沙芥叶总黄酮的体外抗氧化研究

竹叶黄酮的抗氧化活性研究

食 品 科 技 FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY 2011年 第36卷 第7期 提取物与应用 · 201 · 罗宇倩1，郭 辉1，胡林福2，施林巍2，钱俊青1* (1.浙江工业大学药学院，杭州 310014； 2.浙江竹类资源生物技术研究开发中心，安吉 313300) 摘要：为了有效利用竹叶中黄酮类物质，研究采用不同的方法(DPPH法、邻苯三酚自氧化法(325 nm)和 Fenton法)评价了竹叶黄酮的抗氧化活性，以Vc和茶多酚为阳性对照品。结果表明：竹叶黄酮清除超氧负离子自由基和DPPH自由基的能力比茶多酚强，其EC 50相应为11.7 μg/mL和18.3 μg/mL，分别是Vc的约1.2倍和3.4倍；竹叶黄酮在清除羟自由基效果与茶多酚相当，EC 50 为0.58 mg/mL，比Vc效果好。因此竹叶黄酮具有很强的抗氧化能力，值得深入研究其生理功能及开发利用价值。 关键词：竹叶；黄酮；抗氧化性 中图分类号：TS 202.3 文献标志码：A 文章编号：1005-9989(2011)07-0201-03 Antioxidant activity of ? avonoids from bamboo leaves LUO Yu-qian 1, GUO Hui 1, HU Lin-fu 2, SHI Lin-wei 2, QIAN Jun-qin 1* (1.College of Pharmacognosy of Zhejiang University of Technology Hangzhou 310014; 2.Biological Technology R&D Center of Bamboo Resources, Anji 313300) Abstract: The antioxidant activity of total flavonoids from bamboo leaves was determined by various assays, including DPPH radical-scavenging, self-oxidation of 1, 2, 3-phentriolassay method(325 nm) and Fenton reactions. The results showed that ? avonoids from bamboo leaves have very strong scavenging capabilities for superoxide anion and DPPH free radical, their EC 50 values are 11.7 μg/mL and 18.3 μg/mL respectively, and are approximately 1.2 times and 3.4 times as much as that of vitamin C respectively. The scavenging capability of bamboo leaves ? avonoids for hydroxyl radical is stronger than that of vitamin C, weaker than tea polyphenol, and its EC 50 is 0.58 mg/mL.Key words: bamboo leaves; ? avonoids; antioxidation 收稿日期：2010-11-07 ﹡通讯作者基金项目：浙江省制药工程重中之重开发基金项目。 作者简介：罗宇倩(1986—)，女，湖南株洲人，硕士研究生，研究方向为天然药物的提取与纯化以及药理研究。 淡竹叶和淡竹沥是中医一味传统的清热解毒药，早已为我国人们所认识。竹叶中黄酮类物质是主要活性物质，含量平均在2%，主要为黄酮糖苷[1]，分别是荭草苷、异荭草苷、牡荆苷和异牡荆苷，以及木犀草素苷、洋芹苷和黄酮苷类。竹叶黄酮具有明显的抗脂质过氧化[2-3]、清除羟自 由基和调节血脂功能及抗过敏、抗炎、抗菌、抗突变、抗肿瘤、抗溃疡、抗病毒、保护心血管疾病[4-5]及保肝等生理活性，是一类极具开发前景的天然有机抗氧化剂[1,6-8]。 我国竹叶资源丰富，因此充分开发利用竹叶中的黄酮类成分具有十分重要的现实经济意义。 竹叶黄酮的抗氧化活性研究

