多功能酶标仪原理及应用

浅谈多功能酶标仪选择的要素

近年来，随着多功能酶标仪在国内各高校实验室逐渐推广开来，多功能酶标仪品牌和型号也逐渐多了起来，乱花渐欲迷人眼。除了三大传统优势品牌PE、MD和TECAN，还出现了众多后来者插足此市场，如收购了芬兰雷勃的Thermo、从发光起家的Berthold、针对药筛领域的BMG以及新兴的BioTek等品牌。各品牌都有各自的一个甚至多个系列产品线，特性各不相同，选购时各种技术参数、技术指标令人眼花缭乱。 本文尝试从用户实际使用的角度，探讨应该如何看待花样繁多的参数特性，希望能帮助大家找到真正合适自己的多功能酶标仪。 一、滤片Vs光栅 多功能酶标仪的分类方法众多，但最简单的莫过于用他们的滤光方式来作分界线。一般来说，可以分为滤光片型和光栅型两大类。当然也有一些型号，例如Synergy4和EnVision等，一台机器里面同时装上了滤光片和光栅。但是滤片和光栅并不能同时完成同一个检测，还是想用光栅的时候用光栅，该用滤片的时候用滤片；还有一些实验非用其中一个不可，另一模块实现不了的。所以这类仪器本质上还只是把滤片和光栅放在了一起，并没有使两者糅合而产生新的技术突破。 总体来说，滤片技术由于发展已久，配合二向色镜（其实也就是另一模式的滤光反光滤镜）等光路系统，可以实现大部分实验的需要。目前常规多功能酶标仪中最高的检测灵敏度就是用滤光片型做出来的，例如TECAN Infinite F500的荧光检测的灵敏度可以达到0.04 fmol/孔（荧光素，384孔/80ul）。 但是滤光片型仪器由于受限于滤片的波长和数量限制，不可能满足日益增加的实验类型的检测需要，而且有时需要对物质的吸收、激发和发射光谱进行研究，所以后来就诞生了光栅型的仪器。 最先推出光栅的是MD公司，其光栅习惯上称为单光栅。由于光纯度的不足，在光栅的后面又加入了一组带阻滤片，再把杂光过滤一遍，达到了5×10-4的杂光率，基本与纯粹的滤光片系统一致。后来TECAN 又发展出了双光栅技术，通过两次光栅滤光，杂光率降到了10-6。后来，Thermo、BioTek和PE的部分新款仪器等都使用了类似双光栅技术。由于激发和发射各用了一组双光栅，此类机器又被称为四光栅型多功能酶标仪。 光栅型酶标仪的推陈出新，使得用户在波长选择上不再受限，而且在杂光率、带宽控制等性能上还超越了滤光片系统。例如，TECAN公司在2008年底推出使用了第三代四光栅系统的M1000酶标仪，杂光率降到了2×10-7的新低，还实现了带宽2.5～20nm连续可调。这些都是目前滤光片型酶标仪所不能或者较难实现的。 二、杂光率&波长准确性 光栅型滤光系统俨然已经成为了目前通用性多功能酶标仪的主流，多家厂家共同努力，已经把光栅技术推到了历史新高。在光栅的众多技术参数之中，最关键的无疑就是光栅的杂光率和波长选择的准确性了。 杂光率指得就是光源通过光栅后，得到的光线中，“不需要”的波长的光占所标称波长的光的比例，表征了滤光的纯度。由于光线干涉、衍射等的复杂性，无论使用滤光片还是光栅，杂光都是不可避免的。各种滤光技术的本质就是要想办法把杂光尽可能地去掉。一般来说，滤光片型的杂光率在10-4～10-5之间，光栅型的可以做到10-6～10-7。由于此类杂光是非特异的，而且会直接进入最后的检测器，所以有多少的杂光就会引入多少的随机误差。在荧光等检测过程中，由于检测器存在放大效应，杂光率的干扰也会被指数级放大。因此，杂光率就是一个滤光系统的首要性能指标。 光栅的另一个重要指标就是波长选择的准确性。因为很多检测是依赖于物质在某个波长的特征图谱。就像

多功能酶标仪技术规格要求

多功能酶标仪技术规格要求 一、采购内容 二、技术要求 1、系统性能 多模式检测模块：可见光/紫外光吸收、荧光强度（顶读&底读）、超高灵敏化学发光、时间分辨荧光和超灵敏Alpha检测。 2、激发光源： 2.1光吸收、荧光强度、TRF模块光源采用高能闪烁氙灯，波长范围230-1000 nm。*2.2 Alpha光源采用680 nm 高能固态激光光源，激光输出功率>200 mw。 *3、检测器：多模式检测模块：同时配置两个PMT：一个红敏PMT和一个独立超高灵敏度PMT。 4、可见/紫外吸收光：双光栅系统可进行光吸收检测，波长范围230-1000 nm，双光栅分光步进（increments）0.5nm。 *5、荧光强度（顶读和底读）：高精度四光栅系统，要求前置cut-off滤光片，波长范围250-850nm；分光步进（increments）0.5nm。 *6、超敏感化学发光：独立于荧光检测之外的单独光路，独立超敏感PMT检测器。 7、时间分辨荧光：激发配置320 nm/340 nm滤光片/二向色镜优化组合，保证激发光强度。发射光路为双光栅，满足包括615nm和665 nm在内的单/多波长检测。*8、超灵敏Alpha检测：优化独立Alpha专用光路，采用高能固态激光+独立超灵敏PMT优化高速组合，以达到最佳的检测效率和灵敏度。要能提供Alpha检测试剂盒及特殊应用的定制化服务。 9、温控模块：保证样品检测温度稳定到室温+3至65摄氏度。

