一种高效的酵母菌培养基的设计_肖波

的蛋白质已无表达(图4)。

2.2.2 乳杆菌1#传代过程中蛋白质表达的差异

乳杆菌1#在转至第20次时,一些分子质量大于66kD 的蛋白质停止表达,无条带显现(图5)。

2.2.3 乳杆菌2#传代过程中蛋白质表达的差异

分析结果显示,乳杆菌2#在传代过程中,从转管第15次开始出现一些分子质量大于66kD 的蛋白,并且还出现了一些从前没有表达的分子质量约为50kD 和一些小于等于40kD 的蛋白质(图6)

。

图6 乳杆菌2#SDS-PAGE 分析

其中M 为中分子质量蛋白Marker,1、2、3、4、5分别为转管第1、5、10、15、20次的全细胞蛋白样品。

Fi g.6 SDS-PAGE Analysis of Lac tobacillus 2#

3 讨论

微生物在多次转管培养过程中容易退化,遗传稳定性会发生变化,导致其生理生化特性的变化,从而菌种质量得不到保证。由于国内对引进DVS 乳酸菌种菌株的遗传稳定性尚未进行研究,传统的看法认为DVS 乳酸菌株不可传代,因而大大地限制了我国DVS 菌种的开发工作。RAPD 技术作为一种可靠、快速的方法目前已被广泛应用于菌种、菌株及物种鉴定等方面。Fani R 在对Azospirillu m 菌的研究过程中也应用了RAPD

技术,证实其是一种简单、快速、安全、有效的鉴别方法,并且可以作为评估菌株在外界环境中遗传稳定性的有力工具[7]。

本研究通过对菌株传代过程中形态观察、连续转管培养过程中的RAPD 和SDS-PAGE 实验表明,分离得到的乳球菌在常规培养条件下具有良好的遗传稳定性;乳杆菌1#具有较好的遗传稳定性;乳杆菌2#在常规培养条件下遗传稳定性较差,可能与培养条件不适合,在培养过程中发生了基因组的突变或丢失有关,亦或该菌株为基因工程菌株,本身具有较差的遗传稳定性,需要特殊的培养条件。

优良的乳酸菌菌株及良好的菌株遗传稳定性是开发和研制直投式酸奶发酵剂的必备条件。本研究在国内外首次成功地采用RAPD 方法分析了乳酸菌菌株在传代过程中的遗传稳定性,并且观察了三种不同菌株在传代过程中蛋白质表达的差异,为建立乳酸菌菌株增殖培养和保存方法,阐明乳酸菌种菌株的生物学特性,进而开发我国的直投式酸奶发酵剂提供了重要的研究基础。

参考文献:

[1]Si ngh SK,Upadhya y RC,Ka mal S,e t al .M us hroom cryopreservation and i ts ef -fec t on s urvival,yiel d and genetic stabi lity[J].Cryo L etters ,2004,25(1):23-32.[2]Woodburn M A,e t al .Random amplified polymorphic DNA fi ngerprinti ng of mosquito pathogenic and monpathogenic s train of Bacillus sphae ricus Int[J].Sys t.Bacteriol.M ,1995,45(2):212-217.

[3]Zhai Z,Wu Y,Engelmann F,et al .Genetic s tabili ty assess ments of plantlets regenerated from cryopreserved in vitro cultured grape and ki wi s hoot-tips us -ing RAPD[J].Cryo Letters ,2003,24(5):315-322.[4]Ankarloo J,Caugant D A,Ha nsen B M,et al .G eno me stability of Bacillus thuringiensis subsp.Israe le nsis is olates[J ].Cu rr Microbiol ,2000,40(1):51-56.[5]Kim WK,Mauthe W,Hausner G,e t al .Isolati on of high molecular weight D NA and double strandes RNAs from fungi[J].Can J Bot ,1990,68:1898-1902.

[6]J IN M iao,G AO X UE -Jun,LEI Lei,et al .Isolati on and identification of Lac tobac illus from bringed in directed -vat-set yoghurt c ulture [J ].China Dairy Industry ,2003,31(4):14-161

[7]Fani R,Bandi C,Bandon MG,e t al .RAPD fingerprinting is useful for iden -tification of Azas pirillum strai ns[J].Microb Release ,1993,1(4):217-2211

一种高效的酵母菌培养基的设计肖波1,王彩梅1,戚晓利

2

(1.烟台师范学院生命科学学院,山东烟台264025;2.佳木斯大学理学院生物系,黑龙江佳木斯154007)

摘要:为了设计一种高效酵母菌培养基,以便在需要酵母菌快速生长繁殖时,使用该类培养基,在较短时间内获得大量酵母菌,分别以LB 培养基、麦氏培养基作为最基本的培养基加入一定量的大豆提取物,配制成为一定浓度的培养基,并用于酵母菌的培养。根据酵母菌的生长情况,判定大豆提取物对酵母菌的生长繁殖是否有促进作用。实验证明,大豆提取物对酵母菌生长繁殖具有明显的促进作用,尤其是浓度为6%时作用最明显。结果表明,采用LB 或麦氏培养基加入6%的大豆提取物对酵母菌的生长促进作用最佳,是一种高效的酵母菌培养基。

关键词:酵母菌;培养基;大豆提取物;生长

中图分类号:Q93-335 文献标识码:A 文章编号:1004-311X(2005)02-0050-03

A Design of the High Valid Saccharomycete Culture

XIAO Bo 1,W ANG Cai-mei 1,QI Xiao-li 2

(1.Yantai Normal Uni versity,the Life Science College,Yantai 264025;

2.Jiamusi Universi ty,the Biol ogical Department of Science College,Ji amusi 154007,P 1R 1China)

Abstract:For Saccha r omycetes growing and breeding fas t When being needed,a high valid Saccharomycetes culture designed to be used,a large amount of Saccharomycetes were got wi thin shorter ti me.LB culture,Maxwell culture as the most basic cul ture separately,were compounded well on schedule wi th the composi tion,then the soybean extracts were added,respectively.The Saccharomycetes were cultivated on the culture wi th certain densi ty.According to the growth situation of the Saccha romycetes ,whether soybean extracts have facilitation to the growth of the Saccharomycetes was judged.The test of soybean extract -s growth to Saccharomycetes shows obvious facilitation to breed them,it is the most obvious when the soy -bean extract c s density is 6%.The result indicated the LB cul ture containing 6%soybean extract and the Maxwell culture containing 6%soybean extract are high valid culture.

Key words:Saccharomycete ;culture;soybean extract;growth

培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养物质,用以分离、培养、鉴定、保存各种微生物或积累其代谢产物[1]

。在自然界中,微生物种类繁多,营养类型多样,加之研究目的不同,所以培养基的配制方法和原料也就各不相同。一般情况下,不同种类的培养基中,都会含有水分、

碳源、氮源、能源、无机盐、生长因子等,只是相对含量会有差

第15卷第2期:502005年4月 生 物 技 术BIOTECHNOLOGY

Vol 115,No 12:50

Apr 12005

异。不同微生物对p H 的要求也不同,霉菌和酵母菌的培养基一般要求略偏酸性,而细菌和放线菌的培养基一般要求略偏碱性或称中性。酵母菌作为一种对人类有益的菌种,在很多时候,需要其快速生长繁殖,这就要求具备它所需要的各种最适条件,其中培养基营养丰富就是其一。目前国内外,大多采用麦氏培养基进行酵母菌的培养,尚未发现有改进方法报道。而本文针对培养基营养丰富这一条件,通过添加营养成分丰富的大豆提取物,使酵母菌在短时间内进行了大量的扩增。

收稿日期:2004-07-22;修回日期:2005-01-06

作者简介:肖波(1972-),男,硕士,讲师,从事分子生物学的教学与研究以及电镜分析等工作,发表论文4篇。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验材料

酿酒酵母(Saccharom ycetes cere visiae ),为本校微生物实验室保存菌种。1.1.2 试剂

胰蛋白胨,北京奥博星生物技术责任有限公司;酵母膏、酵母粉(Oxoid Ltd,Basingstoke Hampshire,England);葡萄糖,江苏盐城双源化工厂,分析纯;氯化钠、氯化钾,青岛江山化学试剂厂,分析纯;醋酸钠,天津市科密欧化学试剂开发中心,分析纯;大豆,北辰粮油公司。1.1.3 仪器

威N VL-8110型豆浆机,中山市小榄镇威的电器有限公司;WD700G 型微波炉,广东格兰仕集团有限公司;恒温震荡培养箱,太仓市实验设备厂。1.1.4 培养基基本成分[2]

