Nature：肽键生成新途径

Nature：肽键生成新途径

来自中国科技大学的最新报道，美国范德堡大学（Vanderbilt University）的科研人员发现了一种生成肽键的新方法。该方法使用溴化硝基烷烃与碘活化的胺反应产生酰胺。该反应可以和不对称的aza-Henry反应连用，提供了生产非天然氨基酸酰胺和多肽的新途径。

肽键作为天然肽和蛋白的骨干普遍存在。氨基酸借肽键联结成蛋白质，肽键如同关节一样构建了蛋白质的骨架。同时肽键也广泛存在于很多药物小分子中，例如人们常用的消炎药青霉素和阿莫西林。化学家们常用的生成肽键方法是羧酸和胺的脱水缩合反应。其中羧酸为亲电试剂，胺为亲核试剂。而在《自然》（Nature）新报道的这一方法中，作者发现可以使用溴化硝基烷烃作为羧酸的替代物，与碘活化的胺反应。反应物的极性与经典的脱水缩合反应相反（umpolung）。溴化硝基烷烃的使用提供了生成肽键的一种全新的理念。

当反应分子体积增大、位阻或立体化学复杂程度增强的时候，常用的脱水缩合反应有时就难以达到要求。比如芳香基甘氨酸的肽键生成中就常会伴随一定程度的消旋（导致纯度降低）。而新报道的这一方法可以和不对称的aza-Henry反应连用，成功避免了芳香基甘氨酸的酰胺产生过程中的消旋。此方法将会对酰胺和多肽的合成产生广泛和深远的影响。

《自然》杂志为此刊发了编者按，同时还在“新闻和观点”栏目中配发了一篇署名文章来重点推荐新报道的这一方法。文章称赞这一新方法“简便，通用，激动人心。这不仅仅是一项令人满意的智力成果，还有更深远的应用价值。药物化学家可以很快地应用这一方法来合成含有肽键的具有生物活性的分子，而它们中的一些某一天也许会被用来治疗疾病。”从某种意义上来说，这一新方法无异于化学领域内的新发掘的一座金矿。

文章的第一作者沈博2003年毕业于中国科技大学，在范德堡大学获得化学博士学位后，现在在麻省理工学院（MIT）从事博士后研究。

原文出处推荐：

Nature 465, 1027–1032 (24 June 2010) doi:10.1038/nature09125

Umpolung reactivity in amide and peptide synthesis

Bo Shen, Dawn M. Makley & Jeffrey N. Johnston

The amide bond is one of nature’s most common functional and structural elements, as the backbones of all natural peptides and proteins are composed of amide bonds. Amides are also present in many therapeutic small molecules. The construction of amide bonds using available methods relies principally on dehydrative approaches, although oxidative and radical-based methods are representative alternatives. In nearly every example, carbon and nitrogen bear electrophilic and nucleophilic character, respectively, during the carbon-nitrogen bond-forming step. Here we show that activation of amines and nitroalkanes with an electrophilic iodine source can lead directly to amide products. Preliminary observations support a mechanism in which the polarities of the two reactants are reversed (German, umpolung) during carbon-nitrogen bond formation relative to traditional approaches. The use of nitroalkanes as acyl anion equivalents

provides a conceptually innovative approach to amide and peptide synthesis, and one that might ultimately provide for efficient peptide synthesis that is fully reliant on enantioselective methods.

本文来源于：生物问问博客,原文地址：https://www.sodocs.net/doc/1516271910.html,/html/1059.html

nature09125-s1.pd

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ELLMAN试剂法测定自由巯基和二硫键审批稿

E L L M A N试剂法测定 自由巯基和二硫键 YKK standardization office【 YKK5AB- YKK08- YKK2C- YKK18】

ELLMAN试剂测定自由巯基试验基于的原理： 5,5’-dithiobis-2-nitrobenzoic acid (DTNB) 5,5-二硫基-双(2-硝基苯甲酸) 5,5-二硫基-双(2-硝基苯甲酸)(DTNB)在412nm没有吸收，与巯基反应后，生成2-硝基-5-巯基苯甲酸（TNB）[1]。TNB2-在412nm有很强的吸收，可以用于对肽段的自由巯基进行定量分析[2]。 S S NO2NO2 -OOC-OOC + SH S- S NO2 NO2 -OOC -OOC + S DTNB TNB2- 根据文献记载，TNB的吸光系数在*103M-cm-~*103M-cm-之间[3,4]。吸光度测量的最灵敏范围在之间。A=εbc，其中A为吸光度，ε是摩尔吸收光系数或消光系数，ε单位为升/（摩尔·厘米）[L/(mol·cm）]。以吸光度下限来计算（吸光系数取*103M-cm-），需要TNB的浓度为c=（*103LM-cm-*1cm）=*10-5mol/L *10-8mol/ml)，需要蛋白浓度为*10-5mol/L*18790g/mol=L=ml. 我们的条件可以达到这个检测限度。 ELLMAN试剂法测定自由巯基主要的影响因素有：

1.EDTA的适量加入有助于TNB显色的稳定和成梯度线性关系[5]。 2.在不同缓冲液中，TNB的最大吸收波长略微不同，所以它们在412nm 的吸收也不 3.同，要根据选择的缓冲液来确定[5]。另外，TNB的分光光度法分析对 SDS很敏感[6]。 4.DTNB随着pH的升高，降解速度加快。在，其降解速度为%/h，在 5.pH值，其降解速度为%/h,随着pH值得升高，降解速度加快，在pH 12 时，15min之内会完全降解[7,8]。 6.摩尔吸收光系数在不同的温度下不同，随温度的升高而下降[4]. 试验方案 主要材料： 1.材料 PEG-G-CSF 批号：080229 浓度ml G-CSF 批号：080126 浓度ml 10k超滤膜 PALL 2.试剂 Sequencing Grade Modified Trypsin,Promega，lot#237826。20 ug/小瓶。 加入20 ul 50mM NH4HCO3，溶解，配成1 ug/ ul的酶液。 1M DTT 刘春凤提供 TFA（三氟乙酸）：TEDIA Lot# 705114 乙腈：Fisher Scientific Lot# 055848 Starter kit for MALDI-TOF MS：BRUKER DALTONICS，Lot NO 2007-208241-001(including α-Cyano-4-hydroxycinnamic

