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铁皮石斛茎段丛生芽诱导研究

铁皮石斛茎段丛生芽诱导研究
铁皮石斛茎段丛生芽诱导研究

铁皮石斛(Dendrobium officinale Kimura et Migo)为兰科石斛属多年生附生草本植物,是珍贵中药材,所含的主要成分为石斛多糖,具有提高人体白细胞,增加机体免疫力等功能[1];有滋阴清热、生津益胃、止咳润肺之功效。野生铁皮石斛多附生在亚热带深山密林中环境阴湿的树木或岩石上。由于长期人为过度采挖及其生境的破坏,铁皮石斛野生资源已濒临灭绝,已被国家列为重点保护的药用植物之一。

铁皮石斛种子极小、无胚乳,自然条件下需与某些真菌共生才能萌发,因此一般不采用有性繁殖,而一般分株、扦插方法的繁殖率极低[2],难于满足栽培生产的需要。采用铁皮石斛的茎段进行丛生芽的诱导培养,具有取材易、繁殖系数高、遗传变异率低、繁殖速度快等优点[3],能在较短时间内为商业栽培提供大量标准化优良种苗。实现铁皮石斛的商业栽培不但为种植者创造丰厚的经济效益,还一定程度上对保护野生资源和生态环境具有重要意义。

云南省德宏热带农业科学研究所为满足德宏地区石斛商业种植的需要,长期从事石斛组培快繁技术的研究。本试验以铁皮石斛茎段为外植体,采用不同基础培养基、植物生长调节剂、培养基添加物等处理,探索促进铁皮石斛茎段丛生芽分化及瓶苗壮苗生根的方法,提高石斛组培快繁技术水平,现将结果报道于下:

1材料和方法

1.1试验材料

外植体取自德宏热带农业科学研究所石斛种质资源圃一年生铁皮石斛茎段。

1.2试验方法

1.2.1外植体消毒处理方法筛选

取健壮茎段,剪除叶、根,先用洗衣粉水清洗,再用去离子水冲洗4~5次,在无菌操作台上切成

铁皮石斛茎段丛生芽诱导研究

李泽生,白燕冰,耿秀英,李桂林,周侯光,高燕,赵云翔

(云南省德宏热带农业科学研究所,云南瑞丽678600)

摘要

摘要::通过对铁皮石斛组培过程的外植体消毒方法,以及不同培养基、培养基添加物的筛选试验,结果表明:多种消毒剂配合使用并进行二次消毒的效果最好;基础培养基以1/2MS较好;1/2MS+5.0mg/L NAA+2.0mg/L6-BA是最适合丛芽分化的诱导培养基;在培养基中添加香蕉10%+洋芋10%生根多,瓶苗长势好。

关键词

关键词::铁皮石斛;丛芽诱导;消毒方法;培养基;添加物

中图分类号:S682.31文献标识码:A文章编号:1672-450X(2011)02-0028-04

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Studies on Stem Clumpy Bud Induction of Dendrobium officinale

LI Ze-sheng,BAI Yan-bing,GENG Xiu-ying,LI Gui-lin,ZHOU Hou-guang,GAO Yan,ZHAO Yun-xiang

Dehong Institute of Tropical Agriculture;Ruili678600,China

Abstract:The results from screening experiment have revealed that low contamination and high survival rate appeared in com-bined disinfectants treatment during Dendrobium officinale culture,following a second sterilization.The suitable medi-um for clumpy bud induce is1/2MS+5.0mg/L NAA+2.0mg/L6-BA,and this medium makes bottle seedlings growing well with additives of10%banana add10%potato.

Key words:Dendrobium officinale;clumpy bud induction;disinfection method;medium;additives

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收稿日期:2011-04-15

带有茎节的1~2cm小段,然后采用(1)75%酒精20s;(2)0.1%升汞20m;(3)75%酒精20s+0.1%升汞15m+2%次氯酸钠30s;(4)75%酒精20s+ 0.1%升汞15m+2%次氯酸钠20s;(5)75%酒精20s+0.1%升汞20m+2%抗生素20s;(6)75%酒精20s+0.1%升汞15m+2%次氯酸钠20s+2%抗生素20s等6种方法进行消毒处理,再将消毒后的外植体接种于培养基中,每个处理分别接种10瓶,每瓶接种5段外植体,每个处理重复3次。所有处理均在培养温度(25±1)℃、光照时间10h/d、光照强度1200lx条件下培养,1周后,检查外植体污染情况,并计算污染率。将污染的外植体再以上述污染率最小的方法进行二次消毒,培养一周后再统计二次消毒的污染率。筛选出最佳消毒方法。

1.2.3不同基础培养基筛选

将消毒好的外植体分别接种到A,MS;B,1/2MS;C,N6;D,Ar等4种基础培养基中。培养基中均添加相同激素、生长素、蔗糖25%、琼脂4.3g/L、活性炭1.0g/L,pH5.8。

各培养基处理接种10瓶,每瓶接种5段外植体,每个处理3次重复。培养20d继代一次,培养60d后统计丛生芽个数,并观察、评估丛生芽粗壮度和叶色,筛选出最佳基础培养基配方。

1.2.4不同植物生长素筛选

在筛选出的最佳基础培养基中添加6-BA2.0mg/L(单位,下同),并分别与添加NAA (0.5、1.0)、IBA(.5、1.0)、IAA(0.5、1.0)、2,4-D(1.0、2.0、3.0)等植物生长素组成9种不同浓度的处理。每个处理接种外植体10瓶,每瓶接种5段,每个处理3次重复。培养20d继代一次,培养60d后统计丛生芽数、丛生芽变异数(指诱导的不定芽发生畸形、叶片肥大或扭曲等现象),并观察瓶苗生势,筛选出细胞分裂素与生长素最佳配比。

1.2.5不同细胞分裂素筛选

在筛选的最佳基础培养基中添加NAA0.5mg/L (单位,下同),分别添加6-BA(1.0、2.0、3.0)、KT (1.0、2.0、3.0)等细胞分裂素组成6种不同浓度的处理。每个处理接种外植体10瓶,每瓶接种5段,每个处理3次重复。培养20d后继代,培养60d后统计丛生芽数、变异丛生芽数,并统计瓶苗生势,筛选出生长素与细胞分裂素最佳配比。

1.2.6不同添加物筛选

在选出的最佳基础培养基中分别添加香蕉10%、香蕉10%+洋芋10%、洋芋10%、椰乳10%、洋芋10%+椰乳10%,组成5种处理。切取丛生芽分别接种各处理培养基,各处理接种10瓶,每瓶接种5段,每个处理3次重复。生根培养60d后观察丛生芽健壮度、整齐度及每株生根数,筛选出最佳添加物。

2结果与分析

2.1不同消毒程序对外植体的消毒效果

从不同消毒处理来看,以75%酒精20s+0.1%升汞15min+2%次氯酸钠20s+2%抗生素20s的处理组合污染率最低,只有42%,外植体成活率最高,达到58%。再用此法对污染外植体进行二次消毒,污染数最低,污染率只有8%;而单独使用一种消毒剂,消毒的效果较差,其中以75%的酒精消毒20s效果最差,污染率为100%,采用此法对污染外植体进行二次消毒,污染率仍然最高,达到48%。其他几种方法以75%酒精20s+0.1%升汞15min+ 2%次氯酸钠30s处理的消毒效果次之,污染率虽能降低到48%,但外植体成活率也下降,只有28%左右;而其他方法的效果不是很好。试验表明:对石斛外植体首次、二次消毒采用第5种方法效果最好。详见表1。

表1不同消毒处理对外植体的消毒效果

消毒处理组合 接种数 污染数 污染率/%成活率/% 二次消毒后污染数

75%酒精20s5050100048

0.1%升汞15m i n5038762426

75%酒精20s+0.1%升汞15m i n+2%次氯酸钠30s5024482816

75%酒精20s+0.1%升汞15m i n+2%次氯酸钠20s5036725218

75%酒精20s+0.1%升汞15m i n+2%抗生素20s5038762418 75%酒精20s+0.1%升汞15m i n+2%次氯酸钠20s+2%抗生素20s502142588

