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2020届 一轮复习 苏教版DNA的粗提取与鉴定学案.doc

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2020届 一轮复习 苏教版DNA 的粗提取与鉴定学案

| 实验:DNA 的粗提取与鉴定

[思维导图·成一统

]

[基础速练·固根基]

1.判断下列叙述的正误

(1)用不同浓度的NaCl 溶液反复溶解与析出DNA 可去除蛋白质(√)

(2)提取DNA 时,如果没有鸡血材料,可用猪血代替(×)

(3)在DNA 的粗提取与鉴定实验中,用菜花替代鸡血作为实验材料,其实验操作步骤相同(×)

(4)洗涤剂能瓦解细胞膜并增加DNA 在NaCl 溶液中的溶解度(×)

(5)将制备的含有DNA 的滤液加入60~75 ℃的恒温水浴箱中保温10~15 min ,可以将DNA 析出(×)

(6)实验中两次使用蒸馏水的目的不同(√)

(7)在DNA 的粗提取与鉴定实验中,将丝状物溶解在2 mol/L NaCl 溶液中,加入二苯胺试剂即呈蓝色(×)

2.填空识记实验原理

(1)粗提取原理:DNA 在不同浓度NaCl 溶液中溶解度不同,且不溶于冷酒精。 ①DNA 与蛋白质在不同浓度的NaCl 溶液中溶解度不同。

②DNA 与杂质对酶、高温和洗涤剂的耐受性不同。

③DNA 不溶于酒精溶液,但是细胞中的某些蛋白质则溶于酒精,利用这一原理可将DNA 与蛋白质进一步分离。

(2)鉴定原理: DNA +二苯胺试剂――→沸水浴

蓝色。 3.填空掌握操作流程

4.据图回答①~④操作的目的分别是什么

①_____________________________________________________________________,

②_________________________________________________________________, ③___________________________________________________________________

_____,

④___________________________________________________________________ _____。

提示:①是使鸡血细胞吸水涨破释放出核物质;②是析出DNA,去除溶于酒精的杂质;③是使DNA溶解在2 mol/L NaCl溶液中;④是稀释NaCl溶液使其浓度接近0.14 mol/L,去除溶于低浓度NaCl溶液的杂质。

[题组练透·过考点]

1.(2014·江苏高考)下列关于“DNA的粗提取与鉴定”实验叙述,错误的是( )

A.酵母和菜花均可作为提取DNA的材料

B.DNA既溶于2 mol/L NaCl溶液也溶于蒸馏水

C.向鸡血细胞液中加蒸馏水搅拌,可见玻棒上有白色絮状物

D.DNA溶液加入二苯胺试剂沸水浴加热,冷却后变蓝

解析:选C 原则上含DNA的生物材料都可用来提取DNA,只是选用DNA含量高的生物组织,成功的可能性更大;DNA在2 mol/L NaCl溶液和蒸馏水中溶解度都较大;向鸡血细胞液中加蒸馏水搅拌,鸡血细胞会吸水破裂,但在蒸馏水中不会析出DNA;DNA溶液加入二苯胺试剂后需沸水浴加热,待冷却后溶液变蓝。

2.(2015·江苏高考,多选)下图1、2分别为“DNA的粗提取与鉴定”实验中部分操作步骤示意图,下列叙述正确的是( )

A.图1、2中加入蒸馏水稀释的目的相同

B.图1中完成过滤之后保留滤液

C.图2中完成过滤之后弃去滤液

D.在图1鸡血细胞液中加入少许嫩肉粉有助于去除杂质

解析:选BCD 图1中加入蒸馏水的目的是使鸡血细胞吸水涨破,图2中加入蒸馏水的目的是调节盐溶液的浓度,使DNA析出。图1中含有DNA的核物质位于滤液中,因此完成过滤后应保留滤液。图2中析出的DNA在纱布上,因此完成

过滤后应弃去滤液。嫩肉粉中含有木瓜蛋白酶,能催化杂质蛋白的分解。

[归纳拓展]

1.DNA粗提取实验中的三个注意点

(1)本实验不能用哺乳动物成熟红细胞作实验材料,原因是哺乳动物成熟红细胞无细胞核。

(2)因DNA容易被玻璃容器吸附,实验过程中最好使用塑料的烧杯和试管,减少提取过程中DNA的损失。

(3)每次用玻璃棒搅拌时都要沿同一方向,防止打碎DNA分子。

2.DNA的粗提取与鉴定实验中的“2、3、4”

(1)加蒸馏水2次:

①加到鸡血细胞液中,使血细胞吸水涨破;

②加到含DNA的2 mol/L的NaCl溶液中,使NaCl溶液的浓度下降到0.14 mol/L,使DNA析出。

(2)用纱布过滤3次:

①过滤血细胞破裂液,得到含细胞核物质的滤液;

②滤取0.14 mol/L的NaCl溶液中析出的DNA(黏稠物);

③过滤溶有DNA的2 mol/L的NaCl溶液。

(3)用NaCl溶液4次:

①加2 mol/L的NaCl溶液,溶解提取的细胞核物质;

②用0.14 mol/L的NaCl溶液使DNA析出;

③用2 mol/L的NaCl溶液,溶解滤取的DNA黏稠物;

④用2 mol/L的NaCl溶液,溶解丝状物用于鉴定DNA。

[课堂巩固练—小试身手]

1.(2013·江苏高考)某同学用洋葱进行DNA粗提取和鉴定实验,操作错误的是 ( )

A.加入洗涤剂后用力进行快速、充分的研磨

B.用蛋白酶纯化过滤后的研磨液中的DNA

C.加入酒精后用玻璃棒轻缓搅拌

D.加二苯胺试剂摇匀后沸水浴加热

解析:选A 加入洗涤剂后研磨动作要轻缓、柔和,否则会产生许多泡沫,不利于后续步骤的操作;蛋白酶能够分解蛋白质,因此能起到纯化DNA的目的;加入酒精和用玻璃棒搅拌时,动作要轻缓,以免引起DNA分子的断裂,导致DNA 分子不能形成絮状沉淀;DNA可与二苯胺试剂在沸水浴条件下作用显蓝色。

2.下列关于“DNA粗提取和鉴定”实验的叙述,正确的是( )

A.酵母菌、菜花和猪的成熟红细胞都可作为提取DNA的材料

B.在酒精溶液中,某些蛋白质的溶解度比DNA大

C.在研磨植物细胞时加入洗涤剂是为了溶解DNA

D.在50~60 ℃的水浴中,DNA遇二苯胺试剂后即呈蓝色

解析:选B 猪的成熟红细胞没有细胞核和众多细胞器,不含DNA,不能作为提取DNA的材料;某些蛋白质溶于酒精溶液,而DNA不溶;研磨植物细胞时加入洗涤剂是为了瓦解细胞膜;沸水浴中,DNA遇二苯胺试剂呈蓝色。