LB 培养基(g/L):胰蛋白胨10g,酵母粉5g,NaCl 10g,调p H 至7.0。

麦氏培养基(g/L):葡萄糖1g,KCl 1.8g,酵母膏2.5g,醋酸钠8.2g,调p H 至7.0。1.2 方法

1.2.1 大豆提取物的制备

将干大豆浸泡24h 后,用微波炉煮熟,再用豆浆机制成豆浆,在本试验中大豆湿重为132g 制取豆浆1.3L,所得浓度为100g/L 。

1.2.2 液体接种培养基的配制

分别按上述两种培养基配方依次准确的称取各种成分放入500ml 锥形瓶中,酵母膏用玻璃棒挑取,放在小烧杯中称量,用热水溶化后倒入锥形瓶中。向锥形瓶中加入一定体积的蒸馏水,用玻璃棒搅匀,使药品完全溶解,调pH 至7.0。补充蒸馏水到所需体积。将配制好的培养基分装于50ml 的锥形瓶中,每瓶装液35ml,用橡皮筋和报纸封口。在0.103Mpa 下、121e 灭菌20min 。取灭过菌的培养基放入37e 的恒温培养箱中培养24h,以检查灭菌是否彻底。1.2.3 固体接种培养基的配制

配制方法同液体接种培养基,每瓶分装量为50ml,在灭菌前每瓶中加入0.75g 琼脂。灭菌后待冷至55e -60e 时,倒平板,每瓶倒两个培养皿。

1.2.4 液体标准培养基的配制

分别配制LB 培养基、麦氏培养基,配制方法同1.2.2。配好后,分别按表1的量分装于50ml 的锥形瓶中;然后,在灭菌前,按所需量加入大豆提取物。

表1 液体标准培养基配方

Table 1 Liquid standard culture c omponents

LB(ml)大豆提取物

(m l)

提取物浓度(%)

总量(ml)

麦氏(ml)

大豆提取物

(ml)

提取物浓度

(%)

总量(m l)35003535003534.30.723534.30.723533.6 1.443533.6 1.443532.9 2.163532.9 2.163532.2

2.8

8

35

32.2

2.8

8

35

1.2.5 固体标准培养基的配制

按上述LB 培养基、麦氏培养基配方配制,配制方法同1.2.2,配制好后分别按表2中的量分装于50ml 的锥形瓶中,每

瓶在灭菌前加入0.75g 琼脂和相应量的大豆提取物。灭菌后,冷却至55e -60e ,

倒平板。

图1 酵母菌在LB+不同浓度的大豆挖取物培养基上的生长状态比较

Fig 11 The Sacc haromycetes c ere visiae gro wth conditi ons among LB culture plus soybean e xtrac ts of various

concentration

图2 酵母菌在麦氏+不同浓度的大豆提取物培养基上的生长状态比较Fig 12 The Sac charomycete s cerevisiae growth conditions among Maxwell culture pl us s oybean extracts of various concentration

1.2.6 接种

1121611 固体培养基:用无菌接种环挑取单个菌落,在平板上进行三区划线,最后封口。放入37e 恒温培养箱中培养合适的时间后观察。

1121612 液体培养基:取一定量的接种液,用无菌水将接种培养液稀释适当的浓度,用显微镜直接计数法计数。然后根据计数情况将接种培养液分别用相应的LB 培养基或者麦氏培养基稀释合适的倍数后接种。并在空气浴振荡器中160r/min 、37e 下培养。

表2 固体标准培养基配方

Table 2 Solid s tandard cul ture components

LB(ml)大豆提取物

(ml)

浓度(%)琼脂(g)总量(ml)麦氏(ml)大豆提取物

(ml)

浓度(%)琼脂(g)总量(ml)50000.755050000.755049120.755049120.755048240.755048240.755047360.755047360.755046

4

8

0.75

50

46

4

8

0.75

50

1.2.7 细菌生长情况测定

固体培养基,主要用于菌落生长观察,以辅助判断菌体生长情况;液体培养基用于计数,采用显微镜直接计数法[2]进行计数,其具体过程为:

取适量种子液,用无菌水稀释,制成适当浓度的菌悬液。将清洁干燥的计数板盖上盖玻片,用毛细管加样。静止5min 后,将计数板置于显微镜的载物台上进行计数。1.3 数据统计

采用F 检验,P<0.05差异具有显著性,P<0.01差异极显著。

2 结果

2.1 体培养基菌落生长状况:如图1、图2。2.2 液体培养基菌体生长情况:计数如表3。

512005年4月 一种高效的酵母菌培养基的设计

表3 液体培养基菌体生长情况计数

Table 3 The Quanti ty of Saccharom yce te s cerevisiae in liquid culture

组别LB LB+提取物(2%)

LB+提取物(4%)

LB+提取物(6%)

LB+提取物(8%)

组别麦氏麦氏+提取物

(2%)

麦氏+提取物

(4%)

麦氏+提取物

(6%)

麦氏+提取物

(8%)

1

5.2 5.69.611.261 5.67.27.610.8 5.828.27.889.682

6.658.69.6 6.835 3.4

7.88 6.83 4.2 3.6 6.2

8.6 6.24 4.6 5.27.68.654 5.6 5.28.27.88.85

3.4

5.8

6

6.6

5.2

5

3.4

5.8

5

7.6

4.8

(注:实验数据均为对酵母菌培养48h 后计数所得)

表4 各组数据分析结果

Table 4 The analysis results of each group data

组LB LB+提取物(2%)LB+提取物(4%)

LB+提取物(6%)LB+提取物(8%)

组麦氏麦氏+提取物

(2%)

麦氏+提取物

(4%)

麦氏+提取物

(6%)

麦氏+提取物

(8%)

均数 5.53 5.567.88.62 6.2

均数 5.08 5.367.128.88 6.48

MS 组内

2.498

组间

10.87MS 组内

1.907

组间

11.66F0.05

F=4.35094

Fcrit=2.8660

F0.01

F=6.1149

Fcrit=4.430717

3 讨论

利用方差分析法[3]对各组数据进行分析的结果如表4。通过方差分析得知,在加大豆提取物的一系列培养基中,LB 培养基及其加大豆提取物的各培养基之间比较,F = 4.35904>Fcrit=2.8660,即P<0.05,LB 培养基与加大豆提取物的各浓度的培养基之间对促进酵母菌的快速生长繁殖来说具有明显差异。F=6.1149>Fcrit=4.430717,即P<0.01,麦氏培养基与加大豆提取物的各浓度的培养基之间对促进酵母菌的快速生长繁殖来说差异极显著。所以,大豆提取物的加入对促进酵母菌的快速生长繁殖具有明显的促进作用,而且,在LB 培养基和麦氏培养基中都是所加大豆提取物的浓度为6%时,对酵母菌的生长繁殖的促进作用最明显。因此,这类培养基的设计是可以采用的,也是可行的。

由于大豆提取物的制备比较简便,来源丰富,容易获得,同时,又由于它在促进酵母菌的快速生长繁殖具有明显的促进作用,所以,由大豆提取物加入LB 培养基或者加入麦氏培养基制成的这一类培养基,既适用于实验室快速的酵母菌菌种制作,也适用于工业生产中酵母菌菌种的快速制取,可以预见这类培养基具有广阔的应用前景。

参考文献:

[1]沈萍,范秀容,李广武.微生物学试验[M ]1第3版1北京:高等教育出版社,1999,6149.

[2]沈萍,范秀容,李广武.微生物学试验[M ]1第3版.北京:高等教育出版社,1999.690-692.

[3]盖钧镒.试验统计方法[M]1第3版.北京:中国农业出版社,2000,91132-125.

