石斛中多糖含量的测定
题目石斛中多糖含量的测定
学生姓名高换楼学号1111034082所在学院化学与环境科学学院
专业班级化工1102班
指导教师季晓晖
完成地点陕西理工学院
2015 年 06 月 08 日
石斛中多糖含量的测定
高换楼
（陕西理工学院化学与环境科学学院化工专业1102班，陕西汉中723001）
季晓晖
[摘要] 石斛为我国常用贵重药材，有养阴清热、益胃生津的功效，石斛一直备受国内外研究者的重视。本文利用蒽酮-硫酸法对铁皮石斛多糖的含量进行了测定，并采用正交试验得到最佳实验方案，在石斛粉碎程度为粉末、液料比为50mL/g、提取2次，每次3小时的情况下多糖提取率最高。本文的实验结果为今后铁皮石斛多糖提取的质量评价及其进一步开发和利用提供参考依据。
[关键词] 石斛；多糖；蒽酮-硫酸法；抗氧化性；测定；
Determination of Dendrobium polysaccharide content
GAO Huanlou
（Grade 02, Class 11, Major chemical engineering, School of chemical and environmental science Dept, Shaanxi University of Technology, Hanzhong 72300x, Shaanxi）
Tutor: JI Xiaohui
Abstract: Dendrobium is in common use in our country precious medicinal herbs, the effect of nourishing yin and clearing heat, nourishing stomach fluid, Dendrobium has attracted a lot of attention of researchers at home and abroad. The anthrone-sulfuric acid method of Dendrobium officinale polysaccharide content were measured, and using the orthogonal test and the optimum solution is obtained. In Dendrobium degree of comminution is in the form of powder, liquid to solid ratio for 50mL/1g, extraction 2 times, every time 3 hours of polysaccharides extraction rate was the highest. The experimental results for the quality evaluation of future Dendrobium officinale polysaccharide extraction and its further development and utilization to provide reference.
Key words: Dendrobium; polysaccharide; anthrone-sulfuric acid method; antioxidation; determination;
目录
1论文综述 (1)
1.1石斛生物碱 (1)
1.2石斛多糖 (1)
1.3铁皮石斛的其他化学成分 (3)
1.3.1氨基酸类 (5)
1.3.2微量元素 (5)
1.3.3木脂素类 (5)
1.3.4酚酸类 (5)
1.3.5苯丙素类 (6)
1.3.6芪类其衍生物 (6)
1.3.7菲类和联苄类化合物 (7)
1.4石斛的药理作用 (7)
1.4.1增强机体免疫作用 (7)
1.4.2抗氧化作用 (7)
1.4.3抗肿瘤作用 (7)
1.4.4抗疲劳作用 (8)
1.4.5降血糖作用 (8)
1.4.6生津作用 (8)
1.4.7其他药理作用 (8)
2实验 (8)
2.1材料和试剂、仪器 (8)
2.1.1仪器 (8)
2.1.2材料及试剂 (9)
2.2试验方法 (9)
2.2.1预处理与纯化过程 (9)
2.2.2样品制备及试剂配制 (9)
2.2.3测定 (9)
2.2.4铁皮石斛多糖抗氧化性测定 (10)
2.2.5多糖提取的正交试验 (10)
2.2.3计算 (11)
2.2.5结果与分析 (11)
3结论 (13)
4外文翻译 ................................................................................................................... 错误！未定义书签。
1论文综述
石斛是我国传统常用名贵中药材，为兰科（Orchidaceae）石斛属（DendrobiumS.w）多种植物的干燥茎的统称。在我国已有2000多年的药用历史，早在《神农本草经》、《本草纲目》等著作中就有记载，并列居上品。著名的有金钗石斛（D.nobile Lindl）、铁皮石斛（D.officinale Kimura et Migo）、霍山石斛（D.huoshanense）[1]等。目前我国76种石斛属植物中，有近40种被作为药用。传统中医常将其用于滋阴清热、生津益胃、止咳润肺、清音明目等[2]。现代药理研究表明石斛具有多种医药功效，可预防和治疗白内障、增强免疫功能、治疗肿瘤、降血糖、抗氧化等，在临床中应用相当广泛。化学成分分析显示，药用石斛所含的化学成分类型多样，包括生物碱、多糖、菲类、联苄类、黄酮类、倍半萜类、香豆素、甾体及挥发油等[3]。
1.1石斛生物碱
生物碱是石斛药材中最重要的活性成分之一，也是最早分离并进行结构确认的化合物。1932年，日本人铃木秀干在中药金钗石斛（D.nobile）中首次分离获得一种生物碱，命名为石解碱（Dendrobine）[4]。1935年，陈克恢等再次在金钗石斛中分离得到石斛碱，并测定金钗石斛中总生物碱的含量为0.52%[5]。1964年，犬伏康夫等确定石斛碱具有倍半萜骨架结构[6]。迄今为止，已经从16种石斛属植物分离得到32种生物碱，主要骨架共分为四大类即石斛碱型、八氢中氮茚型、四氢比咯型和咪唑型[7]。石斛碱型石斛碱是石斛属植物中存在最多的一类重要生物碱，共有19种；其基本骨架是含有15个C的picrotoxane型倍半萜；它含有一个五元内酯环，N与picrotoxane倍半萜的2位与11位形成五元杂环，N上通常连有甲基等官能团。按其骨架结构变化，石斛碱型石斛碱又分为七种骨架类型[7-10]。1997年，台湾学者Sha等首次通过α-羰基游离基环化反应全合成了纯手性的石斛碱（—）-dendrobine[8]。2000年，日本学者Morita等从金钗石斛中分离得到一种很少见的五元内酯开环的石斛碱型生物碱—Mubironine C（C17H29O3N），其15位与3位的γ内酯断开。八氢中氮茚（octahydroindolizone）类[7,10-12]石斛碱是一种含有一个氮原子的五元和六元并环体系的生物碱，该类生物碱共有6种。四氢比咯型[7,13-16]生物碱共有5种，Leete等用放射性标记化合物[1—14C]-醋酸钠和[4,2′—14C]邻琥珀酰基苯甲酸加入报春石斛的生长过程，发现[1—14C]-醋酸钠中的14C主要存于该类石斛碱的第5位C上，提出琥珀酰苯甲酸是其合成前体，Breuer等[16]以邻羧基苯基环丙酮为原料水解得到了一种四氢比咯型生物碱石斛宁（shihunine）。咪唑型[17,18]生物碱有一个典型的咪唑环结构，该类生物碱有2种，1993年，Hemscheidt等[18]根据标记的3C和15N研究其生物合成途径，推测该类生物碱可由D,L-赖氨酸生物合成。
前期研究报道，铁皮石斛的生物碱含量只有金钗石斛的1/20[1]。金钗石斛含较多生物碱，其一年生含量最高，为0.5489%，随年份增加，其含量依次减少;铁皮石斛中几乎不含生物碱，三年生最高也仅含0.0121%[3]。此外，文献报道野生石斛茎叶中总生物碱的含量仅有0.3%[2]，文中发现人工培植的金钗石斛中总生物碱含量高于野生品种，为0.5489%，因此，预测人工培植品将可替代野生品。铁皮石斛中总生物碱含量较低，诸燕等[19]研究发现，人工栽培的铁皮石斛与市场购买的铁皮枫斗药材总生物碱在0.0190%～0.0430%；浙江省11个铁皮石斛种质一年生、二年生、三年生样品平均总生物碱为0.0253%、0.0270%、0.0326%，云南产一年生铁皮石斛平均总生物碱为0.0343%。1.2石斛多糖
石斛多糖是石斛类中药材的主要有效成分，为大分子化合物，是铁皮石斛的主要药效成分。目前对中药多糖的分析以含量和单糖组成分析为主，特别是后者，在分析仪器的普及、色谱及色谱联用技术的发展等因素的推动下，已经成为2010年版药典铁皮石斛质量标准的检测方法之一。
多糖类成分的化学结构复杂：一级结构主要反映糖链的糖基组成、各种组成单糖的分子数比例、单糖残基的构型、残基之间的连接次序等内容，单糖残基的排列顺序对多糖的活性有影响；二级结构反映多糖骨架链的构象；三级结构反映了单糖残基中各官能团之间非共价作用形成的有序、规则而粗大的空间构象；四级结构指多聚链间非共价键结合形成的聚集体。多糖的高级结构与其生物学功能密切相关。目前铁皮石斛多糖研究以含量测定和一级结构研究为主，在此基础上2010年版《中国药典》制定了专属性更强的铁皮石斛鉴别和含量测定方法；同时，铁皮石斛多糖的指纹图谱分析、
高级结构、构效关系、生物化学等方面的研究还有待继续深入地开展。相信随着色谱、电泳等现代分离技术的发展，质谱技术在生物大分子质量与结构分析中、色谱-质谱联用技术在化学成分定性、定量分析中的广泛应用，铁皮石斛多糖的活性成分及结构功能通过相关药效学的研究将能够得到明确的界定。在此基础上，铁皮石斛的质量标准会有质的提高[20]。