10、具有三种振荡模式：线形、圆形、8字形，可设定震荡速度、振幅及振荡时间。具有仪器外（outside）振荡功能，在程序运行的过程中，微孔板可以伸出仪器外部振荡，便于实现程序运行中观察振荡效果，而不必中止程序。 11、具有板孔扫描功能：可选孔内圆形或方形区域中的多点扫描检测，适用于贴壁细胞或不均匀样本检测，以减少因样品分布不均匀造成的检测偏差。软件可自动优化调节检测器Z轴高度，以保证检测的灵敏度，减少孔间信号串扰。 12、配备专业仪器自动化控制及数据分析处理软件，软件友好，易学易用。具备线性拟合、动力学、剂量效应等多种常用的数据计算及分析功能，结果可以Excel、文本、网页、图片等多种格式输出。 三、技术服务要求 3.1设备安装调试 在用户指定的地点完成安装调试，并配合用户进行测试验收。 3.2 技术培训及服务 3.2.1完成设备现场安装调试和验收后，在用户所在地免费提供专业培训，就 设备的操作使用和保养维护等内容进行重点培训。 *3.2.2 要能提供原厂AlphaScreen/AlphaLISA检测试剂以及时间分辨荧光检 测试剂，并具有专业技术开发实验室及服务能力，并由应用技术工程师提供蛋 白-蛋白等分子间相互作用实验的现场操作培训以及后期新实验开发培训。 3.3质保期 整机保修1年，保修期自验收签字之日起计算。 3.4维修响应时间 接到维修通知后，2小时内作出响应，24小时内到场排除故障。

多功能酶标仪SpectraMaxi3的操作规程

多功能酶标仪SpectraMax i3的标准操作规程Standard Operation of SpectraMax i3 部门Department 签名/日期Signature/Date 起草人：Prepared by 樊小川，Xiaochuan Fan QC 审核人：Reviewed by 黄思佳，Sijia Huang QC 审核人：Reviewed by 褚夫兰，Fulan Chu QA 批准人：Approved by 张伯彦，Boyan Zhang 质量负责人 1 目的 建立多功能酶标仪SpectraMax i3的标准操作程序，规范SpectraMax i3 多功能酶标仪检测时的操作。 2 适用范围

本规程适用于所有对多功能酶标仪SpectraMax i3的操作 3 术语或定义 多功能酶标仪：指功能较强、精度较高的单体台式酶标仪，可检测吸光度（Abs)、荧光强度(FL)、时间分辨荧光（TRF)、化学发光（Lum)等。 4 责任 4.1 仪器负责人负责多功能酶标仪的日常及定期维护，出现故障时负责联系厂家维修，保 证运行正常。 4.2 实验操作人员需严格按照本规程执行，保证仪器正常使用，每次用完后填写仪器使用 记录，且使用后及时清理台面，保持仪器洁净。 5 EHS要求 N/A 6 程序 6.1 仪器安装 仪器与电脑连接完毕并连接电源以后，按仪器背面的按钮可以直接启动仪器，经过几分钟后的仪器自检后就可以开始用于检测。在连有电源的情况下，保持24小时开机，不要罩防尘罩以保持透气，隔1-2月关机重启一次。 6.2 SoftMax Pro软件操作基本步骤 6.2.1 打开软件 点击“SoftMax Pro 6.3”图标，打开SoftMax Pro 软件，出现"Plate Setup Helper"对话框。若无则点击图标。 6.2.2 连接仪器 点击‘Choose a diffecient instrument’，打开‘Instrument Connection’对话框，在“Availible Instruments”菜单中选择仪器连接线与电脑所接的串口号(COM)。 选择所购买的酶标仪型号SpectraMax i3或添加模块卡盒型号。最后点击“OK”键连接。 6.2.3 仪器检测参数设定 点击图标后出现“Settings”对话框，对话框最上方出现Read Mode（读板模式）和Read Type（读板类型）两个选项，读板模式有ABS(光吸收)、FL(荧光强度)、LUM(化学发光)和TRF(时间分辨荧光)，读板类型有终点检测（Endpoint）、动力学（Kinetic）、单孔扫描（Well Scan）和光谱扫描（Spectrum）四种。使用者根据实验

酶标仪的检测原理

酶标仪的检测原理 光是电磁波，波长100nm～400nm称为紫外光，400nm～780nm之间的光可被人眼观察到，大子780nm称为红外光。人们只所以能够看到色彩，是因为光照射到物体上被物体反射回来。绿色植物之所以是绿色，是因为植物吸收了光中的红色光谱。酶标仪测定的原理是在特定波长下，检测被测物的吸光值。 检测单位： 光通过被检测物，前后的能量差异即是被检测物吸收掉的能量，特定波长下，同一种被检测物的浓度与被吸收的能量成定量关系。 检测单位用OD值表示，OD是optical delnsity（光密度）的缩写，表示被检测物吸收掉的光密度，OD＝1og（1／trans），其中trans为检测物的透光值。根据Bouger-amberT-beer 法则，OD值与光强度成下述关系： E＝OD=logΙ0/Ι其中E表示被吸收的光密度，Ι0 为在检测物之前的光强度，Ι为从被检测物出来的光强度。 OD值由下述公式计算： E＝OD=C×D×E C为检测物的浓度 D为检测物的厚度 E为摩尔因子 在特定波长下测定每一种物质都有其特定的波长，在此波长下，此物质能够吸收最多的光能量。如果选择其它的波长段，就会造成检测结果的不准确。因此，在测定检测物时，我们选择特定的波长进行检测，称为测量波长。 但是每一种物质对光能量还存在一定的非特异性吸收，为了消除这种非特异性吸收，我们再选取一个参照波长，以消除这个不准确性。在参照波长下，检测物光的吸收最小。检测波长和参照波长的吸光值之差可以消除非特异性吸收。 Anthos 酶标仪检测值计算 仪器中的检测器接收透过被检测物的光能量，转换成二进位数字信号，最大为4095。仪器定义没有光源下的透光值为0％，没有检测物的透光值为100％。则实际检测中，检测物的透光值均在0％一100％之间。透光值 的计算如下： T＝（Meas—Min）／（Max—Min） 其中T为透光值，Meas为检测的二进位数值，Min为在0％的情况下检测的二进位数值，Max为在100％的情况下检测的二进位数值，举例如下： MaX=3600 Mn=20 Meas＝30 T=（30-20）/3600-20)＝0．0028 OD＝1og（1/T）=1og（1/0.0028）=2.552 Anthos 酶标仪的中心定位 仪器会自动对酶标孔进行中心定位，中心定位是要消除酶标孔底的凸凹引起的厚薄不均带来检测的不准确。在对每一个酶标仪进行检测时，仪器其实要进行35个点的测量，选取最中间的5个点的均值为本孔的OD值。 光源的参照通道 参照通道是用来校准由于电压不稳或灯泡磨损带来的影响。 酶标仪的用途和其它提示 用于ELISA试剂的测定，广泛用于各种实验室，包括临床实验室。

