血型鉴定、不规则抗体筛查及交叉配血步骤

血型鉴定、不规则抗体筛查及交叉配血步骤

一.血型鉴定

1.排管并标记患者红细胞悬液管、患者血浆管、患者ABO正定型试管、患者ABO反定型试

管、患者RhD定型试管。

2.标本准备分离患者的血浆，取一滴压积红细胞，三次洗涤，制备患者2%-5%红细胞悬液。

3.加样

ABO正定型：1滴（50ul）抗A、抗B试剂加1滴（50ul）患者红细胞悬液。

ABO反定型：1滴（50ul）患者血清加1滴（50ul）反定型试剂红细胞。

RhD定型：1滴（50ul）抗D血清加1滴（50ul）患者红细胞悬液。

4. 结果判断

离心（2档）：轻摇试管，肉眼观察有无凝集，记录ABO、RhD血型结果。

二.不规则抗体筛查（生理盐水法+凝聚胺法）

1.排管标记01、02、03及自身对照管

2.加样各试管分别加入相应的患者血清2滴（100ul）及筛选细胞1滴（50ul）。

3.结果观察

离心（2档），观察结果

先看上清液有无溶血，轻轻混匀，肉眼观察有无凝集，结果判断并记录。

各试管分别加入低离子介质，轻轻混匀（参照试剂说明书）

各试管再分别加凝聚胺溶液2滴（100ul）混匀，离心

先观察上清液有无溶血

弃去上清液，留约，轻轻混匀

肉眼观察有无凝集（凝者继续试验，否则查找原因并重复试验）

各试管分别加入重悬液2滴（100ul），轻轻混匀

肉眼观察凝集是否在1min内消失

显微镜检查

三.交叉配血试验（生理盐水法+凝聚胺法）

1.标本准备

分离供血者血浆与红细胞

三次洗涤，制备供血者2%-5%红细胞悬液

2.排管标记

排管，主侧、次侧及自身对照管

3.加样

各试管分别加入相应的备检血清2滴（100ul）及2%-5%备检红细胞悬液1滴（50ul）4. 结果观察

离心（2档），观察结果

先看上清液有无溶血

轻轻混匀，肉眼观察有无凝集

结果判断并记录

各试管分别加入低离子介质，轻轻混匀（参照试剂说明书）

各试管再分别加凝聚胺溶液2滴（100ul）混匀，离心

先观察上清液有无溶血

弃去上清液，留，轻轻混匀

肉眼观察有无凝集（凝者继续试验，否则查找原因并重复试验）

各试管分别加入重悬液2滴（100ul），轻轻混匀

肉眼观察凝集是否在1min内消失

肉眼观察阴性者，显微镜检查

记录交叉配血结果

A、B、O试验红细胞悬液的制备

1. 分别采取已知A、B、O三种血型的红细胞，经盐水洗涤3次，以压紧红细胞配成不同浓度的红细胞悬液（见表格）

红细胞悬液的配置

悬液浓度（%）压实红细胞（滴）盐水（滴）

2 1 （40）

5 1 （16）

10 1 （8）

20 1 （4）

2. 为了防止红细胞悬液敏感性不一致，可随机采取3个以上健康成人血液，按A、B、O 型分别混合后，按上法制备。

血型鉴定和交叉配血中常见问题分析和处理包括

血型鉴定和交叉配血中常见问题分析和处理包括： 一、血型相容性检测 二、ABO血型正反定型型不一致的原因分析及处理 三、交叉配血中常见问题分析及处理 四、意外抗体筛选的意义和检测方法 五、弱D检测的的意义和检测方法 一、血型相容性检测 1、受血者和供血者AB0血型是否相容。 2、受血者和供血者RhD血型是否相容。 3、主次侧交叉配血是否相容。 4、受血者血清中是否有临床有意义的意外抗体。 二、ABO正反定型不符的原因分析和处理 （一）原因 1．实验者操作技术的错误： 导致假阴性的有：①未加入抗体或血清。②未识别溶血。③血清与红细胞比例不当 ④离心速度或时间不够。⑤使用失效或错误试剂。⑥实验结果记录或解释错误 导致假阳性的有：①离心速度过大或时间过长、②使用了受到细菌污染的试剂、③试验器皿不干净、④实验结果记录或解释错误 2、红细胞标本问题：①患者近期接受了大量ABO血型相容但不同型的红细胞，如骨髓移植患者，或非O型人接受O型红细胞 ②某些ABO基因变异的个体或ABO亚型红细胞，一些白血病或其他恶性疾病患者的红细胞ABO抗原太弱，应用抗－A、抗－B试剂未能出现预期的凝集反应 ③红细胞获得性或遗传性的异常，如获得性B抗原红细胞或Tn/T多凝集红细胞，人血清抗－A、抗－B试剂可能与这些异常的红细胞反应

④使用未洗涤的红细胞标本，其表面黏附的血浆或血清中含针对抗－A、抗－B 试剂中染色剂或其他成分的抗体，出现假阳性反应 ⑤患者血清中高活性、高浓度冷自身抗体严重致敏（包被）自身红细胞，以至自发地发生凝集，而不是抗体试剂的特异性免疫反应所致 ⑥红细胞表面包被IgG类抗体 3、血清标本的问题：①小的纤维蛋白凝集的红细胞凝块被误认为是血液凝集，如使用血浆标本或未完全去除纤维蛋白的血清标本时。 ②免疫抑制疾病患者血清中ABO抗体减少或消失。老年人ABO抗体减弱 ③4-6月龄内婴儿血清中ABO抗体阴性或很弱，一般只测正定型 ④血清中不正常浓度和比例的蛋白质成分或高分子蛋白增多可引起非特异凝集，如缗钱状红细胞的非特异凝集 ⑤血清中含抗－A、抗－B以外的其他红细胞抗体，如抗－M、抗－I等。 ⑥患者接受了ABO血型不同的骨髓移植 ⑦患者血清中含有针对红细胞保护剂的抗体 ⑧大量C 1分子由于异常高效价的补体结合抗体抗－A、抗－B作用，结合到红细胞膜上，遮蔽了A、B抗原位点，不发生凝集 （二）、分析和处理 基本程序：1.重新采集标本，以避免采集、标记、污染等错误 2.查询患者既往病史、输血史、用药史、骨髓移植史 3.彻底洗涤标本或试剂红细胞 4.应用抗－AB、抗－A1、或抗－H检测红细胞 5.分析抗筛结果，确定结果是否受同种异型或自身冷抗体干扰 6.室温孵育30min后，离心观察结果，以检测弱的抗原抗体反应 7. 做自身红细胞做对照，以确定自身抗体的干扰 ABO正反定型型不符的分类：