多糖其含量多少是评价药材品质的重要指标之一。王建[21]等人的实验结果显示，广西6个产地的马鞭石斛中多糖的含量差异较大，其中以田阳县的马鞭石斛的多糖含量最高，达11.85%，其他产地的马鞭石斛多糖含量分别为10.93%、10.08%、4.18%、4.39%、5.20%。因石斛为多年生植物，有效成分的积累与其生长年限、生长环境等都存在着密切的联系。不同产地的马鞭石斛之间多糖含量差别较大，可能与以上因素有一定的关系。
诸燕等[19]研究浙江人工栽培的铁皮石斛，发现二年生铁皮石斛多糖平均质量分数达34.47%；不同种质、生理年龄的铁皮石斛多糖质量分数存在显著差异。李彩霞[20]比较不同采收期铁皮石斛多糖含量，春季（3月）、夏季（6月）、秋季（9月）和冬季（12月）的铁皮石斛多糖含量分别为4.59%、5.37%、5.92%和6.24%，以冬季采收为佳。尚喜雨[23]对铁皮石斛的组培苗、野生植株、栽培植株中多糖的含量及分布进行系统分析和研究，发现铁皮石斛的多糖含量很高，尤以茎段为最多；不同部位的含量存在一定差异，茎部的差异大于根和叶；人工栽培的两年生植株的多糖含量比一年生的多，野生型的比栽培型的多；杀青后烘干处理可以有效地减少多糖在处理过程中的损失。
在前人研究基础上，近10年从铁皮石斛中分离得到更多的多糖。杨虹等[24]分离得到两个多糖，即DT2和DT3，分子量分别为7.4×10.5和5.4×10.5；DT2和DT3的结构主要以α-（1→4）-D-Glc 缩合而成，末端糖为—1Gal，—1Glc及—1Ara，葡萄糖和半乳糖上含有少量的分支，并含少量的木糖、阿拉伯糖和甘露糖。Hua等[25]分离得到一个结构为O-乙酰葡萄甘露聚糖类型的多糖，主链由β-（1→4）-甘露型吡喃糖基和β-吡喃葡萄糖基重复构成，支链由（1→3）-甘露糖基、（1→3）-葡萄糖基和少量的阿拉伯呋喃糖基组成，支链连接在主链末端糖基的6位上；（1→4）-甘露糖基和葡萄糖基的2位被乙酰化；单糖组成为甘露糖、葡萄糖和阿拉伯糖按40.2∶8.4∶1的摩尔比例组成。何铁光等[26]从铁皮石斛原球茎分离得到均一组分多糖DCPP3c-1，相对分子质量为72.4，由甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖组成，其分子物质的量之比为1.1204∶1∶1.046∶23.354∶3.828∶1.046，DCPP3c-1中1→6键连接的残基占14.0%，1→2或1→4键连接的残基占40.7%，1→3键连接的残基占45.3%。
铁皮石斛多糖的结构特点见表1.1[27]。
表1.1 从铁皮石斛中分离得到的多糖
序号多糖名称分子量单糖组成参考文献
Ⅰ黑节草多糖Ⅰ100000 β0甘露糖型吡喃糖、β露糖型吡喃糖、β
喃糖、葡萄糖、其他戊糖
[28]
Ⅱ黑节草多糖Ⅱ500000 β0甘露糖型吡喃糖、β露糖型吡喃糖、β
喃糖、葡萄糖、其他戊糖
[28]
Ⅲ黑节草多糖Ⅲ120000 β2甘露糖型吡喃糖、β露糖型吡喃糖、β
喃糖、葡萄糖、其他戊糖
[28]
Ⅳ2-O-乙酰葡萄糖
甘露聚糖甘露糖、葡萄糖、阿拉伯糖（40.4∶8.4∶
1）
[29]
ⅤDT2 740000 葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、甘露糖（5.9∶
1.0∶0.8∶0.5）
[30]
ⅥDT3 540000 葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、甘露糖（7.9∶
1.3∶1.0∶0.5∶0.7）
[30]
ⅦDCPP1a-1 189000 甘露糖、葡萄糖（7.015∶1）[31]
多糖含量测定的方法有很多。一类是利用多糖的还原性，如3,5-二硝基水杨酸盐比色法和
Somogyi-Nelson法；另一类是普遍使用的利用多糖在强酸性条件下脱水生成糠醛或其衍生物，再与酚类或胺类化合物缩合，生成有特殊颜色的物质这一性质进行测定，如苯酚-硫酸法和蒽酮硫酸法[32]。苯酚-硫酸法是常用测定多糖含量的方法，可用于甲基化糖、戊糖和多聚糖的测定，方法简单、灵敏度高，试验时基本不受蛋白质存在的影响。蒽酮-硫酸法几乎可以测定所有的碳水化合物，所以用该法测出的多糖含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。
1.3铁皮石斛的其他化学成分
利用先进的检测技术对中药材或其来源植物的化学成分进行定性和定量分析，并结合多元统计分析的方法实现对中药的基源鉴定[20]，陈晓梅等利用此方法对铁皮石斛茎中分离鉴定，其中所含化合物如表1.2所示。
表1.2 铁皮石斛茎中分离鉴定的化合物
化合物类别化合物成分参考文献芪类铁皮石斛素 A dendrocandin A [33]
铁皮石斛素 B dendrocandin B [33]
铁皮石斛素 C dendrocandin C [34]
铁皮石斛素 D dendrocandin D [34]
铁皮石斛素 E dendrocandin E [34]
铁皮石斛素 F dendrocandin F [35]
铁皮石斛素G dendrocandin G [35]
铁皮石斛素H dendrocandin H [35]
铁皮石斛素I dendrocandin I [35]
4,4'-二羟基-3,5-二甲氧基联苄4,4'-dihydroxy-3,5-dimethoxybibenzyl [33]
3,4-二羟基-5,4'-二甲氧基联苄3,4-dihydroxy-5,4'-dimethoxybibenzyl [33]
3'-羟基-3,4,5'-三甲氧基联苄3-O-methylgigantol [33]
4,4'-二羟基-3,3',5-三甲氧基联苄dendrophenol [33]
3,4'-二羟基-5-甲氧基联苄3,4'-dihydroxy-5-methoxybibenzyl [36]
3',4-二羟基-3,5'-二甲氧基联苄gigantol [33]
二氢白藜芦醇dihydroresveratrol [36]
dendromoniliside E [36]
denbinobin [36]
2,4,7-三羟基-9,10-二氢菲2,4,7-trihydroxy-9,10-dihydrophenanthrene [36]
4,5-二羟基-3,3-二甲氧基联苄4,5-dihydroxy-3,3-dimethoxybibenzyl [37]
2,3,4,7-四甲氧基菲2,3,4,7-tetramethoxyphenanthrene [38]
1,5-二羧基-1,2,3,4-四甲氧基菲nakaharain [38]
2,5-二羟基-3,4-二甲氧基菲2,5-dihydroxy-3,4-dimethoxyphenanthrene [38]
2,7-二羧基-3,4,8-三甲氧基菲Confusarin [38]
2,5-二羧基3,4-二甲氧基菲nudol [38]
3,5-二羧基-2,4-二甲氧基菲bulbophyllanthrin [38] 酚类N-p-香豆酰酪胺paprazine [39]
反-N-(4-羟基苯乙基)阿魏酸酰胺moupinamide [39]
二氢松柏醇二氢对羟基桂皮酸酯dhydroconiferyl dihydro-p-cumarate [39]
二氢阿魏酰酪胺dihydro-feruloyltyramine [39]
对羟基苯丙酰酪胺p-hydroxyphenylpropionyl tyramine [39]
丁香酸syringic acid [39]
丁香醛syringaldehyde [39]
香草酸vanillic acid [39]
对羟基苯丙酸p-hydroxy-phenylpropionic acid [37,39]
对羟基桂皮酸p-hydroxy cinnamic acid [37,39]
阿魏酸ferulic acid [39]
对羟基苯甲酸4-hydroxybenzoic acid [39]
松柏醇3-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-2-propen-1-ol [37]
香草醇4-hydroxy-3-methoxybenzyl alcohol [37]
穆坪马兜铃酰胺N-trans-feruloyl tyramine [37]
顺式阿魏酰对羟基苯乙胺[37]
反式桂皮酰对羟基苯乙胺[37]
木质素类(+)-丁香脂素-O-β-D-吡喃葡萄糖
苷
(+)-syringaresinol-β-D-glucopyranoside [40]
Icariol A2-4-O-β-D-glucopyranoside [40]
(+)-lyoniresinol-3a-O-β-D-glucopyranoside [40] 裂异落叶松脂醇(－)-secoisolariciresinol [40]
左旋丁香脂素(－)syringaresinol [37,40]
丁香脂素-4,4-O-双-β-D-葡萄糖
苷
syringaresinol-4,4-O-bis-β-D-glucoside [40] 二氢丁香苷Dihydrosyringin [39]
酚苷类koaburaside [39] 3,4,5-三甲氧基苯基-1-O-β-D-芹
糖-(1→2)-β-D-葡萄糖苷
khaephuouside [40] 4-羟基-2,6-二甲氧基苯基葡萄糖
苷
leonuriside A [40]
2-甲氧基苯基-1-O-β-D-芹糖-(1→2)-β-D-葡萄糖苷2-methoxyphenyl-1-O-β-D-apiofuromosyl-(1
→1-ap-D-glucopyranoside
[40]
4-烯丙基-2,6-二甲氧基苯基葡萄
糖苷
[37]
金盏花苷ⅡErigeside Ⅱ,dictamnoside A [39]
核苷类腺苷adenosine [36] 尿苷uridine [36]
鸟苷guanosine [36]
