不同饮食诱导的胰岛素抵抗大鼠模型的比较

不同饮食诱导的胰岛素抵抗大鼠模型的比较△中国医科大学附属盛京医院内分泌科(沈阳110004)　王艳军　赵　晟　刘国良*

摘　要　目的:应用不同饮食喂养大鼠,观察大鼠产生胰岛素抵抗(IR)的情况,同时观察大鼠游离脂肪酸(FFA)的变化。方法:分别以普通饲料、高糖饲料、高脂饲料、高糖高脂饲料喂养大鼠8周后,行高胰岛素-正葡萄糖钳夹实验,对大鼠胰岛素抵抗程度进行评估,应用酶联免疫吸附方法检测大鼠血清中游离脂肪酸,测量大鼠体重、附睾脂肪垫重量。结果:高脂饲料、高糖高脂饲料组大鼠产生胰岛素抵抗,普通饲料、高糖饲料组未出现胰岛素抵抗,胰岛素抵抗组大鼠游离脂肪酸明显高于非胰岛素抵抗大鼠,胰岛素抵抗组大鼠体重及附睾脂肪垫重量明显高于非胰岛素抵抗大鼠。结论:高脂饲料、高糖高脂饲料喂养大鼠8周可成功地诱导大鼠产生胰岛素抵抗,胰岛素抵抗的产生可能与肥胖、高游离脂肪酸有关。

主题词　胰岛素抗药性/病理生理学　脂肪酸类,非酯化/分析　模型,动物　食品,配方　大鼠

Comparison of insulin resistance model induced by

different diet feeding in rats

Endocrine Department of Shengjing Hospital Affiliated to China M edical University(Shenyang110004)Wang Yanjun　Zhao Sheng　Liu Guo liang

ABSTRAC T　Object s:T o investigate the insulin resistance induced by differ ent diet in ra ts,and to detect the fr ee fat acid(FF A).M etho ds:A fter eig ht w eeks feeding o f commo ndiet,hig h sugar diet,hig h fat diet,o r high sugar high fat diet,theinsulin r esistance o f W istar male r ats w as evaluated by hyper insulinism-no r bloo d sugar ring clam p ex per iment,the FF A w er e detected by enzy me linked immunosor bent assay,and the bo dy w eig ht and epididymis fat pad weights w er e also det ect ed.Results:Insulin r esistance w as induced in the rats fed by hig h fat diet and hig h sugar hig h fat diet,not in the rats fed by commo n diet nor hig h sug ar diet.T he FF A wer e obv iously hig her in t he insulin r esistance r ats than in t he r ats w it ho ut insulin r esistance.body weight especially the w eig ht o f epididy mal fat pad wer e o bv io usly higher in the insulin r esistance rat s than in the rats without insulin resistance.Conclusio ns:Insulin r esistance co uld be successfully induced by8w eeks feeding of high fat diet or hig h sugar high fat diet.T he occur ence of insulin resistance ma y be related to fat,high-lev el FF A,and inflammat ior y r eactio n.

KEY WORDS　I nsulin r esist ance/phy siopatho lo gy　Fatt y acids,N onester ofied/analysis　M o dels, Anim al　F oo d,Fo rmulated　Rats

近年来高脂饮食建立胰岛素抵抗(IR)大鼠模型的方法较多,应用十分广泛,但对单独高糖饮食能否诱发胰岛素抵抗的报道较少,而同时应用高脂、高糖以及高脂高糖联合饮食诱导胰岛素抵抗大鼠模型并进行比较其产生胰岛素抵抗程度的也很少。本研究分别给予Wistar大鼠高糖、高脂、高糖高脂不同饮食喂养,并通过高胰岛素-正血糖钳夹实验对不同饮食饲养的大鼠

△辽宁省教育厅课题(No2004D166)

*中国医科大学附属第一临床学院进行胰岛素抵抗的评估,观察不同饮食对大鼠产生胰岛素抵抗的影响,为建立稳定可靠而且经济实用的动物模型提供参考。

材料与方法

1　材　料

1.1　实验动物:Wistar雄性大鼠40只(中国医科大学实验动物中心提供),4周龄,体重70～80g,单笼饲养,室内温度保持在25℃左右,湿度50%左右。明暗周期12h,自由饮水和进食。随机分为4组饲养,即:正常对照组(C)、高糖组(T)、高脂组(Z)、高糖高脂组

(G)。

1.2　饲料配制:基础饲料为中国医科大学实验动物中心配制。基础饲料:总热量为400kcal/100g;高脂饲料:75g基础饲料+25g猪油;高糖饲料:60g基础饲料+40g蔗糖。高糖高脂饲料:60g基础饲料+15g猪油+25g蔗糖以上饲料热量均为400kcal/100g。

1.3　主要试剂及仪器:诺和灵R:丹麦诺和诺得公司产品,400U/10ml。血糖仪:BIOSEN5030,德国产,葡萄糖氧化酶电极法。微电脑数字式电子微量注射泵。全自动生化分析仪(美国Abbortt Arrosset)。大鼠游离脂肪酸酶联免疫吸附铜染色试剂盒,购自南京建成生物工程研究所。大鼠血清胰岛素酶联免疫吸附测定试剂盒,购自大连泛邦化工有限公司。

2　方　法

2.1　动物分组:将大鼠随机分为4组,即普通饲料组、高糖饲料组、高脂饲料组、高糖高脂组饲料组,每组10只。每2周测1次体重并记录。

2.2　胰岛素抵抗大鼠模型的建立:各组饮食喂养大鼠8周后,进行血糖、胰岛素、血脂、游离脂肪酸的测定并行高胰岛素-正血糖钳夹实验,以评估大鼠是否产生胰岛素抵抗并对抵抗程度进行评估。

2.3　胰岛素抵抗的评估:高胰岛素-正血糖钳夹实验。所有大鼠均禁食12h,于次晨8时进行实验,用4%的水合氯醛(0.3ml%)维持腹腔注射使动物麻醉后,切开颈前皮肤,暴露并分离左颈静脉和右颈动脉,分别切口插入塑料软管(型号PE-50)。用肝素[首次75U,以后25U/(h?kg)]冲管,以颈静脉通道用于胰岛素和葡萄糖的输入,颈动脉通道用于采血供血糖测定,经静脉输液泵恒定的注入速效胰岛素[6.0M u/(kg ?m in)]。每5min经动脉采血10L l测定血糖,根据血糖值调整葡萄糖(20%)的输入速度,使血糖维持于空腹(BBG±0.5mm ol/L)的水平,实验中要观察麻醉大鼠的麻醉深度,如此过程经过120min,后60min的血糖值和葡萄糖的输入速度都进入稳定期,计算60～120min 的葡萄糖输注率(Gluco se injectio n rate,GIR),作为受试个体的胰岛素敏感性的指标。

GIR[mg/(kg?min)]=稳定期葡萄糖的平均输入速度(ml/h)60(h换算为min)×20%(葡萄糖浓度)÷体重(kg)

2.4　其他指标的检测:血糖:葡萄糖氧化酶电极法,BIOSEN5030,德国产;美国Abbortt Arrosset全自动生化分析仪测定血清血脂:包括血清胆固醇(T C)、血清甘油三酯(T G)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C);其它指标:用酶联免疫吸附测定法测定血清胰岛素(Insulin)、血清游离脂肪酸(FFA)。

3　统计学方法　胰岛素、血脂系列、血糖、FFA、体重、附睾脂肪重量、GIR等指标,因为是连续性计量资料,以均数标准差(x-±s)表示,进行方差分析并进行组间的两比较;以上所有分析均由SPSS11.5软件包完成。

结　果

1　各组大鼠体重变化及附睾脂肪垫重量:体重增加最大的是G组,依次为Z组,T组,C组体重增加最少,附睾脂肪垫最重为G组,依次为Z组,T组,C组,附睾脂肪垫重量T组大于C组,但无统计学差异(P>0.