抗氧化实验方法

1还原力的测定 样品2ml加到2ml 0.2mol/L磷酸盐缓冲液（pH6.6）和2ml 1%的铁氰化钾溶液的混合液中。混合物在50℃保温20min，然后在反应混合物中加入2ml 10%的TCA，混合后以3000rpm 离心10min，取上清液2ml与2ml蒸馏水以及0.4ml 0.1%氯化铁在反应试管中反应，10min 后测定其在700nm处的吸光值。吸光值越大表明还原力越强。 注意：建议蛋白浓度以5mg/ml左右变化，例如2.5，5之类变化。但具体情况应根据吸光值大小而定。 0.2mol/L pH6.6的磷酸盐缓冲液的配制见附表。 铁氰化钾溶液应盛装在棕色瓶中。 比色皿的用法：可见光(>400nm)用玻璃比色皿（即没有标字母或者标G的比色皿），紫外光时（<400nm）用石英比色皿（即标Q字比色皿）。 2 DPPH自由基清除活性的测定 将1.5ml样品液添加到1.5ml含0.1 mmol/L DPPH的95％乙醇中，混合，振荡，在 室温下放置30min，然后在波长517nm处检测（Ai）。清除率计算公式为： 空白为1.5 ml 95%的乙醇加入1.5 ml蒸馏水调零。 式中：Ac——对照为1.5 ml DPPH溶液加上1.5 ml蒸馏水在517nm处的吸光值；Aj——1.5ml样品液加上1.5 ml 95%的乙醇在517nm处的吸光值； Ai——1.5ml样品液加上1.5 ml DPPH溶液在517nm处的吸光值； 注意：建议酶解液蛋白浓度以2mg/ml 左右变化，如0.5,1,2,2.5之类变化，但是具体情况应视清除率而定，最终结果应有清除率大于50%和小于50%的情况。 DPPH样品有毒，需戴口罩和手套进行操作。而且DPPH试剂很昂贵，用时注意节约。0.1m mol/L DPPH 乙醇溶液的配制：准确称取0.00395gDPPH，用95%的乙醇溶液溶解并定容到100ml。 3 在卵黄磷脂体系中抗氧化能力的测定 以卵黄脂蛋白为底物的LPO模型反应体系包括:体积比为1:25稀释的卵黄悬液(卵黄用等体积的pH7.45，0.lmol/LPBS配成，使用前磁力搅拌10min)0.2 mL、一定浓度的样品溶液0.lmL、25m moll/LFeSO4溶液0.2mL，用PBS缓冲液补足至2.0mL。对照管除不加样液外其他试剂同前。将上述2种试管同时置37℃恒温水浴锅中保温培养1h。取出后，加入20%TCA0.5mL，静置10 min后，与对照管于3500r/min离心10min，取2.0mL上清液，分别加入质量分数为0.8%硫代巴比妥酸(TBA)溶液1.0mL，加塞于100℃水浴15min，取出冷却。空白管以2.0mLPBS溶液代替，在532nm下测定吸光度，样品对卵黄脂蛋白LPO的抑制率表示为: SA(%)=(Ac一AS)/A C×100 式中:Ac一不加样品的吸光度 As一加入样品的吸光度 注意：卵黄溶液不用时应放置冰箱保存。 酶解液蛋白浓度以5mg/ml左右调整，但具体应视清除率大小而定，对酶解液蛋白浓度

胚胎干细胞的体外诱导分化模型

胚胎干细胞的体外诱导分化模型马宗源　李祺福(厦门大学生命科学学院福建厦门361005) 胚胎干细胞是具有全能性及无限制的自我更新与分化能力的一类特殊的细胞群体,它能通过祖细胞为中介,分化为各种类型的体细胞,可重演体内干细胞的分化过程。自80年代从小鼠囊胚的内细胞团分离到胚胎干细胞并建系到现在已建立了神经细胞、肌肉细胞、上皮细胞、造血细胞等体外分化体系。将胚胎干细胞体外分化成为可利用的分化模型,无论从组织结构、细胞及分子水平都体现了体内分化过程的体外重演,再加上胚胎干细胞系具有体系简单,影响因子少,可控制,便于研究等特点,因此可用于研究早期胚胎发育和细胞分化调控;可成为器官移植和修复器官的细胞来源;还可用于新型药物筛选。 1　胚胎干细胞的生物学特性 胚胎干细胞具有与早期胚胎相似的结构特征,具有较高的核质比和整倍体核型。体外培养的细胞紧密堆积,呈克隆状生长,具有发育分化的多潜能性和无限制的自我更新能力,碱性磷酸酶染色呈阳性,具有高的端粒酶活性,早期胚胎细胞均表达胚胎阶段特异性抗原SSEA-1、SSEA-3、SSEA-4、T RA-1-81、T R A-1-60等;表达种系转录因子OCT-4,并且可将O CT-4基因作为细胞多能性的一个标志;白介素6型细胞因子家族参与维持调节胚胎干细胞未分化状态。 胚胎干细胞建系的过程中要解决的问题在于体外不断增殖的过程中保持未分化的状态,但是细胞如何维持其未分化状态的机理并不清楚。研究发现主要是通过膜上的特异受体蛋白gp130来发挥作用,细胞因子受体蛋白g p130可激活JA N U S、酪氨酸激酶,JA K-ST A T、M EK/M A P K等信号途径,而JAK/ST A T3和M EK/ ERK信号途径则处于相对平衡的状态。另外,一些未知的膜结合分子也参与胚胎干细胞的增殖与分化。分离纯化及鉴定调节细胞的自我更新及分化的未知分子已成为研究的热点。 2　胚胎干细胞为基础的分化模型 胚胎干细胞要维持其未分化的状态,需要在胚胎饲养层中加入分化抑制因子。一旦改变了维持胚胎干细胞未分化状态的条件,胚胎干细胞首先形成胚胎小体,胚胎小体有外中内三胚层,继续分化可形成多种类型的细胞。在体外分化培养时,可自发形成有节律性跳动的心肌细胞,同时还形成骨骼肌、神经细胞、上皮细胞等。由于体外胚胎细胞可重演体内胚胎细胞的发育过程,并且基因的表达时相与体内的胚胎发育过程是相似的,在这一过程中加入外源的诱导分化因子并与相关的调控基因结合,可使胚胎干细胞分化为各种类型的细胞。现在已初步建立了神经细胞、肌肉细胞、上皮细胞和造血细胞等体外分化模型。 2.1　神经细胞　体外培养胚胎干细胞可模拟从未定型细胞向功能性神经元转化的过程,并且其基因的表达时相与体内的胚胎发育过程相似。在分化的早期表达N FL、N F M基因,后期则表达N eur ocan基因。维甲酸及神经生长因子可诱导胚胎干细胞定向分化为神经细胞,是常用的诱导分化物,它能上调神经元特异基因的表达,同时下调中胚层基因的表达。将神经元特异的SOX2基因转进胚胎干细胞,再经维甲酸诱导,可表达90%以上的具有神经元标志的神经细胞。可能是外源基因和维甲酸同时拮抗分化抑制因子的作用,阻碍细胞向其他的方向分化,迫使其向神经元的方向分化。维甲酸能诱导胚胎干细胞分化为C-氨基丁酸能和多巴胺能神经元,而维甲酸分别结合无血清培养基和含胎牛血清的培养基培养胚胎干细胞后发现,采用无血清培养时,几乎检测不到分化的多巴胺能神经元的存在;但在有血清培养时,却能检测到大量的多巴胺神经元。这暗示血清中的某些未知的因子和维甲酸共同起到定向诱导分化 化为特定组织细胞,将这些细胞回输体内,从而达到长期治疗的目的。干细胞的医学应用还包括体外克隆人体器官,然而这比体内移植干细胞要复杂的多。相信随着研究的不断深入,来自人体干细胞的器官应用于临床治疗已为期不远。干细胞研究与应用不仅在疾病治疗方面有着极其诱人的前景,而且将对克隆动物,转基因动物生产,发育生物学,新药物的开发与药效、毒性评估等领域产生极其重要的影响。 参考文献 　1　Th omson J A,Itsk ovitz-Eldor J os eph,Shapiro S S,et al. Em bryonic s tem cell lin es d erived from human b las tocysts.S cience,1998,282:1145—1147. 　2　Sh amb lott M J,Axelman J,W ang S,et al.Derivation of Plurip otent stem cells from cultured human primordial germ cell.Proc Natl Acad S ci U SA,1998,95:13726—13731. 　3　Jack son K A,M i T,Goodell M A.Hematopoietic potential of s tem cells isolated from murie s keletal mus cle.Proc Natl Acad Sci USA,1999,96:14482— 14486. 　4　裴雪涛.干细胞研究现状与展望.高技术通讯,2001, (6):93—95. (BH)