 

2.2不同基础培养基对外植体丛生芽分化的影响

外植体接种40d后茎节处出现膨大,同时出现黄绿色斑点,培养60d后斑点变绿逐渐出现丛生芽。从接种的4种基础培养基来看,培养基B的不定芽诱导率最高,达到82%,诱导的丛生芽达到369个,诱导的苗叶色浓绿、粗壮;其次是培养基A,不定芽的诱导率为64%,诱导的丛生芽数为224个,诱导的苗叶色绿色、较粗壮;最差的是培养基D,不定芽的诱导率只有40%,诱导的苗较细。试验结果表明:含有MS和1/2MS的基础培对铁皮石斛外植体不定芽的诱导率较高,苗的生势较好;两者中又以1/2MS培养基诱导的不定芽更粗壮,叶色更浓绿。详见表2。

2.3不同生长素对铁皮石斛茎段丛生芽分化的影响

植物生长素的功能是促进细胞伸长生长和细胞分裂,诱导植物生长的向性运动,促进生根[4]。从几种生长素配比来看,加入NAA的效果最好。在培养基中分别加入NAA、IBA、IAA三种生长素,外植体诱导的不定芽的差异不大,丛生芽诱导的数量变化也不大,诱导出的丛生芽变异率较低;而加入2,4-D培养基诱导不定芽的效果明显不如加入NAA、IBA、IAA的培养基,且丛生芽的变异率相对较高。

从几种生长素配比来看,随着生长素浓度升高,外植体萌发不定芽的诱导率增加,诱导的丛生芽数也增加,丛生芽变异率逐渐增加。结果表明加入较低浓度的NAA(0.5mg/L)培养基,诱导铁皮石斛外植体丛生芽分化的效果最好。详见表3。2.4细胞分裂素对铁皮石斛茎段丛生芽分化的影响

细胞分裂素的生理作用是促进细胞分裂与扩大,降低根的生长速度,诱导芽的分化,解除顶端优势,促进侧芽萌发生长[4]。从加入的两种细胞分裂素来看,6-BA比KT的效果好。低浓度和高浓度的6-BA对外植体的萌发、丛生芽增殖均不利。当6-BA的浓度为2.0mg/L时,铁皮石斛外植体不定芽的诱导率最高,达到94%,诱导的丛生芽数量最多,所产生的变异苗数适中,瓶苗的长势最好;而随着KT浓度的增加,外植体萌发的数量反而降低,丛生芽诱导的数量也降低,苗的变异率升高。试验结果表明:在培养基中加入适量的6-BA对外植体的诱导率和丛生芽的分化有利。详见表4。2.5不同添加物对铁皮石斛瓶苗壮苗生根的影响

表2不同基础培养基对铁皮石斛茎段丛生芽分化的影响

培养基 外植体数/个 外植体萌发数/个 丛生芽数/个 不定芽诱导率/%丛生芽粗壮度 丛生芽叶色 A503222464较粗 绿 B504136982粗壮 浓绿 C502412048粗 浅绿 D5*******较细 绿

表3生长素对铁皮石斛茎段丛生芽分化的影响

生长素 浓度/m g﹒L-1外植体数/个 外植体萌发数/个 丛生芽数/个 不定芽诱导率/%丛生芽变异数/个 变异率/% N A A0.5504146682286.0

1.0504347686224.6

I B A0.5503531670268.2

1.0503736874318.4

I A A0.5503941578276.5

1.0503439668358.8

2,4-D1.05018162361911.7

2.05021241422811.6

3.05023267463312.4

注:各个处理均添加细胞分裂素2.0m g/L6-B A。 

在培养基中添加不同种类的有机物对铁皮石斛丛生芽诱导有利,从添加的几种有机物来看,对瓶苗的健壮度相差不大。单独添加香蕉10%、洋芋10%或椰乳10%,虽然对瓶苗的健壮度差别不大,但是诱导的瓶苗根系较少,瓶苗的生势相差较大;添加香蕉10%+洋芋10%的组合,瓶苗的健壮度和生势较好,瓶苗生根数较多,瓶苗质量高;而洋芋10%+椰乳10%的组合,瓶苗的健壮度和生势虽然较好,诱导的根系不如香蕉10%+洋芋10%的组合。试验结果表明:在上述培养基中添加香蕉10%+洋芋10%的组合,有利瓶苗生长。详见表5。

3小结

(1)由于铁皮石斛在自然环境中共生菌较多,在以茎段为外植体消毒时,不容易彻底的消除这些共生菌,从而使外植体在培养过程中污染较高;过度消毒则会大大降低外植体的成活率。在消毒

时配合使用多种消毒剂不仅可以对外植体进行充分消毒处理,还保证了外植体较高的成活率。

在实际生产过程中,一些品种的外植体材料相当珍贵,如果直接将污染的外植体进行销毁处理,不仅浪费了试验材料,还会增加生产过程中生产成本。对污染的外植体进行二次消毒处理,则可以在一定程度上降低生产成本,节约试验材料。

(2)在切取茎段时,必须保证每个茎段中有茎节,且不损伤芽点。在同样条件下,采用无茎节茎段分化诱导,很难诱导出丛生芽,说明茎节的芽点具有较强分化能力。

(3)本试验采用铁皮石斛的茎段直接诱导丛生芽,不受时间和季节的限制,在工厂化生产阶段,不仅能够保证品种的真实性,降低瓶苗变异率,还能够节省成本,为以后规模化生产铁皮石斛瓶苗打下理论基础。

参考文献:

[1]朱艳,秦民坚.铁皮石斛茎段诱导丛生芽的研究[J ].中国野生植物资源,2003,22(2):56-57.

[2]张智慧.铁皮石斛的茎段快繁[N ].云南科技报,2006-01-02(A07).

[3]张红梅,刘建东,王岩花,等.铁皮石斛茎段快繁技术研究[J ].山西农业大学,2010,30(6):495-499.

[4]刘庆昌,吴国良.植物细胞组织培养[M ].北京:中国农业大学出版社,2003:31.

表5 不同添加物培养基对铁皮石斛瓶苗壮苗生根的影响 添加物组合 每株根数平均值/条 健壮度 整齐度

香蕉10% 1.4 + + + + + + + 香蕉10%+洋芋10% 3.6 + + + + + + +

洋芋10% 1.2 + + + + + 椰乳10% 0.8 + + + + 洋芋10%+椰乳10% 1.7 + + + + + + +

 

表4 细胞分裂素对铁皮石斛茎段分化丛生芽的影响

细胞分裂素 浓度/ m g ﹒L -1

外植体数/个 外植体萌发数/个 丛生芽数/个 不定芽诱导率/% 丛生芽变异数/个 变异率/%

6-B A

1.0

50

36

382

72

21

5.5

2.0 50 47 466 94 32 6.8

3.0 50 17 264 34 48 18.2 K T

1.0 50 26 268 52 18 6.7

2.0 50 18 234 36 12 5.1

3.0 50 12 182 24 62 34

注:各个处理均添加生长素0.5m g /L N A A 。 

铁皮石斛组织培养

铁皮石斛组织培养研究进展组织培养 摘要:近年来,对铁皮石斛的需求日趋增加,而野生资源难以满足市场需求,组织培养技术使大规模人工栽培成为可能。从种子萌发、原球茎分化、生根与壮苗、原球茎增殖等方面阐述了近年来关于铁皮石斛组织培养技术的研究概况,并展望了发展前景。 铁皮石斛为兰科石斛属植物,是传统名贵中药材。《神农本草经》列为上品,具有益胃生津、滋阴清热、止咳润肺的功效。现代药理研究表明,石斛还具有抗肿瘤、抗衰老、增强人体免疫力和扩张血管的作用。由于石斛自然繁殖力低,种子需与真菌共生才能萌发,加上长期采挖,使得野生铁皮石斛资源日渐枯竭,成为濒危植物,被列为国家重点保护的野生药材品种。为了满足市场的需求,国内许多科研人员进行了铁皮石斛组织培养技术的研究。 1 种子萌发 1.1 胚龄 不同种龄的种子萌发率不一样。叶秀嶙等取铁皮石斛2~ 6 个月种龄的种子进行组织培养发现,种龄愈长,萌发率愈高。2 个月种龄的种子接入改良N6培养基中,萌发率仅为6 % ; 3 个月种龄的种子接入改良叹培养基中,培养2 周后开始萌发,萌发率为87 % ; 4 一6 个月种龄的种子接入培养基中,只要培养一周即可萌发,萌发率为95 %。曾宋君等将铁皮石斛种子接入改良N6培养基中进行组织培养,亦得到相似的结论,幼胚胚龄在60d 以下时,萌发率极低,随着胚龄的增长,其萌发期逐渐缩短,萌发率逐渐升高,成苗率也逐渐