05),其它各组之间均有统计学意义(P>0.05),见表1。

表1　体重及附睾脂肪垫重量(g)

组别0W8W△体重附睾脂肪垫

C74.20±2.09289.57±2.82215.22±3.700 2.20±0.37

T73.20±3.19308.14±3.97232.455±7.9422.69±0.36

Z74.80±2.25319.14±2.96245.200±4.2373.72±0.37

G74.20±3.12325.86±5.66249.600±7.00 4.38±0.37

以上指标用均数标准差(x-±s)表示

2　各组大鼠GIR及血清胰岛素、血糖的检测结果,见表2。

表2　血清胰岛素、血糖、GIR、FFA比较

组别INS(ng/m l)BS(m mol/L)GIR[m g/(kg?m i n)]F FA(L m ol/L)

C 1.41±0.45 5.12±0.1014.41±0.69292.49±105.65

T 1.58±0.50 5.22±0.1113.60±0.89355.29±97.47

Z 2.27±0.85 5.18±0.019.40±1.29660.41±113.19

G 2.53±0.68 5.18±0.017.83±1.11705.12±117.31

以上指标用均数标准差(x-±s)表示

2.1　血清胰岛素检测:G组与Z组的血清胰岛素的水平明显高于高于C组和T组(P<0.01),而C与T组之间、G与Z组之间无统计学差异(P>0.05)。

2.2　各组之间血糖水平无明显差异。

2.3　GIR的结果:G组与Z组的GIR的水平明显低于C组和T组(P<0.01,而C与T组之间无统计学差异,P=0.194)。

2.4　FFA检测结果:G与Z组的血清FFA含量高于C与T组(P<0.05),G与Z组之间,C与T组之间无统计学差异(P>0.05)。

3　血清血脂系列检测:主要检测的指标是甘油三酯(Tr ig)、总胆固醇(Cho l)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-Cho l)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-Cho l),见表3。

表3　血清血脂系列指标(mm ol/L)

组　别T r ig Chol L CL-C HCL-C

C0.06±0.220.10±1.290.29±0.100.79±0.17

T0.12±0.401.14±0.170.41±0.120.51±0.46

Z0.21±0.921.38±0.190.55±0.120.39±0.04

G0.34±0.161.79±0.420.64±0.220.26±0.04

以上指标用均数标准差(x-±s)表示

3.1　甘油三酯(T rig):G与Z组的血清T rig的含量明显高于C组(P<0.01),G组明显高于其它三组, Z组高于T组,T组高于C组,但两组之间无统计学差异(P>0.05);Z组高于C组,两组之间统计学差异明显(P<0.01)。

3.2　总胆固醇(Chol):G与Z组的血清Cho l的含量明显高于C组(P<0.01),G组明显高于其它三组, Z组高于T组,T组高于C组,但两组之间无统计学差异(P>0.05);Z组高于C组,两组之间统计学差异明显(P<0.01)。

3.3　低密度脂蛋白胆固醇(LDL-Chol):G与Z 组的血清LDL-Chol含量均明显高于C与T组(P<0.

05);G与Z组之间无显著性差异,C与T组之间无统计学差异(P>0.05)。

3.4　高密度脂蛋白胆固醇(HDL-Chol):G与Z 组的血清HDL-Chol含量低于C与T组(P<0.05),G 与Z组之间,C与T组之间无统计学差异(P>0.05)。以上结果见表3。

4　FFA与体重、附睾脂肪重量、GIR的相关性: FFA与体重(r=0.313,P=0.049)、附睾脂肪重量(r =0.747,P<0.01)呈明显正相关,与GIR(r=-0.849, P<0.01)呈明显的负相关。

5　GIR与体重、附睾脂肪重量相关性:GIR与体重(r=-0.849,P<0.01)、附睾脂肪重量(r=-0.853,P <0.01)呈明显的负相关。

讨　论

胰岛素抵抗是许多疾病的病理生理基础,是指全

身性胰岛素敏感性下降的一种状态,正常浓度的胰岛

素不能发挥胰岛素的相应效应[1]。判断机体有无IR,需

准确测定胰岛素敏感性。目前有多种评价胰岛素敏感性的指标,但公认的指标是1983年Kragen等建立的大鼠钳夹技术,此技术已成为判断IR的“金标准”,IR动物模型是否复制成功,也需采用此技术检测。目前,用于胰岛素抵抗研究的动物模型主要有三类,即:遗传性肥胖模型、特殊药物模型和特殊饮食喂养模型。其中特殊膳食喂养致IR模型和人类肥胖导致IR的病因学相似,具有复制时间短、饲养方便、模型稳定、可靠性高、价格相对较低等优点,目前已成为IR动物模型的常规复制方法之一。这类模型较为可靠、稳定、饲养方便,而且价格便宜,是较理想的探讨IR病理生理机制和研究的动物模型。

本实验建立高脂、高糖高脂喂养诱导的IR大鼠模型,经高胰岛素-正血糖钳夹实验证实大鼠产生胰岛素抵抗。并观察到产生胰岛素抵抗的大鼠体重增加,以附睾脂肪的增加更为明显,FINS、FFA、T C、T G均高于正常对照组增高,与陈秋等人所作结果相似[2]。从本实验观察,高脂高糖产生胰岛素抵抗最强、高脂次之,高糖在8周的喂养中未出现胰岛素抵抗,是否与喂养时间短有关,有血脂及FFA的改变,但与正常对照组没有统计学意义。

本研究显示,高脂高糖、高脂膳食大鼠的FFA水平明显增高,可能是由于升高的FFA引发的IR,IR的存在又使脂肪组织对胰岛素抗脂解能力的敏感性下降,T G分解为FFA增加,形成恶性循环。FFA是引起胰岛素抵抗的重要信号分子,可在以下途径引起靶组织的胰岛素抵抗,抑制肌肉及肝脏对胰岛素介导的葡萄糖的转运,通过经典的葡萄糖-脂肪循环机制减少葡萄糖的利用[3]。FFA氧化增多可刺激糖异生和肝糖输出增加。脂毒性理论认为当FFA的供给超过非脂肪细胞对FFA氧化供能的需要时,过多的FFA不是进入氧化途径代谢,而是进入非氧化途径造成,TG在非脂肪组织异位沉积[4],异位升高的T G又通过分解出脂肪酸及脂肪酸氨基鞘氨醇,给局部组织带来损伤,其脂毒性在骨骼肌表现为IR,在胰岛表现为糖尿病[5]。

高脂饮食可诱导胰岛素抵抗的形成,胰岛素抵抗的形成可能与高水平的游离脂肪酸有关。总之,胰岛素抵抗与FFA及血脂有着密切的关系,对于糖尿病的发病及心血管疾病有着重要的关系。

参考文献

[1]　T enenba um A,M ot ro M,F isman EZ,et al.per o xiso me

pro lifer-a ct ived recepto r lig and beza fibrat e for pr evention of type2diabetes m ellitus in pa tients w ith cor onary ar tery disease.Circulatio n,2004,109:2197-2202.

