超滤管使用方法和注意事项
超滤管使用方法和注意事项
蛋白浓缩和换Buffer通常使用的超滤管，常用Millipore的Amicon-Ultra-15超滤管（MWCO10kD）。也有其它型号的、不同体积大小和MWCO超滤管可选，视目的蛋白的分子量与浓缩前体积、浓缩目标体积而定。可重复使用，使用一次就扔掉太浪费。以下是个人总结的使用方法和注意事项。
1、选择合适的超滤管，主要考虑MWCO和浓缩体积，最常见的是Ultra-15（10kD）。到底选择多大截留分子量比较合适呢？10kDa、 5kDa、还是30kDa？通常应截留分子量不应大于目的蛋白分子量的1/3，比如目的蛋白分子量为35kDa，就可以选择10kDa截留分子量的超滤管。若目的蛋白分子量为10kD左右，则可以用截留分子量3kD的超滤管。认真阅读使用说明书，注意超滤膜对各种化学物质的耐受程度有所不同，表格中有。
2、新买来的超滤是干燥的，使用前加入MilliQ水，水量完全过膜，冰浴或冰箱里预冷几分钟。然后将水倒出，即可加入蛋白液，加入的多少，以不超过管顶的白线为准。操作要轻，加入蛋白液前，超滤管需要插在冰上预冷。
3、平衡。质量和重心二者都要达到平衡。注意转速和加速度不可太快，否则直接损坏超滤膜。开始离心超滤（离心机预冷至4度）。不同离心机的转速 rpm 换算成g之后，有所不同。具体可参阅附件里的说明书。离心机的加速度调至最低档，减小对膜的压力。注意，一定要等离心机达到目的转速之后，方可离开离心机，否则离心机出问题时，无法第一时间处理，后果不可预测！膜与转轴的方向根据说明书调整（角转离心机的情况是膜与轴垂直）。在实际使用中，一般转速开的比说明书里的要低，这样可以延长离心管的使用寿命。
4、当浓缩到剩下1ml时，【取50ul国产Bradford溶液，加入10ul流穿，看有没变蓝色，以此判断超滤管是否漏掉蛋白。如果管漏了，将上层和流穿重新倒入新管中开始超滤。要精确判断是否漏管，用5mg/ml的BSA离心10min，再取流穿，跑蛋白胶或Bradford粗测】，继续加入剩下的蛋白液浓缩（在冰上操作，防止蛋白受热），直到所有浓缩液都加完为止。离心过程中注意是否发生蛋白沉淀，导致堵管。若发生沉淀，要确定沉淀的具体原因，是蛋白浓度过高还是Buffer不合适；前者可用多根超滤管同时超滤，降低浓度的办法解决，后者的方法是换不同的Buffer，直到蛋白不发生沉淀为止。
5、前面几步用以浓缩蛋白，如果要换Buffer，在总蛋白液浓缩至1ml左右的时候，轻轻加入新的Buffer（经0.22um超滤膜超滤），再浓缩至1ml左右，连续三次，最后一次的浓缩终体积根据需要的蛋白浓度而定，一般不多于500ul，也有浓缩至200ul以内的情况。按照每次至少10倍左右的体积浓缩算，三次达到1000倍以上，基本上可以达到换buffer的目的。
6、取出最终蛋白浓缩液的操作在冰上操作，用黄枪头（200ul）取，轻轻顺着边缘插入枪头，轻轻吹打、混匀蛋白液，注意不要碰到超滤膜，然后吸取浓缩液，每次吸接近200ul，直到吸完。管底剩下的最后一点浓缩液不必吸取，否则难度
太大，有可能损坏超滤膜。最后加入MilliQ水到超滤管中，没过超滤膜，防止膜失水变干。
7、以下是处理超滤管，重复利用超滤管的步骤。
8、倒出超滤管里的水，用milliQ水轻轻润洗几次，【若管底有可见的蛋白沉淀，可以先加入水，然后用枪头吹打，注意不要碰到膜，吹打至沉淀悬起，然后倒掉，不可用自来水猛冲】然后加入0.2M的NaOH溶液，室温放置20min，期间平衡超滤管。再离心10min。倒出残留的NaOH溶液，将管芯浸入MilliQ水的烧杯(1或2L)中,放置几个小时,再换新的水,放置几个小时，不断稀释NaOH浓度。50ml管和盖子用自来水洗，内壁再用 MilliQ水洗干净。