3.下面为“DNA的粗提取与鉴定”实验的一些重要操作示意图,据图回答下列有关该实验的问题:

(1)正确的操作顺序是______________________________。

(2)上图C、E步骤都加入蒸馏水,但其目的不同,分别是____________和_________。

(3)上图A步骤中所用酒精必须经过____________才能使用,该步骤的目的是______________________________。

(4)为鉴定A中所得到的丝状物的主要成分为DNA,可滴加____________试剂,沸水浴,如果出现________,则该丝状物的主要成分为DNA。

解析:两次加入蒸馏水的作用:第一次是使鸡血细胞吸水涨破,DNA从细胞中释放出来进入滤液;第二次是使溶解于物质的量浓度为2 mol/L的NaCl溶液

中的DNA析出,与杂质分离。本题还涉及DNA的鉴定,DNA可在沸水浴条件下与二苯胺试剂作用,被染成蓝色。

答案:(1)C→B→E→D→A (2)加速血细胞的破裂降低NaCl溶液的浓度,使DNA析出(3)充分冷却提取含杂质少的DNA (4)二苯胺蓝色

[课下模拟练—自我检测]

一、选择题

1.鉴定DNA的试剂是( )

A.斐林试剂B.苏丹Ⅲ染液

C.双缩脲试剂D.二苯胺试剂

解析:选D 鉴定DNA用的试剂是二苯胺,苏丹Ⅲ染液用于鉴定脂肪,斐林试剂用于鉴定可溶性还原糖,双缩脲试剂用于鉴定蛋白质。

2.在提取DNA的过程中,最好使用塑料试管和烧杯,目的是( )

A.不易破碎B.减少提取过程中DNA的损失

C.增加DNA的含量D.容易刷洗

解析:选B DNA易被玻璃器皿吸附,使用塑料试管和烧杯,可以减少DNA 的损失。

3.(2018·江苏高考)关于还原糖、蛋白质和DNA的鉴定实验,下列叙述正确的是( )

A.在甘蔗茎的组织样液中加入双缩脲试剂,温水浴后液体由蓝色变成砖红色

B.在大豆种子匀浆液中加入斐林试剂,液体由蓝色变成紫色

C.提取DNA时,在切碎的洋葱中加入适量洗涤剂和食盐,充分研磨,过滤并弃去滤液

D.将DNA粗提物溶解在2 mol/L NaCl溶液中,加入二苯胺试剂,沸水浴后液体由无色变成蓝色

解析:选D 甘蔗茎的组织样液中含有大量的蔗糖,蔗糖属于非还原性糖,与斐林试剂在50~65 ℃的水浴加热条件下不会产生砖红色沉淀;大豆种子的匀浆液中含有大量的蛋白质,鉴定蛋白质时应使用双缩脲试剂,双缩脲试剂在常温下能与蛋白质发生反应,生成紫色的络合物;提取DNA时,植物细胞需要先用洗涤剂瓦解细胞膜,在切碎的洋葱中加入适量的洗涤剂和食盐,进行充分的研磨,

过滤后收集滤液;在沸水浴条件下,DNA与二苯胺试剂反应呈现蓝色。

4.下列有关DNA的粗提取与鉴定实验的叙述,正确的是( )

A.取材:鸡血细胞。原因:有细胞核,其他动物的血细胞都没有细胞核

B.粗提取:不同浓度的NaCl溶液。原因:DNA在其中的溶解度不同

C.提纯:95%的冷酒精。原因:DNA溶于酒精,蛋白质等杂质不溶于酒精D.鉴定:二苯胺试剂。原因:DNA溶液加入二苯胺试剂即呈蓝色

解析:选B 除了哺乳动物成熟的红细胞,其他动物的血细胞都有细胞核。DNA在不同浓度的NaCl溶液中的溶解度不同,从而粗提取DNA。DNA不溶于酒精,蛋白质等杂质溶于酒精,进而提纯DNA。DNA溶液加入二苯胺试剂后需沸水浴加热才会呈蓝色。

5.在DNA粗提取与鉴定实验中,将获得的含有DNA的黏稠物分别按下表处理3次,则DNA主要集中在标号( )

A.

C.①④⑥D.②④⑥

解析:选B DNA在2 mol·L-1的NaCl溶液中溶解度大,过滤后DNA存在于滤液中;DNA在0.14 mol·L-1的NaCl溶液中溶解度低,搅拌过滤后存在于黏稠物中;DNA不溶于95%的冷酒精,搅拌过滤后存在于黏稠物中。

6.如图是“DNA粗提取与鉴定”实验中的两个操作步骤示意图,下列相关叙述正确的是( )

A.图1中溶液a是0.14 mol·L-1的NaCl溶液

B.图1所示操作的原理是DNA能溶于酒精,而蛋白质等杂质不溶

C.图2所示实验操作中有一处明显错误,可能导致试管2中蓝色变化不明显

D.图2试管1的作用是证明2 mol·L-1 NaCl溶液遇二苯胺出现蓝色

解析:选C 图1中是将丝状物溶解,溶液a是2 mol·L-1的NaCl溶液;加入冷却的酒精的目的是除杂,原理是DNA不溶于冷酒精,而杂质蛋白能溶于酒精;图2操作中的错误是试管2中未将DNA溶于2 mol·L-1的NaCl溶液中,可能导致试管2蓝色变化不明显;图2试管1的作用是证明2 mol·L-1NaCl溶液遇二苯胺不会出现蓝色。

7.(2019·南通二模)下列是“肝脏细胞DNA粗提取”实验的两个关键操作步骤,相关叙述错误的是( )

A.步骤1中,加入柠檬酸钠缓冲液的目的是维持pH的稳定

B.步骤1中,冰浴处理的主要原理是低温下DNA水解酶容易变性

C.步骤2中,异戊醇的作用可能是使与DNA结合的蛋白质因变性而沉淀D.步骤2中,离心后应取上清液,因为DNA在2mol·L-1NaCl溶液中溶解度比较大

解析:选B 步骤1中,加入柠檬酸钠缓冲液的目的是维持pH的稳定;步骤1中,冰浴处理的主要原理是降低DNA的溶解度,使DNA析出;步骤2中,异戊醇的作用可能是使与DNA结合的蛋白质因变性而沉淀;DNA在2 mol·L-1的NaCl溶液中溶解度最大,因此加固体NaCl使溶液浓度达到2 mol·L-1后再离心过滤取上清液。

8.(2019·淮阴、海门四校联考)关于DNA的实验,叙述正确的是( ) A.DNA溶液与二苯胺试剂混合,沸水浴后生成蓝色产物

B.PCR的每个循环一般依次经过变性→延伸→复性三步

C.用兔的成熟红细胞可提取DNA

D.用甲基绿吡罗红将细胞染色,细胞质呈绿色,细胞核呈红色

解析:选A DNA溶液与二苯胺试剂混合,沸水浴后生成蓝色产物;PCR的每个循环一般依次经过变性→复性→延伸三步;兔的成熟红细胞中没有DNA;用

甲基绿吡罗红试剂对人的口腔上皮细胞染色,细胞核呈绿色,细胞质呈红色。

9.如图为“DNA的粗提取与鉴定”实验中部分操作步骤示意图,下列有关叙述正确的是( )