[2]　陈　秋,夏永鹏.胰岛素抵抗大鼠模型的建立与评估.江

苏医药,2006,32(3)238-240.

[3]　Randel P J,Ker beg A J,Espinal J.M echarism decrea sing

glucose ox idation in diabetes and star v atio n:r ole of lipid fuels and ho rmo nes.Diabetes Rev,1998,4:623-628. [4]　U nger R H,O rei L.Disease o f lipo r egula tio n:new

per spective o n obesity and related disor der s.FA SEB J.

2001,15:312-332.

[5]　U nger RH,O rei L.Disea se of lipor egulatio n:new

per spective o n obesity and related disor der s.FA SEB J.

2001,15:312-332.(收稿:2007-07-09)

2型糖尿病大鼠模型研究概况

2型糖尿病大鼠模型研究概况 【摘要】目的：综述近年来2型糖尿病(T2DM)大鼠模型的研究进展及对其优缺点进行评价和未来同类模型的展望。方法：主要对T2DM大鼠模型的建立技术和方法进行综合性评价。结果：T2DM大鼠模型目前可以分为自发性T2DM 和实验性T2DM模型,且仍有较大发展空间。结论：经过综合评价研究，认为各种建模方法均有优缺点，目前较认可的是实验性T2DM大鼠模型，因价格低廉，造模方便而广受欢迎，但仍缺乏一定的造模标准。 【关键词】2型糖尿病；动物模型；研究概况 随着经济社会的发展，人们的饮食结构、生活方式等发生了很大改变，糖尿病发病率显著上升，尤其T2DM占了较高比例，大概占了糖尿病发病率的90%。T2DM是因人体胰岛素分泌相对不足或靶细胞对胰岛素敏感性降低继而引发糖、蛋白质、脂肪和水电解质等代谢紊乱所导致的疾病。患者典型表现为三多一少，即多饮、多食、多尿表现，同时还伴有身体消瘦、疲乏、烦躁、口渴等临床症状。 选择一些合适的动物模型进行动物试验成了我们研究糖尿病的良好途径，我们可以从中比较一些糖尿病药物的作用效果以及其药动学的特点，在临床用药上对评价某套治疗方案的可行性及预后等具有十分重要的参考意义。 目前研究的临床T2DM动物模型主要集中在大鼠上，这可能是由于大鼠作为T2DM动物模型相对较稳定且与人T2DM表现相似的优点。因此我们在下面综述近几年来国内外有关临床T2DM大鼠模型研究的情况。 总体上来说，目前临床T2DM研究的大鼠模型主要分为两类，一类是自发性T2DM大鼠模型，另一类则是实验性T2DM大鼠模型，考虑到成本及方便程度，目前以后者居多。 1 实验性T2DM大鼠模型 1.1 单纯高脂高糖引发的T2DM 在试验中，通过较长时间给予大鼠过量的高糖高脂饮食，发现能够诱导出较满意的T2DM大鼠模型，从而能为进一步研究奠定良好的基础。目前认为其机理可能是高糖高脂饲料会导致胰岛B细胞超负荷，进而使胰岛细胞发生损伤、萎缩甚至死亡，胰岛的功能因此下降，继而建立起伴胰岛素抵抗的T2DM模型。鲁瑾[1]等采用61%的高脂饮食，饲养大鼠7周后，大鼠就出现了高胰岛素血症，且形成了明显的胰岛素抵抗，是一个十分可靠的胰岛素抵抗模型。张丽锋[2]等给予W istar大鼠脂肪热比为59%的饲料, 喂养4周，均出现胰岛素抵抗，多项研究试验表明高脂饮食可以诱发产生可靠的糖尿病大鼠模型。 1.2 应用STZ药物诱导产生的大鼠模型由于高糖高脂饲料相对用时较长，且饲料成本相应较高，因此合理使用链脲菌素(STZ)是目前许多研究者所推崇的