多功能酶标仪基本操作规程

多功能酶标仪基本操作规程 一、可见与紫外光原始吸光值的直接测定方法 1、首先打开连接酶标仪的电插板上的全部开关。打开酶标仪主机背面电源线上端的开关。 2、再打开电脑开关。（注意，一定要先开仪器，后开电脑，以免仪器连接出现问题。） 3、在电脑主屏幕上选择[Magellan6]。 4、仪器自检后，酶标板托架自动伸出（注意仪器前部不要放置物品，以免档住托架的伸出）。将酶 标板按数字正确的方向（A1位于左上角）放在托架上。 5、点击仪器下部最右侧的[move plate in] 图标，酶标板将自动进入仪器中。（注意：千万不要用手 将酶标板推入仪器，造成仪器损坏）。 6、在屏幕上选Start measurement。点击绿色箭头。 7、在Select a File窗口左上角选Obtain Raw Date 然后点击绿色箭头。 8、在plate 栏中的plate definition 下拉条中，对板的类型进行选择。酶标的吸光度测定，一般情况 下选xxxxx xx Flat Transparent (x孔，平底，透明板)。（注意测定紫外吸收时要使用可以透过紫外光的透明板）如果板要加盖子，就要再选中Plate with cover。 9、在Measurements 栏内双击Absorbance ，出现Absorbance的对话框。 10、在Absorbance的对话框中： ⑴在Wavelength栏中Measurement项输入测定波长值；Reference项,在需要扣除背景波长时选中并 输入背景波长值。一般情况不选. ⑵在Multiple read per well栏中对于吸光值的测定可不选 ⑶在Read 栏中: Number of flashes 项一般选10；Settle time（使平静时间）项对于96或384孔 板一般选0；对于其他孔数的板可考虑输入适当的值；孔数越少的板，Settle time 设置时间要较长,以防止在测定过程中板移动距离大,对液面平稳的影响。 ⑷在Label栏中Name后输入你为此块板自定义的英文名；也可不设置。 11、在Part of plate 栏中，用鼠标左键拉框，选择要测定的样品孔（使待测定的样品孔变为黄色）， （注意：待测孔只可横向或纵向连续选择，不可以被间断）。如果选择错误需要更改，不要做任何删除，只要再直接重新选择即可。点击本栏中的Detail 对所选的样品孔进行确认后，点击OK，（如果选孔有错误，选择Cancel 返回上页再重复以上操作。） 12、点击OK后，箭头变绿，点击绿色箭头，在Measurement 的workspace处输入（日、月、年- 自定义文件名wsp）再点击Start，仪器开始自动测定。 13、测定结束后，点击File 选择print,直接打印测定参数与结果，或在最上方Edit选择Copy to Excel， 然后打开下方出现的Excel表（显示为板式数据）并打印结果。 14、关机，退出当前界面，点击左下角Exit Megellan 回到主屏幕。关电脑，关仪器电源和插板电 源。 二、荧光值的直接测定方法 1、首先打开连接酶标仪的电插板上的全部开关。打开酶标仪主机背面电源线上端的开关。 2、再打开电脑开关。（注意，一定要先开仪器，后开电脑，以免仪器连接出现问题。） 3、在电脑主屏幕上选择[Magellan6]。 4、仪器自检后，酶标板托架自动伸出（注意仪器前部不要放置物品，以免档住托架的伸出）。将酶 标板按数字正确的方向（A1位于左上角）放在托架上。 5、点击仪器下部最右侧的[move plate in] 图标，酶标板将自动进入仪器中。（注意：千万不要用手 将酶标板推入仪器，造成仪器损坏）。 6、在屏幕上选Start measurement。点击绿色箭头。 7、在Select a File窗口左上角选Obtain Raw Date 然后点击绿色箭头。 8、在plate 栏中的plate definition 下拉条中，对板的类型进行选择。荧光酶标的测定，一般情况下 选xxxxx xx Flat black (x孔，平底，黑板。6孔板测定时没有黑板可选,可选择6孔,平底,透明板)。

