牛奶中酪蛋白的提取与分析

实验题目：牛奶中酪蛋白的提取与分析实验材料：牛奶

小组成员：

实验时间：

一：实验题目：牛奶中酪蛋白的提取与分析

二：报告撰写者

三、小组成员

实验仪器

温度计、布氏漏斗（*）、pH试纸（*）、抽滤瓶（*）水浴锅、烧杯、量筒、表面皿（*）、电子天平（*）、2个1000ml的容量瓶（*）、2张醋酸纤维薄膜（2cm×8cm 厚度120nm）成品（*）、培养皿9—10cm（*）、毛细管（*）、尺子、铅笔、单面刀片（*）、镊子、普通滤纸（*）、电泳槽、玻璃板8cm ×12cm（*）、752型分光光度计（*）、细布（*）、、、的移液管、试管、试管架、

四、实验材料

牛奶（蒙牛特仑苏和伊利金典）

五、实验试剂

特仑苏400ml、金典200ml、巴比妥（*）、巴比妥钠（*）、氨基黑10B（*）、50ml甲醇AR（*）、100ml冰醋酸AR（*）、95%的乙醇250ml（*)、95%的乙醚100ml（*）、L的乙酸100ml（*）、L的乙酸钠100ml（*）、25g氢氧化钠固体（*）标准酪蛋白、15mg五水硫酸铜（*）、60mg酒石酸钾钠（*）所需试剂配制方法：

乙醇乙醚混合液的配制：

10ml95%的乙醇

10ml95%的乙醚

乙醇钠缓冲液的配制：

配制乙醇乙醚1:1的混

L 的乙酸51ml

L 的乙酸钠49ml

巴比妥钠缓冲液的配制：

巴比妥

巴比妥钠

染色液的配制：

氨基黑10B 50ml 甲醇AR

10ml 冰醋酸AR

漂洗液的配制：

45ml95%乙醇AR

5ml 冰醋酸AR

蒸馏水

透明液的配制：

25ml 的冰醋酸AR

75ml 的无水乙醇AR

L 氢氧化钠溶液的配制：

16g 的氢氧化钠固体定容至1000ml

10%氢氧化钠溶液的配制：

5g 的氢氧化钠固体定容至50ml

双缩脲试剂的配制：

15mg 五水硫酸铜

配制巴比妥钠缓冲液（,./L ）,

将上

+40ml 蒸馏水，

混匀既得染

配制的乙酸钠缓冲液（l ） 混匀得染色液

混匀得透明液

溶于5ml 蒸馏水，在搅拌情况下，加入10%氢氧化钠溶液3ml ，用

60mg酒石酸钾钠

标准酪蛋白溶液A的配制（10mg/ml）：

用L氢氧化钠溶液配制10ml

从特仑苏和金典中提取的酪蛋白样品液1、2的配制（2-9mg/ml）：

用L氢氧化钠溶液配制10ml

标准酪蛋白溶液B的配制（1500μg/ml）：

用L氢氧化钠溶液配制

从特仑苏和金典中提取的酪蛋白样品液3、4的配制（50-1500μg /ml）：用L氢氧化钠溶液配制

七、实验目的

1.掌握从牛奶中提取酪蛋白的方法

2.了解蛋白质分离纯化的基本办法

3.学习电泳的基本原理及掌握醋酸纤维素薄膜电泳分离酪蛋白的具

体操作

4.掌握双缩脲法和紫外吸收法测定蛋白质含量的原理及操作方法并

比较两种方法

5.熟悉分光光度计的原理和操作

6.比较特仑苏与金典中的酪蛋白含量

八、实验原理

酪蛋白在其等电点时静电荷为零，同种电荷的相互排斥作用消失，溶解度很低，利用这一性质，将牛乳调节到，酪蛋白就可以从牛乳中分离出来。酪蛋白不溶解于乙醇，这个性质被用来从酪蛋白中除去脂类杂质。

酪蛋白并不是单一的一种蛋白质，而是多种性质类似的蛋白质的统—，β—，γ—，κ—4种类型组成。它们各自的等电点称。其一般由α

s

（pI）具有一定的差异，本实验将酪蛋白溶液点样于用(高于酪蛋白各型等电点)缓冲液浸泡过的醋酸纤维膜上，并在该缓冲液体系中进行电泳，使酪蛋白分子上带上不同量的负电荷，在电泳过程中酪蛋白分子由负极向正极移动，同时酪蛋白各类型分子的相对分子量也不同，因此在电泳过程中其迁移率也不同，从而把酪蛋白的各种类型分离开来。

酪蛋白各组分的含量、等电点及大小

双缩脲在碱性溶液中能与二价铜离子产生紫红色络合物，该反应称为双缩脲反应。蛋白质分子中因含有两个以上的肽键，因此也能发生双缩脲反应。蛋白质在碱性溶液中与二价铜离子产生紫红色络合物，其颜色的深浅在一定范围内与蛋白质的含量称正比，与蛋白质的氨基酸组成及相对分子质量无关。故可用双缩脲反应来测定蛋白质的含量，测定范围为ml蛋白质。

由于蛋白质分子中含有的酪氨酸、色氨酸等残基中具有共轭双键，使得蛋白质在280nm处具有最大吸收值，且其光吸收值与浓度在一定范围内

成正比，因此，该法可用作蛋白质定量测定。该法测定蛋白质含量时具有简单、灵敏、快速、不消耗样品、不受低浓度盐干扰等优点，但该法准确度较差，特别是如果样品中含有嘧啶、嘌呤等吸收紫外光的物质时，会出现较大的干扰，这时，就需要通过紫外吸收差来求蛋白质浓度，但也存在着一定的误差。

九、实验步骤

（一）酪蛋白的提取

1、酪蛋白的等电点沉淀

做六组平行试验，每组分别：将100ml的牛奶放到500ml的烧杯

中，加入40度左右的乙酸钠缓冲液，直到pH达左右，用pH试纸

调试。将上述悬浊液冷却至室温，然后放置5min，用细布过滤，

收集沉淀。

2、除去脂类杂质

将上述沉淀用少量水洗数次，然后悬浮于30ml95%的乙醇中。将此

悬浮液倾入布氏漏斗中，抽滤除去乙醇溶液，再倒入乙醇—乙醚

混合液总洗涤沉淀两次，最后再乙醚洗涤沉淀两次，抽干。将沉

淀从布氏漏斗中移去。在表面皿上摊开以除去乙醚，干燥后得到

的即为酪蛋白。准确称重。

（二）酪蛋白的分离与分析

3、醋酸纤维薄膜的准备（2张）

将醋酸纤维薄膜缓缓进入盛有巴比妥钠缓冲液的器皿中，全部润

湿10-30min，至膜上无白点存在。

4、样品处理

分别取出从特仑苏和金典中制备的酪蛋白，加L的NAOH溶解，备用。

5、仪器和薄膜的准备

电泳装置的准备：用四层干净的滤纸作滤纸桥，将其用缓冲液润湿，铺垫在电泳槽支架上，电泳槽内加入巴比妥钠缓冲液至刻度线处，并使两槽中的缓冲液保持在同一液面。注意滤纸桥的底边必须进入缓冲液中，并将电极仪连接好。

用镊子将浸泡好的醋酸纤维薄膜从缓冲液轻轻取出，注意用镊子夹在薄膜的一边角处，将无光泽面朝上，平放在干净滤纸上，其上再放一层滤纸，用手轻压，以吸取薄膜上多余的缓冲液。

6、点样

取出湿润的醋酸纤维素薄膜，夹在两层滤纸间吸取多余的缓冲液，无光泽面向上，在距离薄膜一端处，用铅笔轻轻画一直线。用玻璃棒粘取酪蛋白样品液，涂于盖玻片边缘处，将盖玻片截面与薄膜无光泽面（涂有醋酸纤维素）画线处垂直接触，轻轻3-5s，是样品渗入膜内，然后轻轻提起盖玻片，点样完毕。

7、放膜

揭开电泳槽盖子，把薄膜两端平贴在滤纸桥上，放膜时需特别注意：点样面朝上（与滤纸直接接触形成电流闭合环路），点样端放于电泳槽负极端（酪蛋白已带上负电荷，电泳时从负极向正极移动）。把膜放好拉直后立即盖上电泳槽盖子，以防膜边干。

