蟾蜍坐骨神经腓肠肌标本制备

蟾蜍坐骨神经腓肠肌标本制备和

不同强度和频率对肌肉收缩的影响

一、实验摘要

1.目的：掌握制备具有正常兴奋收缩功能的蛙类坐骨神经腓肠肌标本基

本操作以及蛙类手术器械的使用方法。学习微机生物信号采集处理系

统和换能器的使用。记录在刺激时间、强度变化率恒定的条件下，不

同强度和频率的电刺激对肌肉收缩的影响。

2.方法：应用蛙类捉拿方法并且毁脑脊髓后制备坐骨神经-腓肠肌标本，

用锌铜弓分别刺激坐骨神经和腓肠肌，观察肌肉变化。再利用张力换

能器将压力变化转换为电信号，用微机生物信号采集处理系统记录不

同强度和频率对肌肉收缩的影响的变化曲线。

3.结果：用锌铜弓刺激坐骨神经时腓肠肌发生收缩。在保持足够的刺激

时间(脉冲波宽)不变的条件下，通过逐步增加对蟾蜍坐骨神经的刺激

强度(脉冲振幅)和改变电脉冲刺激频率可发现当电压低于阈值的强

度刺激，坐骨神经支配腓肠肌的神经纤维不发生兴奋，刺激电压达到

阈强度时，坐骨神经干中阈值最低的神经开始兴奋。刺激强度逐渐增

大，总收缩张力增加。当刺激电压达到使支配腓肠肌的神经纤维全部

兴奋，则收缩张力达单收缩最大值。

4.结论：在一定刺激时间下，刚能引起组织发生兴奋的刺激称为阈刺激，

所达到的强度为阈强度；能引起组织发生最大兴奋的最小刺激称为最

大刺激，相应的刺激强度叫最大刺激强度。介于阈刺激和最大刺激间

的刺激称阈上刺激，相应的刺激强度称为阈上刺激强度。

二、关键词：坐骨神经、腓肠肌、兴奋性、阈值

三、引言：刺激神经使神经细胞产生兴奋，兴奋沿神经纤维传导，通过神经肌接头的化学传递，使肌肉终板膜上产生终板电极，终板电极可引起肌肉产生兴奋（即动作电位），传遍整个肌肉纤维，再通过兴奋-收缩耦联使肌纤维中粗、细肌丝产生相对滑动，宏观上表现为肌肉收缩。[1]

四、材料和方法

1.实验对象：蟾蜍

2.实验仪器：张力换能器、微机生物信号采集处理系统、剪刀、铁碗、

培养皿、锌铜弓、玻璃分针、大头针、蛙板、尖头镊子、棉线、针形

引导电极

3.实验药品和试剂：任氏液

4.实验方法：

1)观察蟾蜍毁脑脊髓前后四肢肌张力的变化。用锌铜弓分别刺激坐

骨神经和腓肠肌，观察肌肉的反应。

2)毁脑脊髓取蟾蜍一只，用左手握住，以食指压其头部前端使

其尽量前俯，右手持探针自枕骨大孔处垂直刺入，到达椎管，即

将探针改变方向刺入颅腔，向各侧不断搅动，彻底捣毁脑组织；

再将探针原路退出，刺向尾侧，捻动探针使逐渐刺入整个椎管内，

捣毁脊髓。此时蟾蜍下颌呼吸运动应消失，四肢松软，即成为一

毁脑脊髓的蟾蜍。否则须按上法再行捣毁。

3)剪除躯干上部及内脏用粗剪刀在颅骨后方剪断脊柱。左手握住

蟾蜍脊柱，右手将粗剪刀沿两侧（避开坐骨神经）剪开腹壁。此时躯干上部及内脏即全部下垂。剪除全部躯干上部及内脏组织，弃于瓷盆内。

4)剥皮避开神经，用右手拇指和食指夹住脊柱，左手捏住皮肤边

缘，逐步向下牵拉剥离皮肤。拉至大腿时，如阻力较大，可先剥下一侧，再剥另一侧。将全部皮肤剥除后，将标本置于盛有任氏液的培养皿中。

5)洗净双手和用过的全部手术器械，再进行下列步骤。

6)分离双腿避开坐骨神经，用粗剪刀从背侧剪去骶骨，然后沿中

线将脊柱剪成左右两半，再从耻骨联合中央剪开（为保证两侧坐骨神经完整，应避免剪时偏向一侧）。将已分离的标本浸入盛有任氏液的培养皿中。

7)游离坐骨神经取腿一条，先用剥离分针沿脊柱侧游离坐骨神经

腹腔部，然后用大头针将标本背位固定于干净蛙板上。用玻璃分针循股二头肌和半膜肌之间的坐骨神经沟，纵向分离暴露坐骨神经之大腿部分，直至分离至腘窝颈神经分叉处。然后剪断股二头肌腱、半膜肌和半膜肌肌腱，并绕至前方剪断股四头肌腱。自上向下剪断所以坐骨神经分支。将连着3-4节椎骨的坐骨神经分离出来。

8)完成坐骨神经小腿标本将已游离的坐骨神经搭在腓肠肌上。用

粗剪刀自膝关节周围向上剪除并刮净所以大腿肌肉，在距膝关节约1cm处剪断股骨。弃去上段股骨，保留部分即为坐骨神经小腿标本。

9)完成坐骨神经腓肠肌标本用尖子镊子在上述坐骨神经腓肠肌

标本的跟腱下方穿孔，穿线结扎之。提起结扎线，在结扎线下方剪断跟腱，并逐步游离腓肠肌至膝关节处，左手握住标本的股骨部分，使已游离的坐骨神经和腓肠肌下垂，右手持粗剪刀水平方向伸进腓肠肌与小腿之间，在膝关节处剪断，与小腿其余部分分离。左手保留部分即为附着于股骨之上的、具有坐骨神经支配的腓肠肌标本。将标本浸入盛有新鲜任氏液的培养皿中待用。

10)实验系统连接和参数设置张力换能器的输出端与生物信号采集

处理系统的输入通道相连。启动RM6240系统软件，在系统软件窗口设置仪器参数：点击“实验”菜单，选择“刺激强度（或频率）对骨骼肌收缩的影响”项。参数：通道模式为张力，采样频率400 Hz～1 kHz，扫描速度1 s/div，灵敏度10～30 g，时间常数为直流，滤波频率100 Hz。在“选择”下拉菜单中选择“强度/频率”

项，显示刺激参数。

11)将离体蟾蜍坐骨神经腓肠肌标本固定在屏蔽盒中，腓肠肌跟腱的

扎线固定在张力换能器的悬臂梁上。坐骨神经放在刺激电极和引导电极上，保持神经与电极接触良好。针形引导电极插入腓肠肌并固定。

12)观察实验现象设定在刺激时间、强度变化率恒定，且强度和频

率初始条件均为零的条件下，采集不同强度和频率的电刺激对肌

肉收缩的影响数据。

五、实验结果

1）用锌铜弓刺激坐骨神经时腓肠肌发生收缩。

2）不同频率递增对肌肉收缩影响记录图

3）不同强度对肌肉收缩影响记录图

在一定刺激时间下，刚能引起组织发生兴奋的刺激称为阈刺激，所达到的强度为阈强度；能引起组织发生最大兴奋的最小刺激称为最大刺激，相应的刺激强度叫最大刺激强度。介于阈刺激和最大刺激间的刺激称阈上刺激，相应的刺激强度称为阈上刺激强度。