八种天然黄酮类化合物的抗氧化构效关系

文章编号:1000-5641(2002)01-0090-06 八种天然黄酮类化合物的抗氧化构效关系 陈季武,　朱振勤,　杭　凯,　杨晓宁 (华东师范大学生命科学学院,上海　200062) 摘要:采用H 2O 2-CTMAB -Luminol 化学发光体系和Fe 2+诱发脂蛋白PU FA 过氧化比色体系,研究了八种高纯度的天然黄酮类化合物清除H 2O 2、LO ?和LOO ?的构效关系。结果表明,这八种天然黄酮类化合物都能有效地清除H 2O 2、LO ?和LOO ?。根据其清除作用和化学结构分析,得出如下结论:B 环上羟基是清除H 2O 2、LO ?和LOO ?的主要活性基团,A 环上羟基是清除H 2O 2、LO ?和LOO ?的重要基团,并且B 环上羟基相邻清除作用就大大增强;糖甙对清除 H 2O 2、LO ?和LOO ?也有贡献。 关键词:黄酮类化合物;　抗氧化;　构效关系中图分类号:Q505 文献标识码:A 黄酮类化合物是泛指两个芳环(A 与B )通过三碳链相互连接构成的一系列化合物。大多数以植物为原料的中药都含有黄酮类化合物。现已发现黄酮类化合物具有众多生理功能 和药用价值,如保护心脑血管、抗菌消炎、抗辐射和抗肿瘤等[[1-4],其中引人注目的是其抗氧化作用,使该研究成为热门课题之一。由于极高纯度的黄酮类化合物来源及技术等限制,对黄酮类化合物抗氧化的研究主要集中于效用上,对其构效关系进行研究甚少。鉴于黄酮类化合物在药学、保健品、食品和化妆品等方面已有的和潜在的应用前景,有必要对其构效关系进行研究。为此,采用H 2O 2-CTMAB -Luminol 发光体系和Fe 2+诱发的脂蛋白PU 2FA 过氧化的比色体系,研究了八种纯度高达97%以上的天然黄酮类化合物清除H 2O 2、LO ? 和LOO ?的构效关系。 1　材料与方法 1.1材料1.1.1　试剂 鲁米诺系Sigma 产品,十六烷基三甲基溴化铵(CTMAB )系B IB 进口分装,其余试剂均系国产分析纯。1.1.2　药物 槲皮素系Fluka 产品,纯度为99%;金丝桃甙、泽漆新甙、芸香甙、山奈素和橙皮甙均由中科院上海药物研究所朱大元教授惠赠,纯度达98%以上;茶多酚购自浙江农业大学茶叶系;黄芩甙由上海中药一厂提供,纯度高达97%以上。 　收稿日期:2001-02 　作者简介:(1956-),男,副教授. 　第1期2002年3月 华东师范大学学报(自然科学版) Journal of East China Normal University (Natural Science ) No.1　Mar.2002

黄酮类化合物生物活性的研究进展_王慧

黄酮类化合物生物活性的研究进展 王 慧 （山东博士伦福瑞达制药有限公司，山东 济南 250101） 摘 要：黄酮类化合物是广泛存在于自然界的一类多酚化合物，有许多潜在的药用价值。现就黄酮类化合物抗肿瘤、抗心血管疾病、抗氧化抗衰老、抗菌抗病毒、免疫调节等作用的研究进展作一综述，以期为开发利用该类药物提供参考。关键词：黄酮类化合物；生物活性；综述文献 中图分类号：R282.71 文献标识码：A 文章编号：1672-979X （2010）09-0347-04 收稿日期：2010-05-31 作者简介: 王慧（1974-），女，山东临沭人，主管药师，从事质量控制工作 E-mail : wanghui0602@https://www.sodocs.net/doc/158218695.html, Progress in Bioactivity of Flavonoids WANG Hui (Shandong Bausch & Lomb Freda Phar. Co., Ltd., Jinan 250101, China ) Abstract: Flavonoids are polyphenols widely found in nature and they have many potential medicinal values. This paper reviews the progress in anti-tumor, anti-cardiovascular disease, anti-oxidation and anti-aging, antibacterial and antivirus, immunological regulation of flavonoids, which can provide the references for the development and utilization of flavonoids. Key Words: flavonoids; bioactivity; review 黄酮类化合物是一类低分子植物成分，具有C6-C3-C6 基本构型，为植物体多酚类代谢物。主要分为黄酮及黄酮醇类、二氢黄酮及二氢黄酮醇类、黄烷醇类、异黄酮及二氢异黄酮类、双黄酮类，以及查尔酮、花色苷等[1]。黄酮类化合物独特的化学结构使其对哺乳动物和其它类型的细胞有重要的生物活性。黄酮类化合物有高度的化学反应性，例如清除生物体内的自由基；又有抑制酶活性、抗肿瘤、抗菌、抗病毒、抗炎症、抗过敏、抗衰老、抗心血管疾病糖尿病并发症等药理作用，且无毒无害。黄酮类化合物还是茶及黄芩、银杏、沙棘等众多中草药的活性成分。因此受到广泛关注，研究进展很快。1 黄酮类化合物的理化性质 黄酮类化合物多为晶体且有颜色，少数如黄酮苷类为无定形粉末，除二氢黄酮、二氢黄酮醇、黄烷及黄烷醇有旋光性外，余者则无。黄酮类化合物的溶解度因结构及存在状态（苷或苷元、单糖苷、双糖苷或三糖苷）不同而有差异，一般游离态苷元难溶于水，易溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯、乙醚等有机溶剂。其中，黄酮、黄酮醇、查儿酮等平面型分子因堆砌较紧密，分子间引力较大，故更难溶于水；而二氢黄酮及二氢黄酮醇等系非平面型分子，排列不紧密，分子间引力较小，有利于水分子进入，水溶解度稍大[2]。 2 黄酮类化合物的生物活性2.1 抗肿瘤活性 黄酮类对多种肿瘤细胞有明显的抑制作用，主要表现在抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡、干预信号转导、影响细胞 [11] Denyer S P, Baird R M. Guide to microbiological control in pharmaceuticals and medical devices[M].2nd ed. Boca Raton: CRC Press, 2006: 325-326. [12] Mao k, Masafumi U, Takeshi K, et al Evaluation of acute corneal barrier change induced by topically applied preservatives using corneal transepithelial electric resistance in vivo [J].Cornea , 2010, 29(1): 80-85. [13] Noecker R. Effects of common ophthalmic preservatives on ocular health[J]. Adv Ther , 2001, 18: 205-215. [14] Kostenbauder H B. Physical factors influencing the activity of antimicrobial agents// Block S S. Disinfection, Sterilization and Preservation[M]. 3rd ed. PhiladelpHia: Lea and Febiger, 1983: 811-828. [15] Berry H, Michaels I. The evaluation of the bactericidal activity of ethylene glycol and some of its monoalkyl ethers against Bacterium coli [J]. J Pharm Pharmacol , 1950, 2: 243-249.

体外抗氧化实验方案

体外抗氧化实验方案 一、DPPH自由基清除法 [原理] DPPH(1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl radical)即1,1-二苯基-2-苦基肼基自由基。分子中，由于存在多个吸电子的-NO2和苯环的大π键，所以，氮自由基能稳定存在。 ON2 NONN2 NO2 当DPPH自由基被清除，其最大吸收波长519nm处的吸光度A值随之减小。DPPH这种稳定的自由基为清除自由基活性的检测提供了一个理想而又简单的药理模型。 [实验步骤] 1.1 DPPH测试液的配制 6.25,10ˉ5M 取DPPH 0.0246g溶于约100mL溶剂甲醇中，超声5min，充分振摇，务使上下各部分均匀。取1mL 该DPPH溶液，在519nm处测A值，使A,1.2-1.3之间最佳。该DPPH溶液最好避光保存，3.5小时内用完。 1.2 样品液的配制 Vc溶液 (0.25mg/ml) 称取Vc 0.01125g 溶于45mL乙醇溶液 1.3 预试 取DPPH溶液2mL，往其中加少量样品液，加样时，先少后多渐加，边加边混合，并观察溶液的褪色m情况，当溶液颜色基本褪去时，记下样品的加样量。 此加样量即为样品的最大用量，在此最大用量的基础上，往前设置5个用量，使之成等差数列。

【如】在预试过程中，发现加样到200μL时，DPPH溶液颜色基本褪去，则200μL为该样品液的最大用量。其用量梯度宜设为40、80、 120 、160、 200μL。浓度梯度mg/ml为 0.0025、0.0050、0.0100、0.0200、0.0400 μg/ml 2.5、5、 10、20、40 1.4 测量 A0值的测量:取DPPH溶液2 mL加入到小试管(或玻璃瓶)中，加95甲醇1mL，充分混合，测A值(517nm)，此A值为A(A0多在0.7-0.9之间)。 0 A值的测量: 取DPPH溶液2mL加入到小试管(或玻璃瓶)中，加样品液xμL (x是根据1.3 预试结果确定样品液的用量)，再加(1000 -x)μL 甲醇，混合，静置30分钟后，测A值(517nm)。加样表如下: 表1 加样表 样品液甲醇总体积 DPPH测试液 30μL 970μL 2 mL 3mL 60μL 940μL 2 mL 3mL 120μL 880μL 2 mL 3mL 240μL 760μL 2 mL 3mL 480μL520μL 2 mL 3mL 1.5 正式测量 方法大致与1.4相同，只不过，每测一个用量需要测三个平行数据。而且在每测一个用量的三个平行数据后，都要重测一次A. 0 [实验结果] 清除率(抑制率)的计算公式:

胚胎干细胞体外诱导分化综述

胚胎干细胞体外诱导分化综述 摘要：由于胚胎干细胞具有自我更新、高度增值和多向分化的潜能，因此，自20世纪90年代开始，对胚胎干细胞的研究成为生物学领域和医药工程领域研究的一个焦点。本文从胚胎干细胞的分离、体外诱导胚胎干细胞的原理和定向分化的机制、胚胎干细胞体外诱导的方法、定向分化的细胞、应用前景和研究存在的问题对胚胎干细胞进行综述。 关键词：胚胎干细胞；体外培养；诱导分化；应用 干细胞是一种具有多分化潜能和自我更新功能的早期未分化细胞。在特定条件下，它可以 分化成不同的功能细胞，形成多种组织和器官，它包括胚胎干细胞和成体干细胞。前者指早期胚胎的多能干细胞，后者是存在于胎儿和成体不同的组织内的多潜能干细胞这些细胞具有自我复制能力，并产生不同种类的具有特定表型和功能的成熟细胞的能力，能够维持机体功能的稳定，发挥生理性的细胞更新和修复组织损伤作用[4,9,10]。 胚胎干细胞（embryonic stem cell,ESC)是从着床前胚胎内内细胞团(inner cell mass,ICM)或原始生殖细胞经体外分化抑制培养分离的一种全能性细胞[1]。它能在体外长期不断自我更新,并保持多向分化潜能,可以分化为内、中、外三个胚层的几乎所有类型细胞。自1981年Evans和Kauffman[2,8]用不同的方法首次成功分离得到小鼠胚胎干细胞以来,小鼠胚胎干细胞成为近20年来人们用来研究发育分化、基因表达调控、基因治疗等最理想的模型，并且有大量研究表明小鼠胚胎干细胞可以在体外被诱导分化为绝大多数类型的成体细胞.1998年Thomson等首次成功分离并建立人胚胎干细胞系。自此，人胚胎干细胞不但提供了一个研究人类自身发育分化的良好机会,而且如果人胚胎干细胞能像小鼠胚胎干细胞一样可以在体外诱导形成各种成体细胞,那么利用这些诱导分化形成的成熟细胞将有可能进行细胞和组织替代治疗, 包括糖尿病、帕金森病、早老性痴呆、心血管疾病和肿瘤等多种目前临床上难以治愈的疾病。 1 胚胎干细胞的分离 自Thomson成功分离并建立人胚胎干细胞系后，多年以来，人们研究出很多胚胎干细胞的 分离方法，在这里主要介绍三种： 1.1 分离自胚胎内细胞团 内细胞团又称胚细胞（embryoblast）,是一团于哺乳动物初期胚胎中的一个细胞团块。从早期胚胎内细胞团（inner cell mass,ICM）分离是获得胚胎干细胞的主要途径。由于不同动物的胚胎发育存在差异，因此应注意取材时间。可通过免疫外科手术法、机械剥离法、组织培 养法等方法除去胚胎滋养层细胞获得囊胚内细胞团（ICM）细胞进行体外分化抑制培养。 1.2分离自原始生殖细胞

楮实提取物体外抗氧化活性的研究

楮实提取物体外抗氧化活性的研究（作者： _________ 单位：___________ 邮编：___________ ） 作者：吴兰芳张振东景永帅杨娟 【摘要】目的探讨楮实提取物的体外抗氧化活性。方法先用80% 乙醇，然后用蒸馏水对楮实进行提取。其中醇提取物依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，水提部分经醇沉、干燥后得到楮实粗多糖。运用羟基（?OH）自由基体系、二苯代苦味基肼（DPPH ）?自由基体系和对 Fe3+的还原能力实验，比较楮实各提取物的抗氧化活性。结果楮实提取物对?OH自由基和DPPH ?自由基均有较好的清除作用，其中总醇提取物对? OH自由基的清除能力最强，其IC50值为0.28 mg/ml;乙酸乙酯提取物对DPPH ?自由基的清除效果最好，其IC50值达到0.08 mg/ml ;各提取物对Fe3+均有较强的还原能力，乙酸乙酯提取物还原效果最为明显。结论楮实提取物具有一定的抗氧 化活性，在抗衰老方面有广泛的应用前景。 【关键词】楮实；抗氧化活性；清除自由基；还原力 【Abstract ] Objective To study the antioxidant activities of extracts from Broussonetia papyrifera in vitro. Methods B.

papyrifera was treated with 80% etha nol and the n the residue was extracted with water. The etha nol extract were extracted respectively by petroleum ether, chloroform, ethyl acetate, n _buta nol. At the same time, crude polysaccharide was obta ined by etha nol precipitati on from water extract. The an tioxida nt activities of the above extracts in vitro were compared by the hydroxyl free radical ( OH), DPPH free radical (DPPH )and deoxidization Fe3+ reacti on system. Results The extracts from B. papyrifera had good scavenging effect on the hydroxyl free radical and DPPH free radical. Etha nol extract had the best scave nging effect on hydroxyl free radical system, which corresponding IC50 value was 0.28 mg/ml. Ethyl acetate extacts had the best scavenging effect on DPPH free radical, which corresponding IC50 value reached to 0.08 mg/ml. All of the extracts had strong deoxidization ability of Fe3+. Among of them, ethyl acetate extracts had significant deoxidizati on ability. Con clusi ons Brouss on etia papyrifera has stronger antioxidant activities and will be widely applicated on anti Jaging. 【Key words ] Broussonetia papyrifera; Antioxidant activity; Radical scave nging; Deoxidizati on 楮实子具有活血理气、补肾清肝、明目、利尿的功效，多用于腰膝酸软、虚劳骨蒸、头晕目眩、目生翳膜、水肿胀满等症〔1，2〕。 一些含楮实子的经典方药经多年临床验证具有确切的抗衰老、促智作

溶剂提取法提取银杏叶中得黄酮实验报告

溶剂提取法提取银杏叶中得黄酮实验报告 小组成员：周璟、胡静、左兵华、刘云飞 2014年5月一、实验目的 ⅰ）掌握传统的溶剂提取法并对银杏中的黄酮进行提取 ⅱ）掌握紫外分光光度计的应用，以及origin软件绘图的基本操作ⅲ）学会自主设计实验，培养团队合作精神 二、实验原理 ⑴关于黄酮：银杏中最具药用价值的成分，有提高人体免疫力的作用；并且抗衰老、调节内分泌，还具有抗炎、抗真菌的作用； ⑵实验需设置空白参比液，由文献资料可知芦丁标准液的最大波长大概为510nm; ⑶本实验采用硝酸铝（氯化铝）法测定银杏叶总黄酮的质量浓度，因 为黄酮类化合物可以与铝盐发生络合显色反应。 其主要原理为：在中性或弱碱性及亚硝酸钠存在的条件下，黄酮类化合物与铝盐发生螯合反应，加入氢氧化钠溶液后，溶液显橙红色，在510nm（左右）处有吸收峰，且符合定量分析的朗伯—比尔定律（即A=kbc）一般与芦丁标准溶液比较定量。先用亚硝酸钠还原黄酮类化合物，再加铝盐络合，最后加氢氧化钠溶液使黄酮类化合物开环，生成2-羟基查尔酮而显色。显色原理发生在黄酮醇类邻位无取代的邻二

酚羟基部位，不具有邻位无取代的邻二酚羟基的黄酮类成分加入上述试剂时是不显色的。（如二氢黄酮类化合物就不发生该显色反应） 三、实验药品及仪器 ⑴药品：银杏叶（阴干碾碎储藏备用），芦丁，无水乙醇，亚硝酸钠，氯化铝和氢氧化钠； ⑵仪器：电子天平，旋转蒸发仪，索氏提取器，uv-1800型紫外分光光度计，研钵，比色皿，容量瓶（10ml*6,50ml*1,100ml*2），移液管，量筒，烧杯，玻璃棒。 四．实验步骤 Ⅰ）配制60%的乙醇溶液（黄酮同时具有水溶和油溶性）。 Ⅱ）准确称取10g银杏叶粉末置于索氏提取器中，加入60%的乙醇溶液10ml，回流提取3h，然后用旋转蒸发仪浓缩并回收乙醇溶液，抽滤得到银杏叶黄酮粗提物。再用60%的乙醇定容到100ml。 Ⅲ）芦丁标准液的配置：准确称取芦丁标准品0.005g，用60%的乙醇溶液加热溶解，并转移到50ml容量瓶内用乙醇溶液定容，摇匀，得质量浓度为0.1mg/ml的芦丁标准液。 Ⅳ）分别吸取上部配制的母液0.0,1.0,2.0,3.0,4.0,5.0ml于6只10ml容量瓶中摇匀，先加入5%的亚硝酸钠0.5ml摇匀，静置6min，再加入10%的氯化铝溶液0.31ml，摇匀，静置6min，再加入4%的氢氧化钠溶液4ml，用60%的乙醇溶液定容到10ml，放置20min。其中，加入

小鼠胚胎干细胞培养实验步骤

细胞的原代培养 点击次数：540 作者：佚名发表于：2009-03-06 16:26转载请注明来自丁香园 一、原代细胞培养原理 原代细胞培养是将机体内的某组织取出，分散成单细胞，在人工条件下培养使其生存并不断生长、繁殖的方法。借助这种方法可以观察细胞的分裂繁殖、细胞的接触抑制以及细胞的衰老、死亡等生命现象。 ? 幼稚状态的组织和细胞，如：动物的胚胎、幼仔的脏器等更容易进行原代培养 ? 掌握无菌操作技术 ? 了解小鼠解剖操作技术 ? 了解原代细胞培养的一般方法与步骤 ?了解培养细胞的消化分散 ? 了解倒置显微镜的使用 二、实验材料 ? 实验动物：孕鼠或新生小鼠 ? 液体：细胞生长液（内含20%小牛血清） 0.25%胰蛋白酶 平衡盐溶液 70%乙醇 ?器材：灭菌镊子、剪刀若干把 灭菌培养皿、细胞培养瓶、小瓶、烧杯若干个 吸管若干支 酒精灯 原代细胞培养方法 三、胰酶消化法 （1）胰酶消化法操作步骤——取材 a. 用颈椎脱位法使孕鼠迅速死亡。

b. 把整个孕鼠浸入盛有75%乙醇的烧杯中数秒钟消毒，取出后放在大平皿中携入超净台。 c. 用无菌的镊子和剪子在前腿下作一腹部水平切口，用无菌镊子将皮肤扯向后腿。 d. 用另一无菌的剪刀和镊子切开腹部，取出含有胚胎的子宫，置于无菌的培养皿上。 e. 剔除胚胎周围的包膜（若胚胎较大，应剪去头、爪），将胚胎放于无菌的含有平衡盐溶液的培养皿中。 f. 漂洗胚胎，去掉平衡盐溶液。继续用平衡盐溶液漂洗胚胎直至清洗液清亮为止。 （2）胰酶消化法操作步骤——切割 a. 将部分胚胎转移至一个无菌小瓶中，用平衡盐溶液漂洗。 b. 然后用眼科手术剪刀小心地绞碎胚胎，直到成1mm3左右的小块，再用平衡盐溶液清洗，洗到组织块发白为止。 c. 静置，使组织块自然沉淀到管底，弃去上清。 （3）胰酶消化法操作步骤——消化、接种培养 a. 视组织块量加入5-6倍的0.25%胰酶液，37℃中消化20-40分钟，每隔5分钟振荡一次，或用吸管吹打一次，使细胞分离。 b. 加入3-5ml细胞生长液以终止胰酶消化作用（或加入胰酶抑制剂）。 c. 静置5-10分钟，使未分散的组织块下沉，取悬液加入到离心管中。 d. 1000rpm，离心10分钟，弃上清液。 e. 加入平衡盐溶液5ml，冲散细胞，再离心一次，弃上清液。 f. 加入细胞生长液l-2ml（视细胞量），血球计数板计数。 e. 将细胞调整到5×105/ml左右，转移至25ml细胞培养瓶中，37℃下培养。 （4）胰酶消化法操作步骤——消化、接种培养