血型鉴定、不规则抗体筛查及交叉配血步骤

血型鉴定、不规则抗体筛查及交叉配血步骤 一.血型鉴定 1.排管并标记患者红细胞悬液管、患者血浆管、患者ABO正定型试 管、患者ABO反定型试管、患者RhD定型试管。 2.标本准备分离患者的血浆，取一滴压积红细胞，三次洗涤，制备 患者2%-5%红细胞悬液。 3.加样 ABO正定型：1滴（50ul）抗A、抗B试剂加1滴（50ul）患者红细胞悬液。 ABO反定型：1滴（50ul）患者血清加1滴（50ul）反定型试剂红细胞。 RhD定型：1滴（50ul）抗D血清加1滴（50ul）患者红细胞悬液。 4. 结果判断 离心（2档）：轻摇试管，肉眼观察有无凝集，记录ABO、RhD血型结果。 二.不规则抗体筛查（生理盐水法+凝聚胺法） 1.排管标记01、02、03及自身对照管 2.加样各试管分别加入相应的患者血清2滴（100ul）及筛选细胞1 滴（50ul）。 3.结果观察

离心（2档），观察结果 先看上清液有无溶血，轻轻混匀，肉眼观察有无凝集，结果判断并记录。 各试管分别加入低离子介质0.65ml，轻轻混匀（参照试剂说明书）各试管再分别加凝聚胺溶液2滴（100ul）混匀，离心 先观察上清液有无溶血 弃去上清液，留约0.1ml，轻轻混匀 肉眼观察有无凝集（凝者继续试验，否则查找原因并重复试验）各试管分别加入重悬液2滴（100ul），轻轻混匀 肉眼观察凝集是否在1min内消失 显微镜检查 三.交叉配血试验（生理盐水法+凝聚胺法） 1.标本准备 分离供血者血浆与红细胞 三次洗涤，制备供血者2%-5%红细胞悬液 2.排管标记 排管，主侧、次侧及自身对照管 3.加样 各试管分别加入相应的备检血清2滴（100ul）及2%-5%备检红细胞悬液1滴（50ul） 4. 结果观察 离心（2档），观察结果

ABO血型鉴定和交叉配血实验

ABO血型鉴定和交叉配血实验 [实验目的] 观察红细胞凝集现象。 学习ABO血型鉴定方法，掌握血型鉴定原理。 [实验原理] ABO血型是根据红细胞表面存在的凝集原决定的。存在A凝集原的称为A血型，存在B凝集原的称为B血型。而血清中还存在凝集素。当A凝集原与抗A凝集素相遇或B凝集原与抗B 凝集素相遇时，会发生红细胞凝集反应。一般A型标准血清中含有抗B凝集素，B型标准血清中含有抗A凝集素，因此可以用标准血清中的凝集素与被测者红细胞反应，以确定其血型。 同种动物不同个体的红细胞凝集称为同族血细胞凝集作用。不同动物的血液互相混合有时也可产生红细胞凝集，称为异族血细胞凝集作用。对于动物的天然血型抗体了解不多，而且免疫效价也很低，所以同种动物第一次输血，一般不会引起严重后果。但第二次输血就必须进行交配试验，才能决定是否能相互输血。 [实验对象] 正常人。 [实验药品] A型B型标准血清。 [仪器器械] 双凹玻片，采血针，竹签，75%酒精棉球，干棉球，玻璃蜡笔（记号笔），尖头滴管，显微镜。 [实验方法与步骤] 1.ABO血型的鉴定： （1）取双凹玻片一块，在两端分别标上A和B，中央标记受试者的号码。 （2）在A端和B端的凹面中分别滴上相应标准血清少许。 图6.9-1 ABO血型鉴定示意图 （3）75%酒精棉球消毒无名指端，用采血针刺破指端，用消毒后的尖头滴管吸取少量血（也可用红细胞悬浮液，见下述），分别与A端和B端凹面中的标准血清混合，放置1～2 min后，能肉眼观察有无凝血现象，肉眼不易分辨的用显微镜观察。 （4）根据凝集现象的有无判断血型（图6.9-1）。

2.交叉配血实验： （1）分别对供血动物和受血动物消毒、静脉取血，制备成血清和红细胞悬浮液。红细胞悬浮液是将受检者的血液一滴，加入装有生理盐水约1 ml的小试管中，即为2%的红细胞悬浮液。加盖备用。 （2）取双凹玻片一块，在两端分别标上供血动物和受血动物的名称或代号，分别滴上它们的血清少许。 （3）将供血者的红细胞悬浮液吸取少量，滴到受血者的血清中（称为主侧配血,图6.9-2）；将受血者的红细胞悬浮液吸取少量，滴入供血者的血清中（称为次侧配血），混合。放置10～30 min后，肉眼观察有无凝集现象，肉眼不易分辨的用显微镜观察。如果两次交叉配血均无凝集反应，说明配血相合，能够输血。如果主侧发生凝集反应，说明配血不合，不论次侧配血如何都不能输血。如果仅次侧配血发生凝集反应，只有在紧急情况下才有可能考虑是否输血。 [注意事项]

ABO血型鉴定与交叉配血

ABO血型鉴定与交叉配血 ABO血型鉴定与交叉配血 血型就是红细胞膜上特异抗原的类型。在ABO血型系统中，红细胞膜上抗原分A 和B两种抗原，而血清抗体分抗A和抗B两种抗体。A抗原加抗A抗体或B抗原加抗B抗体，则产生凝集现象。血型鉴定是将受试者的红细胞加入标准A型血清（含有抗B抗体）与标准B型血清（含有抗A抗体）中，观察有无凝集现象，从而测知受试者红细胞膜上有无A或/和B抗原。在ABO血型系统，根据红细胞膜上是否含A、B抗原而分为A、B、AB、O四型。（见表4-3-1-1） 交叉配血是将受血者的红细胞与血清分别同供血者的血清与红细胞混合，观察有无凝集现象（见图4-3-1-1）。输血时，一般主要考虑供血者的红细胞不要被受血者的血清所凝集；其次才考虑受血者的红细胞不被供血者的血清所凝集。前者叫交叉配血试验的主侧（也叫直接配血），后者叫交叉配血的次侧（也叫间接配血）。只有主侧和次侧均无凝集，称为“配血相合”，才能进行输血；如果主侧凝集，称为“配血不合”或“配血禁忌”，绝对不能输血；如果主侧不凝集，而次侧凝集，可以认为“基本相合”，但输血要特别谨慎，不宜过快过多，密切注视有无输血反应。本实验的目的是学习ABO血型鉴定的原理、方法以及交 叉配血方法。 1．仪器显微镜，离心机。 2．器械采血针，消毒注射器，双凹玻片，小试管，竹签，棉球，腊笔。 3．药品标准A血清，标准B血清，生理盐水，75％酒精，碘酒。