通络救脑注射液对阿尔茨海默病模型大鼠学习记忆及氧化应激反应的影响

2012年12月1日第12期No．12 1 Dec． 2012 中医学报 CHINA JOURNAL OF CHINESE MEDICINE 第27卷总第175期Vol．27 Serial No．175 *基金项目：北京中医药大学自主课题(编号:2011－JYBZZ － XS077) 通络救脑注射液对阿尔茨海默病模型大鼠学习 记忆及氧化应激反应的影响 * Effects of Tongluo Jiunao Injection on learning and memory and oxidative stress response for Alzheimer's Disease Rat Models 刘洋Liu Yang 1，李澎涛Li Pengtao 2，刘希伟Liu Xiwei 1，南一楠Nan Yinan 1，都文渊Du Wenyuan 1 1．北京中医药大学基础医学院中西医结合基础(病理)，北京110029 Integration of Traditional Chinese Medicine and Western Medicine Subject (Pathology )in Basic Medical College of Beijing University of Traditional Chinese Medicine ， Beijing ，China 1100292．北京中医药大学东直门医院，北京100700 Dongzhimen Hospital of Beijing University of Traditional Chinese Medicine ，Beijing ，China 100700 摘要：目的:探讨通络救脑注射液(Tong Luo Jiu Nao injection ， TLJN )对阿尔茨海默病(Alzheimer ’s Disease ，AD )模型大鼠的防治作用及其抗氧化机制。方法:采用脑内定位注射β淀粉样蛋白(βamyloid1-42)建立AD 大鼠模型，在模型建立成功的同时给予TLJN 治疗。采用Morris 水迷宫进行AD 大鼠的行为学检测，用化学比色法检测大脑皮质丙二醛(MDA )的含量。结果:与正常组比较，AD 模型组大鼠的逃避潜伏期明显延长(P ＜0．01)，目标象限停留时间明显缩短(P ＜0．01);TLJN 治疗组大鼠逃避潜伏期明显缩短(P ＜0．05)，目标象限停留时间明显增加(P ＜0．05)。AD 模型组大鼠脑皮质中MDA 含量增加(P ＜0.01);TLJN 治疗组，脑皮质MDA 含量显著减少(P ＜0．01)。结论:TLJN 具有改善学习记忆能力，对抗大鼠神经系统的退行性病变有一定的作用，可能通过抑制AD 模型大鼠脑皮质MDA 产生发挥其保护作用。 Abstract :Objective :To explore the preventive and therapeutic effect and anti-oxidation mechanism of Tong Luo Jiu Nao injection (TLJN )in Alzheimer's Disease (AD )rat models．Methods :The AD rat model was established by injecting β-amyloid1-42into the rat brain ，and successful model rats were given TLJN injection treatment at the same time．The behavioral changes of the AD rats were test-ed with Morris water maze．Chemical colorimetry was used to measure malondialdehyde (MDA )content in the cerebral cortex．Results :Compared with the control group ，the escape latent period of AD rats was significantly longer (P ＜0．01)，retention time of the target quadrant significantly obviously reduced (P ＜0．01);After TLJN treatment ，the escape latent period of AD rats was significantly shorter (P ＜0．05)，and retention time of the target quadrant was significantly increased (P ＜0．05)．In AD model group ，the MDA content in cerebral cortex was increased significantly (P ＜0．01);while after TLJN treatment ，the MDA content in cerebral cortex was decreased obviously (P ＜0．01)．Conclusions :TLJN treatment has certain effects on improving learning and memory ability of AD rats and resisting retrogression of rats nervous system ，and plays protective role in AD rats possibly via inhibiting the production of MDA．关键词：阿尔茨海默病;通络救脑注射液;Morris 水迷宫;学习记忆;氧化应激反应;大鼠 Key words :Alzheimer's Disease (AD );Tongluo Jiunao injection ;Morris water maze ;learning-memory ;oxidative stress response ;rat 中图分类号CLC number ：R285．5 文献标识码Document code ：A 文章编号Article ID ：1674－8999（2012）12－1614－03阿尔茨海默病（Alzheimer ’ s Disease ，AD ）是一种继心血管病、癌症、脑卒中后严重威胁人类健康的高发性神经退变性疾病。但目前临床上对于AD 的病因和发病机制尚不完全清楚， 对于其治疗仍旧是一个世界性的难题。近些年来，对于AD 的发病机制研究方面取得了很多进展，主要集中在遗传因素、环境因素、免疫-炎性机制、氧化应激和细胞凋亡等方面，而氧化应激在AD 中的作用越来越受到研究者的重视。结合本研究团队多年体内外实验研究， 发现AD 的中医病机关键为“毒损脑络”［1-2］ 。因此，本实验采用大鼠双侧海 马注射A β1-42这一致毒片段以模拟“毒损脑络”病证，观察“毒损脑络”病证下AD 大鼠学习记忆变化情况及氧化应激反应的改变，采用针对该中医病机关键具有解毒通络作用的中药复方通络救脑注射液进行干预， 通过Morris 水迷宫行为学检测方法观察药物干预后大鼠学习记忆的改善情况及通络救脑注射液的作用机制，为通络救脑注射液的临床应用提供体外实验依据。 1 材料与方法 1．1 动物分组 清洁级雄性SD 大鼠32只，体质量（250?20）g ，购自北 京维通利华实验动物中心。随机分成正常对照组（正常组）、 A β海马注射组（模型组）、A β海马注射+通络救脑注· 4161·

大鼠二型糖尿病造模方法

大鼠二型糖尿病造模方法 Prepared on 22 November 2020

大鼠2型糖尿病模型建立方法讨论 专业：药理班级：六班姓名：刘畅学号：150517 摘要：据国际糖尿病联合会（InternationalDiabetesFederation，IDF）估计，现在全球约%的成年人患有糖尿病。到2035年，该病患者人数预计会上升至亿。在2013年，全球约有亿成年人患有糖尿病，中国的糖尿病患者人数居全球之首，调查统计人数为亿。糖尿病导致约510万人死亡，平均大约每6秒钟就有1人死于糖尿病。2012年1月9日，中国健康教育中心公布的“中国慢病监测及糖尿病专题调查”结果显示，我国18岁及以上居民糖尿病患病率为2。6%，60岁以上老年人患病率高达%。因此，为治疗糖尿病建立简单、稳定、经济的动物模型非常重要。因2型糖尿病患者人数占糖尿病患病人数的90%以上，本文主要综合讨论高糖高脂饲料联合链脲佐菌素大鼠2型糖尿病模型的建立方法和注意事项。得出结果为：使用体重在190g~240g之间的雄性SD大鼠，通过连续两次腹腔注射小剂量链脲佐菌素并辅以去抗氧化剂处理，合理饲养并通过尾静脉采血方法建立的2型糖尿病模型较理想。 关键词：2型糖尿病，SD大鼠模型，链脲佐菌素STZ， 糖尿病（diabetes）是一种以胰岛素分泌缺陷和胰岛素作用不足所致的以高血糖为特征的葡萄糖、蛋白质、脂质代谢紊乱的综合征，基本治疗方案包括饮食治疗、运动治疗、药物治疗、糖尿病监测及糖尿病教育。病因主要有遗传因素、病毒感染、肥胖等，临床表现为“三多一少”即多尿、多饮、多食和体重减轻。长期的高血糖最终会引起很多严重的并发症，包括心脑血管疾病、糖尿病神经病变、糖尿病视网膜病变，糖尿病肾病、糖尿病足、感染、糖尿病酮症酸中毒、高渗性昏迷等[1]。 糖尿病分为1型糖尿病（Type1diabetes）和2型糖尿病 （Type2diabetes）两种，1型患者因自身免疫β细胞破坏所致，每日胰岛素分泌量非常少，空腹基值及糖刺激后峰值均明显低于正常值，表现为绝对分泌不足。2型糖尿病细分为两类：体重正常患者胰岛素分泌量低于正常人，糖刺激后峰值低并且延迟出现；肥胖糖尿病人胰岛素分泌量大于正常人，空腹基值和糖刺激后高峰明显高于正常人，但延迟出现，因此，表现为相对性胰岛素分泌不足且释放反应迟钝。胰岛素分泌不足的原因可能为：遗传因素、自身免疫、胰岛素拮抗。糖尿病患者中约有90%～95%属于2型糖尿病。 2型糖尿病，即非胰岛素依赖型糖尿病（non-insulin-dependentdiabetesmellitus，NIDDM），根据体重可分为肥胖和不出现肥胖两