SPETROstarOmega全波长全自动多功能酶标仪

SPECTROstar Omega 全波长全自动多功能酶标仪 仪器介绍： SPECTROstar Omega 全波长全自动多功能酶标 仪是BMGLABTECH Omage 系列的一员， SPECTROstar Omega 全波长全自动多功能酶标 仪可以使用于固定波长或者连续波长检测，波长范 围220-1000nm,1nm 扫描递进，与单色器相似， 但是速度更快，分光计可以实现紫外/可见光测量 <1秒/孔，无需扫描。分光计的检测速度和操作简 易的软件让用户能更灵活地优化实验参数。 作为Omega 多功能酶标仪系列的一员， 同时带有振荡孵育，试剂进样功能。 SPECTROstar Omega 具备以下特性： SPECTROstar Omega ·即使在全波长扫描时，内置式的智能注射器仍然能够同时进行试剂的配给并启动动力学反应 ·精确的温度控制可达60oC ，多种振荡模式 ·模板管理器能够进行多种数据处理 ·多功能的动力学软件可用于终点法，long-term 和快速动力学检测 ·实时动力学检测 ·兼容384孔板 ·”QuickStart”模式允许用户只需点击3次鼠标键即可进行读数

·Stacker和机械臂兼容 ·可根据需要升级为FLUOstar Omega或POLARstar Omega。 控制和分析软件 BMG LABTECH的多功能酶标仪软件包同时提供实验步骤设计与数据分析功能。并完全符合FDA 21CFR Part 11。 控制软件能让用户自定义设定仪器的参数和实验步骤，功能包括实时数据显示、检测孔的独立标记、优化动力学分析、用户自定义微孔板、精确的多模式自动进样、振荡和读数，以及可以跟其它分析软件兼容的多模式数据输出功能。 数据分析软件MARS能为用户展示数据、单图、光谱和2D/3D的标准曲线图。数据可以通过预设的模板进行处理，也可以对通过改变统计数据来进行处理。 该软件同样能够制作标准曲线，并可根据如下曲线拟合函数计算得到EC50、IC50和r2值： 线性回归拟合 4-参数拟合 点对点拟合 分段回归拟合 三次样条函数拟合 2nd和3nd多项式拟合 MARS软件包对标准曲线进行一步步的推算，所以很容易得到如：S/N，Delta F%和Z’等重要参数。利用标准拟合等式即可快速的进行酶动力学数据分析，让MARS软件更为完善。 只需按一下鼠标，通用型的微孔板测读器软件包就能为用户提供快速、简单的实验结果，实验步骤设计，和用户自定义数据处理。

酶标仪的工作原理及基本结构

酶标仪的工作原理及基本 结构 Prepared on 22 November 2020

酶免测试的工作原理 吸光度测试的准确性对于酶免测试结果的重要性 酶标仪的组成部分和工作原理 第一节比色分析的基本理论 许多化学物质具有颜色，有些无色的化合物也可以和显色剂作用而生成有色物质。事实证明，当有色溶液的浓度改变时，颜色的深浅也随着改变。浓度越大，颜色越深；浓度越小，颜色越浅。因此，可以通过比较溶液颜色深浅的方法来确定有色溶液的浓度，对溶液中所含的物质进行定量分析。如纳氏管比色法，它是按浓度由高到低，配好一系列标准浓度管，然后拿待测样品和标准管逐个比较，看和哪一个标准管的颜色最相近，便读取该标准管的浓度值为待测样品的浓度值，这就是（目视）比色法。这种方法虽然比较简便，但是系列标准管不易保存，误差较大。后来改用光电检测元件代替目视来测量被测溶液中物质的含量，这种方法叫光电比色法。利用这种方法制成的仪器叫光电比色计。 光电比色计属于吸收光谱仪器范围。 一、光的性质 从物理学中我们知道，光具有波动和微粒两种性质，通称光的波粒两象性。在一些场合，光的波动性比较明显；在另一些场合，光则主要表现为微粒性。 首先，光是一种电磁波。可以用描述电磁波的术语，如振动频率（υ）、波长（λ）、速度（c ）、周期（T ）来描述它。我们日常所见到的白光，便是波

长在400～760nm之间的电磁波，它是由红橙黄绿青蓝紫等色，按照一定比例混合而成的复合光。不同波长的光被人眼所感受到的颜色是不同的。在可见光之外是红外线和紫外线。各种色光及红外线、紫外线的近似波长范围如表1所示。 表1 各种色光及红外线、紫外线的近似近波范围单位：nm 除了波动性外，光还具有微粒性。在辐射能量时，光是以单个的、一份一份的能量（E＝hυ）的形式辐射的。式中υ是光的频率，h为普朗克常量。同样，光被吸收时，其能量一份一份地被吸收的。因此，我们可以说，光是由具有能量（hυ）的微粒所组成的，这种微粒被称为光子。由式中可知，不同波长的光子具有不同的能量。波长越短，即频率越高，能量越大。反之亦然。光子的存在可以从光电效应中得到充分的证明。 二、光的互补及有色物质的显色原理 若把某两种颜色的光按照一定的比例混合，能够得到白色光的话，则这两种颜色的光就叫做互补色。图1中处于直线关系的两种光为互补色。如绿光和紫光为互补色，黄光和蓝光为互补色等等。

多功能酶标仪Gen5软件使用方法_SynergyH4_201

Gen5简要操作说明 一：新建方案 双击桌面上Gen5软件图标，出现如下界面，新建实验可以用来编辑新实验或者选择已经编辑好的方案来读板，新建方案可以编辑新的读板方法。 点击新建方案按钮，并选择标准方案（默认设置），弹出如下界面 双击程序（步骤），弹出如下界面，在此我们可以编辑检测（Read）方法 点击检测，进入下面界面 根据自己的实验类型和检测模式，选择对应的选项： 吸收光： 点击终点法后，如下设置 若点击光谱扫描，如下设置： 点击区域扫描，如下设置： 荧光强度 点击终点法，选择滤光片或者光栅，如果滤光片，如下设置： Gain值设定，默认是35，可以收到根据信号调节或者采用自动校正，如下： 或者已知微孔板信号孔分布情况，可以根据信号孔来校正增益值 选择完成后点击OK即可完成设定； 如果选择光栅检测，设置如下： 编辑完成即可： 注：1）Gain值的设定是为了获得合适的检测信号值，并不会改变信号的趋势，可以在预实验中完成，以后的相同实验固定设置来检测 2）光谱扫描，区域扫描设置方法与吸收光设置类似。 编辑完成后点击OK，确认就可以。 发光 终点法，区域扫描选择滤光片，光谱扫描选择光栅 终点法设置如下： 选择终点法时： 完成后点击OK。

