Kinetics and Intermediates of Marginal Band Reformation Evidence for Peripheral Determinant

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脐带干细胞综述

脐带间充质干细胞的研究进展 间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSC S ）是来源于发育早期中胚层 的一类多能干细胞[1-5]，MSC S 由于它的自我更新和多项分化潜能，而具有巨大的 治疗价值 ,日益受到关注。MSC S 有以下特点：(1)多向分化潜能，在适当的诱导条件下可分化为肌细胞[2]、成骨细胞[3、4]、脂肪细胞、神经细胞[9]、肝细胞[6]、心肌细胞[10]和表皮细胞[11, 12]；(2)通过分泌可溶性因子和转分化促进创面愈合；(3) 免疫调控功能，骨髓源（bone marrow ）MSC S 表达MHC-I类分子，不表达MHC-II 类分子，不表达CD80、CD86、CD40等协同刺激分子，体外抑制混合淋巴细胞反应，体内诱导免疫耐受[11, 15]，在预防和治疗移植物抗宿主病、诱导器官移植免疫耐受等领域有较好的应用前景；(4)连续传代培养和冷冻保存后仍具有多向分化潜能，可作为理想的种子细胞用于组织工程和细胞替代治疗。1974年Friedenstein [16] 首先证明了骨髓中存在MSC S ，以后的研究证明MSC S 不仅存在于骨髓中，也存在 于其他一些组织与器官的间质中：如外周血[17]，脐血[5]，松质骨[1, 18]，脂肪组织[1]，滑膜[18]和脐带。在所有这些来源中，脐血(umbilical cord blood)和脐带(umbilical cord)是MSC S 最理想的来源，因为它们可以通过非侵入性手段容易获 得，并且病毒污染的风险低，还可冷冻保存后行自体移植。然而，脐血MSC的培养成功率不高[19, 23-24]，Shetty 的研究认为只有6%，而脐带MSC的培养成功率可 达100%[25]。另外从脐血中分离MSC S ，就浪费了其中的造血干/祖细胞(hematopoietic stem cells/hematopoietic progenitor cells,HSCs/HPCs) [26, 27]，因此，脐带MSC S (umbilical cord mesenchymal stem cells, UC-MSC S )就成 为重要来源。 一．概述 人脐带约40 g, 它的长度约60–65 cm, 足月脐带的平均直径约1.5 cm[28, 29]。脐带被覆着鳞状上皮，叫脐带上皮，是单层或复层结构，这层上皮由羊膜延续过来[30, 31]。脐带的内部是两根动脉和一根静脉，血管之间是粘液样的结缔组织，叫做沃顿胶质，充当血管外膜的功能。脐带中无毛细血管和淋巴系统。沃顿胶质的网状系统是糖蛋白微纤维和胶原纤维。沃顿胶质中最多的葡萄糖胺聚糖是透明质酸，它是包绕在成纤维样细胞和胶原纤维周围的并维持脐带形状的水合凝胶，使脐带免受挤压。沃顿胶质的基质细胞是成纤维样细胞[32]，这种中间丝蛋白表达于间充质来源的细胞如成纤维细胞的，而不表达于平滑肌细胞。共表达波形蛋白和索蛋白提示这些细胞本质上肌纤维母细胞。 脐带基质细胞也是一种具有多能干细胞特点的细胞，具有多项分化潜能，其 形态和生物学特点与骨髓源性MSC S 相似[5, 20, 21, 38, 46]，但脐带MSC S 更原始，是介 于成体干细胞和胚胎干细胞之间的一种干细胞，表达Oct-4, Sox-2和Nanog等多

