单域抗体研究进展
QianRen Biology 千人·生物, 2015, 2(3), 26-38
Published Online August 2015 in Hans. https://www.sodocs.net/doc/f914043828.html,/journal/qrb
https://www.sodocs.net/doc/f914043828.html,/10.12677/qrb.2015.23004
Research Advance in Single-Domain
Antibody
Sheng Liu1, Jing Li1, Xingguo Liang1*, Huawei Xin2*
1College of Food Science and Engineering, Ocean University of China, Qingdao Shandong
2Institute of Biology and Medicine, Wuhan University of Science and Technology, Wuhan Hubei
Email: Liushengac@https://www.sodocs.net/doc/f914043828.html,, lijouc@https://www.sodocs.net/doc/f914043828.html,, *liangxg@https://www.sodocs.net/doc/f914043828.html,, *xinhuawei@https://www.sodocs.net/doc/f914043828.html,
Received: Jul. 24th, 2015; accepted: Aug. 9th, 2015; published: Aug. 12th, 2015
Copyright ? 2015 by authors and Hans Publishers Inc.
This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY).
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Abstract
Single-domain antibody (sdAb) represents a new generation of engineered antibody fragment consisted of a single monomeric variable antibody domain, which is derived from camelid heavy- chain antibodies (HcAbs) or cartilaginous immunoglobin new antigen receptor (IgNAR). These novel antibodies are able to bind selectively to a specific antigen. Due to the advantageous fea-tures of sdAbs over conventional antibodies and their derivatives, such as smaller size, high affin-ity, high stability, high permeability in tissues, low immunogenicity and simple, cost-effective production, etc., sdAbs allow a broad range of applications in biotechnical and therapeutic use.
This review provides a detailed overview of the developmental history, structural characteristics, expression and purification, properties and potential applications of the sdAbs. Some exciting thoughts and results of the shark sdAb are especially discussed. The risk assessment and prob-lems with respect to future application of sdAbs have also been highlighted.
Keywords
Single-Domain Antibodies (sdAbs), Nanobodies (Nbs), Heavy-Chain Antibodies (HcAbs), Camel,
Shark, Ig New Antigen Receptor (IgNAR)
单域抗体研究进展
刘晟1，李敬1，梁兴国1*，辛化伟2*
1中国海洋大学食品科学与工程学院，山东青岛
*通讯作者。
刘晟等
2武汉科技大学生物医学研究院，湖北武汉
Email: Liushengac@https://www.sodocs.net/doc/f914043828.html,, lijouc@https://www.sodocs.net/doc/f914043828.html,, *liangxg@https://www.sodocs.net/doc/f914043828.html,, *xinhuawei@https://www.sodocs.net/doc/f914043828.html,
收稿日期：2015年7月24日；录用日期：2015年8月9日；发布日期：2015年8月12日
摘要
单域抗体(single-domain antibody, sdAbs)是近年来利用基因工程技术从骆驼科动物和软骨鱼血清中克隆得到的只保留重链可变区的具有抗原结合活性的新型抗体，具有分子量小、特异性高、亲和性好、稳定性高、组织穿透力强、免疫原性低和制备成本低等优点，在诊断、治疗和检测等领域已取得一定成果并获得广泛关注。本文综述了单域抗体的发展历程、结构特征、表达纯化、理化性质及应用方向，特别是对进化上更早出现、抗原结合性能更加多样的鲨鱼sdAbs进行了详尽分析，并对其发展前景和可能面临的问题作了展望。
关键词
单域抗体，纳米抗体，重链抗体，骆驼，鲨鱼，免疫球蛋白新抗原受体
1. 引言
自上世纪七十年代以来，杂交瘤技术(hybridoma technology)，DNA重组(recombinant DNA)，蛋白质工程(protein engineering)和噬菌体展示技术(phage display technology)为以抗体为主的生技药品在疾病的治疗和诊断中的研究和发展提供了一个新的平台[1]-[4]，大大推动了生技药品在临床上的应用和商业上的推广。
1975年，Kohler和Milstein提出了小鼠杂交瘤技术[3]，为单克隆抗体(monoclonal antibodies, mAbs)的发展提供了理论基础。相比传统的从血清中提取的多克隆抗体，mAbs具有特异性高、均一性好的优点。只要细胞株不发生基因突变，杂交瘤细胞就可以在体外永久存活并传代[5]，产生所需的均一抗体。然而，由于mAbs固有的亲和性的局限性大大限制了其应用范围，其成本高、周期长、工序复杂、体积大、稳定性差、不同批次之间差异较大等不足也对mAbs的临床应用提出了挑战。1988年，Skerra等[6]首次运用基因工程技术和分子生物学操作技术在基因水平上设计并改造抗体基因结构，在细菌中同时表达出抗体重链可变区(heavy-chain variable, VH)和轻链可变区(light-chain variable, VL)，成功获得了功能性重组抗体，称可变区抗体片段(Fv, Fragment of variable)。以此为基础，研究人员又将重链和轻链可变区进一步连接、获得了功能性单链可变区抗体片段(single-chain variable fragment, scFv)。如图1(a)所示，与之前获得的包含轻链(VL及CL)和重链可变区(VH)及一个重链恒定区(CH1)的抗原结合片段(antigen-binding frag-ment, Fab)的分子量(约50 kDa)相比，Fv/scFv的相对分子质量更小(约25 kDa)，约为γ-免疫球蛋白(immunoglobulin-γ, IgG)全抗的1/6，具有分子量小、组织分布特异性强和免疫原性低等特点。由于缺少重链恒定区片段(Fc)，Fv/scFv不能与细胞膜的Fc受体结合，而且分子小，可以穿过血脑屏障，大大扩展了其应用前景。此后，随着分子生物学等基础学科的不断成熟，基因重组技术的飞速发展和对抗体结构更深入的认识，出现了继多克隆抗体、单克隆抗体之后的第三代抗体—基因工程抗体。
1989年，Hamers-Casterman等[7]偶然发现骆驼(单峰驼)血液中有半数的抗体是重链抗体(heavy-chain antibodies, HCAbs)，它是一种缺失了轻链的重链二聚体抗体(图1(a))。HCAbs普遍存在于单峰驼(Camelus dromedarius)、亚州双峰驼(Camelus bactrianus)、南美洲的大羊驼(Lama glama)、原驼(Lama guanicoe)、羊