内酯类钩状石斛素aduncin [36] 洋地黄内酯,金盏菊花素digiprolactone,calendin [36]
黄酮类柚皮素,4',5,7-三羟基二氢黄酮naringenin [37,39] 3',5,5',7-四羟基二氢黄酮3',5,5',7-tetrahydroxyflavanone [39]
甾类胡萝卜苷daucosterol [36] β-谷甾醇β-sitosterol [36]
脂肪酸酯反式阿魏酸二十八烷基酯n-octacostyl ferulate [36] 对羟基反式肉桂酸三十烷基酯defuscin [36]
对羟基顺式肉桂酸三十烷基酯n-triacontyl cis-p-coumarate [36]
脂肪酸十六烷酸hexadecanoic acid [36] 十七烷酸heptadecanoic acid [36]
脂肪醇三十一烷醇hentriacontane [36]
苯丙素苷（1R）-1-（4-羟基-3,5-二甲氧基
苯基)-1-丙醇-4-O-β-D-葡萄糖苷(1R)-1-(4-hydroxy-3,5-dimethoxylphenyl)prop
an-1-ol-4-O-β-D-glucopyranoside
[40]
糖类蔗糖sucrose [36]
其他5-羟甲基糠醛5-hydroxymethyl-furaldehyde [36]
在植物化学研究方面，李燕等[33-35,37,41]从铁皮石斛茎中分离鉴定了27个联苄类化合物。杨莉等[42]报道，用HPLC分析了31种石斛属植物（不包括铁皮石斛）中的11个酚性成分（包括联苄化合
物5个，菲和芴酮化合物各3个），发现联苄化合物在石斛属植物中普遍存在，其中3',4-二羟基-3,5'-二甲氧基联苄（gigantol）和4,4'-二羟基-3,3',5-三甲氧基联苄（moscatilin）在检测植物中的分布最广。陈晓梅等[43]分析了包括铁皮石斛在内的24种石斛属植物62份样品的化学成分，得到了类似的结果，并发现野生铁皮石斛的联苄含量高于人工栽培的，说明人工栽培铁皮石斛中小分子化学成分的积累与野生铁皮石斛的存在差别。联苄成分在铁皮石斛样品中的含量均较低，3,4-二羟基-4',5-二甲氧基联苄的平均含量最高，仅为0.05‰；且目前还没有关于该化合物药理活性研究的报道。研究联苄成分与铁皮石斛功效的关系，将有助于明确铁皮石斛的药效成分，提高药材的质量控制标准。
根据陈晓梅等[43]的报道，采集自云南省、浙江省和贵州省的12个铁皮石斛样品中均能检测到柚皮素（4,5,7-三羟基黄烷酮，naringenin）和3,4-二羟基-4',5-二甲氧基联苄。此外，这两个成分在石斛属植物中也有较广泛的分布：柚皮素在20种植物的56份样品中存在；3,4-二羟基-4',5-二甲氧基联苄在13种植物的40份样品中存在。以植物样品中柚皮素、3,4-二羟基-4',5-二甲氧基联苄、gigantol和moscatilin等4个化合物含量、多糖含量、以及多糖的单糖组成中甘露糖和葡萄糖相对含量比（M/G）为预测变量，利用多元统计分析的判别分析（discriminant analysis）建立判别函数，能将铁皮石斛与4种近似植物：晶帽石斛、齿瓣石斛、兜唇石斛和束花石斛完全区别开来。这一结果同时说明柚皮素、联苄和多糖等化学成分对石斛属植物的鉴别有重要意义。引入多种类型化学成分的指标进行判别分析，有助于提高研究对象分类的准确性。
1.3.1氨基酸类
铁皮石斛含有天门冬氨酸、谷氨酸、甘氨酸、缬氨酸、亮氨酸、苏氨酸、丝氨酸、丙氨酸、胱氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、赖氨酸、组氨酸、精氨酸、脯氨酸、酪氨酸等16种氨基酸，前5种占总氨基酸的53％，含有除色氨酸以外的所有人体必须的氨基酸[44]。人工培养铁皮石斛圆球体及分化苗中含有除上述16种氨基酸外，还含苯丙氨酸，其中7种是人体必需但又不能自身合成的氨基酸[45]。
1.3.2微量元素
诸燕等[19]测定铁皮石斛中11种金属元素含量，发现铁皮石斛中钾、钙、镁、锰、锌、铬和铜平均质量分数分别为1205.23、766.82、158.25、31.06、4.28、8.28、0.97mg/kg，砷、汞、铅和镉4种重金属元素含量，除1个样品镉元素超过限量指标0.07mg/kg外，均在规定限度范围内，并且种质与生理年龄对金属元素的积累存在显著影响[46]。
在人工铁皮石斛、原球茎组织培养物、铁皮枫斗与铁皮石斛胶囊中，10种主要微量元素Cu、Zn、Fe、Mn、Ca、Mg、K、Cr、Sr、B含量非常相近[47]。且原球茎组织培养物的9种微量元素（除Cu外）含量均最高。由此提示，以滋补作用为研究方向，铁皮石斛具有巨大的开发价值。
1.3.3木脂素类
已报道[44,48](+)-丁香脂素-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、icariol A2-4-O-β-D-glucopy-ranoside、(+)-lyoniresinol-3a-O-β-D-glucopyranoside、裂异落叶松脂醇、丁香脂素-4,4'-O-双-β-D-葡萄糖苷和丁香脂素等木脂素类化合物。
1.3.4酚酸类
已报道[41,48-51]koaburaside、丁香酸、丁香醛、香草酸、对羟基苯甲酸、松柏醇、香草醇、4-烯丙基-2,6-二甲氧基苯基葡萄糖苷、2-甲氧基苯基-1-O-β-D-芹糖-(1→2)-β-D-葡萄糖苷、3,4,5-三甲氧基苯基-1-O-β-D-芹糖-(1→2)-β-D-葡萄糖苷和(1'R)-1'-(4-羟基-3,5-二甲氧基苯基)-1-丙醇-4-O-β-D-葡萄糖苷等酚酸类化合物。
1.3.5苯丙素类
已发现[41,48](E)-对羟基苯丙酸、对羟基桂皮酸、反式桂皮酸酰对羟基苯乙胺、顺式阿魏酸酰对羟基苯乙胺、阿魏酸、dictamnoside A、反式阿魏酸二十八烷基酯、对羟基反式肉桂酸三十烷基酯、对羟基顺式肉桂酸三十烷基酯、4-烯丙基-2,6-二甲氧基苯基葡萄糖苷和二氢松柏醇二氢对羟基桂皮酸酯等苯丙素类化合物。
1.3.6芪类其衍生物
从石斛中分离出来的芪类化合物主要包括联苄、二氮杂菲等，其药理活性主要为抗肿瘤。目前从铁皮石斛中分离鉴定的芪类化合物有：双苄酚类及菲酚类化合物毛兰素（erianin）和鼓槌菲（chysotoxene）；菲醌母核金钗石斛菲醌（denbinobin）[52]；联苄类化合物dendrocandinA，dendrocandin B，dendrocandin C，dendrocandinD和dendrocandin E[53]4,4’-dihydroxy-3,5-dimethoxybibenzyl，3,4-dihydroxy-5,4’-dimethoxybibenzyl，3-O-methylgigantol，dendrophenol和石斛酚（gigantol）[54]。上述化合物结构特点见表1.3、图1.1。
表1.3 铁皮石斛中芪类化合物结构
类型化合物名称结构参考文献
菲酚类chysotoxene Ⅰ[55]
联苄类Erianin Ⅱ[55]
菲醌类denbinobin Ⅲ[52]
联苄类dendrocandin A Ⅳ：R1=R2=OH.R3=R5=R6=OCH3.R4=H [53]
联苄类dendrocandin B Ⅴ[53]
联苄类dendrocandin C Ⅵ：R1=R2=R5=OH,R3=R6=OCH3.R4=H [54]
联苄类dendrocandin D Ⅵ：R1=R2=R5=OH,R3=OCH3,R6=OCH3,R4=H [54]
联苄类dendrocandin E Ⅵ：R1=R2=R4=R5=OH,R3=OCH3,R6=H [54]
Ⅳ：R2=R5=OH,R1=R3=OCH3,R4=R6=H [53] 联苄类4,4’-dihydroxy-3,5-di
methoxybibenzyl
联苄类3,4-dihydroxy-5,4’-di
Ⅳ：R1=R2=OH,R3=R5=OCH3,R4=R6=H [53]
methoxybibenzyl
联苄类3-O-methylgigantol IV：R1=OH,R3=R4=R5=OCH3,R2=R6=H [53]
联苄类dendrophenol IV：R2=R4=R5=OH,R1=R3=OCH3.R6=H [53]
联苄类gigantol IV：R1=R5=OH,R3=R4=OCH3,R2=R6=H [53]
图1.1 铁皮石斛中芪类化合物母核
1.3.7菲类和联苄类化合物
李榕生等[56]从铁皮石斛乙醇提取物中得到6个化合物：2,3,4,7-四甲氧基菲、1,5-二羧基-1,2,3,4-四甲氧基菲、2,5-二羟基-3,4-二甲氧基菲、2,7-二羧基-3,4,8-三甲氧基菲、2,5-二羧基-3,4-二甲氧基菲、3,5-二羧基-2,4-二甲氧基菲。李燕等[41]分离得到denbinobin、2,4,7-三羟基-9,10-二氢菲。管惠娟和Li 等[48,53,57,58]发现4',5-二羟基-3,3'-二甲氧基联苄，铁皮石斛素A、C、D、E、F、G、J、K、H、L、B、M、N、O、I、P、Q、R，4,4'-二羟基-3,5-二甲氧基联苄，3,4-二羟基-5,4'-二甲氧基联苄，3'-羟基-3,4,5'-三甲氧基联苄，4,4'-二羟基-3,3',5-三甲氧基联苄，3,4'-二羟基-5-甲氧基联苄，3',4-二羟基-3,5'-二甲氧基联苄，二氢白黎芦醇和dendromoniliside E等27个联苄类化合物。
1.4石斛的药理作用
1.4.1增强机体免疫作用
铁皮石斛颗粒（TPSH）可促进荷瘤动物巨噬细胞的吞噬功能，增强T淋巴细胞的增殖和分化及NK细胞的活性，并能明显提高荷瘤动物的血清溶血素值，提示TPSH无论是对非特异性免疫功能，或是特异性细胞免疫以及体液免疫功能，均有一定的提高作用[49]。铁皮石斛多糖对S180实体瘤均有一定的抑制作用，其抑瘤率为9.7%—26.8%，并且铁皮石斛多糖对S180肉瘤小鼠T淋巴细胞转化功能、NK活性、巨噬细胞吞噬功能及溶血素值均有明显提高作用[59]。杨明晶等[60]选择低、中、高剂量的铁皮枫斗西洋参胶囊（58、117、350mg/kg），调节小鼠的免疫功能，发现每天补充中、高剂量的铁皮枫斗西洋参，30d后小鼠的细胞免疫功能、体液免疫功能、单核-巨噬细胞吞噬功能和NK细胞活性明显增强。