Octet BLI大分子结合动力学检测实验设计-Non-Small Molecule Kinetics

Kinetics Assay: 概述： Octet系统可检测生物分子间相互作用，其中RED系列检测分子量下限可达150Da，而QK系列则可检测5kDa以上分子。检测样品为分子量150 Da~1000 Da的小分子以及小于5kDa的分子，采用RED系列实现；分子量大于5kDa时，RED系列及QK系列均可满足要求。该SOP默认待测样品为大分子，为其动力学检测提供通用标准化流程，针对具体分子及特殊情况，可能需要进一步考虑更多细节及优化。 考量及建议： 1.采用Octet系统检测大分子时，应当根据样品特性综合考虑，以选择适当sensor（例如，SA sensor可loading生物 素化的蛋白、抗体、化合物、核酸等以检测与之相互作用的大分子样品，而AHC sensor可直接loading人抗后检测与之相互作用的分子）；所使用sensor批次相同。如用户对于sensor选择有任何疑问，请随时与ForteBio应用科学家联系。 2.蛋白或抗体生物素化操作请参阅ForteBio技术说明书。化合物及核酸、糖类分子生物素化一般需合成实现。核酸及 糖类分子生物素化也可依据Pierce试剂盒操作实现。 3.Assay buffer没有特定要求，便于样品的稳定保存即可；值得注意的是，由于ForteBio大多通过氨基生物素化实现 欧联，因此需生物素化样品的buffer不可为含Tris等氨基的缓冲液。客户可根据需要采用Pierce相关试剂盒实现羧基端生物素化。 4.设置protocol时，一般需要1根sensor loading后在检测buffer中检测基线，作为空白对照。 5.用于loding的生物素化蛋白浓度可采用20ug-50ug/ml。 6.建议对样品进行两轮筛选。例如，第1轮宽泛筛选，浓度为100,10,1,0.1uM，确定样品大概Kd范围；第2轮更精 细筛选：30,10,3.3,1.1uM，获取高度可信的Kd。（注意：所用浓度仅用于发挥导向性作用，实际浓度取决于初筛所获得Kd）。实际实验中，在筛选前可采用1个相对高浓度样品或阳性对照，先测定相互作用有无，然后执行如上筛选。 1.实验目的：采用Octet 系统检测大分子与蛋白间相互作用。 2.实验材料： 2.1仪器：Octet RED系列（或QK系列）； 2.2传感器：SA传感器； 2.3样品：蛋白：MW（kDa），浓度，buffer（不可为Tris或其他含氨基的buffer），总量；大分子：MW（Da），浓 度，总量； 2.4缓冲液：Assay buffer=AB； 2.5其他试剂与耗材：biotin-LCLC-NHS，5mg/ml biocytin、 Greiner 96孔板，BSA，Tween-20， EP管，PD-10 Desalting Columns（或Zeba? Spin Desalting Columns），移液器1套。

脐带血造血干细胞库管理办法(试行)

脐带血造血干细胞库管理办法（试行） 第一章总则 第一条为合理利用我国脐带血造血干细胞资源，促进脐带血造血干细胞移植高新技术的发展，确保脐带血 造血干细胞应用的安全性和有效性，特制定本管理办法。 第二条脐带血造血干细胞库是指以人体造血干细胞移植为目的，具有采集、处理、保存和提供造血干细胞 的能力，并具有相当研究实力的特殊血站。 任何单位和个人不得以营利为目的进行脐带血采供活动。 第三条本办法所指脐带血为与孕妇和新生儿血容量和血循环无关的，由新生儿脐带扎断后的远端所采集的 胎盘血。 第四条对脐带血造血干细胞库实行全国统一规划，统一布局，统一标准，统一规范和统一管理制度。 第二章设置审批 第五条国务院卫生行政部门根据我国人口分布、卫生资源、临床造血干细胞移植需要等实际情况，制订我 国脐带血造血干细胞库设置的总体布局和发展规划。 第六条脐带血造血干细胞库的设置必须经国务院卫生行政部门批准。 第七条国务院卫生行政部门成立由有关方面专家组成的脐带血造血干细胞库专家委员会（以下简称专家委

