安装新色谱柱： 从专用包装盒内取出色谱柱，松动并取下色谱柱出入口的止动塞； 将与进样器相连的管线一端插入色谱柱入口端，拧紧螺帽； （注意：安装时色谱柱上的流向标志应与管路的流动相流向一致。 ） 将与检测器相连的管线一端插入色谱柱出口端，拧紧螺帽。 6.2开机 6.2.1通电前应检查仪器设备之间的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。 6.2.2接通电源，打开计算机和打印机开关 6.2.3等待计算机自检完毕后，进入 Windows 桌面，依次打开泵、进样器、检测器各模块电源。 打开柱温箱开关。 6.2.4待各模块自检完成后，点击 6.2.5确定仪器与工作站已连接，若未连接，需关闭工作站，重新连接。注意必须先打开检测器, 再连接 工作站。 6.2.6从“视图”菜单中选择“方法和运行控制”画面 ，也可单击工作站画面左侧的“方法和运行 控制”项，进入方法和运行控制窗口。 6.3 操作 6.3.1泵的开启和设置 6.3.1.1打开Purge 阀（逆时针），右键点击四元泵下面的空白处，选择“方法”选项，进入泵 编辑画面。 Win dows 桌面 lc ”图标进入化学工作站画面

安捷伦1260型高效液相色谱仪操作规程

安捷伦1260型高效液相色谱仪操作规程 开机 1.1 打开计算机，输入用户名和密码，进入Windows XP画面。 1.2 打开1260 LC 各模块电源(不分先后)。待各模块自检完成后，双击“仪器2联机”图标，化学工作站自动与1260 LC通讯，进入工作站。（注意：在“仪器2脱机”关闭的情况下，“仪器2联机”方能打开。） 1.3 从“视图”菜单中选择“方法和运行控制”画面，来调用所需的界面，正常情况会默认进入此界面。 1.4 确保对应溶剂瓶装入所要使用的流动相，左击“四元泵”模块下的“溶剂瓶”图标或右击“四元泵”下选择“瓶填充”，输入溶剂的实际体积和瓶总体积，可输入停泵的体积。单击“确定”。（注意：此操作很重要，以免气泡进入系统）。 1.5 轻轻旋开泵上的冲洗阀（缓缓旋开约1/4即可，不可用力太过）。右击“四元泵”图标，出现参数设定菜单，单击“方法”选项，进入泵编辑画面。设流量6ml/min，溶剂A设到100%；单击“确定”。右击“四元泵”图标，选择“控制”选项，选中“打开”，单击“确定”，则系统开始排气，直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止；切换到通道同法继续排气，直到所有要用通道无气泡为止（只需排所用到的通道即可）。

1.6 右击“四元泵”图标，出现参数设定菜单，单击“方法”选项，进入泵编辑画面。设流量为：0ml/min，单击“确定”，轻轻关闭排气阀（旋紧即可）。 2. 数据采集方法、系列编辑： 2.1 编辑完整方法： 2.1.1. 从“方法”菜单中选择“编辑完整方法” 项，选中除“数据分析”外的三项，单击“确定”，进入下一界面“方法注释”。 2.1.2. 方法信息： 在“方法注释”中写入方法的相关信息。此项可忽略不写，单击“确定”，进入下一界面“选择进样源/位置”。 2.1. 3. 自动进样器参数设定: 选择“Als”的进样方式，单击“确定”，进入下一界面“设置方法”。 2.1.4. 方法参数设定： 在“设置方法”界面选择“四元泵”选项，在“流量”处输入所需流量，如：1ml/min，在溶剂“B”、“C”、“D”处输入流动相所占比例(A=100-B-C-D)，也可在右侧“时间表”项下选择“添加”，编辑梯度。在“停止时间”项下输入样品运行时间，在“压力限值”输入柱子的最大耐高压，如300bar，以保护柱子。