9、取出浸没的管芯，加至接近满的MilliQ水，50ml管也加满MilliQ水，将管芯慢慢放入50ml离心管，排出部分水，然后盖上盖子，放4度保存，直到下次使用。一般来说，按照上述步骤和注意事项，每根管用三四年不会坏。
实验室常用储存液的配置参数
1．30%丙烯酰胺溶液
【配制方法】将29g丙烯酰胺和1g N，N’-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为60ml的水中。加热至37℃溶解之，补加水至终体积为100ml。用Nalgene滤器（0.45μm孔径）过滤除菌，查证该溶液的pH值应不大于7.0，置棕色瓶中保存于室温。
【注意】丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可以通过皮肤吸收，其作用具累积性。称量丙烯酰胺和亚甲双丙烯酰胺时应戴手套和面具。可认为聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为它还可能会含有少量未聚合材料。一些价格较低的丙烯酰胺和双丙烯酰胺通常含有一些金属离子，在丙烯酰胺贮存液中加入大约0.2体积的单床混合树脂（MB-1Mallinckrodt），搅拌过夜，然后用Whatman 1号滤纸过滤以纯化之。在贮存期间，丙烯酰胺和双丙烯酰胺会缓慢转化成丙烯酰和双丙烯酸。
2．40%丙烯酰胺
【配制方法】把380g丙烯酰胺（DNA测序级）和20g N，N’-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为600ml的蒸馏水中。继续按上述配制30%丙烯酰胺溶液的方法处理，但加热溶解后应以蒸馏水补足至终体积为1L。
【注意】见上述配制30%丙烯酰胺的说明，40%丙烯酰胺溶液用于DNA序列测定。
3．放线菌素D溶液
【配制方法】把20mg放线菌素D溶解于4ml 100%乙醇中，1：10稀释贮存液，用100%乙醇作空白对照读取OD440值。放线菌素D（分子量为1255）纯品在水溶液中的摩尔消化系数为 21，900，故而1mg/ml的放线菌素D溶液在440nm 处的吸光值为0.182，放线菌素D的贮存液应放在包有箔片的试管中，保存于
-20℃。
【注意】放线菌素D是致畸剂和致癌剂，配制该溶液时必须戴手套并在通风橱内操作，而不能在开放在实验桌面上进行，谨防吸入药粉或让其接触到眼睛或皮肤。
药厂提供的作治疗用途的放线菌素D制品常含有糖或盐等添加剂。只要通过测量贮存液在440nm波长处的光吸收确定放线菌素D的浓度，这类制品便可用于抑制自身引导作用。
4．0.1mol/L腺苷三磷酸（ATP）溶液
【配制方法】在0.8ml水中溶解60mg ATP,用0.1mol/L NaOH调至pH值至7.0，用蒸馏水定容1ml，分装成小份保存于-70℃
5．10mol/L乙酸酰溶液
【配制方法】把770g乙酸酰溶解于800ml水中，加水定容至1L后过滤除菌。6．10%过硫酸铵溶液
【配制方法】把1g过硫酸铵溶解于终量为10ml的水溶液中，该溶液可在4℃保存数周。
7．BCIP溶液
【配制方法】把0.5g的5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸二钠盐（BCIP）溶解于10ml 100%的二甲基甲酰胺中，保存于4℃
8．2×BES缓冲盐溶液