A.DNA在常温下遇到二苯胺会被染成蓝色

B.图中加入蒸馏水的目的是稀释盐溶液使DNA析出

C.DNA在2 mol/L的盐溶液中溶解度比较小

D.加入酒精后需用玻璃棒快速来回搅拌

解析:选B DNA溶液加入二苯胺试剂,在沸水浴加热的条件下会变蓝;在DNA浓盐溶液中加入蒸馏水的目的是稀释盐溶液,降低DNA的溶解度,使DNA析出;DNA在2 mol/L的盐溶液中溶解度比较大;加入酒精后需用玻璃棒搅拌,动作要轻缓,以免加剧DNA分子断裂,导致DNA分子不能形成絮状沉淀。

10.若从植物细胞中提取DNA,发现实验效果不好,如看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定时不显示颜色反应等,其不可能的原因是( )

A.植物细胞中DNA含量低B.研磨不充分

C.过滤不充分D.95%冷酒精的量过少

解析:选A 研磨不充分、过滤不充分均会使细胞核内的DNA释放不完全,提取的DNA量变少;若用于沉淀DNA的酒精量过少,也会导致DNA的沉淀量变少。

11.“DNA粗提取”实验中,应尽可能避免DNA断裂和降解。下列相关操作正确的是( )

A.以菜花为材料进行研磨时,可以适当加热以促进DNA溶解

B.向DNA溶液中迅速加入蒸馏水,使DNA快速析出

C.将丝状物溶解到2 mol·L-1NaCl溶液中后,加水析出

D.向DNA溶液中加入冷却的酒精并沿同一方向缓慢搅拌

解析:选D 以菜花为材料进行研磨时要加洗涤剂和食盐,不能加热,否则DNA水解酶活性会上升,会加速分解DNA;向DNA溶液中加蒸馏水要缓慢,使DNA 充分析出;将丝状物溶解到2 mol·L-1 NaCl溶液中的目的是为了进行鉴定,应

该加入二苯胺试剂,不是加水;向DNA溶液中加入冷酒精并沿同一方向缓慢搅拌析出DNA,防止DNA断裂。

12.(2019·盐城模拟)下列有关利用新鲜的菜花进行DNA粗提取与鉴定实验的叙述,正确的是( )

A.向菜花组织中加入蒸馏水并搅拌可释放核DNA

B.加入洗涤剂和食盐的作用分别是瓦解细胞膜和溶解DNA

C.利用DNA不溶于冷酒精的原理可进一步提纯DNA

D.含DNA的氯化钠溶液与二苯胺在常温下混合呈蓝色

解析:选BC 菜花细胞为植物细胞,有细胞壁保护,因此加蒸馏水不会吸水涨破。加入洗涤剂的作用是瓦解细胞膜,加入食盐的作用是溶解DNA。DNA在冷酒精中的溶解度很低,蛋白质在冷酒精中的溶解度较高,因此可以利用DNA 不溶于冷酒精的原理进一步提纯DNA。含DNA的氯化钠溶液与二苯胺在沸水浴下混合呈蓝色。

13.(多选)如图为“DNA的粗提取与鉴定”实验中的一些操作过程。相关叙述正确的是( )

A.实验过程中正确的操作顺序是③→②→⑤→④→①

B.实验⑤步骤中加入蒸馏水直到溶液中有丝状物析出为止

C.若改用植物材料需先用洗涤剂破坏细胞壁再吸水涨破

D.将粗提取的DNA溶解在2 mol/L的NaCl中加入二苯胺试剂加热鉴定

解析:选AD 分析题图,①表示用95%的酒精对DNA进行进一步纯化;③②表示破碎细胞,获取含DNA的滤液;④⑤表示去除滤液中的杂质,所以实验过程中正确的操作顺序是③→②→⑤→④→①;实验⑤步骤中加入蒸馏水直到析出的丝状物不再增加为止;若改用植物材料需研磨破坏细胞壁,同时加入洗涤剂瓦解

细胞膜;可以将粗提取的DNA溶解在2 mol/L的NaCl溶液中,然后加入二苯胺试剂进行加热鉴定。

14.(多选)研究人员比较了不同贮藏条件对棉叶DNA纯度及提取率(提取率越高,获得的DNA越多)的影响,实验结果见下图。下列有关叙述正确是( )

A.提纯DNA时可加入酒精去除不溶的蛋白质、酚类等物质

B.新鲜棉叶提取的DNA纯度最高,提取DNA的量也最多

C.木瓜蛋白酶和不同浓度的NaCl溶液均可用于提纯DNA

D.用二苯胺试剂鉴定,颜色最深的是冷冻3 d处理后提取的DNA

解析:选CD 提纯DNA时可加入酒精去除可溶的蛋白质、酚类等物质;新鲜棉叶提取的DNA纯度最高,冷冻3 d时提取DNA的量最多,二苯胺试剂鉴定颜色最深;木瓜蛋白酶可以去除蛋白质,不同浓度的NaCl溶液可去除与DNA溶解度不同的杂质。

二、非选择题

15.(2019·无锡检测)血液作为一种常见的临床检测材料,如何从血液中快速、高效地分离和提取基因组DNA,对于临床血液检验与分析非常重要,科研人员对比分析了超声波处理法(方法A)、高盐法(方法B)、改良高盐法(方法C)等三种快速提取大鼠全血基因组DNA的方法,实验过程如图,请分析回答:

(1)多组实验数据发现,用大鼠全血为实验材料提取的DNA含量总是很少,原因是

_____________________________________________________________________ ___。

(2)常规细胞破碎方法是_______________________________________________。

三种实验方法所需时间均较短,主要在样品处理和细胞破碎环节进行了优化,就三种方法而言,细胞破碎较理想的为______________。

(3)方法B得到的溶液中RNA含量高于DNA,分析原因是蛋白酶K的加入可能抑制了________的活性。

(4)步骤②中加入NaCl的目的是__________________________________________,

步骤③中加入异丙醇的作用是__________。

(5)得到含DNA的溶液后进行鉴定,需向其中加入____________,沸水浴加热,________后变蓝。

解析:(1)因哺乳动物成熟的红细胞中无细胞核和线粒体,也就没有DNA,因此用大鼠全血为实验材料提取的DNA含量总是很少。(2)常规细胞破碎方法是加入蒸馏水,使细胞吸水涨破。与方法A、B相比,方法C破碎细胞的效率高、成本低,是细胞破碎较理想的方法。(3)方法B得到的溶液中RNA含量高于DNA,其原因可能是蛋白酶K的加入抑制了RNA酶的活性。(4)步骤②中加入NaCl的目的是溶解DNA,步骤③中加入异丙醇的作用是使DNA析出。(5)得到含DNA的溶液后进行鉴定,需向其中加入二苯胺,沸水浴加热,冷却后变蓝。