ELLMAN试剂法测定自由巯基和二硫键

E L L M A N试剂法测定自 由巯基和二硫键 This manuscript was revised by the office on December 22, 2012

E L L M A N试剂测定自由巯基 试验基于的原理： 5,5’-dithiobis-2-nitrobenzoicacid(DTNB)5,5-二硫基-双(2-硝基苯甲酸) 5,5-二硫基-双(2-硝基苯甲酸)(DTNB)在412nm没有吸收，与巯基反应后，生成2-硝基-5-巯基苯甲酸（TNB）[1]。TNB2-在412nm有很强的吸收，可以用于对肽段的自由巯基进行定量分析[2]。 DTNBTNB2- 根据文献记载，TNB的吸光系数在13.6*103M-cm-~14.25*103M-cm-之间[3,4]。吸光度测量的最灵敏范围在0.2-0.7之间。A=εbc，其中A为吸光度，ε是摩尔吸收光系数或消光系数，ε单位为升/（摩尔·厘米）[L/(mol·cm）]。以吸光度下限0.2来计算（吸光系数取14.15*103M-cm-），需要TNB的浓度为c=0.2/（14.15*103LM-cm-*1cm）=1.4*10-5mol/L(1.4*10-8mol/ml)，需要蛋白浓度为 1.4*10-5mol/L*18790g/mol=0.2631g/L=0.2631mg/ml. 我们的条件可以达到这个检测限度。 ELLMAN试剂法测定自由巯基主要的影响因素有： 1.EDTA的适量加入有助于TNB显色的稳定和成梯度线性关系[5]。 2.在不同缓冲液中，TNB的最大吸收波长略微不同，所以它们在412nm的 吸收也不 3.同，要根据选择的缓冲液来确定[5]。另外，TNB的分光光度法分析对SDS 很敏感[6]。 4.DTNB随着pH的升高，降解速度加快。在pH7.0，其降解速度为 0.02%/h，在 5.pH值8.0，其降解速度为0.2%/h,随着pH值得升高，降解速度加快，在 pH12时，15min之内会完全降解[7,8]。 6.摩尔吸收光系数在不同的温度下不同，随温度的升高而下降[4]. 试验方案 主要材料：

ELLM试剂法测定自由巯基和二硫键

E L L M试剂法测定自由巯基 和二硫键 Prepared on 22 November 2020

ELLMAN试剂测定自由巯基试验基于的原理： 5,5’-dithiobis-2-nitrobenzoicacid(DTNB)5,5-二硫基-双(2-硝基苯甲酸) 5,5-二硫基-双(2-硝基苯甲酸)(DTNB)在412nm没有吸收，与巯基反应后，生成2-硝基-5-巯基苯甲酸（TNB）[1]。TNB2-在412nm有很强的吸收，可以用于对肽段的自由巯基进行定量分析[2]。 DTNBTNB2- 根据文献记载，TNB的吸光系数在*103M-cm-~*103M-cm-之间[3,4]。吸光度测量的最灵敏范围在之间。A=εbc，其中A为吸光度，ε是摩尔吸收光系数或消光系数，ε单位为升/（摩尔·厘米）[L/(mol·cm）]。以吸光度下限来计算（吸光系数取*103M-cm-），需要TNB的浓度为c=（*103LM-cm-*1cm）=*10-5mol/L*10- 8mol/ml)，需要蛋白浓度为*10-5mol/L*18790g/mol=L=ml. 我们的条件可以达到这个检测限度。 ELLMAN试剂法测定自由巯基主要的影响因素有： 1.EDTA的适量加入有助于TNB显色的稳定和成梯度线性关系[5]。 2.在不同缓冲液中，TNB的最大吸收波长略微不同，所以它们在412nm 的吸收也不 3.同，要根据选择的缓冲液来确定[5]。另外，TNB的分光光度法分析对 SDS很敏感[6]。 4.DTNB随着pH的升高，降解速度加快。在，其降解速度为%/h，在

5.pH值，其降解速度为%/h,随着pH值得升高，降解速度加快，在pH12 时，15min之内会完全降解[7,8]。 6.摩尔吸收光系数在不同的温度下不同，随温度的升高而下降[4]. 试验方案 主要材料： 1.材料 PEG-G-CSF批号：080229浓度ml G-CSF批号：080126浓度ml 10k超滤膜PALL 2.试剂 SequencingGradeModifiedTrypsin,Promega，lot#237826。20ug/小瓶。加 入20ul50mMNH4HCO3，溶解，配成1ug/ul的酶液。 1MDTT刘春凤提供 TFA（三氟乙酸）：TEDIALot#705114 乙腈：FisherScientificLot#055848 StarterkitforMALDI-TOFMS：BRUKERDALTONICS，LotNO2007- 208241-001(includingα-Cyano-4- hydroxycinnamicacid(HCCA),peptidecalibrationstandard,proteincalibratio nstandardI,proteincalibrationstandardⅡ) PEG肽段反相分离流动相 A液：%TFA/H2O B液：%TFA/90%乙腈/H2O 3.仪器 质谱仪：BRUKERDALTONICSMALTI-TOF-TOFautoflexⅢ(厂内编号 KC2007-011)

