油菜的自交和杂交技术-推荐下载
实验七油菜的自交和杂交技术
一、目的
了解油菜的花器构造和开花习性；通过练习，初步掌握油菜的自交和杂交技术。
二、内容说明
1、花器构造油菜属十字花科(Cruciferae)芸薹属（Brassica），常异花授粉(甘蓝型和芥菜型，天然异交率一般为5%—10%，最高不超过30%)或异花授粉(白菜型，天然异交率一般为80%—90%以上)作物。油菜的花序为总状无限花序，由主花序和分枝花序组成。在花序上互生许多单花，花由花柄、花萼、花冠和
雄蕊等组成。花瓣4片与花萼4片互生，作十字形排列，称十字花冠。雄蕊6枚，侧面的一对为短花丝，中央的两对为长花丝，特称四强雄蕊。雌蕊由2心
皮组成，由假隔膜(胚座框)将子房隔成两室。胚珠着生在心皮的边缘，为侧膜
胚座。(图
7-1)
2、开花习性油菜的开花顺序是先主花序，而后第一分枝、第二分枝花序
依次由上而下开放，同一花序的花朵无论是主花序还是分枝花序都是由下向上
依次开放。油菜单株花期的长短因品种、气候和裁培条件而异，一般为20—30天，每天开花时间一般在上午7时到12时，以9—11时开花最盛。油菜开花散粉的最适相对湿度为75%—85%，最适温度约为14—18℃。10℃以下开花数减少，5℃以下一般不开花。
油菜花的雌蕊较雄蕊先熟，且生活力较强，开花前后7天内柱头均具有受精能力，但以2—3天内受精结实率最高。油菜的花粉落在柱头上45分钟后即可萌发，经18—24小时完成受精过程。
3、油菜的自交不亲和性在油菜杂种优势的利用上，可用优良的自交不亲和系
作母本，优良品种作父本，产生强优势的杂交种用于生产，以提高油菜的产量。由于甘蓝型和白菜型油菜的自交不亲和系具有自交不亲和基因，在开花前1—2
天柱头上可形成一种由特殊蛋白质组成的“隔离层”，它作为一种“感受器”
能识别和阻止相同基因型的花粉发芽，一般套袋自交很难得到种子，因此自交
不亲和系的保持和繁殖就必须在柱头未形成这类蛋白质的蕾期选株，并采用人
工剥蕾后套袋自交或其它方法进行。
三、材料仪器药品
1、材料不同甘蓝型油菜（B.napus L.)或白菜型油菜(B.campestris L.)品种。
2、仪器用具喉头喷雾器、剪刀、镊子、培养皿、玻璃纸袋（10cm×30cm）、
回形针、塑料牌、铅笔。
3、药品试剂 70%酒精、10%NaCL。
四、方法步骤
(一)自交技术
1、选株隔离
(1)自交前1天，选具有该品种典型性状、健壮无病虫害的植株，用镊子摘除花序上已开放的花朵，然后套袋隔离。
(2)次日上午9时后，取下隔离袋，用镊子摘下主花序上当天开放的花朵，置于培养皿中，加盖，待授粉时使用。
2、剥蕾授粉
(1)整序用镊子摘除同一株上将开放的较大的花蕾和花序顶端幼小花蕾，剩下开花前2—4天的15—20个花蕾供剥蕾授粉。
(2)授粉用镊子将花瓣逐一剥开，使柱头外露(可以不去雄)，随即用镊子夹取培养皿中已开裂散粉的花药，在剥开外露的柱头上轻轻涂抹授粉。
若有几个组合同时授粉，每授完一个组合后用70%酒精棉球擦手和镊子，杀死所蘸着的花粉。
3、套袋挂牌授粉后重新套袋，下端袋口斜折，用回形针固定，注意切忌将回形针夹住茎秆，并在花序基部挂上塑料牌，写明品种代号或名称、自交日期和操作者姓名。
4、管理授粉套袋后，每隔2—3天提升纸袋，以利花序伸长和避免穿破纸袋，约1周后取下纸袋，以利角果和种子的发育。
5、收获待角果成熟后，摘下整个花序连同塑料牌一起放入尼龙丝网袋中，晒干脱粒后，将种子连同塑料牌一起放入种子袋中，写明品种代号或名称，妥为贮存，并在工作本上作好记录。
除上述剥蕾自交外，近年来也有探索用喷洒化学药剂使隔离层蛋白溶解、沉淀和变性，以克服自交不亲和，如用10%NaCl喷洒当天开放的花朵，5—10分钟
后授以同株上的花粉，也可获得自交种子。
(二)杂交技术
1.父本套袋隔离要杂交前1天，选具有父本品种典型性状、健壮无病虫害的植株，用镊子摘去花序上已开放的花朵，然后套袋隔离，以供采粉。
2.母本选株整序在父本套袋隔离的同时，选具有母本品种典型性状、健壮无病虫害的植株，用镊子摘去花序上已开放的花朵和花序顶端的幼小花蕾，剩下次日即将开放(花萼已裂开、微露黄色)的10—15个花蕾供去雄。
3.去雄用左手固定花序和花蕾，右手用镊子分开萼片和花瓣，小心地将6枚雄蕊摘去，切勿损伤柱头和余留花药，如遇花药破裂，应将该花去除，并将镊子尖浸入酒精中，以杀死所蘸花粉。
4.套袋挂牌待所有花蕾去雄完毕后，立即套上纸袋，下端袋口斜折，用回形针固定。
5.授粉授粉于去雄后的当天或次日选晴朗天气进行。
(1)采粉用镊子摘取事先已套袋父本花药已开裂的花朵，置于培养皿中，加盖。
(2)授粉取下母本株上的纸袋，用镊子夹取培养皿中的花药，在母本柱头上轻轻涂抹授粉。授粉后立即套袋隔离，挂上塑料牌，写明组合代号或名称、杂交日期和操作者姓名，并在工作本上作好记录。
6.管理收获和贮藏授粉后的管理、收获和贮藏按自交技术步骤4、5进行。
五、实验作业
每人作剥蕾自交和杂交各2个花序，每花序做5—10个花蕾，经7—15天检查自交和杂交荚角数，统计结荚数和结实率。