答案:(1)哺乳动物红细胞中无细胞核和线粒体(2)加入蒸馏水,使细胞吸水涨破方法C (3)RNA酶(4)溶解DNA 使DNA析出(5)二苯胺冷却16.(2019·南通考前卷)CTAB法和SDS法是提取DNA的常用方法,CTAB提取液含有CTAB、EDTA等成分,SDS提取液含SDS、EDTA等成分。CTAB能破坏膜结构,使蛋白质变性,提高DNA在提取液中的溶解度;SDS能破坏膜结构,使蛋白质变性;EDTA能螯合Mg2+、Mn2+,抑制DNA酶的活性。某科研小组为了寻找提取腊梅DNA的优良方法,比较了两种提取DNA的方法,主要操作如下:

实验测定结果如下(表中OD260反映溶液中核酸的浓度,OD280反映溶液中蛋白质的浓度。理论上,纯DNA溶液的OD260/OD280为1.800,纯RNA溶液的OD260/OD280为2.000)。

(1)与常温下研磨相比,液氮中研磨的优点是________________________________;CTAB法和SDS法提取液中都加入EDTA的目的是______________________________。

(2)氯仿-异戊醇密度均大于水且不溶于水,DNA不溶于氯仿-异戊醇,蛋白质等杂质可溶于氯仿-异戊醇,实验过程中加入氯仿-异戊醇离心后,应取①________加异丙醇(异丙醇与水互溶)并离心进行纯化,利用异丙醇溶液纯化DNA的原理是_____________。

(3)两种方法中,________法提取的DNA较多,其可能原因是_____________________。

(4)两种方法中,________法提取的DNA纯度较低,其含有的主要杂质是________。

解析:(1)液氮温度低,在液氮中研磨,DNA酶活性低,可以降低DNA的分解,使研磨更充分;EDTA能螯合Mg2+、Mn2+,抑制DNA酶的活性,减少DNA水解,提高DNA的完整性和总量。(2)氯仿—异戊醇密度均大于水且不溶于水,DNA不溶于氯仿—异戊醇,离心后,氯仿—异戊醇位于试管的底部,DNA溶于上清液中,所以离心后应取上清液;含DNA的上清液中加异丙醇离心后取的是沉淀物,说明

DNA不溶于异丙醇,而杂质能溶于异丙醇。(3)从表中数据可知,CTAB法提取的DNA的OD260是0.033,而SDS法提取的DNA的OD260是0.006,0.033>0.006,所以CTAB法提取的DNA较多,根据CTAB和SDS两种试剂作用的区别,可知CTAB 提高了DNA在提取液中的溶解度,从而可提取出更多的DNA。(4)从表中数据可知,CTAB法提取的DNA的OD260/OD280是 1.833,而SDS法提取的DNA的OD260/OD280是1.200,与1.833相比,1.200偏离1.800更多,所以SDS法提取的DNA纯度较低,纯RNA溶液的OD260/OD280为2.000,比纯DNA溶液的OD260/OD280大,而1.200比1.800小,所以主要杂质不是RNA,而是蛋白质。

答案:(1)研磨充分,低温抑制酶活性,降低DNA的分解减少DNA水解,提高DNA的完整性和总量(2)上清液DNA不溶于异丙醇,而杂质能溶于异丙醇(3)CTAB CTAB提高了DNA在提取液中的溶解度,从而能提取出更多的DNA (4)SDS 蛋白质

《DNA的粗提取与鉴定》实验教学设计(可编辑修改word版)

《DNA 的粗提取与鉴定》实验教学设计

1)、DNA 在NaCl 溶液中的溶解度,是随着NaCl 的浓度的变化而改变的。当NaCl 的物质的量浓度为0.14 mol/L 时,DNA 的溶解度最低。利用这一原理,可以使溶解在NaCl 溶液中的DNA 析出。 2)、DNA 不溶于酒精溶液,但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精溶液。利用这一原理,可以进一步提取出含杂质较少的DNA。 鉴定DNA 的原理: DNA 遇二苯胺(沸水浴)会染成蓝色,因此,二苯胺可以作为鉴定DNA 的试剂。 2、实验过程:师生共同学习 以鸡血为实验材料进行DNA 的粗提取 鸡血细胞做实验材料的原因 ①鸡血细胞核的DNA 含量丰富,材料易得 ②鸡血细胞极易吸水胀破,而用动物肝脏细胞作实验材料常常需要匀浆和离心,对设备要求较高,操作繁琐,历时较长 ①柠檬酸钠作用及作用机理 防止血液凝固。 柠檬酸钠能与血浆中的Ca2+发生反应,生成柠檬酸钙络合物,血浆中游离的Ca2+大大减少,血液就不会凝固 ②注意事项 鸡血细胞破碎以后释放出的DNA,容易被玻璃容器吸附,所以在提取过程中为了减少DNA 的损失,最好使用塑料的烧杯和试管盛放鸡血细胞液 讨论:提取鸡血中的DNA 时,为什么除去血液中的上清液? 答:血液分为两部分,一部分是血浆,一部分是血细胞,离心后除去的上清液是血浆 3、过程(结合导学案边做边学) ①提取鸡血细胞的细胞核物质 ②溶解细胞核内的DNA 【合作释疑一】 (1)为什么要加入蒸馏水?加入蒸馏水后细胞会有什么变化? 答:让细胞内浓度大于周围溶液的浓度,细胞会吸水以至胀破 (2)用玻璃棒搅拌有什么意义? 答:用玻璃棒搅拌可以加速血细胞和细胞核的破裂。注意应沿一个方向快速搅拌,但也不能太快太猛,防止打碎DNA (3)滤去的是什么物质?得到的是什么? 答:过滤将滤去的是细胞膜和核膜等物质;得到的是与蛋白质等物质结合在一起的DNA