KEGG数据库的使用说明

KEGG数据库的使用方法与介绍http://www.genome.jp/ KEGG的数据 KEGG中的pathway是根据相关知识手绘的,这里的手绘的意思可能是指人工以特定的语言格式来确定通路各组件的联系；基因组信息主要是从NCBI等数据库中得到的，除了有完整的基因序列外，还有没完成的草图；另外KEGG中有一个“专有名词”KO（KEGG Orthology），它是蛋白质（酶）的一个分类体系，序列高度相似，并且在同一条通路上有相似功能的蛋白质被归为一组，然后打上KO（或K）标签。下面就首先来讲一下KEGG orthology。 任找一个代谢通路图，在上方有pathway meue | payhway entry | Show(Hide) description | 这3个选项，点击pathway entry, 出现了一个页面，这个随时被连接出来的页面相信大家一定再熟悉不过了。在这个页面中的pathway map项中点击按钮状的链接Ortholog table 。就进入了Ortholog table如下的页面： 在这个表中，行与物种对应，3个字母都是相应物中的英文单词缩写，比如has表示Homo sapiens，mcc表示Macaca mulatta；列就表示相应的Ortholog 分类，比如K00844就表示生物体内的己糖激酶hexokinase这一类序列和功能相似的蛋白质类（酶类）。如上图has后有3101，3098，3099这3个条目，它表示在人类细胞中中存在3中不同的己糖激酶，它们分别由以上这3组数字代表的基因所编码，这3组数字应该是这3个基因的登录号。空白则表示在该物种中不存在这种酶。

ELLMAN试剂法测定自由巯基和二硫键

ELLMAN试剂测定自由巯基 试验基于的原理： 5,5’-dithiobis-2-nitrobenzoic acid (DTNB) 5,5-二硫基-双(2-硝基苯甲酸) 5,5-二硫基-双(2-硝基苯甲酸)(DTNB)在412nm没有吸收，与巯基反应后，生成2-硝基-5-巯基苯甲酸（TNB）[1]。TNB2-在412nm有很强的吸收，可以用于对肽段的自 2- 吸光度 0.2来计算-*1cm） 1.4*10 1. 2. 不 3.同，要根据选择的缓冲液来确定[5]。另外，TNB的分光光度法分析对SDS很敏 感[6]。 4.DTNB随着pH的升高，降解速度加快。在pH7.0，其降解速度为0.02%/h，在 5.pH值8.0，其降解速度为0.2%/h,随着pH值得升高，降解速度加快，在pH 12 时，15min之内会完全降解[7,8]。

6.摩尔吸收光系数在不同的温度下不同，随温度的升高而下降[4]. 试验方案 主要材料： 1.材料 PEG-G-CSF 批号：080229 浓度4.32mg/ml G-CSF 批号：080126 浓度6.9mg/ml 小瓶。 NO B液：0.1%TFA/90%乙腈/H2O 3.仪器 质谱仪：BRUKER DALTONICS MALTI-TOF-TOF autoflexⅢ(厂内编号 KC2007-011) Beckman 22R台式离心机（厂内编号AM-039） Beckman DU-800 紫外分光光度计（厂内编号KC2007-005）

恒温循环仪：JULABO F12-ED（厂内编号KC2008-003） 反相柱：Symmetry C18 5um 300à 高压液相仪器：，（UV/Visible Detector） 试验过程： 一、缓冲液替换 PEG-G-CSF和G-CSF进行缓冲液替换，超滤替换缓冲液为50mM NH4HCO3， 稀释 中加入

Nature数据库检索指南

Nature数据库检索指南 一、数据库介绍： 《Nature》创刊于1869年，是世界上最早的国际性科技期刊。《Nature》网站涵盖的内容相当丰富，不仅提供1997年6月以来的《Nature》全文，而且包括其他众多姊妹刊物。所有可访问全文的刊物列表如下： EMBO reportsNatureNature Biotechnology Nature Cell BiologyNature Chemical BiologyNature Genetics Nature ImmunologyNature MaterialsNature Medicine Nature MethodsNature NeuroscienceNature Reviews Cancer Nature Reviews Drug DiscoveryNature Reviews Genetics Nature Reviews ImmunologyNature Reviews Microbiology Nature Reviews Molecular Cell BiologyNature Reviews Neuroscience Nature Structural & Molecular Biology Nature Structural Biology (2004年刊名改为Nature Structural & Molecular Biology） The EMBO Journal 二、检索方法： 该库有期刊浏览、检索和篇目检索功能，篇目检索包括简单查询和复杂查询两种方式。 ㈠期刊浏览与检索 登录到检索系统的首页，可以进行期刊浏览与检索。 1.按刊名浏览：将所有期刊按刊名顺序排列起来，用户可以按刊名逐卷逐期地直接阅读自己想看的期刊； 2.刊名检索：可以在检索条件输入框中输入刊名关键词，按刊名进行简单检索。然后再选择想看的期刊按卷期浏览。 3.二次检索：按上述的几种方式进行检索或浏览之后，在显示的期刊列表中可以进一步限制进行二次检索。 ㈡检索方式

二硫键检测方法

2.3.1.4 MBP-Permatin蛋白中半胱氨酸残基及二硫键数目的测定 L半胱氨酸可于5,5-二巯基双-2硝基甲苯(DTNB)发生硫醇-二硫化物交换反应,在碱性条件下反应显黄色,在412 nm处有强烈吸收峰。该反应可特异地检测-SH,从而定量检测L半胱氨酸含量。 分析MBP标签氨基酸序列可知,该标签蛋白中不含有半胱氨酸,故不影响原核表达的Permatin中半胱氨酸残基的数目。采用DTNB 方法测定样品的巯基数，其方法的主要步骤为： 1）样品先用8 M尿素37℃处理4 h； 2）游离巯基数的测定: 向未经尿素处理的1.0 ml样品(0.38 mg/ml)中加入2 ml Tris-Gly(0.086 M Tris, 0.09 M Gly, pH 8.0)，加入50μl DTNB(10 mM DTNB, 200 mM Tris-HCl, pH 8.0)，5 min后测定412 nm 处的吸光值; 3) 总的巯基数的测定: 向经尿素处理的0.5 ml样品中加入2 ml Tris-Gly，加入50μl β-巯基乙醇（β-ME），37℃温浴1h，加入10 ml 12%三氯乙酸（TCA），37℃温浴1 h，11000 rpm离心30 min，用5 ml 12% TCA重悬沉淀两次，以彻底去除β-ME，最后用2ml Tris-Gly重溶沉淀，加入50μl DTNB溶液，5 min后测定412 nm处的吸光值。 利用公式：μmol SH/g=73.53×A412×D/C进行计算。其中A412是412 nm处的吸光值, D为稀释倍数，C为蛋白浓度, 73.53是一个系数,由106/1.36 x 104得到。