8、电泳

打开电泳仪电泳开关，调节电压至90-110V，电流，电泳时间

45-60min。在电泳过程中，应该注意控制电压和电流强度，以防

过高或者过低，并保持电泳的连续性。

9、染色与漂洗脱色

电泳关闭后，关闭电源，用镊子立即取出薄膜，直接浸泡在染色

液中染色3-5min，取出后用漂洗液漂洗数次，每次约10min，直

至背景蓝色脱尽。然后用蒸馏水清洗一下，用滤纸吸去膜上多余

的水分，用电吹风的冷风将薄膜吹干。

10、透明

将吹干后的薄膜进入透明液中15s左右，立即用镊子取出，平放

在干净的玻璃板上，轻轻赶去气泡，铺平膜，用电吹风冷风将膜

吹干，即得到一张透明的电泳区带图谱。

11、定量

将漂洗干净的薄膜用滤纸吸干后剪下各蛋白质区带，分别浸泡于

盛有L的NAOH溶液中，37度保温5-10min，待色泽全部被浸出

后，将溶液在590nm波长下比色。分部测出各蛋白质部分的吸光

度，和它们的总吸光度。

（三）牛奶中酪蛋白含量的测定——双缩脲法

12、标准曲线的制作

取21支干燥干净试管编号（每个编号3支平行试管），按下表加入各试剂

将各试管混匀后，在室温下放置30min，每次均以1号试管调零测定各管在540nm波长下的吸光度。取3组测定的平均值，以吸光度为纵坐标，蛋白质含量为横坐标，绘制蛋白质标准曲线，并计算二次线性回归方程。

13、样品测定及分析——特仑苏

取三支试管，分别吸取酪蛋白样品液1，然后加入双缩脲试剂，室温下放置30min。以1号试管调零测定540nm波长下样品液

的吸光度。对照标准曲线或代入二次线性回归方程求出样品液

中蛋白质的含量。

14、样品测定及分析——金典

取三支试管，分别吸取酪蛋白样品液2，然后加入双缩脲试剂，室温下放置30min。以1号试管调零测定540nm波长下样品液

的吸光度。对照标准曲线或代入二次线性回归方程求出样品液

中蛋白质的含量。

（四）牛奶中酪蛋白含量的测定——紫外吸收法

15、标准曲线的制作

将标准酪蛋白溶液B用L氢氧化钠溶液分别配制成一系列浓度

的标准酪蛋白溶液：50,100,200,400,600,800,1000,1500μ

g/ml。以L氢氧化钠溶液作为对照调零，选用光程1cm的石英

比色杯，在280nm波长处测定上述各标准溶液的光吸收值，以

蛋白质浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘出蛋白质标准曲线，

并计算二次线性回归方程。

16、样品测定及分析——特仑苏

取一定的酪蛋白样品液3，以L氢氧化钠溶液作为对照调零，

选用光程1cm的石英比色杯，在280nm波长处测定酪蛋白样品

液的光吸收值，对照标准曲线或代入二次线性回归方程，然后

求出样品液中蛋白质的含量。

17、样品测定及分析——金典

取一定的酪蛋白样品液4，以L氢氧化钠溶液作为对照调零，

选用光程1cm的石英比色杯，在280nm波长处测定酪蛋白样品

液的光吸收值，对照标准曲线或代入二次线性回归方程，然后

求出样品液中蛋白质的含量。

十、实验预期结果

1、提取的酪蛋白为白色粉末状，中夹杂黄色块状物体。其产率的计算

公式为=测得含量/理论含量*100% （理论含量特仑苏为100g，金典为100g）

—，β—，γ—，κ—4种

2、电泳后得到的图谱应该为四条条带:α

s

类型.

—酪蛋白、β—酪蛋白、γ—酪蛋白、κ—酪蛋白的理论含量（%）

3、α

s

分别为：45-55、25-35、8-15、3-7.

十一、参考文献

现代生物化学实验技术蒋立科杨婉身中国农业出版社版

生物化学实践设计与实践蒋立科罗曼高等教育出版社版

生物化学实验黄建华袁道强陈世锋化学工业出版社版

牛奶中酪蛋白的提取与分析

实验题目：牛奶中酪蛋白的提取与分析实验材料：牛奶 小组成员： 实验时间：

一：实验题目：牛奶中酪蛋白的提取与分析 二：报告撰写者 三、小组成员 实验仪器 温度计、布氏漏斗（*）、pH试纸（*）、抽滤瓶（*）水浴锅、烧杯、量筒、表面皿（*）、电子天平（*）、2个1000ml的容量瓶（*）、2张醋酸纤维薄膜（2cm×8cm 厚度120nm）成品（*）、培养皿9—10cm（*）、毛细管（*）、尺子、铅笔、单面刀片（*）、镊子、普通滤纸（*）、电泳槽、玻璃板8cm ×12cm（*）、752型分光光度计（*）、细布（*）、、、的移液管、试管、试管架、 四、实验材料 牛奶（蒙牛特仑苏和伊利金典） 五、实验试剂 特仑苏400ml、金典200ml、巴比妥（*）、巴比妥钠（*）、氨基黑10B（*）、50ml甲醇AR（*）、100ml冰醋酸AR（*）、95%的乙醇250ml（*)、95%的乙醚100ml（*）、L的乙酸100ml（*）、L的乙酸钠100ml（*）、25g氢氧化钠固体（*）标准酪蛋白、15mg五水硫酸铜（*）、60mg酒石酸钾钠（*）所需试剂配制方法： 乙醇乙醚混合液的配制： 10ml95%的乙醇 10ml95%的乙醚 乙醇钠缓冲液的配制： 配制乙醇乙醚1:1的混

L 的乙酸51ml L 的乙酸钠49ml 巴比妥钠缓冲液的配制： 巴比妥 巴比妥钠 染色液的配制： 氨基黑10B 50ml 甲醇AR 10ml 冰醋酸AR 漂洗液的配制： 45ml95%乙醇AR 5ml 冰醋酸AR 蒸馏水 透明液的配制： 25ml 的冰醋酸AR 75ml 的无水乙醇AR L 氢氧化钠溶液的配制： 16g 的氢氧化钠固体定容至1000ml 10%氢氧化钠溶液的配制： 5g 的氢氧化钠固体定容至50ml 双缩脲试剂的配制： 15mg 五水硫酸铜 配制巴比妥钠缓冲液（,./L ）, 将上 +40ml 蒸馏水， 混匀既得染 配制的乙酸钠缓冲液（l ） 混匀得染色液 混匀得透明液 溶于5ml 蒸馏水，在搅拌情况下，加入10%氢氧化钠溶液3ml ，用