【配制方法】用总体积90ml的蒸馏水溶解1.07g盐溶液BES[N，N-双（2-羟乙基）-2-氨基乙磺酸]、1.6g NaCl和0.027g Na2HPO4，室温下用HCl调节该溶液的pH值至6.96、然后加入蒸馏水定容至100ml，用0.22μm滤器过滤除菌，分装成小份，保存于 -20℃。
9．1mol/L CaCl2溶液
【配制方法】在200ml蒸馏水中溶解54g CaCl2?6H2O，用0.22μm滤器过滤除菌，分装成10ml小份贮存于-20℃。【注意】制备感受态细胞时，取出一小份解冻并用蒸馏水稀释至100ml，用Nalgene滤器（0.45μm孔径）过滤除菌，然后骤冷至0℃。
10．2.5mol/L CaCl2溶液
【配制方法】在20ml蒸馏水中溶解13.5g CaCl2?6H2O，用0.22μm滤器过滤除菌，分装成1ml小份贮存于-20℃。
11．1mol/L二硫苏糖醇（DTT）溶液
【配制方法】用20ml 0.01mol/L乙酸钠溶液（pH5.2）溶解3.09g DTT，过滤除菌后分装成1ml小份贮存于-20℃。【注意】DTT或含有DTT的溶液不能进行高压处理。
12．脱氧核苷三磷酸（dNTP）溶液
【配制方法】把每一种dNTP溶解于水至浓度各为100mmol/L左右，用微量移液器吸取0.05mol/l Tris碱分别调节每一dNTP溶液的pH值7.0（用pH试纸检测），把中和后的每种dNTP溶液各取一份作适当稀释，在给出的波长下读取光密度计算出每种dNTP的实际浓度，然后用水稀释成终浓度为50mmol/L的dNTP，分装成小份贮存于-70℃。
13．0.5mol/l EDTA(pH8.0)溶液
【配制方法】在800ml水中加入186.1g二水乙二胺四乙酸二钠
（EDTA-Na?2H2O），在磁力搅拌器上剧烈搅拌，用NaOH调节溶液的pH值至8.0（约需20g NaOH颗粒）然后定容至1L，分装后高压灭菌备用。
【注意】EDTA二钠盐需加入NaOH将溶液的pH值调至接近8.0，才能完全溶解。
14．溴化乙锭（10mg/ml溶液）
【配制方法】在100ml水中加入1g溴化乙锭，磁力搅拌数小时以确保其完全溶解，然后用铝箔包裹容器或转移至棕色瓶中，保存于室温。
【注意】小心：溴化乙锭是强诱变剂并有中度毒性，使用含有这种染料的溶液时务必戴上手套，称量染料时要戴面罩。
15．2×HEPES缓冲盐溶液
【配制方法】用总量为90ml的蒸馏水溶解1.6g NaCl、0.074g KCl、0.027g Na2PO4?2H2O、0.2g葡聚糖和1gHEPES，用0.5mol/l NaOH调节pH值至7.05，再用蒸馏水定容至100ml。用0.22μm滤器过滤除菌，分装成5ml小份，贮存于-20℃。
16．IPTG溶液
【配制方法】IPTG为异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（分子量为238.3），在8ml 蒸馏水中溶解2g IPTG后，用蒸馏水定容至10ml，用0.22μm滤器过滤除菌，分装成1ml小份贮存于-20℃。
17．1mol/L乙酸镁溶液
【配制方法】在800ml水中溶解214.46g四水乙酸镁，用水定容至1L过滤
18．1mol/L MgCl2溶液
【配制方法】在800ml水中溶解203.4g MgCl2?6H2O，用水定容至1L，分装成小份并高压灭菌备用。
【注意】MgCl2极易潮解，应选购小瓶（如100g）试剂，启用新瓶后勿长期存放。
19．β-巯基乙醇（BME）溶液
【配制方法】一般得到的是14.4mol/L溶液，应装在棕色瓶中保存于4℃。
【注意】BME或含有BME的溶液不能高压处理。