（一） ABO血型鉴定 1. 玻片法 （1）取双凹玻片一块，用干净纱布轻拭使之洁净，在玻片两端用腊笔标明A及B，并分别 各滴入A及B标准血清一滴。 （2）细胞悬液制备从指尖或耳垂取血一滴，加入含1ml生理盐水的小试管内，混匀，即得约5％红细胞悬液。采血时应注意先用75％酒精消毒指尖或耳垂。 （3）用滴管吸取红细胞悬液，分别各滴一滴于玻片两端的血清上，注意勿使滴管与血清相 接触。 （4）竹签两头分别混合，搅匀。 （5） 10～30min后观察结果。如有凝集反应可见到呈红色点状或小片状凝集块浮起。先用肉眼看有无凝集现象，肉眼不易分辨时，则在低倍显微镜下观察，如有凝集反应，可见红细 胞聚集成团。 （6）判断血型根据被试者红细胞是否被A，B型标准血清所凝集，判断其血型。 2. 试管法 （1）取试管2只，分别标明A，B字样，分别加入相应标准血清2滴，各管加入受试者的红

不规则抗体筛查

不规则抗体检查 不规则抗体检查也称红细胞抗体检查。不规则抗体是指抗Ａ、抗Ｂ以外的血型抗体。ＡＢＯ系中的亚型,变异型抗Ａ1或某种抗Ｂ等抗体,也称为不规则抗体。其多为ＩｇＧ抗体。主要是经输血或妊娠等免疫刺激产生,在盐水介质中不能凝集而只能致敏相应抗原的红细胞,必须通过特殊介质才能使致敏红细胞出现凝集反应。临床上通常所称的“同型血”实际上是指ＡＢＯ血型系统和Ｒｈ血型系统相同,其它红细胞血型系统未必相同。如果交叉配血不仔细,或者只用盐水介质配血,则有可能检查不出ＡＢＯ血型系统之外的不规则抗体,而此抗体与相应抗原发生免疫反应,可导致溶血性输血反应的发生。 红细胞血型抗体检查适用于下列情况：1、ABO血型鉴定发现受检者血清中有意外抗体时；2、供血者血清抗体筛检；3、输血前受者血清抗体检查；4、输血后溶血反应疑为由同种抗体引起时；5、孕妇血清的抗体检查；6、新生儿溶液血病婴儿血液中抗体检查；7、直接抗球蛋白试验阳性红细胞上抗体的检查。 1. 原理 利用筛选细胞（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）上存在的多种红细胞抗原与被检血清在凝聚胺介质中反应，如果出现凝集表示血清中存在不规则抗体。 2. 试剂 2.1 5%筛选细胞（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ） 2.2 凝聚胺试剂 2.3 直接抗人球试剂 外周血或静脉血 3. 操作步骤 3.1 取试管三支，标明Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ并往各管加病人血清（血浆）2滴，加5%筛选细胞（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）各1滴。

3.2 各加LIM0.7ml，混合均匀后，再各加Polybrene 溶液2滴，并混合均匀。 3.3 用BASO专用离心机1000G离心力，离心10秒，然后把上清液倒掉，不要沥干，让管底残留约0.1ml液体。 3.4 轻轻摇动试管，目测红细胞有无凝集，如无凝集，则必须重作。 3.5 最后加入Resuspending 2滴，轻轻转动试管混合并同时观察结果。如果凝集散开，表示是由Polybrene引起的非特异性聚集，抗体筛检结果为阴性；如凝集不散开，则为红细胞抗原抗体结合的特异性反应，抗体筛检结果为阳性，应进一步作抗体鉴定。 4. 筛选Ⅰ号细胞，筛选Ⅱ号细胞，筛选Ⅲ号细胞。对应的细胞反应格局表一张。 红细胞血型抗体筛选细胞反应格局表 4. 临床意义 虽然不规则抗体筛选阳性率仅为0.37%,但是该项阳性的患者一旦输入具有相应抗原的红细胞,抗原、抗体发生免疫性结合,在补体的参与下,使输入的红细胞发生溶解,即发生溶血性输血反应。患者出现发热、贫血、黄疸和血红蛋白尿,严重时甚至危及其生命。因此,在输血中要经常警惕这种输血反应发生的可能性。当不规则抗体筛选阳性

不规则抗体

不规则抗体 什么是意外抗体？ 意外抗体又称不规则抗体，是指血清中抗-A、抗-B以外的其他血型抗体。 人的血型抗体有IgG和IgM两类。现在所知ABO血型系统的抗-A，抗-B是IgM型，其它血型系统的抗体都是IgG型。IgM型抗体在盐水介质中能与含相应抗原的红细胞发生肉眼可见的凝结（传统ABO血型鉴定）；而IgG型抗体在盐水介质中只能使相应抗原的红细胞致敏，不能使红细胞凝结。IgG型抗体与相应的红细胞反应必须借助酶学试验或抗人球蛋白试验才能发生肉眼可见的凝结。也就是说传统的盐水血型鉴定和交叉配血试验只对ABO血型系统有效，而对其它多种血型系统无效。 意外抗体筛查的重要性？ 由于其它血型系统的不规则抗体会导致输血反应：轻者引起寒战、发热，影响治疗效果；重者破坏输入的不配合的红细胞或缩短其寿命，产生溶血性输血反应，危机病人生命；此外，对孕妇而言，不规则抗体会引起新生儿溶血病，影响新生儿脏器的发育，并使其智力发育受到伤害，严重者则会危及新生儿的生命安全。因此，抗筛选是很必要而且必须的。其筛选的意义主要在于三个方面： 一、献血者的血清或血浆进行抗体筛查，可以防止含有不规则抗体的血液输注给病人，避免由于献血者血液中的不规则抗体引起病人红细胞的破坏而引起的溶血性输血反应，同时可以减少血液浪费，可