员会），负责对脐带血造血干细胞库设置的申请、验收和考评提出论证意见。专家委员会负责制订脐带血 造血干细胞库建设、操作、运行等技术标准。 第八条脐带血造血干细胞库设置的申请者除符合国家规划和布局要求，具备设置一般血站基本条件之外， 还需具备下列条件： （一）具有基本的血液学研究基础和造血干细胞研究能力； （二）具有符合储存不低于1 万份脐带血的高清洁度的空间和冷冻设备的设计规划； （三）具有血细胞生物学、HLA 配型、相关病原体检测、遗传学和冷冻生物学、专供脐带血处理等符合GMP、 GLP 标准的实验室、资料保存室； （四）具有流式细胞仪、程控冷冻仪、PCR 仪和细胞冷冻及相关检测及计算机网络管理等仪器设备； （五）具有独立开展实验血液学、免疫学、造血细胞培养、检测、HLA 配型、病原体检测、冷冻生物学、 管理、质量控制和监测、仪器操作、资料保管和共享等方面的技术、管理和服务人员； （六）具有安全可靠的脐带血来源保证； （七）具备多渠道筹集建设资金运转经费的能力。 第九条设置脐带血造血干细胞库应向所在地省级卫生行政部门提交设置可行性研究报告，内容包括：

ENZYME_KINETICS

Enzyme Kinetics In this exercise we will look at the catalytic behavior of enzymes. You will use Excel to answer the questions in the exercise section. At the end of this session, you must hand in answers to all the questions, along with print outs of any plots you created. Background Enzymes are the catalysts of biological systems and are extremely efficient and specific as catalysts. In fact, typically, an enzyme accelerates the rate of a reaction by factors of at least a million compared to the rate of the same reaction in the absence of the enzyme. Most biological reactions do not occur at perceptible rates in the absence of enzymes. One of the simplest biological reactions catalyzed by an enzyme is the hydration of CO2. The catalyst in this reaction is carbonic anhydrase. This reaction is part of the respiration cycle which expels CO2 from the body. Carbonic anhydrase is a highly efficient enzyme – each enzyme molecule can catalyze the hydration of 105 CO2 molecules per second. Enzymes are highly specific. Typically a particular enzyme catalyzes only a single chemical reaction or a set of closely related chemical reactions. As is true of any catalyst, enzymes do not alter the equilibrium point of the reaction. This means that the enzyme accelerates the forward and reverse reaction by precisely the same factor. For example, consider the interconversion of A and B. A?B(1) Suppose that in the absence of the enzyme the forward rate constant (k f) is 10-4 s-1 and the reverse rate constant (k r) is 10-6 s-1. The equilibrium constant (K eq) is given by the ratio of the two rate constants. K eq=[B] [A] = k f k r = 10?4 10?6 =100 (2) The equilibrium concentration of B is 100 times that of A whether or not an enzyme is present. However, in the absence of an enzyme the reaction could take more than an hour to approach this equilibrium, whereas in the presence of an enzyme, equilibrium could be attained within a

卫生部办公厅关于印发《脐带血造血干细胞治疗技术管理规范(试行)

卫生部办公厅关于印发《脐带血造血干细胞治疗技术管理规 范(试行)》的通知 【法规类别】采供血机构和血液管理 【发文字号】卫办医政发[2009]189号 【失效依据】国家卫生计生委办公厅关于印发造血干细胞移植技术管理规范(2017年版)等15个“限制临床应用”医疗技术管理规范和质量控制指标的通知 【发布部门】卫生部(已撤销) 【发布日期】2009.11.13 【实施日期】2009.11.13 【时效性】失效 【效力级别】部门规范性文件 卫生部办公厅关于印发《脐带血造血干细胞治疗技术管理规范（试行）》的通知 （卫办医政发〔2009〕189号） 各省、自治区、直辖市卫生厅局，新疆生产建设兵团卫生局： 为贯彻落实《医疗技术临床应用管理办法》，做好脐带血造血干细胞治疗技术审核和临床应用管理，保障医疗质量和医疗安全，我部组织制定了《脐带血造血干细胞治疗技术管理规范（试行）》。现印发给你们，请遵照执行。 二〇〇九年十一月十三日