刘晟等
(a)
(b)
(a)：骆驼IgG1是由两条重链(VH, CH1, Hinge, CH2和CH3)和两条轻链(VL和CL)组成的传统四聚体抗体；
两种HCAbs，IgG2和IgG3，缺失了轻链和重链区的CH1，IgG 2的铰链区(hinge)比IgG 3稍长。其VHH
在FR2区有4个氨基酸残基与VH有差异(F37, E44, R45, R/L/G47和V37, G44, L45, F/W47)，导致重链与
轻链分离。(b)：软骨鱼IgNAR，同样缺失轻链，每条重链包括5个恒定区(CH1-5)和1个可变区(VNAR)，
分别在CH1和CH4形成二硫键，聚合成二聚体。
Figure 1. Schematic diagram of three types of camel IgG, shark IgNAR and sdAbs
图1. 骆驼的三种抗体、鲨鱼IgNAR和相应的sdAbs示意图
驼(Vicugna pacos)等种类的偶蹄目(Artiodactyla)胼足亚目(Tylopoda)骆驼科(Camelidae)动物血清中[8]。
1995年之后，又相继在未免疫及免疫的铰口鲨(nurse shark, Ginglymostoma cirratum)、大星鲨(smooth dogfish, Mustelus canis)、白斑角鲨(spiny dogfish, Squalus acanthias)、鰩鱼(skate)和魟鱼(ray)等软骨鱼纲(Chondrichthyes)发现了与HCAbs相似的无轻链的免疫球蛋白新抗原受体(Ig new antigen receptor, IgNAR)
[9]-[11]。鲨鱼血清中含有高达约350 mM尿素(人体中含量低于20 mM)，这种恶劣的体内环境极大地增
加了IgNAR的稳定性和溶解性。
1997年，Ghahroudi等[12]利用噬菌体展示技术获得骆驼重链可变区片段(variable domain of heavy chain of heavy-chain antibody, VHH)基因库，经多轮淘选后得到了只含有一个结构域的最小单元抗原结合片段，被称为单域抗体(single-domain antibodies, sdAbs)。其后，研究人员又从鲨鱼新抗原受体可变区片段(variable NAR, VNAR)基因库[13]中获得了结构相似的sdAbs。这种椭球形的小分子抗体的直径仅2.5 nm，长4 nm，相对分子质量仅15 kDa，因此也被称为纳米抗体(nanobodies, Nbs) [14]。其固有的高特异性、高亲和力和高热稳定性使得sdAbs在其被发现后20多年的研究中取得了瞩目的成果，成为生技药品
刘晟等
的一颗新星，在免疫、诊断、医学成像、检测等领域中受到越来越多的关注。
目前已有文献分别综述了骆驼源sdAbs的结构、特性和应用等方面内容，但都不太全面，极少涉及在进化上更早的以鲨鱼为代表的海洋软骨鱼类sdAbs相关研究进展，且近年来sdAbs相关的研究发展较快，涌现出许多新的研究成果和新技术。因此本文综述了近年来单域抗体研究进展，特别是鲨鱼sdAbs 的结构及特性，并展望了单域抗体的应用前景和面临的问题。
2. 重链抗体和单域抗体结构特征
单域抗体是重链抗体的可变区结构域，其结构影响抗体VH与VL的结合，决定着抗体的许多性质(图1)。重链抗体广泛存在于骆驼科和软骨鱼纲动物血清中，是趋同进化的典型例证，但由于进化起源上的差异等因素[10]，二者的抗体间有许多不同特征。
由于骆驼科动物养殖容易，研究方便，并与人源IgG同源，故早些年的研究对象主要集中于骆驼科动物。如图1(a)所示，骆驼血清中的IgG有三种类型[15]：由两条重链和两条轻链组成的传统四聚体抗体IgG1，其相对分子质量和人源IgG接近，为150 kDa；两种缺失轻链和重链的CH1区的HcAbs (IgG2和IgG3)，其相对分子质量分别为92 kDa和90 kDa，这是由于IgG2的铰链区(hinge)要长于IgG3型抗体[16]。氨基酸序列分析发现[2]，骆驼VHH与VH在第二个框架区(framework region 2, FR2)有4个标志性的氨基酸残基不相同[17] [18]，使得VHH不能与VL对应的区域结合，进而形成独特的HCAbs重链二聚体抗体结构。
目前所发现的骆驼科动物血清中均同时存在传统IgG和HCAbs，只是二者所占的比例在不同动物中不尽相同[19]，在普通的双峰驼中，HCAbs的比例可达50%~80%，而在南美洲大羊驼中可能仅占10%~25%。这对于我们选择何种免疫过的骆驼作为我们的研究对象尤为关键。
随着研究的深入，近年来，sdAbs在以鲨鱼为主的软骨鱼中的研究也越来越受到关注。与骆驼HCAbs 相比，软骨鱼IgNAR有5个重链恒定区(constant region of heavy chain, CH)，即CH1-5，其晶体结构尚未被探知。与骆驼VHH相同，利用基因工程技术和噬菌体展示技术同样可以将鲨鱼VNAR表达为鲨鱼单域抗体(shark sdAbs)，根据VNAR中二硫键的数目与位置[21]，研究人员将鲨鱼IgNAR分为三种类型(图2)。每个VNAR均含有两个抗原互补决定区(complementarity-determining region, CDR)和两个超变区(hypervariable region, HV)。其中传统的CDR2缺失，被HV2取代，形成一个柔性接头，连接FR2和FR3。
I型IgNAR只在铰口鲨中被发现过[22]，或许只存于这一个物种中，其VNAR的FR2和FR4区分别有一个半胱氨酸(Cys)残基，而其CDR3有两个Cys残基。对I型IgNAR的VNAR晶体结构分析(图3(a)和图3(b) [20])，研究人员发现除去与其他型VNAR、人类VH、骆驼VHH的FR1和FR3存在的一对维持基本结构的典型的二硫键外，其FR2与CDR3和CDR3与FR4之间还存在两对非典型的二硫键，这使得CDR3折叠成更紧密的结构，并指向HV2。这种结构大大增加了抗体的热稳定性，但同时也限制了其结构的灵活性，因此降低了抗体对抗原的多样性。
II型IgNAR在VNAR的CDR1与CDR3之间形成非典型二硫键，使得CDR3可以像骆驼的VHH (图3(c))的CDR3一样伸展出来，其VNAR的构像与框架也与VHH比较相似。
III型IgNAR一般只在软骨鱼年幼时(小于1岁)出现[23]，其结构与II型IgNAR比较相似，只是在VNAR的CDR1有一个保守的色氨酸(Trp/W)残基。其CDR3仅有约15个氨基酸残基，缺乏多样性，却形成保护新生鱼的第一道防线[11]，在成年软骨鱼免疫系统成熟的过程中发挥了重要作用。
另外，Liu等[24]还发现了没有形成二硫键的IIb型以及同IIb型结构相似但和III型一样在CDR1有一个保守色氨酸残基的IIIb型IgNAR。但制备出的缺少二硫键的sdAbs稳定性差，亲和力低，其应用前景有限。
刘晟等
黑色为与人源VH和驼源VHH相同的典型二硫键，绿色和红色为非典型二
硫键。
Figure 2. Three IgNAR isotypes from chondrichthyes divided by
the numble and site of VNAR
图2. 软骨鱼IgNAR按VNAR的二硫键的数目和位置划分出的
三种类型
(a) (b) (c)
(a)：铰口鲨Ⅰ型IgNAR的VNAR区晶体结构图，有两对二硫键分别连接FR2与CDR3和CDR3与
FR4，使得CDR3的螺旋折叠区指向HV2。(b)：Ⅰ型VNAR区晶体结构图，其结构相比驼源VHH更
紧凑，比VHH约小20%。(c)：骆驼VHH区晶体结构图，只有一对二硫键连接CDR1和CDR3，使
得CDR3螺旋伸展出来。
Figure 3. Crystal structures of VNAR and VHH [20]
图3. VNAR与VHH晶体结构图[20]
3. 单域抗体的表达与纯化
目前，sdAbs已经可以成熟地采用基因工程的方法进行大量表达，sdAbs制备的核心是建立一个容量较大的基因库，并从中淘选出目的基因片段。
3.1. 单域抗体基因文库的建立
驼源与鲨鱼源sdAbs在抗体的表达纯化及特性分析的操作方法相仿，一般从新鲜的经免疫的或未经免疫的动物外周血液淋巴细胞中提取RNA，逆转录后建立抗体cDNA文库，之后可借助噬菌体展示技术
[25]将抗体cDNA连接到噬菌粒载体转化到大肠杆菌(图4)，再进行基因库的保藏与目标基因的淘选工作，
以大大提高目标产物的筛选效率，也有的采用酵母展示技术[26] [27]和核糖体展示技术[28] [29]等。
根据抗体基因的来源，我们将噬菌体抗体文库分为两类[30] [31]：天然库(na?ve library)和合成库
刘晟等
从外周血淋巴细胞中提取的抗体RNA经逆转录后形成cDNA第一条链，PCR扩增后形成
双链的cDNA文库。抗体DNA经双酶切后与具有两个对应的粘性末端(Sfi I和Not I)的
pHEN2噬菌粒载体连接，电转化至电感受态大肠杆菌，形成噬菌体文库。淘选前，需用
烈性的辅助噬菌体侵染大肠杆菌，激活重组噬菌粒的表达，使大肠杆菌裂解。表达出的
pIII-VHH(VNAR)融合蛋白可随机地装载到噬菌体衣壳蛋白上。
Figure 4. Schematic diagram of sdAbs phage display
图4. SdAbs的噬菌体展示示意图