将有不规则抗体的血液制备成抗体血清，用于稀有血型的检测。 二、对需要输血治疗的患者，进行不规则抗体筛查，可以有助于 血液选择，从而有充分的时间来选择不含有针对某抗体的响应抗原的 血液，从而防止因为输注含有某抗体相应抗原的血液而引起溶血性输 血反应，保证输血安全。 三、孕妇进行不规则抗体筛查，可以尽早发现不规则抗体，可以 在孕期进行新生儿溶血病的预防和治疗，减少不规则抗体对胎儿或新 生儿带来的伤害，减轻新生儿溶血病的性病程度，提高胎儿或新生儿 的身体素质。 四、新生儿 所谓不规则抗体就是除了抗Ａ，抗Ｂ抗体以外的血型抗体。以ＲＨ血型系统的抗体为例（属于不规则抗体），由于是以免疫性抗体为主，因此，在输血时如果有某种ＲＨ抗原输入，在受血者体内，通过免疫反应，就会产生与该抗原相应的抗体。 补充：免疫性抗体是与天然抗体对应的，抗Ａ和抗Ｂ抗体主要是天然抗体，不需要通过后天免疫反应，天生就产生的抗体；免疫性抗体是需要通过妊娠，输血等途径，通过免疫反应而产生的。 新生儿ABO溶血病是由什么原因引起的？(一)发病原因 ABO溶血病是母婴血型不合溶血病中最常见的一种，主要发生在母亲O型，胎儿A型或B型，其他血型极少见。 本病是由于胎儿接受了母体的(通过胎盘)同族免疫抗体而发病，其发病条件是母

不规则抗体筛查的意义

不规则抗体筛查的意义集团企业公司编码：（LL3698-KKI1269-TM2483-LUI12689-ITT289-

不规则血型抗体筛查的意义 不规则抗体是指抗-A、抗-B以外的其他血型抗体。目前不规则抗体的筛查方法是采用瑞士达亚美的标准系列红细胞检测被检者的血清中的不规则抗体。 人的血型抗体有IgG和IgM两类。现在所知ABO血型系统的抗-A，抗-B 是IgM型，其它血型系统的抗体都是IgG型。IgM型抗体在盐水介质中能与含相应抗原的红细胞发生肉眼可见的凝结（传统ABO血型鉴定）；而IgG型抗体在盐水介质中只能使相应抗原的红细胞致敏，不能使红细胞凝结。IgG型抗体与相应的红细胞反应必须借助酶学试验或抗人球蛋白试验才能发生肉眼可见的凝结。也就是说传统的盐水血型鉴定和交叉配血试验只对ABO血型系统有效，而对其它多种血型系统无效。 由于其它血型系统的不规则抗体会导致输血反应：轻者引起寒战、发热，影响治疗效果；重者破坏输入的不配合的红细胞或缩短其寿命，产生溶血性输血反应，危机病人生命；此外，对孕妇而言，不规则抗体会引起新生儿溶血病，影响新生儿脏器的发育，并使其智力发育受到伤害，严重者则会危及新生儿的生命安全。因此，抗筛选是很必要而且必须的。其筛选的意义主要在于三个方面： 一、献血者的血清或血浆进行抗体筛查，可以防止含有不规则抗体的血液输注给病人，避免由于献血者血液中的不规则抗体引起病人红细

胞的破坏而引起的溶血性输血反应，同时可以减少血液浪费，可将有不规则抗体的血液制备成抗体血清，用于稀有血型的检测。 二、对需要输血治疗的患者，进行不规则抗体筛查，可以有肋于血液选择，从而有充分的时间来选择不含有针对某抗体的响应抗原的血液，从而防止因为输注含有某抗体相应抗原的血液而引起溶血性输血反应，保证输血安全。 三、孕妇进行不规则抗体筛查，可以尽早发现不规则抗体，可以在孕期进行新生儿溶血病的预防和治疗，减少不规则抗体对胎儿或新生儿带来的伤害，减轻新生儿溶血病的性病程度，提高胎儿或新生儿的身体素质。 美国、日本、澳大利亚等国家和我国的香港地区均已将不规则抗体筛查列入常规检测，而我国卫生行政部门目前尚未要求对献血者和受血者进行抗体筛查，在临床也只有少数医院对患者进行抗体筛查。我国目前大多数临床医院输血科（或血库）的配血水平比较落后，一直沿用室温盐水方法配血，此方法只能检出不配合的IgM类抗体，不能检出不配合的IgG抗体，而ABO血型系统以外的其他血型系统的绝大多数抗体是IgG性质的抗体，因此，含有不规则抗体（抗-A、抗-B或抗-AB以外的其他抗体，如抗-D）的血液给病人输用后，此不规则抗体会引起急或迟发性输血反应，往往给病人生命带来危险。为提高血液质量，保证输血患者的输血安全，提高输血治疗效果，避免患者输用含有不规则抗体引起的输血反应，使我国输血事业与世界接轨，应该对献血者或输血者进行不规则抗体筛选。

关于不规则抗体筛查

关于不规则抗体筛查 随着输血技术的发展，血型鉴定试剂灵敏度的提高，由于ABO血型鉴定误差引起的速发性溶血反应发生率显著减少，而患者由于输血或妊娠免疫产生的免疫抗体引起的迟发性溶血反应还时有发生。为了保证患者的临床输血安全，患者输血前常规进行抗体筛查，借以发现有临床意义的不规则抗体，对临床安全输血具有重要的意义。 不规则抗体筛查临床意义：:虽然不规则抗体在正常人群中检出率为0.3%~2%，但它是引起迟发性免疫反应的主要原因。患者一旦输入具有相应抗原的红细胞，抗原、抗体发生免疫性结合，在补体的参与下，使输入的红细胞发生溶解，即发生溶血性输血反应。患者出现发热、贫血、黄疸和血红蛋白尿，严重时甚至危及其生命。 不规则抗体筛查方法：经过多年临床实践，人们采用多种方法进行不规则抗体筛查。其中抗球蛋白法孵育时间长，洗涤易导致技术误差，结果判断受主观因素影响较大，不适于血库日常工作需要；凝聚胺法简单、快速、准确、省时，易于在基层医院开展，是近年来普遍应用于国内实验室的不规则抗体筛查方法；微柱凝胶法的基本原理为通过调节凝胶间隙的大小，使其间隙只能允许游离的红细胞通过，而聚集红细胞不能通过，从而使游离红细胞与聚集红细胞分离。如果通过离心，红细胞沉积在凝胶管底部，则表明红细胞未发生凝聚，是阴性反应；若红细胞聚集在凝胶管上部，则表明红细胞发生凝集，呈阳性反应。微柱凝胶试验简便快速、灵敏度高，结果稳定可靠容易判断，标本用量少、易标准化，适用于临床常规不规则抗体筛检。须指出的是筛检用谱细胞不可能包含所有抗原，对一些低频率抗原相应抗体不能检出。因此“不规则抗体筛查阴性”并不等于完全没有不规则抗体；对ABO血型的误判，也不能通过抗体筛查纠正查出。因此即使不规则抗体筛查阴性，还必须用能快速检测出不完全抗体的方法交叉配血，以确保输血万无一失。