红景天对阿尔茨海默病大鼠行为学和脑组织抗氧化能力的影响

红景天对阿尔茨海默病大鼠行为学和脑组织 抗氧化能力的影响 作者：冀俊虎,董联玲,曹娟,杨发明,王健 【摘要】目的探讨红景天对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠的干预效果和作用机理。方法采用腹腔注射D-半乳糖(用生理盐水配成浓度为10 mg/mL)和灌胃AlCl3(用蒸馏水配成浓度为20 mg/mL),并一次性注射东莨菪碱建立AD动物模型。通过Morris水迷宫测试系统检测大鼠学习记忆能力变化,抗超氧阴离子和总抗氧化能力测定检测各组大鼠脑组织抗氧化水平,常规HE染色和免疫组化测Aβ1-40的表达,观察大鼠海马及皮质的形态学改变。用红景天以灌胃方式对实验大鼠进行干预,并以喜得镇做对照观察其干预效果。结果模型组大鼠记忆功能明显减退,神经细胞破坏明显,海马和皮质出现β-淀粉样蛋白沉积及老年斑。中药组、西药组及空白组大鼠在水迷宫测试中,逃避潜伏期明显缩短,原平台象限比、跨平台次数明显增加,与模型组比较差异有统计学意义(P＜0.05)；模型组抗超氧阴离子和总抗氧化能力活性较其他组明显降低(P＜0.05)。结论红景天可以有效改善AD大鼠空间学习记忆能力损害,同时在清除自由基和抗氧化损伤方面有显著功效,具有神经保护作用。 【关键词】红景天；阿尔茨海默病；行为学；抗氧化能力；大鼠

Abstract：Objective To study the intervention effect and mechanism of integripetal rhodiola herb (IRH) on Alzheimer’s disease model rats. Methods Alzheimer’s disease model was made by injecting D-galactose (10 mg/mL) in abdominal cavity and taking AlCl3 (20 mg/mL) by intragastric administration, and injecting scopolamine. Morris water maze testing system was undertaken to observe the change of learning and memory ability in rats, biochemical indicator tested was to contrast the state of oxidative stress, common HE staining and immunohistchemistry staining were to observe the morphology change of the hippcampus and cortex cell. The model rats were administrated IRH by means of intragastric administration contrasting with hydergine to compare the effect. Results The memory ability of model group was obviously decreased, cellula nervosa were damaged badly. A β and senile plaques appeared on hippcampus and cortex. All of the test indexes in Morris water maze showed that the abilities of space search, learning and memory in different groups remarkably improved compared with that of the model group (P ＜0.05). The anti-02·- and T-AC activity of the model group was lower than other groups obviously (P＜0.05). Conclusion IRH has significant relieving effect on the lesion of the abilities of

糖尿病大鼠指标

实验流程 1、末次灌胃后，大鼠禁食不禁水12h，与麻醉前进行称重，行腹腔注射3%戊巴 比妥钠，0.3ml/100g 2、腹主动脉取血，留取全血标本。 3、取肝、脾、肾、胃、心脏及脑。 4、称肝、脾、肾、胃、心脏及脑组织，并分装各个组织，放入-80℃冻存。其中 肝组织剪取1g肝脏，送至肝均浆；肝10%甲醛固定做HE染色，每组5只； 肝4%戊二醛固定做电镜，每组一只； 5、小肠10%甲醛固定做HE染色，每组5只；小肠4%戊二醛固定做粪便电镜，每 组1只；其余肠组织-80℃冻存。 6、肝；制成肝均浆，1g肝脏加入9ml冰生理盐水，制成肝均浆液，离心后，取 上清液，于-80℃冻存。 7、全血标本静置30min后，进行离心，分离血清，血清和血浆均放入-80℃冻存。检测指标： 1、肝脏组织 1.1HE染色观察肝脏组织的病理学改变。 1.2透射电镜观察肝脏超微结构变化 1.3电感耦合等离子体质谱（ICP-MS） 1.4试剂盒测肝均浆超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽过氧化酶 （GSH-Px）、ROS活性氧水平 1.5检测肝脏组织中Western blot、NF-kB、COX-2表达情况，计算其阳性表达 率 2、血清（血浆） 2.1全自动化分析仪测谷草转氨酶（AST）、谷丙转氨酶（ALT）、谷氨转肽酶(GGT)、碱性磷酸酶TG 2.2酶联免疫吸附法检测血浆中肠结合脂肪酸蛋白（FABp2）、D-乳酸（D-LA）及二胺氧化酶（DAO）水平评价大鼠大肠粘膜损伤 2.3试剂盒测血浆超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛（MDA）、4-HNE（羟基壬烯醛）、 谷胱甘肽过氧化酶（GSH-Px）、过氧化氢酶（CAT）评价大鼠氧化应激水平 2.4酶联免疫吸附试验（ELISA）检测大鼠血浆中α肿瘤坏死因子（TNF α）、肿瘤坏死因子β（TNF-β）、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)、单核细胞趋化因子-1(MCP-1)、细胞间粘附因子-1(ICAM-1)浓度 3、肠道菌群

阿尔茨海默病大鼠自噬相关蛋白Beclin—1和凋亡相关蛋白p53表达变化及电针的调控作用

阿尔茨海默病大鼠自噬相关蛋白Beclin—1和凋亡相关蛋白p53表达 变化及电针的调控作用 目的观察电针对大鼠海马自噬相关蛋白Beclin-1和凋亡相关蛋白p53表达的影响，探讨电针治疗阿尔茨海默病（AD）的作用机制。方法将大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组和电针组。电针组取“百会”和“涌泉”进行电针治疗，每日1次，7 d为1个疗程，共治疗4个疗程。疗程结束后尼氏染色观察各组海马CA1区组织形态的变化并计数尼氏体阳性细胞，Western blot检测Beclin-1和p53蛋白的表达。结果模型组CA1区尼氏体阳性的细胞数目较正常组显著减少（P＜0.01），电针组锥体细胞和尼氏体表达较模型组明显增多（P＜0.05）。与正常组比较，模型组海马组织中Beclin-1蛋白表达降低、p53蛋白表达升高（P＜0.05）；与模型组比较，电针组Beclin-1蛋白表达明显升高（P＜0.01），p53蛋白表达降低（P＜0.05）。结论电针治疗可对抗β-淀粉样蛋白诱导的神经元凋亡，改善AD海马组织形态变化。 标签：电针；阿尔茨海默病；凋亡；自噬；Beclin-1蛋白；p53蛋白；大鼠 上海中医药大学名师传承研究工程项目（2009120） 阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease，AD）是一种慢性进行性的中枢神经系统退行性变性病，β-淀粉样蛋白（amyloid-β，Aβ）沉积形成的老年斑、神经原纤维缠结和神经元及其突触的缺失是其典型特征。目前AD的临床药物只能对症治疗，无法逆转其病理进程。自噬是细胞长寿命蛋白、变性或衰老细胞器的主要降解途径[1]。研究表明，自噬功能障碍与多种错折叠蛋白聚集体导致的神经变性疾病有关[2-3]。自噬障碍可能影响Aβ的清除和增加神经细胞死亡[4]，表明自噬可以保护神经元免受Aβ诱导的凋亡[5]，与AD的病理生理学密切相关。针灸治疗AD具有诸多的优势，且疗效明确[6-7]。本研究在构建AD大鼠模型的基础上，通过检测自噬相关蛋白Beclin-1和凋亡相关蛋白p53的表达变化，探讨电针治疗AD的作用机制。 1 实验材料 1.1 动物 SPF级雄性SD大鼠60只，体质量（200±50）g，上海中医药大学实验动物中心提供，动物许可证号：SCXK（沪）2008-0016，实验室符合国家动物实验设施屏障系统标准。 1.2 主要试剂与仪器 Aβ1-40，美国Sigma公司；Beclin-1兔抗大鼠多克隆抗体和HRP标记山羊抗兔二抗，美国cell signaling technology公司；p53山羊抗大鼠多克隆抗体，美