DNA的粗提取与鉴定练习题

DNA的粗提取与鉴定 一、选择题共15小题。 1.有时候,由于实验材料用品所限而需要设法替代。下列各项中正确的是() A. 做植物细胞有丝分裂实验时,可用蒜叶代替洋葱 B. 做植物细胞质壁分离和复原实验时,可用30%的食盐溶液代替30%的蔗糖溶液 C. 做叶绿体色素提取和分离实验时,可用乙醇代替丙酮 D. 做DNA粗提取与鉴定实验时,可用新鲜猪血代替鸡血 2.在DNA的粗提取实验过程中,两次向烧杯中加入蒸馏水的作用是 A.稀释血液,冲洗样品B.使血细胞破裂、降低NaCl浓度使DNA析出C.使血细胞破裂、增大DNA溶解量D.使血细胞破裂、提取含杂质较少的DNA 3、下列操作中,对DNA 的提取量影响较小的是 A .使鸡血细胞在蒸馏水中充分破裂,放出DNA 等核物质 B .搅拌时,要用玻璃棒沿一个方向轻缓搅动 C .在析出DNA 黏稠物时,要缓缓加蒸馏水,直至溶液中黏稠物不再增加 D .在用酒精沉淀DNA 时,要使用冷酒精,甚至再将混合液放入冰箱中冷却 4.在实验中,有两次DNA的沉淀析出,其依据的原理是 ①DNA在NaCl的物质的量浓度为0.14 mol/L时溶解度最低②DNA在冷却的体积分数为95%的酒精中能沉淀析出 A.两次都是①B.两次都是② C.第一次是①,第二次是②D.第一次是②,第二次是① 5.向溶解DNA的NaCl溶液中,不断加入蒸馏水的目的是 A.加快溶解DNA的速度B.加快溶解杂质的速度 C.减少DNA的溶解度,加快DNA析出D.减少杂质的溶解度,加快杂质的析出6.对三次过滤的叙述中,不正确的是 A.第一次过滤后,核物质存在于滤出的固体物中 B.第二次过滤后,使用多层纱布,DNA存在于纱布上的黏稠物中 C.第三次过滤后,DNA存在于滤液中,可进一步除去非DNA物质 D.上述B、C均正确 9.在此实验中,具有和蛋白水解酶相似作用的物质是 A.蒸馏水B.NaCl溶液C.NaOH溶液D.盐酸10、在DNA提取实验中有三次过滤: (1)过滤用蒸馏水稀释过的鸡血细胞液(2)过滤含粘稠物的0.14mol/LNaCl溶液(3)过滤溶解有DNA的2mol/LNaCl溶液以上三次过滤分别为了获得 A、含核物质的滤液、纱布上的粘稠物、含DNA的滤液 B、含核物质的滤液、滤液中DNA粘稠物、含DNA的滤液 C、含核物质的滤液、滤液中DNA粘稠物、纱布上的DNA D、含较纯的DNA滤液、纱布上的粘稠物、含DNA的滤液 11 .在“DNA 的粗提取实验”中,有两次DNA 的沉淀析出,其依据的原理是 ①DNA 在物质的量浓度为0 . 14mol / L 的氯化钠中的溶解度最低 ②DNA 在冷却的体积分数为95 %的酒精中能沉淀析出 A .两次都是① B .第一次是①,第二次是② C.两次都是② D .第一次是②,第二次是① 12. DNA 的粗提取和鉴定实验,与下列哪项原理无关 A . DNA 在0.14mol / L NaCl 溶液中的溶解度最低 B . DNA 易被龙胆紫染成紫色 C .在DNA 溶液中加入二苯胺,加热后产生蓝色 D .加入95 %的冷酒精,DNA 会从溶液中析出

实验——DNA的粗提取与鉴定

实验DNA的粗提取与鉴定 目的要求 1.了解实验原理。 2.学会DNA的粗提取和鉴定的方法,观察提取出来的DNA物质。 3.通过本实验培养实验操作能力和观察能力。 实验原理 1. DNA在NaCl溶液中的溶解度,是随着NaCl的浓度的变化而改变的。当NaCl的物质的量浓度为0.14mOl/L时,DNA的溶解度最低。利用这一原理,可以使溶解在NaCl溶液中的DNA析出。 2.DNA不溶于酒精溶液,但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精溶液。利用这一原理,可以进一步提取出含杂质较少的DNA。 3.DNA遇二苯胺(沸水浴)会染成蓝色,因此,二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。 注意事项 1.步骤3析出含DNA的黏稠物中,蒸馏水要沿烧杯内壁缓缓加入,不能一次快速倒入。 2.实验中有多个步骤都要用玻璃棒进行搅拌,但是在不同的步骤中玻璃棒的用法不同。 实验用具 鸡血细胞液(5~10mL);体积分数为95%的冷酒精,蒸馏水,质量浓度为0.1g/mL的柠檬酸钠溶液,物质的量浓度分别为2mol/L和0.015mol/L的NaCl溶液,二苯胺试剂;烧杯(100mL,1个,50mL,500mL,各2个),漏斗,试管(20mL,2个),玻璃棒,滴管,量筒(100mL,1个),纱布,镊子,滤纸,铁架台,铁环,三角架,酒精灯,石棉网,载玻片,试管夹。 课时安排一课时 课前准备 制备鸡血细胞液,方法是:将质量浓度为0.1g/mL的柠檬酸钠溶液100mL,置于500mL烧怀中,注入新鲜的鸡血(约180mL),用玻璃棒搅拌,使其充分混合,以免凝血。静置于冰箱内一天,使血细胞自行沉淀。(也可以用离心机离心2 min(转速1000转/分)。用吸管吸去上清液。 板书(提前写好) DNA的粗提取与鉴定

课题5DNA的粗提取与鉴定-温州第二高级中学

【课题】:课题5 DNA的粗提取与鉴定【主备人】:苗贤举 【备课时间】: 3月10日【审核人】:宋利刚 【复习目标】 本课题通过尝试对植物或动物组织中的DNA进行粗提取,了解DNA的物理化学性质,理解DNA粗提取以及DNA鉴定的原理。 【复习重点与难点】 复习重点:DNA的粗提取和鉴定方法。 复习难点:DNA的粗提取和鉴定方法。 【知识回顾】一、实验原理 1、提取DNA的方法 提取生物大分子的基本思路是。对于DNA的粗提取而言,就是要利用、等在物理和化学性质方面的差异,提取DNA,去除其他成分。 1)DNA的溶解性 思考题1:DNA在氯化钠溶液中的溶解度有什么特点?对此有什么应用? 思考题2:利用什么原理来将DNA与蛋白质分离开? 2)DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性蛋白酶能水解,但是对没有影响。大多数蛋白质不能忍受60—80o C的高温,而DNA在以上才会变性。洗涤剂能够瓦解,但对DNA没有影响。 3)DNA的鉴定 思考题3:依据什么原理来鉴定DNA? 在条件下,DNA遇会被染成色,因此二苯胺可以作为鉴定DNA 的试剂。 二、实验设计 1、实验材料的选取凡是含有的生物材料都可以考虑,但是使用的生物组织,成功的可能性更大。在下面的生物材料中选取适合的实验材料: 鱼卵、猪肝、菜花(花椰菜)、香蕉、鸡血、哺乳动物的红细胞、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜、在液体培养基的大肠杆菌 2、破碎细胞,获取含DNA的滤液 1)制备和提取细胞核物质:动物细胞的破碎比较容易,以鸡血细胞为例。 在鸡血细胞液中加入一定量的,同时用搅拌,得到鸡血细胞液。过滤后收集研磨液; 如果实验材料是植物细胞,需要先用溶解细胞膜。例如,提取洋葱的DNA时,在切碎的洋葱中加入一定的和,进行充分的搅拌和研磨。过滤后收集研磨液。 思考:①为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂? ②加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么? ③如果研磨不充分,会对实验结果产生怎样的影响? ④此步骤获得的滤液中可能含有哪些细胞成分? 2)溶解细胞核的DNA: 向收集的滤液中加入的溶液,搅拌使DNA呈溶解状态。 3、去除滤液中的杂质 方案一的原理是DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同;方案二的原理是蛋白酶分解蛋白质,不分解DNA;方案三的原理是蛋白质和DNA的变性温度不同。 思考: ①为什么反复地溶解与析出DNA,能够去除杂质? ②方案二与方案三的原理有什么不同?