1.4.2抗氧化作用
何铁光等[26]研究证明，铁皮石斛原球茎多糖组分DCPP1a-1能有效地清除超氧阴离子和·OH，并能抑制小鼠肝匀浆及肝线粒体丙二醛（MDA）的生成和肝线粒体肿胀。鲍素华等[61]研究发现不同相对分子质量的多糖，在不同抗氧化体系中，其抗氧化活性差异显著，DSP对·OH清除作用强于其他多糖；DSP1对DPPH的清除率、抑制Fe2+-VC诱导小鼠肝匀浆脂质过氧化能力、抑制H2O2诱导红细胞氧化溶血能力和总抗氧化能力最佳；DSP2抗氧化能力最弱。铁皮石斛多糖分子质量小于3.53×104u或大于7.44×104u时抑制DNA损伤的生物活性较高，且明显强于VC。汤小华等[62]研究发现鲜铁皮石斛（3g/kg）和铁皮枫斗（0.5、0.90、1.35g/kg）均能提高血清和肝中超氧化物歧化酶（SOD）、肝谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性，鲜铁皮石斛（6g/kg）能提高血清SOD、肝GSH-Px；鲜铁皮石斛（3、6g/kg）和铁皮枫斗（0.45、0.90g/kg）均能降低血清和肝MDA；鲜铁皮石斛（9g/kg）能降低血清MDA；铁皮石斛和铁皮枫斗对急性酒精性肝损伤模型小鼠具有抗氧化作用。铁皮石斛水提物、大豆异黄酮提取物及二者合用对正常小鼠红细胞SOD活力的影响均无显著差异（P>0.05）；但可显著提高小鼠肝组织中SOD活性和降低MDA含量，联合用药对小鼠肝脏SOD活性增效系数Q 值为1.44，说明铁皮石斛水提物与大豆异黄酮提取物具有协同抗氧化作用[63]。
1.4.3抗肿瘤作用
马国祥等[64]分析石斛中的18个种，发现铁皮石斛含有鼓槌菲（chrysotoxene）和毛兰素（erianin），这两个菲类化合物具有对肝癌和艾氏腹水癌细胞抑制活性。李燕[41]进行抗肿瘤活性的初步筛选，发现联苄类化合物4,4'-二羟基-3,5-二甲氧基联苄对人卵巢癌细胞株（A2780）有活性，4,4'-二羟基-3,3',5-三甲氧基联苄对人胃癌细胞株（BGC-823）和人卵巢癌细胞株（A2780）有活性。
铁皮枫斗多糖、菲类、联苄类化合物具有抗肿瘤活性及抗多药耐药性，能抑制多种人体肿瘤细胞株增殖。铁皮石斛多糖联合rIL-2，显著增强脐带血和肿瘤病人外周血LAK细胞体外杀伤作用，通过LAK/rIL-2免疫作用治疗恶性肿瘤。毛兰素(erianin)对小鼠肝癌抑瘤率为50.82%，对肿瘤细胞株K562生长的抑制作用，随着药物浓度的增加而增强。临床观察也发现[65]，铁皮枫斗晶、铁皮枫斗颗粒（胶囊）是放化疗肿瘤患者对症辅助治疗的有效药物，能显著减轻放疗副反应。多糖和芪类化合物的抗肿瘤活性，提示铁皮石斛不仅可以用于癌症对症治疗的辅助用药，亦可作为抗肿瘤药物研究开发的候选物。
1.4.4抗疲劳作用
石斛洋参冲剂能使异丙肾上腺素处理小鼠游泳时间延长、增加小鼠耐缺氧能力，提高甲亢型小鼠存活率。铁皮枫斗晶能维持运动小鼠肝糖原含量，明显降低运动后血清尿素氮和血乳酸含量，均表现明显的抗疲劳作用[66]。
1.4.5降血糖作用
吴昊姝等[67]对铁皮石斛浸膏的降血糖作用及其机制研究表明，铁皮石斛浸膏对正常小鼠血糖及血清胰岛素水平无明显影响，但可使链脲佐菌素性糖尿病大鼠的血糖值降低、血清胰岛素水平升高、胰高血糖素水平降低，还可通过增加大鼠胰岛素β细胞，减少α细胞，修复链脲霉素诱导的β细胞损伤，进而升高血清胰岛素、降低胰高血糖素水平。铁皮石斛也可通过抑制肝糖原分解和促进肝糖原合成，减少血糖来源，增加血糖去路，影响肾上腺素性高血糖小鼠血糖和肝糖原水平。陈爱君等[68]发现铁皮石斛膏3g（生药）/kg剂量灌胃给药可降低四氧嘧啶所致糖尿病模型小鼠的血糖值，并明显改善该模型小鼠的糖耐量，减少其血糖曲线下面积。
1.4.6生津作用
铁皮石斛的生津作用，主要表现为促进腺体分泌和脏器运动[27]。
对消化系统作用：最初研究表明，铁皮石斛和西洋参合用不仅能促进正常家兔的唾液分泌。还能拮抗阿托品对家兔唾液分泌的抑制作用。铁皮石斛单用能促进大鼠胃液分泌、小肠推进运动和小鼠排粪功能。其机制与抑制细胞膜上的Na+/K+ ATP泵有关[69]。临床应用也证实，铁皮石斛可以显著改善口腔气管插管患者口腔溃疡愈合率[70]。进一步证实了铁皮枫斗晶能养阴益胃生津，维护消化系统功能。
对呼吸系统的作用：与前期铁皮石斛提取物结果相同，铁皮枫斗晶能显著促进小鼠气管酚红排泌和家鸽气管内墨汁运动速度，抑制氨水引起的小鼠咳嗽。显示明显的祛痰和镇咳作用[71]。
1.4.7其他药理作用
铁皮石斛提取物对易卒中型自发性高血压大鼠（SHR-sp）具有缓和持久的降压作用，并且其降压作用与用量有一定相关性[72]；对SHR-sp大鼠具有延长生存时间、提高生存率、预防中风的作用，并且铁皮石斛提取物与西药尼莫地平合用对SHR-sp大鼠能较好地延长生存时间、提高生存率、预防中风[73]。鹿伟等[74]对小鼠经口灌胃不同剂量铁皮石斛样品30d，与阴性对照组相比，铁皮石斛样品3个剂量组小鼠负重游泳时间均显著延长，血乳酸和肌酸激酶含量均显著降低，铁皮石斛在提高运动耐力的同时，能显著加快代谢产物的清除，同时通过调节机体免疫功能，促进疲劳的尽快恢复。黄琴等[75]研究得出铁皮石斛胚状体各剂量组（0.2、0.4、0.8g/kg）可以在人体跑步30min后提高血糖含量并降低全血乳酸含量，中、高剂量组可以降低运动后肝糖元及肌糖元的消耗，各剂量组均能明显降低血尿素氮的含量。
铁皮石斛生境独特，对气候要求十分严格，自然成活率极低，野生资源濒临枯竭[76]。1987年国家将铁皮石斛列为重点保护野生珍稀药材品种，第1批《中国珍稀濒危保护植物名录》将铁皮石斛列入其中，《濒危野生动植物种国际贸易公约》也将其列为濒危和特别需要关注的药用植物加以保护[77]。近年来，石斛属植物资源极其紧缺，某些种已濒临灭绝。而铁皮石斛的市场需求持续旺盛，但其野生资源有限，加之铁皮石斛生境不断遭受破坏，导致铁皮石斛野生资源濒临灭绝，无法满足市场需求。因此，应设法提高铁皮石斛多糖提取率。基于此，本试验在单因素试验基础上，采用正交试验探讨铁皮石斛多糖的最佳提取工艺条件，对石斛粉碎程度、液料比、多糖提取温度和提取时间4个因素进行工艺优化，确定最优提取参数。
2实验
2.1材料和试剂、仪器
2.1.1仪器
电子天平：AL204-IC，梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司；低速台式离心机：800型，上海手术器械厂；循环水式真空泵：SHZ-D（Ⅲ），巩义市予华仪器有限责任公司；数显恒温水浴锅：
JXL-2S-6A，江苏省金坛市金祥龙电子有限公司；中草药粉碎机：FW177型，天津市泰斯特仪器有限公司；研钵、研磨棒；旋转蒸发器：RE-2000A型，上海亚荣生化仪器厂；紫外可见分光光度计：722G型，上海精密科学仪器有限公司。
烧杯；量筒；刻度试管；圆底烧瓶；回流管。
2.1.2材料及试剂
干燥的铁皮石斛颗粒；D-无水葡萄糖标准品：含量≥98%，批号为20150303，上海金穗生物科技有限公司；蒽酮；硫酸；无水乙醇；水为蒸馏水。
2.2试验方法
采用硫酸-蒽酮比色法测定其多糖含量，在620nm处使用紫外-可见分光光度计测定吸收度；2.2.1预处理与纯化过程
精密称取铁皮石斛干燥粉末（过孔径为0.354mm筛）1.000g，置圆底烧瓶中。用70mL乙醇（95%）加热回流2次除去杂质，每次一小时。设置反应条件液（mL）料（g）比为65：1、提取时间为2h、提取2次，在90℃热水下回流提取。提取之后过滤，将滤液置250mL容量瓶中定容，得石斛多糖粗提液。分别精密量取1mL定容后的滤液置10mL离心管中，加入9mL体积分数为80%的乙醇，摇匀，冷藏1h，取出，以4000r/min离心15min，所得沉淀加体积分数为80%的乙醇洗涤2次，每次10mL，弃去上清液，沉淀用热蒸馏水溶解，转移至25mL容量瓶中，放冷后加水至刻度，摇匀，即得铁皮石斛多糖浸提液[21]。
2.2.2样品制备及试剂配制
标准品溶液的制备：精密称取葡萄糖标准品25mg置于250mL容量瓶中，加水溶解并定容至刻度，配置成0.1mg/mL的葡萄糖标准溶液。
蒽酮-硫酸溶液的制备（现配现用）：精密称取蒽酮0.1g，加80%的硫酸溶液100mL使溶解，摇匀，放置于棕色瓶中，冷藏。
2.2.3测定
1）测定原理
采用蒽酮-硫酸比色法测定其多糖含量，在620nm处使用紫外-可见分光光度计测定吸收度。2）测定方法
标准曲线的绘制：分别精密吸取0.1mg/mL葡萄糖标准品溶液5ml、20ml、50ml、80ml置于100ml 容量瓶中，各加蒸馏水至刻度，将溶液稀释为5、20、50、80μg/mL。精密量取上述各浓度的溶液及葡萄糖标准液2.0mL于10mL具塞试管中，精密加入蒽酮硫酸溶液6.0mL，置水浴加热15min，取出，迅速冰浴冷却15min，室温放置5min左右，以蒸馏水代替标准溶液为空白对照，按照紫外-可见分光光度法，测定625nm处吸光度。以浓度（C）（μg/mL）为横坐标、吸光度（A）为纵坐标，进行回归计算，绘制标准曲线（如图2.1所示）。得回归方程y=0.0007x+0.0121，相关系数R2=0.9945。表明葡萄糖浓度在5～100μg/mL范围内与吸光度呈良好线性关系。
图2.1 葡萄糖标准曲线
样品测定：精密量取本实验制得的石斛多糖浸提液2mL于10mL具塞试管中，精密加入蒽酮硫酸溶液6.0mL，置水浴加热15min，取出，迅速冰浴冷却15min，室温放置5min左右，以加水试剂空白对照，按照紫外-可见分光光度法，测定625nm处吸光度。记录吸光度值，查标准曲线得知对应的葡萄糖含量。