安捷伦1260高效液相操作规程

安捷伦液相1260高效液相色谱 操作规程 1.前期工作 查找资料（最好是外文文献）了解别人做该样品时常用的流动相和固定相。如果还不清楚样品是什么物质，最起码也应该对其极性进行了解，为选择合适的流动相和固定相打好基础。 流动相选择注意事项： ①避免使用高粘度的溶剂作为流动相； ②所选用的流动相一定要与样品相溶； ③各流动相之间可以很好的相溶； 固定相选择注意事项： a.正相色谱 正相色谱用的固定相通常为硅胶（Silica）以及其他具有极性官能团胺基团，如（NH2，APS）和氰基团（CN，CPS）的键合相填料。由于硅胶表面的硅羟基（SiOH）或其他极性基团极性较强，因此，分离的次序是依据样品中各组分的极性大小，即极性较弱的组份最先被冲洗出色谱柱。正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低，如正已烷（Hexane），氯仿（Chloroform），二氯甲烷（Methylene Chloride）等。 b.反向色谱 反向色谱用的填料常是以硅胶为基质，表面键合有极性相 对较弱官能团的键合相。反向色谱所使用的流动相极性较强，通常为水、缓冲液与甲醇、乙腈等的混合物。样品流出色谱柱的顺序是极性较强的组分最先被冲洗出，而极性弱的组分会在色谱柱上有更强的保留。常用的反向填料有：C18（ODS）、C8（MOS）、C4（Butyl）、C6H5（Phenyl）等。

2.准备工作 ①用于液相色谱分析的样品溶液使用前要经过0.15μm过滤器过滤，必须达到均匀而无颗粒的状态； ②流动相一定要选用色谱级别的（最好是默克、飞世尔、时联等牌子的），并且在使用之前一定要使用0.4μm过滤器过滤，再用超声波清洗仪脱气处理20-30min； ③在连接柱子和色谱仪之前，阀件或管路一定要清洗干净，（一般用异丙醇将管路清洗） 3.仪器操作 （一）将所选择的流动相加入相应的试剂瓶中：棕色瓶对应A 泵，该瓶中只能加双蒸水或娃哈哈纯净水；B、C、D泵根据需要添加。 注：若流动相中有水、乙腈最好现用现处理，不宜放置太长时间。 （二）先打开计算机登陆windows操作系统，再将仪器的泵、色谱柱、检测器打开，待计算机界面显示连接好后，双击桌面“联机”图标，进入化学工作站，从“视图”菜单中选择“方法和运行控制”画面。

Agilent1260infinityII液相色谱仪招标参数

Agilent 1260 infinity II 液相色谱仪招标参数 配置要求： 1、带主动阀及主动密封垫清洗四元梯度泵及在线真空脱气机一套 2、主动密封圈清洗选件一套 3、132位自动进样器一套 4、标准柱温箱一套 5、可变双波长紫外检测器一套 6、耗材一批 技术参数 工作条件： 1.1 工作电压：220+5% V 1.2 环境温度：4~55°C 1.3环境湿度：<95%相对湿度（不冷凝） 一四元梯度泵 2.1 串联双柱塞往复泵，可控制主动入口阀, 可变冲程（20μL～100μL）设计。 2.2 用户自主溶剂压缩因子设置，保证在不同流速及不同流动相组成的最佳流速稳定性。 2.3 自动柱塞清洗装置，有效防止高盐浓度流动相对柱塞的磨损，实时维护泵的使用性能。 2.4 通过专利高速比例阀控制形成低压四元梯度混合，标准配置在线真空脱气机。 2.5 可设置流速范围：0.001~10mL/min, 0.001mL/min步进 2.6 流速范围：0.2~10.0 mL/min 2.7 流速准确度：±1% 或10 μL/min 2.8 流速精度：≤0.07%RSD或≤0.02 min SD 2.9 PH范围：1.0~12.5 2.10 压力范围：0~40 Mpa（0~400bar，0~5800psi）； 2.11 压力脉动：< 2%(通常取1.3%) 2.12 梯度形成：低压四元混合 2.13 梯度组成精度：<0.2% RSD或<0.04 SD 2.14 梯度组成比例范围：0~95% 或5~100%可选 2.15 梯度延迟体积：600~900 μL (与反压相关) 3.在线真空脱气机 3.1 四通路在线真空膜过滤技术，内置真空泵，压力传感器，实时监控真空腔压力变化，保 证及时高效的脱气操作。