高中生物必修二实验十一 DNA的粗提取与鉴定

实验十一 DNA 的粗提取与鉴定 教学目的 1. 初步掌握DNA 粗提取和鉴定的方法。 2. 观察提取出来的DNA 物质。 实验原理 1. DNA 在NaCl 溶液中的溶解度是随NaCl 的浓度变化而改变的。DNA 在0.14mol/L 的NaCl 溶液中的溶解度最低,据此可使溶解于NaCl 溶液中的DNA 析出。 2. DNA 不溶于酒精溶液,但细胞中某些物质可以溶于酒精溶液,据此可提取杂质较少的DNA 。 3. DNA +二苯胺??→?沸水浴蓝色(用于DNA 的鉴定) 实验步骤 1.材料制备 0.1G/ml 柠檬酸钠100ml 500ml 烧杯→玻璃棒搅拌→1000r/min 离心2min →吸去上清液→ 活鸡血180ml 即得鸡血细胞液(也可将上述烧杯置于冰箱中,静置一天使鸡血细胞自行沉淀) 2.方法步骤 取血细胞液5-10ml +20ml 蒸馏水,玻璃棒沿一个方向快速搅拌 (1)提取血细胞核物质 纱布过滤,滤液中含DNA 和其他核物质,如蛋白质 原理:血细胞的细胞膜、核膜吸水胀破,玻璃棒快速搅拌机械加速血细胞破裂 (2)溶解核内DNA :滤液+2mol/L NaCl 溶液40ml ,玻璃棒沿一个方向搅拌 (3)析出含DNA 的粘稠物:向上述溶液中缓缓加入蒸馏水,并轻轻地沿一个方向搅拌,出现丝状物,当丝状物不再增加时,停止加水(此时NaCl 溶液相当于稀释到0.14mol/L ) (4)滤取含DNA 的粘稠物:用多层纱布过滤,含DNA 的粘稠物留在纱布上 (5)(纱布上的)DNA 粘稠物再溶解: 20ml2mol/L NaCl 溶液 50ml 烧杯, 上述粘稠物 缓慢搅拌3 min (6)过滤含DNA 的2mol/L NaCl 溶液:用2层纱布过滤,滤液中含DNA (7)提取含杂质较少的DNA :上述溶液+95%酒精,缓慢搅拌,出现乳白色丝状物,用玻璃棒将丝装物卷起。 (8)DNA 鉴定: 实验关键: 本实验成功的关键是获取较纯净的DNA ,因此应注意: 1.充分搅拌鸡血细胞液。DNA 存在于鸡血细胞核中。将鸡血细胞与蒸馏水混合以后,应用 玻璃棒沿一个方向快速搅拌,使血细胞加速破裂,并释放出DNA 2.沉淀DNA 必须用冷酒精。实验前必须准备好大量95%的酒精,并在冰箱中(5℃以下)至少存放24小时。 3.正确搅拌含有悬浮物的溶液。在第(3)、(5)步骤,玻璃棒不要直插烧杯底部,且搅拌

DNA 的粗提取与鉴定

DNA 的粗提取与鉴定 实验目标 初步掌握DNA的粗提取和鉴定的方法,观察提取出来的DNA物质。 实验原理 DNA在氯化钠溶液中的溶解度,是随着氯化钠的浓度的变化而改变的。当氧化钠的物质的量浓度为0. 14 ml/L时DNA的容解度最低。利用这原理,可以使溶解在氧化钠溶液中的DNA析出。 DNA不溶于酒精溶液,但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精溶液。利用这一原 理,可以进步提取出含杂质较少的DNA。 DNA遇二苯胺(沸水浴)会染成蓝色,因此,二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。 实验器具 鸡血细胞液(5~ 10 mL)。 铁架台、铁环、镊子、三角架、酒精灯、石棉网、载玻片、玻璃棒、滤纸、滴管、量筒(100 mL,1个)、烧杯(100 mL,1个;50mL,500 mL各2个)、试管(20 mL,2个)、漏斗试管夹、纱布。 体积分数为95%的冷酒精溶液(实验前置于冰箱内冷却24 h)蒸馏水、质量浓度为 0.1 g/mL的柠檬酸钠溶液、物质的量浓度分别为2 mol/L和0.015 mol/L 的氯化钠溶液、二苯胺试剂。 实验探究与过程 实验前需要制备鸡血细胞液(由教师完成),制备的方法是:取质量依度为0.1gml 的柠檬酸钠济液(抗凝剂)100 ml,置于500 ml烧杯中。将宰杀活鸡流出的鸡血(约 180mt)注人烧杯中,同时用玻璃棒搅拌,使血液与柠檬酸钠溶液充分混合,以免凝血。然后,将血液倒人离心管内,用1000 r/min(转每分)的离心机离心2 min,此时血细胞沉淀于离心管底部。实验时,用吸管除去离心管上部的澄清液,就可以得到鸡血细胞液。(如果没有离心机,可以将烧杯中的血液置于冰箱内,静置天,使血细胞自行沉淀。) 1.提取鸡血细胞的细胞核物质 将制备好的鸡血细胞液5~10 mL,注人到50 ml,烧杯中。向烧杯中加人燕馏水探 20 m,同时用坡璃棒沿一个方向快速搅拌5 min ,使血细胞加速破裂。然后,用放有纱布的漏斗将血细胞液过德至500ml,的烧杯中,取其滤液。 2.溶解细胞核内的DNA 将物质的量浓度为2 mol/L的氯化钠溶液40 mL加人到滤液中,并用玻璃棒沿一个方向搅拌1 min, 使其混合均匀,这时DNA在溶液中呈溶解状态。 3.析出含DNA的黏稠物