升高,但到达一定的胚龄后,差异并不明显。 1.2 基本培养基 铁皮石斛种子在N6,改良N6,MS , 1 / 2 MS , SH 、KS 、VW 、KundsonC , 1 / 2N6,White等培养基上均可萌发。赵天榜等比较风、MS 等14 种培养基对铁皮石斛种胚成苗率的影响,除残外,所有的基本培养基均优于其减半培养基,其中以N6最好,SH 、Kn 、MS 次之,l /2MS 、1 / 2 Vw 最差。曾宋君等田将铁皮石斛种子在SH 、改良N6、MS 、KS 、VW 、KundsonC 培养基中培养,得出最适培养基为改良N6或自制PT 培养基。罗吉凤等比较了MS 、l / 2MS 、1 / 2 N6和White 培养基对铁皮石斛种子萌发的影响,30d 种子发芽率均达到95 % ,但1 / 2MS 培养基上所萌发的原球茎较大。 1.3 激素 在培养基中添加一定浓度的NAA 可促进种子的萌发,浓度以0.2 一0.5mg/L最适合胚的萌发和生长,过高起抑制作用。2 , 4-D对胚的萌发起抑制作用。6 一BA 对胚萌发后的生长起抑制作用。KT 、IAA 对胚萌发和成苗的影响不大,当浓度超过1mg/L 时,对胚萌发和成苗起抑制作用。ABA 有抑制种子萌发和抑制植物生长的作用,但张铭等发现ABA 能显著提高铁皮石斛原球茎的质量,浓度以0.5mg/L 为最佳。 1.4 天然添加物 在培养基中添加适量的马铃薯汁、香蕉汁、椰乳可促进铁皮石斛种胚的萌发,但张玲等认为香蕉提取物和椰乳对种子萌发和正常发育有不

铁皮石斛市场营销策略

铁皮石斛市场营销策略 中国铁皮石斛加工品市场营销策略研究 一、中国铁皮石斛加工品市场现状 铁皮石斛是我国传统名贵中药材, 具有滋阴清热、益胃生津, 润肺止咳等功效,常用于热病伤津、口干烦渴、病后虚热等多种病症。因森林生态破坏与资源的过度开采, 野生资源濒临枯竭, 1987 年国务院将其列为国家重点保护植物。为了实现铁皮石斛资源的可持续利用, 科研人员自20世纪70年代就开始了人工栽培技术研究工作, 但直到新世纪, 种子生产、组织培养和设施栽培等人工繁育关键技术才得以突破, 并迅速推广应用。同时, 铁皮石斛药用功效与价值的研究也不断深入,一批功能性保健专利产品得以研发、生产, 形成了从铁皮石斛种植生产、加工到销售完整的产业链 , 成为重要的高科技富民农业产业。 二、铁皮石斛加工品市场营销策略 现阶段铁皮石斛产品生产线在各个中药材加工企业中都属新增项目,原有产品 的营销模式固然可以应用到铁皮石斛产品上来,但对于投入成本较大、营养价值较高且消费者并不十分了解的铁皮石斛产品来说,采用原有策略显然已经不能满足市场的需要。 因此,研究制定一套新的、符合铁皮石斛产品本身特性的市场营销策略显得尤 为重要。 1.产品策略 国内对铁皮石斛的认识仅仅局限在少数经济发达城市,而众多种类铁皮石斛加 工品的上市恰恰更大范围地增进了消费者对铁皮石斛的了解与关注。但是,所谓的铁皮石斛加工品是否含有真正来自铁皮石斛果实的原料,而不仅仅是商家用来炒作的概念和促销的手段,这一点还有待于考究。为了使消费者了解真正的铁皮石斛,并

能够根据自身需求选择产品,我们特别针对国内市场上的部分铁皮石斛产品进行了 研究分析。 , 开发与销售 从各地销售市场调研看, 铁皮石斛销售市场目前主要在浙江, 其次是上海、北 京等大都市, 包括主产区云南在内的大部分区域铁皮石斛销售还未形成市场。国 内市场上目前能够购买到的国内企业或合资企业生产的铁皮石斛产品可分为三大类,目前市场销售的一是将铁皮石斛茎制成干品, 即铁皮枫斗, 它由铁皮石斛剪去部分须根后, 边烘边扭成螺旋形或弹簧状干品。二是精深加工产品, 主要有3种类 型,42种,见表1,即胶囊(丸)、口服液和浸膏, 其中有铁皮石斛茎粉末纯品, 但 更多的是添加人参、糖、维生素、灵芝等加工成的复合保健品。三是鲜品直接销售, 包括茎、花和叶, 其中茎为最重要的销售品。 表1 浙江杭州市场销售的石斛产品类型及销售产品类型代表产品主要产地 或产销售场所 家 茎干制品铁皮枫斗云南昆明、浙江集散市场、医药 乐清、广西等产名店 地 精加工品铁皮枫斗胶丸, 浙江森宇控股超市、医药名 铁皮枫斗晶集团、武义寿仙店、专卖店 (冲剂), 铁皮谷药业、浙江天 枫斗胶囊, 铁皇药业、 皮枫民康天然植物 斗晶(颗粒), 制品、杭州胡庆 石斛芝品余堂药业、康恩

铁皮石斛组织培养研究进展组织培养.

铁皮石斛组织培养研究进展 1、1 种子萌发1.2 基本培养基 铁皮石斛种子在N6,改良N6,MS , 1 / 2 MS , SH 、KS 、VW 、KundsonC , 1 / 2N6,White等培养基上均可萌发。赵天榜等比较风、MS 等14 种培养基对铁皮石斛种胚成苗率的影响,除残外,所有的基本培养基均优于其减半培养基,其中以N6最好,SH 、Kn 、MS 次之,l /2MS 、1 / 2 Vw 最差。曾宋君等田将铁皮石斛种子在SH 、改良N6、MS 、KS 、VW 、KundsonC 培养基中培养,得出最适培养基为改良N6或自制PT 培养基。罗吉凤等比较了*** / 2MS 、1 / 2 N6和White 培养基对铁皮石斛种子萌发的影响,30d 种子发芽率均达到95 % ,但1 / 2MS 培养基上所萌发的原球茎较大。 1.3 激素 在培养基中添加一定浓度的NAA 可促进种子的萌发,浓度以0.2 一0.5mg/L最适合胚的萌发和生长,过高起抑制作用。2 , 4-D对胚的萌发起抑制作用。6 一BA 对胚萌发后的生长起抑制作用。KT 、IAA对胚萌发和成苗的影响不大,当浓度超过1mg/L 时,对胚萌发和成苗起抑制作用。ABA 有抑制种子萌发和抑制植物生长的作用,但张铭等发现ABA 能显著提高铁皮石斛原球茎的质量,浓度以0.5mg/L为最佳。 1.4 天然添加物