不规则抗体检查的临床意义

不规则抗体检查的临床意义 不规则抗体检查也称红细胞抗体检查，是指不符合ABO血型系统的血型抗体，即抗A、抗B以外的血型抗体。ABO系中的亚型，变异型抗A1或某种抗B等抗体，也称为不规则抗体，多数为IgG抗体。主要是经输血或妊娠等免疫刺激产生，在盐水介质中不能凝集而只能致敏相应抗原的红细胞，必须通过特殊介质(酶、抗人球蛋白、聚凝胺等，才能使致敏红细胞出现凝集反应。临床上所称的“同型血”实际上是指ABO血型系统和Rh血型系统相同，其它红细胞血型系统未必相同。如果交叉配血不仔细，或只用盐水介质配血，则有可能检查不出ABO血型系统之外的不规则抗体，而此抗体与相应抗原发生免疫反应，可导致溶血性输血反应的发生。 虽然不规则抗体筛选阳性率仅为0.37%，但是该项阳性的患者一旦输入具有相应抗原的红细胞，抗原、抗体发生免疫性结合，在补体的参与下，使输入的红细胞发生溶解，即发生溶血性输血反应。患者出现发热、贫血、黄疸和血红蛋白尿，严重时甚至危及其生命。因此,在输血中要经常警惕这种输血反应发生的可能性。当不规则抗体筛选阳性时，必须进一步作抗体鉴定，确定其特异性后，再输入无相应抗原的红细胞，才能达到安全输血之目的。 新生儿溶血病(HDN)也是由于母亲体内存在与其胎儿红细胞不配合的IgG性质的不规则抗体，引起同种被动免疫性疾病。凡是以IgG性质出现的不规则抗体，理论上都可以引起HDN，因为IgG性质抗体能通过胎盘进入胎儿血循环，破坏胎儿红细胞，引发胎儿水肿、黄疸、贫血和肝脾肿大

，甚至并发核黄疸。因此对有输血史或妊娠史的孕妇也应作不规则抗体筛选，若检测出不规则抗体，应作出相应的预防和治疗。Rh血型中D抗原的抗原性强于E抗原的抗原性，因此产生抗D抗体的几率大于抗E抗体。抗A1抗体为A亚型中不规则抗体，它的存在提示我们在注意ABO血型以外的不规则抗体的同时，也应高度重视ABO亚型中的不规则抗体，因为它也是引起溶血性输血反应的一个因素。抗M抗体为冷凝集素，很少在37℃有活性，一般在体内不能引起溶血反应，但患者处于低温麻醉状态下手术时应注意，因为此类抗体可激活补体。当机体的体温在冷抗体最适反应温度范围内(4～20℃)时，可发生溶血反应。 不规则抗体产生大多为Rh血型系统，除抗D外，其他如抗E，抗Ec，抗Ce检出率占Rh系统67.8%，提示Rh阳性患者输血也可引起溶血反应，且机率较高。据我国汉族人群Rh抗原分布特点，E抗原阳性比D抗原阳性低，产生抗E抗体的机率高于抗D抗体，故Rh血型系统D抗原阳性E抗原阴性者输血不容忽视。Rh阴性个体免疫后产生抗D的机率为70.9%，产生的抗体其效价在体内会逐渐下降，甚至常规试验会漏检，若以后作为受血者输入Rh(D)阳性血刺激时，会很快出现免疫性回忆反应。抗体效价会在1～2周内达到高峰，引起迟发性血管外溶血，且发生在输血后几天，造成输血无效及溶血，易被临床忽视。溶血反应的强度与抗体效价成正比关系，抗体产生的强度增加溶血反应愈严重。抗M、抗Lea、抗P1均较少见，但抗Lea抗体可引起严重的溶血性输血反应，所以不能作为供血者，如为受血者时应给Le(a-b-)血液输。抗M抗体只有37℃或抗球蛋白试验出现阳性时才具有临床意义。抗P1最理想的反应温度为

疑难血型鉴定及交叉配血处理流程(1)(1)

疑难血型鉴定及交叉配血处 理流程(1)(1) -标准化文件发布号：（9456-EUATWK-MWUB-WUNN-INNUL-DDQTY-KII

疑难血型鉴定及交叉配血处理流程 一、正反定型不一致 1、重复试验（严格正规操作）。 2、重新取血（以纠正污染或弄错标本造成的不符），溶血标本不能用于合血。 3、洗涤红细胞后进行以下试验（正反定型凝集低于2+的，应首先怀疑是由于亚型或抗原 抗体活降低引起。） 1）、用自身血清、红细胞做定型对照，检验自身有无完全抗体。 2）、用O型红细胞做反定型对照，确认是否存在ABO系统以外完全抗体。 3）、用抗A、抗AB、抗A1和抗H进行正定型： ①A亚型细胞与抗A、抗AB的凝集强度低于A1细胞，但与抗H的凝集强度高于A1细胞（3+ 以上）； ②A亚型（特别是A2中约有1-8%会产生抗A1），与抗A1基本不发生凝集。 ③用抗AB（O型血清或血浆）是因为它的抗A效价较高，与弱A和弱B抗原亲和力强。 4）、分别用A1型和A2型红细胞反定型检查血清中有无抗A1存在（A亚型中有部份会产生抗A1，能与A1发生凝集，但不与A2凝集。） 5）、询问病史，判断是否是由于病人抗体缺失或减弱引起反定型错误，可延长反应时间，或用灵敏度更高的血型卡做反定型。 6）、被检红细胞做直抗（观察有无被抗体致敏的情况），若为阳性，应将细胞放散至阴性后再定血型。 4、若还不能确定血型，应增加血型物质的检测（如唾液等）。 二、交叉配血不合 （一）主侧端不相合 1、血型鉴定不正确,重新鉴定血型。 2、病人血清中存在同种抗体，与供血者红细胞上的相应抗原反应。 3、供血者红细胞上已经包被了抗体，导致抗球蛋白试验阳性。 4、病人血清不正常，如白蛋白/球蛋白比例不正常引起缗钱状凝集，血清中存在高分子聚 合物的血浆扩容剂引起假阳性。 5、试验系统被污染。 （二）次侧端不相合 1、供血者血浆中存在针对病人红细胞抗原的抗体。 2、病人与供血者的ABO血型不相合。 3、病人的红细胞已经包被了抗体，直接抗人球蛋白试验阳性。 4、抗筛阴性，而次侧不合多由自身抗体引起（此是抗人球配血不合，而聚凝胺配血通过可 输血）。 （三）配血不合的主要因素 1、血型是否正确。 2、是否有自身抗体。 3、是否有同种异体抗体。