(完整版)DNA的粗提取与鉴定

DNA的粗提取与鉴定 (2012江苏)18. 下列关于“DNA 粗提取与鉴定实验”的叙述,正确的是() A. 洗涤剂能瓦解细胞膜并增加 DNA 在 NaCl 溶液中的溶解度 B. 将 DNA 丝状物放入二苯胺试剂中沸水浴后冷却变蓝 C. 常温下菜花匀浆中有些酶类会影响 DNA 的提取 D. 用玻棒缓慢搅拌滤液会导致 DNA 获得量减少 【答案】C 【解析】洗涤剂能够瓦解细胞膜,但不能增加DNA的溶解度,A错;将 DNA 丝状物放入二苯胺试剂中沸水浴中变蓝,不需要冷却,B错;常温下菜花匀浆中有些酶类可破坏DNA,而影响DNA的提取,C正确;用玻棒缓慢搅拌滤液并不影响DNA的含量,而在粗提取时,缓慢撑拌有利于DNA附着,D错【试题点评】本题主要是对实验内容的考查,主要是涉及“DNA 粗提取与鉴定实验”这一实验中的原理、方法和操作步骤等内容。属于实验考查中比较基础的内容。 (2011江苏)19.在利用鸡血进行“DNA的粗提取与鉴定”的实验中,相关叙述正确的是A.用蒸馏水将NaCl溶液浓度调至0.14 mol/L,滤去析出物 B.调节NaCl溶液浓度或加入木瓜蛋白酶,都可以去除部分杂质 C.将丝状物溶解在2 mol/L NaCl溶液中,加入二苯胺试剂即呈蓝色 D.用菜花替代鸡血作为实验材料,其实验操作步骤相同 【答案】B (2010江苏)32.(7分)某生物兴趣小组开展DNA粗提取的相关探究活动。具体步骤如下: 材料处理:称取新鲜的花菜、辣椒和蒜黄各2份.每份l0 g。剪碎后分成两组,一组置于20℃、另一组置于—20℃条件下保存24 h。 DNA粗提取: 第一步:将上述材料分别放人研钵中,各加入l5 mL研磨液,充分研磨。用两层纱布过滤.取滤液备用。 第二步:先向6只小烧杯中分别注人10mL滤液,再加人20 mL体积分数为95%的冷酒精溶液,然后用玻璃棒缓缓地向一个方向搅拌,使絮状物缠绕在玻璃棒上。 第三步:取6支试管,分别加入等量的2 mol/L NaCl溶液溶解上述絮状物。 DNA检测:在上述试管中各加入4 mL二苯胺试剂。混合均匀后,置于沸水中加热5 min,待试管冷却后比较溶液的颜色深浅,结果如下表。

DNA粗提取和鉴定实验

DNA的粗提取与鉴定实验 一、实验原理 ①DNA主要存在于细胞核 ②DNA在NaCl溶液中的溶解度,是随着NaCl的浓度的变化而改变的。当NaCl的物质的量浓度为0.14mol/L时,DNA的溶解度最低。利用这一原理,可以使溶解在NaCl溶液中的DNA 析出。 ③DNA不溶于酒精溶液,但是细胞中的某些蛋白质可以溶于酒精溶液。利用这一原理,可以进一步提取出含杂质较少的DNA。 ⑷DNA遇二苯胺(沸水浴)会染成蓝色,因此,二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。 二、实验材料和用具 鸡血细胞液(5~10ml);体积分数为95%的冷酒精溶液(实验前置于冰箱内冷却24h);蒸馏水;质量浓度为0.1g/ml的柠檬酸纳溶液;质量的浓度分别为2mol/L和0.015mol/L 的氯化纳溶液(新教材不要求0、015的浓度了,都是用的2mol/L);二苯胺试剂;铁架台;镊子;水浴锅;玻璃棒;滤纸;滴管;量筒(100ml,一个);烧杯;(1000ml,一个,50ml、100 ml、500ml各二个);试管(20ml,二个);漏斗;试管夹;纱布。 三、课前准备鸡血细胞液 取质量浓度为0.1g/ml的柠檬酸纳溶液(抗凝剂)100ml,置于500ml烧杯中。注入新鲜的鸡血(约180ml),同时用玻璃棒搅拌,使血液与柠檬酸纳溶液充分混合,以免凝血。将烧杯中的血液置于冰箱内,精置一天,使血细胞自行沉淀。(也可以将血液倒入离心管内,用1000r/min(转每分)的离心机离心2min,血细胞沉淀于离心管底部。实验时。用吸管除去离心管上部的澄清液,就可以得到鸡血细胞液。 四、方法步骤 ①提取鸡血细胞的细胞核物质 将制备好的鸡血细胞液5mL~10mL,注入到50 mL烧杯中。向烧杯中加入蒸馏水20mL,同时用玻璃棒充分搅拌5 min,使血细胞加速破裂。然后,用放有1-2层纱布的漏斗将血细胞液过滤至1000mL。取其滤液。 ②溶解细胞核内的DNA 将氯化钠的物质的量浓度为2mol/L的溶液40mL加入到滤液中,并用玻璃棒沿一个方向搅拌1min,使其混合均匀,这时DNA在溶液中呈溶解状态。

【实验】DNA的粗提取与鉴定

【实验】DNA的粗提取与鉴定 一、实验原理 1.DNA在NaCl溶液中的溶解度随NaCl浓度的不同而不同。当NaCl的浓度为0.14mol/L时,DNA的溶解度最低。利用这一原理,可使溶解在NaCl溶液中的DNA析出。 2.DNA不溶于酒精溶液,但是细胞中的其他许多物质溶于酒精溶液。利用这一原理,可以进一步提取含杂质较少的DNA。 3.DNA遇二苯胺(沸水浴)会染成蓝色;DNA还有遇甲基绿溶液被染成蓝绿色的特性。上述两种方法均可用于鉴定DNA的存在。 二、材料用具 鸡血细胞液;铁架台,铁环,镊子,三脚架,酒精灯,石棉网,载玻片,玻璃棒,滤纸,滴管,量筒(100mL,1个),烧杯(100mL,1个,50mL、500mL各2个),试管(20mL,2个),漏斗,试管夹,纱布;体积分数为95%的酒精溶液(实验前置于冰箱内24h),蒸馏水,质量浓度为0.1g/mL的柠檬酸钠溶液,物质的量浓度分别为2mol/L 和0.015mol/L的氯化钠溶液,二苯胺试剂 1.从鸡血细胞核中提取的物质是DNA吗? 在鸡血细胞中加入蒸馏水,并且搅拌,利用渗透作用原理使鸡血细胞破裂,搅拌进一步促进了鸡血细胞的破裂,于是释放出其中的DNA,当然也有少量的RNA,还的蛋白质。因此,释放出的物质是DNA、RNA和蛋白质的混合物,不仅仅只有DNA。 2.怎样提高血细胞因低渗而破裂的效率? 血细胞的细胞膜对低渗溶液有一定的抵抗能力,这称为渗透脆性。一般而言,血细胞与蒸馏水相混合而使血细胞处于极度的低渗环境之中,细胞因大量失水而致最终破裂并释放出胞内物(包括细胞核)。为促进细胞在低渗条件下破裂,可以辅以快速而有力的搅拌,使之受机械震荡而更易破裂。