在培养基中添加适量的马铃薯汁、香蕉汁、椰乳可促进铁皮石斛种胚的萌发,但张玲等认为香蕉提取物和椰乳对种子萌发和正常发育有不利影响,干扰其正常发育过程。 1.5 炭源 在组培过程中适当添加活性炭,可以吸附代谢过程中产生的废弃物,防止组织褐变,并刺激胚胎的发生与生根,可加人2 %蔗糖。曾宋君等在改良N6+NAA 0.2mg/L 的最适培养基上,发现以白糖、片糖为炭源时,胚萌发和成苗的效果比蔗糖好,这可能是白糖、片糖中含有适合胚萌发和成苗的矿质元素 2 原球茎增殖 2.1 基本培养基 铁皮石斛原球茎增殖可以1/2 MS,MS等作为基本培养基。张治国等研究了6 种不同培养基对铁皮石斛原球茎增殖的影响,结果表明,l /2 MS 是原球茎增殖的适宜培养基。 2.2 激素 适宜的NAA 、KT 、6 一BA 浓度对原球茎的增殖起促进作用。唐桂香等以1 / 2 MS 为基本培养基,发现BA 1.0mg/L和NAAO.lmg/L有利于原球茎诱导增殖。蒋林等叫研究表明,l / 2Ms + NAA1.0mg/L+ KTO.2mg/L比较适合嗓球茎的增殖。蒋波等以1 / 2MS 为基本培养基.添加BA 2.0mg/L + NAA0.5mg/L或6 一BA3.0mg/L + NAAO.5 mg/L的激素,原球茎

铁皮石斛市场调查报告

铁皮石斛市场调查分析报告 一、项目简介及市场简况 铁皮石斛是石斛属药用植物中最为珍稀名贵的一种,被誉为人间仙草。现代科学研究表明,铁皮石斛有效成分主要为石斛碱、石斛苷、石斛多糖、18种氨基酸、酚类、挥发油等。 人们对铁皮石斛十分熟悉,有长期食用的习惯,传统历史久远。目前,铁皮石斛市场需求量很大,但由于自然资源稀缺,人工种植技术成熟度有待提高,其市场供给能力较弱。铁皮石斛种苗、鲜石斛、以鲜石斛加工而成的枫斗及其深加工产品均有广阔的市场前景。适合种植地区:我国华南及东南亚。 经国内外联机检索,国外对于铁皮石斛介绍的相关文献甚少,Internet网上仅提到铁皮石斛,但未作深入讨论。国内自七十年代末以来,相关研究机构对铁皮石斛的组织培养条件、移栽影响因素、成活率和铁皮石斛有效成分等方面进行了一些探索。基本上以传统的培养基及组织培养器具进行组培苗的生产,然后人工模拟铁皮石斛的生长环境,将组培苗移栽到大棚,但移栽成活率不高,且成本居高不下。大部分研究机构(或公司)由于人工栽培本身的难度及成本问题,而停留在实验研究阶段,无法实现商业(工业)化生产。现在,铁皮石斛的人工种植,已成为国内学者、研究机构和企业(公司)关注和研究开发的热点之一。 国际市场上,每公斤铁皮枫斗价格为1300美元左右;东南亚一带,早有历史上形成的销售市场,价格高达每公斤1500美元。澳门、香港、韩国、日本、台湾、马来西亚、新加坡需求旺盛,属有价无货的紧缺药材。在国内市场上,用铁皮石斛制成的枫斗价格为10,000元/kg。 二、铁皮石斛主要药理功效 1、滋阴生津 2、增强体质、调节免疫力 3、抗肿瘤 4、降低血糖、血脂、血压

铁皮石斛组培技术

铁皮石斛的组织培养研究 专业班级: 姓名: 学号: 课程:植物组织培养

目录 摘要 (3) Abstract (4) 前言 (5) 1.培养基 (6) 1.1配方 (6) 1.2配制(以1000ml幼株的生根壮苗培养基为例) (6) 1.3灭菌 (8) 2.转接 (9) 2.1转接前准备 (9) 2.2转接 (9) 2.3培养 (9) 3.炼苗 (10) 3.1炼苗目的 (10) 3.2炼苗方法 (10) 4.移栽 (11) 4.1基质选择 (11) 4.2移栽技术要求 (11) 5.结论与分析 (12) 参考文献 (13)

摘要 铁皮石斛(Dendrobium officinale)是兰科(Orchidaceae)石斛属(DendrobiumSw.)多年生草本植物。铁皮石斛为石斛之极品,它因表皮呈铁绿色而得名。铁皮石斛是传统名贵中药材,有生津益胃、清热养阴和清咽利嗓等功效,主要药用成分石斛多糖是一种免疫调节剂。铁皮石斛蒴果成熟时易开裂,且种子粒径小,自然繁殖率低。为了保护和有效利用铁皮石斛,通过组织培养技术大量快速繁殖铁皮石斛组培苗显得尤为重要。 关键词:铁皮石斛组织培养移栽培养基转接快速繁殖

Abstract Dendrobium orchid Dendrobium is a perennial herb. It is the ultimate in DendrobiumSw,named for its ferric green epidermis.As a rare traditional Chinese herbal medicine,it contributes to dry dampness and strengthen the spleen,clear away lung-heat ,nourish yin ,clear away heat ,and so on.The main medicinal components of Dendrobium polysaccharide is a kind of immune modulators.When mature,its capsule cracks,in which seeds are in small particle size and have a low rate of natural reproduction.In order to protect and utilize the Dendrobium orchid Dendrobium ,it is particularly important to establish a rapid propagation by the tissue culture technique . key words:Dendrobium orchid Dendrobium tissue culture culture medium adapter rapid propagation

铁皮石斛的组织培养

由于石斛自然繁殖力极弱,生长缓慢,加之人们掠夺性采挖,资源已严重枯竭。而石斛栽培一直未解决其存活率低、进入盛产期年限长等问题,故石斛药源一直处于紧张状态。因此,组织培养、遗传转化、菌根技术、悬浮培养等生物技术在石斛的应用意义重大,甚为迫切。石斛的组织培养,可用种子、根、茎尖、茎节及叶等为外植体,但以种子进行组培快繁的为多。原球茎的增殖分化是石斛试管苗繁殖的关键,因此,研究原球茎增殖分化的适宜培养条件非常重要。特别是应用组织培养技术快速大量繁殖石斛试管苗,是解决其种苗与发展生产的有效途径。 铁皮石斛的组织培养 铁皮石斛,又名铁皮兰、节草、耳环石斛等。野生铁皮石斛为国家珍稀濒危保护植物(三级)。由于其生长环境要求特殊,野生资源已濒临灭绝。现云南晨安生物科技开发有限公司对铁皮石斛的组培快繁已获成功,月出苗量50万瓶以上,为铁皮石斛工厂化育苗和大面积栽培闯出了一条新路。 1 胚培养(种子培养):取人工授粉的铁皮石斛果实,用75%的乙醇表面消毒,30s后再用0.1%升汞溶液消毒8min,无菌水冲洗4~5次。在无菌操作下,把果实切成0.1mm见方的小块,接种到培养基上,每瓶3~5块。研究结果表明,N6培养基对种子萌发和生长最好,蔗糖浓度2%最佳,NAA浓度0.2~0.5mg/L最适合胚的萌发和生长;种子培养中加入椰乳对胚萌发和萌发后的初期生长起促进作用;而香蕉汁对继代培养中石斛的生根和壮苗起促进作用,生根和壮苗培养中不加入NAA,只用N6+10%香蕉汁,苗长得更粗壮。培养温度25~28℃,光照强度1600~2000lx,每日10~12h。种子萌发后,转管3~4次,当幼苗长出4~5片真叶并具有3~4条1~2cm长的根时,可将试管苗进行炼苗后移栽。 在实验中尚发现,石斛原球茎的增殖与胚龄相关,不同胚龄培养,其萌发率不同:胚龄45