安捷伦1260高效液相色谱仪操作规程

安捷伦1260高效液相色谱仪操作规程 一、开机 （1）打开计算机，登陆windows操作系统。 （2）打开主机各模块电源（从上至下），待各模块完成自检后，再双击桌面“仪器1联机”图标，进入化学工作站，从视图菜单中选择“方法和运行控制” 画面。 （3）进行仪器配置，点仪器-仪器配置-选择所需模块-自动配置-输入IP地址：192.168.254.11。把各流动相放入相应的溶剂瓶中。 （4）编辑方法。方法-新建方法-方法-编辑完整方法-编辑各项（四元泵、TCC、VWD、仪器曲线参数设定，仪器参数默认），完成后，文件→方法另存为→编辑名称，保存方法。 （5）排气。旋开排气阀（逆时针），右单击“四元泵”图标出现快捷键，点击“方法”设置泵流速，排气可设置1.2ml/min，l流量梯度100，也可5ml/min，流量梯度10。一般冲洗3-5min，注意倾斜储液瓶使过滤头处的气体进入 管道才可使气体排出，观察管路中气体位置，以其排净为目的。关泵，关 闭排气阀（顺时针）。（注意：先开排气阀，再开泵，先关泵，后关排气阀）。（6）在让液体进入柱子之前应将甁填充设置为实际值，谨防空进。将泵流速设置1ml/min,用过渡液即缓冲液冲洗色谱柱20—30分钟。 （7）换流动相，待柱前压力基本稳定后，打开检测器，视图，在线信号，选择信号，观察基线情况。 二、数据采集信息编辑及进样 （1）编辑样品信息：点“单次样品”小瓶，或点击运行信息-单次进样，设定操作者姓名，样品数据文件名，进样量等。 （2）编辑好样品信息后方可进样。 三、数据处理 （1）打开桌面“仪器1脱机”，单击“数据分析”进入数据分析画面。 （2）从“文件”菜单中选择调用信号，选择您的数据文件名，单击确定。（3）谱图优化。从“图形”菜单中选择“信号选项”从范围中选择“自动量程” 及合适的显示时间，或选择“自定义量程”调整，反复进行，直到图比例

Agilent1260LC液相色谱仪使用维护保养规程

Agilent 1260-LC液相色谱仪使用、维护 操作规程 目录 一、目的2 二、适用范围2 三、内容2 四、附件18 五、变更历史18

一、目的 明确Agilent 1260 LC型液相色谱仪硬件使用、维护保养操作方法，使质量部检验人员有章可循。 二、适用范围 本规程适用于公司Agilent 1260-LC型液相色谱仪使用、维护保养操作。 三、内容 1.制定依据 《Agilent 1260 LC system Operating Manual》 《Agilent OpenLAB Control Operating Manual》 2.工作原理： 2.1.高效液相色谱法是用高压输液泵，将具有不同特性的单一溶液或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相，用泵压入装有固定相的色谱柱，经进样阀注入供试品，由流动相带入色谱柱内，在色谱柱内各成分被分离后，依次进入检测器，色谱信号由色谱工作站进行记录处理。利用色谱图色谱峰面积或峰高大小可对待测样品进行定性定量分析。 Agilent 1260 LC型液相色谱仪主要由G1329B四元泵、G1329B自动控温自动进样器、G1316柱温箱、G4212B二极管阵列检测器和Open LAB色谱工作站等部件组成。 3.基本操作步骤 3.1.开机准备 3.1.1.启动计算机：打开计算机电源，登陆windows操作系统。 3.1.2.启动工作站：打开 Agilent1260LC各模块电源。待 Agilent1260LC各模块自检完成后(各模 块右上角指示灯为黄色或者无色)，点击 屏幕左下角“开始”，选择“所有程 序”，选择”Agilent Technologies”选 择“Open LAB”，选择 OpenLABControl,或单击桌面图标则会进入到上图的界面。上面步骤如

安捷伦1260高效液相操作规程

安捷伦1260高效液相操作规程

安捷伦液相1260高效液相色谱 操作规程 1.前期工作 查找资料（最好是外文文献）了解别人做该样品时常用的流动相和固定相。如果还不清楚样品是什么物质，最起码也应该对其极性进行了解，为选择合适的流动相和固定相打好基础。 流动相选择注意事项： ①避免使用高粘度的溶剂作为流动相； ②所选用的流动相一定要与样品相溶； ③各流动相之间可以很好的相溶； 固定相选择注意事项： a.正相色谱 正相色谱用的固定相通常为硅胶（Silica）以及其他具有极性官能团胺基团，如（NH2，APS）和氰基团（CN，CPS）的键合相填料。由于硅胶表面的硅羟基（SiOH）或其他极性基团极性较强，因此，分离的次序是依据样品中各组分的极性大小，即极性较弱的组份最先被冲洗出色谱柱。正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低，如正已烷（Hexane），氯仿（Chloroform），二氯甲烷（Methylene Chloride）等。 b.反向色谱 反向色谱用的填料常是以硅胶为基质，表面键合有极性相 对较弱官能团的键合相。反向色谱所使用的流动相极性较强，通常为水、缓冲液与甲醇、乙腈等的混合物。样品流出色谱柱的顺序是极性较强的组分最先被冲洗出，而极性弱的组分会在色谱柱上有更强的保留。常用的反向填料有：C18（ODS）、C8（MOS）、C4（Butyl）、C6H5（Phenyl）等。