DNA的粗提取与鉴定实验教学设计

DNA的粗提取与鉴定实验 一、教学背景分析 【教材分析】 生物体的性状之所以能够遗传给后代,是由于生物体内具有DNA或RNA这些遗传物质。通过必修2《遗传与进化》的学习,学生已经学习了证明DNA是主要的遗传物质的实验证据。那么DNA究竟是什么样的呢?本课题通过尝试对植物或动物组织中的DNA进行粗提取,了解DNA的物理化学性质,理解DNA粗提取以及DNA鉴定的原理,使学生对DNA有一定的感性认识。 “DNA的粗提取与鉴定实验”在《普通高中生物课程标准》和《考试大纲》对实验内容考查的要求中属D级要求,新课标强调能力培养,高考对实验能力的考核比重也逐年加大。学生通过本次实验探究活动,可进一步提高动手能力和创新能力。 【学情分析】 通过必修2《遗传与进化》的学习,学生已经了解了证明DNA是主要的遗传物质的实验证据,知道生物体的形状之所以能够遗传给后代,是由于生物体内具有DNA或RNA这些遗传物质。通过本课题的学习,使学生对DNA有一定的感性认识。 二、教学目标 【知识目标】 本实验通过尝试对植物或动物组织中的DNA进行粗提取,了解DNA的物理化学性质,理解DNA粗提取方法以及DNA鉴定的原理内容。 【能力目标】 1.实验中能运用已有的知识,选择实验材料用具; 2.通过具体的材料,学生尝试课题研究,体验科学探究的一般过程。 3.初步掌握DNA的粗提取和鉴定的方法 4.在对实验原理、步骤的理解和分析过程中发展学生的科学思维。 5.熟悉粗提取生物大分子的的一般性方法 【情感态度与价值观目标】 1.通过小组之间的分工合作,逐渐养成协作精神; 2.通过科学与数学的整合,逐渐形成简约、严谨的思维品质;

高中生物选修一教案:课题1 dna的粗提取与鉴定

课题1DNA的粗提取与鉴定 教材内容解读 要点1提取DNA的方法 (1)分离 选用一定的物理或化学方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子。 (2)DNA的溶解性 DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同,DNA在NaCl溶液中的溶解度随NaCl的浓度变化,在0.14mol/L的NaCl溶液中溶解度最低。选择适当的盐溶液就能使DNA充分溶解,而使杂质沉淀,在0.14mol/L的NaCl溶液中DNA会析出。 DNA不溶于酒精溶液,但是细胞中的某些蛋白质则溶于酒精。利用这一原理,可以将DNA 与蛋白质进一步分离。 (3)DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性 蛋白酶能水解蛋白质,但是对DNA没有影响。大多数蛋白质不能忍受60~80℃的高温,而DNA在80℃以上才会变性。洗涤剂能够瓦解细胞膜,但对DNA没有影响。 (4)DNA的鉴定 在沸水浴的条件下,DNA遇二苯胺会被染成蓝色。二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。要点2实验设计 (1)实验材料的选取 选用DNA含量相对较高的生物组织,如鸡血。 (2)破碎细胞,获取含DNA的滤液 动物细胞以鸡血为例,在鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水,同时用玻璃棒搅拌,过滤后收集滤液即可。 植物细胞需要先用洗涤剂溶解细胞膜。 (3)去除滤液中的杂质 方法有三种: ①在滤液中加入NaCl,使NaCl溶液浓度为2mol/L,过滤除去不溶的杂质,再调节NaCl溶液浓度为0.14mol/L,析出DNA过滤去除溶液中的杂质,再用2mol/L的NaCl溶液溶解DNA。 ②直接在滤液中加入嫩肉粉反应10~15分钟,嫩肉粉中的木瓜蛋白质酶能够分解蛋白质。 ③将滤液放在60~75℃的恒温水浴箱中保温10~15分钟。 (4)DNA的析出与鉴定 ①析出较纯净的DNA 将处理后的溶液过滤,加入与溶液体积相等的、冷却的酒精溶液(体积分数为95%),静置2~3分钟,溶液中会出现白色丝状物,并用滤纸吸去上面的水分。 ②DNA的鉴定 取两支20mL的试管,各加入物质的量浓度为2mol/L的NaCl溶液5mL,将丝状物放入其中一支试管中,用玻璃棒搅拌,使丝状物溶解。然后,向两支试管中各加入4mL的二苯胺试剂。混合均匀后,将试管置于沸水中加热5分钟,待试管冷却后,比较两支试管中溶液颜色的变化。溶解有DNA的溶液变蓝。 要点3实验案例 案例一以鸡血为实验材料进行DNA的粗提取

生物笔记-dna的粗提取与鉴定

生物笔记-dna的粗提取与鉴定 本卷须知 1.答题前,考生先将自己的姓名、准考证号填写清楚,将条形码准确粘贴在考生信 息条形码粘贴区。 2、选择题必须使用2B铅笔填涂;非选择题必须使用0.5毫米黑色字迹的签字笔书写,字体工整、笔迹清楚。 3、请按照题号顺序在各题目的答题区域内作答,超出答题区域书写的答案无效; 在草稿纸、试题卷上答题无效。 4、保持卡面清洁,不要折叠,不要弄破、弄皱,不准使用涂改液、修正带、刮纸 刀。 【一】提取DNA的原理 利用DNA与RNA、DNA与蛋白质、DNA与脂质物理化学性质的差异提取DNA ①0.14MOL/L的NACL溶液:DNA的溶解度最小,使DNA析出。 ②冷95%乙醇:DNA不溶于酒精,可以用于提取出含杂质较少的DNA。 ③洗涤剂:能溶解细胞膜,有利于细胞内DNA的释放,并且不会破坏DNA结构〔用 于植物细胞〕 ④二苯胺:在沸水浴中,DNA遇二苯胺变成蓝色〔鉴定原理〕 【二】实验材料的选择 选用DNA含量较高的生物材料〔如:鸡血〕 补充:向血液中添加柠檬酸纳防止血液凝固 【三】方法步骤 1、获取含DNA的滤液〔动物只用蒸馏水,植物用洗涤剂〕 5ML鸡血细胞液+10ML蒸馏水,搅拌过滤,收集滤液 2、除去不溶性杂质 滤液中加入2MOL/L的NACL溶液,再加入蒸馏水,稀释至0.14MOL/L,过滤得到 黏稠物 3、DNA的析出 将黏稠物转移到2MOL/L的NACL溶液中,加冷酒精〔体积分数95%〕,析出黏稠物 〔即为粗提取的DNA〕 4、DNA的鉴定 流程:取鸡血鸡血细胞滤液黏稠物 过滤+蒸馏水,过滤+95%冷酒精白色黏稠物 【四】蛋白质分离方法 蛋白质分离的常用方法:凝胶色谱法、电泳法 凝胶色谱法分离原理:相对分子质量大小〔分子质量越大,迁移速率越大〕 电泳法分离原理:带电性质的差异,分子本身的大小和形状

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