铁皮石斛组培方案

铁皮石斛组织培养方案报告 一、实验目的 了解铁皮石斛培养的方法和步骤,熟练掌握外植体的取材、消毒、接种、初代培养的操作过程。 二、实验器材 超净工作台、高压灭菌锅、电磁炉、长镊子、培养皿、酒精灯、接种工具、烧杯、玻璃棒、移液管、培养箱、剪刀、培养瓶等。 三、实验步骤 配方: 根据不同阶段,培养基配方有所差异。如表1 表1 各种培养基配方 配制(以1000ml幼株的生根壮苗培养基为例) 10%香蕉(w/w)+MS +3%蔗糖(w/w)+0.8%琼脂(w/w)+2.0mg/L NAA 1)量取800ml蒸馏水于洁净的大烧杯中,加热至沸腾; 2)准确称量100g香蕉果肉,切成碎片状,并倒入上述烧杯中,加热煮沸5min,其间搅拌使之充分溶解; 3)按照大量、微量、Fe2+盐、有机Ⅰ、有机Ⅱ顺序,量取MS各种母液于盛

有50ml蒸馏水的烧杯,混合均匀; 4)将2)和3)的溶液混合,然后加入30g蔗糖,并移取2ml NAA(0.1mg/ml),混合均匀; 5)加热至沸腾,加入8g琼脂并煮沸5min,其间不断搅拌使之充分溶解; 6)冷却至50±5℃时,调pH至5.4—5.6。分装于培养瓶内,33.3ml/瓶。 注意事项: ①溶解香蕉的蒸馏水尽可能多,以确保香蕉各种成分完全溶解; ②各种母液混合时,要按照大量、微量、Fe2+盐、有机Ⅰ、有机Ⅱ的顺序; ③煮沸时,小心溶液溢出; ④分装时不要污染培养瓶瓶口。 灭菌: 1)检查灭菌锅的水位、电源、排气阀、排气管、安全阀以及压力表,确保灭菌锅各指标和功能的正常,以防事故发生; 2)把带灭菌的培养基装入锅内,盖上锅盖,对称而均匀地扭紧螺丝; 3)打开电源和排气阀,调节电压至220V; 4)待排气阀排除水蒸气30s—1min后,关闭排气阀; 5)当温度上升到121℃后,调节电压至135V,保持20min; 6)关闭电源,使之自动降温至0℃。10min后,打开排气阀和锅盖; 7)5—10min后,取出培养基放于试验台上冷却,待用。

组织培养

在铁皮石斛组织培养研究进展组织培养 摘要: 近年来,对铁皮石斛的需求日趋增加,而野生资源难以满足市场需求,组织培养技术使大规模人工栽培成为可能。从种子萌发、原球茎分化、生根与壮苗、原球茎增殖等方面阐述了近年来关于铁皮石斛组织培养技术的研究概况,并展望了发展前景。铁皮石斛为兰科石斛属植物,是传统名贵中药材。神农本草经》《列为上品,具有益胃生津、滋阴清热、止咳润肺的功效。现代药理研究表明,石斛还具有抗肿瘤、抗衰老、增强人体免疫力和扩张血管的作用。由于石斛自然繁殖力低,种子需与真菌共生才能萌发,加上长期采挖,使得野生铁皮石斛资源日渐枯竭,成为濒危植物,被列为国家重点保护的野生药材品种。 为了满足市场的需求,国内许多科研人员进行了铁皮石斛组织培养技术的研究。 1 种子萌发 1.1 胚龄不同种龄的种子萌发率不一样。叶秀嶙等取铁皮石斛 2~ 6 个月种龄的种子进行组织培养发现,种龄愈长,萌发率愈高。2 个月种龄的种子接入改良 N6 培养基中,萌发率仅为 6 % ; 3 个月种龄的种子接入改良叹培养基中,培养 2 周后开始萌发,萌发率为 87 % ; 4 一 6 个月种龄的种子接入培养基中,只要培养一周即可萌发,萌发率为 95 %。曾宋君等将铁皮石斛种子接入改良 N6 培养基中进行组织培养,亦得到相似的结论,幼胚胚龄在 60d 以下时,萌发率极低,随着胚龄的增长,其萌发期逐渐缩短,萌发率逐渐升高,成苗率也逐渐升高,但到达一定的胚龄后,差异并不明显。 1.2 基本培养基铁皮石斛种子在 N6,改良 N6,MS , 1 / 2 MS , SH 、KS 、VW 、 KundsonC , 1 / 2N6,White 等培养基上均可萌发。赵天榜等比较风、 MS 等 14 种培养基对铁皮石斛种胚成苗率的影响,除残外,所有的基本培养基均优于其减半培养基,其中以 N6 最好,SH 、Kn 、MS 次之,l /2MS 、1 / 2 Vw 最差。曾宋君等田将铁皮石斛种子在 SH 、改良 N6、MS 、KS 、VW 、KundsonC 培养基中培养,得出最适培养基为改良 N6 或自制 PT 培养基。罗吉凤等比较了 MS 、l / 2MS 、 1 / 2 N6 和 White 培养基对铁皮石斛种子萌发的影响,30d 种子发芽率均达到 95 % ,但 1 / 2MS 培养基上所萌发的原球茎较大。 1.3 激素在培养基中添加一定浓度的 NAA 可促进种子的萌发,浓度以 0.2 一 0.5mg/L 最适合胚的萌发和生长,过高起抑制作用。2 , 4-D 对胚的萌发起抑制作用。6 一 BA 对胚萌发后的生长起抑制作用。KT 、IAA 对胚萌发和成苗的影响不大,当浓度超过 1mg/L 时,对胚萌发和成苗起抑制作用。ABA 有抑制种子萌发和抑制植物生长的作用,但张铭等发现 ABA 能显著提高铁皮石斛原球茎的质量,浓度以 0.5mg/L 为最佳。 1.4 天然添加物在培养基中添加适量的马铃薯汁、香蕉汁、椰乳可促进铁皮石斛种胚的萌发,但张玲等认为香蕉提取物和椰乳对种子萌发和正常发育有不利影响,干扰其正常发育过程。 1.5 炭源在组培过程中适当添加活性炭,可以吸附代谢过程中产生的废弃物,防止组织褐变,并刺激胚胎的发生与生根,可加人 2 %蔗糖。曾宋君等在改良 N6+NAA 0.2mg/L 的最适培养基上,发现以白糖、片糖为炭源时,胚萌发和成苗的效果比蔗糖好,这可能是白糖、片糖中含有适合胚萌发和成苗的矿质元素 2 原球茎增殖 2.1 基本培养基铁皮石斛原球茎增殖可以 1/2 MS,MS 等作为基本培养基。张治国等研究了 6 种不同培养基对铁皮石斛原球茎增殖的影响,结果表明, /2 l MS 是原球茎增殖的适宜培养基。 2.2 激素适宜的 NAA 、KT 、6 一 BA 浓度对原球茎的增殖起促进作用。唐桂香等以 1 / 2 MS 为基本培养基,发现 BA 1.0mg/L 和NAAO.lmg/L 有利于原球茎诱导增殖。蒋林等叫研究表明,l / 2Ms + NAA1.0mg/L+ KTO.2mg/L 比较适合嗓球茎的增殖。蒋波等以 1 / 2MS 为基本培养基.添加 BA 2.0mg/L + NAA0.5mg/L 或 6 一 BA3.0mg/L + NAAO.5 mg/L 的激素,原球茎的增殖系数较大。陈兆贵等认为原球茎增殖以 MS + NAA1.0mg/L + 6 一 BA1.0mg/L + KT1.0mg/L 为最佳,35d 增殖倍数达到 5 倍。