牛奶中提取酪蛋白

牛奶中提取酪蛋白 [目的与要求] 1、了解等电点沉淀法 2、学习从牛奶中制备酪蛋白的方法 3、加深对蛋白质等电点性质的理解 [原理] 蛋白质是一种亲水胶体，在水溶液中蛋白质分子表面形成一个水化层。另外，蛋白质又是一种两性离子，在一定pH溶液能够维持一个稳定的状态。但是调节蛋白质溶液的pH值至等电点时，蛋白质会因失去电荷而变得不稳定，此时若再加脱水剂或加热，水化层被破坏，蛋白质分子就相互凝聚而析出。等电点沉淀法主要利用两性电解质分子在等电点时溶解度最低的原理，而多种两性电解质具有不同等电点而进行分离的一种方法。 牛乳中主要的蛋白质是酪蛋白含量约为35g/L。酪蛋白是一些含磷蛋白质的混合物，等电点为4.7。将牛乳的pH调至4.7时，酪蛋白就沉淀出来。用乙醇洗涤沉淀，除去脂类杂质后便可得到较纯的酪蛋白。 但单独利用等电点沉淀法来分离生化产品效果并不太理想，因为即使在等电点时，有些两性物质仍有一定的溶解度，并不是所有的蛋白质在等电点时都能沉淀下来，特别是同一类两性物质的等电点十分接近时。生产中常与有机溶剂沉淀法、盐析法并用，这样沉淀的效果较好。 本实验目的是使学生运用等电点沉淀法制备酪蛋白，从中加深对蛋白质等电点性质的理解。 [方法和步骤] 1、取预先放冰箱中冷却的消毒牛奶6mL，3 000r/min离心10min，除去脂肪层的乳液置50毫升烧杯内，加热至40℃左右，在搅拌下慢慢加入10mL左右预热的醋酸-醋酸钠缓冲液，此时混浊液中有大量絮状物沉下。冷至室温，3 000r/min离心10min，弃去上清液，得酪蛋白粗品。 2、用蒸馏水洗沉淀三次（每次5mL左右），3 000r/min离心10min，弃去上清液。 3、将沉淀置研钵中，研碎后，渐加5mL 95%乙醇，静置片刻，将全部悬浮液转移至布氏漏斗抽滤，抽干后的制品，用乙醇-乙醚混合液洗沉淀二次（每次5mL），最后用无水乙醚洗沉淀二次（每次5mL），抽干。 4、将沉淀摊开在表面皿上，风干，得酪蛋白制品（称重，记录）。 5、酪蛋白溶液的配制：称取酪蛋白0.1g，置10毫升烧杯中，加5mL 0.2mol/L氢氧化钠溶液，搅匀，隔水加热，溶解后转移至10毫升容量瓶中，用少量蒸馏水洗烧杯数次，洗液并入容量瓶中，最后加水至刻度处，摇匀，置冰箱中保存备用。 [结果与计算] 计算酪蛋白含量和得率： 1、含量：酪蛋白克数/100mL牛奶 2、 100 %? = 理论含量 测得含量 得率 式中理论含量3.5g/100mL牛奶

牛奶中酪蛋白的提取与分析培训讲学

牛奶中酪蛋白的提取 与分析

实验题目：牛奶中酪蛋白的提取与分析实验材料：牛奶 小组成员： 实验时间：

一：实验题目：牛奶中酪蛋白的提取与分析 二：报告撰写者 三、小组成员 实验仪器 温度计、布氏漏斗（*）、pH试纸（*）、抽滤瓶（*）水浴锅、烧杯、量筒、表面皿（*）、电子天平（*）、2个1000ml的容量瓶（*）、2张醋酸纤维薄膜（2cm×8cm 厚度120nm）成品（*）、培养皿9—10cm（*）、毛细管（*）、尺子、铅笔、单面刀片（*）、镊子、普通滤纸（*）、电泳槽、玻璃板8cm×12cm（*）、752型分光光度计（*）、细布（*）0.5ml、1.0ml、2.0ml、5.0ml 的移液管、试管、试管架、 四、实验材料 牛奶（蒙牛特仑苏和伊利金典） 五、实验试剂 特仑苏400ml、金典200ml、1.66g巴比妥（*）、12.76g巴比妥钠（*）、0.5g 氨基黑10B（*）、50ml甲醇AR（*）、100ml冰醋酸AR（*）、95%的乙醇250ml（*)、95%的乙醚100ml（*）、0.2mol/L的乙酸100ml（*）、0.2mol/L 的乙酸钠100ml（*）、25g氢氧化钠固体（*）标准酪蛋白、15mg五水硫酸铜（*）、60mg酒石酸钾钠（*） 所需试剂配制方法： 乙醇乙醚混合液的配制： 10ml95%的乙醇10ml95%的乙醚 配制乙醇乙醚1:1的混合

乙醇钠缓冲液的配制： 0.2mol/L 的乙酸51ml 0.2mol/L 的乙酸钠49ml 巴比妥钠缓冲液的配制： 巴比妥1.66g 巴比妥钠12.76g 染色液的配制： 0.5g 氨基黑10B 50ml 甲醇AR 10ml 冰醋酸AR 漂洗液的配制： 45ml95%乙醇AR 5ml 冰醋酸AR 蒸馏水 透明液的配制： 25ml 的冰醋酸AR 75ml 的无水乙醇AR 0.05mol/L 氢氧化钠溶液的配制： 16g 的氢氧化钠固体定容至1000ml 10%氢氧化钠溶液的配制： 5g 的氢氧化钠固体定容至50ml 双缩脲试剂的配制： 配制巴比妥钠缓冲液 +40ml 蒸馏水，混匀既得染 配制pH4.6的乙酸钠缓冲液 混匀得染色液 混匀得透明液 溶于5ml 蒸馏水，在搅拌情况下，

实验六-从淡奶粉中分离、鉴定酪蛋白和乳糖

实验六从淡奶粉中分离、鉴定酪蛋白和乳糖 教学要求: 1 掌握通过等电点分离蛋白质的原理和方法； 2 掌握蛋白质鉴定的特征反应； 3 掌握还原性糖的鉴定方法。 教学重点：掌握通过调节溶液体系的pH值利用等电点分离蛋白质。 教学难点：蛋白质和还原性糖鉴定反应的操作及其现象观察 教学时数：4 学时 一、实验目的 １、掌握分离蛋白质和糖的原理和操作方法； ２、掌握蛋白质的定性鉴定方法； ３、了解乳糖的一些性质。 二、实验原理 牛奶的主要成分是水、蛋白质、脂肪、糖和矿物质，其中，蛋白质主要是酪蛋白，而糖主要是乳糖。 蛋白质在等电点时溶解度最小，当把牛奶的ＰＨ值调到4.8时(酪蛋白的等电点),酪蛋白便沉淀出来。酪蛋白不溶于乙醇和乙醚，可用乙醇和乙醚来洗去其中的脂肪。 乳糖不溶于乙醇在滤去酪蛋白的清液中加入乙醇时，乳糖会结晶出来。 三、实验步骤 １、酪蛋白与乳糖的提取 ４g奶粉与80 mL 40℃温水调配均匀，以10%乙酸调节pH=4.7(用精密pH试纸测试)，

静置冷却，抽滤。 滤饼用6mL水洗涤，滤液合并到前一滤液中。滤饼依次用6mL95%乙醇，6mL乙醚洗涤，滤液弃去。滤饼即为酪蛋白，晾干称重。 在水溶液中加入2.5g碳酸钙粉，搅拌均匀后加热至沸，过滤除去沉淀，在滤液中加入1～2粒沸石，加热浓缩至8ml左右，加入10ml 95%乙醇（注意离开火焰）和少量活性炭，搅拌均匀后在水浴上加热至沸腾，趁热过滤，滤液必须澄清，加塞放置过夜，乳糖结晶析出，抽滤，用95%乙醇洗涤产品，晾干称重。 ２、酪蛋白的性质 缩二脲反应取10ml酪蛋白溶液，加入10% NaOH溶液2ml后，滴入1%CuSO4溶液1ml。振荡试管，观察现象(溶液呈蓝紫色)。 蛋黄颜色反应取10ml酪蛋白溶液，加入浓硝酸2ml后加热，观察现象（有黄色沉淀生成）。再加入10%NaOH溶液2ml，有何变化?(沉淀为橘黄色) 3、乳糖的性质 Fehling反应Ｆehling试剂A和Ｂ各3mL,混匀，加热至沸后加入0.5mL5%乳糖溶液，观察现象。 Tollen反应在2mLTollen试剂中加入0.5mL5%乳糖溶液，在80℃中加热，观察现象(有银镜生成)。 四、实验结果 品名性状产量收率

酪蛋白的提取与测定(参考资料)