(synthetic library)。天然库是未加修饰的完全拷贝动物的抗体基因建立的基因库；合成库包括全合成库和半合成库(semi-synthetic library)。因抗体的框架区基因序列具有一定保守性，而CDR的基因序列则多变并决定抗体的抗原结合性质。因此，半合成库是将天然库与全合成库相结合[32]，只合成相对高变的序列，在大大减少工作量的同时保证噬菌体抗体文库的多样性。目前相关研究主要采用半合成库，其成功度取决于文库的大小和质量。一个能让人满意的噬菌体抗体文库至少要达到109个单位的拷贝数[33]，这将直接影响最终筛选出的单域抗体的特异性、亲和性以及稳定性。从头开始建立一个全新的基因库需要约4~6个月，市面上已经有相关的sdAbs噬菌体基因库出售[11]。
噬菌体展示技术一般选用pIII蛋白和pVIII蛋白展示，前者是噬菌体尾部蛋白的组成部分，可以允许大片段的插入，后者是噬菌体衣壳蛋白，只能展示一段非常短的肽链(6~8个残基)，如图4所示。而编码驼源VHH的基因约为360 nt (IgNAR与之相仿)，表达的sdAbs约由120个氨基酸残基组成，因此研究者通常采用PHEN2，MS2等[34]噬菌体进行基于pⅢ蛋白的单价展示。这些噬菌体一般是溶源性温和噬菌体，在短时间内不能快速增殖，因此在进行扩增淘选时还需要在辅助噬菌体[35]帮助下裂解宿主细胞。
3.2. 目标抗体的淘选
淘选(panning)是从海量的噬菌体抗体文库中采用固相化的抗原富集特异性目标抗体基因的过程。由于噬菌体展示技术可以使融合蛋白表达在噬菌体衣壳表面，利用抗原富集目标抗体的同时使携带了目标抗体基因的噬菌体富集。将这些目标抗体基因分离出来可以很容易地进行表达纯化与分析。
刘晟等
要得到特异性较高的目标抗体基因一般需三轮淘选，每轮淘选可以纯化约4~10倍[36]。由于文库中每种噬菌体抗体的拷贝数很少，而库容量巨大，因此第一轮淘选条件要尽量地非严谨，否则会适得其反，增加偶然因素造成的风险。第一轮淘选后，每种噬菌体的拷贝数大幅提高，随后其操作严谨性也应大幅提高。
3.3. 重组抗体的表达纯化
SdAbs可在细菌、真菌和植物中大量表达，即便是在细菌中也能够形成二硫键，可保证目标sdAbs 结构的正确性和功能的完整性。在表达前，通常给目标抗体基因加上组蛋白标签(6XHis tag)，这样就可以通过固相金属镍亲和柱高效地纯化目标抗体。如有必要，还可以经凝胶过滤等蛋白质分离技术对目标抗体进一步纯化。如Liu等[37]获得的羊驼和鲨鱼sdAbs产物的得率分别为10~20 mg/L和0.5~1.0 mg/L。
4. 单域抗体的理化性质
4.1. 单域抗体对抗原的特异性
单域抗体CDR区是主要的抗原结合区域，其基因库的多样性决定了淘选得到的目标抗体对抗原的特异识别能力。Liu等[38]淘选出的鲨鱼源抗葡萄球菌肠毒素B(SEB)和抗蓖麻毒素(ricin) sdAbs对结构相似的非特异性抗原的结合率分别低于1%和0.1%，表现出高度抗原结合选择性。目前，研究者们已经制备出多种具有高度特异性的基于VHH或IgNAR的sdAbs，可靶向于噬菌体、病毒、细菌和真菌等微生物及其分泌的毒素等大分子蛋白质。如Walper、Graef和Goldman等从驼源和鲨鱼单域抗体库中淘选出高特异性抗炭疽芽孢杆菌(Bacillus anthracis)的孢子和营养细胞[39]，抗金黄色葡萄球菌肠毒素 B (Staphy-lococcus aureus Enterotoxin B, SEB) [40]，抗相思子凝集素(abrus agglutinin) [41]的sdAbs，可用于免疫和检测等领域。
4.2. 单域抗体的亲和性
目前，关于人源scFv抗体的研究也很热门。scFv是由一条VL和一条VH随机地连接而成，这使得抗体的多样性提高，但同时也会因其不确定的组合而降低抗体的亲和性。而sdAbs则没有这方面的后顾之忧，如驼源VHH的热动力学结合与解离常数为105~106 M?1?s?1 (k on)和10?2~10?4 s?1 (k d)，表现出良好的亲和性[33]。Liu等[38]淘选出的亲和力更高的铰口鲨源sdAbs，因其HV4的特殊序列，与抗原间的范德华力更强，其解离常数仅10?7 s?1，与传统IgG相当。另外，由于sdAbs的CDR3区较长，可以深入到抗原内部与之更好地结合。
4.3. 单域抗体的稳定性
热稳定性是sdAbs相对于传统IgG、Fab、scFv抗体最明显的优势。一方面由于sdAbs分子尺寸小，结构紧凑；另一方面，VNAR非典型二硫键也赋予了sdAbs优良的热稳定性[40] [42]。SdAbs的变性温度在70℃~80℃之间[37] [43]，远高于scFv的57℃[44]。即便在95℃下加热一小时，来源于星鲨的sdAbs 仍然能够保持一定的活性[24]，这一性质大大拓展了sdAbs的应用领域。有趣的是，研究人员还发现，有些sdAbs的活性会在复性后获得更好的活性，可能是由于复性过程使蛋白质更好地折叠[38]。
额外的非典型二硫键不仅影响sdAbs分子的热稳定性，同时还影响其化学稳定性。这使得它可以在约60℃~80℃、2.3~3.3 M的盐酸胍溶液中保持活性[45]，抵抗变性剂引起的蛋白质失活，这一特性使得sdAbs可以加入到洗发水中治疗因头皮屑中的糠秕马拉色氏霉菌引起的皮下感染[46]。同时这些二硫键还可以保护sdAbs避免被胰凝乳蛋白酶降解[47]，因此这类sdAbs还可以用于口服。然而，为增加sdAbs
刘晟等
的亲和力和稳定性而人为地增加二硫键数目或改变二硫键位置的同时也会影响CDR3对抗原的特异性，故需要综合考虑。
5. 单域抗体在科研中的应用
作为一类相对分子质量小、特异性高、亲和性好、稳定性高的新型纳米抗体，sdAbs同时还具有周期短(在有完整抗体库下，筛选周期仅1~2个月)、成本低、货架期长等优点。其可开发成诊断和治疗疾病的试剂，作为科学研究的新工具，或者作为检测工具的新型材料，已经在医疗、科研及检测等领域中崭露头角。至2014年[11] [48]，研究人员基于骆驼和鲨鱼已开发出约80种sdAbs，用于免疫、治疗和传感器领域，其中有7种处于I期临床试验阶段，3种处于I/II期，4种处于II期。目前，尚无相关的sdAbs 产品上市。
5.1. 单域抗体在医学中的应用
SdAbs最主要的应用是代替传统IgG抗体或mAbs抗体等在诊断、治疗和免疫检测中的应用。由于sdAbs可以很容易地在细菌或真菌中大量表达，并且其稳定性高、药效好、货架期长，可降低诊断病菌和中和毒素的成本。
由于sdAbs相对分子质量小、尺寸小，并且缺失了Fc结构域，从而避免了与其它免疫蛋白分子如补体蛋白相结合，不会聚合形成大分子抗体衍生物，因此免疫原性低[49]，并且易于携带靶向药物进入细胞内部[50]或穿越血脑屏障[51]，对传统药物很难到达的部位进行治疗。另外，也可筛选出特定的sdAbs直接作用于许多可进入并定位于细胞内或大脑区域的毒素，如蓖麻毒素(ricin)、肉毒梭菌神经毒素(Clostridium botulinum neurotoxin, BoNT)等，这样的sdAbs不仅可以用于检测还可以用于中和毒素[52] [53]。
SdAbs还可以用于医学显影方面[54]，如通过识别表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGFR)等靶标来诊断肿瘤[55] [56]。应用传统单克隆抗体进行放射性元素(99m Tc或68Ga)标记[57]和体内显影的缺点是，由于标记抗体分子量较大，组织穿透性差，显像剂滞留于血液中，而且抗体的半衰期长(可达数天)，影响图像质量[58] [59]，并导致检测间隔长，限制了单克隆抗体在人体中的应用。而sdAbs相对分子质量小，半衰期仅1~2小时[54]，存在着在体内时间过短、放射性元素剂量过大等问题。因此可以将抗体N端和C端融合形成多价聚合体[60] [61]，适当延长其半衰期，降低辐射量，降低信噪比，增强显影效果。这样一方面可减少剂量，减轻肾脏负担，另一方面增加抗体亲和力。
5.2. 单域抗体在科研中的应用
SdAbs还因其对靶标物质的高亲和性和识别位点的多样性等特点被用来作为科学研究的辅助工具。如将sdAbs结合到亲和色谱柱的固定相上来捕获特定组分，在蛋白质纯化中获得良好的效果[62]。通过将绿色荧光蛋白(green fluorescent protein, GFP)等荧光蛋白基因与sdAbs基因融合[63] [64]，构建标记的重组抗体，在体内表达，可跟踪抗原在体内的活动。并且由于许多细菌病毒等抗原一般含有多抗原表位，而sdAbs分子尺寸小，其空间位阻小，可以更多地结合到抗原表面[65]，提高观测的灵敏度。
基于抗体可与特异性蛋白质深入结合、稳定蛋白质构象的特点，很早就有应用抗体辅助不稳定蛋白质结晶来分析其结构和功能特性的提议和尝试；然而传统抗体都或多或少地存在分子量大、不稳定等因素[66] [67]，导致结晶效果一直不尽人意。因此，sdAbs的快速发展为这一设想提供了新的突破口，目前已经可以制备重组抗体亲和试剂作为结晶伴侣试剂[68]。这些亲和试剂的小尺寸和灵活的CDR3片段可以插入高度动态下的蛋白质空隙中，或与蛋白质表面位点紧密结合，保护疏水位点，稳定蛋白质构象，与蛋白质形成共结晶[69]，通过X射线衍射技术来探知蛋白质的空间结构。
刘晟等
5.3. 单域抗体在检测中的应用