2.准备工作 ①用于液相色谱分析的样品溶液使用前要经过0.15μm过滤器过滤，必须达到均匀而无颗粒的状态； ②流动相一定要选用色谱级别的（最好是默克、飞世尔、时联等牌子的），并且在使用之前一定要使用0.4μm过滤器过滤，再用超声波清洗仪脱气处理20-30min； ③在连接柱子和色谱仪之前，阀件或管路一定要清洗干净，（一般用异丙醇将管路清洗） 3.仪器操作 （一）将所选择的流动相加入相应的试剂瓶中：棕色瓶对应A泵，该瓶中只能加双蒸水或娃哈哈纯净水；B、C、D泵根据需要添加。 注：若流动相中有水、乙腈最好现用现处理，不宜放置太长时间。 （二）先打开计算机登陆windows操作系统，再将仪器的泵、色谱柱、检测器打开，待计算机界面显示连接好后，双击桌面“联机”图标，进入化学工作站，从“视图”菜单中选择“方法和运行控制”画面。

Agilent1260高效液相色谱仪操作规程

Agilent1260高效液相色谱仪操作规程 1开机前准备 1.1根据实验要求配制流动相，须经0.45μm滤膜过滤，之后再进行脱气处理，使用前必须用超声波振荡l0-15min，按无机相和有机相分开别装入溶剂瓶A（装有洗盐装置，最好固定盛放无机盐水相）、B 中；对照品和样品溶液进样前要经0.45μm滤膜过滤。 1.2若流动相中含有缓冲盐,则必须以每分钟2～3滴的速度虹吸10% 的异丙醇水冲洗seal-wash，以防有盐结晶在泵头产生而损坏泵头。 2 开机 2.1打开电源，打开计算机，进入Windows 系统，从上到下依次打开各模块电源。 2.2待各模块自检完成后，双击桌面上的“仪器1联机”图标，将自动进入化学工作站画面。 2.3从“视图”菜单中选择“方法和运行控制”画面,也可单击工作站画面左侧的“方法和运行控制”项，进入方法和运行控制窗口。2.4打开Purge阀（逆时针），右击“泵”图标出现参数设定菜单单击“设定泵”选项进入泵编辑画面。 2.5设“流量”逐步增大流速至5ml/min ，A通道设到100%，单击“确定”。 2.6单击“泵”图标，出现参数设定菜单，单击“泵控制“选项选中“开”单击“确定”则系统开始Purge，直到管路内由溶剂瓶A 到泵入口无气泡为止；切换B通道（B通道设到100%）继续Purge

直到所有通道管路内均无气泡为止。（查看柱前压力，若大于10Bar，则应更换排气阀内滤芯/过滤白头。） 2.7将泵的流量设到0.5ml/min，若使用双泵则应设定溶剂配比，如 A=80%，B=20%；关闭排气阀（顺时针）；再将流量设到0.8ml/min ，2分钟后设定至方法所需流速，冲洗色谱柱20-30min。 2.8单击泵下面的瓶图标，输入溶剂瓶A、B内流动相的实际体积（为保护泵和色谱柱，请按实际体积输入）和停泵的体积单击“确定”，如果各溶剂瓶溶剂体积小于停泵体积，泵将自动停止。 2.9把缓冲液（用于柱子过渡的，与流动相等比例的乙腈/水、甲醇/水或10%的水溶液）换成流动相，排气后，逐步增加至所需流速，待柱压基本稳定后，打开检测器等，监视基线。 3数据采集 3.1采集方法编辑 3.1.1编辑完整方法：从“方法”菜单中选择“编辑完整方法”项，选中除“数据分析”外的三项，单击“确定”进入下一画面。 3.1.2方法信息：在“方法注释”栏中加入（如方法的用途等），单击“确定”进入下一画面。 3.1.3泵参数设定：在“流速”处输入方法所需流量（如1ml/min）；默认为A为100%，如需二元高压，在“溶剂B”处输入所需比例,则溶剂A=100-B ，也可“插入”一行“时间表”编辑二元梯度；在“压力限”处输入柱子的最大耐高压（建议设定200bar）以保护柱子,单击“确定”进入下一画面。

安捷伦1260系列液相色谱仪建立全新完整方法向导

建立全新完整方法向导： 1、新建完整方法：选择“方法->新建方法”后，点击“方法->编辑完整方法”编辑新方法 选择“方法信息”、“仪器/采集”、“数据分析”,“数据分析”也可以在“数据采集后”后再加入方法中 2、方法注释可以方法的信息 3、选择进样源