2.2.4铁皮石斛多糖抗氧化性测定
羟基自由基的清除（Fenton[78]反应）大量研究表明，羟基自由基（·OH）具有极强的氧化能力，它能导致生物体内DNA，蛋白质和脂质氧化损伤，对生物组织产生极强的危害作用。本试验通过Fenton法研究铁皮石斛茎多糖对羟基自由基（·OH）的清除作用。
用Fenton反应法产生羟基自由基（·OH）。H2O2/Fe2+体系可通过Fenton反应产生经自由基，化学反应如下:
H2O2+Fe2+→·OH+OH－+Fe3+
用·OH氧化水杨酸产生有色物质，该产物在510nm处有强吸收峰，若体系中加入清除·OH的物质，则会减少有色物质的生成，吸收度降低。吸光度越低，清除·OH效果越好。
测量过程：取2支试管并依次编号为1、2。两支试管各加入9mmol/L的FeSO4 1ml，9mmol/L 的水杨酸-乙醇溶液2.00ml，将1号试管加入铁皮石斛多糖样品溶液2.00ml，2号管加2.00ml蒸馏水作空白对照。最后加入8.8mmol/L的H2O2 2.00ml启动反应。以上试管放入水浴锅37℃恒温水浴1h，取出冷却。以蒸馏水作参比，于510nm处测定其吸光度，便能测定被测物对·OH的清除效果。设计实验如表2.1。
表2.1 多糖清除羟自由基能力
组别吸光度
1 1.7639
2（对照组） 1.8384
3（参比）0
2.2.5多糖提取的正交试验
对本实验分析，影响多糖提取率的因素有很多，有石斛粉碎程度、提取次数、提取时间、液料比、提取温度等等。经全面考虑，最后确定提取次数、提取时间、液料比为优化因素。分别记作A、B、C和D，进行四因素正交试验，各因素均取三个水平，因素水平见下表2.2所示。
表2.2 因素水平表
水平
试验因素
A：提取次数B：提取时间C：料（g）液（ml）比D：石斛粉碎程度
1 1 1 50 大颗粒
2 2 2 65 小颗粒
3 3 3 80 粉末
本实验不考虑交互作用，故选用L9（34）正交表，各因素随机安排，将提取次数（A）、提取时间（B）、液料比（C）和石斛粉碎程度（D）依次安排，如表2.3所示。
表2.3 实验方案及实验结果
试验号因素实验结果
A/次B/h C/ml D
1 A1（1）B1（1）C1（50）D1（大颗粒） 3.57
2 A1B2（2）C2（65）D2（小颗粒）7.23
3 A1B3（3）C3（80）D3（粉末）20.53
4 A2（2）B1C2D348.57
5 A2B2C3D10.45
6 A2B3C1D250.27
7 A3（3）B1C3D210.09
8 A3B2C1D334.73
9 A3B3C2D18.93
注1：试验号并非试验顺序，为了排除误差干扰，试验中可随机进行；安排试验方案时，部分因素的水平可采用随机安排。
2.2.3计算
1）多糖提取率的计算[21]
用蒽酮-硫酸法对铁皮石斛多糖含量进行的测定，多糖提取率按下式计算：
多糖提取率＝（多糖含量×25×250）/药材质量×100%
式中，25和250为稀释倍数。
2）多糖对·OH的清除率的计算
清除率（%）=［（A0－A S）/A0］×100%
式中A0为空白对照液的吸光度；A S为加入样品溶液后的吸光度。
2.2.5结果与分析
1）多糖提取率的计算
样品吸光度为：0.0833，多糖含量为101.71μg·mL-1。由下式计算
多糖提取率＝（多糖含量×25×250）/药材质量×100%
可得：石斛样品中多糖含量为63.57%。
2）多糖对·OH的清除率的计算
A0= 1.8384，A S= 1.7639，由下式计算
清除率（%）=［（A0－A S）/A0］×100%
可得：清除率（%）=4.05%
3）不考察交互作用的正交试验结果分析
表2.4 实验结果分析
试验号因素多糖含量
A：提取次数B：提取时间C：液料比D：石斛粉碎程度
1 A1（1）B1（1）C1（50）D1（大颗粒） 3.57
2 A1B2（2）C2（65）D2（小颗粒）7.23
3 A1B3（3）C3（80）D3（粉末）20.53
4 A2（2）B1C2D348.57
5 A2B2C3D10.45
6 A2B3C1D250.27
7 A3（3）B1C3D210.09
8 A3B2C1D334.73
9 A3B3C2D18.93
K131.33 62.23 88.57 12.95
K299.29 42.41 64.73 67.59
K353.75 79.73 31.07 103.83
k110.44 20.74 29.52 4.31
k233.10 14.14 21.58 22.53
k317.92 26.58 10.36 34.61
极差R 22.66 12.44 19.16 30.3
主次顺序D＞A＞C＞B
优水平A2B3C1D3
优组合A2B3C1D3
①确定试验因素的优水平和最优水平组合
分析A因素各水平对试验指标的影响。由表2.4可以看出，A1的影响反映在第1、2、3号试验中，A2的影响反映在第4、5、6号试验中，A3的影响反映在第7、8、9号试验中。
A1水平所对应的试验指标之和为KA1=y1+y2+y3=3.57+7.23+20.53=31.33，kA1=KA1/3=10.44；
A2水平所对应的试验指标之和为KA2=y4+y5+y6=48.57+0.45+50.27=99.29，kA2=KA2/3=33.10；
A3水平所对应的试验指标之和为KA3=y7+y8+y9=10.09+34.73+8.93=53.75，kA3=KA3/3=17.92。
根据正交设计的特性，对A1、A2、A3来说，三组试验的试验条件是完全一样的（综合可比性），可进行直接比较。如果因素A对试验指标无影响时，那么kA1、kA2、kA3应该相等，但由上面的计算可见，kA1、kA2、kA3实际上不相等。说明，A因素的水平变动对试验结果有影响。因此，根据kA1、kA2、kA3的大小可以判断A1、A2、A3对试验指标的影响大小。由于试验指标为液化率，而kA2>kA3>kA1，所以可断定A2为A因素的优水平。
同理，可以计算并确定B3、C1、D2分别为B、C、D因素的优水平。四个因素的优水平组合A2B3C1D3为本试验的最优水平组合，即硫酸-蒽酮法测试石斛中多糖含量的最优工艺条件为石斛粉碎程度为粉末，加水量50mL/1g，提取2次，每次3小时。
②确定因素的主次顺序
计算各因素的极差R，R表示该因素在其取值范围内试验指标变化的幅度。
R A=max（K A）-min（K A）=33.1-10.44=22.66，同理可以计算出B、C、D的极差。根据极差R 的大小，可以判断各因素对试验指标的影响主次。本实验极差R计算结果见下表2.6，比较各R值大小，可见R D＞R A＞R C＞R B，所以因素对试验指标影响的主次顺序是DACB。即石斛粉碎程度影响最大，其次是提取次数和液料比，而提取时间的影响较小。
③绘制因素与指标趋势图
以各因素水平为横坐标，试验指标的平均值（k）为纵坐标，绘制因素与指标趋势图。由因素与指标趋势图可以更直观地看出试验指标随着因素水平的变化而变化的趋势，可为进一步试验指明方向。各个因素与指标趋势图如下图2.1所示。
图2.2 a-提取次数、b-提取时间、c-液料比、d-石斛颗粒对多糖提取率的影响
（d图中1代表大颗粒、2代表小颗粒、3代表粉末）
3结论
本研究结果表明，各因素对铁皮石斛多糖提取率的影响排序为：石斛粉碎程度＞提取次数＞料液比＞提取时间；由正交试验得到的最佳提取工艺条件为：石斛粉碎程度为粉末状，液（mL）料（g）比50mL/g，提取2次，每次3小时；并且由抗氧化性实验可得铁皮石斛多糖具有提取得到的铁皮石斛多糖具有较好的抗氧化能力。
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致谢
经过几个月学习，毕业设计接近尾声，毕业近在眼前，回头看看走过的路，虽然是第一次做毕业设计，有许多考虑不周的问题，但是在导师季晓辉老师的指导、同学们的帮助下，经过我的努力终于完成了。
在这个过程中，我首先最要感谢我的导师季晓辉老师。虽然季老师平日里工作比较繁忙，但是在我做毕业设计过程中，老师都不厌其烦耐心的指导。从实验过程的设计以及在实验中遇到的问题，论文的调整修改，在整个过程中老师都认真负责的给予我非常细致的指导。在撰写论文期间，我非常敬佩季老师严谨的治学态度和敬业精神，他的敬业精神是我永远学习的榜样。在此谨向季老师致以诚挚的谢意和崇高的敬意。
其次还要感谢同学们对我无私的帮助，还有这四年来教我知识的每一位老师，毕业论文的顺利完成，你们也有很大的功劳。另外，感谢我的母校——陕西理工学院给予我们这样一次机会，能够独立的完成一个课题，使我们在即将离开校园的最后一段时间里，能够更多学习一些实践知识，增强自己的实践操作和动手应用能力，提高了独立思考的能力。再一次对我的母校表示感谢。
写作毕业论文是一次再系统学习的过程，毕业论文的完成，同样也意味着新、生活的开始。愿大家在将来的生活中继续追逐最初的梦想，永不放弃。
石斛中多糖含量的测定
题目石斛中多糖含量的测定 学生姓名高换楼学号1111034082所在学院化学与环境科学学院 专业班级化工1102班 指导教师季晓晖 完成地点陕西理工学院 2015 年 06 月 08 日