20．NBT溶液
【配制方法】把0.5g氯化氮蓝四唑溶解于10ml 70%的二甲基甲酰胺中，保存于4℃。
21．酚/氯仿溶液
【配制方法】把酚和氯仿等体积混合后用0.1mol/L Tris?HCl(pH7.6)抽提几次以平衡这一混合物，置棕色玻璃瓶中，上面覆盖等体积的0.01mol/l
Tris?HCl(pH7.6)液层，保存于4℃。
【注意】酚腐蚀性很强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜，穿防护服。所有操作均应在化学通风橱中进行。与酚接触过的部位皮肤应用大量的水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。
22．10mmol/L苯甲基磺酰氟（PMSF）溶液
【配制方法】用异丙醇溶解PMSF成1.74mg/ml（10mmol/L），分装成小份贮存于-20℃。如有必要可配成浓度高达17.4mg/ml的贮存液（100mmol/L）。
【注意】PMSF严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤，吸入、吞进或通过皮肤吸收后有致命危险。一旦眼睛或皮肤接触了PMSF，应立即用大量水冲洗之。凡被PMSF污染的衣物应予丢弃。PMSF在水溶液中不稳定。应在使用前从贮存液中现用现加于裂解缓冲液中。PMSF在水溶液中的活性丧失速率随pH值的升高而加快，且25℃的失活速率高于4℃。pH值为8.0时，20μmmol/l PMSF水溶液的半寿期大约为85min，这表明将PMSF溶液调节为碱性（pH>8.6）并在室温放置数小时后，可安全地予以丢弃。
23．磷酸盐缓冲溶液（PBS）溶液
【配制方法】在800ml蒸馏水中溶解8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,用HCl调节溶液的pH值至7.4加水定容至1L，在
15lbf/in2(1034×105Pa)高压下蒸气灭菌20min。保存于室温。
24．1mol/L乙酸钾（pH7.5）溶液
【配制方法】将9.82g乙酸钾溶解于90ml纯水中，用2mol/L乙酸调节pH 值至7.5后加入纯水定容到1L，保存于-20℃。
25．乙酸钾溶液（用于碱裂解）
【配制方法】在60ml 5mol/L乙酸钾溶液中加入11.5ml冰乙酸和28.5ml水，即成钾浓度为3mol/L而乙酸根浓度为5mol/L的溶液。
26．3mol/L乙酸钠（pH5.2和pH7.0）溶液
【配制方法】在80ml水中溶解408.1g三水乙酸钠，用冰乙酸调节pH值至5.2或用稀乙酸调节pH值至7.0，加水定容到1L，分装后高压灭菌。
27．5mol/L NaCl溶液
【配制方法】在800ml水中溶解292.2g NaCl加水定容至1L，分装后高压灭
28．10%十二烷基硫酸钠（SDS）溶液
【配制方法】在900ml水中溶解100g电泳级SDS，加热至68℃助溶，加入几滴浓盐酸调节溶液的pH值至7.2，加水定容至1L，分装备用。
【注意】SDS的微细晶粒易扩散，因此称量时要戴面罩，称量完毕后要清除残留在称量工作区和天平上的SDS，10%SDS溶液无须灭菌。
29．20×SSC溶液
【配制方法】在800ml水中溶解175.3g NaCl和88.2g柠檬酸钠，加入数滴10mol/l NaOH溶液调节pH值至7.0，加水定容至1L，分装后高压灭菌。30．20×SSPE溶液
【配制方法】在800ml水中溶解17.5g NaCl、27.6g NaH2PO4?H2O和7.4g EDTA，用NaOH溶液调节pH值至7.4（约需6.5ml 10ml/L NaOH），加水定容至1L，分装后高压灭菌。