牛乳中酪蛋白的制备与浓度测定 一、实验目的 1、学习从牛乳中分离酪蛋白的原理和方法 2、掌握等电点沉淀法提取蛋白质的方法 3、了解紫外吸收法测定蛋白质浓度的原理，熟悉紫外分光光度计的使用 4、学会用考马斯亮蓝结合法测定蛋白质浓度 二、实验原理 1、准备酪蛋白原理：牛乳中主要含有酪蛋白和乳清蛋白两种蛋白质，其中酪蛋白占了牛乳蛋白质的80%。牛乳在PH4.7时酪蛋白等电聚沉后剩余的蛋白质统称为乳清蛋白。酪蛋白是白色、无味的物质，不溶于水、乙醇等有机溶剂，但溶于碱溶液。乳清蛋白不同于酪蛋白，其粒子的水和能力很强，分散性高，在乳中呈高分子状态。本法利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的PH调至4.7时，酪蛋白就沉淀出来。用乙醇洗涤沉淀物，除去脂类杂质后便可得到纯的酪蛋白。 2、紫外吸收法测定蛋白质浓度的原理：大多数蛋白质由于有酷氨酸和色氨酸的存在，在紫外光280nm有吸收高峰，可以进行蛋白质含量的测定。但是核酸在280nm也有吸收，干扰测定，不过核酸的最大吸收峰在260nm，通过测定在280nm和260nm时A的比值，然后通过计算消除核酸存在的影响，可以求得有核酸存在时蛋白质的浓度。 3、考马斯亮蓝结合法测定蛋白质浓度原理：考马斯亮蓝能与蛋白质的疏水微区相结合，这种结合具有高敏感性。考马斯亮蓝G250的磷酸溶液呈棕红色，最大吸收峰在465nm。当它与蛋白质结合形成复合物时呈蓝色，其最大吸收峰改变为595nm，考马斯亮蓝G250—蛋白质复合物的高消光效应导致了蛋白质定量测定的高敏感度。 在一定范围内，考马斯亮蓝G250—蛋白质复合物呈色后，在595nm下，吸光度与蛋白质含量呈线性关系，故可以用于蛋白质浓度的测定。 三、实验器材与试剂 1、制备酪蛋白： 烧杯、玻璃棒、量筒、精密PH试纸、离心机、布氏漏斗、表面皿、恒温水浴锅 牛奶、醋酸缓冲液、冰醋酸、95%乙醇、无水乙醚 2、紫外光吸收法： 紫外可见光分光光度计、容量瓶50ml(×1)、石英比色皿 0.9%NaCl、1mol/LNaOH溶液、1mol/L乙酸溶液 3、考马斯亮蓝法： 紫外可见光分光光度计、试管1.5cm×15cm(×9)、玻璃比色皿 牛血清白蛋白（0.1mg/ml）、考马斯亮蓝、0.9%NaCl 四、实验步骤

酪蛋白的提取

一、实验目的 1、掌握一种提取蛋白的方法。 2、掌握一种检测牛乳质量的方法。 二、实验原理 酪蛋白是乳蛋白质中最丰富的一类蛋白质，约占乳蛋白的80~82%，酪蛋白不是单一的蛋白质，是一类含磷的复合蛋白质混合物，以一磷酸酯键与苏氨酸及丝氨酸的羟基相结合。它还含有胱氨酸和蛋氨酸这两种含硫氨基酸，但不含半胱氨酸。它在牛乳中的含量约为35g/L，比较稳定，利用这一性质，可以检测牛乳中是否掺假。 酪蛋白在其等电点时由于静电荷为零，同种电荷间的排斥作用消失，溶解度很低，利用这一性质，经牛乳调到pH4.6，酪蛋白就从牛乳中分离出来。酪蛋白不溶于乙醇，这个性质被利用来从酪蛋白粗制剂中将脂类杂质除去。 三、仪器和试剂 仪器：温度计、布氏漏斗、pH 试纸、抽滤瓶、电炉、烧杯、量筒、表面皿、天平等。 试剂： 1. 95%乙醇、乙醚 2. pH4.6乙酸钠缓冲液0.2mol/L 3. 乙醇、乙醚混合液：乙醇∶乙醚=1∶1（体积比） 4. 市售牛乳 四、实验步骤 1.酪蛋白等电点沉淀 将100ml牛乳放到500ml烧杯中，加热至40℃左右的乙酸钠缓冲液，直到pH达4.6左右，用pH试纸或酸度计调试。将上述悬浮液冷却至室温，然后放置5min，用细布过滤，收集沉淀。 2.除脂类杂质 将上述沉淀用少量水洗数次，然后悬浮于30ml95%的乙醇中。将此悬浮液倾于布氏漏斗中，抽滤除去乙醇溶液，再倒入乙醇—乙醚混合液洗涤沉淀两次，最后再用一米洗涤沉淀两次，抽干。将沉淀从布氏漏斗中移去，在表面皿上摊开以除去乙醚，干燥后得到的是酪蛋白纯品。准确称重后，计算出每100ml牛乳所制备出的酪蛋白数量（g%），并与理论产量（3.5g%）相比较，求出实际获得百分率。 一、实验目的 酶是植物体内具有催化作用的蛋白质，植物体内的生化反应，一般都是在酶的作用下进行的，没有酶的催化反应，植物的生命也就停止了，因此对酶的研究是阐明生命现象本质中十分重要的部分。为要研究酶首先要将酶从组织中提取出来，加以分离、纯化，不同的研究目的对酶制剂的纯度要求也不相同，有些工作只需要粗的酶制剂即可，而有些工作则要求较纯的酶制剂，需根据不同情况区别对待。在酶的提取和纯化过程中，自始至终都需要测定酶的活性，通过酶活性的测定以监测酶的去向。 二、实验原理 （一）酶的提取 1.酶的存在位置? 存在于动植物以及微生物的细胞的各个部位。 2.如何将酶从细胞中分离? 从高等植物中提取酶常遇到一些实际问题，首先是细胞中含有许多种酶，每种酶的浓度又很低，只占细胞总蛋白质中的极小部分（叶中的双磷酸核酮糖羧化酶除外），而许多植物组织中蛋白质的含量又很低。此外，各种酶的存在状态不同，有在细胞外的外酶，在细胞内的内酶，内酶中又有与细胞器一定结构相结合的结合酶，也有的存在于细胞质中，提取时都应区别对待，作不

实验报告-从牛奶中分离酪蛋白

实验报告 一、实验名称：从牛奶中分离酪蛋白 二、实验目的： 1.学习从胶体中提取某一类物质的方法。 2.学习蛋白质的各种颜色反应及其原理。 三、实验原理： 1.蛋白质是两性化合物，溶液的酸碱性直接影响蛋白质分子所带的电荷。当调节牛奶 的pH值达到酪蛋白的等电点（pl）4.8左右时，蛋白质所带正、负电荷相等，呈电 中性，此时酪蛋白的溶解度最小，会以沉淀形式从牛奶中析出。 2.缩二脲反应原理：具有两个或两个以上肽键的化合物在碱性条件下与Cu2+反应,生 成红紫色的络合物。所有的蛋白质均有此显色反应。 3.蛋白黄色反应原理：硝酸将蛋白质分子中的苯环硝化，在加热状态下产生了黄色硝 基苯衍生物，再加碱颜色加深呈橙黄色。这是含有芳香族氨基酸特别是含有酪氨酸 和色氨酸的蛋白质所特有的颜色反应。 4.茚三酮反应原理：蛋白质与茚三酮共热，产生蓝紫色的还原茚三酮、茚三酮和氨的 缩合物。此反应为一切氨基酸及α-氨基酸所共有。 四、实验步骤及现象： 1.取50mL脱脂牛奶于150mL烧杯中，用热水浴加热至40℃，维持此温度，边搅拌 边加稀醋酸（1：9）溶液约2mL——有白色沉淀析出。 2.继续搅拌并使悬浊液冷却至室温，然后将混合物转入离心杯中，于3000r/min离心 15min。 3.离心完毕后，上清液倒入乳糖回收瓶中，沉淀用95%的乙醇（20ml）搅匀，然后用 布氏漏斗减压过滤，用乙醇-乙醚（1：1）混合液洗涤沉淀2次，每次约10ml，最 后用5ml乙醚洗涤沉淀一次，减压过滤至干——得到干燥的白色固体。 4.将干粉铺于表面皿上，称量并计算牛奶中酪蛋白含量。 5.称取0.5g酪蛋白，溶解于0.4M氢氧化钠溶液的生理盐水（5mL）中，然后滴加3-4 滴1%硫酸铜溶液，振荡试管——溶液变成紫色。 五、实验数据： 空表面皿的质量m0 =28.15g 表面皿与酪蛋白的总质量m1 =31.78g 牛奶中酪蛋白的质量m= m1 - m0 =3.63g 六、讨论与感想： 1.牛奶是一种胶体，在正常情况下是均一稳定的，要想分离出其中的某一成分，就应 该想办法使这种成分变成沉淀析出。通过本次实验，我知道了可以通过调节胶体的 酸碱性，来改变蛋白质分子所带电荷，使其达到等电点。此时蛋白质分子间的电荷 作用力最小，分子间没有了间隙，浮力减小，蛋白质就会沉淀。而实验中50ml牛 奶和2ml稀醋酸（1：9）所配成的混合液的pH恰好在4.8左右，正好是蛋白质的