脐带血造血干细胞 治疗技术管理规范（试行） 为规范脐带血造血干细胞治疗技术的临床应用，保证医疗质量和医疗安全，制定本规范。本规范为技术审核机构对医疗机构申请临床应用脐带血造血干细胞治疗技术进行技术审核的依据，是医疗机构及其医师开展脐带血造血干细胞治疗技术的最低要求。 本治疗技术管理规范适用于脐带血造血干细胞移植技术。 一、医疗机构基本要求 （一）开展脐带血造血干细胞治疗技术的医疗机构应当与其功能、任务相适应，有合法脐带血造血干细胞来源。 （二）三级综合医院、血液病医院或儿童医院，具有卫生行政部门核准登记的血液内科或儿科专业诊疗科目。 1.三级综合医院血液内科开展成人脐带血造血干细胞治疗技术的，还应当具备以下条件： （1）近3年内独立开展脐带血造血干细胞和（或）同种异基因造血干细胞移植15例以上。 （2）有4张床位以上的百级层流病房，配备病人呼叫系统、心电监护仪、电动吸引器、供氧设施。 （3）开展儿童脐带血造血干细胞治疗技术的，还应至少有1名具有副主任医师以上专业技术职务任职资格的儿科医师。 2.三级综合医院儿科开展儿童脐带血造血干细胞治疗技术的，还应当具备以下条件：

卫生部关于印发《脐带血造血干细胞库设置管理规范(试行)》的通知

卫生部关于印发《脐带血造血干细胞库设置管理规范(试行)》的通知 发文机关：卫生部(已撤销) 发布日期： 2001.01.09 生效日期： 2001.02.01 时效性：现行有效 文号：卫医发(2001)10号 各省、自治区、直辖市卫生厅局： 为贯彻实施《脐带血造血干细胞库管理办法（试行）》，保证脐带血临床使用的安全、有效，我部制定了《脐带血造血干细胞库设计管理规范（试行）》。现印发给你们，请遵照执行。 附件：《脐带血造血干细胞库设置管理规范（试行）》 二○○一年一月九日 附件： 脐带血造血干细胞库设置管理规范（试行） 脐带血造血干细胞库的设置管理必须符合本规范的规定。 一、机构设置 （一）脐带血造血干细胞库（以下简称脐带血库）实行主任负责制。 （二）部门设置 脐带血库设置业务科室至少应涵盖以下功能：脐带血采运、处理、细胞培养、组织配型、微生物、深低温冻存及融化、脐带血档案资料及独立的质量管理部分。 二、人员要求

（一）脐带血库主任应具有医学高级职称。脐带血库可设副主任，应具有临床医学或生物学中、高级职称。 （二）各部门负责人员要求 1．负责脐带血采运的人员应具有医学中专以上学历，2年以上医护工作经验，经专业培训并考核合格者。 2．负责细胞培养、组织配型、微生物、深低温冻存及融化、质量保证的人员应具有医学或相关学科本科以上学历，4年以上专业工作经历，并具有丰富的相关专业技术经验和较高的业务指导水平。 3．负责档案资料的人员应具相关专业中专以上学历，具有计算机基础知识和一定的医学知识，熟悉脐带血库的生产全过程。 4．负责其它业务工作的人员应具有相关专业大学以上学历，熟悉相关业务，具有2年以上相关专业工作经验。 （三）各部门工作人员任职条件 1．脐带血采集人员为经过严格专业培训的护士或助产士职称以上卫生专业技术人员并经考核合格者。 2．脐带血处理技术人员为医学、生物学专业大专以上学历，经培训并考核合格者。 3．脐带血冻存技术人员为大专以上学历、经培训并考核合格者。 4．脐带血库实验室技术人员为相关专业大专以上学历，经培训并考核合格者。 三、建筑和设施 （一）脐带血库建筑选址应保证周围无污染源。 （二）脐带血库建筑设施应符合国家有关规定，总体结构与装修要符合抗震、消防、安全、合理、坚固的要求。 （三）脐带血库要布局合理，建筑面积应达到至少能够储存一万份脐带血的空间；并具有脐带血处理洁净室、深低温冻存室、组织配型室、细菌检测室、病毒检测室、造血干/祖细胞检测室、流式细胞仪室、档案资料室、收/发血室、消毒室等专业房。 （四）业务工作区域应与行政区域分开。