二硫键检测方法

. 2.3.1.4 MBP-Permatin蛋白中半胱氨酸残基及二硫键数目的测定 L半胱氨酸可于5,5-二巯基双-2硝基甲苯(DTNB)发生硫醇-二硫化物交换反应,在碱性条件下反应显黄色,在412 nm处有强烈吸收峰。该反应可特异地检测-SH,从而定量检测L半胱氨酸含量。 分析MBP标签氨基酸序列可知,该标签蛋白中不含有半胱氨酸,故不影响原核表达的Permatin中半胱氨酸残基的数目。采用DTNB 方法测定样品的巯基数，其方法的主要步骤为： 1）样品先用8 M尿素37℃处理4 h； 2）游离巯基数的测定: 向未经尿素处理的1.0 ml样品(0.38 mg/ml)中加入2 ml Tris-Gly(0.086 M Tris, 0.09 M Gly, pH 8.0)，加入50μl DTNB(10 mM DTNB, 200 mM Tris-HCl, pH 8.0)，5 min后测定412 nm 处的吸光值; 3) 总的巯基数的测定: 向经尿素处理的0.5 ml样品中加入2 ml Tris-Gly，加入50μl β-巯基乙醇（β-ME），37℃温浴1h，加入10 ml 12%三氯乙酸（TCA），37℃温浴1 h，11000 rpm离心30 min，用5 ml 12% TCA重悬沉淀两次，以彻底去除β-ME，最后用2ml Tris-Gly重溶沉淀，加入50μl DTNB溶液，5 min后测定412 nm处的吸光值。 利用公式：μmol SH/g=73.53×A412×D/C进行计算。其中A412是412 nm处的吸光值, D为稀释倍数，C为蛋白浓度, 73.53是一个系数,由106/1.36 x 104得到。 如有侵权请联系告知删除，感谢你们的配合！ 精品

蛋白质中二硫键的定位及其质谱分析解析

第２０卷第６期２００８年６月 化 学进展 ＰＲＯＧＲＥＳＳＩＮＣＨＥＭＩＳＴＲＹ Ｖ０１．２０Ｎｏ．６Ｊｕｎｅ，２００８ 蛋白质中二硫键的定位及其质谱分析＊ 仇晓燕１’２ 崔 勐１ （１．中国科学院长春应用化学研究所长春质谱中心 刘志强１ 刘淑莹Ｈ‘ 长春１３００２２；２．中国科学院研究生院 北京１０００３９） 摘 要 二硫键是一种常见的蛋白质翻译后修饰，对稳定蛋白质的空间结构，保持及调节其生物活性有

着非常重要的作用。因此，确定二硫键在蛋白质中的位置是全面了解含二硫键蛋白化学结构的重要方面。在众多实验方法中，现代质谱技术因其操作简单、快速、灵敏等优点而成为分析二硫键的重要手段。本文介绍了目前主要的定位二硫键的方法以及质谱在二硫键定位分析中的应用与进展。 关键词 二硫键定位质谱串联质谱三羧乙基膦稳定同位素标记 中图分类号：０６５７．６３；Ｑ５１ 文献标识码：Ａ文章编号：１００５．２８１Ｘ（２００８）０６．０９７５—０９ ＰｒｏｔｅｉｎＤｉｓｕｌｆｉｄｅＢｏｎｄＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎａｎｄＩｔｓＡｎａｌｙｓｉｓｂｙＭａｓｓＳｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ Ｑｉｕ Ｘｉａｏｙａｎｌ＇２ ＣｕｉＭｅｎ９１Ｌｉｕ劢ｉｑｉａｎ９１ＬｉｕＳｈｕ乒ｎ９１‘‘ （１．ＣｈａｎｇｃｈｕｎＣｅｎｔｅｒｏｆＭａｓｓＳｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ，ＣｈａｎｇｃｈｕｎＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＡｐｐｌｉｅｄＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，ＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅｓ， Ｃｈａｎｇｃｈｕｎ１３００２２，Ｃｈｉｎａ；２．ＧｒａｄｕａｔｅＳｃｈｏｏｌｏｆｔｈｅＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００３９，Ｃｈｉｎａ） ＡｂｓｔｒａｃｔＤｉｓｕｌｆｉｄｅｂｏｎｄｓ

ELLMAN试剂法测定自由巯基和二硫键

E L L M A N试剂法测定自由巯基和二硫键标准化工作室编码[XX968T-XX89628-XJ668-XT689N]