温度控制 需要注意的是，温控设定后需要加热一定时间才能达到目的温度，所以可以根据实际情况在打开仪器同时设定预加热。方法如下： 点击第二排最右边按钮（仪器图标，数字显示目前仪器内部的温度），点开后出现以下对话框： 点击预热， 实验完成后，记得关闭预加热。 震荡： 动力学检测： 接着设置检测步骤： 延迟： 方案编辑完成后取名字，保存。 编辑完成后，之间点击绿色三角按钮进行读板。 点击后，将板子放在载板台上，点击ok，即可进行读数，同时读数结束后可以保存在自己的文件夹下面。如不需要原始的实验数据，也可以点击取消不保存。 三：数据导出 读板过程结束，载板台会弹出，软件上出现读板结果，我们只需要点击Excel导出数据图标，就可以把数据导出到Excel表中，进行后续的数据处理。

酶标仪使用说明

酶标仪基本知识及其检测原理 酶标仪基本知识及其检测原理，文章简要介绍了酶标仪的原理和及应用。 光是电磁波，波长100nm-400nm称为紫外光，400nm-780nm 之间的光可被人眼观察到，大子780nm称为红外光。人们只所以能够看到色彩，是因为光照射到物体上被物体反射回来。绿色植物之所以是绿色，是因为植物吸收了光中的红色光谱。酶标仪测定的原理是在特定波长下，检测被测物的吸光值。 检测单位： 光通过被检测物，前后的能量差异即是被检测物吸收掉的能量，特定波长下，同一种被检测物的浓度与被吸收的能量成定量关系。 检测单位用OD值表示，OD是opticaldelnsity（光密度）的缩写，表示被检测物吸收掉的光密度，OD=10g（1/trans），其中trans为检测物的透光值。根据Bouger-amberT-beer法则，O D值与光强度成下述关系： E=OD=logⅠ0/Ⅰ其中E表被吸收的光密度，Ⅰ0为在检测物之前的光强度，Ⅰ为从被检测物出来的光强度。 OD值由下述公式计算： E=OD=C×D×E 其中：C为检测物的浓度；D为检测物的厚度；E为摩尔子。

在特定波长下测定每一种物质都有其特定的波长，在此波长下，此物质能够吸收最多的光能量。如果选择其它的波长段，就会造成检测结果的不准确。因此，在测定检测物时，我们选择特定的波长进行检测，称为测量波长。 但是每一种物质对光能量还存在一定的非特异性吸收，为了消除这种非特异性吸收，我们再选取一个参照波长，以消除这个不准确性。在参照波长下，检测物光的吸收最小。检测波长和参照波长的吸光值之差可以消除非特异性吸收。 酶标仪检测值计算 仪器中的检测器接收透过被检测物的光能量，转换成二进位数字信号，最大为4095.仪器定义没有光源下的透光值为0%，没有检测物的透光值为100%。则实际检测中，检测物的透光值均在0%-100%之间。 透光值的计算如下： T=（Meas-Min）/（Max-Min） 其中T为透光值，Meas为检测的二进位数值，Min为在0%的情况下检测的二进位数值，Max为在100%的情况下检测的二进位数值，举例如下： 酶标仪的中心定位 仪器会自动对酶标孔进行中心定位，中心定位是要消除酶标孔底的凸凹引起的厚薄不均带来检测的不准确。在对每一个酶标

酶标仪原理及结构-科邦实验室

酶标仪的原理及结构 酶标仪即酶联免疫检测仪，是酶联免疫吸附试验的专用仪器。可简单地分为半自动和全自动2大类，但其工作原理基本上都是一致的，其核心都是一个比色计，即用比色法来分析抗原或抗体的含量。 酶标法是什么 酶联免疫吸附试验方法简称酶标法，是标记技术中的一种，是从荧光抗体技术，同位素免疫技术发展而来的一种敏感，特异，快速并且能自动化的现代技术。 酶标法的基本原理是将抗原或抗体与酶用胶联剂结合为酶标抗原或抗体，此酶标抗原或抗体可与固相载体上或组织内相应抗原或抗体发生特异反应，并牢固地结合形成仍保持活性的免疫复合物。当加入相应底物时，底物被酶催化而呈现出相应反应颜色。颜色深浅与相应抗原或抗体含量成正比。 由于此技术是建立在抗原-抗体反应和酶的高效催化作用的基础上，因此，具有高度的灵敏性和特异性，是一种极富生命力的免疫学试验技术。 酶标仪的原理 酶标仪就是应用酶标法原理的仪器，酶标仪类似于一台变相光电比色计或分光光度计，其基本工作原理与主要结构和光电比色计基本相同。