实验二十四从牛乳中分离酪蛋白

实验二十四从牛乳中分离酪蛋白 实验二十四从牛乳中分离酪蛋白 1、目的 掌握从牛乳中分离酪蛋白的原理，学会操作方法。 2、原理 牛乳中含有多种蛋白质，它们有着不同的性质，在脱脂牛乳的蛋白质中酪蛋白约占80%，酪蛋白是一类含磷蛋白质的复杂混合物。利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳 的pH 调到4.7（酪蛋白的等电点）时，酪蛋白就沉淀析出。再用乙醇和乙醚洗涤沉淀， 除去脂类杂质，便可制得纯酪蛋白。 3、实验材料与仪器 3.1材料 新鲜牛乳 （1）95%乙醇 （2）乙醚 （3）0.2 mol/L醋酸溶液 （4）0.2 mol /L pH 4.7醋酸–醋酸钠缓冲液，配制方法如下：先分别配制A 液 和B 液： A 液（0.2 mol / L 醋酸钠溶液）称取分析纯醋酸钠（NaAc ·3H 2O ）27.22g 溶于蒸馏水中，定容至1000 ml。 B 液（0.2 mol / L 醋酸溶液）称取分析纯冰醋酸（含量大于99.8%）12.0g 溶于蒸馏水中，定容至1000 ml。 取A 液885 ml 和B 液615 ml 混合，即得pH 4.7 的醋酸－醋酸钠缓冲液1500 ml 。 3.2仪器 恒温水浴、普通离心机、精密pH 试纸或酸度计、布氏漏斗、抽滤瓶、表面皿、离心 管（80 ml、量筒、烧杯（100 ml）、玻棒、电子天平 4、操作步骤

（1）取30 ml鲜牛乳，置100 ml烧杯中，加热至40 ℃。在搅拌下慢慢加入预热至40 ℃、pH 4.7的醋酸–醋酸钠缓冲溶液40 ml，用精密pH 试纸或酸度计检查pH ，再用0.2 mol/L醋酸溶液调至pH 4.7，静置冷至室温。 （2）悬浮液出现大量沉淀后，转移至离心管中，在3 500 r /min下离心10 min，弃去上清液，所得沉淀为酪蛋白的粗制品。 （3）用40 ml 蒸馏水洗涤沉淀，将沉淀搅起，同上离心分离，弃去上清液。加入30 ml 95%乙醇，把沉淀充分搅起至成悬浊液，将其转移到布氏漏斗中抽滤，先用30 ml 95%乙醇洗涤，再用30 ml乙醚洗涤，最后抽干制得酪蛋白。 （4）将酪蛋白白色粉末摊在表面皿上风干，于电子天平称重M 。 5、计算 X=M/V 式中：M---酪蛋白白色粉末的重量（g ） V---鲜牛乳体积（ml ）

牛奶中酪蛋白和乳蛋白素粗品的制备

2008～2009学年第二学期 实训一牛奶中酪蛋白和乳蛋白素粗品的制备（6学时） 一、目的和要求 1、掌握盐析法的原理和操作； 2、掌握等电点沉淀法的原理和基本操作。 二、实验原理 牛奶中主要的蛋白质是酪蛋白，乳蛋白素是一种广泛存在于乳品中，合成乳糖所需要的重要蛋白质。酪蛋白在pH4.8左右会沉淀析出，但乳蛋白素在pH3左右才会沉淀。利用此一性质，可先将pH降至4.8，或是在加热至40℃的牛奶中加硫酸钠，将酪蛋白沉淀出来。酪蛋白

不溶于乙醇，这个性质被利用来从酪蛋白粗制剂中除去脂类杂质。将去除掉酪蛋白的滤液的pH调至3左右，能使乳蛋白素沉淀析出，部分杂质即可随澄清液除去。再经过一次pH沉淀后，即可得粗乳蛋白素。 三、实验材料 1、材料 脱脂牛乳或低脂牛乳（50ml）、蒸馏水 2、器材 100ml量筒、100ml烧杯（2个）、250ml烧杯、水浴锅、玻璃棒、布氏漏斗、滤纸、抽滤瓶、真空泵、pH计、pH试纸、离心机、离心管、磁力搅拌器 3、试剂 无水硫酸钠、无水乙醇、浓HCl、NaOH 0.1mol/L HCl溶液配制：用洁净的量杯（或量筒）量取9mL浓盐酸，注入盛有1000mL水的试剂瓶中，盖上玻璃塞，摇匀。 （一般来讲最浓的浓盐酸质量分数是37.5%，量浓度约是12mol/L，密度1.183g/cm3左右。） 0.1mol/L NaOH溶液配制：称取4克氢氧化钠固体，用少量蒸馏水溶解，将溶液转移到1L的容量瓶中，定容，摇匀。 四、实验步骤 1、盐析沉淀法制备酪氨酸 （1）将50ml牛乳倒入100ml烧杯中，于40℃水浴中加热并搅拌。

（2）向上述烧杯中缓缓加入（约10min内分次加入）10g无水硫酸钠，再继续搅拌10min。 （或者是书中所讲述的部分----------） （3）将溶液用布氏漏斗过滤，分别收集沉淀和滤液。沉淀悬浮于30ml乙醇中，倾于布氏漏斗中过滤除去乙醇溶液，抽干。将沉淀从布氏漏斗中移出，在表面皿上摊开以除去乙醇，干燥后得到的是酪蛋白。准确称重。 2、等电点沉淀法制备乳蛋白素 （1）将制备酪蛋白操作步骤（3）所得滤液置于100ml烧杯中，一边搅拌，一边利用pH计以浓盐酸调整pH至3±0.1。 （2）将溶液倒入离心管中，6000r/min离心15min，倒掉上层液。（3）在离心管内加入10ml去离子水，振荡，使管内下层物重新悬浮，并以0.1mol/L氢氧化钠溶液调整pH至8.5～9.0，此时大部分蛋白质均会溶解。 （4）将上述溶液以6000r/min离心10min，上层液倒入50ml烧杯中。 （5）将烧杯置于磁搅拌加热板上，一边搅拌，一边利用pH计以0.1mol/L盐酸调整pH至3±0.1。 （6）将溶液倒入离心管中，6000r/min离心10min，倒掉上层液。取出沉淀干燥，并称重。 五、注意事项 离心机的使用安全：

牛奶中酪蛋白的制备

牛奶中酪蛋白的制备 一、实验目的 1. 学习从牛奶中制备酪蛋白的原理和方法。 2. 掌握等电点沉淀法提取蛋白质的方法。 二、实验原理 利用酪蛋白的等点点为4.7，所以调节牛奶的pH4.7使酪蛋白沉淀洗出。等电点是调节溶液的pH,使蛋白质所带的正电荷和负电荷恰好相等，总净电荷为零，以两性离子存在，不想阳极移动也不想阴极移动，此溶液的pH称为蛋白质的等电点。酪蛋白不溶于乙醇、乙醚等试剂。因而加入乙醇乙醚洗涤沉淀物除去脂类杂质后便可得到纯酪蛋白。 三、实验材料、试剂与仪器 （一）材料与试剂 95%乙醇、新鲜牛奶、乙醇-乙醚混合液（乙醇：乙醚=1：1） 0.2mol/L pH4.7醋酸-醋酸钠缓冲液 A液：0.2mol/L醋酸钠溶液称NaAC·3H2O 27.22g，定容至1000 mL。 B液：0.2mol/L醋酸溶液，称优纯醋酸（含量大于99.8%）6.0g定容至500 mL。 取A液590mL，B液410mL混合即得pH 4.7的醋酸-醋酸钠缓冲液1000 mL。 （二）器具 离心机、抽滤装置、精密pH试纸、玻璃棒、量筒、恒温水浴 四、实验步骤 （一）酪蛋白的粗提 100mL牛奶加热至40℃。在搅拌下慢慢加入预热至40℃、pH4.7的醋酸缓冲液100mL，用精密pH试纸或酸度计调pH至4.7。将上述悬浮液冷却至室温。离心15分钟（3000 r /min）。弃去清液，得酪蛋白粗制品。 （二）酪蛋白的纯化 1. 用水洗涤沉淀3次，离心10分钟（3 000r/min），弃去上清液。 2. 在沉淀中加入30mL乙醇，搅拌片刻，将全部悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤。用乙醇-乙醚混合液30 mL洗沉淀2次。最后用乙醚洗沉淀2次，抽干。 3. 将沉淀摊开在表面皿上，风干；得酪蛋白纯品。 （三）准确称重，计算含量和得率。