E L L M A N试剂测定自由巯基 试验基于的原理： 5,5’-dithiobis-2-nitrobenzoicacid(DTNB)5,5-二硫基-双(2-硝基苯甲酸) 5,5-二硫基-双(2-硝基苯甲酸)(DTNB)在412nm没有吸收，与巯基反应后，生成2-硝基-5-巯基苯甲酸（TNB）[1]。TNB2-在412nm有很强的吸收，可以用于对肽段的自由巯基进行定量分析[2]。 DTNBTNB2- 根据文献记载，TNB的吸光系数在13.6*103M-cm-~14.25*103M-cm-之间[3,4]。吸光度测量的最灵敏范围在0.2-0.7之间。A=εbc，其中A为吸光度，ε是摩尔吸收光系数或消光系数，ε单位为升/（摩尔·厘米）[L/(mol·cm）]。以吸光度下限0.2来计算（吸光系数取14.15*103M-cm-），需要TNB的浓度为c=0.2/（14.15*103LM-cm-*1cm）=1.4*10-5mol/L(1.4*10-8mol/ml)，需要蛋白浓度为 1.4*10-5mol/L*18790g/mol=0.2631g/L=0.2631mg/ml. 我们的条件可以达到这个检测限度。 ELLMAN试剂法测定自由巯基主要的影响因素有： 1.EDTA的适量加入有助于TNB显色的稳定和成梯度线性关系[5]。 2.在不同缓冲液中，TNB的最大吸收波长略微不同，所以它们在412nm的 吸收也不 3.同，要根据选择的缓冲液来确定[5]。另外，TNB的分光光度法分析对SDS 很敏感[6]。 4.DTNB随着pH的升高，降解速度加快。在pH7.0，其降解速度为 0.02%/h，在 5.pH值8.0，其降解速度为0.2%/h,随着pH值得升高，降解速度加快，在 pH12时，15min之内会完全降解[7,8]。 6.摩尔吸收光系数在不同的温度下不同，随温度的升高而下降[4]. 试验方案 主要材料：

数据库操作指南nature示例 - 武汉大学图书馆

1 CALIS 中文平台数据库 CALIS （中国高等教育文献保障系统）中文平台是专为中国国内读者而设计的，检索平台为中文界面。CALIS 平台上目前包括以下三个数据库： ? Nature 全文在线：以英国1869年即开始出版的著名的《Nature 》周刊为主要内容。收录《Nature 》周刊 1997年6月以来的全文、《Nature 》出版集团出版的8种《Nature 》姊妹期刊（月刊）、7种评论期刊以及EMBO 报告（EMBO Reports ）和期刊（The EMBO Journal ）的全文内容。数据每周更新。 注：欲查询更多信息，可访问Nature 主站（https://www.sodocs.net/doc/1516271910.html,）。 ? IOP 电子期刊：英国皇家物理学会（Institute of Physics ，IOP ）出版的电子期刊是物理学及相关学科学者 和研究人员普遍使用的期刊，学术价值很高。数据库收录1997年以来(主站点上最早回溯至1874年)的36种电子期刊的全文。 注：欲查询更多信息，可访问IOP 主站（https://www.sodocs.net/doc/1516271910.html,/EJ/）。 ? RSC 全文电子期刊：英国皇家化学学会（Royal Society of Chemistry ，RSC ）出版的期刊和数据库一向是化 学领域的核心期刊和权威性的数据库。数据库收录1997年以来的34种电子期刊的全文及四种数据库（需在RSC 主站上使用）。 注：欲查询更多信息，可访问RSC 主站（https://www.sodocs.net/doc/1516271910.html,/Publishing ）。 Nature16种电子期刊 IOP 英国皇家物理学会电子期刊 RSC 英国皇家化学会电子期刊 选择方据库索词在 刊名中的位置 输入刊名关键词，可按刊名进行简单索，再选择想看的期刊按卷期浏览。 字顺刊名列表。点击刊名可按卷期浏览论文 武汉大学图书馆 https://www.sodocs.net/doc/1516271910.html, 读者指南 B0507-2 ◇数据库检索◇

巯基

巯基 巯的字和音均由氢硫二字拼合而成。带有巯基的化合物最常见的是半胱氨酸 HOOC-CH（NH2）-CH2-SH、谷胱甘肽G-SH以及含半胱氨酸残基的各种蛋白质。 1基本介绍 巯基又称氢硫基。是由一个硫原子和一个氢原子相连组成的一价原子团，结构式为：—SH 巯基是硫醇（R—SH）、硫酚（Ph—SH）、硫代羧酸（硫羟羧酸，或俗称硫赶羧酸）分子中的官能团。 2结构介绍 由氢和硫两种原子组成的一价原子团。也叫氢硫基。巯的字和音均由氢硫二字拼合而成。带有巯基的化合物最常见的是半胱氨酸HOOC-CH（NH2）-CH2-SH、谷胱甘肽G-SH 以及含半胱氨酸残基的各种蛋白质。两个半胱氨酸的两个巯基可以脱氢氧化为胱氨酸而在分子中形成-S-S-结构，-S-S-称为二硫键（二硫桥），二硫键是巯基的氧化形式，二硫键可加氢再还原为巯基。谷胱甘肽、巯基蛋白及巯基酶的活性基团是巯基，通过巯基参与反应。 3检测方法 1. RP-HPLC法测定巯基含量 采用色谱柱Kromasil-C18 (250×4.6mm, 5μm)，流动相A(0.1%TFA)和流动相B（甲醇）梯度洗脱：流动相B 40%~80%，0~10min，然后80% B保持5min，流速0.8mL/mi n，检测波长327nm，得到NTB标准曲线y=3.67059x+0.14123，回收率101.9%，RSD=l. 17%，从而建立了一种高灵敏度巯基检测方法。 2. 采用分子荧光光谱法作为反应条件，用反相高效液相色谱梯度洗脱法测定巯基 用OPA、丹酰氯、茚三酮与半胱氨酸反应，测其可见紫外吸收光谱及荧光光谱；在不同PH、温度、反应时间条件下，用OPA与半胱氨酸反应测其荧光度；分别吸收0.1mmol/ L半胱氨酸溶液0、20、40、60、80、100 μl，各加入10 μlH2O2,室温下反应30min，然后加热蒸干，残渣用200μl OPA衍生液，定容至5 ml，4 min时测其荧光光谱。取pH8. 4的硼酸缓冲溶液5μl，混合10次；加入OPA衍生液2μl，混合进样走HPLC。梯度条件：洗脱液B所占比例0min为0，17min线性增加至60%，17.5min线性增加至100%，20mi n洗脱结束。激发波长为340nm,荧光检测波长为450nm。 3.柱前衍生高效液相色谱-紫外检测法