脐带血间充质干细胞的分离培养和鉴定

脐带血间充质干细胞的分离培养和鉴定 【摘要】目的分离培养脐带血间充质干细胞并检测其生物学特性。方法在无菌条件下用密度梯度离心的方法获得脐血单个核细胞，接种含10%胎牛血清的DMEM培养基中。单个核细胞行贴壁培养后，进行细胞形态学观察，绘制细胞生长曲线，分析细胞周期，检测细胞表面抗原。结果采用Percoll(1.073 g/mL)分离的脐血间充质干细胞大小较为均匀，梭形或星形的成纤维细胞样细胞。细胞生长曲线测定表明接后第5天细胞进入指数增生期，至第9天后数量减少;流式细胞检测表明50%～70%细胞为CD29和CD45阳性。结论体外分离培养脐血间充质干细胞生长稳定，可作为组织工程的种子细胞。 【关键词】脐血;间充质干细胞;细胞周期;免疫细胞化学 Abstract: Objective Isolation and cultivation of mesenchymal stem cells (MSCs) in human umbilical cord in vitro, and determine their biological properties. Methods The mononuclear cells were isolated by density gradient centrifugation from human umbilical cord blood in sterile condition, and cultured in DMEM medium containing 10% fetal bovine serum. After the adherent mononuclear cells were obtained, the shape of cells were observed by microscope, then the cell growth curve, the cell cycle and the cell surface antigens were obtained by immunocytochemistry and flow cytometry methods. Results MSCs obtained by Percoll (1.073 g/mL) were similar in size, spindle-shaped or star-shaped fibroblasts-liked cells. Cell growth curve analysis indicated that MSCs were in the exponential stage after 5d and in the stationary stages after 9d. Flow cytometry analysis showed that the CD29 and CD44 positive cells were about 50%～70%. Conclusions The human umbilical cord derived mesenchymal stem cells were grown stably in vitro and can be used as the seed-cells in tissue engineering. Key words:human umbilical cord blood; mesenchymal stem cells; cell cycle; immunocytochemistry 间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSCs)在一定条件下具有多向分化的潜能，是组织工程研究中重要的种子细胞来源。寻找来源丰富并不受伦理学制约的间充质干细胞成为近年来的研究热点[1]。脐血(umbilical cord blood, UCB)在胚胎娩出后，与胎盘一起存在的医疗废物。与骨髓相比，UCB来源更丰富，取材方便，具有肿瘤和微生物污染机会少等优点。有人认为脐血中也存在间充质干细胞(Umbilical cord blood-derived mesenchymal stem cells，UCB-MSCs)。如果从脐血中培养出MSCs，与胚胎干细胞相比，应用和研究则不受伦理的制约，蕴藏着巨大的临床应用价值[2,3]。本研究将探讨人UCB-MSCs体外培养的方法、细胞的生长曲线、增殖周期和细胞表面标志等方面，分析UCB-MSCs 作为间充质干细胞来源的可行性。

脐带血干细胞检测

脐带血干细胞检测 对每份脐血干细胞进行下列检测： ①母体血样做梅毒、HIV和CMV等病原体检测，这一检测使脐血干细胞适合于其它家庭成员应用。如任何一种病原体测试阳性，需重复测定。 ②每份脐血干细胞样本同时检测确定没有微生物污染。 ③细胞活性检测、有核细胞数、CD34+细胞数、集落形成试验等。CD34是分子量115KD 的糖蛋白分子，使用特定单克隆抗体（抗-CD34）确定，脐血祖细胞的大部分，包括体外培养产生造血集落的细胞都包含在表达CD34抗原的细胞群中。 ④HLA组织配型、ABO血型。 一、采血方式及其优点 再生缘生物科技公司采用最严谨的封闭式血袋收集法，避免在收集脐带血液时可能遭受微生物污染的发生，且以最少之操作步骤，收集最大量之脐带血液方式，在产房内即可完成。 二、脐带血处理与保存 脐带血收集于血袋，经专人运送至再生缘生物科技公司之无菌细胞分离实验室后，由专业的技术人员于完全无菌的环境下，依标准操作程序将血液进行分离，收集具有细胞核的细胞，其中含有丰富的血液干细胞，经加入冷冻保护剂和适当品管检测后，并进行以最适合