从骆驼和鲨鱼抗体基因库中筛选出的抗霍乱毒素和葡萄球菌肠毒素的高亲和性sdAbs可与金纳米颗粒(gold nanoparticles, AuNPs)共轭结合后组成复合材料用于生物传感器上[70] [71]，实现对靶标物的快速检测。另一个应用是用于酶联免疫吸附反应(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)的双抗夹心法中替代二抗[24] [72]，降低检测成本，获得更准确的结果。Anderson等[73]还探索了用sdAbs制作量子点的方法，成功制作出粒径仅12 nm的用二氢硫辛酸(dihydrolipoic acid, DHLA)配基包裹的靶向蓖麻毒素的sdAbs量子点，用于表面等离子体谐振(surface plasmon resonance, SPR)检测蓖麻毒素，检测限仅为mAbs 同类的1/2。
SdAbs的另一个特点是可识别小分子的半抗原位点，这是传统抗体通常所不能做到的。利用这一特性可将sdAbs组装在试纸条中用于海关机场等场所，用免疫层析法检测除草剂、TNT和治疗药物等敏感物质[74]-[76]，这种方法可简化检测步骤，降低检测时间和费用，并且在设备缺乏的地区也可准确快速检测。
6. 前景展望与存在的问题
单域抗体因其小尺寸、高特异性、高亲和性、高稳定性、高组织穿透性、低免疫原性和生产周期短等优点，在其被发现的二十多年时间里，在免疫、诊断、疾病治疗、材料、晶体学和食品科学等领域均取得丰硕的成果，其更是为各类学科创建了一个新的研究平台。
无可否认，单域抗体将在未来的研究与应用中发挥越来越重要的作用，但同时也要正视其在目前研究中的困境。虽然一些筛选出的抗体药物已经获得批准，进入II期临床试验阶段[77]，但有研究指出，大剂量重复使用融合多价单域抗体也将使机体对单域抗体产生免疫原性，最终结果只有通过一定数目病人的临床试验研究才会得以展现[11]。另外，虽然目前筛选特异性抗体的时间已经大大缩短，但要获得具有完整功能的理想产品仍然是一件费时费力的事。与传统抗体的应用规模，系统成熟度和市场认可度相比，单域抗体的研究和应用还处于探索阶段，其大规模的应用还需克服相当的困难，解决一些现实的问题。当然，这些问题将随着研究的深入，分析手段和分析工具的革新而逐步解决。
我国目前关于单域抗体的研究还处于起步阶段。一方面是由于单域抗体发展时间较短，研究还处于基础阶段；另一方面受限于骆驼和鲨鱼等研究材料的高价格。贺生芳[78]和丁志凌[79]分别对Intein介导的单域抗体在大肠杆菌中的表达纯化和99m Tc标记的单域抗体在肿瘤放射免疫显影中作了初步探究，取得了不错的进展。未来单域抗体将成为一个强大的工具箱来辅助尖端科学的研究，在高特异性药剂的研发、胞内成像、结晶、快速检测及食品解毒等领域具有不可估量的发展潜力。
基金项目
本成果获得国家自然科学基金面上项目(31371385)和山东省自然科学基金杰出青年基金(JQ201204)资助。
参考文献(References)
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抗体技术研究进展_人源抗体技术
第33卷第5期暨南大学学报（自然科学版） Vol．33No．52012年10月 Journal of Jinan University （Natural Science ） Oct．2012 ［收稿日期］2012－03－26 ［基金项目］国家自然科学基金项目（81202449）；广东省科技计划项目（201213010300016）［作者简介］向军俭（1952－），男，教授，研究方向：抗体技术与应用 抗体技术研究进展（1）：人源抗体技术 向军俭，童吉宇，王 宏 （广东省分子免疫与抗体工程重点实验室；暨南大学抗体工程研究中心，广东广州510632） ［摘 要］100年来，抗体的发现为人类疾病诊断、治疗和有害物质的分析检测发挥了巨大的作用．特别是1975年 发明了单克隆抗体技术以及1986年发明基因工程抗体技术，为研制特异性高、大量均一并大量生产抗体成为了现实，也使嵌合抗体、全人源抗体造福人类并产生巨大的经济效益．为了克服鼠源性单抗可诱发人抗鼠抗体（HA-MA ），通过嵌合抗体、改构抗体、小分子抗体等技术和改良抗体与抗原结合的特异性，已成为抗体技术研究的主要发展方向，本文主要就抗体人源化及抗体分子小型化，抗体功能复合化两个部分的进展进行综述．［关键词］抗体； 人源化抗体； 基因工程抗体； 抗体库技术； 小分子抗体 ［中图分类号］R392．11 ［文献标志码］A ［文章编号］1000－9965（2012）05－0524－07 Recent advances in antibody technique （1）：Humanized antibody technique XIANG Jun-jian ，TONG Ji-yu ，WANG Hong （Guangdong province Key laboratory of Molecule Immunology and Antibody Engineering ，Jinan University ，Guangzhou 510632，China ） ［Abstract ］In the past 100years ，antibody has played a significant role in human disease diagnosis and treatment and the analysis of detrimental substances．Especially ，the inventions of both monoclonal antibody technique in 1975and genetic engineering technique in 1986，on one hand ，have made it possi-ble for producing abundant antibodies of high specificity and homogeneity ，on the other hand ，help chim-eric antibody and fully human antibody bring benefit to human beings．To overcome the problem that mu-rine monoclonal antibody may induce HAMA ，technologies such as chimeric antibody ，reshaping antibod-y ，small-molecule antibody and improvements of the specificity between antibody and antigen have be-come the main trend when developing antibody technique．This review gives an overview on antibody hu-manization ，small-molecule antibody and composite function of antibody．［Key words ］antibody ；humanization antibody ；genetic engineering antibody ； antibody library technique ；small-molecule antibody 19世纪末抗体首次被发现，其后很长一段时间内人们都以抗原免疫动物获得抗血清（多克隆抗 体）．1975年， K hler 和Milstein 建立了B 淋巴细胞杂交瘤技术，为大量生产均一、特异性强的单克隆抗体提供了技术支持并使免疫学发生一场革命，有力 地促进诊断与治疗性抗体的发展．然而由于单克隆 抗体大部分为鼠源性抗体，在临床治疗中可在人体 内可诱发人抗鼠抗体（HAMA ）［1］ ，限制了单克隆抗体在临床治疗中的应用．随着基因工程技术的发展和对各类抗体结构和氨基酸序列、及其变异种属和
抗独特型调节作用
抗独特型抗体的调节及其应用 摘要：抗独特型抗体是针对抗体可变区的抗原决定簇(独特型)产生的特异性抗体，其中Ab2是初始抗原在体内的“内影像”由于可模拟初始抗原并竞争性抑制Ab1与抗原的结合而广泛应用于疫苗研究、肿瘤免疫、移植耐受、自身免疫病、食品安全等方面，因此对近年采抗独特型抗体的应用进行综述。 关键词：抗体，抗独特型 前言：Jerne，N．K于1974年提出的免疫调节网络学说认为：外来抗原在机体内应答产生的抗体Ab1，同时可刺激产生抗Ab1的第二抗体(Ab2)，并称之为抗独特型抗体。机体免疫系统内的各个细胞克隆，通过自我识别，相互刺激，或相互制约，构成一个动态的网络结构，来调节体内的正常免疫反应。如果该网络结构发生紊乱，则因侵害机体自身而将导致自身免疫性疾病如风湿性关节炎，系统性红斑狼疮和重症肌无力以及免疫抑制等疾病。机体内存在许多不同基因型并能产生抗体的B淋巴细胞克隆，由于遗传性的差异导致产生的抗体的多样性与不均一性，这种多样性固然与不同的外来抗原本身结构有关，但根据免疫网络学说，机体免疫系统是一个建立在识别自身抗原的基础上来识别外来的抗原的系统。如果外来抗原进入体内，首先能被具有细胞表面受体的免疫细胞克隆所识别，结合抗原后，被活化，分化和增殖，产生抗体以及产生效应细胞和记忆细胞，与此同时，机体内同时存在具有识别这种抗体的免疫细胞克隆，通过免疫细胞之间相互识别V区上的独特型决定簇引发调节机体的免疫反应。 “免疫网络学说”在承认细胞系选择学说的基础上，认为免疫应答并非仅由某个单一克隆细胞的激活而实现。独特型决定簇具有自身免疫原性，体内存在能识别自身独特型决定簇的淋巴细胞。机体接受外来抗原刺激时，能识别外来抗原的淋巴细胞克隆首先被激活，产生针对外来抗原的抗体Ab1，随后能识别某一个克隆独特型决定簇的第2个克隆被激活，产生抗独特型抗体Ab2，依次类推还可以有第3个Ab3，第4个Ab4……。这些克隆相互制约，相互连锁，形成一个闭合型、多层次级联网络。网络的主要作用是抑制抗体的产生，因为只有抑制才能保持机体的免疫自稳状态，使抗体维持在一定水平上。否则，抗体无休止地产生，反而会使机体患免疫病。免疫系统网络学说已经被实验所证明，有力地促进和指导了基础免疫学的研究和发展。独特型(Id)即位于抗体分子可变区的抗原决定簇，是位于抗体可变区内高变区的遗传标志。本质上，Id的差异是由抗体轻链可变区（V l）和抗体重链可变区(V b)内高变区氨基酸序列不同所致。这种氨基酸序列的差异也是抗体特异性的分子基础，不同特异性的抗体分子其独特型也不同。独特型由若干表位组成，称为独特位，它可刺激机体产生相应的抗体，即抗独特型抗体AId。许多实验表明，用抗Id抗体代替抗原免疫动物所产生的免疫应答，能够增强动物对原虫、病毒和细菌感染的抵抗力，作为免疫制剂或免疫调节剂来弥补现有疫苗的不足，或者作为免疫治疗剂治疗肿瘤、自身免疫性疾病，有的用于免疫诊断试剂来建立新的血清学方法。 在疫苗研究中的应用抗独特型抗体Ab2作为抗原的模拟物，可代替病原体，刺激机体产生与抗原特异性抗体具有同等免疫效应的抗体，诱导抗病原体的特异性免疫应答，由此制成的疫苗称为抗独特型疫苗，又称内影像疫苗。迄今为止，抗独特型疫苗主要应用于肿瘤免疫方面。如应用于结肠癌病人,可减缓病情发展、肿瘤的转移并延长病人存活。但与传统疫苗相比，Ab2的免疫原性较弱,因此抗独特型疫苗可与佐剂联用以提高免疫原性，根据不同肿瘤的特性可选择恰当的佐剂。在对结肠癌的研究中发现，抗独特型抗体疫苗与聚核苷酸CPG联用比与完全福氏佐剂CFA联用更能提高抗肿瘤的免疫应答；白细胞介素_6(IL_6)与抗独特型抗体的融合蛋白质可有效地提高体内抗恶性卵巢癌的体液免疫应答，因为IL_6是促进B细胞成熟，增强B细胞功能的细胞因子，也是浆细胞的必需生长因子。近年来，随着对单链可变
单克隆抗体药物研究新进展
单克隆抗体药物研究新进展 单克隆抗体药物，俗称“生物导弹”，是一种具备疾病治疗靶向性治疗的药物，该种药物针对一些对应疾病的治疗具备极强的治疗针对性，往往可以取得较为有效的治疗效果，其整体所占市场份额也比较大。该领域的药品已经慢慢成为一种治疗疾病的主流药物，随着相关研究人员的不断研究推进，其整体呈现一种不断拓宽化的发展。本文从单克隆抗体药物整体的市场情况、靶点及技术三个方面进行全面的研究探索。 标签：治疗性抗体；上市抗体药物；靶点；技术综述 抗体药物的第一次应用是于十九世纪，采用血清疗法针对患者进行相关治疗，在这个阶段人们对抗体药物的认知停留在使用有效的阶段；随着医疗实力的不断发展，直到1975年杂交瘤技术之后，才逐步实现了抗体的更为全面的认知及大规模量产的过程。现阶段随着社会的不断发展，疾病种类也越来越多，治疗起来也越来越麻烦，在这样一种大的背景下，单克隆抗体药物的全面研究和使用，有效的帮助患者进行疾病的靶向治疗和恢复。 一、抗体药物的市场情况 抗体药无是一种具备靶向性，能实现与靶抗原特异性结合来实现对疾病针对性治疗的药物，该种药物在进行使用的过程中，对患者的病症能做到针对性的治疗，具备治疗过程中的安全性治疗及快速准确性治疗。该种药物常常作用与一些恶性肿瘤及免疫性疾病的治疗。因为这些疾病都具备一定的治疗难度，故此药物的出现，可以有效的实现对症治疗，帮助患者进行相关疾病的缓解，因为这样的一种原因，导致在进行相关应用的过程中，该种药物得到了巨大的发展[1]。现阶段，单克隆抗体药物已经成为一种在市场上占据巨大份额的药物，其具备巨大的经济效益，同时帮助患者进行各种疾病的治疗和恢复，其整体已经成为针对疾病进行治疗的有效思路及理论。针对该种药物的扩展，主要是针对一些靶向性进行全面的研究，研究出新的靶点，制造出更多针对更多病症的单克隆抗体药物。 二、靶点研究进展 单克隆抗体药物具备一对一的治疗针对性，其靶点的把控是针对疾病治疗的重要点。世界范围之内，针对新靶点的研究如火如荼。针对热点靶点的研究，主要通过分析世界范围内患者的病症及发病几率进行全面的分类研究，研究出一些有效且具备普遍性的靶点，全面促进单克隆抗体药物的研究和发展。其现阶段世界主要研究靶点分以下几类。 （一）PD-1、PD-L1 PD-1是一种存在于T细胞表面的免疫抑制跨膜蛋白，主要针对癌症进行相关治疗，其主要作用有两点：1.针对慢性感染炎症进行相关限制；2.针对癌症中
基因工程抗体
基因工程抗体及其进展 【摘要】着对分子生物学研究和抗体分子结构功能的深入研究,利用细胞工程和遗传工程对抗体分子进行改建并赋予其新的功能,进而开发了新的抗体应用领域,使单克隆抗体技术又向前发展了一步。基因工程抗体是按人类设计所重新组装的新型抗体分子,可保留或增加天然抗体的特异性和主要生物学活性,去除或减少无关结构,从而可克服单克隆抗体在临床应用方面的缺陷。细胞工程产生的鼠源单克隆抗体及基因工程产生的人源单克隆抗体。抗体产生的技术革命为抗体治疗开辟了广阔的前景。 【关键字词】基因工程抗体人源化抗体小分子抗体广阔的前景 基因工程抗体以其独特的优点(免疫原性低、可按人的意愿加以改造等) 正逐渐取代动物源性单抗。随着基因工程和蛋白质工程等生物技术在抗体研制领域的广泛应用, 适应不同需要的基因工程抗体的种类日趋多样化, 构建日趋合理化, 在体内的生物学效应也日臻完善, 使之较天然单抗的治疗效果更好, 范围更广, 并在初步临床试用中展示了光辉的前景。分子生物学技术的发展，推动了免疫球蛋白遗传学的研究。抗体的研究从原来的血清学方法、氨基酸水平分析发展到大免疫球蛋白基因结构、表达及调控DNA水平的研究，揭示了抗体多样性、等位基因排斥现象、抗体的分泌型和膜结合型形式、H链类别转换以及亲和力成熟机制等多种生物学现象。自1975年Milstein和k?hler等人研制出单克隆抗体以来，抗体技术得到了广泛的应用和发展，但在生物研究和临床疾病的治疗中却遇到了一定的困难。异源性鼠抗体在人体内诱生免疫应答，产生抗小鼠抗体；人单克隆杂交瘤制备困难，生产量少，稳定性差；获得特异性类别抗体比较困难。随着对抗体基因的研究和DNA分子重组技术的应用，通过基因改造获得特异性抗体成为可能。1989年Huse等首次构建了抗体基因库，从而使抗体的研究从细胞水平进入到分子水平，并推动了第3代抗体—基因工程抗体技术的发展。至此，抗体的产生技术经历了三个阶段：经典免疫方法产生的异源多克隆抗体；细胞工程产生的鼠源单克隆抗体及基因工程产生的人源单克隆抗体。抗体产生的技术革命为抗体治疗开辟了广阔的前景。 1、基因工程抗体概述及分类 基因工程抗体又称重组抗体, 是指利用重组DNA 及蛋白质工程技术对编码抗体的基因按不同需要进行加工改造和重新装配, 经转染适当的受体细胞所表达的抗体分子。目前报道的基因工程抗体很多, 分类方法不一, 大体可以分为三类。 1．1 完整的抗体分子该类抗体类似于天然抗体分子, 但经改造后更接近于人的免疫球蛋白, 可在一定程度上降低HAMA。 1．1．1. 嵌合抗体(ch imeric an t ibody) 由在基因水平上连接的小鼠抗体V 区及人抗 体C 区组成。这种抗体含75%～ 80% 人抗体, 20% 鼠抗体, 保留了原来鼠源单抗的特异性, 但对人体仍具一定的免疫原性。 1．1．2. 人源化抗体(human ized an t ibody)又称重构型抗体、改型抗体( reshaped an t ibody)或CDR 移植抗体(CDR graf t ing an t ibody) : 通过置换三个发夹状环的鼠抗体超变区(又称互补决定区, CDR) , 使构成抗原结合部位的轻重链各3 个CDR 区是鼠源的, 其余
抗体药物的研究现状和发展趋势
一、研究现状 1．抗体研究发展历程 抗体作为药物用于人类疾病的治疗拥有很长历史。但整个抗体药物的发展却并非一帆风顺，而是在曲折中前进。第一代抗体药物源于动物多价抗血清，主要用于一些细菌感染性疾病的早期被动免疫治疗。虽然具有一定的疗效，但异源性蛋白引起的较强的人体免疫反应限制了这类药物的应用，因而逐渐被抗生素类药物所代替。第二代抗体药物是利用杂交瘤技术制备的单克隆抗体及其衍生物。单克隆抗体由于具有良好的均一性和高度的特异性，因而在实验研究和疾病诊断中得到了广泛应用。 单抗最早被用于疾病治疗是在1982年，美国斯坦福医学中心Levy等人利用制备的抗独特型单抗治疗B细胞淋巴瘤，治疗后患者病情缓解，瘤体消失，这使人们对抗体药物产生了极大的期望。1986年，美国FDA批准了世界上第一个单抗治疗性药物——抗CD3单抗OKT3进入市场，用于器官移植时的抗排斥反应。此时抗体药物的研制和应用达到了顶点。随着使用单抗进行治疗的病例数的增加，鼠单抗用于人体的毒副作用也越来越明显。同时一些抗肿瘤单抗未显示出理想效果。人们的热情开始下降。到20世纪90年代初，抗内毒素单抗用于治疗脓毒败血症失败使得抗体药物的研究进入低谷。由于大多数单抗均为鼠源性，在人体内反复应用会引起人抗鼠抗体（HAMA）反应，从而降低疗效，甚至可引起过敏反应。因此，一方面在给药途径上改进，如使用片段抗体、交联同位素、局部用药等使鼠源性抗体用量减少，也增强了疗效；另一方面，积极发展基因工程抗体和人源抗体。 近年来，随着免疫学和分子生物学技术的发展以及抗体基因结构的阐明，DNA 重组技术开始用于抗体的改造，人们可以根据需要对以往的鼠抗体进行相应的改造以消除抗体应用不利性状或增加新的生物学功能，还可用新的技术重新制备各种形式的重组抗体。抗体药物的研发进入了第三代，即基因工程抗体时代。与第二代单抗相比，基因工程抗体具有如下优点：①通过基因工程技术的改造，可以