如上图所示：阈强度为0.096V，最大刺激强度0.162V。

开始收缩的频率为3Hz ，完全强直收缩的频率为23Hz

六、实验分析

1.锌铜弓用金属锌和铜铆接而成，锌铜弓在极性溶液中形成回路时，锌与铜两

极产生约0.5-0.7V的直流电压，电流的刺激作用于神经肌肉标本，由于产

生生物电流，因而引起肌肉的收缩。

2.制备标本的过程中，要不断滴加任氏液，以防标本干燥，丧失正常生理活性；

操作过程中应避免强力牵拉和手捏神经或夹伤神经肌肉；毁脑脊髓时防止蟾蜍皮肤分泌的蟾蜍毒液射入操作者眼内或污染实验标本。

3.在恒定时间间隔用不同强度的电压刺激坐骨神经，当电压低于阈值的强度刺

激，坐骨神经支配腓肠肌的神经纤维不发生兴奋，其所支配的肌细胞也不会发生兴奋和收缩。刺激电压达到阈强度（本次实验阈强度为0.095V）时，坐骨神经干中阈值最低的神经开始兴奋，其所支配的运动单位的肌纤维兴奋并发生收缩。刺激强度逐渐增大，坐骨神经干中兴奋的神经纤维增加，兴奋和收缩的运动单位增加，令总收缩张力增加。当刺激电压达到使支配腓肠肌的神经纤维全部兴奋，则收缩张力达单收缩最大值（本次实验最大刺激强度

0.162V）。

4.如果给肌肉以连续短促刺激，随着刺激频率的不同，肌肉收缩会出现不同的

形式。当频率较低时（本实验频率为3Hz），后一个刺激落在前一个刺激引起的收缩过程结束之后，则只引起一连串各自分开的单收缩。随频率增加，后一个刺激落在前一个刺激引起的收缩过程的舒张期，则如实验记录数据所示的在频率为7Hz时形成了不完全强直收缩。当频率增加到每一个后面的刺激落在前一个收缩过程中的收缩期，则各次收缩的张力变化和长度完全融合或叠加起来，就形成完全强直收缩，如实验结果记录所示，开始完全强直收缩的频率为23Hz。

七、实验结论

1.蛙类的某些基本生命活动和生理功能与哺乳类动物有相似之处，而且其离体

组织的生活条件比较简单，易于控制和掌握，来源也较丰富，由此在生理学实验，尤其是细胞生理学的某些实验中，常用蛙或蟾蜍的坐骨神经腓肠肌标本来观察神经肌肉的兴奋性、刺激与反应的规律及肌肉收缩的特点等。

2.在保持足够的刺激时间(脉冲波宽)不变的条件下，通过逐步增加对蟾蜍坐骨

神经的刺激强度(脉冲振幅),当电压低于阈值的强度刺激，坐骨神经支配腓肠肌的神经纤维不发生兴奋。刺激电压达到阈强度时，坐骨神经干中阈值最低的神经开始兴奋。当刺激电压达到使支配腓肠肌的神经纤维全部兴奋，则收缩张力达单收缩最大值。

3.在保持足够的刺激时间(脉冲波宽)不变的条件下和改变电脉冲刺激频率可

发现当频率较低时,只引起一连串各自分开的单收缩。随频率增加，后一个刺激落在前一个刺激引起的收缩过程的舒张期，则形成了不完全强直收缩。

当频率增加到每一个后面的刺激落在前一个收缩过程中的收缩期，则各次收缩的张力变化和长度完全融合或叠加起来，就形成完全强直收缩。

参考文献：

[1]陆源、林国华、杨午鸣主编《机能学实验教程》朱大年、王庭槐第8版《生理学》

[2]朱大年、王庭槐第8版《生理学》

实验十人类染色体g显带技术及g带核型分析

实验十人类染色体G显带技术及G带核型分析 实验目的 1、初步掌握染色体G带标本的制备技术。 2、了解人类染色体的G显带的带型特征。 实验用品 1、材料：常规方法制备的中期人类染色体标本（标本片龄不超过30天为宜）。 2、器材：显微镜、恒温培养箱、烤箱、恒温水浴箱、冰箱、染色缸、小镊子、玻片架、香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸。 3、试剂：％胰蛋白酶溶液、％EDTA溶液、胰蛋白酶一EDTA混合液、％生理盐水、蒸馏水、Giemsa原液、Giemsa稀释液、1／15mol ／L磷酸缓冲液。 实验原理 人们将用各种不同的方法，以及用不同的染料处理染色体标本后，使每条染色体上出现明暗相间，或深浅不同带纹的技术称为显带技术（banding technique）。本世纪70年代以来，显带技术得到了很大发展，且在众多的显带技术中（Q带、G带、C带、R带、T带），G带是目前被广泛应用的一种带型。因为它主要是被Giemsa染料染色后而显带，故称之为G显带技术，其所显示的带纹分布在整个染色体上。 研究发现，人染色体标本经胰蛋白酶、Na0H、柠檬酸盐或尿素等试剂处理后，再用Giemsa 染色，可使每条染色体上显示出深浅交替的横纹，这就是染色体的G带。每条染色体都有其较为恒定的带纹特征，所以G显带后，可以较为准确的识别每条染色体，并可发现染色体上较细微的结构畸变。关于G显带的机理目前有多种说法，例如，Lee等（1973）认为染色体上与DNA结合疏松的组蛋白易被胰蛋白酶分解掉，染色后这些区段成为浅带，而那些组蛋白和DNA结合牢固的区段可被染成深带。有人认为，染色体显带现象是染色体本身存在着带的结构。比如用相差显微镜观察未染色的染色体时，就能直接观察到带的存在。用特殊方法处理后，再用染料染色，则带更加清楚，随显带方法不同，显出来的带特点也不一样，说明带的出现又与染料特异结合有关。一般认为，易着色的阳性带为含有AT多的染色体节段，相反，含GC多的染色体段则不易着色。总的来说，G显带的机理还未搞清。 内容与方法 一、人类染色体G显带标本制备 1、胰蛋白酶法 ①将常规制备的人染色体玻片标本（未染色的白片）置70℃烤箱中处理2小时，然后转入37℃培养箱中备用，一般在第3～7天进行显带。 ②取％的胰蛋白酶原液加生理盐水至50ml，配成％的工作液并用NaHCO3调pH值至7左右。 ③将配好的胰蛋白酶工作液放入37℃水浴箱中预热。 ④将玻片标本浸入胰蛋白酶中，不断摆动使胰蛋白酶的作用均匀，处理1～2分钟（精确的时间自行摸索）。 ⑤立即取出玻片，放入生理盐水中漂洗两次。 ⑥染色。将标本浸入37℃预温的Giemsa染液（1:10的Giemsa原液和的磷酸缓冲液）