不规则抗体筛选操作规程

不规则抗体筛选操作规程 一．试剂和仪器 1.抗人球蛋白（IgG,C3b/C3d）多特异检测试剂卡或抗人球蛋白（IgG）单特异检测试剂卡。 2.上海血液生物医药有限公司3%抗筛试剂红细胞悬液 3.离心机和孵育器 二．标本收集与处理 1．血清或血浆都可以使用。 2．如果在直接抗人球蛋白实验中加入了血浆标本，因为钙离子的失活，补体依赖的抗体可能无法检测出来，所以建议使用血清标本。三．操作步骤 1．取出试剂卡，平衡至室温；使用前离心确保无气泡和断层。2．观察卡的反应液面高度，确保试剂液面高于凝胶平面3mm左右，否则请勿使用；撕开试剂卡上的锡纸，撕开后的微柱请于1小时内进行下面操作。 3. 分别向反应柱内加入50 ul患者血清或血浆。注意，加样时，吸头请勿触及微柱管壁。 4．再分别向反应柱内加入10ul 3%红细胞悬液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ(抗筛红细胞)。 5．观察柱中的反应物各组分是否混匀，必要时轻弹几下微柱充分，使反应物混匀。 6．在孵育仓中37℃孵育15分钟。

7．用离心机离心5分钟，离心必须在加样后30分钟内进行。 8. 从微柱正反两面判读并记录结果。 四．结果判读 阳性结果（＋）：红细胞凝集为阳性结果。 阴性结果（－）：无溶血及红细胞未凝集为阴性结果。 溶血会导致玻璃珠上方呈粉红色或红色。如果发现溶血现象，则应先将血清或血浆置于56℃水浴30min以灭活补体，然后再重复试验，观察红细胞凝集现象。 4 + 反应：红细胞在柱中玻璃珠上面凝集，并形成一个环形带。 3 + 反应：发生凝集的大部分红细胞停留在玻璃珠的上半部分。 2 + 反应：发生凝集的红细胞分布于整个玻璃珠床，柱的底部有少 量细胞。 1 + 反应：大部分凝集的红细胞停留在玻璃珠床的下半部分，柱的 底部有少量红细胞。 阴性反应：所有红细胞均穿过玻璃珠床，在柱的底部形成一个平整的红细胞聚集带。 五.注意事项 1. 试剂卡应保存在2～25℃，请勿冷冻保存；请勿将试剂卡放入自动除霜的冰柜中，也不要放在离热源很近或阳光直射的地方。如果试剂卡放在冰箱中，使用前应先恢复至室温。 2.卡中液体试剂的冻结或蒸发都有可能影响未凝集红细胞通过玻璃珠到达微柱底部；另外细菌污染也有可能引起假阳性结果。

不规则抗体筛查试验操作规程

XXX医院 不规则抗体筛查试验操作规程 1.目的为规范红细胞不规则抗体筛选、鉴定的技术操作，保证检查结果准确和临床输血安全、有效，依据《输血实验室管理程序》有关条款的要求制定本规程。 2.适用范围本规程适用于本院红细胞不规则抗体的筛查。 3.职责输血科具有专业技术资格的人员负责红细胞不规则抗体的筛选和鉴定，但只对所筛选或鉴定的标本负责。 4.相关文件 试剂采购、保存和使用管理程序 设备采购、使用管理程序 消毒与清洁管理程序 标本采集、运输、保存和报废管理程序 5.相关记录 仪器设备的采购、使用和维护记录 仪器的温度记录 恒温水温箱的换水和消毒记录 消毒液的配置记录 清洁消毒记录 试剂采购、使用记录 标本交接和报废记录 6.实验原理 采用盐水介质法、凝聚胺法或抗球蛋白法等试验使受检者血清（血浆）与筛选红细胞反应，检测受检者血清（血浆）中是否存在红细胞不规则抗体，红细胞不规则抗体阳性者进一步与谱红细胞反应，根据反应格局鉴定抗体特异性。 7.仪器设备和检测环境 7.1.仪器设备等：玻璃试管(75X12mm)、玻片、记号笔、一次性塑料滴管、显微镜、交叉配血专用离心机、试管架、恒温水温箱、试剂保存冰箱、标本保存冰箱。 7.2. 检测环境：室温应控制在18~27℃，湿度应保持在30~70%。 8.试剂 ①生理盐水、凝聚胺试剂、直接抗人球蛋白试剂（抗IgG,C3d），均为有合格证件的正品。 ②市售O型筛选红细胞：为三支以上不同人份的3%筛选红细胞，均为有合格证件的正品。 或自制O型筛选红细胞：选择已确认ABO血型为O型的健康者，采集EDTAK 抗凝血 2 标本离心，取少许红细胞置于试管中，用生理盐水离心洗涤3次得压积红细胞[3400转/

疑难血型鉴定及交叉配血处理流程

疑难血型鉴定及交叉配血处理流程 一、正反定型不一致 1、重复试验（严格正规操作）。 2、重新取血（以纠正污染或弄错标本造成的不符），溶血标本不能用于合血。 3、洗涤红细胞后进行以下试验（正反定型凝集低于2+的，应首先怀疑是由于亚型或抗原抗体活降低引起。） 1）、用自身血清、红细胞做定型对照，检验自身有无完全抗体。 2）、用O型红细胞做反定型对照，确认是否存在ABO系统以外完全抗体。 3）、用抗A、抗AB、抗A1和抗H进行正定型： ①A亚型细胞与抗A、抗AB的凝集强度低于A1细胞，但与抗H的凝集强度高于A1细胞（3+以上）； ②A亚型（特别是A2中约有1-8%会产生抗A1），与抗A1基本不发生凝集。 ③用抗AB（O型血清或血浆）是因为它的抗A效价较高，与弱A和弱B抗原亲和力强。 4）、分别用A1型和A2型红细胞反定型检查血清中有无抗A1存在（A亚型中有部份会产生抗A1，能与A1发生凝集，但不与A2凝集。） 5）、询问病史，判断是否是由于病人抗体缺失或减弱引起反定型错误，可延长反应时间，或用灵敏度更高的血型卡做反定型。 6）、被检红细胞做直抗（观察有无被抗体致敏的情况），若为阳性，应将细胞放散至阴性后再定血型。 4、若还不能确定血型，应增加血型物质的检测（如唾液等）。 二、交叉配血不合 （一）主侧端不相合 1、血型鉴定不正确,重新鉴定血型。 2、病人血清中存在同种抗体，与供血者红细胞上的相应抗原反应。 3、供血者红细胞上已经包被了抗体，导致抗球蛋白试验阳性。 4、病人血清不正常，如白蛋白/球蛋白比例不正常引起缗钱状凝集，血清中存在高分子聚合物的血浆扩容剂 引起假阳性。 5、试验系统被污染。 （二）次侧端不相合 1、供血者血浆中存在针对病人红细胞抗原的抗体。 2、病人与供血者的ABO血型不相合。 3、病人的红细胞已经包被了抗体，直接抗人球蛋白试验阳性。 4、抗筛阴性，而次侧不合多由自身抗体引起（此是抗人球配血不合，而聚凝胺配血通过可输血）。 （三）配血不合的主要因素 1、血型是否正确。 2、是否有自身抗体。 3、是否有同种异体抗体。