铁皮石斛有效成分及药理作用的研究进展

铁皮石斛有效成分及药理作用的研究进展 张绘芳1,郭慧2 【摘要】铁皮石斛主要含石斛多糖、生物碱、氨基酸、微量元素和菲类化合物等有效成分;现代研究表明,其具有增强机体免疫力、抗肿瘤、促进消化液分泌、抑制血小板凝集、降血脂、降血糖、抗氧化、抗衰老和退热止痛等药理作用。本文通过对相关文献的整理和归纳,对铁皮石斛有效化学成分和药理作用的研究概况作一综述,为开发利用有药用价值的天然产物提供参考。 【关键词】铁皮石斛;化学成分;药理作用 铁皮石斛(Dendrobium candidum Wall.ex Lindl)为兰科(Orchidiaceae)石斛属多年生草本植物的新鲜或干燥茎。铁皮石斛又名铁皮枫斗、耳环石斛、铁皮兰、黑节草等,为石斛之上品,名列“中华九大仙草”之首。其味甘,性微寒,归胃、肾经,具有养阴清热、益胃生津的功效,药用价值历代为人们所推崇。本文就近年来对铁皮石斛的化学成分和药理作用研究情况做一次较全面回顾,旨在使该种传统中药的独特药用价值被更多地了解,为进一步研究、开发和利用提供参考。 1 有效化学成分 1.1 多糖 多糖是铁皮石斛中一种重要的活性物质,且含量较高。研究表明,多糖成分与铁皮石斛的药效,如增强机体免疫机能、杭肿瘤、杭衰老、杭疲劳、降血糖等方面,有着密切的联系。实验证明从铁皮石斛中能分离纯化得到三种多糖I、II、III,并确定它们为一类0-乙酸葡萄甘露聚糖。杨虹等运用糖组成分析、甲基化分析及NMR等方法研究铁皮石斛多糖DT2、DT3的化学结构,主要以。α-(1-4)-D-Glc为主链。这种多糖具有增长T细胞、B细胞、NK细胞和巨噬细胞功能的作用。 1.2 生物碱 生物碱类成分是石斛属植物中最早分离并进行结构确认的化合物,其研究开

铁皮石斛功效大全

铁皮石斛功效大全 1、滋养阴津 《中国药学大词典》称铁皮石斛“专滋肺胃之气液,气液冲旺,肾水自生”,善于养阴生津,治疗阴虚津亏诸症。 2、增强体质 铁皮石斛具有滋阴养血的功能。清代《药性论》说:铁皮石斛能补肾积精、养胃阴、益气力。含有丰富的多糖类物质,具有增强免疫功能的作用。 3、补益脾胃 铁皮石斛是益胃生津药。《神农本草经》、《本草再新》中均有记载,称谓“肠胃药”,是治疗胃脘痛、上腹涨痛的常用药物。现代医学实验证实:铁皮石斛对脾胃病中常见的致病菌幽门螺杆菌有较好的抑制作用,有助于治疗萎缩性胃炎、浅表性胃炎、十二指肠溃疡等幽门螺杆菌阳性的病症;同时,口服铁皮石斛煎液能够促进胃液的分泌,增强胃的排空能力,帮助消化。 4、护肝利胆 铁皮石斛有较好的利胆作用。历代医家都认为“铁皮石斛”具有滋养肝阴的作用,是治疗各种肝胆病的要药,可用于治疗肝炎、胆囊炎、胆结石等肝胆疾病。 5、强筋降脂 人进入中年以后,阴津开始衰弱,筋骨功能逐渐减退,铁皮石斛能够滋养阴液、润滑关节,从而达到强筋健骨、流利关节、增强抗风湿的效果。现代药理研究还表明:铁皮石斛能提高应激能力,具有良好的抗疲劳、耐缺氧作用;可促进循环、扩张血管、降低血胆固醇和甘油三脂。 6、降低血糖 铁皮石斛功能养阴清热润燥,自古以来就是治疗糖尿病的专用药。临床研究表明,铁皮石斛不仅可以增强胰岛素活性,同时能显著降低血糖水平,使血正常。 7、抑制肿瘤 铁皮石斛对肺癌、卵巢癌和早幼粒细胞性白血病等恶性肿瘤的某些细胞有杀灭作用,具有较强的抗肿瘤活性。临床用于恶性肿瘤的辅助治疗,能改善肿瘤患者的症状,减轻放、化疗的副作用,增强免疫力,提高生存质量,延长生存时间。 8、明亮眼睛 石斛具有滋阴养目的功能,被历代医家作为养护眼睛的佳品。现代药理学研究证实:石斛对防治老年白内障和保护少儿视力有明显效果。 9、滋养肌肤 人体进入中年后,由于体内的阴液日益减少,从而加速了皮肤老化,使之变黑或变皱。铁皮石斛含有的黏液质,对人体皮肤有滋润营养作用。 10、延年益寿 《神农本草经》将铁皮石斛列为具有“轻身延年”作用的圣药。现代药理学研究证实:铁皮石斛含有多种微量元素,对于人体的健康长寿有着密切的关系,对人体的抗衰老作用比一般的药物更广泛、更全面。

铁皮石斛组织培养

铁皮石斛组织培养研究进展组织培养摘要:近年来,对铁皮石斛的需求日趋增加,而野生资源难以满足市场需求,组织培养技术使大规模人工栽培成为可能。从种子萌发、原球茎分化、生根与壮苗、原球茎增殖等方面阐述了近年来关于铁皮石斛组织培养技术的研究概况,并展望了发展前景。 铁皮石斛为兰科石斛属植物,是传统名贵中药材。《神农本草经》列为上品,具有益胃生津、滋阴清热、止咳润肺的功效。现代药理研究表明,石斛还具有抗肿瘤、抗衰老、增强人体免疫力和扩张血管的作用。由于石斛自然繁殖力低,种子需与真菌共生才能萌发,加上长期采挖,使得野生铁皮石斛资源日渐枯竭,成为濒危植物,被列为国家重点保护的野生药材品种。为了满足市场的需求,国内许多科研人员进行了铁皮石斛组织培养技术的研究。 1 种子萌发 1.1 胚龄:不同种龄的种子萌发率不一样。叶秀嶙等取铁皮石斛2~ 6 个月种龄的种子进行组织培养发现,种龄愈长,萌发率愈高。2 个月种龄的种子接入改良N6培养基中,萌发率仅为6 % ; 3 个月种龄的种子接入改良叹培养基中,培养2 周后开始萌发,萌发率为87 % ; 4 一6 个月种龄的种子接入培养基中,只要培养一周即可萌发,萌发率为9 5 %。 1.2 基本培养基:铁皮石斛种子在N6,改良N6,MS , 1 / 2 MS , SH 、KS 、VW 、KundsonC , 1 / 2N6,White等培养基上均可萌发。赵天榜等比较风、MS 等14 种培养基对铁皮石斛种胚成苗率的影响,除残外,所有的基本培养基均优于其减半培养基,其中以N6最好,SH 、Kn 、MS 次之,l /2MS 、1 / 2 Vw 最差。 1.3 激素:在培养基中添加一定浓度的NAA 可促进种子的萌发,浓度以0.2 一0.5mg/L最适合胚的萌发和生长,过高起抑制作用。2 , 4-D对胚的萌发起抑制作用。6 一BA 对胚萌发后的生长起抑制作用。KT 、IAA对胚萌发和成苗的影响不大,当浓度超过1mg/L 时,对胚萌发和成苗起抑制作用。 1.4 天然添加物:在培养基中添加适量的马铃薯汁、香蕉汁、椰乳可促进铁皮石斛种胚的萌发, 1.5 炭源:在组培过程中适当添加活性炭,可以吸附代谢过程中产生的废弃物,防止组织褐变,并刺激胚胎的发生与生根,可加人2 %蔗糖。 2 原球茎增殖 2.1 基本培养基:铁皮石斛原球茎增殖可以1/2 MS,MS等作为基本培养基。 2.2 激素:适宜的NAA 、KT 、6 一BA 浓度对原球茎的增殖起促

铁皮石斛栽培技术研究进展【论文】

铁皮石斛栽培技术研究进展 摘要:通过对近年来国内外关于铁皮石斛栽培技术的相关文献进行归纳和总结,发现适合铁皮石斛的种植基质多种多样,这些基质有共性,也有特性。通过对其栽培环境因子的研究,为合理开发和种植铁皮石斛提供理论依据。 关键词:石斛;基质;栽培模式;肥料 1基质 1.1菌渣∶水苔 栽培食用菌后的培养料称为菌渣,富含纤维素、维生素、抗生素、木质素、矿质元素和其他生物活性物质。陈世昌等的研究表明,添加适宜菌渣,可以增加土壤孔隙度,降低土壤容重[5]。唐敏[6]设计了5种栽培基质:A(菌渣∶水苔=1∶9)、B(菌渣∶水苔=3∶7)、C(菌渣∶水苔=5∶5、D(菌渣∶水苔=4∶6)、CK(菌渣∶水苔=0∶10),结果表明,当菌渣和水苔的比例为3∶7时,其基质对铁皮石斛的根长、根数、苗高、生长速度和存活率起到了较明显的促进作用。我们每年产生的菌渣至少400万t,传统的处理方法为燃烧

