搜档网
当前位置:搜档网 › 中药仙茅不同有效成分对骨髓间质干细胞诱导作用的比较

中药仙茅不同有效成分对骨髓间质干细胞诱导作用的比较

中药仙茅不同有效成分对骨髓间质干细胞诱导作用的比较
中药仙茅不同有效成分对骨髓间质干细胞诱导作用的比较

中药仙茅不同有效成分对骨髓间质干细胞诱导作用的比较【摘要】目的比较中药仙茅中不同有效成份对骨髓间质干细胞诱导作用的差异。方法分别采用rt-pcr检测和倒置显微镜下观察的方法,对使用中药仙茅多糖和仙茅黄酮诱导刺激后的骨髓间质干细胞进行检测,观察仙茅不同有效成分对骨髓间质干细胞刺激后的变化。结果仙茅多糖和仙茅黄酮成分均能诱导骨髓间质干细胞向神经元细胞诱导分化。结论仙茅黄酮较仙茅多糖对骨髓间质干细胞向神经元细胞定向诱导分化的作用更强。

【关键词】仙茅多糖;仙茅黄酮;骨髓间质干细胞;神经元细胞;神经胶质细胞

最近研究表明,骨髓间质干细胞(mscs)具有在一定条件下分化为神经细胞、成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞和肌母细胞的强大潜能。因此如何诱导骨髓间质干细胞的分化并成功应用于临床成为研究热点。传统中医认为“肾主骨生髓”,基于几千年中医临床实践,常以“温肾壮阳,填精益髓”为治疗原则,治疗神经系统疾病。前期研究结果证明,仙茅作为传统温肾壮阳之要药,其水提物具有明确促进骨髓间质干细胞向神经细胞转化的作用,但其作用核心有效成分或单体成分是什么尚属空白。本研究选择仙茅中多糖类和黄酮类两大主体成分,分别对成年大鼠骨髓间质干细胞体外转化为神经细胞进行研究,并比较两类成分作用的差异性,为进一步的有效单体成分研究及后期临床应用奠定实验基础。现将研究结果报道如下。

常用药物的药理作用

常用药物的药理作用 15、去甲肾上腺素 1 )兴奋心脏 2)收缩血管 3)升高血压 16、盐酸肾上腺素 1)兴奋心脏 2)对皮肤、粘膜及内脏血管有收缩作用;对骨骼肌及冠状动脉有扩张作用; 3)收缩压、舒张压均可升高 4)松弛支气管平滑肌;使粘膜血管收缩,降低毛细血管通透性,减轻或消除粘膜充血或水肿5)促进肝糖原分解和糖原异生,升高血糖 17、异丙肾上腺素 1)兴奋心脏 2 )舒张血管,使收缩压升高而舒张压下降,脉压增大 3)扩张支气管 4)促进脂肪分解 18、硫酸阿托品 1)抑制腺体分泌 2)扩瞳、升高眼压、调节麻痹 3 )解除平滑肌痉挛 4)解除迷走神经对心脏抑制 5 )扩张血管,改善微循环 6 )解救有机磷酸脂类中毒 19、盐酸利多卡因 1 )局部麻醉 2)抗心律失常 20、尼可刹米 直接兴奋延髓呼吸中枢,提高呼吸中枢对CO2的敏感性;也可刺激颈动脉体化学感受器反射性兴奋呼吸中枢,使呼吸加深加快。 21、洛贝林 通过刺激颈动脉体和主动脉体的化学感受器,反射性兴奋呼吸中枢。 22、间羟胺 1)收缩血管、升高血压作用较去甲肾温和、缓慢而持久 2 )心肌收缩力增强,可使休克患者心排血量增加 3)较少引起心悸和心律失常 4)收缩肾血管作用较弱,较少引起少尿、无尿 23、盐酸多巴胺 1)兴奋心脏 2)大剂量应用时,表现为血管收缩。外周阻力增加,故收缩压和舒张压均升高 3)治疗量时产生排钠利尿作用;大剂量应用时使肾血管明显收缩,肾血流量减少。 24、西地兰 1)正性肌力作用显著加强衰竭心脏的收缩力,增加心排血量,从而解除心衰的症状 2)负性频率作用减慢心率的作用 3)对心肌电生理的影响降低窦房结自律性,减慢房室传导速度,可减慢心房纤颤或心房扑动的心室率

功效神奇的仙鹤草

[临床经验] 功效神奇的仙鹤草(转) 仙鹤草,又叫脱力草或石打穿,是一味常用止血药,虽然人们将它划归为止血药物,但它的功用远不仅限于止血,现在用于治疗其他一些类型的疾病同样收效显著,不妨让我们一同来关注一下。 1.治疗疲乏症。 整日疲乏无力,少气懒言,精神不振属于脾气虚弱的表现,仙鹤草在治疗出血病症的同时,还具补脾益气之作用,用于治疗脾虚引起的上述诸症效果良好。用法:仙鹤草40克、红塘30克,先将仙鹤草煎2次合匀,分成2份,早晚各一份,饮用前将红糖融化在药液中饮用。 2.治疗肿瘤 临床应用发现,仙鹤草具有活血祛瘀,消除肿瘤的功效,用于治疗各种类型的肿瘤,具有较好的作用,在应用时可在辨证的基础上加入复方中使用。 3.治疗肾炎 肾炎是一种常见泌尿系疾病,不管是急性肾炎还是慢性肾炎,将仙鹤草加入配方中,会显著提高治疗效果,这是因为仙鹤草不但具有利尿消肿的作用,而且能消除尿中红细胞,故治疗肾炎有佳效 4.治疗糖尿病 如今,糖尿病已成为一种严重危害人类健康的“流行病”,给人们的生活及心理健康也造成了严重影响。临床实践发现,仙鹤草对于防治糖尿病有很好的疗效,既可单方面应用,也可在辨证的基础配入复方。单方使用时,每次30克开水冲泡代茶,每日一剂。 5.防治耳鸣耳聋 仙鹤草具有开窍益聪的作用,近年来用于治疗耳鸣耳聋等症也取得了可喜的成绩,不论各种性质的耳鸣耳聋,均可将仙鹤草加入到复方中使用,会显著增强治疗效果。 6.治疗咳嗽 实践中发现,将仙鹤草与百部、桔梗、半夏等止咳化痰药物合用,具有良好的消炎、镇静、止咳之作用,凡因感冒引起的各种咳喘症状,用以上药物配合使用,每每应手而瘥。 7.用于各种汗症 汗症是由于阴阳失调,肌腠不因而引起的汗液外泄证,主要分为夜间出现的盗汗及白天出现的自汗两种,仙鹤草无论对盗汗还是自汗均有很好的治疗效果,可配合辨证方药应用。

骨髓间充质干细胞研究进展(一)

骨髓间充质干细胞研究进展(一) 【摘要】骨髓间充质干细胞是干细胞领域的研究热点之一。虽然近几年来有关间充质干细胞的研究已取得了很大进展,但仍有很多问题有待进一步解决。本文主要对间充质干细胞的生物学特性、以及免疫耐受性、分化和促修复、间充质干细胞的标记等问题进行综述。 【关键词】骨髓间充质干细胞分化标记 骨髓间充质干细胞,BMSCs)是骨髓内除造血干细胞(hematopoieticstemcells,HSC)之外的另一类干细胞,是骨髓造血微环境的重要组成部分,在体内外均具有支持和调控造血的作用。因其比较容易贴壁和形成成纤维样的克隆,因此也称成纤维细胞集落形成单位(Colonyformingunitfibroblast,。又由于它们来自骨髓的支持结构,并作为滋养层支持造血干细胞的生长,因此也有人称其为骨髓基质细胞(Bonemarrowstromalcells,BMSCs)。 1骨髓MSCs的生物学特性 不同物种的BMSCs体外培养的形态学特征大致相同,主要表现为梭形、纺锤形,少数为多角形。目前,BMSCs的分离方法主要有以下几种:(1)全骨髓培养,是将无菌抽取的骨髓加入培养液制成细胞悬液并培养,原代培养培养物以造血细胞成分居多,为利于BMSCs的贴壁生长,可采用DMEM和胎牛血清培养。BMSCs对营养要求高,胎牛血清终浓度为10%~20%,有人认为红细胞会随着换液而逐渐被自然去除,对BMSCs影响不大。细胞融合后以1:2比例传代,3~4天换液一次〔1〕;(2)离心培养法,是根据骨髓中细胞成分比重的不同,采用离心分离法提取单核细胞进行培养。在新鲜无菌的骨髓抽取物中加入抗凝培养液稀释1500~2000r/min离心20~30min,采集交界处的单核细胞层,PBS洗涤2~3次后,加入培养液接种培养;(3)细胞表面分子标记分选法,主要是根据BMSCs的细胞表面分子特征来分离。一般采用流式细胞仪、免疫磁珠或免疫沉积法来进行分选。但由于目前仍未找到BMSCs 特异性的细胞表面标记物〔2〕该法较少采用。影响BMSCs扩增的主要因素:(1)血清:血清对大量扩增BMSCs起着重要的作用,不同浓度的血清对培养BMScs纯度的影响亦较大,常用10%~20%的胎牛血清培养BMSCs;(2)接种密度:BMSCs的体外扩增速度与其接种密度也有关,一般认为较低密度种植有益于增殖。高密度接种后细胞生长较慢其原因可能是由于细胞间的接触抑制,或细胞释放到培养基中的因子影响了BMSCs的生长;(3)细胞因子:一些细胞因子对于维持BMSCs增殖和未分化状态亦十分重要;(4)动物种属:一般认为BMSCs的生长特性相似,但也有资料显示BMSCs生长特点有种属差异〔3〕。 2间充质干细胞移植后的免疫耐受性 在移植治疗中,一般情况下,移植物会引起宿主的免疫排斥反应。但对于间充质干细胞来说却不是这样。实验表明间充质干细胞可以抑制T细胞的增殖从而导致免疫耐受〔4~7〕。T 细胞与其它细胞的相互作用可以通过混和淋巴细胞反应来观察。被标记的T细胞与其它细胞混合后,如果可以引起T细胞的免疫反应,则可以观察到T细胞的增殖现象。但当把间充质干细胞与T细胞混合后却观察不到T细胞的增殖反应,而且这种现象并不是由于T细胞凋亡或其它的有害作用引起的。因为在去除间充质干细胞后,这些T细胞仍然可以对其它物质进行反应。此外,使用趋化膜将两种细胞分隔开培养后,间充质干细胞对T细胞的抑制作用依然存在,表明这种抑制作用可能通过某种可溶性的小分子起作用。另外,除了未分化的间充质干细胞可以抑制T细胞的增殖外,实验也表明,随着干细胞的分化,其抗原性并没有随之增加〔8〕。总之,间充质干细胞可以通过某种机制抑制T细胞的成熟来逃避免疫系统的清除。也暗示间充质干细胞可能在机体免疫系统的调节及骨髓中各种干细胞未分化状态的维持方面起作用。 3促组织修复和细胞分化 骨髓间充质干细胞(BMSCs)是存在于骨髓组织中的一类成体干细胞(adultstemcells,AS),在一

中药功效大全一览表

中药功效大全一览表 1.辛温解表药: 麻黄.桂枝.紫苏叶.荆芥.防风.细辛.白芷.香薷.羌活.独活.藁本.辛夷.生姜.葱白.石胡荽.苍耳子.芸香草.柽柳。 2.辛凉解表药: 薄荷.蝉蜕.葛根.柴胡.升麻.牛蒡子.桑叶.菊花.蔓荆子.淡豆豉.浮萍.木贼。 3.清热泻火药: 石膏.寒水石.知母.栀子.芦根.竹叶.天花粉.夏枯草.淡竹叶.密蒙花.谷精草.青葙子.压趾草 4.清热燥湿药: 黄芩.黄连.黄柏.龙胆草.苦参.秦皮.白鲜皮.椿白皮.。(泻火解毒药):黄芩.黄连.黄柏.犀角.芒硝.龙胆草.水牛角.。 5.清热解毒药: 连翘.拳参.贯众.玄参.牛黄.白薇.大黄.射干.绿豆.甘草.秦皮.红藤.酸浆.白蔹.马勃.青黛.漏芦.升麻.菊花.大蓟.小蓟.地榆.朱砂.紫珠.蔊菜.硼砂.金银花.忍冬藤.连翘心.大青叶.板蓝根.水牛角..蒲公英.鱼腥草.白头翁.败酱草.穿心莲.蚤休(七叶一枝花).半枝莲.半边莲.土茯苓.山豆根.马齿苋.垂盆草.四季青.金果榄.凤尾草.天葵子.千里光.金荞麦.山慈菇.地锦草.鸦胆子.鸭跖草.雷公藤.豨莶草.金钱草.地耳草.青木香.鸡矢藤.仙鹤草.苎麻根.黄药子.羚羊角.紫花地丁.白花蛇舌草.。 6.清热凉血药: 犀角.玄参.牡丹皮.赤芍.紫草.白薇.水牛角.生地黄.。 7.清退虚热药: 青蒿.白薇.鳖甲.知母.黄柏.龟板.秦艽.地骨皮.银柴胡.胡黄连.。 8.泻下药: 大黄.芒硝.芦荟.羊蹄.玄明粉.番泻叶.。 9.润下药: (润肠通便)杏仁.桃仁.当归.百部.蜂蜜.桑葚.锁阳.火麻仁.郁李仁.何首乌.紫苏子.瓜蒌仁.柏子仁.松子仁.黑芝麻.决明子.车前仁.胡桃仁.冬葵子.肉苁蓉.。 10.峻下药: 甘遂.巴豆.大戟.芫花.商陆.牵牛子。 11.祛风湿散寒药: 羌活.独活.川乌.草乌.辛夷.苍术.木瓜.蚕沙.松节.蕲蛇.白花蛇.乌梢蛇.威灵仙.雷公藤.伸筋草.寻骨风.海风藤.老鹳草.路路通.苍耳子.。 12.祛风湿清热药: 秦艽.防己.桑枝.萆薢.稀莶草.臭梧桐.海桐皮.络石藤.穿山龙.丝瓜络.。

间充质干细胞分离与培养

文章编号:100025404(2001)0520553203论著 骨髓间充质干细胞的分离与培养 艾国平,粟永萍,闫国和,冉新泽,刘晓宏,罗成基,程天民 (第三军医大学预防医学系防原医学教研室、全军复合伤研究所,重庆400038) 提 要:目的 摸索体外分离培养骨髓间充质干细胞的最佳条件,并观察其部分生物学活性。方法 采用常规的细胞培养传代技术以及光、电镜技术和细胞增殖活性检测法,观察不同贴壁时间、不同浓度血清、不同种植密度对骨髓间充质干细胞生长、增殖、形态的影响,并观察培养细胞的部分生物学特性。结果 以选用4~24h贴壁的有核细胞,加入5%~10%胎牛血清、种植密度(4~8)×104个/ml的培养条件为最适宜细胞生长;在此条件下,培养扩增的细胞仍具有干细胞多向分化性;其形态呈梭状,具有快速增殖的能力;培养细胞在3~4d进入对数生长期,随后进入平台期,分裂相细胞明显减少;光镜下细胞呈梭状或类成纤维状,2~10代的细胞呈均质状;超微结构显示为早期幼稚细胞形态。结论 建立了骨髓间充质干细胞体外分离、培养的条件,探讨了骨髓间充质干细胞部分生物学特性,为进一步深入研究骨髓间充质干细胞的诱导分化和应用打下基础。 关键词:骨髓间充质干细胞;组织工程学 中图法分类号:R329.2文献标识码:A Cultivation and isolation of the bone marrow mesenchymal stem cells AI G uo2ping,S U Y ong2ping,Y AN G uo2he,RAN X ing2ze,LI U X iao2hong,LUO Cheng2ji,CHE NG T ian2min(Department of Radiation M edicine, Institute of C ombined Injury of P LA,Third M ilitary M edical University,Chongqing400038,China) Abstract:Objective T o observe s ome biological features of bone marrow mesenchymal stem cells and explore the best conditions for is olating and culturing in vitro.Methods C omm on cell culture technique,light and electron microscopy were used to study the effects of the growth,prolif2 eration,m orphology of the bone marrow mesenchymal stem cells in different adherent time,concentration of serum and cell density.Re sults The best culture condition in vitro for growth was4-24hours adherent time,5%-10%fetal bovine serum,(4-8)×104/ml cell density.The cells were spindle in shape and had a strong ability of proliferation.The time for cell duplication was3to4days.The cells showed the characteristics of stem cells in electron microscope.Conclusion The best condition for is olation and culture of bone marrow mesemchymal stem cells was success fully established and s ome biological features were obserred.It found a base for further investigation and using of mesenchymal stem cells. K ey w ords:mesenchymal stem cell;tissue engineering 干细胞是近年来研究的热点,骨髓中除造血干细胞以外,还含有另一类干细胞—间充质干细胞(Mes2 enchymal stem cell,MSC),在不同的诱导条件下,具有向中胚层和神经外胚层组织细胞分化的能力,如向成骨细胞、成软骨细胞、脂肪细胞、成纤维细胞、内皮细胞、神经细胞及支持造血的基质细胞等分化的能力[1,2]。随着细胞工程学和组织工程学的发展,利用干细胞的多向分化性,选择合适的生物材料和有靶向性目的基因,已有报道MSC在骨、软骨、肌腱和神经胶质修复中的作用[3,4],国内在这方面的工作尚处于起步阶段。本实验旨在摸索体外分离培养骨髓间充质干细胞的最佳条件,为进一步研究骨髓间充质干细胞的诱导分化和应用打下基础。 1 材料与方法 1.1 骨髓MSC的分离 从胸骨无菌抽取约1~2ml的骨髓,肝素化后,加入红细胞裂解液5ml,混匀,1200r/min,离心10min;弃上清,用0.01 基金项目:国家重点基础研究发展规划项目(“973”项目)(G1999054205) 作者简介:艾国平(1969-),女,四川省隆昌县人,博士研究生,讲师,主要从事组织工程学方面的研究,发表论文6篇。电话:(023)68752355 收稿日期:2001201226;修回日期:2001203218m ol/L的P BS(pH7.2)洗2~3次,1200r/min,各离心10min;计数,以2×109/ml种入10%F BSα2ME M培养基,青霉素100U/ ml、链霉素100μg/ml,37℃,5%C O2孵箱中培养;不同时相点弃悬浮细胞,用0.01m ol/L P BS(pH7.2)尽量轻轻洗去未贴壁的细胞,加入含10%F BSα2ME M培养基。 1.2 不同贴壁时间对MSC增殖的影响 选用贴壁后1、2、3、4、6、8、12、24、48、72h的细胞进行传代培养,观察不同时间贴壁的细胞传代、增殖能力及形态学的变化。 1.3 不同浓度胎牛血清(F BS)对MSC生长的影响 细胞按4×104/ml种入96孔培养板中,分别加入以下F BS 浓度的α2ME M培养基:0%、1%、2.5%、5%、7.5%、10%、12.5%、15%、17.5%、20%,每个浓度6孔;培养48h后,加入20μl MTT (5mg/ml二苯基四氮唑溴盐),37℃避光培养4h;尽量吸掉上清液,加入150μl二甲基亚砜,室温振荡10min,HT27000plus多孔读数仪490nm处读取D490值,以培养液作空白对照。 1.4 比较不同种植密度对MSC生长的影响 用含10%F BS的α2ME M培养基;细胞按以下密度(×104/ ml):0.3、0.6、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0种入96孔培养板中,每一密度6孔;培养48h后,按上述方法测其D490值。 1.5 培养细胞生长曲线 细胞按0.5×104/ml种入24孔培养板,每孔培养液为1ml,每天取3孔测其D490值,连续测8d,绘出培养细胞生长曲线。 355 第23卷第5期2001年5月 第 三 军 医 大 学 学 报 ACT A AC ADE MI AE ME DICI NAE MI LIT ARIS TERTI AE Vol.23,N o.5 May.2001

人骨髓间充质干细胞的贴壁分离与体外培养

万方数据

ISSN1673—8225CN21.1539/R赵凌云,等人骨髓间充质干细胞的贴壁分离与体外培养wwM.zglckf,comkf23385083@sina.com 0引言 骨髓间充质干细胞是具有形成骨、软骨、脂肪、神经和成肌细胞能力的多种分化潜能的细胞亚群,取材方便,易于体外扩增,可进行自体移植,而不存在组织配型和免疫排斥的问题,被认为是骨组织工程中最佳的种子细胞。本实验目的在于建立一种可行的骨髓间充质干细胞取材和分离扩增的培养方法。 1材料和方法 设计:开放性实验。 单位:解放军济南军区总医院脊髓修复科。 材料:实验于2006—02/12在解放军济南军区总医院脊髓修复科完成。骨髓来源于解放军济南军区总医院脊髓修复科收治的脊髓完全性损伤患者,对本实验均知情同意。基础培养液由含体积分数为0.15胎牛血清和低糖仪一MEM配置。低糖d-MEM培养基(Hyclone);淋巴细胞分离液(密度1.077g/mL,上海试剂二厂生产);胰蛋白酶,胎牛血清(Gibico);C02培养箱(上海力申科学仪器有限公司,HF90);生物安全柜(上海力申科学仪器有限公司,HFsafe一1200/c);倒置显微镜(Leica);离心机(JOUANB4i多功能台式机)。 设计、实施、评估者:设计、实施为第一作者,评估为第二、三作者,均经过系统培训,未使用盲法评估。 方法: 骨髓间充质干细胞的分离及传代培养:在无菌条件下,以含5mL肝素钠生理盐水的20mL注射器,于患者髂后上棘穿刺抽取骨髓组织6mL,移入含5mL肝素钠生理盐水的试管内,混匀,而后沿管壁缓慢加入含10mL淋巴细胞分离液的离心管中,2000r,min离心20min,小心吸取界面层细胞,用D—Hanks平衡盐溶液洗2次,2000r/min离心8min,加入基础培养液,血细胞计数板计数,调整细胞的浓度,将细胞悬液按109—1010L-1接种于培养瓶,放置37℃、体积分数为0.05的C02饱和湿度孵箱中培养。于培养后的两三天更换培养液,并用D-Hanks平衡盐溶液冲洗2次,以去除未贴壁的造血细胞,以后每3d换液一次,进一步去除未贴壁的细胞。观察细胞生长情况,待细胞融合成片、长满培养瓶底部后,用质量浓度为2.5g/L的胰蛋白酶流过所有细胞表面,盖好瓶盖,将培养瓶放在倒置显微镜下观察,发现细胞变圆,部分脱壁,控制消化时间不超过3min,立即加入2mL有血清培养液终止消化,用弯头吸管轻轻吹打细胞生长区域,吹打过程中不要用力,结束后再用少量培养液漂洗一遍,然后加入适 5650量培养液计数,分别接种在新的培养瓶内。 骨髓间充质干细胞的生长曲线的绘制:取第3代生长状态良好的细胞,用质量浓度为2.5g/L的胰蛋白酶消化制成细胞悬液,接种至24孔培养板,3孔/组,细胞1×104/孔,每孔加入培养液1mL,放置37℃、体积分数为0.05的C02孵箱中培养。以细胞数为纵坐标,时间为横坐标,绘制细胞生长曲线。 骨髓间充质干细胞贴壁率的测定:取第3代生长状态良好的细胞,用质量浓度为2.5g/L的胰蛋白酶消化制成细胞悬液,接种至24孔培养板,3孔/组,细胞1×104/孔,每孔加入培养液1mL,放置37℃、体积分数为0.05的C02孵箱中培养,每隔2h进行细胞贴壁率检测。 主要观察指标:①骨髓间充质干细胞的形态学观察。②骨髓间充质干细胞的生长曲线。③骨髓间充质干细胞的贴壁率。 统计学分析:由第一作者采用ESA4.0软件进行统计处理,数据以娃s表示。 2结果 2.1骨髓间充质干细胞的形态学观察倒置显微镜下,骨髓间充质干细胞接种1d即贴壁,2d时贴壁细胞较多。经冲洗和换液去除悬浮细胞后,贴壁细胞继续培养3d开始增殖,伸展为椭圆型、短梭型、多角型及不规则型等(图1)。至14d细胞密集在集落中心,基本铺满瓶底,第3~5代细胞呈均匀一致的长梭型,排列成旋涡状或放射状(图2)。 图1原代培养的骨髓间充质干细胞贴壁后3d开始增殖,伸展为椭圆型、短梭型、多角型及不规则型等(倒置显微镜,x20) 2.2骨髓间充质干细胞的生长曲线骨髓间充质干细胞传代后3d内处于潜伏期,3d后进入生长期,7d后进入平台期。第3代骨髓间充质干细胞生长曲线见图3。 P.O.Box1200。Shenyang110004kf23385083@sina.com www.zglckf.com  万方数据

十八种抢救药物名称及药理作用

上饶清水医院抢救车内 十八种抢救药物名称及药理作用(按排列顺序编号)

注意事项:1、常见搏动性头痛,颈部面部皮肤潮红,应向病人解释。2、体位性低血压引起的晕厥,避免突然起床。

注意事项:1.抗心率失常药可损害心肌机能。故用药时应注意观察其作用及副作用。2.可能引起胃肠道反应如:厌食、恶心、口干、舌麻等。亦有低血压和房室传导阻滞等出现。3.孕妇、哺乳期妇女慎用。 17、盐酸普罗帕酮(心律平)70mg/支 【注意事项】(1)心肌严重损害者慎用。(2)严重的心动过缓,肝、肾功能不全,明显低血压患者慎用。(3)如出现窦房性或房室性传导高度阻滞时,可静注乳酸钠、阿托品、异丙肾上腺素或间羟肾上腺素等解救。 【注意事项】冬季在注射前须先将安瓿加热至与体温相近温度,再徐缓注入静脉,可避免血管痉挛。 19、碳酸氢钠注射液:250ml:12.5g 药理:调节水、电解质及酸碱平衡药。主要用于代谢性酸中毒、碱化尿液、胃酸过多引起的症状、中和部分药物中毒。 20、甘露醇注射液:250ml:50g 药理:脱水药。主要用于组织脱水、降低颅内

眼内压、渗透性利尿、促进某些药物过量的排泄等。 21、林格氏液(复方氯化钠注射液)500ml 药理:水、电解质平衡调节药。主要用于各种原因引起的水、电解质平衡。 22、各种规格的氯化钠注射液、葡萄糖注射液、葡萄糖氯化钠注射液。主要用于补充体液、能量,或作为其它药物溶媒。 以下药品不在抢救车内,但需要了解: 23:盐酸纳诺酮注射液:1ml:0.4mg 药理:本品为阿片受体拮抗药。主要用于酒精中毒、阿片类药物引起的呼吸抑制。 24、地西泮注射液(安定):2ml:10mg 药理作用:治疗精神障碍药、弱安定药、抗焦虑药。具有镇静、抗焦虑、抗惊厥、中枢性肌肉松弛作用。静脉注射为治疗癫痫持续状态首选用药。静注可用于全麻诱导用药。 25、去乙酰毛花苷注射液:2ml:.04mg药理作用:循环系统用药,强心剂。用于心力衰竭、急性心功能不全、控制伴快速心室率的心房颤动、心房扑动。 26、葡萄糖酸钙注射液:10ml:1g药理作用:矿物质类电解质调节药。主要用于治疗钙缺乏,急性血钙过低、碱中毒、过敏性疾病。镁、氟中毒的抢救等。27、苯巴比妥钠注射液:1ml:0.1g 药理作用:神经系统药物、镇静催眠抗惊厥药。主要用于治疗焦虑、失眠、癫痫及运动障碍。是治疗癫痫大发作及局限性发作的重要药物。 28:速效救心丸:40mg*120粒药理:活血行气、祛瘀止痛。主要用于冠心病缓解心绞痛症状。 护理部 2016年

秦皮的功效与作用

[标签:标题] 篇一:七种常用中药的功效及服用禁忌 七种常用中药的功效及服用禁忌 胖大海、枸杞子、金银花等都是人们熟识且常用的中药,由于这些中药药性较为平和,大多数人都是根据自己的经验去服用,其实这些常用中药也有一些服用禁忌,切不可随意服用,并要掌握好安全用量。 胖大海——清肺利咽 胖大海味甘,性寒;有小毒。有清肺利咽、润肠通便之功效,适用于风热邪毒侵犯咽喉所致的喑哑,其他原因引起的喑哑用胖大海无效,特别是老年人突然失音及脾虚者应该慎用。【安全用量】代茶饮每次不得超过3粒,以防中毒。 决明子——降血压、降血脂、清肝明目 决明子味甘、苦,性微寒,具有降血压、降血脂、清肝明目等功效。但决明子可引起腹泻,女性长期服用轻则引发月经不规律,重则可使子宫内膜不正常;有泄泻、低血压者及怀孕女性也应慎用。另外,决明子是一种泻药,长期服用对身体不好,会损伤身体的正气。 【安全用量】每日用量为10~15克。 枸杞子——滋补肝肾,益精明目,抗衰老 枸杞子味甘,性平,功能为滋补肝肾,益精明目,抗衰老。外邪实热,脾虚有湿及泄泻者忌服。枸杞子温热身体的效果相当强,患有高血压、性情太过急躁的人或平时大量摄取肉类食物面泛红光的人不宜服用。正在感冒发烧、身体有炎症、腹泻的人最好别吃。最适合吃枸杞的是体质虚弱、抵抗力差的人。而且,一定要长期坚持,每天吃一点,才能见效。【安全用量】每日用量为5~15克。 甘草——润肺祛痰止咳 甘草味甘,性平,有补益心脾、润肺祛痰止咳,缓急止痛,清热解毒,调和诸药之功效,但长期服用能引起水肿和血压升高,还易引起低钾血症,导致心律失常、肌肉无力等。湿盛胀满者不宜服用。 【安全用量】每日用量为3~10克。 人参——大补元气,提高免疫力 人参大补元气、生津安神、补脾益肺,能兴奋神经系统,提高免疫力,抗衰老。身强体壮者长期服用或过量服用人参易口干舌燥,甚至鼻孔出血。实证、热证而正气不虚者忌服。有些人认为人参是一种补品,吃了对身体总有好处,这是错误的想法。无论是红参还是生晒参,在服用过程中一定要循序渐进,不可操之过急、过量服食。另外,一定要注意季节变化。一般来说,秋冬季节天气凉爽,进食比较好;而夏季天气炎热,则不宜食用。在服用人参后忌吃萝卜、忌饮茶。人参忌与葡萄同食,葡萄中含有鞣酸,极易与人参中的蛋白质结合生成沉淀,影响吸收而降低药效。 【安全用量】每日用量为5~10克。 菊花——平肝明目,解毒 菊花味辛、甘、苦,性微寒,有疏风清热、平肝明目、解毒的作用。但阳虚体质者不适合服用;气虚胃寒、食少泄泻者应慎服;阴阳两虚型、痰湿型、血淤型高血压病患者也不宜服用菊花。菊花的服用方法:以苏杭一带所长的大白菊或小白菊最佳,每次用3克左右泡茶饮用,每日3次。 【安全用量】每日用量为6~10克。 金银花——清热解毒

巧记中药功效[1]

(一)解表药 (1)发散风寒药 麻黄发汗解表+宣肺平喘,利水消肿 桂枝+温通经脉,助阳化气 紫苏解表散寒解鱼蟹之毒+行气宽中 生姜+温中止呕,温肺止咳 荆芥祛风解表+透疹消疮,炒炭止血 防风+胜湿止痛,止痉,止泻 羌活解表散寒,祛风胜湿,止痛+ 藁本+ 白芷+宣通鼻窍+燥湿止带,消痈排脓细辛+ +温肺化饮,通窍醒神 苍耳子发散风寒,宣通鼻窍,止痛+散风祛湿 辛夷+ 香薷发汗解表,化湿和中,利水消肿 (2)发散风寒药 薄荷疏散风热,透疹利咽+清利头目,疏肝行气 牛蒡子+宣肺祛痰,清热解毒散肿,滑肠通便蝉蜕+开音,明目退翳,熄风止痉 蔓荆子疏散风热清利头目 桑叶疏散风热,清肝明目,平抑肝阳+清肺润燥,凉血止血 菊花+清热解毒 柴胡解表,升阳举陷+退热,疏肝解郁,退热截疟 升麻+透疹,清热解毒 葛根+透疹,生津止渴,止泻 淡豆豉解表,除烦,宣发郁热 (二)清热药 (1)清热泻火药 石膏清热泻火,止渴+除烦,敛疮生肌,收湿,止血 知母+生津润燥,滋阴润燥(肺,胃,肠,肾阴)芦根+生津,除烦,止呕,清热利尿 天花粉+生津,消痈排脓 淡竹叶清热泻火,除烦+利尿 栀子+利湿,凉血解毒。焦栀子凉血止血 夏枯草清热泻火,清肝明目,降血压+散结消肿 决明子+润畅通便

(2)清热燥湿药 黄芩清热燥湿(上焦),泻火解毒+凉血止血,除热安胎 黄连(中焦)+ 黄柏(下焦)+退热除蒸,解毒疗疮 苦参清热燥湿,杀虫止痒+利尿,止泻 白鲜皮+清热解毒,祛风 龙胆草清热燥湿,泻肝胆火,明目 (3)清热解毒药 金银花清热解毒,疏散风热+凉血止痢 连翘+消肿散结,清心利尿(疮家圣药) 蒲公英清热解毒,消痈散结+利湿通淋,通经下乳 紫花地丁+凉血 穿心莲+凉血,燥湿 大青叶清热解毒,凉血消斑+利咽 板蓝根+利咽 青黛+清肝泻火,熄风定惊 白花蛇舌草清热解毒,利湿通淋 熊胆清热解毒,熄风止痉,清肝明目 射干清热解毒,利咽+祛痰, 山豆根+消肿 马勃+止血 马齿苋清热解毒,凉血止痢+止血, 鸦胆子+截疟,腐蚀赘疣 白头翁+ 贯众清热解毒凉血止血,杀虫 土茯苓解毒除湿,通利关节 (4)清热凉血药 生地清热凉血,养阴生津+止血 玄参+泻火解毒,消痈 丹皮清热凉血,活血祛瘀+清透阴分伏热(治无汗骨蒸要药)赤芍+止痛,清泻肝火 紫草清热凉血,活血,解毒透疹+ 水牛角+定惊 (5) 清虚热药

内科常用药物药理作用

降脂 1阿昔莫司胶囊:0.25g,高脂血症, 高胆固醇血症。 2普罗布考:0.125g,高胆固醇血症。 3辛伐他汀:20mg,.用于高胆固醇血症和混合型高脂血症,冠心病。 4瑞舒伐他汀:5mg高胆固醇血症 5阿托伐他汀:10mg/20mg治疗高 胆固醇血症和混合型高脂血症;冠 心病和脑中风的防治。 6薯蓣皂苷片:80mg用于冠心病、 心绞痛的辅助治疗。亦可用于并发 高血压、高甘油三酯、高胆固醇等 症的患者。 7氟伐他汀:20mg原发性高胆固 醇血症。 8阿昔莫司胶囊:0.25g高脂血症 降糖 1格列美脲片:2mg, 2型糖尿病。 2盐酸二甲双胍肠溶片:0.25g,降 糖药 3格列吡嗪分散片:5mg,降糖药 4瑞格列奈:1mg,降糖药 5阿卡波糖:50mg2型糖尿病。 6格列喹酮:30mg2型糖尿病。 7伏格列波糖:0.2mg 2型糖尿 病。 8罗格列酮:1mg/4mg 2型糖尿 病。 9依帕司他胶囊:50mg糖尿病神 经性病变。 降压 1吲达帕胺:2.5mg,用于治疗高血 压。 2依那普利:5mg/10mg,降压。 3特拉唑嗪:2mg用于治疗高血压; 用于改善良性前列腺增生症患者 的排尿症状。 4厄贝沙坦:75mg治疗原发性高血压。合并高血压的Ⅱ型糖尿病肾病的治疗。5缬沙坦分散片:40mg轻、中度 原发性高血压。 6氯沙坦钾片:100mg高血压。 7氢氯噻嗪片:25mg水肿性疾病, 高血压。 心血管 1胺碘酮:0.2g,抗心律失常药。 2地高辛:0.25mg,用于急慢性心力 衰竭, 3单硝酸异山梨酯:20mg,抗心绞痛药,用于冠心病的长期治疗 4硝酸异山梨酯:5mg,治疗冠心 病,心绞痛 5美西律:50mg,控制急,慢性室性 心律失常。 6美托洛尔:.25mg,高血压,.心律失常,心绞痛、心肌梗死。 7心宝丸:60mg,温补心肾,活血 通络,用于慢性心功能不全,心绞 痛及心肌缺血性改变 8稳心颗粒:9g,用于心律失常, 室性早搏的治疗 9薯蓣皂苷片:80mg,冠心病,心 绞痛的辅助治疗,高血压、高脂血 症,高胆固醇。 10硝酸甘油:0.5mg,治疗和预防心 绞痛,急性心肌梗死,充血性心力 衰竭,还可用于治疗高血压。 11曲美他嗪:20mg,心绞痛发作的 预防性治疗,眩晕,耳鸣。 降压、心血管 1地尔硫卓:90mg冠状动脉痉挛 引起的心绞痛和劳力型心绞痛;高 血压;肥源性心肌病。 2比索洛尔:5mg原发性高血压、 心绞痛的治疗。 3非洛地平:5mg,高血压、心绞痛。4苯磺酸氨氯地平:5mg,高血压及 心绞痛。 5卡维地洛:10mg原发性高血压; 治疗有症状的充血性心力衰竭。 6硝苯地平5mg(缓释10mg、控 释30mg)片:心绞痛,高血压 7卡托普利:25mg高血压;心力 衰竭。 8贝那普利:10mg高血压;心功能不全。 9福辛普利钠:10mg,用于治疗高血压 或心衰。 10阿米洛利:用于高血压病,心 力衰竭,肝硬化等病以致水肿和腹 水。 治喘 1茶碱缓释片:0.1g,适用于支气 管哮喘、喘息型支气管炎、阻塞性 肺气肿等缓解喘息症状;也可用于 心源性肺水肿引起的哮喘。 2酮替芬:1mg,支气管哮喘,哮喘 性支气管炎、过敏性咳嗽、过敏性 鼻炎。 3盐酸丙卡特罗:25ug,用于防治支 气管哮喘、哮喘性支气管炎、伴有 支气管反应性增高的急性支气管 炎和慢性阻塞性肺疾病所致的喘 息症状。 4多索茶碱:0.2g,支气管哮喘, 慢支及其他支气管痉挛引起的呼 吸困难 5孟鲁斯特纳:10mg,平喘,也适 用于过敏性鼻炎引起的症状 6固本咳喘:0.4g,益气固表,用 于治疗咳嗽,痰多,喘息气促 7吸入性异丙托溴胺溶液: 250vg/2ml,为支气管扩张剂,用 于慢支,肺气肿,哮喘等慢阻肺疾 病 8吸入性硫酸沙丁胺醇溶液: 5mg/ml,治疗及预防支气管哮喘, 缓解急性支气管痉挛 9布地奈德吸入混悬液:1mg/2ml, 为糖皮质激素,有强效的局部抗炎 和抗过敏作用 治胃 1二甲硅油片:25mg,胃肠道胀气。 2多潘立酮:10mg,消化不良,腹 胀,嗳气,恶心,呕吐。 3莫沙必利:5mg,用于功能性消化 不良,伴有胃灼热、嗳气、恶心、 呕吐、早饱、上腹胀、上腹痛等症 状。 4枸橼酸铋雷尼替丁:0.2g, 抑制胃 酸分泌、保护胃粘膜 5果胶铋:50mg,胃及十二指肠溃 疡 6硫糖铝:1g/10ml,胃及十二指肠 的溃疡的治疗。 7奥美拉唑:20mg适用于胃溃疡、 十二指肠溃疡、应激性溃疡、反流 性食管炎和卓-艾综合征(胃泌素 瘤)。 8法莫替丁:20mg用于缓解胃酸 过多所致的胃痛、胃灼热感(烧 心)、反酸。 9埃索美拉唑镁肠溶片:20mg胃 食管反流性疾病;根除幽门螺杆 菌。 治前列腺 1非那雄胺片:5mg,治疗已有症状 的前列腺增生。 2普适泰片:74mg,良性前列腺增 生。 3盐酸特拉唑嗪:2mg,治疗高血压, 良性前列腺增生。 4坦洛新缓释胶囊:0.2mg,前列 腺增生引起的排尿困难 治头晕 1地芬尼多:25mg,防止多种原因 或疾病引起的眩晕、恶心、呕吐。 2氟桂利嗪胶囊:5mg脑血供不足,椎动 脉缺血,脑血栓形成后等;耳鸣,脑晕; 偏头痛预防;癫痫辅助治疗。 3尼麦角林:30mg,用于头晕。 4盐酸曲美他嗪片:20mg,心绞痛 发作的预防性治疗,眩晕,耳鸣。 5银杏叶:9.6mg,用于脑部血液 循环不足及其眩晕,头痛,记忆力 减退等症状。 镇静 1劳拉西泮:0.5mg缓解焦虑症状 2艾司唑仑片:1mg抗焦虑、失眠。也用 于紧张、恐惧及抗癫癎和抗惊厥。 3地西泮:2.5mg用于焦虑、镇静催眠, 还可用于抗癫癎和抗惊厥 4氟哌噻吨美利曲辛片:10.5mg 轻、中型焦虑、抑郁、虚弱。 5心神宁片:养血除烦,宁心安神。 神经 1甲钴胺:5mg,改善患者自觉症状, 如麻木、自发性疼痛、感觉异常、 直立性眩晕、多汗、口渴等 2谷维素:10mg,神经官能症,更 年期综合症的镇静助眠。 3丙戊酸钠缓释片:0.2g全身性、 部分性或其他类型癫痫。 4多巴丝肼片:0.25g帕金森病。 5 11卡马西平片:0.1g/0.2g癫痫; 三叉神经痛和舌咽神经痛发作;躁 狂-抑郁症。 6石杉碱甲片:50μg良性记忆障 碍。 7吡拉西坦氯化钠注射液:脑外伤、 脑血管疾病等所致记忆及思维功 能减退。 护肝 1葡醛内酯:50mg,用于急慢性肝 炎、肝硬化等肝脏疾病,食物或药 物中毒。 2甘草酸二铵:50mg适用于伴有 谷丙转氨酶升高的急、慢性病毒性 肝炎的治疗。 3复方益肝灵:21mg益肝滋肾, 解毒祛湿。 4水飞蓟宾:140mg中毒性肝脏损 害;慢性肝炎及肝硬化的支持治 疗。 补肾 1阿魏酸哌嗪:50mg肾小球疾病, 肾病综合症早期尿毒症以及冠心 病、脑梗塞、脉管炎等的辅助治疗。 2金水宝:0.33g补肺益肾、止咳 化痰。 3普乐安:补肾固本。 4固本咳喘:0.4g益气固表,健脾 补肾。 5百令胶囊:0.25g补肺益肾、止 咳化痰。 6强骨胶囊:0.25g,补肾,强骨, 止疼。 7心宝丸:60mg温补心肾,益气 助阳,活血通脉。 祛痰 1桉柠蒎肠溶软胶囊:0.3g,祛痰药 2盐酸氨溴索:30mg,用于急、慢 性呼吸系统疾病引起的痰液黏稠、 咳痰困难。 3乙酰半胱氨酸胶囊:0.2g,用于 大量粘痰阻塞而引起的呼吸困难, 4金水宝:0.33g,补肺益肾,止咳 化痰 5牛黄蛇胆口服液:10ml,清热, 化痰,止咳 6固本咳喘:0.4g,益气固表,用

巴戟的作用与功效

巴戟的作用与功效 巴戟天是一种常用的中草药,它具有多种作用,具有很好的功效。... 巴戟 目录 ?1、巴戟天的介绍 ?2、巴戟天的功效与作用 ?3、巴戟天的用药注意事项 1 巴戟天的介绍 巴戟天是一种中草药,为双子叶植物茜草科的巴戟天的干燥根。根呈扁圆柱形,略弯曲。它又称为巴戟、巴吉天、戟天、巴戟肉、鸡肠风、猫肠筋、兔儿肠等。性味:辛甘,主治阳痿遗精、宫冷不孕、月经不调、少腹冷痛、风湿痹痛、筋骨痿软。

巴戟天含有很多的药用成分,根中含有根含蒽醌类成分:如甲基异茜草素、甲基异茜草素-1-甲醚、大黄素甲醚、2-羟基羟甲基蒽醌、1-羟基蒽醌、1-羟基-2-甲基蒽醌、1,6-二羟基-2,4-二甲氧基蒽醌、1,6-二羟基-2-甲氧基蒽醌、2-甲基蒽醌;还含环烯醚萜成分,如水晶兰甙;又含葡萄糖,甘露糖,β-谷甾醇,棕榈酸。维生素,十九烷,24-乙基胆甾醇等。 根皮中含还原糖、甙、强心甙、黄酮、甾体三萜、氨基酸、有机酸;亦含钾、钙、镁等23种金属元素,其中15种为人体必需微量元素。根皮中铅含量较木心中为低,铁、锰、锌等16种微量元素含量较木心为高. 巴戟天的根扁圆柱形式圆柱形,略弯曲,长度不等,直径1-2cm,表面灰黄色或灰黄棕色,有的微带紫色,具纵皱及深陷的横纹,有的呈缢缩状或皮部横向断离而露出木部,形如鸡肠。质坚韧,折断面不平,皮部厚5-7mm,淡紫色,木部直径2-4mm。气微,味苦,略涩。 另外要注意,巴戟天与淫羊霍二者性味相近,均可补肾阳、强筋骨,祛风除湿。然淫羊霍辛、温之性较强,其辛散壮阳之力较峻,且温中寓燥,二药有一缓,一峻,一润、一燥之不同。所以在购买时要注意。 巴戟天的价格不会很贵,我国巴戟天产不足销时均从该国进口补充市场。近两、三年来广西市场上的巴戟天销势不断看好,价格也在不断看好、不断上扬,2003年每千克销价还在10-12元的低价位,2004年开始升至11-14元,2005年续升至14-16元,进入2006年10月份便升至20-25元,目前还在不断上升,平均的市场价格为每50克2元左右。 收起 2 巴戟天的功效与作用 巴戟天是一类中草药,其根可入药,味辛甘;温。归于肝经;肾经。主要用于补肾助阳;强筋壮骨;祛风除湿。临床主治:肾虚阳痿;遗精早泄;少腹冷痛;小便不禁;宫冷不孕;风寒湿痹;腰膝酸软;风湿肢气。主要表现在:

小鼠骨髓间充质干细胞的分离培养与鉴定

小鼠骨髓间充质干细胞的分离培养与鉴定 发表时间:2012-05-24T09:50:06.677Z 来源:《医药前沿》2012年第1期供稿作者:林芸1 蔡鹏威2 陈为民1 孟春3 [导读] 分离、培养符合实验要求的小鼠骨髓间充质干细胞并进行鉴定,为进一步的研究打基础。 林芸1 蔡鹏威2 陈为民1 孟春3 ( 1 福建医科大学省立医院临床学院血液科福建福州 3 5 0 0 0 1 ) ( 2 福建省立医院检验科福建福州 3 5 0 0 0 1 ) ( 3 福州大学生物工程学院福建福州 3 5 0 0 0 1 ) 【摘要】目的分离、培养符合实验要求的小鼠骨髓间充质干细胞并进行鉴定,为进一步的研究打基础。方法采用贴壁培养法培养小鼠骨髓间充质干细胞,观察细胞的形态及生长特性,并应用流式细胞仪对细胞表面抗原CD34、CD45、CD29、CD44进行表型鉴定。结果原代分离的间充质干细胞在接种后培养24小时,细胞开始贴壁,胞体呈圆形或多边形,培养第3-5天,细胞开始较紧密贴附壁上并开始有细胞呈梭形,培养第7天开始观察到细胞分裂,随着细胞数的增加,细胞的生长速度变快,逐渐成漩涡状排列,培养第12天贴壁细胞长满瓶底的80%,并融合成片。传代后细胞生长迅速,培养7天左右即可长满瓶底的80%。传至10代仍具有良好的增殖活性。流式细胞仪检测第4代及第8代MSCs细胞均不表达CD34、CD45,但表达CD29、CD44,纯度分别为73.8% 、91.65%。结论采用贴壁培养法可获得生长状态良好、增殖能力强的间充质干细胞,随传代数增加,其纯度增加,且该方法简单、实用。 【关键词】骨髓间充质干细胞细胞培养流式细胞术表型鉴定 【中图分类号】R392.2 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752(2012)01-0082-02 间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)起源于中胚层,具有高度增殖和自我更新的能力,有向骨、软骨、脂肪、血管内皮细胞、神经星型胶质细胞等分化的潜能[1],可分化成骨髓基质支持造血,并可分泌多种细胞因子促进造血干细胞增殖分化,同时它能抑制同种异体反应性T淋巴细胞,在同种异基因造血干细胞移植后的造血重建及免疫调节,预防移植物抗宿主病等方面有广阔的应用前景[2],但骨髓间充质干细胞含量极低,仅占骨髓单个核细胞的0.001%-0.010%[3],因此,培养出生长状态良好,足够数量的骨髓间充质干细胞是应用的前提。 1 材料和方法 1.1 材料 1.1.1 实验动物雄性,C57B L/6小鼠,清洁级,8周龄,体重18-20g,购于吴氏动物实验中心。 1.1.2 实验仪器与试剂低糖DMEM培养基(Gibco公司),特级胎牛血清(Hy c l o ne公司),胰蛋白酶(Si gma公司),青霉素钠(Si gma公司),链霉素(Si g m a公司),5%C O2培养箱(日本三洋公司),流式细胞仪(BD FA CSCalibur),倒置显微镜(OLYMPUS),大鼠抗小鼠单克隆抗体:CD29-PE、CD44-FITC、CD34-PE、CD45-FITC(BD公司)。 1.2 方法 1.2.1 小鼠骨髓间充质干细胞的分离及原代培养取8周龄雄性C57BL/6小鼠,颈椎脱臼法处死,75%酒精浸泡5分钟,取出双侧腿骨,置于装有P BS溶液的培养皿中小心剔除粘连于骨上的肌肉组织,移入装有预冷的含10%特级胎牛血清、青霉素钠100U/ml、链霉素0.1g/L 的低糖DMEM培养液的培养皿中,剪去腿骨两端,用1m l注射器抽取培养液反复冲洗骨髓腔,直至骨发白,收集冲洗液,反复吹打使细胞打散,静置10分钟,小心将上清移至灭菌的10m l离心管中,4℃3000r p m离心3分钟,弃上清,用含10%特级胎牛血清的L-DMEM培养液重悬细胞,反复吹打混匀,4℃3000r p m离心3分钟,弃上清,再用含10%特级胎牛血清的L-D M EM培养液重悬细胞,反复吹打混匀,4℃3000r p m离心3分钟,弃上清,再用含10%特级胎牛血清的L-DMEM培养液重悬细胞,反复吹打混匀,调整细胞密度为5×105个/ml接种于25cm2培养瓶中,置于5%C02,37℃,饱和湿度95%的培养箱中培养4小时后,轻轻吸出上清,并加入新鲜培养液。培养24小时后轻轻吹打,使未贴壁的细胞悬浮,吸出上清,加入新鲜的培养液,继续培养。以后每天换液1次,并观察细胞形态。 1.2.2 小鼠骨髓间充质干细胞的传代培养原代细胞生长接近瓶底的80%时,吸去上清,加入0.125%胰蛋白酶,37℃条件下消化并观察细胞形态,待细胞呈球形、不在粘连时吸弃胰酶,加入新鲜培养液重悬细胞,4℃3000r pm离心3分钟,弃上清,再加入培养液重悬细胞,反复吹打混匀,按1:2比例接种到新的培养瓶,置于5%C02,37℃,饱和湿度95%的培养箱中继续培养,仍然每天换液,直至细胞贴壁融合成片,接近瓶底80%时,重复以上操作,再次传代。 1.2.3 小鼠骨髓间充质干细胞的表型鉴定收获第4代及第8代生长良好的细胞,胰酶消化后,4℃1000r p m离心5分钟,弃上清,PBS洗涤细胞2次,每代细胞分别设2管,调节每管细胞数为5×105,分别加入C D29和C D44、CD34和CD45单抗,室温孵育30分钟,PBS洗涤细胞3次,流式细胞仪检测分析,同时用PBS作为一抗设置阴性对照。 2 结果 2.1 小鼠骨髓间充质干细胞的原代培养及扩增培养4小时后吸出上清,加入新鲜培养液后,大多数悬浮细胞被吸出,瓶中细胞数目明显减少,并且都呈现球转,折光率较强,原代分离的间充质干细胞在接种后培养24小时,细胞开始贴壁,胞体呈圆形或多边形,培养第3-5天,细胞开始较紧密贴附壁上并开始有细胞呈梭形,并不断长大、变长,但未观察到细胞分裂,培养第7天开始观察到细胞分裂(图1),随着细胞数的增加,细胞的生长速度变快,逐渐成漩涡状排列,培养第12天贴壁细胞长满瓶底的80%,并融合成片(图2)。传代后细胞生长迅速,培养7天左右即可长满瓶底的80%。传至10代仍具有良好的增殖活性。

相关主题