不规则抗体筛查试验

不规则抗体筛查试验（SOP） 【产品名称】 通用名称：不规则抗体检测试剂（人血红细胞） 英文名称：Red Blood Cells Reagent for Irregular Antibody Test 【包装规格】每盒有O Ⅰ、O Ⅱ 、O Ⅲ 红细胞各1瓶，5ml/瓶，浓度4%。 【生产企业】 企业名称：长春博迅生物技术有限责任公司 【预期用途】 有临床意义的不规则抗体会导致溶血性输血反应，破坏输入的红细胞或缩短其寿命，轻则影响治疗效果，重则危及病人生命；对于孕妇而言，不规则抗体会引起新生儿溶血病，影响新生儿脏器及智力发育，严重者则会危及新生儿的生命。对受血者和献血者进行不规则抗体检测，能够发现有临床意义的抗体，从而减少溶血性输血反应。本品采用凝聚胺方法检测待检血浆（血清）是否存在不规则抗体，只用于临床检测，不用于血源筛查。 【检验原理】 本实验原理为血凝试验。红细胞上含有D、C、E、c、e、Jk a、Jk b、M、N、s、Fy a、Fy b、k、Le a、Le b、P 1 ，该实验用已知抗原的红细胞与待检血浆（血清）孵育，以发现待检血浆（血清）中是否存在不规则抗体。 【主要组成成份】 本品由3人份（单人份/瓶）直接抗人球蛋白试验阴性的O型健康成人红细胞组成，红细胞上含有能引起溶血性输血反应的抗原，抗原谱至少包括Rh系统的D、C、E、c、e抗原，Kidd系统的Jk a、Jk b抗原，MNS系统的M、N、s抗原，Kell系统的k抗原，Duffy系统的Fy a、 Fy b抗原，Lewis系统的Le a、Le b抗原，P系统的P 1 抗原。每套试剂红细胞中至少有2人份红细胞含有D、C、c、e、s、Fy a、k抗原，至少1人份红细胞含有E、Jk a、Jk b、M、N、Fy b、Le a、 Le b、P 1 抗原。 O Ⅰ 红细胞5ml×1 O Ⅱ 红细胞5ml×1 O Ⅲ 红细胞5ml×1 不同批号的红细胞试剂不可以互换。 【储存条件及有效期】 2~8℃保存。有效期自检定合格之日起90天，试剂开瓶后在2~8℃下可保存60天。 【样本要求】 EDTA抗凝的血浆标本或血清。溶血、严重脂血或污染的样本不得用于本实验。 【参与试剂】 试剂名称：凝聚胺介质试剂 试剂生产公司：珠海贝索生物技术有限公司 【检验方法】

Rh-CDE血型系统检测及不规则抗体筛查分析

Rh-CDE血型系统检测及不规则抗体筛查分析 摘要】目的：检测成都北部地区18678例Rh-CDE血型及23592例不规则抗体， 探讨其在临床输血中的应用价值。方法：采用本院2016年2月至2016年7月住 院及门诊患者的静脉血液标本，对其进行Rh-CDE血型鉴定和抗体筛查。结果： Rh-CDE血型样本中检测出其CDE抗原有双群或弱阳性现象，成都北部地区人去抗筛阳性率为：0.47%。结论：对患者进行常规Rh-CDE同型配合相合输血及不规则 抗体筛查，有效预防迟发型输血溶血反应，提高输血治疗的安全性，有利于保障 患者生命安全。 【关键词】Rh-CDE血型鉴定；不规则抗体筛查；安全输血 【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231（2018）02-0048-02 Detection of Rh-CDE blood group system and analysis of irregular antibody screening He Zhewen, Ding Xianping (Corresponding author). Key Laboratory of biological resources and ecological environment, Ministry of education of Sichuan University, Ministry of education, Key Laboratory of biological resources research and utilization, Key Laboratory of Sichuan and Chongqing co construction, Sichuan, Chengdu 610065, China 【Abstract】Objective Detect 18678 cases of Rh-CDE blood type and 23592 irregular antibodies in northern Chengdu, and to explore its application value in clinical blood transfusion. Methods Rh-CDE blood group identification and antibody screening were carried out by venous blood samples of inpatients and outpatients in our hospital from February 2016 to July 2016. Results The CDE antigen in Rh-CDE blood group samples showed double or weak positive, and the positive rate of anti screening was 0.47% in northern Chengdu. Conclusion routine routine Rh-CDE matched blood transfusion and irregular antibody screening can effectively prevent delayed transfusion hemolytic reaction and improve the safety of blood transfusion treatment, which is beneficial to ensure the safety of patients. 【Key words】Rh-CDE blood type identification; Irregular antibody screening; Safe blood transfusion safety. 临床输血以安全、合理、有效为原则。在临床常规开展Rh-CDE交叉配血及 不规则抗体筛查有利于预防由反复多次输血或者有妊娠史的患者产生的免疫抗体 引起的迟发性溶血反应[1]。现将我科Rh-CDE血型鉴定和抗筛检测的临床应用评 价及经验总结如下。 1.资料与方法 1.1 一般资料 取自本院2016年2月至2016年7月住院及门诊患者的静脉血液标本，患者 来自于成都北部地区，采集方法：采用EDTA-k2抗凝管留取4毫升静脉全血标本。其中Rh-CDE血型鉴定18678例，抗体筛查23592例。 1.2 仪器与试剂 日本久保田KA-2200型离心机，WADianna GRIFOLS DG SPIN离心机，WADianna GRIFOLS DG THERM孵育器，西班牙Grifols Erytra全自动血型分析仪。 凝胶卡分为DG Gel ABO-CDE卡，DG Gel Coombs卡，标准A、B、O血细胞及标准 抗体筛查Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ号细胞均由上海血液提供（浓度为3%～5%），标准谱细胞