牛奶中酪蛋白含量的测定

牛奶中酪蛋白的提取及含量测定 一、实验原理 1、牛乳的主要成分：碳水化合物（5%）、脂类（4%）、蛋白质（3.5%）、维生素、微量元素（Ca、P等矿物质）、水（87%） 牛奶中的糖主要是乳糖。乳糖是一种二糖，它由D?半乳糖分子和D?葡萄糖分子通过P -1,4-糖昔键连接而成。乳糖溶于水，不溶于乙醇，当乙醇混入乳糖水溶液中时，乳糖会结晶出来，从而达到分离的目的。 牛奶中的蛋白质主要是酪蛋白和乳清蛋白两种，其中酪蛋白占了牛乳蛋白质的80%。酪蛋白是白色、无味的物质，不溶于水、乙醇等有机溶剂，但溶于碱溶液。而乳清蛋白水合能力强，分散性强，在牛乳中呈高分子状态。 2、等电点沉淀法： 在等电点时，蛋白质分子以两性离子形式存在，其分子净电荷为零（即正负电荷相等），此时蛋白质分子颗粒在溶液中因没有相同电荷的相互排斥，分子相互之间的作用力减弱，其颗粒极易碰撞、凝聚而产生沉淀，所以蛋白质在等电点时，其溶解度最小，最易形成沉淀物。酪蛋白的等电点为4.7左右（不同结构的酪蛋白等电点有所不同），本实验中将牛乳的pH调值4.7时，酪蛋白就沉淀出來。 市售牛奶通常会添加耐酸碱稳定剂來增加粘稠度，以致即使pH调至等电点酪蛋白也沉淀的很少，故实验时可将pH稍微调过多一点再调回等电点。同时，市售牛奶由于生产过程通常导致酪蛋白组分发生变化，因而使pl偏离了 4.7,通常偏酸。3、酪蛋白的提纯 根据乳糖、乳清蛋白等和酪蛋白的溶解性质差异，可以用纯水洗涤来除去乳糖、乳清蛋白等溶于水的杂质，再用乙醇除去脂类，然后过渡到用乙瞇洗涤，由于乙瞇很快挥发，最终得到纯粹的酪蛋白结晶。 4、蛋白质含量的测定（考马斯亮蓝结合法） 考马斯亮蓝能与蛋白质的疏水微区结合，这种结合具有高敏感性。考马斯亮蓝G520的磷酸溶液呈棕红色，最大吸收峰在465nm o当它与蛋白质结合形成复合物时呈蓝色，其最大吸收峰变为595nm o在一定范围内，考马斯亮蓝G520- 蛋白质复合物呈色后，在595nm下，吸光度与蛋白质含量呈线性关系，故可以测定蛋白质浓度。 二、实验器材与试剂 1、器材：恒温水浴锅、离心机、抽滤装置、蒸发皿、精密pH试纸、旋涡混合器、紫外分光光度计、试管四、5mL吸管、50mL容量瓶、100mL ft筒、电子分析天平 2、试剂：鲜牛奶、pH4.7醋酸■醋酸钠缓冲溶液、乙醇■乙艇混合液（95%乙醇、无水乙瞇体积比1： 1）、0.9%NaCl溶液、标准蛋白液（0.1mg/mL牛血清蛋白）、考马斯亮蓝G520染液 三、实验操作记录 1、酪蛋白的制备 将20mL牛奶盛于100mL的烧杯中加热到40*C,在搅拌下慢慢加入预热至40?C、pH4.7的醋酸缓冲溶液20mLo用冰醋酸调节溶液pH至4.7,此时即有大量的酪蛋白沉淀析出。将上述悬浮液冷却至室温，离心Smin (4000r/min),弃去上清液，沉淀即为酪蛋白粗品。

从牛奶中提取酪蛋白

实验二从牛奶中提取酪蛋白 一、实验目的要求 1.学习从牛乳中制备酪蛋白的方法。 2.了解从牛奶中制取酪蛋白的原理。 二、实验原理 牛乳中的主要蛋白质是酪蛋白，含量约为3.5g/100ml。酪蛋白是含磷蛋白质的混合物，相对密度1.25-1.31，不溶于水、醇、有机溶剂，等电点为4.7.利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的pH值调至4.7时，酪蛋白就沉淀出来。用乙醇洗涤沉淀物，除去脂质杂质后便可得到纯的酪蛋白。 三、原料与器材 鲜牛奶、恒温水浴锅、台式离心机、抽滤装置。 四、试剂 1.95%乙醇 2.无水乙醚 3.0.2mol/l的醋酸-醋酸钠缓冲液 A液（0.2mol/l的醋酸-醋酸钠溶液）：称取NaAc.3H2O54.44g，定容至2000ml。 B液（0.2mol/l的醋酸-醋酸钠溶液）：称取优级纯醋酸（含量大于99.8%）12.0g，定容至1000ml。取A液1770ml与B液1230ml混合即得pH4.7的醋酸-醋酸钠缓冲液3000ml。 4.乙醇-乙醚混合液 乙醇：乙醚=1：1（体积比）。 五、操作步骤 1.将5ml牛奶置试管或小烧杯中，在水浴中加热至40℃，在搅拌下漫漫加入预热至40℃（应注意两种液体都应先预热至40℃再用），pH4.7的醋酸-醋酸钠缓冲液5ml，用精密pH试纸或酸度计调pH至4.7(用1%NaOH或10%醋酸溶液进行调整)。观察牛奶开始有絮状沉淀出现后，保温一定时间使沉淀完全。 将上述悬浮液冷却至室温。离心分离8min（8000r/min）或15min（2000r/min），弃去上清液，得到酪蛋白粗制品。 2.用蒸馏水洗涤沉淀3次（洗涤时将沉淀颗粒用干净吸管吹开或用毛细管的封闭一端搅开，充分洗涤），离心5min（12000r/min）或10min（3000r/min），弃去上清液。 3.在沉淀中加入3ml95%的乙醇，搅拌片刻，将全部悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤。用乙醇-乙醚混合液洗涤沉淀2次，最后用乙醚洗涤沉淀2次，抽干。 4.将沉淀摊开在表面皿上，风干，得酪蛋白精制品。 5.称取所获酪蛋白的质量（g）。 六、计算含量和得率： 酪蛋白含量（g/ml）=酪蛋白（g）/50m l×100%； 得率=测得含量/理论含量×100%。 七、实验注意事项： 1.离心管中装入样品后必须严格配平，否则对离心机损坏严重； 2.离心管装入样品后必须盖严，并擦干表面的水分和污物后方可放入离心机。 3.离心机用完后应拔下电源，然后检查离心腔中有无水迹和污物，擦除干净后才能盖上盖子放好保存，以免生锈和损坏。 八、思考题：

牛奶中酪蛋白和乳糖的分离

牛奶中酪蛋白和乳糖的分离 、原理 牛奶是一种乳状液，主要由水、脂肪、蛋白质、乳糖等组成。牛奶蛋白分为四种： B -乳球蛋白、丫 -乳清蛋白、乳清蛋白和酪蛋白。其中酪蛋白对牛奶蛋白的贡献最大， 占了 80%含有10%的磷，对促进大脑发育起至关重要的作用； 乳清蛋白分子比较 小，相对酪蛋白更加易消化；而乳球蛋白多是牛奶中的生物活性物质，如免疫球蛋 白、乳铁蛋白、溶菌酶 等。酪蛋白是牛奶中的主要蛋白质，是含磷蛋白质的复杂混 合物。蛋白质是两性化合物,当调节牛奶的pH 达到酪蛋白的等电点(pH = 4. 8)时, 蛋白质所带正、负电荷相等，呈电中性，此时酪蛋白的溶解度最小，会从牛奶中沉淀出 来,以此分离酪蛋白。因酪蛋白不溶于乙醇和乙醚 ,可用此两种溶剂除去酪蛋白中的 脂肪。 乳糖是一种二糖,由一分子B -D-半乳糖的半缩醛羟基与另一分子葡萄糖 C4k 的 醇性羟基缩去一分子水通过B -1 , 4糖苷键结合而成。乳糖也不溶于乙醇,当乙醇混 入乳糖水溶液中，乳糖会结晶出来，从而达到分离的目的。 orD-葡萄糖 H 0H CHOH tt-D- ( + )-葡萄糖(占36%) H H H