单克隆抗体及其应用的研究进展
2009年第1期畜牧兽医科技信息国兽医科学,2007,37(1):29-32 [9]李余动,等.胶体金免疫层析法快速检测氯霉素残留[J].中国食品卫生杂志,2005,17(5):416-419 [10]张明,等.免疫胶体金法检测磺胺甲恶唑残留的研究[J].中国兽药 杂志,2006,40(4):17-24 [11]邓省亮,等.胶体金免疫层析法快速检测黄曲霉毒素B1的研究 [J].食品科学,2007,28(2):232-236 [12]Sun Xiulan,et al.Preparation of gold-labeled antibody probe and its use in immunochromatography assay for detection of aflatoxin B1[J].International Journal of Food Microbiology ，2005，99(2):185-194 [13]赖卫华,等.应用胶体金试纸条快速检测赭曲霉毒素A 的研究[J]. 食品科学,2005,26(5):204-207 [14]Timo Klewitz,et al.Immunochromatographic assay for determina tion of botulinum neurotoxin type D[J].Sensors and Actuators B:Chemical,2006,113(2):582-589 1975年德国学者Kohler 和英国学者M ilstein 发明了杂交瘤技术。他们成功地将骨髓瘤细胞和产生抗体的B 淋巴细胞融合为杂交瘤细胞，这种合成的杂交瘤细胞稳定、有致瘤性、能产生抗体，其分泌的抗体是由识别一种抗原决定簇的细胞克隆所产生的均一性抗体，故称之为单克隆抗体(简称单抗)。自从鼠源单抗之后，单抗历经了鼠源性抗体、嵌合抗体、 人源化抗体、人源性抗体4个发展阶段。近年来随着分子生物学和细胞生物学的发展，单克隆抗体的应用已日益普及，单抗理论几乎应用到生物学研究的每一个区域。单克隆抗体制备技术的发展也就显得尤为重要。1 单克隆抗体的研究进展 1.1鼠源性单抗自单克隆抗体制备技术问世以来，制备单抗的一般程序基本相同，从超免疫的供体中即抗原免疫的小鼠，获取脾细胞，再与骨髓瘤细胞融合，最后对单个细胞进行克隆，培养出能分泌单抗的克隆细胞。目前生产的单抗大多是鼠源性的，但其在临床应用方面还存在着很大的弊端，主要是鼠源单抗与NK 等免疫细胞表面Fc 段受体亲和力弱,产生的抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用(ADCC)作用较弱，而且它与人补体成分结合能力低,对肿瘤细胞的杀伤能力较弱，并且鼠源性抗体在人血循环中的半衰期短，它发挥AD-CC 作用的时间较短； 其次鼠单克隆抗体还具有免疫原性，使宿主易引起过敏反应。这样一方面降低了单抗的效价，另一方面又会给病人带来严重的后果。因此鼠源性单克隆抗体还应进一步改善才能广泛应用于临床。 1.2嵌合抗体抗体的恒定区是抗体分子结构中免疫原性 最强的部位，而决定抗体特异性的是抗体的可变区。从杂交瘤细胞分离出功能性可变区基因，与人Ig 恒定区的基因连 接,再插入适当表达载体，转染宿主细胞，表达人-鼠嵌合抗体。也就是将鼠源性单抗在保留其抗原结合活性的基础上，尽可能的去除鼠源化部分或代之以人源化片断，减少了鼠源性抗体的免疫原性，从而尽可能的减少单抗的异源性，同时保留了亲本抗体特异性结合抗原的能力。但是这种抗体仍保留了30%的鼠源性，可诱发人抗小鼠反应(HAM A)。 1.3人源化抗体由于嵌合抗体异源性仍然很大，因此需要对鼠源抗体进行人源化改造，进一步人源化的方法很多,主要是重构抗体和表面重塑技术。重构抗体就是互补决定区(complementarity determining region,CDR)移植，将鼠抗体的CDR 移植到人抗体的相应部位，这样人源化程度可达90%以上，目前该方法是人源化单抗最常用、最基本的方法。而表面重塑技术，即将鼠抗体框架区表面氨基酸的残基(surface amino acid residues,SAR)进行人源化改造。该方法是仅替换与人抗体SAR 差别明显的区域，在维持抗体活性并兼顾减少异源性基础上选用与人抗体表面残基相似的氨基酸替换。 1.4人源性抗体虽然人源化抗体解决了鼠抗体的免疫原 性等问题，但生产人源化抗体仍有很大的困难；人源化过程需大量繁复、昂贵的电脑模拟，需取代不同的氨基酸以恢复选择性和亲和力，工作量非常大，并且它总还含有少量鼠源性成分。完全的人源性抗体才是用于治疗的理想抗体，目前它主要通过3种途径来研制：噬菌体抗体库技术、核糖体展示技术和转基因小鼠制备人源性抗体。1.4.1 噬菌体抗体库技术 噬菌体抗体库技术是迄今发展 最成熟、 应用最广泛的抗体库技术。其基本原理是将蛋白分子或肽段的基因克隆到丝状噬菌体的基因组DNA 中,与噬菌体的外壳蛋白形成融合蛋白,从而使该异源分子呈现于噬菌体表面。通过这种方式,形成了一个收藏上亿个以体外方式制得的不同抗体的基因数据库,使从任何真实的抗原中迅速分离高度相似的同族抗体成为可能。分离得到的抗体可用于 单克隆抗体及其应用的研究进展 孔 维1，杨文辉2 （1.东北农业大学动物医学院，哈尔滨150001；2.哈尔滨北方森林动物园，哈尔滨150300） 000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000作者简介：孔维（1979～），湖南平江人，硕士研究生 专论与综述 9
抗体药物地研究现状和发展趋势
抗体药物的研究现状和发展趋势 一、研究现状 1．抗体研究发展历程 抗体作为药物用于人类疾病的治疗拥有很长历史。但整个抗体药物的发展却并非一帆风顺，而是在曲折中前进。第一代抗体药物源于动物多价抗血清，主要用于一些细菌感染性疾病的早期被动免疫治疗。虽然具有一定的疗效，但异源性蛋白引起的较强的人体免疫反应限制了这类药物的应用，因而逐渐被抗生素类药物所代替。第二代抗体药物是利用杂交瘤技术制备的单克隆抗体及其衍生物。单克隆抗体由于具有良好的均一性和高度的特异性，因而在实验研究和疾病诊断中得到了广泛应用。 单抗最早被用于疾病治疗是在1982年，美国斯坦福医学中心Levy等人利用制备的抗独特型单抗治疗B细胞淋巴瘤，治疗后患者病情缓解，瘤体消失，这使人们对抗体药物产生了极大的期望。1986年，美国FDA批准了世界上第一个单抗治疗性药物——抗CD3单抗OKT3进入市场，用于器官移植时的抗排斥反应。此时抗体药物的研制和应用达到了顶点。随着使用单抗进行治疗的病例数的增加，鼠单抗用于人体的毒副作用也越来越明显。同时一些抗肿瘤单抗未显示出理想效果。人们的热情开始下降。到20世纪90年代初，抗毒素单抗用于治疗脓毒败血症失败使得抗体药物的研究进入低谷。由于大多数单抗均为鼠源性，在人体反复应用会引起人抗鼠抗体（HAMA）反应，从而降低疗效，甚至可引起过敏反应。因此，一方面在给药途径上改进，如使用片段抗体、交联同位素、局部用药等使鼠源性抗体用量减少，也增强了疗效；另一方面，积极发展基因工程抗体和人源抗体。 近年来，随着免疫学和分子生物学技术的发展以及抗体基因结构的阐明，DNA 重组技术开始用于抗体的改造，人们可以根据需要对以往的鼠抗体进行相应的改造以消除抗体应用不利性状或增加新的生物学功能，还可用新的技术重新制备各种形式的重组抗体。抗体药物的研发进入了第三代，即基因工程抗体时代。与第二代单抗相比，基因工程抗体具有如下优点：①通过基因工程技术的改造，可以降低甚至消除人体对抗体的排斥反应；②基因工程抗体的分子量较小，可以部分
人源化单克隆抗体的研究进展