光源灯发出的光波经过滤光片或单色器变成一束单色光，进入塑料微孔极中的待测标本.该单色光一部分被标本吸收，另一部分则透过标本照射到光电检测器上，光电检测器将这一待测标本不同而强弱不同的光信号转换成相应的电信号，电信号经前置放大，对数放大，模数转换等信号处理后送入微处理器进行数据处理和计算，Z后由显示器和打印机显示结果。 微处理机还通过控制电路控制机械驱动机构X方向和Y方向的运动来移动微孔板，从而实现自动进样检测过程。而另一些酶标仪则是采用手工移动微孔板进行检测，因此省去了X，Y方向的机械驱动机构和控制电路，从而使仪器更小巧，结构也更简单。 微孔板是一种经事先包理专用于放置待测样本的透明塑料板，板上有多排大小均匀一致的小孔，孔内都包埋着相应的抗原或抗体，微孔板上每个小孔可盛放零点几毫升的溶液。其常见规格有40孔板，55孔板，96孔板等多种，不同的仪器选用不同规格的孔板，对其可进行一孔一孔地检测或一排一排地检测。 酶标仪测定是在特定波长下，检测被测物的吸光值。随着检测方式的发展，拥有多种检测模式的单体台式酶标仪叫做多功能酶标仪，可检测吸光度(Abs)、荧光强度(FI)、时间分辨荧光(TRF)、荧光偏振(FP)、和化学发光(Lum)。 酶标仪从原理上可以分为光栅型酶标仪和滤光片型酶标仪。光栅型酶标仪可以截取光源波长范围内的任意波长，而滤光片型酶标仪则根据选配的滤光片，只能截取特定波长进行检测。 酶标仪的结构 酶标仪所用的单色光既可通过相干滤光片来获得，也可用分光光度计相同的单色器来得到。在使用滤光片作滤波装置时与普通比色计一样，滤光片即可放在微孔板的前面，也可放在微孔板的后面，其效果是相同的。光源灯发出的光经聚光镜，光栏后到达反射镜，经反射镜作90°反射后垂直通过比色溶液，然后再经滤光片送到光电管。 酶标仪可分为单通道和多通道2种类型，单通道又有自动和手动2种之分。自动型的仪器有X，Y方向的机械驱动机构，可将微孔板L的小孔一个个依次送入光束下面测试，手动型则靠手工移动微孔板来进行测量。

酶标仪注册技术审查指导原则

附件1 酶标仪注册技术审查指导原则 本指导原则旨在指导和规范酶标仪产品的技术审评工作，帮助审评人员理解和掌握该类产品原理、机理、结构、性能、预期用途等内容，把握技术审评工作基本要求和尺度，对产品安全性、有效性做出系统评价。 本指导原则所确定的核心内容是在目前的科技认识水平和现有产品技术基础上形成的，因此，审评人员应注意其适宜性，密切关注适用标准及相关技术的最新进展，考虑产品的更新和变化。 本指导原则不作为法规强制执行，不包括行政审批要求；但审评人员需密切关注相关法规的变化，以确认申报产品是否符合法规要求。 一、适用范围 本指导原则适用于仅对ELISA实验结果进行比色，测量每一测试微孔吸光度值的普通酶标仪，根据《医疗器械分类目录》（国药监械〔2002〕302号）类代号为6840-3，品名举例为“酶免疫”、“半自动酶标仪”，管理类别为Ⅱ类。 本指导原则也适用于全自动酶联免疫分析仪的读数模块。 二、技术审查要点 （一）产品名称的要求 酶标仪的命名应与《医疗器械分类目录》（国药监械〔2002〕 —1 —

302号）或国家标准、行业标准中的通用名称一致。一般命名为“半自动酶标仪”、“半自动酶标分析仪”、“全自动酶标分析仪”、“酶标分析仪”或“酶标仪”、“酶联免疫分析仪”。 （二）产品的结构和组成 酶标仪主要由电源、光源系统、单色器系统、样品室、检测器、微机和操作软件等组成。光源发出的光经平行处理后，透过滤光片/光栅射入样品室，经过待测液后，透射光信号被检测器检测，放大及模拟/数字转换后由微机进行计算、处理，并由显示器、打印机显示并打印出最终测定结果。 根据通道数量划分，酶标仪有单通道和多通道两种类型。 根据测定模式划分，酶标仪目前主要有单波长、单波长/双波长、波长连续可调式三种。 酶标仪结构图如图1所示。 图1 酶标仪主要部件（举例说明） —2 —

多功能酶标仪SpectraMax-i3的操作规程

多功能酶标仪SpectraMax-i3的操作规程编号 M-SOP-2-0083 No. 标准操作规程版本号 Standard Operating Procedure 01 Version 多功能酶标仪SpectraMax i3的标准操作规程 多功能酶标仪SpectraMax i3的标准操作规程 Standard Operation of SpectraMax i3 部门签名/日期 Department Signature/Date 起草人: XX， Xiaochuan X Prepared by QC 审核人: XX， Sijia XX Reviewed by QC 审核人: XX， Fulan X Reviewed by QA 批准人: XX， Boyan XX Approved by 质量负责人 颁发部门执行日期质量保证部-QA Issued by Effective Date 替换文件复审日期 Version 00 Replaced For Review Date 分发部门 QA，QC Distributed to 1 of 7 编号 M-SOP-2-0083 No. 标准操作规程版本号 Standard Operating Procedure 01 Version 多功能酶标仪SpectraMax i3的标准操作规程 1 目的 建立多功能酶标仪SpectraMax i3的标准操作程序，规范SpectraMax i3 多功能酶标仪 检测时的操作。 2 适用范围

本规程适用于所有对多功能酶标仪SpectraMax i3的操作 3 术语或定义 多功能酶标仪:指功能较强、精度较高的单体台式酶标仪，可检测吸光度(Abs)、荧 光强度(FL)、时间分辨荧光(TRF)、化学发光(Lum)等。 4 责任 4.1 仪器负责人负责多功能酶标仪的日常及定期维护，出现故障时负责联系厂家维修，保 证运行正常。 4.2 实验操作人员需严格按照本规程执行，保证仪器正常使用，每次用完后填写仪器使用 记录，且使用后及时清理台面，保持仪器洁净。 5 EHS要求 N/A 6 程序 6.1 仪器安装 仪器与电脑连接完毕并连接电源以后，按仪器背面的按钮可以直接启动仪器，经过几分钟后的仪器自检后就可以开始用于检测。在连有电源的情况下，保持24小时开机，不要罩防尘罩以保持透气，隔1-2月关机重启一次。 6.2 SoftMax Pro软件操作基本步骤 6.2.1 打开软件 点击“SoftMax Pro 6.3”图标，打开SoftMax Pro 软件，出现 "Plate Setup Helper"对话框。若无则点击图标。