柔毛路边青挥发性成分研究

高玉琼1,3,王恩源2,赵德刚1,刘建华3,刘洋1

(1.贵州省农业生物工程重点实验室,贵州贵阳,550025;2.贵州神奇盛世制药有限责任公司,贵州贵阳550002;

3.贵州省生物技术研究开发基地,贵州贵阳550002)

摘要:目的:研究柔毛路边青(Herba gei )挥发油成分,为有效控制中成药蓝止安脑胶囊质量及中药二次开发提供理论依据。方法:利用水蒸气蒸馏法提取柔毛路边青挥发油,用GC/MS 进行分离测定,结合计算机检索技术对分离的化合物进行结构鉴定,应用色谱峰面积归一化法计算各成分的相对百分含量。结果:分离出59个成分,确定了43个化合物,占挥发油总量的87.51%。结论:柔毛路边青挥发油成分大于5%的为A -蒎烯10.73%,松金娘烷醇13.63%,松金娘烯醛7.19%,松金娘烯醇5.03%,二环[3,1,1,]-6,6-二甲基-3-亚甲基庚烷6.83%,丁子香酚15.82%。其中含量最高的物质为丁子香酚。

关键词:柔毛路边青;水蒸气蒸馏;挥发油;气相色谱-质谱联用

中图分类号:R284.1 文献标识码:A 文章编号:1004-311X(2005)02-0052-03

Studies on the Chemical Constituents of the Volatile Oil from Herba gei

GAO Yu-qiong 1,3

,WANG En-yuan 2

,ZHAO De-gang 1

,LI U Jian-hua 3

,LI U Yang

1

(1.Head Gui zhou Key Laboratory of Agricutural Bioengineering,Guiyang 550025;2.Guizhou Shenqi Shengs hi Pharmaceutical Company LTD.,Gui yang 550002;3.Guizhou Institute of Biotechnology Res earch and Devel opment,Guiyang 550002,P.R.of China)

Abstract:Objective :To study the chemical cons tituents of the volatile oil from Herba gei and give essential numbers for controlling quality and studies.Methods :The oil was obtai ned by steam distillation.The chemical compositi ons were separated and identified by GC/MS.The relative con -tents in the oil were determined by are a nomalization.Results :Fifty-nine components were detected in the volatile constituents of Caulis Lonicer -ae .;of which forty -three components representing 87.51%of the oil were characterized.C onclusion :The major constituents are A -pinene 10.73%,myrtanal 13.63%,myrtenal 7.19%,myrtenol 5.03%,bicydo[3,1,1]heptane,6,6-dimethyl-3-methylene 6.83%,eugenol 15.82%1The highest con ten t in the oil is eugenol.

Key words:H erba gei ;s team distillation;volatile oil;GC/MS

收稿日期:2004-10-09;修回日期:2005-01-09专项资金:贵州省跨世纪科技人才工程专项资金资助项目[/贵州生物

技术制药产业前期研究0,黔科合人专字(2000)9816号]

作者简介:高玉琼(1958-),女,硕士,在读博士生,副研究员,研究方

向为植物成分研究、新药研究与开发,获省市成果奖4项,发表论文10余篇;赵德刚(1961-),男,博士,博士生导师,教授,近五年主持完成国家、省基金项目等4项,发表论文20余篇,获省二等奖、四等奖各1项,部一等奖1项,2004年被评为全国模范教师。从事植物次生代谢物质生物合成相关基因克隆、植物生物反应器及安全利用转基因技术等研究。

柔毛路边青(H e r ba gei )为蔷薇科植物柔毛路边青Geum j a ponicum Thunb.var.chinese F.Bolle 的干燥全草,是贵州少数民族用药[1]

。生于深山山坡草地、田边、河边、灌丛及疏林下,分布于我国西南、华东、中南、陕西、甘肃、新疆等地区。性味苦、

辛,性寒。归肝、肾经[2,3]

。该品主要用于治疗头晕眩,是中药

蓝止安脑胶囊主要成分之一[4],为了更好地控制中药产品质

量,作者采用水蒸汽蒸馏法,利用气相色谱-质谱-计算机联用系统对柔毛路边青植物挥发性成分进行了定性定量研究,

获得59个组分,鉴定出43个化合物。采用该方法对柔毛路边青干燥全草进行挥发性成分研究属首次报道。1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验材料

柔毛路边青干燥全草,产自贵州遵义,由贵州大学生物科学与技术系植物学副教授关平鉴定为蔷薇科植物柔毛路边青Geum j a p onicum Thunb.va r.chinese F.Bolle 干燥全草。

第15卷第2期:522005年4月 生 物 技 术BIOTECHNOLOGY

Vol 115,No 12:52

Apr 12005

枯草芽孢杆菌发酵培养基的优化

枯草芽孢杆菌发酵培养基优化 作者姓名 专业 指导教师姓名 专业技术职务

目录 摘要 (1) ABSTRACT (2) 第一章绪论 (3) 1.1枯草芽孢杆菌简介 (3) 1.2枯草芽孢杆菌的应用 (3) 1.2.1枯草芽孢杆菌在工业酶生产中的应用 (3) 1.2.2枯草芽孢杆菌在生物防治领域中的应用 (3) 1.2.3枯草芽孢杆菌在微生物添加剂领域中的应用 (4) 1.2.4 枯草芽孢杆菌在医药方面的应用 (4) 1.2.5 枯草芽孢杆菌在水产中的应用 (4) 1.2.6枯草芽孢杆菌是微生物学与分子生物学研究的良好试验材 料 (5) 1.2.7枯草芽孢杆菌在环境保护方面的应用 (5) 1.3 国内外的研究现状与发展趋势 (6) 1.4研究的思路、目的及意义 (7) 第二章材料与方法 (7) 2.1实验材料 (7) 2.1.1 菌株鉴定 (7) 2.1.2 培养基 (7)

2.1.3 主要设备 (8) 2.2 培养基的优化 (9) 2.2.1 培养方法 (9) 2.2.2实验流程 (9) 2.2.3实验方法 (10) 2.2.4正交试验 (11) 第三章结果和分析 (11) 3.1 鉴定结果如下 (11) 3.2 枯草芽孢杆菌最优化培养基正交实验结果 (16) 3.3 pH变化曲线（以G18为例） (19) 3.4 实验总结 (25) 致谢 (27)

摘要 枯草芽孢杆菌是主要的饲用益生菌菌株，本论文以两株枯草芽孢杆菌G18和G21培养的延滞期和倍增时间为评价指标，通过三角瓶摇床培养，进行了两因素三水平的正交试验，对发酵培养基主要组分进行了优化，豆粕处理的蛋白酶加量2u/g 豆粕、5u/g豆粕、10u/g豆粕和玉米浆添加量0.5%、1.0% 、1.5% 做两个因素三水平的正交实验，研究表明：G18最佳培养基是：葡萄糖0.5%，淀粉3%，豆粕3%，玉米浆1.0%，破壁酵母0.5%，磷酸氢二钠0.2%，硫酸镁0.1%，硫酸锰0.01%，普通a淀粉酶2u/g淀粉，蛋白酶添加量10u/g豆粕。G21的最佳培养基是：葡萄糖0.5%，淀粉3%，豆粕3%，玉米浆1.5%，破壁酵母0.5%，磷酸氢二钠0.2%，硫酸镁0.1%，硫酸锰0.01%，普通a淀粉酶2u/g淀粉，蛋白酶添加量5u/g豆粕。[关键词] 枯草芽孢杆菌培养基优化正交试验

146种细菌-真菌-酵母培养基配方

146种培养基配方 ——2009年2月1日星期日by尛森蟲1. Acetobacter Medium (醋酸菌培养基) Glucose (葡萄糖) 100g Yeasst extract (酵母膏) 10g CaCO3 20g Agar (琼脂) 15g Distilled water (蒸馏水) 1000ml Adjust (调) pH to 6.8 适用范围：恶臭醋酸杆菌混浊变种 2. Nutrient Agar (营养肉汁琼脂) Pepton (蛋白胨) 5g Beef extract (牛肉膏) 30g NaCl 5g Agar (琼脂) 15g Distilled water (蒸馏水) Adjust (调) pH to 7.0-7.2 [Note]：When cultivation of Bacillus，5mg of to MnSO4.H2O may be added . It is favorable to promote spore formation . 适用范围：产气气杆菌、粪产碱杆菌、蜡状芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌蕈状变种、地衣形芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、多粘芽孢杆菌、尘埃芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌深黑变种、苏云金芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌蜡螟亚种(青虫菌)、苏云金芽孢杆菌戈尔斯德变种、苏云金芽孢杆菌猝倒亚种、产氨短杆菌、黄色短杆菌、谷氨酸棒状杆菌、北京棒杆菌、大肠埃希氏菌(大肠杆菌)、铜绿假单胞菌(绿脓杆菌)、凸形假单胞杆菌、荧光假单胞菌、弯曲假单胞菌、恶臭假单胞菌、假单胞杆菌、藤黄八叠球菌、亚黄八叠球菌、尿素八叠球菌、金黄色葡萄球菌、运动发酵单孢菌 3. Azotobacter Medium (固氮菌培养基) KH2PO4 0.2g K2HPO4 0.8g MgSO4.7H2O 0.2g CaSO4.2H2O0.1ｇ Na2MoO4.2H2O Trace(微量) Yeast axtract(酵母膏) 0.5g Mannitol(甘露醇) 20g FeCl3 Tract(微量) Distilled water (蒸馏水) 1000ml Agar (琼脂) 15g Adjust (调) pH to 7.2 适用范围：固氮菌、胶质芽孢杆菌 4. Corn Meal Medium (玉米粉培养基) Maize flour (玉米粉) 5g Peptone (蛋白胨) 0.1g Glucose (葡萄糖) 1g Tap water (自来水) 1000ml [Note]:Boil the mixture in autoclave at 121℃for 1 hr. distribute the medium into 18ⅹ18 mm tubes , each contains 10 ml of the li quid , then autoclave at 121℃for 1 hr . again (15磅蒸煮1小时,分装入18ⅹ18毫米试管,每管深度达6厘米。15磅再次灭菌15小时。) 5. Lactic-bacteria Medium I (乳酸菌培养基I ) Yeast extract (酵母膏) 7.5g Peptone (蛋白胨) 7.5g Glucose (葡萄糖) 10g KH2PO4 2g Tomato juice (西红柿汁) 100ml Tween (吐温) 80 0.5ml Distilled water (蒸馏水) 900ml pH 7.0 适用范围：植物乳杆菌(胚芽乳杆菌)、嗜热乳酸链球菌 6. Lactic-bacteria Midium Ⅱ(乳酸菌培养基Ⅱ) Lacto-casein peptone (乳酪蛋白胨) 10g Beef extract (蛋白胨) 10g Yeast extract (酵母膏) 5g Glucose (葡萄糖) 5g Tween (吐温) 80 1g K2HPO4 2g Na-acetate (醋酸钠) 5g Diamine citrate (柠檬酸二胺) 2g MgSO4.7H2O 0.2g MnSO4.H2O 0.05g Distilled water (蒸馏水) 1000m pH 6.5-6.8 适用范围：植物乳杆菌(胚芽乳杆菌) 7. Peotone Glucose Yeast extract Medium PGY (蛋白胨、酵母膏、葡萄糖培养基)

146种培养基配方

146种培养基配方 1、牛肉膏蛋白胨培养基（培养细菌用） 牛肉膏3g 蛋白胨5g 氯化钠10g 琼脂15~20g pH 7.0~7.2 水1000mL 2、2、高氏（Gause）1号培养基（培养放线菌用） 可溶性淀粉20g 硝酸钾1g 氯化钠0.5g 磷酸氢二钾0.5g 硫酸镁0.5g 硫酸亚铁0.01g 琼脂20g 水1000mL pH 7.2～7.4 配制时，先用少量冷水将淀粉调成糊状，倒入煮沸的水中，在火上加热，边搅拌边加入其他成分，溶化后，补足水分至1000mL。121℃灭菌20min。 查氏（Czapek）培养基（培养霉菌用） 硝酸钠2g 磷酸氢二钾1g 氯化钾0.5g 硫酸镁0.5g 硫酸亚铁0.01g 蔗糖30g 琼脂15~20g 水1000mL pH 自然 121℃灭菌20min。

4、马丁氏（Martin）琼脂培养基（分离真菌用） 葡萄糖10g 蛋白胨5g 磷酸二氢钾1g 七水合硫酸镁0.5g 1/3000孟加拉红 100mL （rose bengal，玫瑰 红水溶液） 琼脂15—20g pH 自然 蒸馏水800mL 112℃灭菌30min。 临用前加入0.03%链霉素稀释液100mL，使每毫升培养基中含链霉素30μg。 5、马铃薯培养基（简称PDA）（培养真菌用） 马铃薯200g 蔗糖（或葡萄糖）20g 琼脂15—20g pH 自然 培养基的配制：马铃薯去皮，切成块煮沸30min，然后用纱布过滤，再加糖及琼脂，熔化后补足水至1000mL。121℃灭菌30min。 6、麦芽汁琼脂培养基 培养基的配制： (1)、取大麦或小麦若干，用水洗净，浸水6—12小时，至15℃阴暗处发芽，上面盖纱布一块，每日早、中、晚淋水一次，麦根伸长至麦粒的两倍时，即停止发芽，摊开晒干或烘干，贮存备用。 (2)、将干麦芽磨碎，一份麦芽加四份水，在65℃水浴中糖化3—4小时，糖化程度可用碘滴定之。加水约20mL，调匀至生泡沫时为止，然后倒在糖化液中搅拌煮沸后再过滤。 (3)、将糖化液用4—6层纱布过滤，滤液如混浊不清，可用鸡蛋白澄清，方法是将一个鸡蛋白加水约20mL，调匀至生泡沫时为止，然后倒在糖化液中搅拌煮沸后再过滤。 (4)、将滤液稀释到5—6波美度，pH约6.4，加入2%琼脂即成。121℃灭菌30min。 7、无氮培养基（自生固氮菌、钾细菌）

培养基的配制

实验一培养基的配制 实验目的 1.明确培养基的配制原理。 2.掌握配制培养基的一般方法和步骤。 实验内容 学习细菌、放线菌、酵母菌及霉菌四大类微生物培养基的配制。 实验原理 培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质，用以培养、分离、鉴定、保存各种微生物或积累代谢产物。 各类微生物对营养的要求不尽相同，因而培养基的种类繁多。培养细菌常用牛肉膏蛋白胨培养基，培养放线菌常用高氏 I 号培养基，培养霉菌常用蔡氏培养基或马铃薯培养基，培养酵母菌常用麦芽汁培养基或马铃薯葡萄糖培养基。另外还有固体、液体、加富、选择、鉴别等培养基之分。在这些培养基中，就营养物质而言，一般不外乎碳源、氮源、无机盐、生长因子及水等几大类。琼脂只是固体培养基的支持物，一般不为微生物所利用。它在96 C 以上熔化成液体，而在 45 C左右开始凝固成固体。在配制培养基时，根据各类微生物的特点，就可以配制出适合不同种类微生物生长发育所需要的培养基。 培养基除了满足微生物所必需营养物质外，还要求有一定的酸碱度和渗透压。霉菌和酵母菌的pH 偏酸；细菌、放线菌的 pH 为微碱性。所以每次配制培养基时，都要将培养基的 pH 值调到一定的范围。 牛肉膏蛋白胨培养基配方 牛肉膏 3.0 g 蛋白胨10.0g NaCl 5.0g 水1000mL pH 高氏 7.4~7.6 I 号培养基配方 可溶性淀粉 20g NaCl 0.5g KNO 3 1g K 2HPO 4 ? 3H2O0.5g MgS04 7H20 0.5g FeS04 ? 7H20 0.01g 琼脂15—25g 水1000mL

pH 7.4~7.6 马铃薯培养基配方 马铃薯(去皮) 葡萄糖(或蔗糖) 琼脂水 自然 pH 200g 20g 15~25g 1000ml 察氏培养基配方 蔗糖30g NaNO3 2g K2HPO4 1g KCl 0.5g MgS04 7H2O FeS04 7H2O 0.5g 0.01g 琼脂15~25g 蒸馏水自然 pH 1000ml 实验器材 牛肉膏，蛋白胨， NaCl ，琼脂，1mol/LNaOH, 1mol/LHCI , KNO 3, K2HPO4? 3H2O, MgS04 ? 7H2O, FeS04 ? 7出0,马铃薯，蔗糖等。 试管，三角瓶，烧杯，量筒，玻棒，培养基分装器，天平，牛角匙， pH 试纸 (pH 5.5~9.0) ，棉花，牛皮纸，记号笔，麻绳，纱布等。 实验步骤 1．牛肉膏蛋白胨培养基配制方法 (1) 称量：按培养基配方比例依次推确地称取牛肉膏、蛋白胨、 NaCL 放人烧杯中。牛肉膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后倒入烧杯，也可按在称量纸上，称量后直接放入水中，这时如稍微加热，牛肉膏便会与称量纸分离，然后立即取出纸片。 蛋白胨很易吸湿，在称取时动作要迅速。另外，称药品时严防药品混杂，一把牛角匙用于一种药品，或称取一种药品后，洗净，擦干，再称取另一药品。瓶盖也不要盖错。 (2) 溶化：在上述烧杯中先加入少于所需要的水量，用玻棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解。将药品完全溶解后，补充水到所需的总体积，如果配制固体培养基时，将称好的琼脂放入己溶的药品中，再加热溶化，最后补足所损失的水分。 在琼脂溶化过程中，应控制火力，以免培养基因沸腾而溢出容器。同时．需不断搅拌．以防琼脂糊底烧焦。配制培养基时，不可用铜或铁锅加热溶化，以免离子进入培养基中，影晌细菌生长。 ⑶调pH 在未调pH前，先用精密pH试纸测量培养基的原始 pH ,如果偏酸，用滴管向培养基中逐滴加入

双歧杆菌与乳酸菌筛选培养基

BBL培养基 双歧杆菌选择性培养基成份 蛋白胨15.0g 酵母粉2.0g 葡萄糖20.0g 可溶性淀粉0.5g 氯化钠5.0g 5%半胱氨酸10.0mL 西红柿浸出液400.0mL 吐温80 1.0mL 肝提取液80.0mL 琼脂20.0g 蒸馏水520.0mL pH7.0 MRS培养基 乳酸细菌培养基（MRS） 蛋白胨10.0 g 牛肉膏10.0 g 酵母膏 5.0 g 柠檬酸氢二铵[（NH4）2HC6H5O7] 2.0 g 葡萄糖(C6H12O6·H2O) 20.0 g 吐温80 1.0 mL 乙酸钠（CH3COONa·3H2O） 5.0 g 磷酸氢二钾（K2HPO4·3H2O） 2.0 g 硫酸镁（MgSO4·7H2O）0.58 g 硫酸锰（MnSO4·H2O）0.25 g 琼脂18.0 g 蒸馏水 1 000 mL pH 6.2~6.6 当乳酸菌生长代谢出乳酸后，会使pH下降而使颜色由绿变为黄绿，也由于pH 值降低再加上抗生素及厌氧培养的作用，所以一般的微生物不容易在此培养基上生长，因此十分容易鉴别乳酸菌。 2005-03-10 08:08 消息引用收藏分享 奉上一篇实验，以供参考！ 厌氧菌的分离和培养 目前培养厌氧微生物的简便而又有效的技术包括有：厌氧箱培养技术；厌氧罐培养技术；厌氧袋培养技术；亨盖特厌氧滚管技术。这里介绍的是亨盖特厌氧滚管技术。

亨盖特厌氧滚管技术是美国微生物学家亨盖特（Hungate）于1950年首次提出并应用于瘤胃厌氧微生物研究的一种厌氧培养技术。以后这项技术又经历了几十年的不断改进，从而使亨盖特厌氧技术日趣完善，并逐渐发展成为研究厌氧微生物的一整套完整技术。而且多年来的实践已经证明它是研究严格、专性厌氧菌的一种极为有效的技术。 亨盖特厌样滚管培养技术不仅可用于有益厌氧菌如双歧杆菌等的分离、与活菌培养计数，还可以用于有害***菌（如酪酸菌）或病原菌（如肉毒梭状芽孢杆菌）的分离与鉴定。 1材料 1.1 样品 双歧酸奶（液体）、双歧杆菌制剂（固体）。 1.2 培养基 改良MRS培养基，PTYG培养基。 1.3 仪器和器具 亨盖特厌氧滚管装置一套，厌氧管，厌氧瓶，滚管机，定量加样器。 2 流程 铜柱除氧→预还原培养基→稀释用液制备→稀释样品→滚管→培养→计数 3方法 3.1铜柱系统除氧 铜柱是一个内部装有铜丝或铜屑的硬质玻璃管。此管的大小为40—400mm，两段被加工成漏斗装，外壁绕有加热带，并与变压器相连来控制电压和稳定铜柱的温度。铜柱两端连接胶管，一端连接气钢瓶，一端连接出气管口。由于从气钢瓶出来的气体如N2、CO2和H2等通常都含有O2，故当这些气体通过温度约360℃的铜柱时，铜和气体中的微量O2化合生成CuO，铜柱则由明亮的黄色变为黑色。当向氧化状的铜柱通入H2时，H2与CuO中的氧就结合形成H2O，而CuO又被还原成了铜，铜柱则又呈现明亮的黄色。此铜柱可以反复使用，并不断起到除氧的目的。当然H2源也可以由氢气发生器产生。 3.2 预还原培养基及稀释液的制备

酵母表达培养基介绍

毕赤酵母表达的培养基配制［5］ 2.1 LB（Luria－Bertani）培养基： Trypton l％ Y east Extract 0.5％ NaCl l％ PH 7.0 制作平板时加入2％琼脂粉。121℃高压灭菌20min。可于室温保存。用于培养pPICZαA原核宿主菌TOP10F’时可加入Zeocin 25ug / ml。 2.2 LLB（Low Salt LB）培养基： Trypton l％ Y east Extract 0.5％ NaCl 0.5％ PH 7.0 制作平板时加入2％琼脂粉。121℃高压灭菌20min。可于室温保存数月。用于培养pPICZαA 原核宿主菌TOP10F’时，加入Zeocin 25ug / ml，可以4℃条件下保存1～2周。 2.3 YPD （又称YEPD） Y east Extract Peptone Dextrose Medium，（Y east Extract Peptone Dextrose Medium，酵母浸出粉/胰蛋白胨/右旋葡萄糖培养基） Trypton 2% dextrose (glucose) 2% +agar 2% +Zeocin 100 μg/ml 液体YPD培养基可常温保存；琼脂YPD平板在4℃可保存几个月。加入Zeocin 100ug / ml，成为YPDZ培养基，可以4℃条件下保存1～2周。 2.4 YPDS + Zeocin 培养基（Y east Extract Peptone Dextrose Medium）： yeast extract 1% peptone 2% dextrose (glucose) 2% sorbitol （山梨醇）1 M +agar 2% + Zeocin 100 μg/ml 不管是液体YPDS培养基，还是YPDS + Zeocin 培养基，都必须存放4℃条件下，有效期1～2周。 2.5 MGY Minimal Glycerol Medium （最小甘油培养基） （34%YNB；1%甘油；4*10-5%生物素）。将800ml灭菌水、100ml的10*YNB母液、2ml 的500*B母液和100ml的10*GY母液混匀即可，4℃保存，保存期为2个月。 2.6 MGYH Minimal Glycerol Medium + Histidine （最小甘油培养基+ 0.004%组氨酸） 在1000ml的MGY培养基中加入10ml的100*H母液混匀，4℃保存，保存期为2个月。2.7 RD Regeneration Dextrose Medium （葡萄糖再生培养基） （含有：1mol/L的山梨醇；2%葡萄糖；1.34%YNB；4*10-5%生物素；0.005%氨基酸） 1. 将186g的山梨醇定容至700ml，高压灭菌；

酵母双杂交培养基

10×DO（-His，-Leu，-Trp，-Ura）溶液： 不含-His，-Leu，-Trp，-Ura等成分的10×Dropout溶液： 氨基酸10×浓度（mg/L）称重(g)（1 L）称重(g)（500 mL）L-Isoleucine 异亮氨酸300 0.3 0.15 L-Valine 缬氨酸1500 1.5 0.75 L-Arginine HCl 精氨酸200 0.2 0.1 L-Lysine HCl 赖氨酸300 0.3 0.15 L-Methionine 蛋氨酸200 0.2 0.1 L-Phenylalanine 苯丙氨酸500 0.5 0.25 L-Threonine 色氨酸2000 2.0 1.0 L-Tyrosine 酪氨酸300 0.3 0.15 加ddH2O定容后4℃保存 100×氨基酸储备液： 每100ml溶液中分别含有下列成分，配制后保存于4℃氨基酸储备液100 mL中含量 100×His L-histidine HCl monohydrade 200 mg 100×Trp L-Trytohan 200 mg 100×Leu L-eucine 1 g 100×Uracil 200 mg 100×Adenine 400 mg SD 培养基： Yeast Nitrogen Base 0.17 g (without amino acid and Ammonium Sulfate) Ammonium sulfate 0.5 g 葡萄糖 2 g 10×DO(-His –Leu –Trp –Ura)10 ml 加ddH2O定容至100ml。如果配固体培养基加入2％的琼脂粉。 SD相应的缺失培养基：加上除了缺失的氨基酸之外的其他的氨基酸储备液，100 ml S D+1 ml 100×氨基酸储备液。 例如：SD/-Leu：SD+100×His 、100×Trp、100×Uracil、100×Adenine各1 ml。

实验方案(双歧杆菌的分离)

1 双歧杆菌的分离 1.1 样品 取出生后20天母乳喂养健康婴儿粪便。 1.2 培养基 根据目前的双歧杆菌选择性培养基，以及X-Gal在这方面的应用。选择使用NPNL培养基，在其基础上添加X-Gal。 1.2.1 缓冲蛋白胨水溶液（BP） 成份：蛋白胨10g 磷酸氢二钠2g 葡萄糖5g 磷酸二氢钾2g 氯化钠5g 蒸馏水1000ml 制法：精确称取各种试剂，加人到1000ml的蒸馏水中，加热溶化后分装于250ml的三角瓶中，每瓶90ml，121℃，杀菌15min后置4℃的冰箱中备用。 1.2.2 选择性改良NPNL培养基（苏世彦） 成份：酵母膏5g 淀粉0.5g 蛋白胨10g L-半胱氨酸0.5g 胰蛋白胨5g 溶液A 10ml 大豆蛋白胨5g 溶液B 5ml 葡萄糖10g 溶液C 50ml 乳糖3g 琼脂 15g 吐温80 1g pH 7.2 牛肝提取液150ml 制法：将各成分准确量取后，分别加热溶化，混合摇匀后分装，121℃杀菌10min，备用。 溶液A：K2HPO4 10g、KH2PO4 10g溶于蒸馏水100ml。 溶液B：FeSO4·7H2O 0.2g、MgSO4·7H2O 4g、MnSO4·4H2O 0.135g、NaCl 0.2g溶于蒸馏水100ml。 溶液C：丙酸钠30g、硫酸巴龙霉素400mg、硫酸新霉素200mg、NaCl 6g溶于蒸馏水1000ml。 1.2.3 NPNL培养基(孙雪) 培养基成分及用量：牛肉浸汁粉(oxoid)3g，蛋白胨10g，胰蛋白酶5g，

植胨3g，酵母浸出汁5g，肝浸出汁150ml，葡萄糖10g，可溶性淀粉0.5g，溶液A 10ml，溶液B 5ml，吐温80 1g，盐酸半胱氨酸0.5g，琼脂15g，蒸馏水815ml，X-Gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D- 半乳糖苷)60mg。pH 7.2，121℃，15min 高压灭菌。 溶液A：K2HPO425g，KH2PO425g，蒸馏水250ml。 溶液B：MgSO4·7H2O 0.5g，FeSO4·7H2O 0.5g，NaCl 0.5g，MnSO40.337g，蒸馏水250ml，硫酸新霉素100μg/ml，硫酸巴龙霉素200μg/ml，萘啶酮酸15μg/ml，氯化锂3mg/ml。 1.3 分离方法 取成年人的粪便1g，放人含有9ml缓冲蛋白胨水溶液中，用液枪充分混匀，制成1:10的稀释液，摇匀后取1ml注人含有9ml缓冲蛋白胨溶液中制成1:100的稀释液，在此基础上作10-3~10-9与的稀释，由于肠道中双歧杆菌的菌数一般在109左右，所以取10-4~10-9稀释液用倾注法倒平板，每个稀释液都各取1ml分别注人到两只无菌平皿中，每个稀释度重复3个平板。待培养基凝固后倒置，将温度调至37℃进行厌氧培养48h。用缓冲蛋白胨水溶液做稀释液可以有效地保护双歧杆菌的存活，避免受外界环境因素的影响。 1.4 分离培养 在加人样品稀释液的平皿中，分别注人适量冷却至50℃左右的选择性改良NPNL培养基，然后放人37℃的恒温培养箱中厌氧培养1.4.1 培养特性与镜检特性 双歧杆菌在改良NPNL培养基上，经过厌氧培养以后，菌落直径1-2cm，圆形、凸起，表面光滑，边缘整齐，乳白色，粘稠湿润。经革兰氏染色后镜检，双歧杆菌为革兰氏阳性无芽抱杆菌，呈多形性、典型的双歧杆菌为V字型或Y型；也有直、弯、棒状、匙形等多种形态，排列成单、双、短链、X、Y、V 或栅状；其大小为2-8×0.4-0.6μm，不具英膜和鞭毛，无运动性。 培养48h 后，平板上菌落呈现深蓝色、白色、浅蓝色三种颜色。

酵母菌霉菌常用培养基的配方

酵母菌、霉菌常用培养基得配制 一、目得要求 了解合成培养基、半合成培养基与天然培养基得配制原理、学习与掌握麦芽汁培养基、马铃薯葡萄糖培养基、豆芽汁葡萄糖培养基与察氏培养基得配制方法。 二、基本原理 麦芽汁培养基与马铃薯葡萄糖培养基被广泛用于培养酵母菌与霉菌。马铃薯葡萄糖培养基有时也可用于培养放线菌。豆芽汁葡萄糖培养基也就是培养酵母菌及霉菌得一种优良培养基。察氏培养基主要用于培养霉菌观察形态用。麦芽汁培养基为天然培养基,马铃薯葡萄糖培养基与豆芽汁葡萄糖培养基二者均为半合成培养基,而察氏培养基则为合成培养基。培养基配方中出现得自然pH系指培养基不经酸、碱调节而自然呈现得ｐH。 三、实验材料 (一)药品 葡萄搪、蔗糖、NaN03、K2HＰ０4、KCl、ＭｇSO4·７H2O,ＦｅＳ04、琼脂。(二)仪器 天平、高压蒸汽灭菌锅。 (三)玻璃器皿 移液管、试管、锥形瓶、烧杯、量筒、培养皿、玻璃漏斗等。 (四)其她物品 药匙、ｐH试纸、称量纸、记号笔、棉花、纱布、线绳、塑料试管盖、牛皮纸、报纸、新鲜麦芽汁、黄豆芽、马铃薯等。 四、实验内容 (一)麦芽汁培养基得配制 １、培养基成分 新鲜麦芽汁一般为1０—15波林、 2.配制方法

(1)用水将大麦或小麦洗净,用水浸泡６—1２h,置于15℃阴凉处发芽,上盖纱布,每日早、中、晚淋水一次,待麦芽伸长至麦粒得两倍时,让其停止发芽,晒干或烘干,研磨成麦芽粉,贮存备用。 (２)取一份麦芽粉加四份水,在６5℃水浴锅中保温3-4h,使其自行糖化,直至糖化完全(检查方法就是取0。5mｌ得糖化液,加２滴碘液,如无蓝色出现,即表示糖化完全)。 (3)糖化液用4-6层纱布过滤,滤液如仍混浊,可用鸡蛋清澄清(用一个鸡蛋清,加水20m1,调匀至生泡沫,倒入糖化液中,搅拌煮沸,再过滤)、 (4)用波美比重计检测糖化液中糖浓度,将滤液用水稀释到１0—15波林,调ｐH 至6、4。如当地有啤酒厂,可用未经发酵,未加酒花得新鲜麦芽汁,加水稀释到1０—1５波林后使用。 (5)如配固体麦芽汁培养基时,加入2%琼脂,加热融化,补充失水。 (６)分装、加塞、包扎、 (7)高压蒸汽灭菌100 Pa灭菌20 ｍｉｎ。 (二)马铃薯葡萄糖培养基得配制 1、培养基成分 马铃薯20ｇ 葡萄糖 2 g 琼脂1、5—２g 水100mｌ自然ｐH 2.配制方法 (1)配制２0％马铃薯浸汁取去皮马铃薯200g,切成小块,加水１000m１。80℃浸泡lh,用纱布过滤,然后补足失水至所需体积、10０Pａ灭菌２0 min。即成20％马铃薯浸汁,贮存备用、

培养基配方

1、PDA培养基（用于分离、培养植物内生真菌）： 马铃薯（去皮）200g , 葡萄糖20g , 蒸馏水1000 ml , 琼脂粉15g。用于分离内生真菌时在倒平板之前加入已过滤除菌的氯霉素和硫酸链霉素各50 μ g/ml，用于抑制细菌的生长。2、NA培养基（用于分离、培养植物内生细菌）： 牛肉膏3g，蛋白胨5g，葡萄糖2.5g，琼脂粉15g，蒸馏水1000ml，pH 7.0。用于分离内生细菌时在倒平板之前加入已过滤除菌的放线菌酮50μg/ml，用于抑制真菌生长。115℃，20min 灭菌。 3、LB培养基：胰蛋白胨10 g，酵母提取物5 g，NaCl 10 g 蒸馏水至1000 mL,pH=7.0； 4、DSM1培养基：磷酸三钾26.631 g（pH=7.0)，二水柠檬酸三钠9.999 g，硫酸镁0.2465 g，硫酸铵19.821 g，牛肉膏3 g，NaCl 5 g，胰蛋白胨10 g，葡萄糖1 g 蒸馏水至1000 mL，pH=7.0； 5、DSM2培养基：磷酸三钾26.631 g（pH=7.0)，二水柠檬酸三钠9.999 g，硫酸镁0.2465 g，硫酸铵19.821 g，牛肉膏3 g，NaCl 5 g，细菌学蛋白胨10 g，葡萄糖1 g 蒸馏水至1000 mL,pH=7.0； 6、Msgg培养基：磷酸钾5 mmoL/L(pH7.0)，MOPs 100 mmoL/L（pH7.0），MgCl2 2 mmoL/L，CaCl2 700 mmoL/L，MnCl2 50 μM，FeCl3 50 μM，ZnCl2 1 μM，VB1 2 μM，甘油0.5 %，谷氨酸0.5 %，色氨酸50 μg/mL，苯丙氨酸50 μg/mL，蒸馏水1000 mL，pH 7.0。 7、N%NA培养基：牛肉膏3.0 g，细菌学蛋白胨10 g，NaCl 5 g，琼脂粉N*10 g， 8、BGM1培养基：牛肉膏3 g，胰蛋白胨10 g，NaCl 5 g，磷酸三钾26.631 g（pH7.0），二水柠檬酸三钠9.999 g，硫酸镁0.2465 g，硫酸铵19.821 g，葡萄糖1 g，蒸馏水1000 mL，pH 7.0。 9、BGDM培养基：牛肉膏3 g，细菌学蛋白胨10 g，NaCl 5 g，磷酸三钾26.631 g（pH7.0），二水柠檬酸三钠9.999 g，硫酸镁0.2465 g，硫酸铵19.821 g，葡萄糖1 g ，蒸馏水1000 mL，pH 7.0。 10、镰刀菌酸配制：10 mM标准品FA储存液（40 μg/mL）的配制：精密称取0.1792 g定溶于18%（v/v）谱纯甲醇100L，用1N NaOH 调节pH到6.5。换算的质量浓度（w/v）=1792 μg /mL。 11、LB培养基：胰蛋白胨1 g，酵母提取物0.5 g，NaCl 1 g，琼脂1.5 g，水100 mL，pH7.0, 121℃20 min。 24、PCR产物的电泳 主要仪器： 电泳仪、电泳槽、凝胶成像系统、水浴锅、微波炉、离心机等。 主要实验试剂： 1、50×TAE （2 M Tris，1M 醋酸，50 mM EDTA（pH8.0）） 2、10×上样缓冲液（loading buffer） 3、分子量标准DNA Marker 4、琼脂糖 5、EB （溴化乙锭）（黑暗保存） 25、琼脂糖凝胶电泳检测基因组DNA 三羟甲基氨基甲烷（Tris）、硼酸、乙二胺四乙酸（EDTA）、溴酚蓝、蔗糖、琼脂糖、溴化乙锭、DNA marker（λHindIII digest，自带6×loading Buffer，在103房间海尔冰箱中存放）

培养基配方及配制方法

培养基配方 1 斜面菌种保存培养基 1.1PDA培养基（马铃薯葡萄糖琼脂培养基） 称取200g马铃薯，洗净去皮切碎，加水1000ml煮沸0.5h，纱布过滤，滤液补足1000ml，再加15g葡萄糖和15-20g琼脂，充分溶解后趁热纱布过滤，分装试管，每试管约5-10ml（视试管大小而定），121℃灭菌20分钟左右后取出试管摆斜面，冷却后贮存备用。 1.2麦芽汁琼脂培养基 麦芽汁的制备：干麦芽首先进行粉碎（不能太粗，也不必太细。太粗影响糖化效率，过细影响过滤速度），按麦芽重量的3~4倍加水，搅拌均匀后，37℃左右浸泡1小时，然后缓缓加温至55~63℃（在升温过程中应不断搅拌使温度均匀），保温4~6小时（用0.02摩尔/升碘液测定为黄色至无色时），糖化结束。在糖化过程中，应每小时搅拌一次。取过滤后的清液，加1.8%琼脂，分装试管，每试管约5-10ml （视试管大小而定），121℃灭菌20分钟左右后取出试管摆斜面，冷却后贮存备用。 2 基菌落总数检测 2.1平板计数琼脂培养基 将胰蛋白胨5.0g、酵母浸膏2.5g、葡萄糖1.0g、琼脂15.0g 加入蒸馏水1000ml中，煮沸溶解后，调pH，然后在121℃下灭菌15min，取出，稍微冷却后，带热倒入培养皿中。 3志贺氏菌检测

3.1 GN增菌液 成分：胰蛋白胨：20g，葡萄糖：1g，甘露醇：2g，柠檬酸钠：5g，去氧胆酸钠0.5g，磷酸二氢钾4g，磷酸氢二钾1.5g，氯化钠5g，蒸馏水1000ml。pH7.0 制法：将上述物品加入蒸馏水中，加热溶解煮沸，调pH为7.0，分装，在115℃高压灭菌15min。 3.2 HE琼脂 成分：胨：12g，牛肉膏3g，乳糖12g，蔗糖12g，水杨素2g，胆碱20g，氯化钠5g，琼脂18~20g，蒸馏水1000ml0，0.4%溴麝香草酚蓝溶液16ml，Andrade指示剂20ml.，甲液20ml，乙液20ml。pH7.5 制法：将上述前七种成分加入400ml蒸馏水中作为基础液，将琼脂加入到600ml蒸馏水中加热溶解，加入甲液乙液到基础液中，调pH，再加入指示剂，并与琼脂液合并，待冷却至50~55℃，倾注浇平板。注1：此培养基不能高温灭菌。 注2：甲液的配置： 硫代硫酸钠：34g，柠檬酸铁钠：4g，蒸馏水：100ml。 注3：乙液的配置： 去氧胆酸钠：10g，蒸馏水：100ml。 注4：Andrade指示剂的配置： 酸性复红：0.5g，1mol/l的氢氧化钠溶液：16ml，蒸馏水：100ml。将酸性复红溶解于蒸馏水中，加入氢氧化钠溶液，数小时后如复红褪色不全，再加氢氧化钠溶液1~2ml。

毕赤酵母常用培养基与载体

毕赤酵母常用培养基与载体 一、毕赤酵母表达常用载体： 典型的巴斯德毕赤酵母表达载体载体包含醇氧化酶－1（AOX1）基因的启动子和转录终止子（5'AOX1和3'AOX1），它们被多克隆位点（MCS）分开，外源基因可以在此插入。此载体还包含组氨醇脱氢酶基因（HIS4）选择标记及3'AOX1区。当整合型载体转化受体时，它的5'AOX1和3'AOX1能与染色体上的同源基因重组，从而使整个载体连同外源基因插入到受体染色体上，外源基因在5'AOX1启动子控制下表达。毕赤酵母本身不分泌内源蛋白，而外源蛋白的分泌需要具有引导分泌的信号序列。而由89个氨基酸组成的酿酒酵母的分泌信号—α交配因子(α-factor)引导序列已经成功地引导了几种外源蛋白的分泌。分泌表达载体主要有：pPIC9，pPIC9K，pHIL-S1，pPICZα A，pYAM75P等。胞内表达载体主要有：pHIL-D2，pA0815，pPIC3K，pPICZ，pHWO10，pGAPZ，pGAPZa(Invitrogen)，pPIC3.5K等。工程菌株Y11430，MG1003，GS115 （AOX1），KM71，SMD1168。毕赤酵母宿主菌常用的有GS115和KM71两种，都具有HIS4营养缺陷标记。其中，GS115茵株具有AOX1基因，是Mut＋，即甲醇利用正常型；而KM71菌株的AOX1位点彼ARG4基因插入，表型为Muts，即甲醇利用缓慢型，两种菌株都适用于一般的酵母转化方法。多拷贝表达菌株的获得方式：与自主复制的质粒型表达载体不同，整合型表达载体的拷贝数可以有很大的变化。含多拷贝外源基因的表达菌株合成蛋白的量也较多。体内整合可通过高遗传霉素抗性，筛选可能的多拷贝插入；而体外整合可通过连接产生外源基因的串联插入。多拷贝表达菌株的获得方式有两种：一种是利用SDS-PAGE 电泳、免疫杂交或菌落点杂交方法在大量的转化子中进行自然筛选。得到产量高的表达菌株。另一种在转化前将多个表达盒拷贝插入到单个载体中，而后再通过交换整合到受体染色体上。表达蛋白纯化方法：酵母系统表达的蛋白一般都具有活性，所以都采用较温和的纯化方式来纯化目的蛋白，分泌型表达的蛋白有利于纯化，可用硫酸铵沉淀，然后用离子交换，凝胶过滤层析，疏水层析等方法进一步纯化。具体的方法和操作应按所处理的目的蛋白的性质选择。 二．毕赤酵母表达的培养基配制和用途 2.1 LB（Luria－Bertani）培养基： Trypton l％ Yeast Extract 0.5％ NaCl l％ PH 7.0 制作平板时加入 2％琼脂粉。121℃高压灭菌 20min。可于室温保存。用于培养pPICZ αA原核宿主菌TOP10F’时可加入Zeocin 25ug / ml。 2.2 LLB（Low Salt LB）培养基： Trypton l％ Yeast Extract 0.5％