1型糖尿病大鼠模型的建立及观察_张巨彪

7 摘要：目的探讨链脲佐菌素（STZ ）建成可靠、稳定的1型大鼠糖尿病模型情况。方法选取 SDF 级雄性Wistar 大鼠70只，分成3个实验组，各20只和对照组10只，实验组大鼠一次性腹腔注射STZ 30、65、100mg /kg ，对照组10只大鼠腹腔注射枸橼酸缓冲液，用拜安易血糖仪检测血糖，7d 后血糖＞16．65mmol /L 判定为1型糖尿病动物模型。观察大鼠的血糖、体质量、饮水量、胰岛素和C 肽等指标。结果大鼠注射STZ 65mg /kg 7d 后，大部分血糖值达到成模标准，并出现糖尿病表现，持续观察7周，有18只大鼠成模，未见糖尿病转复，糖尿病症状明显。结论腹腔一次性注射STZ 65mg /kg 剂量可成功制备1型糖尿病大鼠模型。 关键词：链尿佐菌素；1型糖尿病模型；大鼠 Establishment and Observation of Type I Diabetic Rat Models ZHANG Ju-biao 1， SU Xiu-lan 2，OUY-ANG Xiao-hui 1 ．（1．Department of Tumor Surger ， Inner Mongolia Autonomous Region People's Hospital ，Hohhot 010010，China ；2．Central Lab of Inner Mongolia Medical University ，Hohhot 010010，China ） Abstract ：Objective To establish type I diabetic rat models by intraperitoneal injection of streptozoto-cin and observe the stability of diabetic changes in rats．Methods 70male Wistar rats were divided into 3experiment groups of 20rats each and 1control group of 10rats．The experiment groups were intraperitoneally injected by 30mg /kg ，65mg /kg ，and 100mg /kg STZ respectively ，while the control group was injected cit-rate buffer．Bayer blood glucose meter was adopted to test the blood glucose ，setting ＞16．65mmol /L after 7d as the type 1diabetic animal model．The fasting blood glucose level ，body weight ，water intake ，insulin and C-peptide of the rats at different time points were observed /measured．Results In the group of injection by 65mg /kg STZ ，after 7days most rats reached the model blood glucose standard and had diabetic manifes-tation ，after continuous observation of 7weeks ，18rats were qualified as the model with obvious symptoms and without conversion．Conclusion With the dose of 65mg /kg of STZ through one intraperitoneal injection ，type 1diabetic rat models can successfully established． Key words ：Streptozotocin ；Type 1diabetic models ；Rat 糖尿病已成为严重威胁人类身体健康和生命的 疾病。它是一种以持续性高血糖为特征的内分泌障碍疾病，可导致全身性代谢紊乱并继发眼、肾、神经和心血管等器官的慢性进行性病变，最终引起功能损伤及衰竭。1型糖尿病及其并发症的病因、发病机制尚未完全阐明，预防和治疗仍不完善，干细胞（stem cells ）是体内存在的一类特殊细胞，有自我更新和不断增生的能力，又具有多向分化的潜能，只要掌握了胰腺干细胞的特异标志、转化调控机制、培养及分离技术，就可以体外操纵干细胞，进行大量扩增和定向诱导分化，最后将得到能分泌胰岛素的胰岛 样细胞［1-2］，用于治疗1型糖尿病。因此，建立较理 想的动物模型研究该病的发病机制和治疗具有重要意义。目前，国内外普遍使用STZ 制备糖尿病大鼠 动物模型。该项实验根据吴清洪报道的方法［3］ ，采用简单的腹腔一次注射的方法制备稳定并且可靠的动物模型。1材料与方法 1．1实验动物的选择和喂养SDF 级成熟Wistar 雄性大鼠70只（体质量220 280g ），购自内蒙古大学实验动物中心，饲养室内氨浓 度＜20g /L ， 相对湿度40% 70%，室温18 25℃，保证良好的通风，避免增加造模后大鼠的感染概率，普通饲料喂养，饮水自由。 1．2主要仪器和试剂拜安易血糖检测仪及试纸（美国Bayer 公司）；STZ （美国Sigma 公司）；胰岛素、C 肽放射免疫分析药盒（均购自内蒙古泽生耗材）。 1．3主要实验试剂的配制STZ 液称取STZ 粉剂0．2g ，溶于pH 4．5，浓度为0．1mmol/L 的枸橼酸三钠-枸橼酸缓冲液20mL 中，制成1%溶 液，经0．22μm 滤器过滤除菌，要求5min 内配制完成，配好后，10min 内用完，STZ 和枸橼酸缓冲溶液低温保存，新鲜配制。 1．4实验分组和大鼠糖尿病模型的制备采取国内外普遍使用的STZ 制备糖尿病大鼠模型，根据徐 华等［4］ 报道， 雄性大鼠易于成模，且成模后血糖稳定性好，故选取成熟雄性大鼠用于实验。将所有大鼠（70只）使用代谢笼单只喂养，适应性喂养1周， 1周内注意观察大鼠的饮食情况、体质量等健康状况， 1周后，选取空腹血糖介于2．92 6．92mmol /L 的大鼠为实验对象。将空腹血糖介于2．92 6．92mmol /L 的大鼠随机分为4组，实验组（60只）分别接受STZ 液一次性腹腔注射，剂量为30、65、100mg /kg ，对照组（10只）注射枸橼酸三钠-枸橼酸缓冲液。实验前 大鼠禁食、水12h 。分别于注射后3、 7、14、28d 采用剪尾法采集血样，用拜安易血糖仪检测空腹血糖，7d 后空腹血糖＞16．65mmol /L ，出现多饮、多食、多尿 · 533·医学综述2013年1月第19卷第2期Medical Recapitulate ， Jan．2013，Vol．19，No．2

糖尿病大鼠尿nephrin 的检测及意义(一)