黄酮类抗氧化

Iridoid and ?avone glycosides from Asystasia gangetica subsp.micrantha and Asystasia salicifolia and their antioxidant activities Prateep Worawittayanon a ,Juriratana Ruadreo a ,Wannaporn Disadee a , Poolsak Sahakitpichan a ,Somkid Sitthimonchai a ,Nopporn Thasana a ,b ,Somsak Ruchirawat a ,b ,Tripetch Kanchanapoom a ,c ,* a Chulabhorn Research Institute and Chulabhorn Graduate Institute,Vipavadee-Rangsit Highway,Bangkok 10210,Thailand b The Center of Excellence on Environmental Health,Toxicology and Management of Chemicals,Vipavadee-Rangsit Highway,Bangkok 10210,Thailand c Faculty of Pharmaceutical Sciences,Khon Kaen University,Khon Kaen 40002,Thailand a r t i c l e i n f o Article history: Received 31March 2011Accepted 28August 2011 Available online 26October 2011Keywords: Asystasia gangetica Asystasia salicifolia Acanthaceae Iridoid glycoside Flavone glycoside Antioxidant activities 1.Subject and sources Asystasia ,member of Acanthaceae family,is a genus comprising of about 70species distributed in tropical and subtropical old world regions (Mabberley,1987).In Thailand,three species-two subspecies have been found,one of which,Asystasia salicifolia Craib,is a native species.The introduced species are Asystasia nemorum Nees.(syn.Asystasia intrusa Blume),Asystasia gangetica (L.)T.Anderson subsp.gangetica (L.).T.Anderson and subsp.micrantha (Nees)Ensermu,which are occasionally widespread and cultivated as ornamental plants. Asystasia ganetica (L.)T.Anderson subsp.micrantha (Nees)Ensermu was collected in March 2010from Khon Kaen University,Khon Kaen Province,Thailand.The latter species,A.salicifolia Craib was collected in November 2006from Nam-Nao National Park,Phetchabun Province,Thailand.The plants were identi ?ed by Mr.Nopporn Nontapa,Department of Pharmaceutical Botany and Pharmacognosy,Faculty of Pharmaceutical Sciences,Khon Kaen University.Two voucher speci-mens (TK-PSKKU-0066and TK-PSKKU-0056)were deposited at the Herbarium of the Faculty of Pharmaceutical Sciences,Khon Kaen University. *Corresponding author.Faculty of Pharmaceutical Sciences,Khon Kaen University,Khon Kaen 40002,Thailand.Tel.:t6643202378;fax:t6643202379.E-mail address:trikan@kku.ac.th (T. Kanchanapoom).Contents lists available at SciVerse ScienceDirect Biochemical Systematics and Ecology journal homepage: https://www.sodocs.net/doc/158218695.html,/locate/biochemsyseco 0305-1978/$–see front matter ó2011Elsevier Ltd.All rights reserved.doi:10.1016/j.bse.2011.08.016 Biochemical Systematics and Ecology 40(2012)38–42

黄酮混合物体外抗氧化活性的相互作用

食 品 科 技FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY 提取物与应用· 198 ·2013年 第38卷 第2期 黄酮类化合物广泛存在于水果、蔬菜、谷物、植物来源的饮料(如红酒、绿茶等)等植物性食品中，具有保护心血管、降血压、降胆固醇、抗收稿日期：2012-08-25 基金项目：宁波职业技术学院2011年院级课题(NZ11022)；宁波工程学院“北仑科技创新基金”项目。 作者简介：汤晓(1981—)，女，浙江宁波人，硕士研究生，讲师，研究方向为植物有效成分提取与应用。 癌、杀菌、消炎等多种生理活性[1]。黄酮类化合物的基本结构为2个苯环通过中央三碳链连接而成，目前已确认结构的黄酮有5000多种，可划分为10汤 晓1，焦泽武1，龚淑珍1，梁 春1，方振飞1，关亚璠1，仇 丹2 (1.宁波职业技术学院应用化工系，宁波 315800 ； 2.宁波工程学院化学工程学院， 宁波 315016)摘要：测定槲皮素、异槲皮素、杨梅素、山萘酚、儿茶素、表儿茶素、芹菜素、飞燕草素-3-O-葡萄糖苷、矢车菊素-3-O-葡萄糖苷等9种黄酮类化合物及其两两混合物的体外抗氧化活性，以研究黄酮混合物的协同、拮抗与加合作用。以DPPH 清除能力、羟基自由基清除能力、总抗氧化性、还原能力为评价指标。结果表明，含有较多B 环羟基的黄酮类化合物更易发生拮抗作用，可通过调节黄酮单品的比例减小混合物的拮抗作用或是增强其协同作用，不同反应机理的评价指标所得结果不同。 关键词：黄酮；抗氧化活性；协同；拮抗；加合 中图分类号：R 285 文献标志码：A 文章编号：1005-9989(2013)02-0198-09 Interaction of flavonoids mixtures on antioxidant activities in vitro TANG Xiao 1, JIAO Ze-wu 1, GONG Shu-zhen 1, LIANG Chun 1, FANG Zhen-fei 1, GUAN Ya-fan 1, QIU Dan 2 (1.Department of Chemical Engineering, Ningbo Polytechnic College, Ningbo 315800;2.College of Chemical Engineering, Ningbo University of Technology, Ningbo 315016)Abstract: This study investigated in vitro antioxidant activities of quercetin, isoquercetrin, myricetin, kaempferol, catechin, epicatechin, apigenin, delphinidin-3-O-glucoside, cyanidin-3-O-glucoside and their pairwise mixtures to evaluate synergistic, antagonistic, and additive effects of flavonoids mixtures. DPPH radical scavenging activity, hydroxyl radical scavenging activity, total antioxidant activity and reducing power were used as evaluation indicators. The results indicate that flavonoids with more B ring hydroxyls are more influenced by antagonistic effect. Antagonistic effect could be reduced and synergistic effect could be enhanced by changing the ratio of single flavonoid in the mixture. Different reaction mechanisms could induce different experimental results.Key words: flavonoids; antioxidant activity; synergistic; antagonistic; additive 黄酮混合物体外抗氧化活性的相互作用