血液干细胞的冷冻降温程序方式，进行细胞冷冻程序，达到避免细胞受到冷冻过程之伤害。完成后，冷冻细胞立刻保存于摄氏零下196度的液态氮槽中。所有操作程序记录和细胞保存相关数据，均由计算机条形码系统追踪确认，完全符合国际脐带血库之标准操作程序和品管要求。 母亲血液之检测 为确保所操作和保存的脐带血液细胞，符合国际血液操作规范，并提供客户最大的保障，对于产妇血液必须同时进行一些病毒传染病的检测，以确保没有下列病毒，如艾滋病毒(HIV)、C型肝炎病毒(HCV)、人类T细胞淋巴病毒(HTLV)和梅毒(syphilis)，同时对于B型肝炎病毒(HBV)和巨细胞病毒(CMV)加以侦测和纪录，作为将来可能应用脐带血细胞时之必要参考数据并符合卫生医疗之要求。 脐带血细胞之品管 对于所保存之脐带血细胞均进行多项操作流程监控和品管检测，如微生物污染检测、血液细胞浓度、细胞存活率、细胞活性测定等，每一步骤均有详细之纪录，在操作方法和使用仪器方面均定期进行验证和校验，以符合国际医疗标准。 三、实验室、贮存处所介绍 再生缘生物科技公司拥有符合美国联邦标准(FED-STD-209E)和中华民国优良药品制造标准（一区、二区、三区）的生物安全实验室和无菌操作设备，在专业的技术人员依标准操作程序下进行血液分离和保存步骤，保障客户珍贵样品和权益。 分离后之细胞将依浓度分装入4-6个冷冻管，计算机降温冷冻完成后，即由食品工业发展研究所国家细胞库专业液态氮库房人员，将冷冻细胞分别存放于二个不同的脐带血细胞专属液态氮槽中保存，在安全机制上更有保障。液态氮库房拥有五吨的液态氮供应系统，每一液氮槽均有自动充填装置和异常警报系统，和每日值勤人员监控，确保冷冻细胞处于最佳的冷冻状态。 四、安全管制措施 脐带血液经快递送达无菌细胞分离实验室后，每一步骤均有专业技术人员操作和监督，并将所有分析数值详细填于具有条形码管制之分析表格和计算机数据表中，利用条形码和读码系统确认样品之专一性，避免人为失误，且便于追溯和数据品管。 在冷冻细胞保存上

Octet BLI 小分子动力学检测亲和力数据分析-1第一章-Small Molecule Kinetics-by row

1.双击数据分析软件图标，打开数据分析软件，在软件Data Selection界面左下侧子窗口路径下选中 待分析kinetics数据，双击后载入左上侧子窗口Loaded Data Kinetics文件夹下： 2.左键单击所载入待分析数据，右侧窗口显示Sensor Tray按钮下界面，即该检测中sensor所在sensor tray 上位置，在此可选择分析哪些sensor采集的数据，本例分析所有sensor的数据 3.该窗口另一个按钮Summary按钮下界面如下，包括实验运行信息，检测程序的步骤及时间、板孔排列 等。

4.选择所需分析sensor后，点击Processing进行数据处理： 5.数据处理界面如下，该窗口左侧依次包括Step1:Data Selection，Step2:Subtraction，Step3:Align Y Axis， Step4:Inter-step Correction，Step5:Process，Step6:View Results，Step7: Save Results；右侧窗口默认为Raw Data View下界面，即原始数据预览。

6.点击Step 1下Sensor Selection按钮，界面如下： 7.对于经典小分子实验，在实验设计上包括sensor对照和孔对照（间经典小分子实验设计SOP），数据 处理时需分别扣除对照孔及对照sensor引入的干扰；选中对照孔，右键下选择Change Well Type…下的Refference Well：

设置Refference Well后界面如下： 8.在Sensor Tray下选中对照Sensor，右键选择Change Sensor Type…下的Refference Sensor：