LUMIstar Omega 化学发光多功能酶标仪

仪器介绍： BMG LATECH 公司为您专门开发出一款LUMIstar Omega 化学发光多功能酶标仪，为快速发光和持续发光提供了高灵敏度的分析检测平台。在需要时可以升级到FLUOstar Omega 或者POLARstar Omega。LUMIstar Omega化学发光多功能酶标仪应用： ·荧光素酶报告基因分析, 启动子分析。 ·化学发光免疫分析 ·细胞基础分析(如：细胞毒性、凋亡和增殖） ·胞内水母发光蛋白Ca2+分析 ·ATP分析 ·GUS分析(?-葡萄糖醛酸酶) ·ROS (reactive oxygen species) ·BRET检测监控分子间的相互作用 控制和分析软件 BMG LABTECH的多功能酶标仪软件包同时提供实验步骤设计与数据分析功能。并完全符合FDA 21CFR Part 11。 控制软件能让用户自定义设定仪器的参数和实验步骤，功能包括实时数据显示、检测孔的独立标记、优化动力学分析、用户自定义微孔板、精确的多模式自动进样、振荡和读数，以及可以跟其它分析软件兼容的多模式数据输出功能。 数据分析软件MARS能为用户展示数据、单图、光谱和2D/3D的标准曲线图。数据可以通过预设的模板进行处理，也可以对通过改变统计数据来进行处理。

该软件同样能够制作标准曲线，并可根据如下曲线拟合函数计算得到EC50、IC50和r2值： 线性回归拟合 4-参数拟合 点对点拟合 分段回归拟合 三次样条函数拟合 2nd和3nd多项式拟合 MARS软件包对标准曲线进行一步步的推算，所以很容易得到如：S/N，Delta F%和Z’等重要参数。利用标准拟合等式即可快速的进行酶动力学数据分析，让MARS软件更为完善。 只需按一下鼠标，通用型的微孔板测读器软件包就能为用户提供快速、简单的实验结果，实验步骤设计，和用户自定义数据处理。 LUMIstar Omega化学发光多功能酶标仪指标参数：

多功能酶标仪常见配置及全参数

Infinite M200 PRO 1．一般参数： 支持的检测模式：光吸收、荧光顶部底部、时间分辨荧光（TRF）、连续发光、瞬时发光、双色发光、BRET、光吸收和荧光波长扫描 1.1 光源：UV高能闪烁氙灯，10^8次闪烁寿命，自带光强监测、校准，免维护无需预热 1.2 光栅杂光率：＜10^-6 1.3 支持板型：6-384孔板，预设常用品牌型号；自动扫描并定义特殊规格板型，NanoQuant微量检测板，4位卧式比色杯，立式比色杯（选配） 1.4 孔内多点读数（光吸收/荧光顶底）：6-384孔板，最多15×15个点（依板型模式可有不同），覆盖全孔，7种点布局 1.5 温度控制：环境温度+5℃至42℃（选配） 1.6 振荡：线性或圆形可选；振幅1-6mm，0.5mm步进；1-1000秒可调 1.7 多标记多模式检测：单个实验中可进行无限制的多波长、多模式检测（光吸收、荧光、发光、波长扫描） 1.8 最快读板速度：96孔板：20秒；384孔板：30秒 1.9 波长扫描速度（FI EX/EM）：150秒；450-550nm，5nm步进，96孔板 1.10 认证：DLReady，Transcreener Red FI 2.光吸收模块 2.1 波长范围：230-1000nm，1nm连续可调 2.2 波长选择：双光栅 2.3 带宽：＜5nm（λ≦315nm），＜9nm（λ＞315nm） 2.4 波长准确性：＜±0.3nm（λ≦315nm），＜±0.5nm（λ＞315nm） 2.5 波长重复性：＜±0.3nm（λ≦315nm），＜±0.5nm（λ＞315nm） 2.6 检测器：紫外硅光电二级管 2.7 检测范围：0-4 OD 2.8 检测分辨率：0.0001 OD 2.9 检测准确性：＜0.5% @260nm 2.10 检测精确性：＜0.2% @260nm 2.11 260/280nm精度：±0.07