ELLMAN试剂法测定自由巯基和二硫键

ELLMAN 试剂测定自由巯基 试验基于的原理： 5,5’-dithiobis-2-nitrobenzoic acid (DTNB) 5,5-二硫基-双(2-硝基苯甲酸) 5,5-二硫基-双(2-硝基苯甲酸)(DTNB)在412nm 没有吸收，与巯基反应后，生成2-硝基-5-巯基苯甲酸（TNB ）[1]。TNB 2-在412nm 有很强的吸收，可以用于对肽段的自由巯基进行定量分析[2]。 S S NO 2 NO 2 - OOC - OOC + SH S -S NO 2 NO 2 - OOC - OOC + S DTNB TNB 2- 根据文献记载，TNB 的吸光系数在13.6*103M -cm -~14.25*103M -cm -之间[3,4]。吸光度测量的最灵敏范围在0.2-0.7之间。A=εbc ，其中A 为吸光度，ε是摩尔吸收光系数或消光系数，ε单位为升/（摩尔·厘米）[L/(mol ·cm ）]。以吸光度下限0.2来计算（吸光系数取14.15*103M -cm -），需要TNB 的浓度为c=0.2/（14.15*103LM -cm -*1cm ）=1.4*10-5mol/L (1.4*10-8mol/ml)，需要蛋白浓度为1.4*10-5mol/L*18790g/mol=0.2631g/L=0.2631mg/ml. 我们的条件可以达到这个检测限度。 ELLMAN 试剂法测定自由巯基主要的影响因素有： 1. EDTA 的适量加入有助于TNB 显色的稳定和成梯度线性关系[5]。 2. 在不同缓冲液中，TNB 的最大吸收波长略微不同，所以它们在412nm 的吸收也不 同，要根据选择的缓冲液来确定[5]。另外，TNB 的分光光度法分析对SDS 很敏感[6]。 3. DTNB 随着pH 的升高，降解速度加快。在pH7.0，其降解速度为0.02%/h ，在

硫醇和硫酚

11.1.2 硫醇和硫酚 Thiol and Thiophenol 硫醇、硫酚的官能团是巯基（-SH ）。它们在结构上分别与醇和酚相似，但在性质上存在着显著的区别。 （1）物理性质。多数硫醇是挥发性液体，有毒有恶臭，空气中有10-11g/L 的乙硫醇时即能为人所感觉。因此硫醇是一种臭味剂，把它加入煤气中以便检查管道是否漏气。美洲臭鼬分泌物的主要成分为(E )-2-丁烯-1-硫醇。硫醇的臭味随着分子量的增加而逐渐减弱。硫酚与硫醇近似，气味也很难闻。 尽管硫醇和硫酚的相对分子质量比含碳数相同的醇或酚高，但沸点却比相应的醇或酚低，例如：乙硫醇的沸点为37o C ，乙醇的沸点则是78 o C ；苯硫酚的沸点168 o C ，苯酚的沸点则是181 o C 。这是因为硫的电负性比氧小，又由于外层电子距核较远，所以硫醇和硫酚的巯基之间相互作用弱，难形成氢键，同时也很难与水分子形成氢键，在水中的溶解度也低，乙醇能与水以任何比例混溶，而乙硫醇在100g 水中的溶解度仅为1.5g 。 （2）化学性质。 ① 酸性。因为硫原子的半径比氧的半径大，与氢的1s 轨道重叠程度较差，较易极化，所以巯基上的氢原子容易解离而显酸性。故硫醇、硫酚的酸性要比相应的醇、酚强得多。例如乙醇的p K a 为17，乙硫醇的p K a 为9.5；苯酚的p K a 为10，苯硫酚的p K a 为7.8。它们都能与碱作用生成相应的盐。 硫醇钠比醇钠在水中稳定，石油工业上就利用此性质，用碱水来洗去石油中的硫醇，以达到除硫的目的。 巯基的酸性也表现在硫醇易与重金属盐反应，生成不溶于水的硫醇 2RSH + HgO (RS)2Hg ↓ + H 2O 2CH 3CH 2SH + (CH 3COO)2Pb Pb(SCH 2CH 3)2↓ + 2CH 3COOH 所谓的重金属中毒，即是体内酶上的巯基与铅或汞等重金属离子发生了上述反应，导致酶失去活性而显示中毒症状。 临床上常用的一种汞、铅中毒的解毒剂通常为含巯基的有机物，如二巯基丙醇（俗称BAL ），它与汞离子发生下述反应： OH CH 2CH CH 2S S Hg 2CH CH 2S S HO SH +2CH 2CH CH 2Hg ArSH + NaHCO 3 RSNa + H 2O + CO 2 2RSH + NaOH RSNa + H 2O