31．100%三氯乙酸溶液
【配制方法】在装有500g TCA的瓶中加入227ml水，形成的溶液含有100%（M/V）TCA。
32．1mol/L Tris溶液
【配制方法】在800ml水中溶解121.91g Tris碱，加入浓HCl调节pH值至所需值。应使溶液冷至室温后方可最后调定pH值，加水定容至1L，分装后高压灭菌。
【注意】如1mol/L溶液呈现黄色，应予丢弃并置备质量更好的Tris。
尽管多种类型的电极均不能准确测量Tris溶液的pH值，但仍可向大多数厂商购得合适的电极。Tris溶液的pH值因温度而异，温度每升高1℃，pH值大约降低0.03个单位。例如：0.05mol/L的溶液在5℃、25℃、和37℃时的pH值分别为9.5、8.9和8.6。
33．Tris缓冲盐溶液（TBS）（25mmol/l Tris）
【配制方法】在800ml蒸馏水中溶解8g NaCl、0.2g KCl和3g Tris碱，加入0.015g酚并用HCl调至pH值至7.4，用蒸馏水定容至1L，分装后在
151bf/in2(1.034×105Pa)高压下蒸汽灭菌20min，于室温保存。
34．X-gal溶液
【配制方法】X-gal为5-溴-4-氯-3-吲哚 -β-D半乳糖苷。用二基甲酰胺溶解X-gal配制成的20mg/ml的贮存液。保存于一玻璃管或聚丙烯管中，装有X-gal溶液的试管须用铝箔封裹以防因受光照而被破坏，并应贮存于-20℃。X-gal溶液无须过滤除菌。
蛋白质浓缩问题——超滤浓缩管的使用及保存
二、离心超滤管浓缩样品 2.1 浓缩样品 1、要浓缩的样品含盐量必须0.3M以上，含盐量低的样品须补加到0.3MNaCl。 2、在内管（附有3KD膜）中加入500μl样品，将内管套入外管。 3、对称放置离心管，14520rpm(即14000g)离心。（离心5min约浓缩2倍，10min约4倍，15min约6倍，20min约8倍，30min约10倍）。 4、离心结束后，将内管倒置套在另一个干净的离心管呢，3880rpm离心min收集浓缩后的样品。或者用移液器直接吸出内管中的样品。 2.2 浓缩管使用后的处理和保存 1、使用完的浓缩管，立即加入500μl含1MNaCl的缓冲液（此缓冲液与浓缩样品的缓冲液一致），8000rpm离心20min。 2、甩净内管中的盐溶液，将内管放入超纯水中浸泡1h。 3、内管加入超纯水500μl，8000rpm离心5min。 4、甩净内管中的水，加入500μl0.2MNaOH，8000rpm离心20min。 5、甩净内管中的NaOH溶液，用超纯水再8000rpm离心5min。 6、甩净内管中的水，放入含0.2-0.5‰NaN3的生理盐水中。 7、外管用自来水洗净后，用超纯水冲洗干净，晾干。 超滤管使用注意事项 2012-06-06 18:12:28| 分类：默认分类| 标签：|字号大中小订阅 蛋白浓缩和换Buffer通常使用的超滤管，常用Millipore的Amicon-Ultra-15超滤管（MWCO10kD）。也有其它型号的、不同体积大小和MWCO超滤管可选，视目的蛋白的分子量与浓缩前体积、浓缩目标体积而定。可重复使用，使用一次就扔掉太浪费。以下是个人总结的使用方法和注意事项。 1、选择合适的超滤管，主要考虑MWCO和浓缩体积，最常见的是Ultra-15（10kD）。到底选择多大截留分子量比较合适呢？10kDa、5kDa、还是30kDa？通常应截留分子量不应大于目的蛋白分子量的1/3，比如目的蛋白分子量为35kDa，就可以选择10kDa截留分子量的超滤管。若目的蛋白分子量为10kD左右，则可以用截留分子量3kD的超滤管。认真阅读使用说明书，注意超滤膜对各种化学物质的耐受程度有所不同，表格中有。 2、新买来的超滤是干燥的，使用前加入MilliQ水，水量完全过膜，冰浴或冰箱里预冷几分钟。然后将水倒出，即可加入蛋白液，加入的多少，以不超过管顶的白线为准。操作要轻，加入蛋白液前，超滤管需要插在冰上预冷。 3、平衡。质量和重心二者都要达到平衡。注意转速和加速度不可太快，否则直接损坏超滤膜。开始离心超滤（离心机预冷至4度）。不同离心机的转速rpm换算成g之后，有所不同。具体可参阅附件里的说明书。离心机的加速度调至最低档，减小对膜的压力。注意，一定要等离心机达到目的转速之后，方可离开离心机，否则离心机出问题时，无法第一时间处理，后果不可预测！膜与转轴的方向根据说明书调整（角转离心机的情况是膜与轴垂直）。在实际使用中，一般转速开的比说明书里的要低，这样可以延长离心管的使用寿命。 4、当浓缩到剩下1ml时，取50ul国产Bradford溶液，加入10ul流穿，看有没变蓝色，以此判断超滤管
超滤工作原理
超滤的工作原理 超滤（Ultrafiltration）技术是一种膜滤法，也有错流过滤（Cross Filtration）之称。它能 从周围含有微粒的介质中分离出10～100A的微粒，这个尺寸范围内的微粒，通常是指液体内的溶质。其基本原理是在常温下以一定压力和流量，利用不对称微孔结构和半透膜介质，依靠膜两侧 的压力差作为推动力，以错流方式进行过滤，使溶剂及小分子物质通过，大分子物质和微粒子如 蛋白质、水溶性高聚物、细菌等被滤膜阻留，从而达到分离、分级、纯化、浓缩目的的一种新型膜分离技术。 超滤技术的优缺点 与传统分离方法相比，超滤技术具有以下特点： 1. 滤过程是在常温下进行，条件温和无成分破坏，因而特别适宜对热敏感的物质，如药物、酶 、果汁等的分离、分级、浓缩与富集。 2. 滤过程不发生相变化，无需加热，能耗低，无需添加化学试剂，无污染，是一种节能环保的 分离技术。 3. 超滤技术分离效率高，对稀溶液中的微量成分的回收、低浓度溶液的浓缩均非常有效。 4. 超滤过程仅采用压力作为膜分离的动力，因此分离装置简单、流程短、操作简便、易于控制 和维护。 5. 超滤法也有一定的局限性，它不能直接得到干粉制剂。对于蛋白质溶液，一般只能得到10～50％的浓度。 超滤装置是在一个密闭的容器中进行，以压缩空气为动力，推动容器内的活塞前进，使样液形成 内压，容器底部设有坚固的膜板。小于膜板孔径直径的小分子，受压力的作用被挤出膜板外，大 分子被截留在膜板之上。超滤开始时，由于溶质分子均匀地分布在溶液中，超滤的速度比较快。 但是，随着小分子的不断排出，大分子被截留堆积在膜表面，浓度越来越高，自下而上形成浓 度梯度，这日才超滤速度就会逐渐减慢，这种现象称为浓度极化现象。为了克服浓度极化现象， 增加流速，设计了几种超滤装置： 1. 无搅拌式超滤 这种装置比较简单，只是在密闭的容器中施加一定压力，使小分子和溶剂分子挤压出膜外， 无搅拌装置浓度极化较为严重，只适合于浓度较稀的小量超滤。 2. 搅拌式超滤 搅拌式超滤是将超滤装置位于电磁搅拌器之上，超滤容器内放人一支磁棒。在超滤时向容器 内施加压力的同时开动磁力搅拌器，小分子溶质和溶剂分子被排出膜外，大分子向滤膜表面堆积时，被电磁搅拌器分散到溶液中。这种方法不容易产生浓度极化现象，提高了超滤的速度。 4. 中空纤维超滤 由于膜板式超滤装置，截留面积有限，中空纤维超滤是在一支空心柱内装有许多的，中空纤维毛 细管，两端相通，管的内径一般在0．2mm左右，有效面积可以达到1平方厘米每一根纤维毛细管 像一个微型透析袋，极大地增大了渗透的表面积，提高了超滤的速度。