蟾蜍坐骨神经腓肠肌标本制备

蟾蜍坐骨神经腓肠肌标本制备和 不同强度和频率对肌肉收缩的影响 一、实验摘要 1.目的：掌握制备具有正常兴奋收缩功能的蛙类坐骨神经腓肠肌标本基 本操作以及蛙类手术器械的使用方法。学习微机生物信号采集处理系 统和换能器的使用。记录在刺激时间、强度变化率恒定的条件下，不 同强度和频率的电刺激对肌肉收缩的影响。 2.方法：应用蛙类捉拿方法并且毁脑脊髓后制备坐骨神经-腓肠肌标本， 用锌铜弓分别刺激坐骨神经和腓肠肌，观察肌肉变化。再利用张力换 能器将压力变化转换为电信号，用微机生物信号采集处理系统记录不 同强度和频率对肌肉收缩的影响的变化曲线。 3.结果：用锌铜弓刺激坐骨神经时腓肠肌发生收缩。在保持足够的刺激 时间(脉冲波宽)不变的条件下，通过逐步增加对蟾蜍坐骨神经的刺激 强度(脉冲振幅)和改变电脉冲刺激频率可发现当电压低于阈值的强 度刺激，坐骨神经支配腓肠肌的神经纤维不发生兴奋，刺激电压达到 阈强度时，坐骨神经干中阈值最低的神经开始兴奋。刺激强度逐渐增 大，总收缩张力增加。当刺激电压达到使支配腓肠肌的神经纤维全部 兴奋，则收缩张力达单收缩最大值。 4.结论：在一定刺激时间下，刚能引起组织发生兴奋的刺激称为阈刺激， 所达到的强度为阈强度；能引起组织发生最大兴奋的最小刺激称为最 大刺激，相应的刺激强度叫最大刺激强度。介于阈刺激和最大刺激间 的刺激称阈上刺激，相应的刺激强度称为阈上刺激强度。 二、关键词：坐骨神经、腓肠肌、兴奋性、阈值 三、引言：刺激神经使神经细胞产生兴奋，兴奋沿神经纤维传导，通过神经肌接头的化学传递，使肌肉终板膜上产生终板电极，终板电极可引起肌肉产生兴奋（即动作电位），传遍整个肌肉纤维，再通过兴奋-收缩耦联使肌纤维中粗、细肌丝产生相对滑动，宏观上表现为肌肉收缩。[1] 四、材料和方法 1.实验对象：蟾蜍 2.实验仪器：张力换能器、微机生物信号采集处理系统、剪刀、铁碗、 培养皿、锌铜弓、玻璃分针、大头针、蛙板、尖头镊子、棉线、针形 引导电极 3.实验药品和试剂：任氏液 4.实验方法： 1)观察蟾蜍毁脑脊髓前后四肢肌张力的变化。用锌铜弓分别刺激坐 骨神经和腓肠肌，观察肌肉的反应。 2)毁脑脊髓取蟾蜍一只，用左手握住，以食指压其头部前端使 其尽量前俯，右手持探针自枕骨大孔处垂直刺入，到达椎管，即 将探针改变方向刺入颅腔，向各侧不断搅动，彻底捣毁脑组织； 再将探针原路退出，刺向尾侧，捻动探针使逐渐刺入整个椎管内， 捣毁脊髓。此时蟾蜍下颌呼吸运动应消失，四肢松软，即成为一 毁脑脊髓的蟾蜍。否则须按上法再行捣毁。

动植物标本采集及其制作方案计划

综合实践活动方案 动植物标本采集及制作 单位：鹤壁市第一中学 主办：万物生学社 辅导教师：孙溥辉

活动名称：动植物标本采集及制作 活动类型：综合实践类 适用年级：高一、高二年级 指导思想： 开发学生个性潜能，培养学生创新精神和实践能力，开阔学生视野，充分利用当地资源，促进学生自主合作探究，培养学科学、爱科学的精神及审美情趣，培养爱自然爱家乡的道德情操，促进学生的全面发展，促进学校特色的形成。 目的任务： 1.从学生的兴趣爱好出发，开发适合学生水平，符合学生特 点的综合活动型校本课程。 2.通过学习不同类型动植物标本的采集和制作，让学生学会 动植物标本采集、制作的具体操作过程，锻炼和培养学生的动手能力。 3.通过采集和制作动植物标本，增强学生对自然界生物的益 害的认识和了解，增强自觉保护生物多样性的观念。 4.通过对校园植物的认识，让学生亲近自然，提高学生热爱 自然、热爱生物、珍惜生命的理念。 活动内容： 1、学会采集、制作当地常见的动植物标本。 2、学会利用网络解决制作过程中的疑问。 3、师生合作将社会实践活动取得的成果进行展评，从而激发学生的学习兴趣，丰富课余生活，使学生意识到获取知识和技能，培养思想和方法不仅仅在课堂，而更多的应该在课外，在社会实践活动中。活动用具： 采集制作动植物标本的用具：旧报纸或草纸，刷子或纱布，标本夹或两块比台纸大一些的木板和书，吸水纸或棉絮，台纸，标签，胶水，胶带或缝衣针和线，毛笔，刀片，剪刀，玻璃纸。 活动时间：

1．采集制作：5月1日——5月10日； 2．集中展评：2017年5月 20日。 活动组织：孙溥辉、王杰 活动地点： 1．采集地点：校内或校外； 2．制作参评地点：学校生物实验室、校园内 纪律安全： 组织活动的教师负责对学生进活动安全教育，学生必须遵守安全规定，在校内、外采集标本时一定注意人身安全，对人类有安全威胁的生物，一律不准采集（指导教师必须明确要求）。 课时安排：6课时 活动实施： 活动组织形式：分组实验 实施步骤：本课程分为6个课时。 评估方法 每小组在每次标本制作实验后，每人上交一份实验成果，每个实验成果按等级打分，占总成绩的55％。 书面测试。试题主要考核学生对几种比较常用动植物标本制作的掌握情况，要求学生能写出具体的制作流程，并且加强试题的探究性和开放性。这部分占总成绩的35％。 出勤率和课堂参与态度占总成绩的10％。 I 植物标本采集和制作部分 一、藻类植物标本制作 (一)水绵整体封芷法 1、取纯净的水绵丝状体少许—→表面皿洗培养—→分散—→眼科剪刀分割成几段。 2、固定：将分割的材料放入小口瓶或小培养皿中，用弱性铬酸醋固定液固定12－24小时。 配方：铬酸1g 或10%铬酸2.5ml 冰醋酸1g 或10%醋酸5 ml H2：99ml 或H292.5ml

坐骨神经-腓肠肌标本制备(医学相关)

坐骨神经-腓肠肌标本制备 一、实验目的要求 1、学习蛙类动物单毁髓与双毁髓的方法。 2、学习并掌握坐骨神经-腓肠肌标本及腓肠肌标本的制备方法。 3、了解电刺激的极性法则。 二、实验原理 1、蛙或蟾蜍等两栖类动物的一些基本生命活动和生理功能与温血动物相似，而其离体组织生活条件易于掌握，在任氏液的浸润下，神经肌肉标本可较长时间保持生理活性。因此，在生理学实验中常用蛙或蟾蜍坐骨神经腓肠肌离体标本来观察神经肌肉的兴奋性、兴奋过程以及骨骼肌收缩特点等。 2、细胞的静息膜电位为外正内负，电刺激可改变可兴奋细胞的膜电位差。膜电位减小时，细胞去极化，细胞兴奋；膜电位增大时，细胞超极化，细胞兴奋性被抑制。蘸有任氏液的锌铜弓接触活组织时，可产生沿锌片—活组织—铜片流向的电流对细胞产生刺激效应。 三、实验材料和仪器 1、实验材料：牛蛙 2、实验器材：手术剪、手术镊、手术刀、眼科剪、眼科镊、毁髓针、蛙板、固定针、滴管、培养皿、玻璃分针锌铜弓、污物缸、粗棉线、任氏液 四、实验步骤 1、洗净实验动物→毁髓→剥制后肢→分离坐骨神经→游离腓肠肌→游离股骨头→标本检验→电刺激极性法则的验证 2、双毁髓 一只手握住牛蛙，使其背部向上。用拇指压住牛蛙背部，食指按压其头部前端，另一只手持毁髓针，由两眼之间沿中线向下触划，触及凹陷处即为枕骨大孔。将毁髓针垂直刺入枕骨大孔。将针尖向前刺入颅腔内搅动，此时为单毁髓；将毁髓针退回枕骨大孔，针尖转向后方，与脊椎平行刺入椎管内捣毁脊髓，完成双毁髓。 3、坐骨神经-腓肠肌标本制备 （1）剥制后肢标本:轻提双毁髓蛙，自背面耻骨联合上方约1公分处横向剪断脊柱。轻轻托起后肢，看清坐骨神经位置，沿脊柱两侧横向切口剪断体壁，去除断口以上肢体和内脏放入污物缸。剥去后肢皮肤后放入任氏液中备用。 （2）分离两后肢：用粗剪刀纵向剪开脊柱，并剪断两后肢相连的肌肉，一只用于剥制标本，一只放入任氏液中保存。 （3）分离坐骨神经：将后肢标本脊柱端腹面向上，趾端向外侧用蛙钉将标本固定在蛙板上。先在腹腔面用玻璃分针沿脊柱游离坐骨神经,然后在标本的背侧于股二头肌与半膜肌的肌肉缝内将坐骨神经与周边的结缔组织分离直到腘窝，但不要伤及神经，其分支待以后用手术剪剪断肌肉。 （4）游离腓肠肌：同样用玻璃分针将腓肠肌与其下的结缔组织分离并在其跟腱处穿线、结扎； （5）分离股骨头：捏住股骨，剪去并刮净周围肌肉，保留股骨的后2/3，剪断股骨; （6）检验标本：用手术镊轻提标本的脊椎片，再用经任氏液蘸湿的锌铜弓接触坐骨神经，如腓肠肌发生收缩，则表示标本机能正常。轻提腓肠肌上的结扎线，将标本放入任氏液中保存15-20分钟后进行实验。 （7）电刺激的极性法则验证：用棉线在神经干中间部位进行结扎，以阻断神经传导兴奋的能力。用锌铜弓跨越结扎线刺激坐骨神经干。使锌极在腓肠肌一端刺激，观察腓肠肌收缩发