不规则抗体筛选和鉴定标准操作规程

不规则抗体筛选和鉴定标准操作规程 1.检验目的 不规则抗体筛选和鉴定可在交叉配合之前进行或一起进行，这样有利于患者抗体的早期确认及鉴定，发现临床上有意义的抗体，避免一些可能的情况而造成病情的延误。 2.检验方法 分盐水介质法、抗球蛋白法和微柱凝胶法。 3.检验原理 让待检者的血清与已知血型的试剂红细胞即筛选红细胞（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ套）起反应，以发现在37℃中有反应活性的抗体。这种抗体可引起新生儿溶血病、溶血性输血反应、或使输入的红细胞存活期缩短等。当不规则抗体筛选试验阳性后，再进行不规则抗体鉴定，即利用谱红细胞（11套鉴定细胞）与待检者的血清反应，根据反应结果判断机体所产生的同种抗体类别。 4.标本要求 受检者不抗凝静脉血4.0ml，分离血清，48小时内使用 5.试剂 5.1.筛选红细胞：由2或3人份的O型红细胞组成为一套试剂，每套试剂筛选 红细胞中至少有以下常见的抗原：D、C、E、c、e、M、N、S、s、P、Le a、Le b、K、k、Fy a、Fy b、Jk a、Jk b等。每次用3套试剂（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）进行抗体筛选，见表1005-1。 5.2.鉴定谱细胞：除包括常见的抗原以外还有：C w、Kp a、Kp b、Js a、Js b、Lu a、 Lu b、Xr/min a等。每次用11套试剂进行抗体鉴定，见表1005-2。 5.3.抗球蛋白试剂：多特异性抗球蛋白血清（IgG、C3d）。 5.4.致敏红细胞（质控细胞）。 5.5.0.9%生理盐水。 5.6.Coombs微柱凝胶卡。 6.器材 试管、吸管、37℃水浴箱、台式离心机、滤纸、微量加样器等。 7.操作程序

7.1.盐水介质法 7.1.1．取受检者血清2滴于标记有Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的3支小试管中。 7.1.2．对应加入Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ套2%～5%筛选红细胞生理盐水悬液1滴，37℃孵育30分钟。 7.1.3.以3000r/min离心10秒，观察凝集和溶血情况，并记录反应情况于 表1005-1中。如果抗体筛选试验阳性，继续做以下试验。 表1005-1 红细胞血型筛选细胞反应格局表 注：＋为阳性；0为阴性 7.1.4再取受检者血清2滴于标记有1～11的11支小试管中。 7.1.5.在11支小试管中分别加入11套2%～5%鉴定谱细胞生理盐水悬液1滴， 37℃孵育30分钟。 7.1.6.以3000r/min离心10秒，观察凝集和溶血情况，并将反应情况记录于表1005-2中表1005-2 红细胞血型谱细胞反应格局表

疑难血型鉴定和疑难交叉配血

疑难血型鉴定与疑难交叉配血 1、疑难血型鉴定 疑难血型就是一种血型难以检定或判定（正反定型不一致）得现象,多由血型抗原减弱形成亚型、疾病原因引起抗体减弱或部分血型系统罕见表型等原因引起。因此,疑难血型鉴定主要从弱抗原、弱抗体与特殊抗原或抗体检测角度出发，结合血型血清学与分子生物学研究方法对患者样本进行检测。而对于不规则抗体筛查与鉴定，主要就是对抗体种类与特性进行研究，尤其就是利用吸收/放散试验对同时存在多种同种抗体或自身抗体进行分离鉴定，从而较为准确得分析患者血清抗体得特异性。在工作中遇到此类情况时，应按照以下步骤进行分析与处理：(１)分析可能存在得原因先排除人为操作因素,再通过了解患者临床资料分析可能得原因，主要包括抗原类影响因素与抗体类影响因素，抗原类影响因素一般包括ABO亚型、血液病、骨髓移植等,抗体类影响因素一般包括不规则抗体、药物抗体、先天抗体缺失、丙种球蛋白过低、冷凝集素等。 （2）设计实验进行验证疑难血型鉴定流程见流程图1。 流程图1 疑难血型鉴定流程

2014年１月，在工作中发现正反定型结果不符样本一例,经一系列血清学试验确证该患者为P１Pｋ血型系统得ｐ表型，经分子生物学基因测序,初步推断Ａ4GALT 基因第3外显子得９０3Ｃ＞G突变就是患者p表型形成得分子生物学基础,该研究成果从不同角度与深度撰写论文,先后发表《临床军医杂志》与《中国输血杂志》论文各一篇，并由此逐步展开疑难血型鉴定。在此之后得工作中，通过阅读文献自修学习,鉴定出Am、Bm、B３等血型亚型，形成了一套相对完整得疑难血型鉴定思路与流程。 ２014年2月与2015年10月，在工作中分别遇到一例反复进行输血治疗得患者,经一系列血清学试验，确证此两例患者均因多次输血治疗而产生多种不规则抗体，该研究成果先后以论文形式发表于《临床军医杂志》。在后期工作中，通过对解放军174医院住院患者不规则抗体筛查与鉴定结果进行分析，对厦门地区住院患者不规则抗体得分布特征有了较为清晰得了解，该研究成果以论文形式发表于《国际医药卫生导报》,并形成了一套相对完整得不规则抗体筛查与鉴定流程。 2、疑难交叉配血 交叉配血就是确保安全有效输血得最重要环节,只有交叉配血真正相合（相容)才能保障临床输血治疗得安全性。现一般进行供者与受者AＢO、ＲｈD同型配血，只有配血相合时才能输血（特殊情况例外），当出现配血不相合时，则视为“疑难配血"。目前,输血科常用得交叉配血得方法主要包括聚凝胺法、卡式法与抗球蛋白法。当遇到异常得配血实验结果时,应以抗人球蛋白法为准，但任何一种实验方法都存在假阳性或假阴性得可能。因此,需在不同得情况采取不同得检测技术，建立适合本实验室得血液免疫学检测流程。在工作中遇到疑难配血时,可按照以下步骤进行分析与处理： （1）分析可能存在得原因先排除人为操作因素，再通过了解患者临床资料分析可能得原因，交叉配血不合包括主侧配血不合与次侧配血不合，其产生原因主要如下：①主侧配血不合:患者血清中存在同种抗体、自身抗体、冷凝集素、药物抗体、血浆蛋白紊乱等因素;供着红细胞直抗阳性（相对少见).②次侧配血不合：患者红细胞黏附免疫球蛋白或抗体,直抗阳性，全凝集或多凝集；供着血清中存在同种抗体、自身抗体、冷凝集素、药物抗体、血浆蛋白紊乱等因素（相对少见）。 (2）设计实验进行配血疑难配血流程见流程图2.