论人源化单克隆抗体的研究进展 *** （生物工程一班生命科学学院 ***大学哈尔滨 150080） 摘要：自从单克隆抗体问世至今已广泛应用与临床治疗，然而鼠源性单克隆抗体在临床治疗中会产生人抗鼠抗体反应，从而使鼠源性单克隆抗体的应用受到极大限制。随着基因工程技术和抗体工程技术的迅速发展，人源性单克隆抗体开始快速发展而逐渐代替鼠源性单克隆抗体。本文将就人源化单克隆抗体的构建以及其在临床治疗方面的应用进行综述。 关键词：单克隆抗体人源化临床治疗 Theory humanized monoclonal antibody research progress *** (The 1st class of Bioengineering , College of Life Science, *** University, Harbin, 150080) Abstract: Since the advent of monoclonal antibody has been widely applied in clinical treatment, but the mouse source sex monoclonal antibodies in clinical treatment will produce people resistance to mouse antibody response, so that the rat source sex monoclonal antibody application are highly limited. Along with the genetic engineering technology and the rapid development of antibody engineering technology, humanized sex monoclonal antibody began to rapid development and gradually replaces the rat source sex monoclonal antibody. This paper will review humanized monoclonal antibody construction and the application of clinical treatment in this article. Keywords: monoclonal antibody humanized clinical treatment 1975年。Kohler和Milstein将小鼠骨髓瘤细胞和经免疫的小鼠脾细胞融合，形成了可产生单克隆抗体的杂交瘤细胞，该细胞机能产生抗体，又可无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术[1]，此后单抗药物开始迅速发展并广泛应用于临床。1982年，Philip Karr 将第一株抗独特型单抗(anti- ld) 应用于B细胞淋巴瘤的临床治疗并取得成功[2]，使得治疗性抗体的研究很快成为生物医药的热点，许多以单克隆抗体为研究对象的公司相继成立。然而，鼠源性单克隆抗体应用于人类有较强的免疫原性，能诱发人抗鼠抗体( Human ant-i mouse antibody, HAMA) 反应，引起强烈的免疫排斥反应[3]，而且鼠源性单克隆抗体不能有效地激活人体的生物效应功能，因此限制了其临床应用。这使研究学者意识到研制鼠源性单克隆抗体人源化或完全的人源性抗体才有可能减少或避免HAMA反应并提高疗效。然而反复实验证明, 杂交瘤技术不能提供稳定分泌人抗体的细胞株。直到80年代末期，随着分子生物学研究的深入，在抗体基因工程研究领域相继出现了一
抗体药物制备技术研究进展
1 绪论 以细胞工程技术和基因工程技术为主体的抗体工程药物近年来取得了突破性进展，并成功应用于临床。一方面，随着功能基因组学与蛋白质组学的研究进展，将发现与确定越来越多新的与疾病相关的分子靶点，而与这一发展相适应的、具有高度特异性、针对疾病相关分子靶点的抗体药物将被陆续研制成功；另一方面，抗体药物用于癌症、心脑血管疾病、病毒感染以及类风湿性关节炎等疾病的治疗，受到了广泛关注。 2抗体药物发展的历史 200多年前，人们将白喉杆菌培养物上清液中分离到的可溶性毒素注入马体，发现得到的抗血清可以治疗白喉，这是第一个用抗体治疗疾病的例子。1891年，法国人Babes等用采自经狂犬病疫苗免疫的人或犬的全血治疗被疯狼严重咬伤的患者，这是抗狂犬病最早应用的例子[1]。1975年Kohler及Milstein建立了B淋巴细胞杂交瘤技术。该技术使人们通过细胞工程可以在体外定向地制备各种单克隆抗体（monoclonal anti-body，Mab），这是产生抗体的重大技术革命。1984年诞生了第一个基因工程抗体—人—鼠嵌合抗体。然而真正以基因工程操作的方式制备抗体却始于1989年底，英国剑桥的W inter小组与Scrips研究所的Lerner小组的创造性工作，他们利用PCR 技术克隆人的全部抗体基因，并重组于原核表达载体中，用标记抗原就可筛选到相应抗体，当时称为组合抗体库技术。20世纪90年代后，这一技术不断发展，陆续出现人源化抗体、单价小分子抗体（Fab、单链抗体、单域抗体等）、多价小分子抗体（双链抗体、三链抗体、微型抗体等）、融合蛋白抗体（免疫抗体、免疫黏连素等）及特殊类型抗体（双特异抗体、抗原化抗体、细胞内抗体等）[2]。近年来，发展的噬菌体抗体库技术及核糖体展示抗体库技术,更易于筛选高亲和力抗体和利用在体外进行的方法对抗体性状进行改造[3]。 3抗体药物的结构与功能特点 3．1抗体分子的结构 早在20世纪50年代末期，把电镜的观察结果结合Poler利Nisonoff的研究结果，导致了经典的免疫球蛋白单体的Y型结构模式[4]。现已得知，抗体分子单体的基
单克隆抗体的制备及其应用研究进展
单克隆抗体的制备及其应用研究进展 燕珊珊 摘要:单克隆抗体技术的突破为医学和生物学的基础研究开创了新纪元。基因工程抗体技术的发展更为疾病治疗、临床试验和科研方面做出巨大贡献。此外，抗体还可能执行除目前所具有之外的更多功能。本文将就单克隆抗体的制备及其应用研究进展进行论述。 关键词:单克隆抗体；基因工程；小鼠骨髓瘤细胞；细胞杂交瘤技术；噬菌体；临床应用 抗体是机体免疫系统的重要效应分子，从第一代多克隆抗体（polyclonalantibody,PcAb）到第二代单克隆抗体的成功制备，人们投入了大量的临床应用研究，对医学和生物学的发展发挥了巨大的作用。 单克隆抗体（monoclonal antibodies，mAbs）技术的突破为医学和生物学的基础研究开创了新纪元。基因工程抗体技术的发展更为疾病治疗、临床试验和科研方面做出巨大贡献。目前，制备mAbs 的方法中比较成熟的主要有以下几种：1. 抗原特异性的B 淋巴细胞杂交瘤技术；2. 人-鼠嵌合抗体制备技术； 3.噬菌体展示技术获得的抗原特异性人源性抗体；4. 转基因小鼠制备的人mAbs；5.核糖体展示技术。
通过这些方法，我们利用相应抗原靶向构建治疗性抗体，从而达到预防、治疗疾病的目的，促进生物制药学的发展。以下主要是对抗体制备技术的发展及其应用研究进展进行综述。 1 鼠源性抗体 1975 年，Kohler 和Milstein[1] 将小鼠骨髓瘤细胞和经绵阳红细胞免疫的小鼠脾细胞融合，形成了可产生单克隆抗体的杂交瘤细胞，该细胞既能产生抗体，又可无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。由免疫B细胞-浆细胞、瘤细胞融合形成的杂交瘤细胞系可分泌单一、特异性、纯化的抗体，且能在选择培养基中生长、无限增值、分裂，同时在选择培养基作用下，利用代谢缺陷补救机理筛选出同时具有两种细胞特征的细胞克隆。这种经过反复克隆而挑选出来的融合细胞所产生的抗体称为单克隆抗体(McAb)。它在分子结构、氨基酸序列以及特异性等方面都是一致的。淋巴细胞杂交瘤技术的主要步骤包括：动物免疫、细胞融合、杂交瘤细胞的筛选与单抗检测、杂交瘤细胞的克隆化、冻存、单抗的鉴定等。至今，科学家们已经建立众多鼠源性mAbs 来诊断和治疗多种人类疾病。然而作为在人体内的应用，鼠源单抗尚存在一些问题。鼠源性抗体作为异种蛋白应用于人体可引起免疫反应，产生人抗鼠抗体（human anti-mouse antibody,HAMA）[2]，很大程度上限制了mAbs 的临床应用。此外，鼠源性mAbs 不能与人类抗体FcRn 结合[3]。为了克服以上这些问题，近年，随着分子生物学的发展，人们已有可能通过抗体工程技术制备人-鼠嵌合抗体、人源化抗体或全人抗体。
单克隆抗体的研究进展
单克隆抗体的研究进展 姓名：学号： 摘要：1976年德国学者Kohler和英国学者Milstein创建杂交瘤技术而使鼠源单克隆抗体被广泛用于生物学和医学研究领域，建立了治疗性抗体的第一个飞跃。自此抗体分子成为了生物及医学领域中用途最为广泛的蛋白质分子。随着对抗体的理化性质以及对免疫球蛋白分子结构与功能的阐明应用DNA重组技术和抗体库技术对鼠单抗进行人源化改造，先后出现了嵌合抗体、人源化抗体和全人抗体，它们从不同方面补充了鼠单抗临床应用的缺陷，使抗体制备技术得到了全新发展。 关键词：单克隆抗体；鼠单抗；人源化 鼠源性单克隆抗体开始了多克隆抗体走向单克隆抗体的新时代。与多克隆抗体相比，单克隆抗体具有特异性高、效价高、纯度高、理化性状均一、重复性强、成本低并可大量生产等无可比拟的优点。目前比较成熟的制备方法有（1）抗原特异性的B淋巴细胞杂交瘤技术；（2）人–鼠嵌合抗体制备技术；（3）噬菌体展示技术获得的抗原特异性人源性抗体；（4）转基因小鼠制备的人mAbs；（5）核糖体展示技术。随着对各类抗体结构和氨基酸序列及其变异的种属和功能之间关系的深入了解，而能够利用抗体工程技术对抗体结构进行改造从而达到预防、治疗疾病的目的，促进生物学及医学的发展。一下主要是对抗体制备技术的及其应用研究进展进行综述。 1杂交瘤技术 杂交瘤的制备是制备抗原特异性的单克隆抗体，所以融合一方必须是经过抗原免疫的B细胞，通常选用被免疫动物的脾细胞，脾淋巴细胞的主要特征是抗体分泌功能。融合细胞另一方则要求在培养条件下的永生性，只有肿瘤细胞才是具备这一条件，所以选择同一体系的骨髓瘤细胞，因多发性骨髓瘤是B细胞系恶性肿瘤，其特点是稳定易培养、自身不分泌免疫球蛋白及细胞因子、融合率高、是次黄嘌呤鸟嘌呤核苷酸转移酶（HGPRT）和胸腺嘧啶激酶（TK）的缺陷性，是理想的脾细胞融合对象。再用HAT培养基筛选只有能长期生存与繁殖的是具有亲带双方遗传性能的融合细胞。 杂交瘤技术操作主要流程示意图
抗体药物的研究现状和发展趋势