Octet BLI 小分子结合动力学检测实验设计Small Molecule Kinetics

Small Molecule Kinetics Assay: 概述： Octet RED系列可检测分子量为150 Da~1000 Da的小分子与蛋白间相互作用。该SOP的目的在于为小分子动力学检测提供通用标准化流程，针对具体分子及特殊情况，可能需要进一步考虑更多细节及优化。此外，该SOP假定所有使用者已经过ForteBio应用科学家上机培训，如若不然，请在培训完成后参考该SOP。 考量及建议： 1.采用RED系列检测小分子时，应当使用SSA sensor（Cat# 18-0008 and 18-0009），该sensor是ForteBio公司目前唯 一具备检测小分子灵敏度的传感器。 2.用于与小分子结合的蛋白或抗体必须生物素化。请参阅ForteBio技术说明书。 3.建议assay buffer为PBS+5%DMSO； 4.设置protocol时，须设置两组SSA sensor，运行中第1组为实际检测用sensor，第2组为生物胞素（biocytin）封闭 后、用作阴性对照的sensor。 5.至关重要的是，检测sensor与对照sensor间运行步骤数以及各步运行时间必须一致-任何偏差将导致所得数据无法 于Octet RED软件上分析。 6.用于loding的生物素化蛋白浓度建议采用50ug/ml。如蛋白很小或容易产生空间位阻，可能需要进行定量。如蛋白 较宝贵，其用量可以更低，但随后的结合效率可能会有所折扣（17kDa的蛋白在推荐浓度下3min后可产生2nm的shift）。 7.稀释样品，DMSO最终浓度为5%（例如：溶于100%DMSO中20mM的样品，按照1:20溶于PBS后其浓度为 1mM，DMSO为5%）。 8.建议对样品进行两轮筛选。例如，第1轮宽泛筛选，浓度为100,10,1,0.1uM，确定样品大概Kd范围；第2轮更精 细筛选：30,10,3.3,1.1uM，获取高度可信的Kd。（注意：所用浓度仅用于发挥导向性作用，实际浓度取决于初筛所获得Kd）。实际实验中，在筛选前可采用1个相对高浓度样品或阳性对照，先测定相互作用有无，然后执行如上筛选。 9.注意：两组SSA sensor必须为同一批次。 1.实验目的：采用Octet RED检测小分子与蛋白间相互作用。 2.实验材料： 2.1仪器：Octet RED； 2.2传感器：SSA传感器； 2.3样品：蛋白：MW（kDa），浓度，buffer（不可为Tris或其他含氨基的buffer），总量；小分子：MW（Da），浓 度，总量； 2.4缓冲液：Assay buffer=AB（一般为PBS）；