植物浸制标本的制作--实验指导.ppt

实验七植物浸渍标本的制作 植物浸制标本是将新鲜的植物材料，浸制保存在化学药品配制的溶液里，使其保持原有的形态结构及固有颜色的一种植物形态保存方法。植物浸制标本具有本色泽鲜艳,立体感强, 形态逼真等特点, 是植物分类和植物区系研究必不可少的科学依据，也是植物资源调查、开发利用和保护的重要资料。 一、实验目的 1、学习植物浸渍标本制作的基本原理。 2、学习植物浸渍标本的采集和制作方法。 二、实验设备与材料 1、主要设备与用具：天平、水浴锅、标本瓶（15cm*25cm）、大烧杯（用来煮绿色标本用）、量筒、载玻片（用来固定标本）、白线（固定标本用）、剪刀、玻棒、标签纸等。 2、药品与试剂：酒精、甲醛（或福尔马林）、醋酸铜（或硫酸铜）、冰醋酸、硼酸、亚硫酸、氯化钠、石蜡等。 3、植物材料：新鲜完整的草本植株；木本植物绿色叶枝（枝条长度取 25cm-30cm）；成熟的新鲜红色果蔬（如小番茄、樱桃、红枣、红色小萝卜等）；新鲜黄色果蔬（如姜、梨、金橘、黄番茄等）。每小组准备一种颜色的植物材料。 三、实验步骤 植物浸渍标本一般经过采集、制作、记载等一系列步骤来完成。 1、植物标本的采集 自然界植物种类繁多，采集标本要根据使用目的而定。 采集标本时应注意以下几点： ①必须采集完整的标本。被子植物尽量采到花、果和种子，草本植物要求尽量根、茎、叶、花、果实和种子采全。对一些有地下茎的种类，必须采集这些植物的地下部分，否则将难以鉴定。 ②雌雄异株的植物，应分别采集雌株和雄株。 ③乔木、灌木或特别高大的草本植物，只能采取其植物体的一部分。但必须注意采集该植物具有代表性的部分。 ④对寄生植物的采集，应注意连同寄主一起采下，并要分别注明。 ⑤采集标本的份数，一般要采2-3份，给以同一个编号。 ⑥采集标本时应注意爱护资源，特别是稀有植物。 ⑦必须认真做好野外记录。 主要内容包括植物的产地、生长环境、性状、花的颜色和采集日期等。2、标本的清理

生物实验报告-坐骨神经腓肠肌标本制备

坐骨神经腓肠肌标本的制备和神经干动作电位 的观察与传导速度的测定 一、实验目的： 1.学习蛙类动物双毁髓的实验方法。 2.学习并掌握坐骨神经-腓肠肌标本的制备方法。 3.观察蛙坐骨神经干复合动作电位的基本波形，并了解其产生的原理。 4.学习蛙和蟾蜍离体神经干上神经冲动传导速度的方法和原理。 二、实验材料： 1.实验对象：蟾蜍 2.实验器材：常规手术器械（粗剪刀、手术剪、眼科剪、手术镊、眼科镊）蛙板、蛙钉、探针、锌铜弓、玻璃分针、培养皿、任氏液、滴管、手术线、PC机、信号采集处理系统、神经屏蔽盒等。 三、实验原理： 神经干在受到有效刺激以后可以产生复合动作电位，标志着神经发生兴奋。如果在离体神经干的一段施加刺激，从另一端引导传来的神兴奋冲动，可以记录出双相电位，加入在引导的两个电极之间将神经干麻醉或损伤，阻断其兴奋传导能力，这时候记录出的动作电位就成为单相电位。神经细胞的动作电位是以全或无的方式产生的。但是，复合动作电位的幅值在一定刺激强度下是随刺激强度的增加而增大的。

如果在远离刺激点的不同距离处分别引导离体神经干动作电位，两引导点之间的距离为m，在两引导点分别引导出的动作电位的时相差为s。即可按照公式v=m/s来计算出兴奋的传导速度。蛙类的坐骨神经干属于混合性神经，其中包含有粗细不等的各种纤维，其直径一般为3-29um,其中直径最粗的有髓纤维为A类纤维，传导速度在正常室温下为35-40 m/s。 神经每兴奋一次极其在兴奋以后的回复过程中，其兴奋性都要经历一次周期性的变化，其全过程依次包括绝对不应期、相对不应期、超常期和低常期4个时期。为了测定坐骨神经在发生一次兴奋以后兴奋性所发生的周期性变化，首先要给神经施加一个条件性刺激引起神经兴奋，然后在前一兴奋及其恢复过程不同时相再施加一个测试性刺激，用于检查神经的兴奋阈值和所引起的动作电位的幅度，以判定神经兴奋性的变化。 四、实验方法及步骤： 1、坐骨神经干标本制备 （1）破坏脑与脊髓： 取蛙一只，用自来水冲洗干净，左手持蛙，用食指下压其吻部，拇指按压在其骶髂关节下方，使其头尽量前俯，右手持探针沿两眼之间中线向后方轻划，至触及头颈部正中的凹陷处，即为枕骨大孔的位置。用探针在凹陷处垂直刺入枕骨大孔，再将其针尖转向前刺入颅腔，左右搅动探针，彻底捣毁脑组织；然后缓慢地把探针退至枕骨大孔处，将其转向后方，与脊柱平行捻动探针使其刺入整个椎管，彻底捣毁脊

脊椎动物浸制标本的制作

（二）脊椎动物浸制标本的制作 1．鱼类的浸制标本制作 （1）整理姿态：将新鲜的鱼用纱布包好，干燥致死。然后用清水将鱼体表的粘液冲洗干净（勿损伤鳞片）。用注射器从腹部向鱼体内注射10%的福尔马林溶液，以固定内脏，防止腐烂。然后，将鱼的背鳍、臀鳍和尾鳍展开，用纸板及曲别针加以固定。把整理好的标本侧卧于解剖盘内。鱼体向解剖盘一侧可适量放些棉花衬垫，特别是尾柄部要垫好，以防标本在固定时变形。 （2）防腐固定：加入10%的福尔马林溶液至浸没标本，作为临时固定，待鱼硬化后取出。 （3）装瓶保存：用适当大小的标本瓶（标本瓶要长于鱼体6cm 左右，以便贴上标签后仍能从瓶外看到标本全貌），将固定好的鱼类标本，头朝下放入。或根据标本瓶的内径和高度截一玻璃片，将标本用两条丝线分别从鳃盖骨后缘体侧和尾柄部穿入，缚扎在玻璃片上。用橡胶瓶塞或软木塞剔好小槽做成4个玻片固定脚，分别嵌在玻片两侧，将玻片和标本缓缓装入标本瓶内。最后，将10%福尔马林倒入瓶内至满，盖严瓶盖。 （4）贴标签：将注有科名、学名、中名、采集地、采集时间的标签贴于瓶口下方。标签贴好后，可在标签上用毛笔刷一层石蜡液，以防字迹褪色。 2．两栖、爬行类浸制标本制作：

（1）整理姿态：把活的蛙、蜥蜴、蛇、龟等动物放入大小适宜的标本缸或厚塑料袋内，用脱脂棉浸透乙醚或氯仿放入其中，盖严缸盖或封紧袋口，使动物麻醉。待致死后，立即进行整形，按它们生活的姿态，用大头针固定在蜡盘上。体形大的标本应事先在体内注射10%的福尔马林溶液。 （2）固定保存：与鱼类标本的固定保存方法相同。个体中等或较小的标本应头朝上绑于玻璃板上，再放入瓶中保存，使外形结构更易观察且展示性更强。 3．解剖标本的浸制制作：解剖标本的制作目的是观察内脏，应按解剖的一般方法除去体壁，以露出内脏。如要展示某一器官系统时，还须小心地除去不需要的部分，展示部分的各器官仍保持其自然位置，然后浸泡于10%福尔马林液中。如为标明各器官名称，可用打印好的名词签（或用铅笔书写），用水胶贴在各器官上，待粘牢晾干后，浸入保存液中即可。 （三）浸制标本长期保存时应注意的问题 1．某些新制作的浸制标本，经过一段时间，溶液会变黄或混浊，是动物体内的浸出物所造成。标本在浸泡1～3个月后，根据情况更换固定液2～3次，直到浸液不再发黄为止。 2．瓶口应密封，以防药液挥发。当标本不能全部淹没在保存液中时，应及时添加药液，否则露出部分会变干、变形，甚至发霉变质。

蟾蜍坐骨神经腓肠肌标本的制备坐骨神经干标本的制备缝匠肌神经标本制备

实验六蟾蜍坐骨神经-腓肠肌标本的制备 坐骨神经干标本的制备、缝匠肌神经标本制备 一、实验目的 1、急性动物实验（与慢性动物实验的区别） 2、离体标本实验（与在体标本实验的区别） 3、掌握锌铜弓导致生物电产生的原理 4、掌握离体标本的制备及手术训练 可 集到唾液腺分泌的纯净唾液；研究某种内分泌功能时，常先摘除动物某个内分泌腺，以便观察这种内分泌激素缺乏时以及人为替代后的生理功能改变，用以了解这种内分泌激素的生理作用。慢性动物实验适用于观察某一器官或组织在正常情况下的功能以及在整体中的作用地位，但不宜用来分析某一器官或组织细胞生理功能的详细机制。与急性动物实验相比，慢性动物实验的干扰因素较多，实验条件较难控制。 2、锌铜弓的作用及原理 锌铜弓：在生理学实验中，锌铜弓是检验标本机能活性最常用而简易的刺激器。由铜片和锌片两种金属制成。锌铜弓具有刺激作用，是因为金属与溶液之间产生电位差，即电极电位。

通常将金属浸入电解质溶液中，如Zn便溶解而成Zn离子。而在Zn的里面则形成负离子。Cu在溶液中则相反，金属与溶液之间便产生了电位差——电极电位。如果将Zn和Cu一端接触，则在接触部位电流由Cu向Zn方向流动；而在溶液中则相反，由Zn向Cu流动。当锌铜弓接触组织时（注意：表面必须湿润），电流便沿Zn→可兴奋组织→Cu方向流动，而产生流动作用。这样，锌铜弓好像一个电池，Zn如同其阳极，Cu好像阴极而发挥作用。神经或肌肉的电刺激阈值非常小，所以仅用锌铜弓接触，即可构成刺激，以便检验组织的机能活性。 3、蟾蜍作为生理学实验模式生物的优点 蛙或蟾蜍等两栖类动物的一些基本生命活动和生理功能与温血动物相似，而其离体组织生活条件易于掌握，在任氏液的浸润下，神经肌肉标本可较长时间保持生理活性，因此，在生理学实验中常用蛙或蟾蜍坐骨神经腓肠肌离体标本来观 处各扎一细线，然后在扎线与脊柱之间剪断神经。提着神经上的细线，将两条坐骨神经分别置于两条大腿上，左手持脊柱，将骶骨翘起，将下位脊柱全部剪除。捏着两侧髂骨向反方向分离，使耻骨联合脱臼后，沿耻骨联合正中将两下肢剪开，将一条腿浸于任氏液中备用，另一条置于浸有任氏液的玻璃板上。 （（2）、（3）两步可变为一手捏住脊柱后端，一手抓着蟾蜍头部向两侧拉开，可直接分离两腿，蟾蜍皮肤仍留在蟾蜍上身部。若试验中当堂进行坐骨神经-腓肠肌兴奋性实验，则不需浸泡入任氏液） （4）游离坐骨神经和剪断股骨：认清坐骨神经沟和腓肠肌的部位，用剪刀剪断梨状肌及其周围的结缔组织，左手提着神经上的细线，右手持剪刀或玻璃分针沿坐骨神经沟细心剥离，直至将坐骨神经剥离到腘窝。将游离干净的坐骨神经

干制标本制作

干制标本制作 干制标本是指以干燥方法制成的标本，其优点是制做简单，勿须其它溶液或容器保存，但干制标本由于脱水容易收缩变形，且容易虫蛀霉变。现以昆虫成虫为例对干制标本加以说明。 （一）采集昆虫 1.使用工具 捕虫网：活泼的昆虫一般适宜用网来捕捉。所以采集昆虫必须要有捕网、扫网及水网。捕网通常用纹帐或白尼龙纱制成网圈，用粗铁丝制成环形，直径约30厘米左右，底袋呈圆锥形。网柄长约1米左右。扫网主要适于在草丛中捕捉昆虫。可用麻布或亚麻布制成，比捕网略小一些。网柄要短（长约一尺半左右）而粗，网要坚固。此外，扫网是网底开。水网和捕网大致相同，但是用细布制成，并且网比较浅，而网柄较长。 毒瓶：采集时，一般应带两个毒瓶，一个瓶毒杀蝴蝶及蛾类昆虫，另一瓶毒杀其它类的昆虫。毒瓶可用直筒形瓶制成，也可用广口瓶或平底试管等制成。毒杀剂可采用氰化钠或氰化钾等，也可用敌敌畏、氨水、乙醚等。 三角纸包：外出采集，采到昆虫不能立即做成标本，可先用三角纸包包好，编号记载后，带回驻地或学校制做。三角纸包的大小可由昆虫的大小决定。取较柔软难透水的纸一张折成三角袋。 采集箱：野外采集时，有些标本需要当时就进行针插，所以要有一个放标本的盒子。一般用保存针插标本的木标本盒就可以，另外也可以用轻的木料作成采集箱（见图7）。箱盖和箱底高度一样（约4厘米），都贴上软木板便于插标本。箱的大小关系不大，也可分为几格放其它物品，除针插标本外，可把纸三角袋和纸包标本放在箱内，以免压坏。 2.采集昆虫的方法 网捕：网捕主要用来捕捉会飞的昆虫，或停在植物上的昆虫。网捕的方法如下：当昆虫飞来，迎面用网捕捉，当虫子入网后，使网底向上甩，连虫子同网底一齐翻到上面来，然后再用手或试管伸入网内将虫子取出来。 扫捕：此法主要用在大片的草丛和茂密的灌木中。当采集者走到茂密的藏有虫子的草丛中时，用扫网在上面左右摆动，一面扫一面前进，将有许多小虫子集中到网底，或者被甩入网底，连接着胶管中。尤其在途中采集而时间仓促的时候，边扫边走也可以得到许多标本。 灯光诱集：夜间，灯下会有许多昆虫飞来，停在窗上，墙上，或绕灯而飞，所以在灯下常常能采到许多昆虫标本。方法如下：野外采集可以临时拉线挂一盏200瓦电灯或点一盏汽油灯，在灯的后面张开一块白布，下面用石头压住。这样可以诱来非常多的各种昆虫，最多的是大小不一的蛾类，它们多停在白布上。这时，只要多备几个毒瓶就可以大量收集昆虫。 （二）制作标本 1.标本制作前需要准备的工具

损伤离体蟾蜍坐骨神经对腓肠肌收缩的影响

损伤离体蟾蜍坐骨神经对腓肠肌收缩的影响 摘要：目的：本实验通过设置自身对照，观察损失离体蟾蜍坐骨神经对腓肠肌收缩情况和生物电变化来研究神经损伤对肌肉收缩功能的影响。方法：通过生物信号采集处理系统给予激损伤前后的离体蟾蜍坐骨神经相同强度和频率的刺激。观察记录神经与骨骼肌的生物电和相应的收缩情况，对比损伤神经前后，神经干动作电位（action potential，AP）、肌电、肌肉收缩的图像变化。结果：损失前，依次出现神经干动作电位（action potential，AP）、肌电、肌肉收缩的波形，说明坐骨神经和腓肠肌均有生物电、腓肠肌有明显肌肉收缩；损伤后，只出现神经干AP的波形，说明坐骨神经仍有生物电，而腓肠肌生物电消失，肌肉不收缩。结论：损伤离体蟾蜍坐骨神经后，再刺激神经，其骨骼肌就不会随之产生肌膜AP以及收缩现象。骨骼肌的收缩需要神经传导兴奋，神经损伤后肌肉因无法接受神经传导的兴奋而无法收缩。关键词：离体蟾蜍；神经损伤；生物电；肌肉收缩 Abstract: Objective: To observe the gastrocnemius bioelectric and contraction change of damaged isolated toad sciatic nerve to explore the influence of never injury on muscle contraction. Methods: By virtue of stimulating toad in vitro sciatic nerve before injury and after, to observe the corresponding record bioelectric nerve and skeletal muscle contraction. Result: Before injury, the sciatic never and gastrocnemius were bioelectric, muscle contracted; after injury, the sciatic never is still bioelectrical, but gastrocnemius bioelectric disappear, muscle does not shrink. Conclusion: Skeletal muscle contractio need for conduction of exciting never, muscle can not shrink after never injury due to unacceptable excitation. Keywords: isolates toad; never injury; bioelectricity; muscle contraction 引言：肌肉是构成动物体的主要组织，其主要功能是当受到来自神经的刺激时产生收缩，进而引起动物体内外的各种运动。[1] 骨骼肌去神经支配后出现肌萎缩和收缩功能的丧失，肌纤维发生与萎缩相关联的系列形态学和组织学变化。近年来随着技术水平和理论研究的进展，治疗效果有了很大的提高，但仍未达到满意的效果。[2]周围神经损伤后神经及其所支配的骨骼肌功能的恢复是当今运动创伤康复及外科领域中较为棘手的问题之一，故本文试探其机理。 1.材料和方法 1.1 实验对象 蟾蜍 1.2 实验药品和试剂 任氏液、蒸馏水 1.3 实验仪器 蛙类手术器械一套（粗剪刀一把、组织剪一把、镊子一把、探针一根、玻璃分针两把、蛙钉四个、蛙板一个、培养皿一个、滴管一个、棉线若干），张力换能器，肌槽，刺激电极，铁架台，生物信号采集处理系统，微机，标本屏蔽盒。 1.4 实验方法 1.4.1实验系统连接和参数设置 张力换能器的输出端与生物信号采集处理系统的输入通道相连。启动RM6240系统软件，在系统软件窗口设置仪器参数。点击“实验”菜单，选择“神经干动作电位、肌电、肌肉收缩”项，调节刺激强度为2V。设置通道一、二参数为生物电，通道三为张力。 1.4.2离体蟾蜍坐骨神经腓肠肌标本制作 （1）捣毁蟾蜍脑脊髓：取蟾蜍一只，左手握蛙，以食指压其头部前端使其尽量前俯，右手持探针自枕骨大孔处垂直刺入，到达椎管，即将探针改变方向刺入颅腔，向各侧不断搅动，

动植物标本采集及制作实施方案

动植物标本采集及制作方案

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综合实践活动方案 动植物标本采集及制作 单位：鹤壁市第一中学 主办：万物生学社 辅导教师：孙溥辉

活动名称：动植物标本采集及制作 活动类型：综合实践类 适用年级：高一、高二年级 指导思想： 开发学生个性潜能，培养学生创新精神和实践能力，开阔学生视野，充分利用当地资源，促进学生自主合作探究，培养学科学、爱科学的精神及审美情趣，培养爱自然爱家乡的道德情操，促进学生的全面发展，促进学校特色的形成。 目的任务： 1.从学生的兴趣爱好出发，开发适合学生水平，符合学生特 点的综合活动型校本课程。 2.通过学习不同类型动植物标本的采集和制作，让学生学会 动植物标本采集、制作的具体操作过程，锻炼和培养学生的动手能力。 3.通过采集和制作动植物标本，增强学生对自然界生物的益 害的认识和了解，增强自觉保护生物多样性的观念。 4.通过对校园植物的认识，让学生亲近自然，提高学生热爱 自然、热爱生物、珍惜生命的理念。 活动内容： 1、学会采集、制作当地常见的动植物标本。 2、学会利用网络解决制作过程中的疑问。 3、师生合作将社会实践活动取得的成果进行展评，从而激发学生的学习兴趣，丰富课余生活，使学生意识到获取知识和技能，培养思想和方法不仅仅在课堂，而更多的应该在课外，在社会实践活动中。活动用具： 采集制作动植物标本的用具：旧报纸或草纸，刷子或纱布，标本夹或两块比台纸大一些的木板和书，吸水纸或棉絮，台纸，标签，胶水，胶带或缝衣针和线，毛笔，刀片，剪刀，玻璃纸。 活动时间：

1坐骨神经腓肠肌标本

观察结果： 用已经湿润的铜锌弓两端先后接触坐骨神经，可观察到腓肠肌产生一次收缩。 并且课观察到先用铜极接触，后用锌极接触时坐骨神经的收缩强度大于先用锌极接触后用铜极接触的收缩强度。 讨论分析： 铜锌弓在溶液中沾湿以后，锌的表面店里出正离子，里面形成负离子，而铜的表面电离出负离子，里面形成正离子。当铜锌弓接触或组织时，电流便沿着锌片，活组织，铜片的方向流动产生刺激反应。所以锌相当于正极，而铜相当于负极。正极的电势高于负极。所以锌极后接触坐骨神经时，收缩的强度比较大。 任氏液的组成模拟了两栖动物的血浆成分，含有神经传导所需的钠离子钾离子葡萄糖等物质，并起维持渗透压的作用。 神经与肌肉是可兴奋组织，神经细胞的静息膜电位为外正内负，坐骨神经接受一次刺激时，膜对钠离子的通透性增加，细胞外的任氏液中的钠离子顺浓度梯度内流，导致膜内负电位减小，当达到阈电位时，钠离子通道全部开放，钠离子大量内流，细胞内正电荷增加，膜内负电位从减小到消失，进而出现膜内正电位。动作电位产生。由于任氏液是导电的，于是在膜的兴奋段和未兴奋段之间，会由于电位差的存在而产生电荷的移动。于是刺激就顺着坐骨神经传导。 当传递到腓肠肌时，即由神经兴奋到肌肉收缩，这个过程就是神经传导电信号，电信号传导至神经-肌肉节点即为突触，轴突末梢膜的钙离子通道开放，膜对钙离子的通透性增加，钙离子就由细胞外进入轴突内。钙离子浓度增高可促进大量囊泡向接头前膜靠近，囊泡膜与接头前模发生融合而破裂，囊泡中的递质乙酰胆碱通过胞作用释放入接头间隙，电信号转化为了化学信号，递质作用于突触后膜（也就是肌肉细胞膜），产生胞内信号，使储存于肌质网中的钙离子释放，引起肌肉收缩。 整个标本包括了神经中枢，传出神经即坐骨神经，效应器即腓肠肌。缺少接收器和传入神经。 结论： 整个标本不是一条完整的反射弧，不是一次反射，只能算为反应。 电刺激可以通过坐骨神经传导并能是腓肠肌产生收缩。说明标本制备成功。

人体外周血淋巴细胞染色体制备与观察实验方案

实验方案 实验外周血淋巴细胞培养及染色体标本制备，染色体组型分析 一、实验目的 1、了解动物细胞培养的方法。掌握人体外周血淋巴细胞培养与染色体标本制备。 2、初步掌握人类染色体G－带的显示方法及人类染色体G－带在染色体识别中的意义。 3、熟悉人类染色体的镜下检查和核型分析方法。初步掌握人类染色体G带的特征及其 识别。 二、实验原理 所谓外周血培养即是将外周血接种在适当的培培养物中加入适量的秋水仙素，使纺锤体微管解聚，这样细胞停留在中期，可以获得大量的分裂细胞。用低渗盐溶液（一般是0.075mol/L的KCl）处理，使其中的红细胞及分裂相细胞膜和一部分细胞质除去，最后以气干法制片，可获得较好的染色体养基中进行培养。人类外周血细胞本来是终末分化细胞，一般没有分裂能力，但经PHA（植物血球凝集素）或ConA等药物刺激后，转变成可分裂的转化细胞。 染色体显带是将染色体标本经过一定程序处理，并用特定染料染色，使染色体沿其长轴显现明暗或深浅相间的横行带纹――染色体带，这种技术，称为染色体显带技术。通过显带，人们可以准确地识别每一条染色体及染色体上的各个区段，并可发现染色体上较细微的结构变化。 在所有的显带技术中，G显带（G banding）是最常见的显带技术，它是将染色体标本用碱、胰蛋白酶或其它盐溶液处理后，再用Giemsa染液染色，在普通显微镜下，可见深浅相间的带纹，称G带（G band）。G显带方法简便，带纹清晰，染色体标本可以长期保存，因此被广泛用于染色体病的诊断和研究。 正常人类染色体的数目为46条(23对)，1960年的Denver会议和1963年的London会议制定了统一的人类染色体命名体制：按照染色体的相对长度、臂比和着丝粒指数，将常染色体（22对）按大小用阿拉伯数字标记，顺次排列为1～22号，性染色体用X和Y标记；并按染色体大小和着丝粒位置，把人类染色体分为七个组，用大写字母A～G表示。 染色体经显带处理后，每条染色体都显示出其特定的带纹特征（见下表）。根据这些特征，可以准确地识别每条染色体，检出染色体数目或结构畸变。 表1 人染色体组型及其特征

浸制标本的制作

浸制标本的制作 方法1 (1)、绿色植物标本的浸制 用50 ml冰醋酸和50ml水配成50%醋酸溶液，在溶液中慢慢加入醋酸铜粉末，不断搅拌，直到饱和为止，配成醋酸铜溶液。 取醋酸铜原液1份，加水4份稀释，将溶液倒入大烧杯内加热至70—85?，然后将新鲜绿色植物放入烧杯内，不久材料变成黄绿色，继续加热直至材料又变成跟原来的色泽相似时停止加热，取出绿色标本，在清水里漂洗干净，浸入5%的福尔马林溶液瓶中保存。 还可用硫酸铜代替醋酸铜，配成饱和的硫酸铜溶液，用硫酸铜溶液同上述方法一样处理绿色植物。 有一些特别幼嫩的植物，不宜加热，可浸入5%硫酸铜溶液里，直至材料由绿变黄，再由黄变绿时取出。浸泡时间约5天左右。标本经清水漂洗后，浸入5%的福尔马林溶液里保存。 标本处理后装瓶时，最好将标本用线轻轻地缚在透明的玻璃片上，连同玻璃片一起浸入5%的福尔马林保存液中保存，保存液一定要没过标本。 (2)、红色标本的浸制。 取4ml福尔马林、4g硼酸、400ml水配置成处理液。选择完整成熟的新鲜果实(如番茄、樱桃等)，洗净后浸入处理液中，当果实由红色转为深褐色时取出。浸泡时间一般为1—3天，但要视果实的大小、颜色深浅而定。果实取出后直接浸入亚硫酸硼酸保存液(100ml1%亚硫酸、2g硼酸、100ml水配成)中保存，可保持果实原有色泽。 (3)、黄绿色标本的浸制。

将黄绿色的果实或植物黄绿色部分(如梨、金橘、甜瓜等)洗干净，浸入5%硫酸铜溶液1—3天，取出后漂洗干净，浸入亚硫酸甘油酒精保存中保存，保存液用 20ml10%亚硫酸、20ml甘油和20ml95%的酒精，加水600ml配成。也可用50ml10%亚硫酸和50ml95%酒精，加水400ml配成亚硫酸酒精保存液，同样能达到保存的目的。 (4)、紫色标本的浸制。 用10ml40%的福尔马林、12ml95%酒精加入200ml配成福尔马林酒精溶液，将洗净的紫色果实，直接浸入上述溶液中保存。如果是紫色的浆果(如葡萄)时必须先浸入福尔马林食盐溶液(12ml40%福尔马林、24ml12%食盐水、水200ml配成)内，选取即将成熟的果实洗净，浸入上述液中2—3月，然后取出，保存在2%的福尔马林溶液瓶中，这样处理后，果实的原有色泽可保持较长时间。 (5)、白色或淡绿色标本的浸制。 取氯化锌10g，加入300ml水中，充分搅拌，溶解后再加入40ml 95%的酒精，静置沉淀后，取上面的澄清液。将白色植物(如银耳、慈菇等)洗干净后浸入上述溶液中保存。也可取15g氯化锌，溶解在300ml水中，再加入8ml40%福尔马林和8ml 甘油，搅匀后静置沉淀，取上层澄清液。 植物浸制标本装瓶后，瓶口要加盖，若观察约两周后，保存液没有变浑浊或产生沉淀，可用熔化的石蜡在瓶口接缝处封口，存放在阴凉处，避免阳光直射，使标本原有的色泽保持时间较长。 方法2 液浸法保存植物标本，关键在于保色、防腐。植物标本浸液有以下几种: 1(普通标本液浸法 用福尔马林50ml、酒精300ml，加蒸馏水2000ml配制而成。这种浸液可使植物标本不腐烂、不变形，但不能保色。

实验五 人类染色体标本制备

实验五人类染色体标本制备 【目的要求】 1．熟悉人外周血淋巴细胞培养的原理。 2 3 【实验原理】 人类间期细胞核中的遗传物质染色质，在细胞进入分裂期时，经逐级螺旋形成染色体。 在分裂期的中期，染色体达到最大程度的凝集，表现为短而粗的典型结构。人外周血的有形 成分中，只有白细胞有核，而白细胞中只有淋巴细胞(主要是小淋巴细胞)具有潜在的细胞分 裂能力。 培养液中加入有丝分裂刺激剂植物血凝素(PHA)可使处于G0期、具有潜在分裂能力的淋 巴细胞转化为具有分裂能力的淋巴母细胞，并进入旺盛的有丝分裂周期；加入纺锤体抑制剂 秋水仙素可使处于分裂过程的淋巴细胞停滞在分裂中期，在收获细胞时，用低渗剂0.075 mol/L KCl对细胞进行低渗处理，可使胞膜胀破，染色体均匀分散；经离心、固定、制片等 过程，最终可获得便于观察分析的染色体标本。 制备的染色体标本片，不经特殊处理，直接染色，在显微镜下观察识别，并进行核型分 析的过程称为染色体非显带核型分析。 【实验用品】 (一) 材料：人外周静脉血。 (二) 器材：吸管、刻度离心管、量筒、5ml注射器、6号针头、台式离心机、试管架、 冷藏载玻片（一端磨砂）、铅笔、酒精灯、超净工作台、恒温水浴箱、载玻片、止血带、酒 精棉球、显微镜、废液缸。 (三)试剂 1. RPMI1640培养液 (1) RPMI1640：RPMI1640固体培养基10.4 g,溶于1000 ml双蒸水中，抽滤除菌。 (2) RPMI1640培养液：每100 ml RPMI1640培养液中含RPMI 1640 80 ml、灭活的小牛血 清20 ml、PHA 50 mg、青霉素(终浓度100 U/ml)、链霉素10000 μg (终浓度100 μg /ml)， 15磅、20min高压灭菌的NaHCO3调pH至7.2～7.4，分装20小瓶，每瓶5 ml。 (3) 配制方法 配制过程所需的玻璃器具先用浅水洗刷干净，烘干，放入清洁液中浸泡2 d，取出后用自来水冲洗15次，蒸馏水冲洗3次，双蒸水冲洗1次，烤干后包装，15磅20 min高压灭菌。 新瓶塞等橡胶类制品用水洗刷后，用0.5mol/L NaOH煮沸20min，自来水冲洗；用0.5mol/L HCl煮沸20 min，自来水冲洗，蒸馏水冲洗，在双蒸水中浸泡24h；浸泡后取出晾干，包装后高

浸泡标本的制作方法

标本的制作方法 1、绿色植物标本的浸制 用50 ml冰醋酸和50ml水配成50%醋酸溶液，在溶液中慢慢加入醋酸铜粉末，不断搅拌，直到饱和为止，配成醋酸铜溶液。 取醋酸铜原液1份，加水4份稀释，将溶液倒入大烧杯内加热至70—85℃，然后将新鲜绿色植物放入烧杯内，不久材料变成黄绿色，继续加热直至材料又变成跟原来的色泽相似时停止加热，取出绿色标本，在清水里漂洗干净，浸入5%的福尔马林溶液瓶中保存。 还可用硫酸铜代替醋酸铜，配成饱和的硫酸铜溶液，用硫酸铜溶液同上述方法一样处理绿色植物。 有一些特别幼嫩的植物，不宜加热，可浸入5%硫酸铜溶液里，直至材料由绿变黄，再由黄变绿时取出。浸泡时间约5天左右。标本经清水漂洗后，浸入5%的福尔马林溶液里保存。 标本处理后装瓶时，最好将标本用线轻轻地缚在透明的玻璃片上，连同玻璃片一起浸入5%的福尔马林保存液中保存，保存液一定要没过标本。 2、红色标本的浸制 取4ml福尔马林、4g硼酸、400ml水配置成处理液。选择完整成熟的新鲜果实（如番茄、樱桃等），洗净后浸入处理液中，当果实由红色转为深褐色时取出。浸泡时间一般为1—3天，但要视果实的大小、颜色深浅而定。果实取出后直接浸入亚硫酸硼酸保存液（100ml1%亚硫酸、2g硼酸、100ml水配成）中保存，可保持果实原有色泽。 3、黄绿色标本的浸制 将黄绿色的果实或植物黄绿色部分（如梨、金橘、甜瓜等）洗干净，浸入5%硫酸铜溶液1—3天，取出后漂洗干净，浸入亚硫酸甘油酒精保存液中保存，保存液用20ml10%亚硫酸、20ml甘油和20ml95%的酒精，加水600ml配成。也可

用50ml10%亚硫酸和50ml95%酒精，加水400ml配成亚硫酸酒精保存液，同样能达到保存的目的。 4、紫色标本的浸制 用10ml40%的福尔马林、12ml95%酒精加入200ml配成福尔马林酒精溶液，将洗净的紫色果实，直接浸入上述溶液中保存。如果是紫色的浆果（如葡萄）时必须先浸入福尔马林食盐溶液（12ml40%福尔马林、24ml12%食盐水、水200ml 配成）内，选取即将成熟的果实洗净，浸入上述液中2—3月，然后取出，保存在2%的福尔马林溶液瓶中，这样处理后，果实的原有色泽可保持较长时间。 5、白色或淡绿色标本的浸制 取氯化锌10g，加入300ml水中，充分搅拌，溶解后再加入40ml 95%的酒精，静置沉淀后，取上面的澄清液。将白色植物（如银耳、慈菇等）洗干净后浸入上述溶液中保存。也可取15g氯化锌，溶解在300ml水中，再加入8ml40%福尔马林和8ml甘油，搅匀后静置沉淀，取上层澄清液。 植物浸制标本装瓶后，瓶口要加盖，观察大约两周后，若保存液没有变浑浊或产生沉淀，可用凡士林在瓶口接缝处封口，存放在阴凉处，避免阳光直射，使标本原有的色泽保持时间较长。 浸泡标本要求尽可能保存原实物标本的颜色，姿态完好，没有缺损，展示空间要求通风、干燥、阴凉，避免阳光的直接照射。

生物实验报告-坐骨神经腓肠肌标本制备

生物实验报告 姓名: 班级: 日期: 同组者: 实验序号: 实验题目:坐骨神经-腓肠肌标本的制备 实验目的:1.学习蛙类动物双毁髓的实验方法。 2(学习并掌握坐骨神经-腓肠肌标本的制备方法。 实验原理:两栖类动物的离体组织所需要的生活条件比较简单， 易于控制和掌握。 因此在生理实验中常用蟾蜍的坐骨神经——腓肠肌 标本来观察兴奋性、兴奋过程、刺激强度、刺激频率 与肌肉收缩反应的一些规律以及骨骼肌的收缩特性 等。 实验对象:蟾蜍 实验器材:常规手术器械(粗剪刀、手术剪、眼科剪、手术镊、 眼科镊)蛙板、蛙钉、探针、锌铜弓、玻璃分针、培 养皿、任氏液、滴管、手术线等。 实验方法及步骤: 1、破坏脑脊髓 部位枕骨大孔。如果蟾蜍四肢松软，呼吸消失，表示脑脊髓已完全破坏，否则按上述方法再进行捣毁。 2、剪去躯干上部及内脏 在骶髂关节前1 cm处用金冠剪(粗剪)剪断脊柱(可在下肢前端)。沿脊柱切口向下剪开两侧腹部皮肤至耻骨处，将头、前肢、内脏及腹部软组织全部剪掉，放于污物盘，只保留下端脊柱和下肢。在腹侧脊柱两旁可看到腰骶神经丛。注意切勿触及或损伤坐骨神经。

3、剥后肢皮肤 左手持镊子夹住脊髓断端，右手捏住断端边缘，剥掉全部后肢皮肤。将标本放于盛有任氏液的培养皿内，将手和手术器械洗净。 4、分离两腿 用金冠剪剪去尾骨杆(骶骨)，沿脊椎中线将脊柱剪开，再沿耻骨联合正中央剪开两侧大腿，使两腿完全分离(切勿伤及神经)，将两腿浸于任氏液中。 5、游离坐骨神经 取一后肢，腹面向上(背位)，固定于蛙板上，沿脊柱侧用玻璃分针轻轻勾起坐骨神经，逐一剪去神经分支至股端。用金冠剪 剪断脊柱，只保留一小段椎骨片与坐骨神经相连。 将标本改为背面向上(腹位)固定，用镊子提起梨状肌，剪断，用玻璃分针将坐骨神经小心勾至背部。再沿坐骨神经沟(半膜肌和股二头肌的肌间缝)分离坐骨神经。用镊子夹住与神经相连的脊椎骨，提起神经，用眼科剪将神经分支及结缔组织膜顺序剪断，将神经一直游离到腘窝处。 6、游离腓肠肌 用镊子夹住脊椎骨，将神经搭在腓肠肌上，用剪刀将膝关节周围的大腿肌肉完全剪除，用金冠剪将膝关节上方的股骨刮干净，暴露骨股并在距膝关节上1 cm处剪断，分离腓肠肌的跟腱，用线结扎，然后自跟腱的附着点剪断，提起跟腱，将腓肠肌分离至膝关节处，将小腿其余部分剪掉。这样就制备了一个附着在股骨上的腓肠肌并带有支配腓肠肌的坐骨神经的完整标本。