糖尿病大鼠尿nephrin 的检测及意义(一) 【摘要】目的：建立糖尿病大鼠模型，探讨糖尿病大鼠尿中nephrin的检测、动态变化及意义。方法：SD大鼠腹腔注射链脲佐菌素制成糖尿病模型，正常对照组注射等量枸橼酸缓冲液，动态检测各组大鼠24h尿微量白蛋白及肾功能，以Western-Blot方法动态检测尿中nephrin。结果：正常大鼠尿中无nephrin排泄，而糖尿病大鼠尿中可检测出nephrin，诱模早期（2周）即可出现，随着病程的延长，nephrin逐渐增多，8周达高峰后，nephrin的排泄又逐渐减少。结论：糖尿病肾病早期nephrin即可从尿中排泄，尿nephrin可作为糖尿病肾病的早期诊断指标之一，还将有助于监测、判断糖尿病肾病的病程进展。 【关键词】糖尿病肾病；大鼠；微量白蛋白;尿nephrin 〔Abstract〕Objective:Diabeticratswereinducedtoexplorethedetectionofurinarynephrinindiabeticrats,itsdyna micchangesandclinicalsignificance.Methods：SDratsweredividedinto2groups.Diabeticratsmodelwereinducedbysingleintraperitonealinjectionof streptozocin(STZ),whilethoseofnormalcontrolgroupwereinjectedwithequaldosageofcitricacidbuffe rsolution.Twentyfourhoursurinarymicroalbuminandrenalfunctionwereambulatorilymonitored,and UrinaryNephrinwasmeasuredwithWestern-Blot.Results：Thetestshowedthatnourinarynephrinwerefoundinnormalcontrolgroup,butitwasdectetedoutindia beticratsgroup,anddiscoveredattheearlystage(2weeksafterSTZinjection).Withtheextensionofcours e,urinarynephringraduallyincreased,andthengraduallydecreasedafterreachingitspeakbyweek8.Co nclusion：Thenephrincouldbeexcretedoutfromurineattheearlystageofdiabeticnephropathy.Urinarynephrinc ouldnotonlyberegardedasaspecificindexfortheearlydiagnosisofdiabeticnephropathy,butalsobeben ificialtoclinicalmonitoringandevaluatingthedegreesoftheDN. 〔Keywords〕diabeticnephropathy;rats;microalbumin;urinarynephrin 糖尿病肾病(diabetesnephropathy，DN)是糖尿病微血管病变之一，是终末期肾衰的重要原因，早期诊断和治疗可延缓其发展。DN起病隐匿，早期诊断困难，目前公认的诊断早期DN的指标是尿微量白蛋白，但也仅使DN诊断提早到依据Mogensen建议的Ⅲ期。部分糖尿病患者当发现微量白蛋白尿时，肾脏的结构损害已很明显〔1〕。因此不能单以尿微量白蛋白的出现来判断早期DN。 蛋白尿的发生与肾小球滤过屏障密切相关，nephrin是新近发现由足细胞表达、特异定位于肾小球足细胞裂孔隔膜的蛋白分子，参与肾小球滤过屏障的形成并维持其正常功能〔2〕。研究表明，实验性糖尿病模型及人类蛋白尿相关的肾小球疾病均有nephrin表达的改变，且nephrin可从尿中排泄〔3〕。而尿中nephrin排泄量增加是否可敏感反映糖尿病早期肾脏损害，目前国内尚未有报道。本文对糖尿病大鼠尿蛋白排泄率(AER)及尿液nephrin进行动态观察，旨在探讨尿nephrin在DN中的变化规律及其对早期DN的诊断意义。 1对象与方法 1.1实验动物及分组 雄性SD大鼠76只，体质量230～280g，购自江苏大学医学院实验动物中心，血糖正常。试验期间，室温控制在18～20℃，湿度48%，12小时交替照明，大鼠自由饮水进食，保持垫料干燥。实验共分对照组（n=36），糖尿病组（n=40）。对照组0周处死6只，再与糖尿病组随机分为2，4，6，8和12周5个亚组，分别于DM诱模后2，4，6，8和12周处死。 1.2糖尿病模型的建立 所有大鼠适应性喂养1周，随机取40只，禁食12h后，空腹状态下，链脲佐菌素（STZ）按55mg/kg一次性腹腔注射制备糖尿病模型，STZ临用前用枸橼酸钠缓冲液(0.1mmol/L,pH4.2)

2型糖尿病大鼠模型的建立及其验证

2型糖尿病大鼠模型的建立及其验证论著 燕娟1　郭巍伟1　梁执群1　李志国1　郭永昌2 (山西医科大学1人文社会科学学院;2实验动物中心　山西　太原　030001) 【摘要】　目的　制备一种发病过程类似人类2型糖尿病的动物模型。方法　雄性S D成年大鼠高糖高脂饲料喂养 1个月,诱发出胰岛素抵抗,给予小剂量链脲佐菌素(STZ)25mg/kg,腹腔注射,建立2型糖尿病大鼠模型。结果　试验 组大鼠血糖升高,对胰岛素敏感性下降,从生化指标和形态学方面证实造模成功。结论　本实验2型糖尿病大鼠模型 造模成功,它具有中度高血糖、胰岛素抵抗、成功率高等特点,是人类2型糖尿病及其药物研究的理想动物模型。 【关键词】　糖尿病　动物模型　大鼠 Type2d i a betes ra t m odel and its ver i f i ca ti on.YAN Juan,G UO W ei-w ei,L I ANG Zhi-qun,et al.ShanxiM edical U niversity,College O f Hu2 m anities A nd Social Science,Taiyuan Shanxi030001,China. 【Abstract】　O bjecti ve　Preparati on of a disease si m ilar t o human type2diabetes ani m al model.M ethods　Male S D adult rats fed high- fat high-sugar a month,induced insulin resistance,given l ow-dose strep t ozot ocin(STZ,25mg/kg,intraperit oneal injecti on),set up in type2 diabetic rat model.Results　Test gr oup of rats increased bl ood glucose,insulin sensitivity decreased,fr om the bi oche m ical indices and mor phol ogy confir med the successful model.Conclusi on　The experi m ental rat model of type2diabetes model successfully,it has moderately high bl ood sug2 ar,insulin resistance,the success rate is high,are of human type2diabetes and its drug research ideal ani m al model. 【Key words】　D iabetes;Ani m al model;Rat 糖尿病与心脑血管疾病、肿瘤是当前威胁人类健康的三大非传染性疾病,已成为全球性的卫生问题。随着我国人民生活水平的提高、人口老化、生活方式的改变以及诊断技术的进步,糖尿病的发病率呈现迅速上升趋势,2型糖尿病是糖尿病人群的主体,占糖尿病发病率的90%以上。因此,研制2型糖尿病动物模型具有重要的医学研究意义。在国外2型糖尿病的研究中,采用的动物模型多为遗传相关模型,如ob/ob小鼠、db/db小鼠及肥胖型Zucker大鼠等,其特点是遗传因素在发病过程中占主导作用,不完全与临床相符,且十分昂贵,不利于国内研究的开展[1]。本研究结合前人经验,应用高糖高脂饲料结合小剂量链脲佐菌素(STZ)建立了2型糖尿病大鼠模型,较符合人类普通型2型糖尿病发病机制,有利于进行2型糖尿病及其并发症的相关研究[2,3]。1　材料和方法 1.1　动物和材料　清洁级雄性S D大鼠40只,体质量(180±20)g,由山西医科大学实验动物中心提供,每笼4～5只,饲以普通饲料,自由摄食摄水,除实验应激外无其他不良刺激。STZ由美国Sig m a公司生产。胰岛素、胰高血糖素放射免疫分析药盒为解放军总医院科技开发中心放免所产品,购自北京普尔伟业生物科技有限公司。 1.2　2型糖尿病大鼠模型的建立　在大鼠适应期后,随机取10只作为正常对照组,其余30只给予高糖高脂饲料(在标准全价混合饲料的基础上添加蔗糖、炼猪油和蛋黄,热能含量21.6kJ/kg)。高糖高脂饲料组喂养4周后,腹腔注射STZ(临用前溶解在pH=4.0的0.1mmol/L柠檬酸缓冲液内,25mg/kg,1次/d,连续2d),正常对照组普通饲料喂养4周,再注射等量柠檬酸缓冲液,1次/d,连续2d。注射药物两天后间隔1d血糖测试仪测查大鼠空腹血糖(测试前禁食12h)即注射后血糖,以血糖含量16.7mmol/L为2型糖尿病大鼠模型判定标准,随机选取10只糖尿病大鼠为模型组。继续普通饲料喂养4周。 1.3　指标测定 1.3.1　一般状况观察　包括大鼠的精神状态、体质量、饮水量、食量、大小便。 1.3.2　血糖测定　腹腔注射STZ或柠檬酸缓冲液2 d后及实验结束时分别进行空腹状态下剪尾取血,测其血糖值,为注射后血糖。4周后处死大鼠测其血糖为终血糖。 1.3.3　血清胰岛素、胰高血糖素水平测定　实验结束时禁食12h,20%的乌拉坦腹腔麻醉大鼠,腹主动脉取血,分离血清后放射免疫分析法测定。 1.3.4　胰岛素敏感指数(I SI)的计算　参照李光伟等[4,5]的方法,I SI=ln[1/F BG×F I N S],F BG为空腹血糖,F I N S为空腹胰岛素。 1.4　统计学处理　采用SPSS11.5统计软件对实验数据进行处理,数据以均数±标准差( x±s)的形式表示,用t检验分析。 2　结果 2.1　两组大鼠一般状况　对照组大鼠生长良好,体质量持续增加,无其他症状。模型组大鼠在注射STZ后体质量呈缓慢增长、逐步较前下降、消瘦走势,观察发现有 ? 5 ? 临床和实验医学杂志　2009年4月　第8卷　第4期