adsorption kinetics of CO2 O2 N2 and CH4 in cation-exchanged

Adsorption Kinetics of CO2,O2,N2,and CH4in Cation-Exchanged Clinoptilolite Gelacio Aguilar-Armenta,*,?Guadalupe Hernandez-Ramirez,?Erika Flores-Loyola,? Alejandra Ugarte-Castaneda,?Rutilo Silva-Gonzalez,?Cristobal Tabares-Munoz,? Antonio Jimenez-Lopez,§and Enrique Rodriguez-Castellon§ Centro de In V estigacion de la Facultad de Ciencias Quimicas,Benemerita Uni V ersidad Autonoma de Puebla, B V d.14Sur y A V.San Claudio,C.U.,Col.San Manuel,C.P.72570,Puebla,Puebla,Mexico,Instituto de Fisica“Luis Ri V era Terrazas”,Benemerita Uni V ersidad Autonoma de Puebla,Ado.Postal J-48, Col.San Manuel,C.P.72570,Puebla,Puebla,Mexico.,and Dpto de Quimica Inorganica, Facultad de Ciencias,Uni V ersidad de Malaga,29071Malaga,Spain Recei V ed:September24,1999;In Final Form:No V ember7,2000 The rate of adsorption of pure CO2,O2,N2,and CH4on natural untreated clinoptilolite-rich volcanic tuff (Cp)from Tehuacan(Puebla,Mexico),and on cation-exchanged clinoptilolite samples(Ca-Cp,K-Cp,and Na-Cp)has been measured at20°C using a glass high-vacuum volumetric apparatus.The X-ray diffraction pattern of Cp showed that the main crystalline phases correspond to clinoptilolite-heulandite and minor amounts of mordenite,cristobalite,feldspar(albite),quartz,smectite,and opal.The adsorption rates of gases in the initial period(t<180s)were measured with a custom acquisition data card capable of registering pressure and time data five times per second,simultaneously.The influence of cation exchange on adsorption kinetics of the gases depended on the gas-adsorbent contact time(t).In the initial period,the adsorption rate of all gases on all samples decreased in the order Ca-Cp>K-Cp>Cp>Na-Cp,and the affinity decreased in the order CO2.N2>O2>CH4,whereas at equilibrium(t f∞s)the adsorption uptake decreased in the sequence CO2.CH4>N2>O2.The slow adsorption of methane in Na-Cp was probably due to diffusional difficulties as a result of channel blockage by Na+cations.By cation exchange of Cp an adsorbent can be tailored for the separation of N2/O2,N2/CH4,and CO2/CH4mixtures. Introduction Zeolites are porous,crystalline,hydrated aluminosilicates of alkali and alkaline earth cations that possess a three-dimensional structure.The zeolite framework consists of an assemblage of SiO4and AlO4tetrahedra joined together in various regular arrangements through shared oxygen atoms to form an open crystal structure containing pores of molecular dimensions into which guest molecules can penetrate.The negative charge created by the substitution of an AlO4tetrahedron for a SiO4 tetrahedron is balanced by exchangeable cations(e.g.,Na+,K+, Ca2+,Mg2+),which are located in large structural channels and cavities throughout the structure.These cations play a very important role in determining the adsorption and gas-separation properties of zeolites.These properties depend heavily on the size,charge density,and distribution of cations in the porous structure.Synthetic zeolites are manufactured on a large scale for industrial use,but natural zeolites have not yet found extensive application as commercial molecular sieves,even though a few,particularly clinoptilolite,are abundant in volcanogenic sedimentary rocks.1Of the more than40natural zeolites species known today,clinoptilolite is the most abundant in soils and sediments.The framework of clinoptilolite is formed by two parallel channels of10-member rings(channel A)and eight-member rings(channel B)connected to a third channel C of eight-member rings.1The approximate channel sizes(?) are:A,4.4×7.2;B,4.1×4.7;C,4.0×5.5.Small hydrated cations(Na+,K+,Ca2+,and Mg2+)can easily enter the channels of clinoptilolite and compete for the major exchangeable-cation sites,2designated as M(1),M(2),M(3),and M(4).The major cations are located and distributed as follows:3M(1)is located in channel A,where Na>Ca;M(2)is located in channel B, where Ca>Na;M(3)is located in channel C,where there is only K;and M(4)is located in channel A,where there is only Mg.Clinoptilolite has been applied to gas and radioactive wastewater cleaning,gas separation,and gas drying,4-6and Minato et al.7and Galabova et al.8discussed the possibility of using clinoptilolites to separate oxygen from air.Others9,10have shown that the use of K-exchanged clinoptilolite for air separation leads to an increase in the coefficient of oxygen production.Frankiewicz and Donnelly11found that clinoptilolite can be used to separate N2/CH4mixtures,and that an incom-pletely exchanged sample containing divalent cations appeared to be the most selective for N2.Through cation manipulation, Ackley et al.12tailored clinoptilolite for a commercially viable, kinetic separation of a N2/CH4mixture.The affinity of zeolites for N2is attributable to the field gradient-quadrupole interaction energy,13,14which is stronger for divalent cations than for monovalent cations.Boniface et al.15reported that clinoptilolite appeared to be a promising adsorbent for O2/Ar separation,but because O2is preferentially adsorbed,this adsorbent was not ideal for purifying oxygen.Mumpton16noted that natural zeolites,primarily chabazite and clinoptilolite,have been used to purify natural gas contaminated with large amounts of CO2, H2S,and H2O. In view of the fact that large deposits of zeolitic tuffs, *Author to whom correspondence should be addressed.Fax:5222295 584.E-mail:geaguila@siu.buap.mx. ?Centro de Investigacion de la Facultad de Ciencias Quimicas,Ben-emerita Universidad Autonoma de Puebla.Fax:5222295584. ?Instituto de Fisica“Luis Rivera Terrazas”,Benemerita Universidad Autonoma de Puebla.Fax:5222448947. §Dpto de Quimica Inorganica,Facultad de Ciencias,Universidad de Malaga.Fax:3452132000.1313 J.Phys.Chem.B2001,105,1313-1319 10.1021/jp9934331CCC:$20.00?2001American Chemical Society Published on Web01/26/2001