酶标仪基本知识及其检测原理

酶标仪基本知识及检测原理 酶标仪（MicroplateReader）是对酶联免疫检测（EIA）实验结果进行读取和分析的专业仪器。酶联免疫反应通过偶联在抗原或抗体上的酶催化显色底物进行的，反应结果以颜色显示，通过显色的深浅即吸光度值的大小就可以判断标本中待测抗体或抗原的浓度。 酶标仪广泛地应用在临床检验、生物学研究、农业科学、食品和环境科学中，特别在近几年中，由于大量的酶联免疫检测试剂盒的应用，使得酶标仪在生殖保健领域中应用越来越广泛，同时促进了生殖健康技术水平提高。 目前国内许多计生站系统开展了酶免检测项目，如：乙肝五项、爱滋病检测、优生优育系列检测、激素检测等。过去多数采用目测方法，报出的结果缺乏科学的依据。例如：某弓形虫检测试剂盒中，临界值规定为：阴性对照品的OD值×2.5,通过目测无法判断标本孔的反应颜色是否超过临界值。肉眼进行两孔之间的颜色比较可能还行，但比较一孔的颜色是否超过另一孔颜色的2.5倍就不可能。 国内多家权威机构，如卫生部临床检验中心和计划生育系统等多次强调酶标仪的重要性，并要求酶联免疫检测试剂应使用酶标仪判读，酶免试剂的质控也应使用酶标仪，并提供酶标仪测定的原始数据，而各厂家的试剂盒说明书没有是让用目测的。同时酶免检测的项目往往是一些实质性的感染和病变（如：肝炎、爱滋病、优生优育等），判读更要求严谨，由误诊引起的纠纷很难处理。另外，住院手术病人术前的丙肝、爱滋等EIA试剂检测是避免因输血引起感染引发的医疗事故纠纷的必要手段，正逐渐被许多单位所采用。 酶标仪的使用方法 作为微孔板比色计的酶标仪，其基本功能不外乎一个比色测定，所不同的是在测定波长范围、吸光度范围、光学系统、检测速度、震板功能、温度控制、定性和定量测定软件功能等方面的差异，当然全自动酶免疫分析系统还具有自动洗板、温育、加样等功能。在临床实验室实际工作中，实验人员在使用酶标仪进行

酶标仪工作原理及使用方法

酶标仪简介： 酶标仪即酶联免疫检测仪是酶联免疫吸附试验的专用仪器又称微孔板检测器。可简单地分为半自动和全自动2大类，但其工作原理基本上都是一致的，其核心都是一个比色计,即用比色法来进行分析。测定一般要求测试液的最终体积在250μL以下，用一般光电比色计无法完成测试，因此对酶标仪中的光电比色计有特殊要求。 酶标仪原理： 酶标仪实际上就是一台变相光电比色计或分光光度计，其基本工作原理与主要结构和光电比色计基本相同. 图示是一种单通道自动进样的酶标仪工作原理图.光源灯发出的光波经过滤光片或单色器变成一束单色光，进入塑料微孔极中的待测标本.该单色光一部分被标本吸收，另一部分则透过标本照射到光电检测器上，光电检测器将这一待测标本不同而强弱不同的光信号转换成相应的电信号.电信号经前置放大，对数放大，模数转换等信号处理后送入微处理器进行数据处理和计算，最后由显示器和打印机显示结果. 微处理机还通过控制电路控制机械驱动机构X方向和Y方向的运动来移动微孔板，从而实现自动进样检测过程.而另一些酶标仪则是采用手工移动微孔板进行检测，因此省去了X,Y方向的机械驱动机构和控制电路，从而使仪器更小巧，结构也更简单. 微孔板是一种经事先包理专用于放置待测样本的透明塑料板，板上有多排大小均匀一致的小孔，孔内都包埋着相应的抗原或抗体，微孔板上每个小孔可盛放零点几毫升的溶液. 光是电磁波，波长100nm~400nm称为紫外光，400nm~780nm之间的光可被人眼观察到，大于780nm称为红外光。人们之所以能够看到色彩，是因为光照射到物体上被物体反射回来。绿色植物之所以是绿色，是因为植物吸收的大部分为红橙光和蓝紫光，但对绿色不吸收，反射出来，所以植物呈现为绿色。酶标仪测定的原理是在特定波长下，检测被测物的吸光值。 随着检测方式的发展，拥有多种检测模式的单体台式酶标仪叫做多功能酶标仪，可检测吸光度(Abs)、荧光强度(FI)、时间分辨荧光(TRF)、荧光偏振(FP)、和化学发光(Lum)。 酶标仪从原理上可以分为光栅型酶标仪和滤光片型酶标仪。光栅型酶标仪可以截取光源波长范围内的任意波长，而滤光片型酶标仪则根据选配的滤光片，只能截取特定波长进行检测。 检测单位 光通过被检测物，前后的能量差异即是被检测物吸收掉的能量，特定波长下，同一种被检测物的浓度与被吸收的能量成定量关系。

酶标仪标准操作规程

酶标仪标准操作规程 一、目的 正确使用酶标仪测读酶联免疫吸附试验结果（吸光度）。 二、原理 通过选择滤光片获得特定波长的光线，透过待测溶液自动连续读取96孔板上各样品孔的吸光度。 三、主要操作规程 1.开启酶标仪电源，待酶标仪自检完成，仪器的液晶显示窗出现PLATE READING及闪动光标（若仪器提示不能通过自检或出现其他出错信息，请立即停止下列操作并将错误信息详细记录，报告专业人员维修）。 2.开启计算机。 3.打开酶标仪专用程序（此时在操作界面左下方显示Ready字样）。 4.打开“File”菜单，选择“New Reading”的“New Endpoint Protocol”项（此时酶标仪转为计算机控制模式）；在“Reading Parameters”处，设置各项参数： 单波长测定选择Single 双波长测定选择Dual 选择Measurement Filter项确定测量滤光片波长值 选择Reference Filter项确定参比滤光片波长值 本机目前配置的滤光片波长有四种： 1.405nm 2.450nm 3.540nm 4.630nm (另有490nm的滤光片可选用，需另行安装) 5.检查确认所设各参数无误，将酶标板放入仪器内（左上角为A1）关闭测量室的盖板（注意：不能将酶标板的盖子放入仪器内。） 6.点击Run键，仪器开始测定，测定完成后，显示出与酶 标板规格一致排列的各孔OD值。 7.可将数值用Copy命令复制后粘贴至Excel电子数据工作表上，或打开File菜单，运行Export 命令，选择相应的数据文件格式，按自己确定的路径和文件名进行保存。

8.取出酶标板，按关闭程序→关闭计算机→关闭酶标仪的顺序关机。 9.每次工作完毕，清洁工作台面，做好仪器使用记录。 四、关键词：酶标仪；操作 五、主要参考文献 酶标仪使用说明书: