植物组织培养技术考试要点
名词解释
植物组织培养：是指植物的任何器官、组织或细胞，在人工预知的控制条件下，放在含有营养物质和植物生长调节物质等的培养基中，使其生长、分化，形成完整植株的过程。
培养基：是离体植物（外植体）赖以生长、分化的基础，是根据植物的需求，人工配制的含有各种营养成分的营养液。
污染：在组织培养过程中培养基和培养材料滋生杂菌，导致培养失败的现象。
褐变：在组培过程中，由培养材料向培养基中释放褐色物质，致使培养基逐渐变成褐色，培养材料也随之慢慢而死亡的现象。
玻璃化：当植物材料进行离体繁殖时，有些培养物的嫩茎、叶片往往会出现半透明状和水渍状，这种现象称为玻璃化。
脱分化：已有特定结构与功能的植物组织，在一定的条件下，细胞改变原来的分化状态，失去原来的结构和功能，转变为具有分生能力的细胞，这个过程称为脱分化。
再分化：在愈伤组织生长到一定阶段后即可通过更换培养基或改变培养条件，诱导促使其中的“芽点”或“原始胚状体”逐渐发育成一个幼小的植物体，这一过程就叫做再分化。
愈伤组织：植物各种器官的外植体在离体的条件下，细胞经脱分化等一系列过程，转变为分化细胞，继而转变形成一种能迅速增殖的无特定结构和功能的细胞团，称为愈伤组织。
驯化：开始继代培养要加入生长调节物质，其后加入少量或不加入生长调节物质就可以生长，这种现象称为“驯化”。
种质：亲代通过生殖细胞或体细胞传递给子代的遗传物质。
植物种质保存：利用天然或人工创造的适宜环境，使个体中含有的遗传物质保持其遗传完整性，有高的活力，能通过繁殖将其遗传特性传递下去。
常温保存：在常温（20±5）O C条件下，通过改变培养基中某些营养物质的浓度，改变培养的环境条件，可达到种质保存的目的。
低温保存：低温保存也称为缓慢生长保存，是通过改变培养基和环境条件使培养基的生长降到最低限度，又不致死亡，以达到延长保存时间的目的。
超低温保存：也称为冷冻保存，主要是指在液氮的超低温下使细胞代谢和生长处于基本停止的状态，在适宜的条件下细胞可迅速繁殖，再生出新的植株，并保持原来的遗传特性。
1、简述植物组织培养技术的主要特点。
（1）基础理论植物组培的基础理论是植物细胞全能性的理论，即每个细胞都拥有该物种的所有遗传信息，并在条件适合的情况下能够发挥该物种的各种功能和具有发育成为一个正常和完整的独立个体的能力。
（2）技术特点无菌培养和外植体培养
（3）生产特点①不占用耕地，生产不受季节控制②周年连续生产，不受灾害天气和病虫害限制③生长环境可人工控制并人为创造
2、植物组培的意义和作用主要有哪些？
（1）培育新品种的有效手段
（2）种质资源保存的有效方法
（3）去除病毒、真菌和细菌等病害和无性系的快速繁殖
（4）促进有机物的生产和生理学的研究
3、简述通用实验室的构成和用途。
此区包括药品储存室、洗涤室、培养基配制室和灭菌室等。
（一）药品储存室药品储存室主要存放组织培养常用的各种化学试剂，如无机盐、有机物、生长调节剂、消毒剂及各种生化试剂等。
（二）洗涤室洗涤室用于清洗各种培养器皿、用具及培养材料等。
（三）培养基配制室培养基配制室用于培养基的配制、分装、封口，以及培养基灭菌前暂时存放。
（四）灭菌室灭菌室用于培养基、器皿、工具的灭菌消毒工作。
4、接种室包括哪些设备和用具？
接种室又称无菌室，是进行菌种分离和接种的专用房间，室内安装一空调，使室温可控，接种室外面设缓冲间门不宜对开，最好安装滑动门窗，接种室内的地面和墙壁要求光滑洁净，室内根据要求配置一定数量的超净工作台、接种用的小推车以及接种工具和消毒用的乙醇、酒精灯等，室内和缓冲间装紫外线灯和日光灯。
5、培养设备是什么，主要包括哪些？
培养设备是指专为培养物创造适宜的光、温、水、气等条件的设备，包括：空调器、定时器、恒温器、增湿机或去湿机、培养架、摇床或旋转床、光照培养箱、照度计及温、湿度计。6、简述一个标准组培实验室应具备设施。
（1）玻璃器皿和其他实验器皿的清洗和储存（2）培养基的制备、灭菌和存放（3）植物材料的无菌操作（4）将接种材料培养在适宜的温度、湿度和光照条件下（5）培养材料的细胞学及解剖学观察、实体照相、切片观察
7、玻璃器皿的清洗的总体要求、标准和不同玻璃器皿的清洗方法。
(1)总体要求：有机物、油脂等污物去掉（2）标准：瓶壁透明发亮，内外碧水膜均一，不形成水珠（3）不同器皿的清洗①新器皿1%稀HCl浸泡12h，再用肥皂水洗净，清水冲洗，最后用蒸馏水冲洗1遍，晾干后备用②用过器皿先将器皿中的残渣除去，用清水洗净，再用温肥皂水或洗洁精洗净，清水冲洗干净，最后用蒸馏水冲洗1次，晾干后备用③污染器皿在121O C高温蒸汽灭菌30min后，倒去残渣，用清水冲洗，蒸馏水，晒干，有菌斑用毛刷刷净，再用清水冲洗干净，，浸泡于浓的重铬酸钾洗涤液中，浸泡2小时，清水冲洗后用蒸馏水洗，晾干
8、组织培养工厂有哪些厂房和场地组成？各自的功能和作用是什么？
组培育苗工厂一般划分为以下几个生产车间：培养瓶清洗车间、培养基母液调配车间、培养基制备车间、无菌操作车间、培养车间、炼苗温室和苗圃。
（1）培养瓶清洗车间可承担大量的培养器皿如三角瓶、试管、培养皿等的洗涤与试管苗出瓶工作。
（2）培养基母液调配车间已知的培养基组成成分不下10种，为了减少工作量，提高工作效率，在配制培养基时，一般先配成比所需浓度高10~100倍的母液，配制使用时可按比例稀释。
（3）培养基制备车间完成培养基配制、分装、包扎和高压灭菌等工作。
（4）无菌操作车间也称接种车间，是组培工厂最核心和关键部分。
（5）培养车间将接种的材料在人为控制温度、湿度和光照等条件下进行培养生长的场所。（6）炼苗温室和苗圃①炼苗温室创造适宜温度条件②苗圃直接向社会提供各种良种壮苗，可根据市场信息、林业生产等需要灵活安排各种林业苗木、观赏花卉等的育苗计划。
9、组织培养工厂有哪些主要设备？这些设备各有什么作用？
（1）超净工作台是一种提供局部无尘无菌工作环境的单向流型空气净化设备。
（2）高压蒸汽灭菌锅最基本的灭菌装备，用于培养基的灭菌。
（3）培养架摆放大量培养物，以利于大量生产的需要。
（4）照明光源补充植物光合作用的需要。
10、培养基的成分主要有哪些？
主要包括5大类：无机养分、有机养分、植物生长调节物质、糖（碳源）以及介质或载体（纸桥或琼脂等），此外还含有大量的水分，可提供植物所需的碳、氢、氧，配制培养基时一般用离子交换水、蒸馏水或重蒸馏水。
11、什么是外植体？如何进行外植体的选择？
外植体是指第一次接种用的植物材料。
（1）选择合适的部位木本植物、较大的草本植物采取茎段，本身矮小或缺乏显著的茎的草本植物采用叶片、叶柄、花葶或花瓣等作外植体，满天星、勿忘我、情人草和菊花等都是带芽的材料作为外植体。
（2）取材季节合理多年生植物—生长期取材，特别是春芽一年生植物—幼嫩组织
（3）考虑器官的生理状态和发育年龄幼嫩年龄的组织器官更适于组培
（4）选择合适大小的外植体0.5—1cm
（5）选择健壮的植株
（6）选择优良的种质
（7）选择合适的植物种类双子叶＞单子叶、草本＞木本
12、外植体的接种主要有哪些技术步骤？
（1）在接种前4h用甲醛熏蒸接种室，并打开室内紫外灯进行灭菌。
（2）在接种前20min，打开超净工作台的风机以及台上的紫外灯。
（3）接种员先洗净双手，在缓冲间换好专用实验服，并换穿拖鞋等。
（4）上工作台后，用乙醇棉球擦拭双手，特别是指甲处，然后擦拭工作台面。
（5）先用乙醇棉球擦拭接种工具，再将镊子和剪子从头至尾过火一遍，然后反复过火尖端处，对培养皿要过火烤干。
（6）接种时，接种员双手不能离开工作台，不能说话、走动和咳嗽等。
（7）接种完毕后要清理干净工作台，可用紫外灯灭菌30min。若连续接种，每5天要大强度灭菌1次。
13、简述培养基配制的主要技术步骤。
①将已配种好的各种母液按顺序排好，根据母液倍数或浓度计算和吸收相应量的各种母液和生长调节物质；计算和称取琼脂和蔗糖。
②由于琼脂较难溶解，所以先在烧杯或量杯中放入一定量的水，加入琼脂，在电炉上加热并不断搅拌，使之溶解。
③按照大量元素、微量元素、铁盐、有机物和生长调节物质母液的顺序倒入已融化的琼脂中，继续加温，不断搅拌，使之均匀溶解。若母液在贮藏过程中产生沉淀或结晶，或是变色，则不能使用，应重新配制。
④加入蔗糖，待蔗糖溶解后，加水定容至所需体积。
⑤调整培养基的pH。大多数的园林植物都要求在pH5.6~5.8的条件下进行组织培养。一般用1mol/L的HCl或1mol/L的NaOH调节。
⑥培养基的分装：一般占培养容器的1/4~1/3为宜。
14、外植体为什么褐变？如何防止其褐变？
（1）原因由于外植体中的酚类化合物与多酚氧化酶作用被氧化形成褐色的醌类化合物，醌类化合物在酪氨酸酶的作用下，与外植体组织中的蛋白质发生聚合，进一步引起其他酶系统失活，导致组织代谢紊乱，生长受阻，最终逐渐死亡。
（2）措施①正确选择外植体②选择适宜的培养基③创造合适的培养条件④连续转移
15、配制母液的原则。
（1）相同类型试剂混合
（2）容易形成沉淀的药剂要分开
（3）母液浓度适宜
（4）用量认真计算核对
（5）药品准确称量
16、用于外植体灭菌的常用药剂有哪些？各自特点如何？
最常用的是次氯酸钠，所需的灭菌时间稍长，但性质比较温和，对植物材料杀伤较轻，比较灭菌的材料经常用它，但灭菌的彻底程度不如氯化汞，使用质量浓度2%，灭菌时间5~30min。氯化汞相对灭菌效果最好，但必须较严格地掌握灭菌时间，并需多次无菌水冲洗才能洗脱表面附着的残液，否则植物材料易产生毒害或受到强烈抑制，使用质量浓度0.1~1%，灭菌时间5~30min。
乙醇使用体积分数70~75%，灭菌时间0.2~2min。
17、各种植物组织器官的灭菌方法。
外植体
消毒程序
备注前处理消毒冲洗
茎段自来水冲洗后，70%
乙醇中浸泡数秒
2%次氯酸钠溶液中
浸泡15~30min
无菌水冲洗3~4次以茎段或顶芽为外
植体
叶片自来水冲洗后，70%
乙醇中浸泡数秒
0.1%氯化汞溶液中
浸泡1min，再在2%
次氯酸钠溶液中浸
泡15~30min
无菌水反复冲洗，吸
干过多的水分
以叶片或叶柄切段
为外植体
器官自来水冲洗后，70%
乙醇中浸泡数秒
2%次氯酸钠溶液中
浸泡20~30min
无菌水冲洗3~4次，
无菌滤纸吸干水分
以芽眼或内部器官
为外植体
果实70%乙醇中浸泡数
秒
2%次氯酸钠溶液中
浸泡10min
无菌水冲洗3~4次培养幼胚获得植株
或取果肉为外植体
种子70%乙醇中浸泡数
分钟，无菌水冲洗
10%次氯酸钙浸泡
20~30min，再用1%
的溴水浸泡5min
无菌水冲洗3~4次，
无菌滤纸吸干水分
以萌芽的幼苗各部
位为外植体
18、组培中污染原因有哪些？如何预防？
（1）①微生物细菌感染材料带菌或培养基灭菌不彻底
②操作人员不慎工作人员使用了未经充分灭菌的工具及呼吸时呼出的细菌，或手接触材料或器皿边缘，使微生物落入材料或器皿
③器械环境周围环境不清洁或空气不洁净，灰尘很多，或超净工作台的过滤装置失效，培养用器皿口径过大，瓶口边缘污染真菌
（2）①防止材料带菌②外植体灭菌③玻璃器皿的灭菌④金属器械灭菌
⑤布质制品灭菌⑥操作室培养室⑦操作人员严格按照无菌操作规范操作
19、玻璃化的原因及预防措施。
（1）①激素浓度高浓度的细胞分裂素有利于促进芽的分化，也会使玻璃化的发生比例提高
②温度高温或温度变化幅度大会提高玻璃化的发生率
③湿度高湿条件使玻璃化发生频率升高
④琼脂浓度随着琼脂浓度的增加，玻璃化苗的比例减少
⑤光照强度增加光照强度使玻璃化发生比例降低
⑥培养基成分提高培养基的碳氮比，可以减少玻璃化的比例
（2）①调整培养基中无机成分②提高培养基中蔗糖和琼脂的浓度
③降低细胞分裂素和赤霉素的浓度④增加自然光照，控制光照时间
⑤控制温度⑥改善培养容器的气体交换状况
20、组培苗的特点，愈伤组织再生形成新植物体途径。
（1）①组培苗生长细弱，茎、叶表面角质层不发达，气孔的调节能力差。
②组培苗茎、叶虽呈绿色，但叶绿素的光合作用较差。
③根的吸收能力极低，根系吸收的水分难以满足小苗蒸腾作用的消耗，小苗体内的水分达不到平衡。
④组织幼嫩，结构较松散，细胞含水率高，机械组织很不发达，容易发生机械损伤，对逆境的适应和抵抗能力差。
（2）①愈伤组织→不定芽→植株→先芽后根
先根后芽
不同部分产生芽根
②愈伤组织→胚状体→植株
21、哪些组织适合进行组培快速繁殖？
（1）通过培养生产不带病毒的种苗，使生产力得到大幅度的提高，例如马铃薯、香蕉和大蒜等。
（2）有性繁殖时变异幅度大的品系，可以从这些群体中选择优良的个体，进行无性繁殖，生产出整齐划一的大量种苗，例如某些果树和兰花等。
（3）雌雄异株植物，通过组培快繁技术繁殖具有更高栽培价值的雌性植株或雄性植株。（4）需要用较大量的目的产品作为种苗材料进行种植的物种，如大蒜、甘蔗等。
（5）组培快繁技术简单、繁殖系数高的植物，如杂种芹菜、胡萝卜等。
（6）在野生或传统的栽培条件下个体繁殖效率低下的植物，如兰花等。
22、组织培养有哪些途径可以实现繁殖植物种苗的目的？
（1）短枝发生型：微型扦插特点：能一次成苗，遗传稳定，成活率高，但繁殖系数低（2）丛生芽发生型特点：不经过愈伤阶段，后代变异小
（3）不定芽发生型特点：繁殖系数高，但变异大
（4）胚状体发生型特点：成苗量大，速度快，结构完整，但对其发育过程了解不足，应用不十分广泛
（5）原球茎发生型：兰科植物特有
23、组培快繁有哪些步骤？
第一阶段：初代培养第二阶段：芽苗的增殖第三阶段：诱导芽苗生根第四阶段：炼苗和移栽
24、组培快繁方式的优势？
（1）繁殖效率高，生长速度快
（2）组培快繁不受季节和环境条件限制
（3）培养条件的可控性强
（4）占用空间小，管理方便，有利于自动化管理
（5）不存在种子繁殖过程中的世代问题
25、影响茎段组培快繁效果的因素及具体措施。
（1）外植体材料的选取选取生长健壮、无病虫和生长迅速的幼嫩茎段，优先选用顶部材料。
（2）培养基中植物激素及其浓度常用的细胞分裂素6-BA促进腋芽增殖，质量浓度0.5~5mg/L，常用的生长素NAA改善芽苗的生长状况，质量浓度0.05~1.0mg/L，赤霉素GA3质量浓度为1mg/L以下。
（3）防止褐变和有害物质的积累防止褐变措施：①在培养基中单独添加或配合使用芸香苷，20%硫代硫酸钠溶液、柠檬、活性炭、维生素C及聚乙烯吡咯烷酮②pH为5.5是可以取得较好的培养效果③降低培养光照强度可以明显减轻外植体的褐变程度④发现外植体近旁培养基有褐变物质积累时马上转接到新的培养基上
（4）培养方式和条件液体振荡培养增殖率高，缩短增殖周期，温度一般控制在26~28O C 之间你，光照时间为12~16h/d，光照度在2000~3000lx之间
26、无病毒苗培育的意义？
（1）无病毒苗培育可明显提高作物的产量、品质。
（2）无病毒苗培育增产增收效益显著。
（3）无病毒苗培育促进农产品出口，增加就业机会。
（4）排除了使用药剂，降低生产成本，减少污染，防止公害，对保护环境有积极意义。27、无病毒原因。
（1）在一个植物体内，病毒易于通过维管束系统而移动，分生组织则不存在维管束系统。（2）病毒在细胞间移动的另一个途径是通过胞间连丝移动，速度缓慢，难以赶上茎尖分裂旺盛的分生细胞。
（3）分裂旺盛的分生细胞代谢活性强，使病毒无法进行复制。
（4）植物体内存在病毒钝化系统，而茎尖分生组织内钝化系统活性最高，钝化病毒，使病毒难以复制。
（5）茎尖分生组织的生长素含量高，足以抑制病毒的增殖。
28、无病毒苗培育的方法有哪些？
（1）茎尖分生组织（2）愈伤组织培养脱毒（3）珠心胚培养脱毒
（4）热处理脱毒（5）微体嫁接脱毒（6）热处理结合茎尖培养脱毒
29、茎尖培养脱毒的方法和过程。
（1）培育脱毒母株，获得外植体①选择品种选择品质好，产量高，抗、耐病毒苗的品种②确保品种纯度严格鉴定获取快繁外植体母株的品种纯度，可避免无效劳动，提高工作效率③获得外植体选择生长健壮、无病虫害的母株，既不受季节影响，又易消毒。
（2）选择培养基常用的培养基有MS、N6、B5、Nitsch培养基等，诱导愈伤组织的培养基以添加2，4-D效果最好，其浓度为1~3mg/L，分化培养基中可根据其分化方向添加1~3mg/L 的BA，再加少许的IAA（0.2~0.5mg/L），生根培养基可单独添加生长素（0.5~1mg/L）。（3）剥离和接种将处理好的植物部分，如包含茎尖的茎段或芽等灭菌，置超净工作台40倍显微镜下，剥去外叶和较大的叶原基，暴露出生长点分生组织，剥离带1~2个叶原基的分生组织，接种到试管内的芽分生培养基上。
（4）继代培养生根和快繁将已接种外植体的试管置于（23±2）O C，光照度为3000lx，光周期为13~16h/d的培养室中培养2~3周成苗，待苗长至1~2cm高，转入生根培养基中培养，生长7~10d生根，转入快繁培养基继续繁殖。
30、无病毒植物鉴定方法有哪些？（植物病毒鉴定检测有几种方法？）
（1）目测症状法（2）指示植物法（3）血清学鉴定法
（4）电子显微镜鉴定法（5）酶联免疫吸附法（6）免疫吸附电镜法
31、花药培养和花粉培养有何区别和相同点？
（1）相同点：二者培养目的相同，都是为诱导花粉细胞发育成为单倍体细胞，形成单倍体植株。
（2）区别：花药培养为器官培养，花粉培养为细胞培养。
32、什么是单倍体育种及单倍体育种优势？
以单倍体为材料的育种程序称为单倍体育种。
（1）缩短育种年限（2）单倍体育种的程序较简便
33、花药培养的大致过程如何？
（1）取材（2）培养基的配制（3）消毒（4）接种（5）培养
34、花粉植株发育有哪些途径？
花粉细胞第一次有丝分裂①均等分裂→两个等大子细胞，均匀诱导单倍体
②不均等分裂→形成大营养细胞、小生殖细胞a小细胞退化，大细胞均匀诱导单倍体
b大细胞退化，小细胞均匀诱导单倍体
c大小细胞均诱导单倍体
35、常用的单倍体植株二倍化有哪些途径？
（1）自发加倍（自然加倍）（2）人工加倍（3）从愈伤组织再生加倍植株
36、单细胞分离方法有哪些？
（1）机械法（2）酶解法
37、机械法、酶解法分离单细胞的具体过程如何？
（1）机械法①称取10g新鲜叶片，进行表面消毒后放于研钵中。
②加入40ml研磨介质：20μmol/L蔗糖+10μmol/LMgCl2+20μmol/LTris-HCl缓冲液，pH7.8，轻轻研磨成匀浆。
③用两层细纱布过滤，取滤液。
④用低速离心法将滤液中细微的碎屑除掉，得到沉淀在底层的游离细胞。
（2）酶解法①果胶酶的制备：0.5％果胶酶+0.5％葡聚糖硫酸钾+0.8％甘露醇，配成20ml，调节pH为5.8，用孔径为0.2~0.4μm的滤膜过滤灭菌。
②取刚长成的嫩叶用70％乙醇漂洗数秒，用饱和漂白粉上清液浸泡15min，无菌水冲洗4~5次。吸干表面的水分，用消过毒的镊子撕去叶的下表皮。
③用消过毒的解剖刀将叶片切成3cm见方的小块，取2g切好的叶片放入装有果胶酶液的三角瓶中。
④用真空泵抽气1~2min，使酶液渗入细胞间隙。
⑤将三角瓶置于低速转床上，转速为120r/min，温度25~28O C，30min后，吸取酶液、碎片。
⑥再放入上述果胶酶液20ml，保温振荡30min，吸出酶液，此酶液主要含有海绵组织细胞。
⑦再次放入上述果胶酶液20ml，保温振荡30min，用纱布或尼龙网过滤除去被消化的叶脉和表皮。
⑧在100g条件下离心2min，吸去上清液，底层即得均一的栅栏组织单细胞。
38、细胞悬浮培养的方法类型有哪两种？
（1）分批培养（2）连续培养
39、优良悬浮细胞培养体系的要求。
（1）愈伤化的细胞分散性良好
（2）细胞均一性好，细胞有用成分含量高
（3）增殖速度迅速
40、单细胞培养有哪些方法？各种方法的概念、用途、优缺点如何？
看护培养法、微室培养法和平板培养法
（1）看护培养法
概念：是指把单个细胞置于一块活跃生长的愈伤组织上培养，促使单个细胞持续分裂和增殖的培养方法。
用途：诱导单细胞体系
优点：最大的优点是简便易行，且效果较好，易于成功。缺点：不能在显微镜下直接观察细胞生长过程。
（2）微室培养法
概念：是指把含有单细胞的培养液小滴放在无菌小室中培养，使单细胞生长和增殖形成单细胞无性系的无菌培养方法。
用途：观察细胞的生长、分裂及形成细胞的过程
优点：可对细胞培养过程进行连续显微观察，了解一个细胞的生长、分裂、分化和形成细胞团的全部过程。缺点：培养时间短。
（3）平板培养法
概念：把单个细胞与融化的琼脂培养基均匀混合，并平铺一薄层在培养皿底上的培养方法。用途：分离单细胞无性系，研究其生理生化、遗传上的差异，广泛应用于原生质体及细胞融合产物的培养。
优点：可定点观察细胞，分离单细胞系容易。缺点：培养细胞气体交换不畅。
41、什么是离体保存？离体保存有哪些优点？
将组织和细胞培养中的外植体或试管苗储存在使其抑制生长、缓慢生长或无生长的条件下，达到长期保存的方法称为离体保存。
（1）解决一些无性繁殖作物种质资源在低温下长期保存问题，可有效避免资源的丢失。（2）节省土地和劳动力，保存方法简单，花费少且能在保存中脱毒。
（3）在提供利用时，可快速繁殖，也有利于国际国内种质交换。
42、离体保存通常有哪几种方法？
常温保存、低温保存和超低温保存。
43、植物组培材料的超低温冷冻保存的过程大致可分为几个阶段？各有什么特点？
（1）冷冻尽量保持细胞和组织的自然状态，同时又能迅速停止各种酶的活动和细胞的各种生命活动。
（2）储存温度不能超过-130O C，否则细胞内的冰晶就会生长，细胞生活力会因此而下降。（3）解冻要保持材料的生活力，自液氮中取出后，先投入温水溶液中。
（4）重新培养解冻后的植物材料在培养前除去防腐剂，防止冷冻防腐毒害植物细胞
44、冷冻方法有哪几种？
（1）快速冷冻法（2）慢速冷冻法（3）分步冷冻法
45、细胞的生活力和存活率的测定。
（1）再培养，即化冻后立即将材料转移到新鲜培养基上进行再培养。
（2）荧光素双醋酸酯染色法，与观察原生质体活力的方法一样。
（3）TTC法，此法显示细胞内脱氢酶的活性。
46、冷冻保护剂分为哪两种类型？常见的冷冻保护剂有哪些？
渗透型抗冻剂和非渗透型抗冻剂。
渗透型抗冻剂:二甲亚砜、乙二醇、乙酰胺、丙二醇和甘油等。
非渗透型抗冻剂:聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖、葡聚糖和聚乙二醇等。
植物组织培养实验基本步骤。。
植物组织培养实验基本步骤 一、母液的配置 1、MS大量元素母液的配制 将大量元素配制成10倍的母液，使用时再稀释10倍。按照配方表中用量依次分别称取扩大10倍的：NH4NO3 、KNO3 、KH2PO4 、 MgSO4·7H2O 、CaCl2·2H2O ，所有药品称取完毕后用蒸馏水逐个溶解，待全部溶解后，最后定容至500ml，转入500ml细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称、放大倍数、配制日期、配制人姓名，置于4℃冰箱中保存备用。 2、MS微量元素母液的配制 将微量元素配制成100倍的母液，使用时再稀释100倍。按照配方表中用量分别依次称取：MnSO4· 4H2O 、ZnSO4·7H2O 、 H3BO3 、KI 、CuSO4·5H2O 、CoCl2·6H2O ，用蒸馏水逐个溶解，待全部溶解后，用容量瓶定容至500ml，转入500ml细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称、放大倍数、配制日期、配制人姓名，置于4℃冰箱中保存备用。 3、MS铁盐母液配制 将铁盐配制成100倍的母液，使用时再稀释100倍。按照配方表中用量分别称取扩大100倍的：称
FeSO4·7H2O 和Na2·EDTA ，把FeSO4·7H2O和Na2·EDTA·2H2O分别置于200ml蒸馏水中，加热并不断搅拌使之溶解（磁力搅拌器，边加热，边搅拌）。保持加热，把FeSO4溶液慢慢倒入Na2·EDTA溶液中并不断搅拌，接近沸腾时停止加热，待溶液冷却后加蒸馏水到最终容积500ml，置于棕色细口瓶中，用力振荡1～2min，贴上标签，注明母液名称、放大倍数、配制日期、配制人姓名。在室温下避光保存一段时间令其充分反应后，再置于4℃冰箱中保存备用。 4、MS有机化合物母液的配制 将有机化合物配制成100倍的母液，使用时再稀释100倍。按照配方表中用量分别称取扩大100倍的：肌醇、维生素B1 、烟酸、甘氨酸、维生素B6 、蔗糖，用蒸馏水依次溶解并定容至500ml后，转入500ml 细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称、配制日期、配制人姓名，置于4℃冰箱中保存备用。 二、植物激素的配置 常见激素：二氯苯氧乙酸（2，4－D）、萘乙酸（NAA）、吲哚乙酸（IAA）、吲哚－3－丁酸（IBA）、激动素（6-糠氨基嘌呤、 KT）、6－苄氨基嘌呤（6－BA）、赤霉素（GA3）、 1、生长素类： （1）、生长素类在组织培养中的主要作用是：诱导细胞的分裂和根的分化，诱导愈伤组织
植物组织培养试题与答案(集合版)
植物组织培养练习题 1.植物组织培养：指要人工控制的条件下，将植物体的任何部分，或器官、或组织、或细胞， 进行离体培养，使之发育形成完整植物体。所谓人工控制的条件，即营养条件和环境条件； 植物体的任何一部分是指根、茎、叶、花、果、实以及它们的组织切片和细胞。 2.愈伤组织培养：将外植体接种在人工培养基上，由于植物生长调节剂的存在，而使其细胞 脱分化形成愈伤组织，然后通过再分化形成再生植株。 3.外植体：植物组织培养中的各种接种材料，包括植物体的各种器官、组织、细胞和原生质 体等。 4.脱分化：一个已停止分裂的成熟细胞转变为分生状态，并形成未分化的愈伤组织的现象。 5、接种：把经过表面灭菌后的外植体切碎或分离出器官、组织、细胞，转放到无菌培养基上的 全部操作过程。 6、褐变：外植体在培养过程中体内的多酚氧化酶被激活，使细胞里的酚类物质氧化成棕褐色的醌类 物质，这种致死性的褐化物不但向外扩散使培养基逐渐变成褐色，而且还会抑制其他酶的活性，严重影响外植体的脱分化和器官分化，最后变褐而死亡的现象。 二填空 植物组织培养根据培养方式分为固体培养和液体培养。 2、植物组织培养类型分为愈伤组织培养、器官培养、胚培养、细胞和原生质体培养。 3、组织培养的主要应用领域有快速繁殖、脱毒、体细胞无性系变异和新品种培育、单倍体育种、种质保存、遗传转化、次生代谢物的生产等几个方面。 4、茎尖培养根据培养目的和取材大小可分为快速繁殖和脱毒培养两种类型。 5、一般组织培养的几道工序如下：培养器皿的清洗、培养基的配制、分装和高压灭菌；无菌操作——材料的表面灭菌和接种，培养；试管苗的驯化、移栽与初期管理。 6、在进行植物组织培养室设计时，其设计应包括洗涤室、准备室、灭菌室、无菌操作室、培养室、细胞学实验室、摄影室等分室，另加驯化室、温室和大棚。 7、培养基的成分主要包括无机营养、氨基酸、有机附加物、维生素、糖、琼脂、激素、活性炭、PH。 8、植物器官培养主要是指植物的根、茎、叶、花器和幼小果实的无菌培养。 9、细胞全能性是指植物的每一个细胞都携带有一完整的基因组，并具有发育成完整植株的潜在能力。 10、玻璃化现象是指试管苗的一种生长失调症状，当植物材料进行离体繁殖时，有些培养物的嫩茎、叶片往往会出现半透明状和水渍状，这种现象称为玻璃化。其苗称为玻璃化苗。
植物组织培养技术
植物组织培养技术 植物组织培养是指将植物体的一部分接种在合成培养基上，使其按照预定目标生 长发育成新植株。近年来，花卉组织培养及快繁脱毒技术越来越多地应用于花卉种苗 繁殖生产中。 一、组织培养在花卉产业中的应用 1.快速、大量繁殖优良品种组织培养技术已成为种苗生产的主要技术之一。经组织 培养，可增加繁殖系数，加快繁殖速度，可生产出种性纯、品质好、产花量高的生产 性用苗。在花卉育种过程中，不断的杂交、选种极大地扩展了花卉的花形与颜色，使 得花卉在各方面都越来越接近人们的需求。但在同时，也造成了花卉基因类型的高度 异质化———子代不易有均一表现。而组培苗是在母株器官、组织或细胞的基础上发展起来的，可以保持母株的全部特性（花形、花色、株形、开花习性、抗逆性等）， 因而可以根据需要来选择集多种优良性状于一体的植株加以分生，从而得到大量与母 株一模一样的植株。 2.培育脱毒苗木采用组织培养技术，利用植株的分生组织不易感染病毒的原理，可 以对花卉植株的分生组织进行组织培养来繁殖苗木，防止亲代植株的病害传递给子代，从而达到脱毒的目的。 病毒病对长期应用营养繁殖（分株、扦插等）的观赏植物及其生产的危害相当严重。由于观赏植物多采用营养繁殖，如嫁接、分株、压条等方法繁殖时，病毒（及类 病毒）则通过营养体及刀具、土壤传递给后代，大大加速了病毒病的传播与积累，导 致病毒病的危害越来越严重。据统计，观赏植物的病毒已多达100多种，并且逐年有 新增病毒的报道。观赏植物因病毒病大大影响其观赏价值，表现在康乃馨、菊花、百合、风信子等的鳞茎、球茎与宿根类花卉及兰科植物等严重退化，花少且小，花朵畸形、变色，大大影响观赏价值，严重者甚至导致某些品种的灭绝，严重制约观赏植物 生产的发展，这也是我国切花品种跨不出国门的原因之一。组培快繁技术已应用到蝴蝶兰的栽培中非洲菊也可以通过组培快繁技术进行繁殖 植物组织培养脱毒的原理主要是利用茎尖分生组织不带毒或少带毒。感病植株体内的病毒分布不均匀，其数量随植株部位和年龄而异，越靠近茎尖顶端的区域，病毒 的浓度也越低。分生区域无维管束，病毒只能通过胞间连丝传递，赶不上细胞不断分 裂和活跃的生长速度，因此生长点含有病毒的数量极少，几乎检测不出病毒。因此， 茎尖培养时，切取茎尖的大小对脱毒效果有很大影响，茎尖越小效果越佳，但太小时 不易成活，过大则不能保证完全除去病毒。不同种类的植物和不同种类的病毒在茎尖
《植物组织培养》综合复习题
植物组织培养综合测试题 一、填空题（每空0.5分） 1. 植物组织培养按培养对象分为_______、_________、_________、__________、__________等几种类型. 2. 在分离原生质体的酶溶液内，需要加入一定量的_______其作用是保持原生质体膜的稳定，避免破裂. 3. 1902年德国植物生理学家Haberlandt第一次提出植物_______的理论概念；1943年White提出植物细胞“_________”学说，并出版了《植物组织培养手册》，从而使植物组织培养成为一门新兴的学科。 4. 用烘箱迅速干燥洗净后的玻璃器皿时温度可以设在_________℃的温度范围内，而若用它高温干燥灭菌则需在_________℃的温度下1-3小时；烘干植物材料的温度是_________℃. 5. 细胞全能性是指植物的每个细胞都具有该植物的__________和__________的能力。
6. 1962年，Murashige和Skoog为培养烟草花叶细胞设计了__________培养基，其特点是__________浓度较高，且为较稳定的__________。 7. 7.6-BA / NAA的高低决定了外植体的发育方向，比值低时促进__________的生长，这时__________占主导地位；比值高促进__________的生长，这时__________占主导地位. 8. 植物组织培养按培养的方式分为_______培养和_______培养. 9. 组织培养的特点是：_______、_______、_______. 10. 1962年印度Guha等人成功地培养毛叶曼陀罗花药获得_________，这促进了花药和花粉培养的研究。 11. 在组织培养中，不耐热的物质用__________法灭菌，而培养基常用__________法灭菌. 12. 6-BA / NAA的高低决定了外植体的发育方向，比值__________促进根的生长，这时__________占主导地位；比值__________促进芽的生长，这时__________占主导地位。 13. 在组织培养中，非洲菊是靠__________的方式进行繁殖的，而蝴蝶兰是以 __________的方式进行快繁的。
植物组织培养实验报告
植物组织培养实验报告 Modified by JACK on the afternoon of December 26, 2020
院(系、部) 化学与生物工程学院专业生物技术（师范）年级13级学号 姓名组别第二组课程名称植物细胞工程学实验日期 指导老师实验名称植物组织培养综合实验 一、实验目的 1.熟悉MS培养基的组成，掌握贮备液的配制方法 2.学习、掌握植物组织固体培养基的配制和灭菌方法； 3.掌握超净工作台上的接种方法与注意事项，了解接种室的灭菌方法； 4.了解组织培养的基本程序； 5.掌握接种的方法和材料的培养过程； 6.掌握无菌操作技术，包括外植体除菌和接种技术； 7.观察外植体的生长状况、染菌状况，剔除染菌外植体； 8.了解MS培养基和1/2MS培养基的区别 二、实验原理 1.植物细胞的全能性 一切植物都由细胞构成，细胞是构成植物体的基本结构与功能单位。 植物细胞含有全套遗传信息，具有形成完整植物的潜能。 2.植物细胞表现出全能性的条件 1.离体状态； 2.有一定的营养物质，激素和其他外界条件（无菌、温度、pH）； 3.选择性能优良、细胞全能性表达充分的基因型 3.无菌条件
把植物的组织、器官等，使其在人工控制的无菌条件下，使植物在人工培养基上繁殖。用于进行组织培养的组织、器官和细胞称为外植体。在组培中外植体都死带菌的，在接种前必须进行表面消毒，这时取得培养成功的最基本和重要的前体。组织培养的主要过程都是在无菌条件下进行的，所以所有的器材、植物体、接种室都应是无菌的。 4.脱分化与愈伤组织 已有特定结构与功能的植物组织，在一定条件下，其细胞被诱导改变原来的发育途径，逐步逆转其原有的分化形态，转变为具有分生能力的胚细胞的过程称为脱分化。脱分化所用的化学物质与MS培养基的区别是需要激素诱导。所以脱分化培养需在MS培养基上添加激素进行愈伤组织诱导。 5.培养基 植物组织培养常用的培养基为MS培养基。常用的凝固剂是琼脂,它的主要作用是使液体培养基凝固，琼脂本身并不提供任何营养，它只是一种高分予的碳水物从海藻中提取出来，仅溶解于热水，成为溶胶，冷却后(40℃以下)即凝固为固体状凝胶。琼脂的用量一般在4—10克／升之间。琼脂的凝固能力除与原料、厂家的加工方式等有关外，还与高压灭菌时的温度、时间、pH值等因素有关，长时间的高温会使凝固能力下降，过酸过碱加之高温会使琼脂发生水解而丧失凝固能力，存放时间过久，琼脂变褐，也会逐失去凝固能力。MS培养基属于富盐平衡培养基，特点是：无机盐浓度较高，元素间的比例适当，离子平衡性好，具有较强的缓冲性，因而在培养的过程中可维持较好的稳定性；营养丰富，在一般培养中无须额外加
国内外植物组织培养技术的差距
国内外植物组织培养技术的差距 姓名：*** 学号：********* 指导教师：*** 专业班级：生物工程2009级1班 完成日期：2012-06-05
摘要 植物组织培养技术是农业生物技术中最早实现产业化并取得显著经济效益和社会效益的领域，在理论研究和生产实践中具有广泛的应用价值。通过对国内外植物组培的发展概况以及技术差距的分析，指出了我国植物组织培养技术的发展现状、目前存在的主要问题和应采取的措施，并对植物组织培养技术的发展作了展望。 关键词：组织培养概况差距展望 Abstract The plant tissue culture technology is agricultural biotechnology as the first realized industrialization and get a remarkable economic and social benefits of the field, in the theoretical research and production practice has wide application value. Through the domestic and international plant tissue and the development situation of the technology gap analysis, and pointed out the plant tissue culture technology's development present situation, the existing problems and the measures should be taken, and the development of plant tissue culture technology are discussed. Key words：Tissue culture situation gap looking
植物组织培养试题
农业生物技术第二章植物组织培养试卷 班级___________ 姓名___________ 得分______________ 一、单项选择题（60） 1．植物组织培养是（） A．离体的植物器官或细胞培育成愈伤组织B．愈伤组织培育成植株 C．离体的植物器官、组织或细胞培养成完整植物体 D．愈伤组织形成高度液泡化组织 2．由于培养物脱离母株在试管内培养,故将植物组织培养又叫（） C．器官培养 D．离体培养 A.初代培养 B.继代培养 3．细胞形态和功能发生永久性变化过程称为（） A.分生 B.分化 C．脱分化 D．再分化 4．对外植体进行的第一次培养称为（） A.初次培养 B.器官培养 C．初代培养 D．继代培养 5．在人工培养基上通过诱导外植体而形成的一团无序的薄壁细胞团叫（） A.分生组织 B.保护组织 C．同化组织 D．愈伤组织 6．大量生产实践证明,通过（）可以有效地去除植物体内的病毒,获得无毒种苗. A.茎段培养技术 B.茎尖脱毒技术 C．组织快繁技术 D．转基因技术 7．植物体因受伤或生理上分离而失掉组织或器官后,恢复或复制失去的部分,形成新的完整植株的能力,称为（） A.植物细胞全能性 B.植物的极性现象 C．植物的再生功能 D．细胞的分化 8．下列关于细胞全能性叙述正确的是（） A.每个生物体内的所有细胞具有相同的功能 B.生物体内任何一个细胞可完成该生物体全部功能 C．生物体每一个活细胞都具有发育成完整个体的潜能 D．生物体每个细胞都经过产生、分裂、生长、衰老、死亡的全过程 9．构成胚的所有细胞几乎都保持着未分化的状态和旺盛的分裂能力，称为（） A.脱分化细胞 B.成熟细胞 C．胚性细胞 D．再分化细胞 10．愈伤组织表面和内部形成很多胚状体，称为（） B.胚泡C．体细胞胚D．合子胚 A.胚囊 11．植物再生功能的产生是由于植物受伤组织产生了（） A.细胞分裂素 B.赤霉素 C．创伤激素 D．生长素 12．草莓茎尖在4℃黑暗条件下，可以保持生活力达（）年之久 A.4 B.5 C．6 D．8 13．脱毒培养指的是（） A.种苗消毒后的培养 B.种苗及土壤消毒后的培养 D．无毒茎尖的培养技术 C．外植体消毒后的培养
植物组织培养实验设计及.doc
植物组织培养实验设计及 常用设备的使用与维护 一．实验目的 1.熟悉植物组织培养实验室的组成及设备 2.掌握植物组织培养实验室的设计要求 3.熟悉植物组织培养所需的仪器设备 二．实验原理 植物组织培养是通过无菌操作，在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术。要达到无菌操作和无菌培养，就需要人为创造无菌的环境，使用无菌的器皿及器械，同时还需要人工控制的温度,光照，湿度等培养条件。无菌环境和培养条件的创造需要一定的设施及设备。 三．实验步骤 1.实验室的设计要求 功能齐全、布局合理、环境清洁、易于灭菌 2.实验室的组成及功能 实验室的组成： 洗涤室、药品室、称量室、培养基配制室、灭菌室、接种室、培养室、观察记录室、储藏室、移苗室 实验室的功能： 洗涤室用于玻璃器皿、实验用具的清洗、干燥、培养材料清洗、预处理也可在本室完成。室内应建造大型水槽和一个或几个浸泡
池，水槽最好上一内衬白瓷片的水泥槽，为防止碰坏玻璃器皿，下面可铺一活动的橡胶板。备有晾瓶架，用于放置刷净的培养器皿，配备有一定数量的周转盘或小推车，用于运输培养器皿。地面要注意防滑，排水通畅，墙壁要有耐湿、防潮功能。 药品室用于存放各种药品试剂。室内要求干燥、通风，避免光照，配有药品柜、冰箱等设备。化学试剂物品分类存放于柜中，有毒物质如升汞需要专人密封保存。原药可室温下存放，配好的母液，宜置于4℃冰箱中保存。药品室紧邻称量室较好，便于工作。 称量室进行化学药品的称量。要求干燥、密闭，无直射光照，避免腐蚀性药品和水气直接接触。有固定的水磨石平台，安放普通天平、精密天平和分析天平，要有电源插座，最好设计在阴面的房间，这样对怕光药品的保存和称量有利，称量室紧邻培养基配制室较好，以方便配制母液和培养基。房间较少时，可以与药品室合二为一。 培养基配制室主要进行母液的配制，培养基的配制、分装、包扎和灭菌前的暂时存放。在条件允许下，面积宜大不宜小，室内应有大型实验台。配有电炉、锅子、量具、培养基分装器具、吸管、培养容器、水浴锅和酸度计等。如规模较小，可与洗涤室、灭菌室合并在一起。
植物组织培养实验报告
如对你有帮助，请购买下载打赏，谢谢！ 院(系、部) 化学与生物工程学院专业生物技术（师范）年级13级学号姓名组别第二组课程名称植物细胞工程学实验日期2016.3-6 指导老师实验名称植物组织培养综合实验 一、实验目的 1.熟悉MS培养基的组成，掌握贮备液的配制方法 2.学习、掌握植物组织固体培养基的配制和灭菌方法； 3.掌握超净工作台上的接种方法与注意事项，了解接种室的灭菌方法； 4.了解组织培养的基本程序； 5.掌握接种的方法和材料的培养过程； 6.掌握无菌操作技术，包括外植体除菌和接种技术； 7.观察外植体的生长状况、染菌状况，剔除染菌外植体； 8.了解MS培养基和1/2MS培养基的区别 二、实验原理 1.植物细胞的全能性 一切植物都由细胞构成，细胞是构成植物体的基本结构与功能单位。植物细胞含有全套遗传信息，具有形成完整植物的潜能。 2.植物细胞表现出全能性的条件 1.离体状态； 2.有一定的营养物质，激素和其他外界条件（无菌、温度、pH）； 3.选择性能优良、细胞全能性表达充分的基因型 3.无菌条件 把植物的组织、器官等，使其在人工控制的无菌条件下，使植物在人工培养基上繁殖。用于进行组织培养的组织、器官和细胞称为外植体。在组培中外植体都死带菌的，在接种前必须进行表面消毒，这时取得培养成功的最基本和重要的前体。组织培养的主要过程都是在无菌条件下进行的，所以所有的器材、植物体、接种室都应是无菌的。 4.脱分化与愈伤组织 已有特定结构与功能的植物组织，在一定条件下，其细胞被诱导改变原来的发育途径，逐步逆转其原有的分化形态，转变为具有分生能力的胚细胞的过程称为脱分化。脱分化所用的化学物质与MS培养基的区别是需要激素诱导。所以脱分化培养需在MS培养基上添加激素进行愈伤组织诱导。 5.培养基 植物组织培养常用的培养基为MS培养基。常用的凝固剂是琼脂,它的主要作用是使液体培养基凝固，琼脂本身并不提供任何营养，它只是一种高分予的碳水物从海藻中提取出来，仅溶解于热水，成为溶胶，冷却后(40℃以下)即凝固为固体状凝胶。琼脂的用量一般在4—10克／升之间。琼脂的凝固能力除与原料、厂家的加工方式等有关外，还与高压灭菌时的温度、时间、pH值等因素有关，长时间的高温会使凝固能力下降，过酸过碱加之高温会使琼脂发生水解而丧失凝固能力，存放时间过久，琼脂变褐，也会逐失去凝固能力。MS培养基属于富盐平衡培养基，特点是：无机盐浓度较高，元素间的比例适当，离子平衡性好，具有较强的缓冲性，因而在培养的过程中可维持较好的稳定性；营养丰富，在一般培养中无须额外加入复杂的有机成分；微量元素种类全，浓度高。这类培养基是目前使用最广泛的培养基。 6.生长调节物质 包括天然植物激素额人工激素类似物。植物激素是一类植物自身合成、同时对其生长发育具有重要调节作用的有机化合物。生长调节物质对于离题培养中的细胞分裂分
植物组织培养技术考试复习题
植物组织培养技术 考试复习题 一、填空题 1、组织培养的理论依据是：植物细胞的全能性。 2、根据培养的外植体材料不同，可将植物组织培养分为以下几种类型：愈伤组织培养、器官培养、胚培养、 细胞培养、原生质体培养、遗传转化。 3、植物组织培养实验室一般划分为洗涤室、培养基配置室、缓冲室、无菌接种室、培养室、观察室、驯化室等分室，其中植物组织培养实验室对无菌条件要求最严格的区域是无菌接种室。 4、培养基成分主要包水分、无机盐类、有机营养成、植物生长调节物质、天然物质、 pH 、凝固剂。 5、目前应用最广泛的组培基本培养基是 MS培养基。 6、培养基最常用的碳源是糖类物质，使用浓度在1%-5% 常用 3%。 7、培养基中加入活性炭的目的：减少外植体的褐变。 8、生长素/细胞分裂素的高低决定着外植体的发育方向，其比值高则有利于根的形成；其比值低则有利于芽的形成。 9、一个已停止分裂的成熟细胞转变为分生状态，并形成未分化的愈伤组织的现象称为"__脱分化__" 10、某些生长调节物质及抗生素、酶类物质遇热不稳定，对其灭菌时不能进行(高压蒸汽 )灭菌，而要进行过滤方法灭菌。 11、确定花粉发育时期最简捷有效的方法是压片镜检法。
12、液体培养基和固体培养基最主要的区别是：固体培养基中添加了琼脂粉，而液体培养基一般不添加。 13、细胞悬浮培养的方法有分批培养和连续培养。 14、外植体灭菌常用的消毒剂是酒精，使用浓度一般为 70—75％。 15、具有防止褐变作用的维生素是抗坏血酸（维生素c）。 16、常用防止褐变的试剂有有机酸、硫代硫酸钠。 17、组培中按照污染的对象分，常见的污染类型有细菌性污染、真菌性污染。 18、在使用超净工作台进行无菌操作前，应先将借种器械放进超净工作台，并打开紫外线灯和风机组工作进行消毒20分钟左右。 19、配制培养基调节pH值时常用氢氧化钠溶液和稀盐酸溶液。 20、某溶液在使用前已配制成100倍的母液，在使用时，若需要配制1/2 L的培养基，则需要吸取母液的量是 5ml 。 21、原球茎是兰科植物特有的一种快繁方式。 22、组织培养植株的再生途径有两条，分别是：器官发生途径和胚胎发生途径。 23、一般进行外植体培养时，须诱导形成新的分生组织，即形成愈伤组织。 24、在使用完移液枪后，应注意调回至该移液枪最大量程。 25、植物组织培养快速繁殖技术的基本过程包括材料的初代培养、继代培养、生根培养、驯化培养。
植物组织培养实验参考答案9
植物组织培养实验复习题 一、名词解释 1、大量元素:指含量占生物总重量万分之一以上的元素，包括C、H、O、N、P、S、K、C、Mg等。 2、微量元素:含量占生物总重量万分之一以下的元素。 3、植物生长调节剂:人工合成的对植物的生长发育有调节作用的化学物质。 4、外植体：把由活植物体上切取下来以进行培养的那部分组织或器官 5、细胞全能性：植物体的每个细胞都含有该植物全部的遗传信息。 6、基础培养基：根据植物营养原理和植物组织离体培养的要求而人工配置的营养基质。 7、愈伤组织:人工培养基上由外植体组织的增生细胞产生的一团不定形的疏松排列的薄壁细胞。 8、褐变:植物组织中多酚氧化酶被激活，使酚类物被氧化成醌类物，可抑制其他酶活性，毒害外植体。 9、茎尖脱毒:茎尖分生区的病毒传播速度很慢，利用茎尖组培获得无病毒苗，来达到脱毒的目的。 10、不定芽：凡从叶、根或芽节间或是离体培养的愈伤组织上等通常不形成芽的部位生出的芽。 11、污染率：污染数除以接种数，再乘以100%。 12、诱导率：愈伤数除以未污染数，再乘以100%。 13、成活率：成活数除以未污染数，再乘以100%。 14、接种：将表面消毒的外植体转接到无菌的培养基上的过程。 15、消毒：消灭材料上的病菌（不损伤植物材料）。 16、灭菌：利用物理或化学的方法，达到组织培养所学的无菌环境。 17、母液：欲配培养液的浓缩液。 18、无病毒苗：指不含该种植物的主要危害病毒，即经检测主要危害病毒在植物内的存在表现为阴性反应的苗木。 19、植物组织培养：在无菌条件下，将离体的植物器官、组织、细胞以及原生质体，培养在无菌培养基上和人工控制的环境中，使其生长、分化、增殖，甚至长出新的植株的过程和技术。 20快速繁殖：采取培养基配制，材料灭菌，无菌培养，幼苗转移到苗床，成苗转至大田栽种五步走的繁殖培养方式 21、继代培养：继代培养是指愈伤组织在培养基上生长一段时间后，营养物枯竭，水分散失，并已经积累了一些代谢产物，此时需要将这些组织转移到新的培养基上的培养方式。 22、生根培养：将长到一定长度的微枝（>10mm）转移到生根培养基上培养。 23、玻璃化现象：试管苗的茎叶变成透明水渍状，生长畸形，增殖系数明显下降，难以诱导生根，即使诱导生根，其根系质量极差，移栽成活率极低。 24、暗培养： 25、液体培养：将所需培养物的悬浮液在液体培养基中培养的方法。 26、脱分化：一个成熟细胞回复到分生状态或胚性细胞状态的现象。 27、分化：由于细胞的分工而导致的细胞结构和功能的改变或发育方式改变的过程。 28、热处理脱毒：利用高温下使植物组织中的病毒部分钝化或完全失去活性的方法。 1 / 6 29、微尖嫁接技术：把极小（<0.2mm）的茎尖作为接穗嫁接到实生砧木上（无菌种子培养获无菌
植物组织培养技术
第2章植物组织培养技术 第二节植物组织培养概述 一、授课章节 第二节植物组织培养概述。 二、学时安排 2学时。 三、教学目标 1．掌握植物组织培养的含义。 2．了解植物组织培养的类型划分。 3．理解植物组织培养的应用原理。 4．掌握植物组织培养的特点和应用。 四、教学重点、难点分析 重点： 植物组织培养的含义、特点和应用。 难点： 植物组织培养的应用原理。 五、教具 电化教学设备，植物组织培养试管苗。 六、教学方法 讲授法，多媒体课件。 七、教学过程 Ⅰ.导入 前面我们学习了有关植物育种的一些知识，今天，请看我给同学们看一样东西(教师拿出试管苗)，问同学们这是什么呢？这就是我们要学的植物组织培养。 II.新课
一、植物组织培养的含义 植物组织培养是指在无菌条件下，将离体的植物器官、组织、细胞以及原生质体培养在人工培养基上，给予适宜的培养条件，使其长成完整植株的过程。由于培养物脱离母株在试管内培养，故又称离体培养、试管培养。 二、植物组织培养的类型 植物组织培养由于分类依据不同可划分为不同的类型。 三、植物组织培养的应用原理 （一）植物细胞全能性 植物细胞全能性，是指植物体上每个具有完整细胞核的植物细胞，都具有该植物体的全部遗传信息和产生完整植株的能力。植物的体细胞一旦脱离所在器官或组织的束缚成为离体状态时，在一定的营养、激素和外界条件作用下，就可能表现出全能性，而生长发育成为完整的植株。
（二）细胞的分化和形态建成 （三）植物的再生功能 四、植物组织培养的特点 （一）研究材料来源单一，无性系遗传信息相同 （二）试验经济，管理方便，工作效率高 （三）培养条件人为控制，可周年连续进行试验或生产 （四）生长快，周期短，繁殖率高 五、植物组织培养的应用 （一）优良品种的快速繁殖 （二）脱毒及脱毒苗的再繁育 （三）植物新品种的培育 （四）种质资源的保存和交换 （五）有用次生代谢产物的生产 III.作业 1.简述植物组织培养的概念和培养类型。 2.植物组织培养技术有哪些特点？ 3.植物组织培养在生产上有哪些方面的应用？ 4.通过学习，你对植物组织培养技术是怎样理解的？ 第二节植物组织培养厂房的设计与构建一、授课章节 第二节植物组织培养厂房的设计与构建。 二、学时安排 2学时。
第五章 植物组织培养技术实验方案
第五章植物组织培养技术 一、植物组织培养中的基本概念 (1) 植物组织培养技术: 在无菌培养的条件下，将离体的植物器官（根，茎，叶，花，果实等）、组织（形成层，花药组织等）、细胞（体细胞，生殖细胞等）以及原生质体等培养在人工配制的培养基上，并给予适当的培养条件，使其长成完整植株的过程。 (2) 理论依据： 植物细胞的全能性，即指植物机体的每个细胞都含有该物种全套的基因组，具有发育成完整个体的潜力。 (3) 外植体： 从活体植株上切下的，用于组织培养的细胞、组织和器官。一般包括茎尖、根、茎、叶、花、种子等器官以及他们形成的体细胞胚等材料。 (4) 分化： 在个体发育过程中，由一种相同的细胞类型经细胞分裂后逐渐在形态、结构和功能上形成稳定性差异，产生不同的细胞类群的过程称为细胞分化。 (5) 脱分化： 已经高度分化的植物器官、组织或细胞，在切割损伤和培养物内外因素的共同作用下，逐渐丧失原来的分化结构和功能，最后形成无组织的细胞团或愈伤组织的过程。 (6) 愈伤组织： 在人工培养基上由外植体脱分化形成的一团无序生长的薄壁细胞。（具有细胞分裂能力）。 (7) 再分化： 已经脱分化的细胞在一定条件下，又可经过愈伤组织或胚状体，再分化出根和芽，形成完整植株，这一过程叫作再分化。 (8) 不定芽： 在高等植物正常的个体发育中，芽一般是只从茎尖或叶腋等的一定位置生出。所以这种象顶芽、腋芽、副芽等均在一定部位生出的芽，称为定芽。与此相反，凡从叶、根、或茎节间等通常不形成芽的部位生出的芽，则统称为不定芽。 (9) 胚状体： 在离体植物细胞、组织或器官培养过程中，由一个或一些体细胞，经过胚胎发生和发育过程，形成的与合子胚相类似的结构。 二、植物组织培养过程（菊花为例） 1、培养基的配制: 方法：培养基干粉配制法 称取培养基干粉42g加水加热煮沸溶解后定溶至1L，按照需要的浓度分别加入激素。 （其中生根用的植物激素NAA为0.2mg/1000ml） 用1mol/L NaOH和1mol/L HCl调节pH至5.8。将配好的培养基迅速分装至150ml组培瓶中，拧上盖子，放入灭菌锅121℃，灭菌20min。 2、菊花接种与培养：
《植物组织培养》试题及答案教学教材
试卷编号NO： 高等函授教育《植物组织培养》试题 学号：姓名： 一名词解释：（10*2分=20分） 1、植物细胞组织培养 2、细胞全能性 3、脱分化 4、外植体 5、试管苗驯化 6、间接不定芽发生 7、双极性 8、微体嫁接 9、人工种子 10、体细胞无性系变异 二填空：（30*1分=30分） 1、目前植物组织培养应用最广泛的方面是 和。 2、由脱分化的细胞再分化出完整植株有两种途径，一种叫做，另一种叫做。 3、培养用具的常用灭菌方法有、、 。 4、某些生长调节物质及抗生素、酶类物质遇热不稳定，对其灭菌时不能进行，而要进行。 5、一般来说，黑暗条件下有利于的增殖，而往往需要一定的光照。 6、植物离体授粉技术通常包括、、 三个方面。 7、一般液体培养的继代时间较短，继代一次；而固体培
养继代时间可以长些，继代一次。 8、外植体器官发生的三种途径包括、、。 9、从再生植株倍性来看，小孢子培养通常产生植株，胚 培养通常产生植株，通常产生三倍体植株。 10、脱毒苗鉴定与检测的主要方法有、、 、。 11、在生长素中，对于许多作物花粉的启动、分裂、形成愈伤组织和胚状体起着决定性作用，但是对却有抑制作用。 12、用平板培养法培养单细胞或原生质体时，常用 来衡量细胞培养效果。 13、用药剂处理是诱导染色体加倍的传统方法。 三计算题（1*10分=10分） 某培养基的配方是MS＋BA 2.0mg/L＋NAA 0.5mg/L＋2.5%蔗糖＋0.7％琼脂粉。MS母液的浓度分别是：大量元素２０倍，微量元素500倍，铁盐100倍，有机物５０倍；BA母液浓度1.0 mg/ml ，NAA母液浓度0.1mg/ml。要配制400ml 该培养基，需要吸取各种母液各多少ml？分别称取蔗糖、琼脂粉各多少克？（要求写出计算步骤）四简答题（5*5分=25分） 1、造成组织培养过程中发生污染的原因有哪些？如何有效控制污染？ 2、简述外植体消毒的一般步骤。
植物组织培养实验报告
植物组织培养实验报告 一实验目的 让植物组织经过脱分化作用，形成愈伤组织，经过再分化作用，愈伤组织又能重新分化为有结构的组织和器官，最终形成完整的植株。 二实验原理 植物组织培养是把植物的器官，组织以至单个细胞，应用无菌操作使其在人工条件下，能够继续生长，甚至分化发育成一完整植株的过程。植物的组织在培养条件下，原来已经分化停止生长的细胞，又能重新分裂，形成没有组织结构的细胞团，即愈伤组织。这一过程称为“脱分化作用”，已经“脱分化”的愈伤组织，在一定条件下，又能重新分化形成输导系统以及根和芽等组织和器官，这一过程称“再分化作用”。植物激素在此过程中起着重要的作用，吲哚乙酸（IAA ）和 6 –苄基氨基腺嘌呤（6 – BA ）的比例，决定了根和芽的分化。 三实验器材 （一）试剂 乙醇、IAA 或 2 ，4 – D 、HgCl 2 （或次氯酸钠）、6- 苄基氨基腺嘌呤（6-BA ） MS 培养基 （二）仪器设备 培养室，高压灭菌锅，水浴锅，解剖刀，三角烧瓶（100mL ），烧杯，量筒，培养皿，超净工作台，分析天平，长镊子，剪刀，橡皮筋等 三实验步骤 1. 配制培养基 （1 ）愈伤组织诱导培养基：MS 培养基（蔗糖含量为10 g/L ，2,4 – D 含量为 2 mg/L ，琼脂10 g/L ）。 （2 ）试验培养基：在MS 培养基中按表33 – 1 加入IAA 和6–BA 。 吲哚乙酸先用少量0.1 mol/L NaOH 溶解，6- 苄基氨基腺嘌呤先用少量0.1 mol/L HCl 溶解，然后用蒸馏水稀释，再加入培养基中。 2. 培养基灭菌 将配好的培养基加入琼脂加热溶解，调至pH 5.8 ，趁热分装于100 mL 三角烧瓶中，每瓶约20 mL 。待培养基冷却凝固后，用两层称量纸包扎瓶口，并用橡皮筋扎牢，然后在高压灭菌锅中121 ℃（ 1 kg/cm 2 ）下灭菌20 min 。取出三角烧瓶放在台子上，
植物组织培养技术实验
《植物组织培养技术》课程 实验实训教学大纲 (2004级食用菌与蔬菜专业适用) 生物工程与农业经济系 濮阳职业技术学院 2005年9月
说明 本大纲是根据2004级三年制食用菌与蔬菜专业教学计划而制订的。一、课程性质和任务 植物组织培养技术实验实训课程是食用菌与蔬菜专业专业的主要专业基础课程之一。 植物组织培养是在无菌条件下，利用人工培养基对植物的器官、组织、细胞和原生质体进行培养的技术，是现代生物技术的核心技术之一。在植物的优良品种快速繁殖，脱毒苗木生产、缩短育种进程、种质资源保存等方面具有其它技术无法比拟的优势。 植物组培实验实训课程的教学任务在于使学生掌握组织培养的基本操 作技能和技巧，为进一步开展组培实训及从事组织培养工作奠定基础。 为适应高职高专教育改革的要求、突出高职高专教育的特点，适应本地农村产业结构调整的需要，本大纲以2003年的教学大纲为蓝本，在教学内容上进行了调整。 2、本课程教学的基本内容： 本课程是一门理论性、技术性和实践性强的的课程，通过本课程的学习，要求学生掌握植物组织培养基础知识、基本理论和基本技术。重点是植物的快速繁殖技术和组培苗工厂化生产技术。并紧紧围绕培养高等应用型技术人才，以强化技术应用能力培养为主线，着眼于培养学生应职岗位综合能力和创新精神，提高学生实践动手能力、科学实验能力、技术推广与市场开拓能力和组培苗工厂化生产经营与组织管理能力。 3、内容安排与学时分配 本大纲将教学内容分为实验教学、实训教学两个模块。实验教学结合理论讲授，在第三学期开设，共22学时。实训教学在第三、四学期开设，每学期为期一周。具体教学内容和学时分配见下表：
植物组织培养试题及答案总结
《绪论》复习题及参考答案 一、填空： ★1、根据培养的材料，植物组织培养分：愈伤组织培养、器官培养、细胞培养、原生质体培养、悬浮培养等类型。 2、植物组织培养的发展分为三个阶段：萌芽阶段、奠基阶段和快速发展和应用阶段。 3、1902年，Haberlandt提出了植物细胞“全能性”学说，1934年，White出版了《植物组织培养手册》从而使植物组织 培养为一门新兴学科。 二、名词解释： ★1、植物组织培养(plant tissue culture)：是指通过无菌和人工控制的环境条件下，利用适当的培养基，对离体的植物器官、组织、细胞及原生质体进行培养，使其再生细胞或完整植株的技术。由于培养材料已脱离了母体，又称为植物离体培养（Plant culture in vitro）。 2、脱分化（dedifferentiation）：由高度分化的植物器官、组织或细胞产生愈伤组织的过程，称为植物细胞的脱分化。 3、再分化（redifferentiation）：脱分化产生的愈伤组织继续进行培养又可以重新分化成根或芽等器官，这一过程称为植物细胞的再分化。 ★4、外植体(explant)：由活体（in vivo)植物体上切取下来的，用于组织培养的各种接种材料。包括各种器官、组织、细胞或原生质体等 ★5、愈伤组织(callus)：原指植物在受伤之后于伤口表面形成的一团薄壁细胞，在组培中则指在离体培养过程中形成的具有分生能力的一团不规则的薄壁细胞，多在植物体切面上产生。 三、问答题： 1、简述植物组织培养的理论依据？ 植物组织培养的理论依据是细胞全能性学说，即植物体的每一个细胞都携带有一套完整的基因组，并具有发育成为完整植株的潜在能力。 ★2、植物组织培养有哪些特点？ （1）培养条件可以人为控制 （2）生长周期短，繁殖率高： （3）管理方便，利于工厂化生产和自动化控制： ★3、植物组织培养的分类？ （1）根据培养对象不同：组织培养、器官培养、胚胎培养、细胞培养、原生质体培养等； （2）根据培养物培养过程：初代培养、继代培养； （3）根据培养基的物理状态：固体培养、液体培养。 ★4、植物组织培养主要应用于哪些方面？ （1）快速繁殖运用组织培养的途径，一个单株一年可以繁殖几万到几百万个植株； （2）种苗脱毒针对病毒对农作物造成的严重危害，通过组织培养可以有效地培育出大量的无病毒种苗； （3）培育和创制新品种利用组织培养可以使难度很大的远缘杂交取得成功，从而育成一些罕见的新物种； （4）大量生产次生代谢物质通过植物细胞培养获得的生物碱、维生素、色素、抗生素以及抗肿瘤药物不下50多个大类，其中已有30多种次生物质的含量在人工培养时已达到或超过亲本植物的水平。植物细胞次生物质的研制与生产硕果累累，后来居上。 （5）植物种质资源的离体保存植物组织培养结合超低温保存技术，可以给植物种质保存带来一次大的飞跃。因为保存一个细胞就相当于保存一粒种子，但所占的空间仅为原来的几万分之一，而且在-193度的液氮中可以长时间保存，不像种子那样需要年年更新或经常更新。 （6）人工种子人工种子便于贮藏和运输，适合机械化播种；繁殖速度快，不受季节和环境限制，利于工厂化生产；体细胞胚由无性繁殖体系产生，可以固定杂种优势。 第1章《实验室及基本操作》复习题及参考答案 一、填空： 1、组织培养实验室必要的设备有超净工作台、高压灭菌器、空调机、天平、显微镜、蒸馏水发生器、酸度计等。 ★2、培养基成分主要包括①无机营养成分、②有机营养成分）、③植物生长调节物质、④碳水化合物、⑤其它物质。
植物组织培养试题与答案(集合版)
植物组织培养试题与答案(集合版)
植物组织培养练习题 1.植物组织培养：指要人工控制的条件下，将植物体的任何部分，或器官、或组织、或细胞， 进行离体培养，使之发育形成完整植物体。所谓人工控制的条件，即营养条件和环境条件； 植物体的任何一部分是指根、茎、叶、花、果、实以及它们的组织切片和细胞。 2.愈伤组织培养：将外植体接种在人工培养基上，由于植物生长调节剂的存在，而使其细胞 脱分化形成愈伤组织，然后通过再分化形成再生植株。 3.外植体：植物组织培养中的各种接种材料，包括植物体的各种器官、组织、细胞和原生质 体等。 4.脱分化：一个已停止分裂的成熟细胞转变为分生状态，并形成未分化的愈伤组织的现象。 5、接种：把经过表面灭菌后的外植体切碎或分离出器官、组织、细胞，转放到无菌培 养基上的全部操作过程。 6、褐变：外植体在培养过程中体内的多酚氧化酶被激活，使细胞里的酚类物质氧化成棕褐色的醌类 物质，这种致死性的褐化物不但向外扩散使培养基逐渐变成褐色，而且还会抑制其他酶的活性，严重影响外植体的脱分化和器官分化，最后变褐而死亡的现象。 二填空 植物组织培养根据培养方式分为固体培养和液体培养。 2、植物组织培养类型分为愈伤组织培养、器官培养、胚培养、细胞和原生质体培养。 3、组织培养的主要应用领域有快速繁殖、脱毒、体细胞无性系变异和新品种培育、单倍体育种、种质保存、遗传转化、次生代谢物的生产等几个方面。 4、茎尖培养根据培养目的和取材大小可分为快速繁殖和脱毒培养两种类型。 5、一般组织培养的几道工序如下：培养器皿的清洗、培养基的配制、分装和高压灭菌；无菌操作——材料的表面灭菌和接种，培养；试管苗的驯化、移栽与初期管理。 6、在进行植物组织培养室设计时，其设计应包括洗涤室、准备室、灭菌室、无菌操作室、培养室、细胞学实验室、摄影室等分室，另加驯化室、温室和大棚。 7、培养基的成分主要包括无机营养、氨基酸、有机附加物、维生素、糖、琼脂、激素、活性炭、PH。 8、植物器官培养主要是指植物的根、茎、叶、花器和幼小果实的无菌培养。 9、细胞全能性是指植物的每一个细胞都携带有一完整的基因组，并具有发育成完整植株的潜在能力。 10、玻璃化现象是指试管苗的一种生长失调症状，当植物材料进行离体繁殖时，有些培养物的嫩茎、叶片往往会出现半透明状和水渍状，这种现象称为玻璃化。其苗称为玻璃化苗。