国外数据库的使用方法介绍

一、美国 (1)Wiley InterScience(英文文献期刊) Wiley InterScience是John Wiely & Sons 公司创建的动态在线内容服务，1997年开始在网上开通。通过InterScience，Wiley公司以许可协议形式向用户提供在线访问全文内容的服务。Wiley InterScience收录了360多种科学、工程技术、医疗领域及相关专业期刊、30多种大型专业参考书、13种实验室手册的全文和500多个题目的Wiley学术图书的全文。其中被SCI 收录的核心期刊近200种。期刊具体学科划分为：Business, Finance & Management (商业、金融和管理)、Chemistry (化学)、Computer Science （计算机科学）、Earth Science （地球科学）、Education （教育学）、Engineering （工程学）、Law （法律）、Life and Medical Sciences （生命科学与医学）、Mathematics and Statistics （数学统计学）、Physics （物理）、Psychology （心理学）。 [转帖]如何用代理注册自己的wiley interscience密码 忘记了是在哪里看到的了，不过的确是好用，我已经注册了一个，介绍给大家，大家不妨也注册一个。wiley interscience原来的确验证方法已经失效，大家不妨用SD代理试试看，一般来说定了SD的确图书馆大多也定了wiley interscience。 注意:（1）必须进入代理后进行注册,否则没有相应的权限,注册后要击活,方法是:进入代理后（2）当你手上有INTERSCIENCE的密码时,不要忘记去看看过期了没有!inTERSCIENCE的PWD 用90天左右，必须续用！（据说不必须进入代理就右进行续用）方法是快到期之前点MYPROFILE--------点ActivateRoaming Access-----点LICENSE SOURCES、REFRESH ROAMING ACCESS即可。 =============================================== (2)美国IEEE (英文文献期刊) IEEE（Institute of Electrical & Electronics Engineers）是电子信息领域最著名的跨国性学术团体，其会员分布在世界150多个国家和地区。据IEEE统计，IEEE会员总数2001年比2000年增加3.1%，达到377342人，其中学生会员为65669人，增长12.6%。 随着人们的信息越来越多地来自Internet，IEEE需要为会员提供更加完善和全面的电子信息产品和服务。IEEE应成为IEEE会员获得信息的首选之地。IEEE必须识别正确的信息，并提供对它们的访问方法。实现这个目标的重要一步是通过IEEE Xplore与IEEE/IEE Electronic Library (IEL)连接。IEL包括了1988年以来IEEE和IEE的所有期刊杂志和会议录，以及IEEE的标准，可以通过题目、关键词和摘要进行查阅。 IEEE密码 =============================================== (3)美国EBSCO(英文文献期刊) https://www.sodocs.net/doc/1516271910.html, 登陆-----点MYPROFILE--------点ActivateRoaming Access即可。 数据库简介： EBSCO公司从1986年开始出版电子出版物，共收集了4000多种索引和文摘型期刊和2000多种全文电子期刊。该公司含有Business Source Premier （商业资源电子文献库）、Academic Search Elite（学术期刊全文数据库）等多个数据库。500XK6 Business Source Premier收录了三千多种索引、文摘型期刊和报纸，其中近三千种全文

二硫键与蛋白质的结构

二硫键与蛋白质的结构 徐国恒（北京大学医学部生理与病理生理系北京100191） 摘要二硫键是肽链上2个半胱氨酸残基的巯基基团发生氧化反应形成的共价键，具有链内二硫键和链间二硫键2种形式。与氨基酸的氨基氮原子之间形成的稳定共价键不同，二硫键容易被还原而断裂，断裂后可再次氧化重新形成二硫键，因而是可以动态变化的化学键。二硫键是参与一级结构也是形成高级结构的重要化学键，对蛋白质折叠和高级结构的形成与维持十分重要。讨论了二硫键的形成和特征及其与蛋白质结构和功能之间的关系，并讨论了生物学教学中关于二硫键的一些疑问。 关键词蛋白质二硫键高级结构功能 二硫键（disulifide bond）即S—S键，是2个巯基被氧化而形成的—S—S—形式的硫原子间的共价键。肽链上的2个半胱氨酸（cysteine，简称Cys）残基的巯基基团，可发生氧化反应形成二硫键；伴随二硫键的形成，半胱氨酸残基转变为胱氨酸残基。二硫键对维持蛋白质的分子结构具有十分重要的作用。 1 链内二硫键和链间二硫键 同一条肽链上的2个半胱氨酸残基之间形成的二硫键，称为链内二硫键，例如胰岛素A链内有1个二硫键。不同的肽链上的2个半胱氨酸之间可形成链间二硫键，例如胰岛素蛋白分子由A、B 2条肽链组成，除了A链内部有1个链内二硫键外。A链和B 链之间也通过2个二硫键连接在一起（图1）。另外，免疫球蛋白lgG的轻链和重链也是通过链间二硫键结合的。 图 1 胰岛素蛋白分子的链内二硫键和链间二硫键

Cys是半胱氨酸的英文缩写 2 二硫键的作用 二硫键对蛋白质的正确折叠和高级结构的形成与维持十分重要。二硫键的形成迫使同一或不同肽链的不同区域的氨基酸残基向一起靠拢集合，由此肽链迅速折叠并形成稳定的空间拓扑结构，该区域的氨基酸残基数量是高度密集的；同时疏水氨基酸残基围绕着二硫键，可形成局部疏水中心，拒绝水分子进入肽的内部破坏氢键。利于形成稳定的高级结构区域。由于二硫键可以桥接肽链的不同区域，有时候也被称为二硫桥（disulifide bridge）。 3 二硫键是一个动态变化的化学键 二硫键由2个巯基通过氧化反应生成。二硫键虽然是共价键，但并不十分牢靠。二硫键很容易被还原而断裂，断裂后可以再次氧化重新形成二硫键。因而，二硫键是可以动态变化的，只具有相对的稳定性，这一特征与氨基酸氮原子间形成的十分牢靠的共价键不同。许多蛋白质需要二硫键维持其特定的高级结构和生物学功能。当二硫键被断开还原为巯基基团时，蛋白质结构必然发生改变，可能完全或部分失去原有的生物功能。但有些蛋白质可能因为二硫键的还原，发生构象变化导致生物活性反而增强或出现新的功能。无论是二硫键断裂或是二硫键重新形成，均可调节蛋白质执行某种特定的功能。 4 二硫键的断裂再键合调节蛋白质功能 在细胞内一些蛋白质需要二硫键维持结构和功能，但另一些蛋白的活性却有赖于半胱氨酸残基的游离巯基的存在（即二硫键被还原断开的状态）。那么，蛋白质如何实现二硫键的氧化还原即键合与断裂呢？细胞中普遍存在一种三肽即谷胱甘肽，含谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸残基，半胱氨酸上的巯基为其活性基团。谷胱甘肽有还原型和氧化型两种形式，在酶的作用下两型之间可以相互转化。在细胞内，作为巯基供体的还原型谷胱甘肽占多数，有利于维护蛋白质的巯基处于还原状态，不形成二硫键，以维护蛋白质的特定功能。因而还原型谷胱甘肽能保护酶分子上的巯基，有重要的生理功用。有些毒物如芥子气、重金属盐等，能与酶分子的巯基结合而抑制酶活性，从而发挥其毒性作用。二巯基丙醇可以使结合的巯基恢复原来状态，所以具有解毒作用。