或丢弃,但会造成环境污染,这也为菌渣的合理开发开辟了新的途径。 1.2松树皮∶泥炭土 谢静等[7]所做试验设3个处理,分别为松树皮∶泥炭土=2∶1、松树皮、松树皮∶蔗渣=2∶1,结果表明,松树皮与泥炭土体积比为2∶1时能显著促进铁皮石斛节数、根数增多,茎伸长,增加鲜叶和鲜条产量,提高生物量,总体情况显著优于其他处理。蔗渣因其通气性差,基质潮湿,容易造成根系腐烂死亡,从而影响铁皮石斛生长。 1.3细陶粒∶腐殖土 李关艳等[8]以细陶粒、珍珠岩、腐殖土、椰糠、刨花、泥炭6种基质配制不同的混合基质进行炼苗筛选,具体试验设计如下:珍珠岩∶细陶粒(1∶1、1∶2、1∶3)、珍珠岩∶腐殖土(1∶1、1∶2、1∶3)、珍珠岩∶泥炭(1∶1、1∶2、1∶3)、珍珠岩∶椰糠(1∶1、1∶2、1∶3)、珍珠岩∶刨花(1∶1、1∶2、1∶3)、细陶粒∶腐殖土(1∶1、1∶2、1∶3)、细陶粒∶泥炭(1∶1、1∶2、1∶3)、细陶粒∶椰糠(1∶1、1∶2、1∶3)、细陶粒∶刨花(1∶1、1∶2、1∶

石斛组织培养研究进展

石斛组织培养研究进展 张明1,夏鸿西2,朱利泉2,张玉进2 (1.重庆市中药研究院,重庆400065; 2.西南农业大学,重庆400716) [摘要]目的:综述国内外对石斛组织培养进行的深入研究。方法:系统查阅国内外近10年来的有关文献20余篇。结果与结论:介绍了石斛组培的多种方法,对培养基、激素及多种条件对组培的影响作了论述,并提出了存在的问题及对策。 石斛属Dendrobium为兰科第2大属,多年生草本植物,全球计有1 500种。多生于树皮或岩石上,开花多,结果少,每果可含100万粒种子。种子细如粉尘[1],每粒重约0.3~0.4μg。种胚不超过球形阶段,即存在后熟现象。由于缺乏胚乳组织,需与真菌共生(symbiotical)才能萌发,自然条件下发芽率一般不及5%。石斛为合轴生长(sympodial),分株是其繁殖的主要方式,对生长条件的要求较为苛刻。石斛属植物中有不少是名贵中药,在《本草纲目》中石斛被列为上品。我国76种石斛属植物中有近40种作药用[2],著名的有 D.nobile(金钗石斛)、D.candium(铁皮石斛)、D.huosanness(霍山石斛)等。具有强阴益精、补肾益力、轻生延年等作用,其应用范围正迅速扩大。石斛属植物约有四分之一可供观赏[3],称为石斛兰 D.orchids,以花艳丽而著称,近年作为观赏植物发展迅速,已形成独立产业。集药用和观赏于一体的价值,加之过度的采伐利用和繁殖率低,造成了石斛供需之间的紧张状况,

我国已将其列为濒于绝灭的受保护的中药品种之一。自1960年法国人Gmorel利用石斛基尖组织培养无病毒植株的无性繁殖技术创立以来,石斛组织培养逐步走向深入化。近年来,石斛组织培养的最佳条件,包括光照、温度、pH以及如何选用外植体,选用激素等取得长足进展,并利用组培技术研究种子萌发过程中的生理生化变化等,还获得了转基因石斛植株。我国石斛组织培养研究起步较晚,直到1984年,徐云鹏等才首次报道获得霍山石斛试管苗[4]。此后又利用铁皮石斛、束花石斛、兜唇石斛的茎尖、叶尖或种胚获得了再生植株。 1石斛组织培养再生植株的获得 组织培养获得石斛再生植物株的途径有器官发生型和原球茎发生型两种。器官发生型通过外植体组织培养,使预先存在的分生组织形成芽(如腋芽)或不定分生组织(如子叶、茎段、愈伤组织等)形成不定芽。此途径又可分为3种类型:无菌短枝型(又称节培法),芽增殖型,器官发生型;原球茎发生途径通过石斛适宜外植体诱导产生胚性愈伤组织并增殖,随后形成类胚组织原球茎进而发育成完整的再生植株。通常由种子离体培养产生的胚性组织称原球茎(protocorm),而上外植体叶尖、基尖等诱导形成的胚性组织称为拟原球茎(protocorm like bodies)即PLBs。原球茎或拟原球茎转入不含任何激素或生长素的培养基(如MS)便可再生出完整小植株。 1.1原球茎发生 影响原球茎发生的主要有外植体的大小、来源、生理状态、培养基类型、激素浓度,种类、处理时间及一些其它因素。

铁皮石斛多糖的研究进展

铁皮石斛多糖的研究进展 xx (xx,xx,xx) 摘要:以系统的文献调研为基础,对兰科石斛属植物铁皮石斛多糖的含量、药理作用、提取方法和组成加以综述。该文对其多糖的含量、药理作用、提取方法和组成等方面做了详细而全面的总结,为今后铁皮石斛药用资源的更好的开发利用提供参考。 关键词: 铁皮石斛多糖药效药用资源 1 引言 铁皮石斛(Dendrobium officinale Kimura et Migo),是兰科(Orchidaceae)石斛属(Dendrobium)多年生附生草本植物[1],一种名贵珍稀濒危的中药材。自古以来就有“植物熊猫”、“救命仙草”的美誉。其主要分布于西南部(大别山)、东部(鄞县、天台、仙居)、西部(宁化)、广西西北部(天峨)、(地点不详)、东南部(石屏、、麻栗坡、西畴)。生于海拔达1600米的山地半阴湿的岩石上[2]。铁皮石斛具有滋阴清热、生津益胃、润肺止咳等功效,位列“中华九大仙草之首”,被录入2010版药典[3]。由于铁皮石斛在自然条件下生长的环境较为苛刻,加上人们过度采挖,导致野生的铁皮石斛资源濒临灭绝。目前铁皮石斛已经实现了人工栽培,但一般也不易成活。铁皮石斛主要含有多糖、生物碱、氨基酸、酚类化合物等化学成分。现代药理研究表明铁皮石斛在增强免疫力、抗肿瘤、抗氧化、抗疲劳、降血糖、生津、镇咳等方面有多种功效[4]。本文就铁皮石斛多糖的含量、药理作用、提取方法和组成等方面研究工作进行概述。

2 铁皮石斛多糖含量的研究 近年来,铁皮石斛多糖的研究得到了人们越来越多的关注。由于铁皮石斛多糖是铁皮石斛的主要成分,其含量较高,还具有提高免疫力、抗氧化、抗肿瘤等功效,使得铁皮石斛在医学上具有极大的应用前景。 多糖的含量测定方法有苯酚-硫酸法[5]、3,5-二硝基水酸法[6]、分子光谱法[7]等。 2.1 不同器官组织、不同生长期多糖含量不同 无论是野生苗还是人工栽培苗,都是茎中多糖含量最高,又尤以二年生的茎中多糖含量最高。 何铁光[8]发现,野生铁皮石斛茎中的多糖含量随年份不同含量差异较大,多年生茎中的多糖含量最高,其次是叶。华允芬[9]也发现铁皮石斛的多糖含量是茎>根;尚喜雨[10]对铁皮石斛的组培苗、野生植株、栽培植株中多糖的含量及分布进行了系统的分析和研究,也发现铁皮石斛的多糖含量很高,尤以茎段为最;不同部位的含量存在一定差异,茎部的差异要大于根、叶。这说明传统用药上铁皮石斛以茎为入药部分在主要化学成分分析上是合理的。 何铁光[11]对铁皮石斛的组培产物原球茎的多糖含量进行了测定,发现原球茎与野生品的多糖和总氨基酸含量相近。初步证明以组织培养获得的铁皮石斛原球茎代替其野生品是解决铁皮石斛资源紧缺的有效途径。 2.2 不同品种铁皮石斛的多糖含量不同

中药铁皮石斛研究概况-宋晓艳

118 第17卷 第8期 2015?年?8?月 辽宁中医药大学学报 JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCM Vol. 17 No. 8 Aug .,2015 铁皮石斛来源于兰科植物铁皮石斛 (Dendrobium officinale Kimura et Migo )的干燥茎,又名黑节草、铁吊兰等,是一种极为珍稀的中药材。2005版《中华人民共和国药典》记载铁皮石斛为兰科石斛的一个品种,而2010版《中华人民共和国药典》把铁皮石斛作为单列药材品种。铁皮石斛剪去部分须根,边加热边扭成螺旋形或是弹簧状,烘干, 称“铁皮枫斗”(耳环石斛)[1] 。在《神农本草经》中铁皮石斛被列为上品,性寒,味甘、淡、微咸,归胃、肺、肾经,功效为益胃生津、滋阴清热。用于阴伤津亏,口干烦渴,食少干呕,病后虚热,目暗不明[2]。当今,时代的快速发展,生活节奏的加快,越来越多的人出于亚健康的状态,需要滋补调理的人也越来越多,以铁皮石斛为原料开发的保健品越来越多,其药食两用也渐渐被青睐。但是,铁皮石斛的生长环境极为苛刻,自然产量极低,其野生资源已濒临绝种, 被国家列为2级保护植物[3] 。所以,对铁皮石斛要更加的关注和保护。本文从以下几个方面对铁皮石斛进行研究综述。 1 组织快速繁殖的研究 铁皮石斛的种子极为细小,胚胎发育不完全, 无胚乳,在自然状态下发芽率极低,有性繁殖极为困 难。利用组织快速繁殖幼苗的方法成为人工栽培铁皮石斛的最佳途径之一。铁皮石斛组织培养过程与外植体的种类、培养基、激素、有机提取物(马铃薯汁、椰子汁、苹果汁、香蕉提取液等)、无机添加物(活 性炭、硒)等有关[4] 。 1.1?种子外植体的培养 以种子作为外植体的报道,大多采用种子→原球茎→愈伤原球茎的增生和分化→壮苗生根→小植株[5],这种组织培养过程耗费的时间特别长,邓瑞云等[6] 研究建立种子萌发最适培养基为1/2 MS+0.2 mg/L 萘乙酸(NAA )+100 g/L马铃薯汁+ 25 g/L 蔗糖汁,小苗增殖最适培养基为1/2 MS+0.2 mg/L NAA+100 g/L 马铃薯汁(或香蕉汁)+ 25 g/L 蔗糖汁+0.5 g/L 活性炭,壮苗与生根最适培养基为1/2 MS+0.2 mg/L NAA+100 g/L 香蕉汁+25 g/L 蔗糖汁+0.5 g/L 活性炭,使种子直接萌发成小苗,缩短组培育苗的时间。 1.2?茎段外植体的培养 由于大多试管苗茎细,苗弱,脱瓶移栽成活率 低,朱艳等[7] 取铁皮石斛茎段进行组织培养,这样既可获得一定数量的试管苗,又为进一步的移植栽培试验提供了种苗,由此也建立了一套茎段快速繁殖的体系,丛芽最适合的培养基1/2 MS+10%香蕉 中药铁皮石斛研究概况 宋晓艳1,2 ,冯晓2,赵雪梅2 (1.山东中医药大学,山东?济南?250355;2.山东大学附属省立医院,山东?济南?250021) 摘 要: 铁皮石斛是药食两用名贵中药之一,石斛中之极品,具有独特的药用价值,应用极其广泛。其含有多糖、氨基酸、挥发油等多种化学成分,具有抗氧化、抗肿瘤、降血糖等多种生物活性。该文就铁皮石斛组织快速繁殖培养、化学成分、药理作用、临床应用方面进行了综述概况。这对其药用价值和开发利用价值的进一步研究提供重要前提。 关键词:铁皮石斛;组织培养;化学成分;药理作用;临床应用 中图分类号:R284 文献标志码:A 文章编号:1673-842X (2015) 08- 0118- 03 收稿日期:2014-12-30 基金项目:山东省中医药科技发展计划项目(2013-189)作者简介:宋晓艳(1987-),女,山东潍坊人,硕士研究生,研究方向:中药新制剂与临床药学。通讯作者:赵雪梅(1964-),女,山东潍坊人,主任药师,硕士研究生导师,博士,研究方向:中药新制剂与临床药学。 Introduction to Research Progress of Dendrobium Officinale Kimura Et Migo SONG Xiaoyan 1,2 ,FENG Xiao 2,ZHAO Xuemei 2 (1.Shangdong University of Traditional Chinese Medicine,Ji'nan 250355,Shandong,China;2.Shangdong Provincial Hospital Affiliated to Shangdong University,Ji'nan 250021,Shandong,China)Abstract:Dendrobium is affiliated one of edible expensive medicine and need Dendrobium ,it has a unique medicinal value and an extremely wide application. It contains polysaccharides,amino acids,volatile oil,et. It has function of antioxidant,antitumor,hypoglycemic. To make a summary of tissure culture,chemical constituents,pharmacology,clinical application of Dendrobium officinale Kimura et Migo ,which provides medicinal value and exploitation value for the further study of the important prime. Key words:Dendrobium officinale Kimura et Migo ;tissure culture;chemical constituents;pharmacology;clinical application DOI:10.13194/j.issn.1673-842x.2015.08.039

铁皮石斛种子的组织培养

铁皮石斛种子的组织培养 考虑了好久,在网上买了一粒种子,不是不舍得,就是不知道是不是真的铁皮石斛,终于下手了,管他呢,至少是石斛吧,O(∩_∩)O~ 种子是买回来了,又犯懒了,本人最大的毛病就是思想很勤快,要是干实事,很懒,我是没见过我这么懒的人。懒也得做啊,种子再开口了怎么办?狠狠心开始干! 准备:首先是配制培养基,查了下资料,种子的无菌萌发培养基为1/2ms培养基,蔗糖20g,我稍微做了下调整,培养基1/2ms,蔗糖由20g变成25,琼脂为5g。 无菌萌发培养基:1/2ms培养基+蔗糖25g+琼脂5g(灭完菌接种的时候才发现,有点硬了!) 首先,我没有蒸馏水,用的就是大桶水,(态度不严谨啊O(∩_∩)O哈哈~)把琼脂5g,1/2ms培养基 2.14g,蔗糖25g一股脑的倒入800ml的冷水里 (注:个人认为,琼脂在开水的时候倒入容易结块,不容易溶解,当然用温水是好的,但何必呢,所以先倒入冷水,然后再加热,大家以为对不对啊), 轻轻的搅拌,让培养基和蔗糖完全溶解,然后定容,注意,定容的时候要定容到1100ml,因为我们在加热的时候还有高压灭菌的时候,会有大量的水蒸气出现,多出的100ml是减少这部分的损失。

然后测量一下ph值,大概在3.4(当时记录了,但后来不知道弄哪里去了,也可能是4.2),先不管他,加热溶解!把烧杯放到液化气灶上开最小火,把烧杯放上,然后开始加热边搅 拌............................ 好漫长啊! 大概10分钟的样子,终于好了,拿下来,开始测量ph值,然后慢慢的一滴一滴的加入氢氧化钠溶液边搅拌边测量,5.8!

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