石斛中多糖含量的测定 高换楼 （陕西理工学院化学与环境科学学院化工专业1102班，陕西汉中723001） 季晓晖 [摘要] 石斛为我国常用贵重药材，有养阴清热、益胃生津的功效，石斛一直备受国内外研究者的重视。本文利用蒽酮-硫酸法对铁皮石斛多糖的含量进行了测定，并采用正交试验得到最佳实验方案，在石斛粉碎程度为粉末、液料比为50mL/g、提取2次，每次3小时的情况下多糖提取率最高。本文的实验结果为今后铁皮石斛多糖提取的质量评价及其进一步开发和利用提供参考依据。 [关键词] 石斛；多糖；蒽酮-硫酸法；抗氧化性；测定； Determination of Dendrobium polysaccharide content GAO Huanlou （Grade 02, Class 11, Major chemical engineering, School of chemical and environmental science Dept, Shaanxi University of Technology, Hanzhong 72300x, Shaanxi） Tutor: JI Xiaohui Abstract: Dendrobium is in common use in our country precious medicinal herbs, the effect of nourishing yin and clearing heat, nourishing stomach fluid, Dendrobium has attracted a lot of attention of researchers at home and abroad. The anthrone-sulfuric acid method of Dendrobium officinale polysaccharide content were measured, and using the orthogonal test and the optimum solution is obtained. In Dendrobium degree of comminution is in the form of powder, liquid to solid ratio for 50mL/1g, extraction 2 times, every time 3 hours of polysaccharides extraction rate was the highest. The experimental results for the quality evaluation of future Dendrobium officinale polysaccharide extraction and its further development and utilization to provide reference. Key words: Dendrobium; polysaccharide; anthrone-sulfuric acid method; antioxidation; determination;
铁皮石斛多糖的功效
铁皮石斛多糖的功效 了解过铁皮石斛的朋友，都知道铁皮石斛的功效卓著，可以滋养阴津、提高免疫、增强体质、补益脾胃、护肝利胆、清虚热、强筋壮骨、降低血糖、抑制肿瘤、明亮眼目、滋养肌肤、延年益寿等等令人诱惑的功效。 很多朋友也听说过，铁皮石斛之所以能有如此多的功效，是因为含有石斛多糖。 糖？ 最近不是报道说，糖不利身体健康吗？！ 此多糖，非彼糖。 糖尿病的人不可以吃糖，但是可以吃石斛多糖。 石斛多糖属于活性多糖的一种。在国内，活性多糖的提法比较新，应用也很少。但在国外，特别是日本，普遍多了。活性多糖是功能性食品的一种，在保健范畴之内。 活性多糖的生理功能 （一）多糖的免疫调节功能 免疫调节作用是大多数活性多糖的共同作用，也是它们发挥其他生理和/或药理作用（抗肿瘤）的基础。活性多糖可通过多条途径、多个层面对免疫系统发挥调节作用。大量免疫实验证明，活性多糖不仅能激活T、B淋巴细胞、巨噬细胞和自然杀伤细胞(NK)等免疫细胞，还能活化补体，促进细胞因子的生成，对免疫系统发挥多方面的调节作用。 （二）抗肿瘤的功能 据文献报道，已有50个属178种的提取物都具有抑制S-180肉瘤及艾氏腹水瘤等细胞生长的生物学效应，明显促进肝脏蛋白质及核酸的合成及骨髓造血功能，促进体细胞免疫和体液免疫功能。 （三）活性多糖的抗突变作用
在细胞分裂时，由于遗传因素或非遗传因素的作用，会产生转基因突变。突变是癌变的前提，但并非所有突变都会导致癌变，只有那些导致癌细胞产生恶性行为的突变才会引起癌变，但可以肯定，抑制突变的发生有利于癌症的预防。多种活性多糖表现出较强的抗突变作用。（四）降血压、降血脂、降血糖的功能 冬虫夏草多糖对心律失常、房性早博有疗效；灵芝多糖对心血管系统具调节作用，可强心、降血压、降低胆固酵、降血糖等。试验结果表明，蜜环茵多糖(AMP)能使正常小鼠的糖耐量增强，能抑制四氧嘧啶糖尿病小鼠血糖升高；研究也发现，蘑菇、香菇、金针菇、木耳、银耳和滑菇等13种食用茵的子实体具有降低胆固醇的作用，其中尤以金针菇为最强。腹腔给予虫草多糖，对正常小鼠、四氧嘧啶小鼠均有显著的降血糖作用，且呈现一定的量效关系。云芝多糖、灵芝多糖、猴头菇多糖等也具降血糖或降血脂等活性。活性多糖可降低血脂，预防动脉粥样硬化斑的形成。 （五）活性多糖对多种病毒，如艾滋病毒(HIV-1)、单纯泡疹病毒(HSVl，HSV-2)、巨细胞病毒(CMV)、流感病毒、囊状胃炎病毒(VSV)、劳斯肉瘤病毒(RSV)和反转录病毒等有抑制作用。香菇多糖对水泡性口炎病毒感染引起的小鼠脑炎有治疗作用，对阿拉伯耳氏病毒和十二型腺病毒有较强的抑制作用。 （六）活性多糖的抗氧化作用 已发现许多活性多糖具有清除自由基、提高抗氧化酶活性和抑制脂质过氧化的活性，起到保护生物膜和延缓衰老的作用。 （七）活性多糖的其它功能 除具有上述生理功能外，活性多糖还具有抗辐射、抗溃疡和抗衰老等功能。具有抗辐射作用的活性多糖有灵芝多糖、猴头多糖等。具有抗溃疡作用的活性多糖有猴头多糖、香菇多糖等。具有抗衰老作用的活性多糖有香菇多糖、铁皮石斛多糖、虫草多糖、灵芝多糖、云芝多糖和猴头菌多糖等。
几种市售枫斗的多糖含量测定
几种市售枫斗的多糖含量测定 .烈斗 浙江省医学科学琏1999年9月(邑弟39期 , 多 .j 几种市售枫斗的多糖含 药帕研究所(3l0013)兰李亚芳 中药枫斗是以石斛属多种植物的茎经过 特殊加工制成的干燥品,亦称耳环石斛.传统 认为质重,嚼之粘牙,无渣者为优,老药工凭 此来判断枫斗的优劣,但无内在的质量评价 标准.近年来,石斛多糖的研究引起人们的重 视,并证明石斛多糖是评价枫斗的重要生理 活性物质之一ll.J.我们于l997年2月～ l999年6月采用苯酚一硫酸比色法,测定r 几种市售枫斗的多糖含量. 一 ,材料与方法 ∈一)材料: 1.样品:铁皮枫斗1(福建),铁皮枫斗2 (福建),枫斗1(云南),枫斗2(云南),小环叉 直条枫斗(云南),野生枫斗(云南),野生紫皮 扭斗(云南),儿洲牌铁皮枫斗(广西): 2仪器:7230型分光光度计(上海分析 仪器厂)
3试剂:苯酚试剂:苯酚(分析纯)l0 加水l50g混匀,溶解即得,置淙色瓶内,冰箱'巾备用;其它试剂(无水乙醇,硫酸等)均为国产分析纯 (二)方法: 多糖的提取与含量测定,参照文献方法i 二,结果 (一)葡萄糖标准液吸光度测定结果:标 准品浓度在495,9.90,1485,1980,2475 297O,3465,396O时,吸光度分别为o069, O135,0203,0287,0366,0428,0500 0.587,以吸光度A为纵坐标,浓度c为横坐标,绘制标准曲线,得回归方程: A=一0010536+0.Ol4923C.r= 25 量测定 z,7/ 丁委静张治国户.f 09994 (二)换算因素 塑重量—— 多糖液葡萄糖浓度(g/m])×多糖稀释因素结果:f为1504. (三)几种市售枫斗多糖含量见表1. 表1几种枫斗的多糖含量 三,讨论 ()结果表明,不同种石斛加工成的枫 斗.多糖含差别很大,已测的几个样品中多糖含最高低相差约4倍
石斛的多糖提取及其多酚物质的抗氧化性研究
目录 1、综述 (2) 1.1 铁皮石斛简介 (2) 1.2 铁皮石斛国内外研究的进展 (3) 1.3 铁皮石斛的育种与繁殖 (4) 1.4 本文研究的意义 (5) 2、铁皮石斛的水分测定及其多糖的提取 (5) 2.1水分的测定 (5) 2.2多糖的提取 (6) 3、铁皮石斛乙酸乙酯萃取多酚物质抗氧化性的研究 (6) 3．1 铁皮石斛乙酸乙酯萃取母液及浓度梯度的配制 (6) 3.2 实验测定原理及方法 (8) 3.2.1 铁皮石斛乙酸乙酯萃取物清除DPPH自由基的测定 (8) 3.2.2 铁皮石斛乙酸乙酯萃取物清除羟基自由基（.OH）的测定 (8) -）的测定 3.2.3 铁皮石斛乙酸乙酯萃取物清除超氧阴离子自由基（·O 2 (9) 3.2.4 铁皮石斛乙酸乙酯萃取物还原能力的测定 (10) 4、结果与讨论 (10) 4.1 对DPPH自由基的清除能力 (10) 4.2 对羟基自由基（.OH）的清除能力 (11) -）的清除能力 (12) 4.3 对超氧阴离子自由基（·O 2 4.3 还原能力的测定 (13) 5、结论 (13) 参考文献： (14)
铁皮石斛的多糖提取及其多酚物质的抗氧化性研究 专业：环境科学学号：200911201066 姓名：许永佳指导老师：苏小建 内容摘要：石斛多达五十余种，是市场上常见的名贵中草药和保健品。研究表明，植物的多糖及多酚含量很大程度决定了它的功效。本次实验，我们主要用铁皮石斛为主原料，选取水提醇沉法来提取它的多糖并测其含量。然后用极性较大的乙酸乙酯来萃取获得多酚物质，通过其对DPPH自由基、羟基自由基和超氧阴离子自由基的清除作用以及其还原能力的测定，探讨铁皮石斛多酚物质的抗氧化活性，并与人工合成抗氧化剂BHT对自由基清除能力及还原能力进行比较。实验结果表明：石斛的多糖含量为4.73%，它的多酚物质具有很强的抗氧化性，优于合成物BHT。 关键词：铁皮石斛；多糖；抗氧化性；自由基； BHT 1、综述 1.1 铁皮石斛简介 铁皮石斛[D-officinale]，俗称吊兰,是兰科石斛属植物。茎，直立，圆柱形，节间披有白色的膜质鞘；叶，纸质，长圆状披针形，尖端钝并钩转，基部有抱茎的鞘；花，白色，生于老茎上部节间，唇瓣菱形，喉部有一紫红色的斑块。铁皮石斛为名贵草药，药名为黑节草，拥有滋阴润肺、养胃生津、明目清热、增强免疫力、医治失音沙哑、抗衰老等功效。野生铁皮石斛生于海拔100——3000米之间的山地半阴湿岩石、树皮上，喜温暖湿润气候和半阴湿的环境，不耐寒。铁皮石斛的鲜茎可直接食用，可炖汤，可泡茶，可浸酒[1]，通常加工成制成药品或饮料，如铁皮枫斗、铁皮石斛功能性饮料等。近年来以其为原料生产的高级保健品远销欧美和东南亚沿海发达地区。 早在1400多年前的《神农本草经》和400多年前的《本草纲目》等古典中药书籍中，就将铁皮石斛列为药材中的上品。《道藏》则称：“铁皮石斛、天山雪莲、三两人参、百二十年首乌、花甲之茯苓、肉苁蓉、深山灵芝、海底珍珠、冬虫夏草为九大仙草”。由于铁皮石斛的生长环境特殊及其自身繁殖慢等原因，野生铁皮石斛资源稀缺。目前铁皮石斛主要生长于在中国安徽西南部（大别山）、浙江东部（鄞县、天台、仙居）、福建西部（宁化）、广西西北部（天峨）、四川、云南东南部（石屏、文山、麻栗坡、西畴）。