酵母培养基的配置

(一)麦芽汁培养基的配制 1．培养基成分 新鲜麦芽汁一般为10-15波林。 2．配制方法 (1)用水将大麦或小麦洗净，用水浸泡6-12h，置于15℃阴凉处发芽，上盖纱布，每日早、中、晚淋水一次，待麦芽伸长至麦粒的两倍时，让其停止发芽，晒干或烘干，研磨成麦芽粉，贮存备用。 (2)取一份麦芽粉加四份水，在65℃水浴锅中保温3-4h，使其自行糖化，直至糖化完全(检查方法是取0.5ml的糖化液，加2滴碘液，如无蓝色出现，即表示糖化完全)。 (3) 糖化液用4-6层纱布过滤，滤液如仍混浊，可用鸡蛋清澄清(用一个鸡蛋清，加水20 m1，调匀至生泡沫，倒入糖化液中，搅拌煮沸，再过滤)。 (4)用波美比重计检测糖化液中糖浓度，将滤液用水稀释到10-15波林，调pH至6．4。如当地有啤酒厂，可用未经发酵，未加酒花的新鲜麦芽汁，加水稀释到10-15波林后使用。 (5)如配固体麦芽汁培养基时，加入2％琼脂，加热融化，补充失水。 (6)分装、加塞、包扎。 (7)高压蒸汽灭菌100 Pa灭菌20 min。 （二)马铃薯葡萄糖培养基的配制 1、培养基成分 马铃薯20g 葡萄糖 2 g 琼脂 1.5-2g 水100ml 自然pH 2．配制方法 (1)配制20％马铃薯浸汁取去皮马铃薯200g，切成小块，加水1000m1。80℃浸泡lh，用纱布过滤，然后补足失水至所需体积。100 Pa灭菌20 min。即成20％马铃薯浸汁，贮存备用。 （2)配制时，按每100 m1马铃薯浸汁加入2g葡萄糖，加热煮沸后加入2g琼脂，继续加热融化并补足失水。 (3)分装、加塞、包扎。 (4)高压蒸汽灭菌100 Pa灭菌20 min。 (三)豆芽汁葡萄糟培养基的配制 1．培养基成分 黄豆芽10g 葡萄糖5g 琼脂 1.5-2g 水100ml 自然pH 2．配制方法 (1)称新鲜黄豆芽10g，置于烧杯中，再加入100 m1水，小火煮沸30 min，用纱布过滤，补足失水，即制成10％豆芽汁。

双歧杆菌的培养

双歧杆菌的培养和分离 双歧杆菌是专性厌氧菌，对氧气非常敏感，因此，双歧杆菌的分离、培养及活菌计数的关键是提供无氧和低氧化还原电势的培养环境。 双歧杆菌的最适生长温度37℃~41℃，最低生长温度25℃~28℃，最高43℃~45℃。初始最适pH 6.5~7.0，在pH4.5~5.0或pH 8.0~8.5不生长。其细胞呈现多样形态，有短杆较规则形、纤细杆状具有尖细末端形、球形、长杆弯曲形、分枝或分叉形、棍棒状或匙形。单个或链状、V形、栅栏状排列，或聚集成星状。革兰氏阳性，不抗酸，不形成芽孢，不运动。双歧杆菌的菌落光滑、凸圆、边缘完整、乳脂至白色、闪光并具有柔软的质地。双歧杆菌是人体内的正常生理性细菌，定殖于肠道内，是肠道的优势菌群，占婴儿消化道菌丛的92%。该菌与人体终生相伴，其数量的多少与人体健康密切相关，是目前公认的一类对机体健康有促进作用的代表性有益菌。该菌可以在肠粘膜表面形成一个生理性屏障，从而抵御伤寒沙门氏菌、致泻性大肠杆菌，痢疾致贺氏菌等病原菌的侵袭，保持机体肠道内正常的微生态平衡；能激活巨噬细胞的活性，增强机体细胞的免疫力；能合成B族维生素、烟酸和叶酸等多种维生素；能控制内毒素血症和防治便秘，预防贫血和佝偻病；可降低亚硝胺等致癌物前体的形成，有防癌和抗癌作用；能拮抗自由基、羟自由基及脂质过氧化，具有抗衰老功能。 双歧杆菌的培养方法很多，如厌氧箱法、厌氧袋法、厌氧罐法。本实验介绍的是一种简便的试管培养法——亨盖特厌氧滚管技术该技术的优点是：预还原培养基制好后，可随时取用进行试验；任何时间观察或检查试管内的菌都不会干扰厌氧条件。 近年来兴起的一种新的RAPD等分子生物学技术对双歧杆菌进行基因指纹图谱的构建，分析不同双歧杆菌种间存在的同源性和多态性；RAPD技术也可用于双歧杆菌菌种鉴定及分型。一般来讲，我们都应用适合鉴定所有厌氧菌的方法，主要包括双歧杆菌特定酶的检测、乙酸、乳酸等有机酸的测定、糖发酵试验和其他相关指标等。 一、实验方法 1、铜柱系统除氧 2、预还原培养基及稀释液的制备 制作预还原培养基及稀释液时，先将配置好的培养基和稀释液煮沸驱氧，而后用半定量加样器趁热分装到螺口厌氧试管中，一般琼脂培养基装4.5～5.0mL，稀释液装9mL，并插入通N2气的长针头以排除O2。此时可以清楚的看到培养基内加入的氧化还原指示剂—刃天青由蓝到红最后变成无色，说明试管内已成为无氧状态，然后盖上螺口的丁烯胶塞及螺盖，灭菌备用。 3、分离 （1）编号 取五支无菌水试管，分别用记号笔标明10-1、10-2……10-5。 （2）稀释 在无菌条件下，用无菌注射器吸取1mL混合均匀的液体样品，加入装有预还原生理盐水的厌氧试管中，用震荡器将其混合均匀，制成10-1稀释液。用无菌注

培养基配方

https://www.sodocs.net/doc/1e8162447.html,/experiment/plant2/159568.shtml 11. Glucose Asparagine （葡萄糖、天门冬素琼脂） Glucose （葡萄糖）10g Asparagine （天门冬素）0.5g K2HPO4 0.5g Water （水）1000ml pH 7.2-7.4 适用范围：刺孢小单孢菌绛红变种、紫色小单孢菌（绛红小单孢菌） 12. Gause′s Synthetic Agar （高氏合成一号琼脂） KNO3 1g Soluble starch（可溶性淀粉）20g K2HPO4 0.5g MgSO4.7H2O 0.5g NaCl 0.5g FeSO4 0.01g Agar （琼脂）20g water （水）1000ml pH 7.2-7.4 适用范围：刺孢小单孢菌绛红变种、紫色小单孢菌（绛红小单孢菌）、白黄链霉菌、白色链霉菌、抗生链霉菌、双重轮丝链霉菌、产色链霉菌、烬灰链霉菌、天蓝色链霉菌、灭蚊链霉菌、红霉素链霉菌、青色链霉菌、球孢链霉菌、浅灰链霉菌、灰色链霉菌、吸水链霉菌、淡紫灰链霉菌、黄色长孢链霉菌、藤黄色链霉菌、细黄链霉菌、黑化链霉菌、玫瑰色链霉菌、华美链霉菌、嗜热链霉菌、委内瑞拉链霉菌、紫色直丝链霉菌、紫色链霉菌、绿色链霉菌 13. Wort Agar （麦芽汁琼脂） Dilute the world (without hop) to 12 Brix. Add 15g agar into 1000ml of the diluted word..Melt the agar by heating, then distribute the medium into tubes. Autoclave at 110 for 30 minutes. (将发酵啤酒的原料（未加酒花），稀释至12柏林，加琼脂15克，溶化后分装。15磅灭菌30分钟。) 适用范围：克鲁斯假丝酵母、郎比可假丝酵母、解脂假丝酵母、马其顿假丝酵母、拟热带假丝酵母、粗壮假丝酵母、皱褶假丝酵母、热带假丝酵母、产朊假丝酵母、阿舒假囊酵母、白地霉、果香地霉、地霉属、异常汉逊酵母、异常汉逊酵母变种、阿拉伯糖醇汉逊酵母、施氏汉逊酵母、菅囊酵母、伯顿毕赤酵母、膜醭毕赤酵母、粘红酵母、小红酵母、胶红酵母、深红酵母、卡尔斯伯酵母、酿酒酵母、椰园酿酒酵母、发酵性酵母、洛格酵母、罗斯酵母、鲁氏酵母多形鲁氏酵母、威尔酵母、酵母、路德类酵母、栗酒裂殖酵母、掷抱酵母、贝雷丝孢酵母、皮状丝孢酵母、糙孢曲霉、无壳曲霉、鲜橙曲霉、红曲霉、紫红曲霉、红色红曲霉、红曲霉菌 14. Potato Dextrose Agar PDA (马铃薯、葡萄糖琼脂) Potato extract (马铃薯汁) 1000ml Dextrose(glucose) (葡萄糖) 20g Agar (琼脂) 20g [Note]: Potato extract: Slice potatoes thin. Add 1000ml of water, immediately to prevent Oxidtion of juice and boil until soft. (approximately 30min.). Filter through cotton-cloth. Autoclave at 115℃for 20 minutes.（注：取去皮马铃薯200克，切成小块，加水1000毫升煮沸30分钟，滤去马铃薯块，将滤液补足至1000