westlaw使用指南

Westlaw International 法律在线数据库检索指南 1．主界面介绍 进入Westlaw之后的界面可以分为三大部分，页面上部为导航栏，页面左侧为快速检索区，页面右侧为检索输入区。 1.1 上方导航栏 上方导航栏共有六个标签，分别是：World Journals（期刊）、Federal（美国法律）、WLI General Subscription（所有内容）、Westlaw UK（英国法律）、Westlaw Australia（澳大利亚法律）、LawSource（加拿大法律）。 1.2 快速检索区 快速检索区有两个检索项，即Find by citation和Search these databases。 如果知道文献的引称信息（citation），比如案例文献编号、法律条例编号等，可直接通过Find by citation查询。不同类型的文献，其引称格式也不同，引称一般以该文献的出版物名称、卷、页码或年份、卷、出版物名称、页码的格式，如294 F SUPP 2D 132 、1999 1 AC 197。对各种类型文献的citation格式，系统提供查询，另外系统还可限定文献的出版国。上述功能也可通过首页工具栏的“FIND”实现。 如果您需要查询的数据库没有在当前的标签页列出，可通过Search these databases，在订购的所有数据库中查询，在检索结果列表中选择所需要的数据库进行检索。如果选择的是相同类型的多个数据库，检索界面将提供和该类文献特点有关的多个检索字段，比如选择案例库，提供的检索字段有代理人或律师、法院、法官、司法解释、标题等，使用户能实现更精确的检索。如果选择不同类型的多个数据库，因文献类型不同，没有共有字段，所以检索范围只能为全文检索，不能限定检索字段。 1.3检索输入区 系统提供两种检索方式，即“字词及连接符” （Terms and Connectors）和“自然语言”（Natural Language）。使用“字词及连接符”进行检索时，可同时限定文献的出版日期。字词之间的连接符包括逻辑算符和位置算符，逻辑算符有AND、OR、BUT NOT，位置算符可限定检索词之间的位置关系，如A /p B，表示检索词A和B须在同一个段落中，A /s B，表示检索词A和B须在同一个句子中。“Add Connectors or Expanders”的“Help”，可显示所有算符的代码及含义，方便用户选择使用。 使用“自然语言”检索时，只须用简单的英语描述您的问题，系统会分析该描述，忽略无关字词，选取检索词并作出适当的检索。如输入“must a manufacturer disclose the side effects of a drug”。 检索输入栏下是Westlaw预设的数据库列表，最多可选择在10个数据库同时检索。 2．选择数据库 数据库名称（Database Name）及其数据库识别号（Database Identifier）不一定能充分显示给用户其收录的文献类型和涵盖范围，用户可以点击数据库旁的按钮查看该数据库的内容及涵盖范围。 2.1 快速选择数据库

二硫键的定位修饰

蛋白质药物的二硫键定点修饰摘要：蛋白质中的二硫键在蛋白质分子的立体结构形成上起着重要作用，通过合适的策略可用于定点修饰。本文简要介绍了利用蛋白质原生二硫键对其进行定点修饰的策略和实施方法，并讨论了该方法的有效性。 前言 蛋白质和多肽药物(以下简称蛋白质药物)具有作用位点专一、疗效明确等优点，用于各种疾病治疗的蛋白质药物研制及应用已经成为生物医药产业发展的热点。蛋白质药物的聚乙二醇修饰，是将活化的聚乙二醇通过化学方法偶联到蛋白、多肽、小分子有机药物和脂质体上，可以有效地解决蛋白质药物所存在的半衰期短、酶稳定性差、具有免疫原性等问题[1, 2]。 自1977年PEG用于修饰牛血清白蛋白以来，已有许多不同种类的活化PEGs 被成功地开发并用于蛋白质修饰。PEG修饰技术也经历了两个发展阶段,即以传统的随机修饰为特点的第一代PEG修饰技术和以定点修饰为特点的第二代PEG 修饰技术。相对于随机修饰，定点修饰能够针对特定基团或专一位点进行修饰，有利于保持蛋白质药物的活性，产物易于表征，产品质量更容易控制，已成为PEG修饰蛋白质药物的研究热点[3]。 为了达到这一目标，研究者们设计了不同的合成策略并合成了相应的PEG 修饰剂，不断探索蛋白质药物定点修饰的方法[4,5]。其中，对于含有自由巯基的半胱氨酸的残基的蛋白质药物，可以利用巯基的高反应活性，选取能够特异性与巯基偶联的PEG修饰剂，能够高效地对蛋白质进行定点修饰。然而，蛋白质分子中的半胱氨酸残基数量较少且很少以游离形式存在，虽然可以通过基因工程准确将半胱氨酸引入到蛋白质药物预先设计的位置，但这在技术上和成本上均有较高的要求。另外，在蛋白质的纯化过程，过多的自由巯基将导致二硫键形成，蛋白质空间结构改变，以及蛋白质的不可逆聚集。 虽然利用自由巯基定点修饰蛋白质的方法困难重重，研究者发现大多数蛋白质都具有的二硫键更适于用来定点修饰，可以通过化学还原，使二硫键释放出两个巯基，从而进行定点修饰。但在一些蛋白质分子中，二硫键在稳定其二级和三级结构上起着关键的作用，对二硫键修饰极有可能导致其活性丧失。因此，开发