齿瓣石斛多糖含量测定比较
齿瓣石斛多糖含量测定比较 石斛是中国名贵中药材，多糖是石斛的主要有效成分之一。本文测定了不同产地，种植方式以及不同部位的齿瓣石斛多糖含量，对齿瓣石斛栽培应用有重要意义。 标签：齿瓣石斛多糖；含量测定；比较 石斛属（Dendrobium）是兰科第二大属，全球约有1500种，主要集中分布在我国华南和西南地区[1]。石斛为我国名贵中药，具有滋阴清热、益胃生津等功效。齿瓣石斛化学成分类型多样，其中糖类也是重要化学成分，广西的加工品一级枫斗含量高达45.89%[2]。本文对不同齿瓣石斛多糖含量进行测定比较。 1仪器和试药 1.1仪器UV-2450紫外分光光度计（日本岛津）；电子天平；分析天平（FA200413）。 1.2试药对照品：D-无水葡萄糖（中国食品药品检定研究院，批号：110833-201205）。 1.3试剂双蒸水：自制；无水乙醇，95%乙醇，苯酚。 1.4药材见表1。 2实验方法 2.1紫外可见分光光度法测定石斛多糖含量[3]。 2.1.1对照品溶液的配置取D-无水葡萄糖对照品适量，精密称定，加水制成每1 ml含94.66ug的溶液，即得。 2.1.2供试品溶液的制备取石斛鲜品茎约60 g，精密称定，置于九阳豆浆机中，选择五谷模式榨汁，加水定容至1000ml，混匀，离心（转速为4000转/min）20min，上清液稀释8倍，精密量取2ml置10ml塑料离心管中，精密加入无水乙醇10ml，摇匀，冷藏1 h，离心，弃上清，加80%乙醇洗涤2次，每次8ml，离心，弃上清，沉淀用热水溶解，转移至25ml容量瓶中，放冷，加水至刻度，摇匀，即得。 2.1.3标准曲线的绘制精密量取对照品溶液0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml，分别置10 mL具塞棕色试管中，加水补至1.0 ml，加5%苯酚溶液（临用时配）1.0 ml，摇匀，迅速加入浓硫酸5.0mL，置沸水浴加热20min，取出，立即置冰水浴中冷却5 min后取出，以相应试剂为空白，照紫外-可见分光光度法在488nm
真菌中多糖含量测定方法的研究概况
Advances in Analytical Chemistry 分析化学进展, 2017, 7(1), 9-15 Published Online February 2017 in Hans. https://www.sodocs.net/doc/05776236.html,/journal/aac https://https://www.sodocs.net/doc/05776236.html,/10.12677/aac.2017.71002 文章引用: 果卉, 孙渺, 周婷婷. 真菌中多糖含量测定方法的研究概况[J]. 分析化学进展, 2017, 7(1): 9-15. Methods for the Determination of Fungal Polysaccharides Content Hui Guo, Miao Sun, Tingting Zhou * The Second Military Medical University, Shanghai, China Received: Feb. 6th , 2017; accepted: Feb. 20th , 2017; published: Feb. 27th , 2017 Abstract Recently fungi polysaccharides are valuable application substance, which is used in antiviral, an-tiinflammatory, anticoagulation activity, hypoglycemic and hypolipidemic action. In addition their immunoregulation and anticancer activity have been received much concern. So it’s important for a rapid and accurate analysis and determination of fungal polysaccharides. Through the study of polysaccharide in recent years literature, this paper provides a comprehensive survey on research of methods for different fungus polysaccharides. Keywords Fungus Polysaccharides, Determination, Colorimetric Method, Chromatography Method 真菌中多糖含量测定方法的研究概况 果 卉，孙 渺，周婷婷* 第二军医大学，上海 收稿日期：2017年2月6日；录用日期：2017年2月20日；发布日期：2017年2月27日 摘 要 真菌多糖是近些年来应用价值丰富的一类活性物质。不仅具有抗病毒，抗炎，抗凝血，降血糖，降血脂等生物活性，还因其具有免疫调节，抗肿瘤等活性而备受关注。因此对于真菌多糖快速准确的分析检测具有重要意义。本文综述了近年来国内外不同类的真菌多糖的含量测定方法，以期对进一步的研究提供参考。 *通讯作者。
铁皮石斛功效大全
铁皮石斛功效大全 1、滋养阴津 《中国药学大词典》称铁皮石斛“专滋肺胃之气液，气液冲旺，肾水自生”，善于养阴生津，治疗阴虚津亏诸症。 2、增强体质 铁皮石斛具有滋阴养血的功能。清代《药性论》说：铁皮石斛能补肾积精、养胃阴、益气力。含有丰富的多糖类物质，具有增强免疫功能的作用。 3、补益脾胃 铁皮石斛是益胃生津药。《神农本草经》、《本草再新》中均有记载，称谓“肠胃药”，是治疗胃脘痛、上腹涨痛的常用药物。现代医学实验证实：铁皮石斛对脾胃病中常见的致病菌幽门螺杆菌有较好的抑制作用，有助于治疗萎缩性胃炎、浅表性胃炎、十二指肠溃疡等幽门螺杆菌阳性的病症；同时，口服铁皮石斛煎液能够促进胃液的分泌，增强胃的排空能力，帮助消化。 4、护肝利胆 铁皮石斛有较好的利胆作用。历代医家都认为“铁皮石斛”具有滋养肝阴的作用，是治疗各种肝胆病的要药，可用于治疗肝炎、胆囊炎、胆结石等肝胆疾病。 5、强筋降脂 人进入中年以后，阴津开始衰弱，筋骨功能逐渐减退，铁皮石斛能够滋养阴液、润滑关节，从而达到强筋健骨、流利关节、增强抗风湿的效果。现代药理研究还表明：铁皮石斛能提高应激能力，具有良好的抗疲劳、耐缺氧作用；可促进循环、扩张血管、降低血胆固醇和甘油三脂。 6、降低血糖 铁皮石斛功能养阴清热润燥，自古以来就是治疗糖尿病的专用药。临床研究表明，铁皮石斛不仅可以增强胰岛素活性，同时能显著降低血糖水平，使血正常。 7、抑制肿瘤 铁皮石斛对肺癌、卵巢癌和早幼粒细胞性白血病等恶性肿瘤的某些细胞有杀灭作用，具有较强的抗肿瘤活性。临床用于恶性肿瘤的辅助治疗，能改善肿瘤患者的症状，减轻放、化疗的副作用，增强免疫力，提高生存质量，延长生存时间。 8、明亮眼睛 石斛具有滋阴养目的功能，被历代医家作为养护眼睛的佳品。现代药理学研究证实：石斛对防治老年白内障和保护少儿视力有明显效果。 9、滋养肌肤 人体进入中年后，由于体内的阴液日益减少，从而加速了皮肤老化，使之变黑或变皱。铁皮石斛含有的黏液质，对人体皮肤有滋润营养作用。 10、延年益寿 《神农本草经》将铁皮石斛列为具有“轻身延年”作用的圣药。现代药理学研究证实：铁皮石斛含有多种微量元素，对于人体的健康长寿有着密切的关系，对人体的抗衰老作用比一般的药物更广泛、更全面。
石斛总多糖提取工艺及测定方法研究
石斛总多糖提取工艺及测定方法研究 发表时间：2018-11-23T14:12:36.320Z 来源：《医药前沿》2018年27期作者：许磊 [导读] 确定石斛总多糖的最佳提取工艺及含量测定方法。方法：通过正交实验，采用苯酚-硫酸法测定的多糖含量为指标 许磊 （天津民祥生物医药股份有限公司天津 300000） 【摘要】目的：确定石斛总多糖的最佳提取工艺及含量测定方法。方法：通过正交实验，采用苯酚-硫酸法测定的多糖含量为指标，研究提取温度、提取次数、提取时间、料液比对石斛总多糖提取率的影响。结果：石斛总多糖最佳提取工艺条件为提取温度为100℃、提取时间为2h、料液比为5:4。结论：该工艺简单、方便、快捷，可用于不同品种石斛总多糖的提取。 【关键词】石斛；总多糖；单因素；正交试验；含量测定 【中图分类号】R284.2 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2018）27-0368-02 石斛为兰科植物马鞭石斛、铁皮石斛、环草石斛、黄草石斛的新鲜或干燥茎，被称为“九大仙草”之首，为珍稀、名贵、道地中草药，当下多以其总多糖含量的高低来判断石斛品质的优劣。本研究以总多糖含量为指标，通过正交实验，优化并最终确定了石斛总多糖的最佳提取工艺，以期为石斛总多糖的提取工艺研究提供参考和借鉴。 1.材料与试剂 石斛采自安徽省霍山县，无水葡糖糖、苯酚、硫酸等化学试剂均为分析级，实验用水均为Milli-Q超纯水机制备（密理博（上海）贸易有限公司）。