4、设置方法 从左到到依次设定后，再点确定 1）、设置泵

2）、设置ALS 一般选择标准进样和洗针进样，其余不管

标准进样---简单的进样，在“进样量”字段中制定进样量。进样量取决于自动进样器的配置设置 洗针进样---可以指定进样包括在抽取样品后，将针移动到针座之前进行针清洗，在“清洗瓶针清洗”字段中指定装有清洗溶剂的位置(瓶) 使用进样器程序---可以使用当前的进样器程序，将显示当前进样器程（不要打勾） 3）、设置TCC 温度---控制柱温箱温度。限值：-5.0到80.0度(G1316A)或者-5.0到100.0度(G1316B)。柱温箱只能冷却到比环境温度低10度的温度 与检测池相同(G1316B)---可将温度设置为与配置检测器的池温度。其余不管

4）、设置FLD 一般设置波长，其余不管 5）、设置RID 光学部件温度---设置光学设备温度。限值：高出环境5度到55度之间，建议为高出环境5度，以提高基线稳定性 极性---设置RID信号的极性。由于分析物和洗脱液的特性，即使在

一个运行内示差折光检测器也可以显示负峰和正峰。从“正极性”或“负极性”数据中选择需要的“信号极性” 其余不管 在控制中 加热器要打开 流通池要冲10-20分钟 6）、设置UVD 一般设置波长，其余不设。 7）、设置DAD

Agilent 1260高效液相色谱仪实验操作

实验十七Agilent 1260高效液相色谱仪实验操作 一、实验目的 1．熟悉液相色谱仪的整套装置、工作原理、工作流程；熟练操作和使用液相化学工作站。2．掌握高效液相色谱仪定性、定量描述未知物含量的实验方法。 3．了解高效液相色谱仪的基本维护与保养细则。 二、实验原理 液相色谱法就是同一时刻进入色谱柱中的各组分，由于在流动相和固定相之间溶解、吸附、渗透或离子交换等作用的不同，随流动相在色谱柱中运行时，在两相间进行反复多次（103～106次）地分配过程，使得原来分配系数具有微小差别的各组分，产生了保留能力明显差异的效果，进而各组分在色谱柱中的移动速度就不同，经过一定长度的色谱柱后，彼此分离开来，最后按顺序流出色谱柱而进入信号检测器，在记录仪上或色谱数据机上显示出各组分的色谱行为和谱峰数值。根据各组分在色谱图上的保留时间（或保留距离），可直接进行组分的定性；根据各组分峰面积的大小，即可作为定量测定的参数，采用工作曲线法（即外标法）测定相应组分的含量。 液相色谱仪工作原理图 三、仪器与试剂 1．仪器 Agilent 1260 高效液相色谱系统（包括VL型二级管阵列检测器、VL型二元泵、自动进样器、液相色谱工作站），AUY220电子分析天平（日本岛津），MDS-10微波消解萃取工作站（上海新仪），UPT-II-40L超纯水机(成都超纯水有限公司)，SG5200HPT超声波清洗器(上海冠特超声仪器有限公司)，SHB-III循环水真空泵（郑州长城科工贸公司）。2．试剂

色谱甲醇、超纯水、99.8% A标准对照品。 3.色谱条件 色谱柱：ZORBAX-SB-C18 色谱柱(150 mm ×4.6 mm，5 μg )；流动相：甲醇:水 = 60:40，流速为1mL/min；检测波长：250 nm，柱温：室温25℃。 四、实验操作内容 1．标准溶液配制准确称取一定量的A标准对照品，用甲醇配成一定浓度的对照品溶液。 2. 供试样品溶液的制备 准确称取0.5 g粉碎均匀的试样( 精确到0.0001g )于萃取罐中，加入超纯水25 mL，在60℃下微波提取30 min，冷却至室温，用0.45 μm滤膜过滤，取续滤液供测定。 3．开启电脑及色谱仪各部分，等电脑自检完毕准备使用。 4．设置自动进样器分别吸取A对照品溶液2、5、8、10、15、20 μL进样，于206 nm处测定峰面积。以进样量(μg)为横坐标( x )，以峰面积为纵坐标( y )计算回归方程。在相同的色谱条件下测定未知样品的峰面积，从而算出未知样品中A的含量。 五、思考题 1．高效液相色谱仪主要应用于哪些领域，分别解决哪些实际应用问题？ 2．简述高效液相色谱与气相色谱的主要区别？ 3. 高效液相色谱仪使用过程中需要注意哪些问题？ 4. 高效液相色谱仪基本维护与保养细则有哪些？