STZ诱导的大鼠糖尿病模型

STZ诱导的大鼠糖尿病模型 糖尿病（diabetes mellitus，DM）是胰岛素抵抗和胰岛素缺乏导致的以高血糖为主要特征表现的代谢紊乱综合征，易发生心、脑、肾等并发症。糖尿病状态下血浆游离脂肪酸异常增高，心肌耗能增加，葡萄糖代谢下降，脂肪酸代谢增加，心脏内过量的脂肪酸摄取和氧化导致心肌内脂肪代谢产物的积聚引起心脏脂质毒性，并在此基袖上出现氧化应激，导致细胞调亡、内皮功能紊乱、炎症反应增加，同时出现心肌的损伤，心肌的结构和功能均发生改变，最后导致糖尿病患者的死亡。 1.实验动物 SPF级SD小鼠，雄性，周龄为4w~6w，体重为180g~200g。 2.实验分组： 实验分六组：正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组三个剂量组，每组15只动物。 3. 模型周期 4W 4.主要试剂及配制方法 柠檬酸、柠檬酸三钠、链脲佐霉素(Streptozocin, STZ) 1. 柠檬酸钠缓冲液配制：将 2.10 g柠檬酸加入双蒸水100 ml配成柠檬酸母液，称为A液；将2.94g柠檬酸三钠加入双蒸水100 ml配成柠檬酸钠母液，称为B液；将A、B液按1:1.32比例混合，pH计测定pH值，调定溶液pH=4.0，即是所需配制STZ的0.1 mol/L柠檬酸钠缓冲液。 2. STZ溶液的配制：将STZ溶于0.1 mol/L柠檬酸钠缓冲液中，新鲜配制成10 mg/mL浓度的STZ溶液，并用0.22μm滤菌器过滤除菌。注意避光配制，现用现配。 5.建模方法 1.术前12h禁食 2. 模型组小鼠按照55 mg/kg 剂量的STZ 进行腹腔注射，对照组给予给予相同剂量的柠檬酸钠缓冲液。

3. STZ注射7 d后，测空腹血糖，选择血糖为13.5-25mmol/L纳入正式实验。 4. STZ注射后，每周测血糖，称体重，观察体重血糖变化。 5. 第4周检测各组大鼠的体重和空腹血糖值后，摘眼球采血，室温静置2h 后于4℃3000r离心10分钟提取血清，放入-80冰箱冻存。同时取黄脂，皮下脂肪，骨骼肌，白脂，肝脏，肺脏，心脏，肾脏用于病理和分子生物学检测。 6.模型评价 1. 大体观察：正常组大鼠体型适中，精神状态良好，动作自如，反应灵敏，毛发平伏有光泽。而糖尿病大鼠体重变轻，精神萎靡，反应迟钝，毛竖无光泽，动作迟缓，弓背捲体，尿量显著增加。糖尿病大鼠较正常组体重显著减轻，心脏系数、肝脏系数较正常组有显著增加，且有统计学意义。 2. 空腹血糖、甘油三酯和总胆固醇水平的变化： 正常对照组的空腹血糖、甘油三酯和总胆固醇水平在实验前后均无显著差异；DM组的空腹血糖、甘油三酯和总胆固醇水平显著高于对照组， 3.糖尿病大鼠心脏组织形态学的变化 经HE染色可见正常对照组大鼠心肌纤维排列整齐，致密，结构清晰，细胞核染色质分布均匀，细胞外间质较少，微血管结构正常，可见少量成纤维细胞，间质无明显的炎症细胞浸润；DM模型组大鼠心肌纤维排列紊乱，心肌细胞肥大，细胞间隙增大，结构不清晰，有的细胞核膜皱缩，核固缩，并有炎症细胞浸润，肌细胞间也可见成纤维细胞浸润 4.糖尿病大鼠肺脏组织形态学的变化 HE染色显示，对照组大鼠肺组织结构清晰，肺泡分布均勾，肺泡隔、支气管 壁完整，肺间质分布均勻，少见炎性细胞浸润；DM组大鼠肺组织结构紊乱，部分肺泡腔萎缩、塌陷，可见肺大泡，支气管壁增厚，肺间质和血管周围细胞外基质增多，成纤维细胞增多，并有大量炎症细胞浸润， 5.糖尿病大肾脏组织形态学的变化 HE染色显示，DM组大鼠肾小球肥大增生，肾小球系膜基膜增厚，肾小管空泡变性，胞质空亮。 6.糖尿病大鼠肝脏组织形态学的变化 经油红O染色可见DM组大鼠肝内脂滴较大，红色脂滴明显，肝脏可见显著的