紫外分光光度计（上海美谱达仪器有限公司）；LC-4016型低速离心机（安徽中科中佳科学仪器有限公司）；十万分之一天平（梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司）；超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；双层铁皮电炉（上海日用电炉厂）。 2.方法与结果 2.1 石斛中总多糖含量的测定 2.1.1对照品溶液的制备 取无水葡萄糖对照品适量，精密称定，于100mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀，制成每1mL含90μg/mL的溶液，即得对照品储备液。 2.1.2供试品溶液的制备 取石斛粉末（过三号筛）约0.12g，精密称定，加水80mL，加热回流2小时，放冷，转移至100mL量瓶中，用少量水分次洗涤容器，洗液并入同一量瓶中，加水至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液2mL，置15mL离心管中，精密加入无水乙醇10mL，摇匀，冷藏1h，取出，离心（转速为每分钟4000转）20min，弃去上清液（必要时滤过），沉淀加80%乙醇洗涤2次，每次8mL，离心，弃去上清液，沉淀加热水溶解，转移至25mL量瓶中，放冷，加水至刻度，摇匀，即得。 2.1.3总多糖含量的测定 精密量取供试品溶液1mL，置10mL具塞试管中，精密加入5% 苯酚溶液 1mL，摇匀，再精密加硫酸5mL，摇匀，置沸水浴中加热20分钟，取出，置冰浴中冷却5分钟，以相应试剂为空白，照紫外-可见分光光度法（2015药典通则0401），在488nm的波长处测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中无水葡萄糖的量，计算，即得。 总多糖提取率=总多糖质量/原药材的干品重量×100%。 2.1.4标准曲线的制备 精密量取对照品溶液0.1mL、0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL，分别置10mL具塞试管中，各加水补至1.0mL，振摇，精密加入5%苯酚溶液l.0mL（现配现用，注意避光），摇匀，再精密加硫酸5mL，摇匀，置沸水浴中加热20分钟，取出，置冰水浴中冷却5分钟，以相应试剂为空白，照紫外-可见分光光度法（2015药典通则0401），在488nm的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。在9.016～90.160 μg/mL范围内线性良好（y=0.00881x+0.11252，R2=0.99904）。 2.1.5精密度实验 按标准曲线确定的范围内，精密吸取葡萄糖对照品溶液6份，各1mL，按照2.1.3项下操作测定吸光度，计算RSD=2.4%，精密度良好，符合方法学要求。 2.1.6稳定性实验 在标准曲线确定的范围内，精密吸取2.1.2项下制备的供试品1mL，分别于0h，2h，4h，6h按照2.1.3项下操作测定吸光度，计算其RSD=0.88%，稳定性良好，符合方法学要求。 2.1.7重复性实验 在标准曲线确定的范围内，精密量取2.1.2项下制备的供试品1mL，按照2.1.3项下操作测定吸光度，连续测定6次，计算RSD=3.2%，重复性良好，符合方法学要求。 2.1.8加样回收率实验 取已知含量的石斛粉末100mg，精密称定，共六份，分别加入适量的对照品溶液，按照2.1.3项下操作测定吸光度，计算提取回收率，RSD=3.4%，加样回收率合格，符合方法学要求。 2.2 石斛总多糖提取工艺考察 以提取温度、提取时间、料液比、提取次数为因素，选用L9（34）正交表进行正交实验（表1）。进而得到石斛总多糖加热回流提取的最优条件。石斛总多糖最佳提取条件正交实验表见表2。
铁皮石斛多糖的研究进展课件
铁皮石斛多糖的研究进展 xx （xx，xx，xx） 摘要：以系统的文献调研为基础,对兰科石斛属植物铁皮石斛多糖的含量、药理作用、提取方法和组成加以综述。该文对其多糖的含量、药理作用、提取方法和组成等方面做了详细而全面的总结,为今后铁皮石斛药用资源的更好的开发利用提供参考。 关键词: 铁皮石斛多糖药效药用资源 1 引言 铁皮石斛(Dendrobium officinale Kimura et Migo),是兰科(Orchidaceae)石斛属(Dendrobium)多年生附生草本植物[1],一种名贵珍稀濒危的中药材。自古以来就有“植物熊猫”、“救命仙草”的美誉。其主要分布于安徽西南部（大别山）、浙江东部（鄞县、天台、仙居）、福建西部（宁化）、广西西北部（天峨）、四川（地点不详）、云南东南部（石屏、文山、麻栗坡、西畴）。生于海拔达1600米的山地半阴湿的岩石上[2]。铁皮石斛具有滋阴清热、生津益胃、润肺止咳等功效,位列“中华九大仙草之首”,被录入2010版药典[3]。由于铁皮石斛在自然条件下生长的环境较为苛刻，加上人们过度采挖，导致野生的铁皮石斛资源濒临灭绝。目前铁皮石斛已经实现了人工栽培，但一般也不易成活。铁皮石斛主要含有多糖、生物碱、氨基酸、酚类化合物等化学成分。现代药理研究表明铁皮石斛在增强免疫力、抗肿瘤、抗氧化、抗疲劳、降血糖、生津、镇咳等方面有多种功效[4]。本文就铁皮石斛多糖的含量、药理作用、提取方法和组成等方面研究工作进行概
述。 2 铁皮石斛多糖含量的研究 近年来,铁皮石斛多糖的研究得到了人们越来越多的关注。由于铁皮石斛多糖是铁皮石斛的主要成分，其含量较高,还具有提高免疫力、抗氧化、抗肿瘤等功效,使得铁皮石斛在医学上具有极大的应用前景。 多糖的含量测定方法有苯酚-硫酸法[5]、3,5-二硝基水杨酸法[6]、分子光谱法[7]等。 2.1 不同器官组织、不同生长期多糖含量不同 无论是野生苗还是人工栽培苗，都是茎中多糖含量最高，又尤以二年生的茎中多糖含量最高。 何铁光[8]发现，野生铁皮石斛茎中的多糖含量随年份不同含量差异较大，多年生茎中的多糖含量最高，其次是叶。华允芬[9]也发现铁皮石斛的多糖含量是茎>根；尚喜雨[10]对铁皮石斛的组培苗、野生植株、栽培植株中多糖的含量及分布进行了系统的分析和研究，也发现铁皮石斛的多糖含量很高，尤以茎段为最；不同部位的含量存在一定差异，茎部的差异要大于根、叶。这说明传统用药上铁皮石斛以茎为入药部分在主要化学成分分析上是合理的。 何铁光[11]对铁皮石斛的组培产物原球茎的多糖含量进行了测定，发现原球茎与野生品的多糖和总氨基酸含量相近。初步证明以组织培养获得的铁皮石斛原球茎代替其野生品是解决铁皮石斛资源紧缺的有效途径。
石斛中多糖含量的测定
题目石斛中多糖含量的测定 学生高换楼学号1111034082 所在学院化学与环境科学学院 专业班级化工1102班 指导教师季晓晖 完成地点理工学院 2015 年06 月08 日
石斛中多糖含量的测定 高换楼 （理工学院化学与环境科学学院化工专业1102班，723001） 季晓晖 [摘要] 石斛为我国常用贵重药材，有养阴清热、益胃生津的功效，石斛一直备受国外研究者的重视。本文利用蒽酮-硫酸法对铁皮石斛多糖的含量进行了测定，并采用正交试验得到最佳实验方案，在石斛粉碎程度为粉末、液料比为50mL/g、提取2次，每次3小时的情况下多糖提取率最高。本文的实验结果为今后铁皮石斛多糖提取的质量评价及其进一步开发和利用提供参考依据。 [关键词] 石斛；多糖；蒽酮-硫酸法；抗氧化性；测定； Determination of Dendrobium polysaccharide content GAO Huanlou （Grade 02, Class 11, Major chemical engineering, School of chemical and environmental science Dept, Shaanxi University of Technology, Hanzhong 72300x, Shaanxi） Tutor: JI Xiaohui Abstract: Dendrobium is in common use in our country precious medicinal herbs, the effect of nourishing yin and clearing heat, nourishing stomach fluid, Dendrobium has attracted a lot of attention of researchers at home and abroad. The anthrone-sulfuric acid method of Dendrobium officinale polysaccharide content were measured, and using the orthogonal test and the optimum solution is obtained. In Dendrobium degree of comminution is in the form of powder, liquid to solid ratio for 50mL/1g, extraction 2 times, every time 3 hours of polysaccharides extraction rate was the highest. The experimental results for the quality evaluation of future Dendrobium officinale polysaccharide extraction and its further development and utilization to provide reference. Key words:Dendrobium; polysaccharide; anthrone-sulfuric acid method; antioxidation; determination;