CH20H CH20H HOH p-D-半乳糖残基D-葡萄糖残基 、实验材料和试剂 脱脂乳或脱脂奶粉 醋酸-醋酸钠缓冲溶液（PH=4.7）, 95聽醇，乙醚，碳酸钙粉末，苯肼试剂。 三、实验步骤 1.从牛奶中分离酪蛋白 在烧杯中加入2g脱脂奶粉，再加入40ml40C, PH=4.7的醋酸-醋酸钠缓冲溶液 40ml，用PH精密试纸检验液体的PH fi（使牛奶pH = 4. 8 ），放置冷却、澄清后，用 尼龙布过滤酪蛋白。（在滤液中加入少量粉状碳酸钙，留作乳糖的分离。）依次用乙醇、乙醇和乙醚的等体积混合液、乙醚洗涤酪蛋白，去除脂肪,待酪蛋白充分干燥后称量其重量,并计算牛奶中酪蛋白的含量。 2.从牛奶中分离乳糖 在除去酪蛋白的乳清中，加入1.5g CaCO3粉末，搅拌均匀后加热至沸。加CaCO的目的一方面是中和溶液的酸性，防止加热时乳糖水解，另方面又能使乳白蛋白沉淀。过滤除去沉淀，在滤液中加入1?2粒沸石，加热浓缩至3?5ml，加入10ml 95% 乙醇（注意离开火焰）和少量活性炭，搅拌均匀后在水浴上加热至沸腾，趁热过滤，滤液必须澄清。加塞放置过夜，乳糖结晶析出，抽滤，用95%L醇洗涤产品。 3.乳糖成脎试验 取自制乳糖溶于少量水中，浓度约为5%在试管中加入1ml乳糖溶液，1ml苯肼试剂①，摇匀，试管口用棉花塞住，在沸水浴中加热，并不时振摇，加热10?15分钟后，取出放置冷却，乳糖脎成结晶析出。取少量乳糖脎在显微镜下观察其结晶形

牛乳中酪蛋白与制品的研究与应用

牛乳中酪蛋白及制品的研究与应用 摘要：酪蛋白是牛奶中的主要蛋白质，占牛奶中蛋白质总量的80%，是一种全价蛋白。本文就酪蛋白及制品的研究现状、功能特性、应用进行了阐述。 关键词：酪蛋白及制品研究现状功能特性应用 Research and Application on Casein and Its Products of Milk Abstract：Casein is a main protein in milk，make up 80% in total protein. It is a kind of full-price protein. The paper elaborated research status，functional characteristic and application of casein and its products. Key words：casein and its products，research status，functional characteristic，application. 酪蛋白是牛奶中的主要蛋白质，含量约为2.6 g/100 ml，占牛奶中蛋白质总量的80%，分子量约75，000～375，000。酪蛋白主要有四种类型:αs- 酪蛋白、β- 酪蛋白、k - 酪蛋白、γ- 酪蛋白。酪蛋白在牛乳中以酪蛋白酸钙·磷酸钙复合体形式存在于乳中，呈胶体状，等电点为pH4.6。鲜乳加酸(调pH4.5) 或凝乳酶可使酪蛋白沉淀而分离出来[ 1 ]。酪蛋白是一种全价蛋白，含有人体必需的8种氨基酸，极易消化吸收，是优质氨基酸供给源，成为婴幼儿及幼畜的主要蛋白源。目前酪蛋白及制品主要用于造纸工业、皮革工业、乳酸工业、国防工业、塑料、油漆、化妆品、中草药分析、水果保鲜、医药、营养保健品等行业中。 1 酪蛋白及制品的研究现状

牛奶中酪蛋白和乳糖的分离与鉴定

牛奶中酪蛋白和乳糖的分离与鉴定 梁焱科张翔 （武汉大学化学与分子科学学院，430072） 摘要：牛奶是一种营养价值很高的食品，它主要是由水、脂肪、蛋白质、乳糖和盐组成。本实验完成了对牛奶中酪蛋白和乳糖的分离和检测，锻炼了我们的动手能力和在实验中分析问题的能力。 关键词：牛奶，酪蛋白，乳糖，分离与检测 一、前言 牛奶是营养最完备的食品之一，这一点己为许多人认识并接受。尤其是在婴儿及青少年时期，每大一定量的牛奶能促进身体健康成长。牛奶的主要成分是水、蛋白质、脂肪、糖和矿物质，这些都是人体发育所必不可少的物质。 牛奶是一种均匀稳定的悬浮状和乳浊状的胶体性液体，牛奶主要由水、脂肪、蛋白质、乳糖和盐组成。酪蛋白是牛奶中的主要蛋白质，是含磷蛋白质的复杂混合物。蛋白质是两性化合物，当调节牛奶的pH值达到酪蛋白的等电点（pH=4.8）时，蛋白质所带正、负电荷相等，呈电中性，此时酪蛋白的溶解度最小，会从牛奶中沉淀出来，以此分离酪蛋白。因酪蛋白不溶于乙醇和乙醚，可用此两种溶剂除去酪蛋白中的脂肪，牛奶中酪蛋白的含量约为3.4%。牛奶中的糖主要是乳糖。乳糖是一种二糖，它是唯一由哺乳动物合成的糖，它是在乳腺中被合成的。乳糖是成长中的婴儿建立其发育中的脑干和神经组织所需的物质。乳糖也是不溶于乙醇的，所以当乙醇混入水溶液中时乳糖会结晶出来，从而达到分离的目的。 乳糖是由D-半乳糖分子C，上的半缩醛羟基和D-葡萄糖分子C4上的醇羟基脱水通过β-1，4苷键连接而成。乳糖是还原性糖，绝大部分以α-乳糖和β-乳糖两种同分异构体形态存在，α-乳糖的比旋光[α]D20=+860, β-乳糖的比旋光[α]D20=+350，水溶液中两种乳糖可互相转变，因此水溶液有变旋光现象。牛奶中乳糖的含量约为4-6%。乳糖的溶解度20℃时为16.1%。 二、实验部分 ⒈牛奶中酪蛋白的分离 ①取100mL新鲜伊利牛奶，在恒温水浴中加热至40℃，边搅拌边慢慢加入10%醋酸溶液，用pH计测量其pH值，使其在4.8左右，放置冷却、澄清后，抽滤。但由于抽滤速度过慢，故先拿出离心，收集离心之后的固体部分和液体部分，分别再抽滤（在滤液中加入少量粉状碳酸钙，留作乳糖的分离），此时过滤速度加快。依次用乙醇、乙醇和乙醚的等体积混合液、

牛奶中酪蛋白的提取与分析

实验题目：牛奶中酪蛋白的提取与分析 实验材料：牛奶 小组成员： 实验时间： 一：实验题目：牛奶中酪蛋白的提取与分析二：报告撰写者三、小组成员

实验仪器 温度计、布氏漏斗（* ）、pH试纸（* ）、抽滤瓶（*）水浴锅、烧杯、量筒、表面皿（* ）、电子天平（* ）、2个1000ml的容量瓶（*）、2张醋酸纤维薄膜（2cm x 8cm厚度120nm）成品 （* ）、培养皿9 —10cm （* ）、毛细管（* ）、尺子、铅笔、单面刀片（* ）、镊子、普通滤纸 （* ）、 电泳槽、玻璃板8cm x 12cm （* ）、752型分光光度计（*）、细布（* ）0.5ml、1.0ml、2.0ml、 5.0ml的移液管、试管、试管架、 四、实验材料 牛奶（蒙牛特仑苏和伊利金典） 五、实验试剂 特仑苏400ml、金典200ml、1.66g巴比妥（* ）、12.76g巴比妥钠（* ）、0.5g氨基黑10B （* ）、50ml 甲醇AR (* )、100ml 冰醋酸AR ( *) 、95%的乙醇250ml (*)、95% 的乙醚100ml (* )、0.2mol/L的乙酸100ml （*）、0.2mol/L的乙酸钠100ml （* ）、25g氢氧化钠固体（*）标准酪蛋白、15mg五水硫酸铜（* ）、60mg酒石酸钾钠（*） 所需试剂配制方法： 乙醇乙醚混合液的配制： 从特仑苏和金典中提取的酪蛋白样品液1、2 的配制（2-9mg/ml）:

10ml95%的乙醇10ml95%的乙醚乙醇钠缓冲液的配制：0.2mol/L 的乙酸51ml 0.2mol/L的乙酸钠49ml 巴比妥钠缓冲液的配制：巴比妥1.66g 巴比妥钠12.76g 染色液的配制：0.5g氨基黑10B 50ml 甲醇AR 10ml冰醋酸AR 漂洗液的配制：45ml95% 乙醇AR 5ml冰醋酸AR 蒸馏水透明液的配制：25ml的冰醋酸AR 75ml 的无水乙醇AR 0.05mol/L氢氧化钠溶液的配制：16g的氢氧化钠固体定容至1000ml 10%氢氧化钠溶液的配制：5g 的氢氧化钠固体定容至50ml 双缩脲试剂的配制：_ 15mg五水硫酸铜60mg酒石酸钾钠- 标准酪蛋白溶液A的配制（10mg/ml）: 用0.05mol/L氢氧化钠溶液配制10ml 配制乙醇乙醚1:1的混合液 配制pH4.6的乙酸钠缓冲液（0.2mol/l） 配制巴比妥钠缓冲液（pH8.6,0.06mol./L ）将上述二者混合后定容于1000ml +40ml蒸馏水，混匀既得染色液 混匀得染色液 混匀得透明液 溶于5ml蒸馏水，在搅拌情况下，加入 10%氢氧化钠溶液3ml，用蒸馏水稀释到10ml，用棕色瓶避光保存 从特仑苏和金典中提取的酪蛋白样品液1、2 的配制（2-9mg/ml）:

牛奶中部分成分的分析

牛奶中部分成分的分析 1.实验目的 1.1设计合适的实验方法来分析牛奶中蛋白质与钙的含量 1.2学习利用等电点沉淀法从牛奶中制备酪蛋白 1.3熟悉可见光分光光度计的操作。 1.4加强对沉淀、抽滤、溶液配制等基本操作的锻炼。 1.5掌握双缩脲法测定蛋白质的原理和方法。 1.6掌握配位滴定法测定液体食品中钙含量的原理和方法。 1.7通过与牛奶包装上注明的含量比较，学会对自己实验分析结果进行客观评价。 2. 实验原理 牛乳中的主要的蛋白质是酪蛋白，含量约为35g·L-1。酪蛋白是一些含磷蛋白质的混合物，等电点为4.7。利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的pH调至4.7时，酪蛋白就沉淀出来。用乙醇洗涤沉淀物，除去脂类杂质后便可得到纯酪蛋白。 双缩脲(NH2CONHCONH2)在碱性溶液中与硫酸铜反应生成紫红色化合物，称为双缩脲反应，蛋白质分子中含有许多肽键在碱性溶液中也能与Cu2+反应产生紫红色化合物。在一定范围内，其颜色的深浅与蛋白质浓度成正比。因此，可以利用比色法测定蛋白质浓度。双缩脲法是测定蛋白质浓度的常用方法之一。操作简便、迅速、受蛋白质种类性质的影响较小，但灵敏度较差，而且特异性不高。除-CONH-有此反应外，-CONH2、-CH2NH2、-CS-NH2等基团也有此反应。 钙与身体健康息息相关，钙除成骨以支撑身体外，还参与人体的代谢活动，它是细胞的主要阳离子，还是人体最活跃的元素之一，缺钙可导致儿童佝偻病，青少年发育迟缓，孕妇高血压，老年人的骨质疏松症。缺钙还可引起神经病，糖尿病，外伤流血不止等多种过敏性疾病。补钙越来越被人们所重视。牛奶中含有易被人体吸收得钙，有些牛奶产品中还特地加钙而成为钙奶。对于液体牛奶中钙的含量，可采用EDTA法进行直接测定。考虑到牛奶中含有Fe3+、Al3+等干扰离子，可以加入少量三乙醇胺以消除它们的，调节pH≈12～13，以铬蓝黑R作指示剂，指示剂与钙生成红色的络合物，当用EDTA 滴定至计量点时，游离出指示剂，溶液呈现蓝色。 3. 实验步骤

牛乳酪蛋白提取

综合实验：从牛奶中分离乳脂、酪蛋白和乳糖 一、引言 牛奶约含有3.4％乳脂，经离心就可上浮，撇出乳脂层可加工奶油，剩余的即脱脂乳，可用于分离酪蛋白和乳糖。牛奶中主要的蛋白质是酪蛋白，含量约为35g/L。酪蛋白在乳中是以酪蛋白酸钙-磷酸钙复合体胶粒存在，胶粒直径约为20～800 纳米，平均为100 纳米。在酸或凝乳酶的作用下酪蛋白会沉淀，加工后可制得干酪或干酪素。本实验利用加酸，当达到酪蛋白等电点pH=4.6 时，酪蛋白沉淀。脱脂乳中除去酪蛋白后剩下的液体为乳清，在乳清中含有乳白蛋白和乳球蛋白，还有溶解状态的乳糖，乳中糖类的99.8%以上是乳糖，可通过浓缩、结晶制取乳糖。 二、实验材料和试剂 1．新鲜牛奶。 2．试剂：10%醋酸，95%乙醇，乙醚，碳酸钙，5%醋酸铅溶液，10%氯化钠，0.5%碳酸钠，0.1mol/L，氢氧化钠，0.2%盐酸，饱和氢氧化钙溶液，米伦试剂。 米伦试剂的配制：将汞100g 溶于140ml(密度1.42)的浓硝酸中(在通风橱内进行)。然后加两倍量的蒸馏水稀释。 三、实验步骤 1. 从牛奶中分离乳脂及转变为奶油 取20 mL新鲜牛奶，于普通生化离心机上3500rpm 离心5分钟，取出离心管后，小心将乳脂层与脱脂乳分离，将乳脂层冻结，然后回放到室温下，将要重新融化前，快速搅动使脂肪球膜破裂以及脂肪球膜蛋白变性，倾出释放出的少量水后，继续搅动形成油包水式的奶油。称量后计算得率。 2. 从牛奶中分离酪蛋白 将脱脂乳在恒温水浴中加热至40℃,边轻轻搅拌边慢慢加入10%醋酸溶液,使牛奶pH = 4. 7,放置冷却、澄清后,用尼龙布过滤或直接用玻璃棒挑出酪蛋白粗品。滤液（乳清）留作乳糖的分离。将酪蛋白粗品转入另一烧杯，加20ml蒸馏水，用玻棒充分搅拌，洗涤除去其中的水溶性杂质（如乳清蛋白，乳糖以及残留的缓冲溶液），离心后弃去上层液，加15ml乙醇，洗涤除去其中的磷脂，离心后弃去上层液，加15ml乙醚洗涤除去其中的脂肪, 离心后弃去上层液，待酪蛋白充分干燥后称量其重量,并计算酪蛋白的得率。 3. 从牛奶中分离乳糖 在除去酪蛋白的乳清中，加入5g CaCO3 粉末，搅拌均匀后加热至沸。加CaCO3 的目的一方面是中和溶液的酸性，防止加热时乳糖水解，另一方面又能使乳白蛋白沉淀。过滤除去沉淀，在滤液中加入1～2 粒沸石，加热浓缩至10ml，加入20ml 95%乙醇（注意离开火焰）和少量活性炭，搅拌均匀后在水浴上加热至沸腾，趁热过滤，滤液必须澄清。加塞放置过夜，乳糖结晶析出，抽滤，用95%乙醇洗涤产品。充分干燥后称量其重量,并计算乳糖的得率。