抗体药物得研究现状与发展趋势 一、研究现状 1.抗体研究发展历程 抗体作为药物用于人类疾病得治疗拥有很长历史。但整个抗体药物得发展却并非一帆风顺,而就是在曲折中前进。第一代抗体药物源于动物多价抗血清,主要用于一些细菌感染性疾病得早期被动免疫治疗。虽然具有一定得疗效,但异源性蛋白引起得较强得人体免疫反应限制了这类药物得应用,因而逐渐被抗生素类药物所代替。第二代抗体药物就是利用杂交瘤技术制备得单克隆抗体及其衍生物。单克隆抗体由于具有良好得均一性与高度得特异性,因而在实验研究与疾病诊断中得到了广泛应用。 单抗最早被用于疾病治疗就是在1982年,美国斯坦福医学中心Levy等人利用制备得抗独特型单抗治疗B细胞淋巴瘤,治疗后患者病情缓解,瘤体消失,这使人们对抗体药物产生了极大得期望。1986年,美国FDA批准了世界上第一个单抗治疗性药物——抗CD3单抗OKT3进入市场,用于器官移植时得抗排斥反应。此时抗体药物得研制与应用达到了顶点。随着使用单抗进行治疗得病例数得增加,鼠单抗用于人体得毒副作用也越来越明显。同时一些抗肿瘤单抗未显示出理想效果。人们得热情开始下降。到20世纪90年代初,抗内毒素单抗用于治疗脓毒败血症失败使得抗体药物得研究进入低谷。由于大多数单抗均为鼠源性,在人体内反复应用会引起人抗鼠抗体(HAMA)反应,从而降低疗效,甚至可引起过敏反应。因此,一方面在给药途径上改进,如使用片段抗体、交联同位素、局部用药等使鼠源性抗体用量减少,也增强了疗效;另一方面,积极发展基因工程抗体与人源抗体。 近年来,随着免疫学与分子生物学技术得发展以及抗体基因结构得阐明,DNA 重组技术开始用于抗体得改造,人们可以根据需要对以往得鼠抗体进行相应得改造以消除抗体应用不利性状或增加新得生物学功能,还可用新得技术重新制备各种形式得重组抗体。抗体药物得研发进入了第三代,即基因工程抗体时代。与第二代单抗相比,基因工程抗体具有如下优点:①通过基因工程技术得改造,可以降低甚至消除人体对抗体得排斥反应;②基因工程抗体得分子量较小,可以部分降低抗体得鼠源性,更有利于穿透血管壁,进入病灶得核心部位;③根据治疗得需要,制备新型抗体;④可以采用原核细胞、真核细胞与植物等多种表达形式,大量表达
综述-单克隆抗体的研究报告进展
单克隆抗体的研究进展 摘要：单克隆抗体近年来发展迅速，并广泛应用于医学，生物学，免疫学等多种学科。单抗药物可用于治疗肿瘤、病毒性感染、心血管病以及其它疾病，尤其是用于治疗肿瘤，已显示出良好的前景。本文参阅近10年国外相关文献，并进行整理，综述单克隆抗体的研究进展，着重阐述用于治疗肿瘤的单克隆抗体应用中存在的问题、解决方法以及研究的展望。 关键词：单克隆抗体；抗肿瘤药物；治疗 单抗药物治疗疾病具有明确的靶向性，作用机制明确，因而具有起效快、疗效好、副作用小等优点。尤其是对肿瘤的治疗，能克服化疗药物不能有效区分正常细胞和肿瘤细胞、副作用大等缺点。同时，单克隆抗体体积小，能更有效地透入肿瘤；分子小、消除快、累积毒性小；所携带的弹头脱离后，可较快被清除；循环中免疫靶向结合物对靶细胞的竞争作用小；半衰期短；穿透性好；能穿过血脑屏障，因而还可以作为新一代靶向载体。与化学药物、毒素、放射性核素、生物因子、基因、分化诱导剂、光敏剂、酶等物质构成单克隆抗体靶向药物，把杀伤肿瘤细胞的活性物质特异的输送到肿瘤部位，利用单抗对肿瘤表面相关抗原或特定的受体特异性识别，从而把药物直接导向肿瘤细胞，提高药物疗效，降低药物对循环系统及其他部位的毒性[1]。 1作用机制 目前，单抗的作用机制并不十分明确，通过研究，目前认为有阻断作用、信号传导作用以及靶向作用等三种作用机制[1]。 1.1阻断作用 现用于临床的大部分未偶联单抗主要用于自身免疫和免疫抑制，是通过阻断和调节作用完成的。几乎在所有的单抗应用中，通常是通过阻断免疫系统的一种重要的胞桨或受体-配体相互作用而实现的。另一种相类似的阻断活性可能存在于单抗的抗病毒感染中，通过阻断和抵消病原体的进入和扩散表现出对机体的防御功能，短期给予单抗后可取得长期疗效。肿瘤细胞生长、扩增和分化，需要各种生长因子的持续性刺激，而这些生长因子也参与肿瘤的侵润、转移和血管生成，单克隆抗体与其受体结合，可抑制配体-受体的相互作用，从而使得这些肿瘤细胞得不到生长因子的刺激而自行死亡。贝伐单抗通过结合VEGF受体，阻断VEGR与受体的结合，抑制皮细胞增殖或者血管生成，抑制病灶转移[2]。 1.2信号传导作用 许多抗癌单抗是通过恢复效应因子，直接启动信号机制而获得细胞毒效应的。对Trastuzumab而言，单抗结合可诱导一系列在肿瘤生长控制中起作用的信号传递，该抗原是生长因子受体家族的一个成员，能
抗体药物的研究现状和发展趋势分析报告
抗体药物的研究现状和发展趋势分析报告
一、研究现状 1．抗体研究发展历程 抗体作为药物用于人类疾病的治疗拥有很长历史。但整个抗体药物的发展却并非一帆风顺，而是在曲折中前进。第一代抗体药物源于动物多价抗血清，主要用于一些细菌感染性疾病的早期被动免疫治疗。虽然具有一定的疗效，但异源性蛋白引起的较强的人体免疫反应限制了这类药物的应用，因而逐渐被抗生素类药物所代替。第二代抗体药物是利用杂交瘤技术制备的单克隆抗体及其衍生物。单克隆抗体由于具有良好的均一性和高度的特异性，因而在实验研究和疾病诊断中得到了广泛应用。 单抗最早被用于疾病治疗是在1982年，美国斯坦福医学中心Levy 等人利用制备的抗独特型单抗治疗B细胞淋巴瘤，治疗后患者病情缓解，瘤体消失，这使人们对抗体药物产生了极大的期望。1986年，美国FDA批准了世界上第一个单抗治疗性药物——抗CD3单抗OKT3进入市场，用于器官移植时的抗排斥反应。此时抗体药物的研制和应用达到了顶点。随着使用单抗进行治疗的病例数的增加，鼠单抗用于人体的毒副作用也越来越明显。同时一些抗肿瘤单抗未显示出理想效果。人们的热情开始下降。到20世纪90年代初，抗内毒素单抗用于治疗脓毒败血症失败使得抗体药物的研究进入低谷。由于大多数单抗均为鼠源性，在人体内反复应用会引起人抗鼠抗体（HAMA）反应，从而降低疗效，甚至可引起过敏反应。因此，一方面在给药途径上改进，如使用片段抗体、交联同位素、局部用药等使鼠源性抗体用量减少，
也增强了疗效；另一方面，积极发展基因工程抗体和人源抗体。 近年来，随着免疫学和分子生物学技术的发展以及抗体基因结构的阐明，DNA重组技术开始用于抗体的改造，人们可以根据需要对以往的鼠抗体进行相应的改造以消除抗体应用不利性状或增加新的生物学功能，还可用新的技术重新制备各种形式的重组抗体。抗体药物的研发进入了第三代，即基因工程抗体时代。与第二代单抗相比，基因工程抗体具有如下优点：①通过基因工程技术的改造，可以降低甚至消除人体对抗体的排斥反应；②基因工程抗体的分子量较小，可以部分降低抗体的鼠源性，更有利于穿透血管壁，进入病灶的核心部位； ③根据治疗的需要，制备新型抗体；④可以采用原核细胞、真核细胞和植物等多种表达形式，大量表达抗体分子，大大降低了生产成本。 自从1984年第一个基因工程抗体人－鼠嵌合抗体诞生以来，新型基因工程抗体不断出现，如人源化抗体、单价小分子抗体（Fab、单链抗体、单域抗体、超变区多肽等）、多价小分子抗体（双链抗体，三链抗体，微型抗体）、某些特殊类型抗体（双特异抗体、抗原化抗体、细胞内抗体、催化抗体、免疫脂质体）及抗体融合蛋白（免疫毒素、免疫粘连素）等。另外，用于制备新型抗体的噬菌体抗体库技术成为继杂交瘤技术之后生命科学研究中又一突破性进展。采用噬菌体抗体库技术筛选抗体不必进行动物免疫，易于制备稀有抗原的抗体、筛选全人源性抗体和高亲和力抗体。同时也将抗体工程的研究推向了一个新的高潮。在噬菌体抗体库基础上，近几年又发展了核糖体展示抗体库技术。利用核糖体展示技术筛选抗体的整个过程均在体外进
海水鱼病多联抗独特型抗体
海水鱼病多联抗独特型抗体 疫苗 西安斯凯达生物制品有限公司 2016.6
产品简介
改革开放以来，我国海水养殖渔业发展迅速，至今海水鱼每年养殖量约6 0亿尾，随着养殖量扩大，鱼病也逐年严重。每年因病害造成损失上百亿元。 国内对海水养殖病防治主要依靠化学药和抗生素，这些药物过多使用，造成耐药和药物残留及毒副作用，疫苗已成为海水养殖疾病防治领域研究与开发的主流产品。至今国内未见商品化的海水鱼疫苗问世，也未见国外疫苗引入的报道，为此我们和第四军医大学合作，在海洋863和现代农业863计划基金资助下，对海水鱼病的防治进行研究，先后研究出鱼病多联诊断试剂，鱼病多联单克隆抗体治疗制剂和鱼病多联抗独特型抗体疫苗。其中抗独特型抗体疫苗2004年获国家发明专利证书，2006年获国家农业部一类新兽药证书。 海水鱼病多联抗独特型抗体疫苗是由三种海水鱼重要病菌：溶藻弧菌、鳗弧菌、迟缓爱德华菌的抗独特型抗体混合而成的海水鱼病多联抗独特型单克隆抗体疫苗，用以接种免疫养殖海水鱼，以预防养殖海水鱼这三种重要流行病的爆发。
技术原理
免疫学界公认，抗体和抗原的结合位称为独特位，认为抗体的独特位和与其进行免疫结合的抗原表位，其空间构形是互补的，所以称独特位为抗原表位的内影像。如果用抗体再去接种免疫机体时，抗体的独特位能刺激机体产生抗独特位的抗体，这种抗体称为抗独特型抗体。 抗独特型抗体的结合位点的空间结构和独特位是互补的，而和原来的抗原表位的空间结构是相类似的，它具有抗原表位的功能，能刺激机体产生抗原表位的抗体。如果抗原是病原体，病原体的抗独特型抗体就能取代病原体起到疫苗的作用。 技术原理 免疫小鼠 免疫小鼠 免疫小鼠 抗原表位 抗独特型抗体 独特位 抗体 抗体 抗独特型抗体产生原理