超滤管使用方法和注意事项
超滤管使用方法和注意事项 蛋白浓缩和换Buffer通常使用的超滤管，常用Millipore的Amicon-Ultra-15超滤管（MWCO10kD）。也有其它型号的、不同体积大小和MWCO超滤管可选，视目的蛋白的分子量与浓缩前体积、浓缩目标体积而定。可重复使用，使用一次就扔掉太浪费。以下是个人总结的使用方法和注意事项。 1、选择合适的超滤管，主要考虑MWCO和浓缩体积，最常见的是Ultra-15（10k D）。到底选择多大截留分子量比较合适呢？10kDa、5kDa、还是30kDa？通常应截留分子量不应大于目的蛋白分子量的1/3，比如目的蛋白分子量为35kDa，就可以选择10kDa截留分子量的超滤管。若目的蛋白分子量为10kD左右，则可以用截留分子量3kD的超滤管。认真阅读使用说明书，注意超滤膜对各种化学物质的耐受程度有所不同，表格中有。 2、新买来的超滤是干燥的，使用前加入MilliQ水，水量完全过膜，冰浴或冰箱里预冷几分钟。然后将水倒出，即可加入蛋白液，加入的多少，以不超过管顶的白线为准。操作要轻，加入蛋白液前，超滤管需要插在冰上预冷。 3、平衡。质量和重心二者都要达到平衡。注意转速和加速度不可太快，否则直接损坏超滤膜。开始离心超滤（离心机预冷至4度）。不同离心机的转速rpm 换算成g之后，有所不同。具体可参阅附件里的说明书。离心机的加速度调至最低档，减小对膜的压力。注意，一定要等离心机达到目的转速之后，方可离开离心机，否则离心机出问题时，无法第一时间处理，后果不可预测！膜与转轴的方向根据说明书调整（角转离心机的情况是膜与轴垂直）。在实际使用中，一般转速开的比说明书里的要低，这样可以延长离心管的使用寿命。 4、当浓缩到剩下1ml时，【取50ul国产Bradford溶液，加入10ul流穿，看有没变蓝色，以此判断超滤管是否漏掉蛋白。如果管漏了，将上层和流穿重新倒入新管中开始超滤。要精确判断是否漏管，用5mg/ml的BSA离心10min，再取流穿，跑蛋白胶或Bradford粗测】，继续加入剩下的蛋白液浓缩（在冰上操作，防止蛋白受热），直到所有浓缩液都加完为止。离心过程中注意是否发生蛋白沉淀，导致堵管。若发生沉淀，要确定沉淀的具体原因，是蛋白浓度过高还是Buf fer不合适；前者可用多根超滤管同时超滤，降低浓度的办法解决，后者的方法是换不同的Buffer，直到蛋白不发生沉淀为止。 5、前面几步用以浓缩蛋白，如果要换Buffer，在总蛋白液浓缩至1ml左右的时候，轻轻加入新的Buffer（经0.22um超滤膜超滤），再浓缩至1ml左右，连续三次，最后一次的浓缩终体积根据需要的蛋白浓度而定，一般不多于500ul，也有浓缩至200ul以内的情况。按照每次至少10倍左右的体积浓缩算，三次达到1000倍以上，基本上可以达到换buffer的目的。 6、取出最终蛋白浓缩液的操作在冰上操作，用黄枪头（200ul）取，轻轻顺着边缘插入枪头，轻轻吹打、混匀蛋白液，注意不要碰到超滤膜，然后吸取浓缩液，
超滤+反渗透技术说明
一、总则 1.1本技术规范书适用于工业园区取供水工程超滤、反渗透及离子交换除盐水系统及其配套设备，它提出了该设备本体及辅助设备的功能设计、结构、性能、安装和试验等方面的技术要求。 1.2 需方在本招标文件中提出了最低限度的技术要求，并未规定所有的技术要求和适用的标准，供方应提供满足本招标文件和所列标准要求的高质量产品及其相应服务。 1.3 如果供方没有以书面对本招标书的条文提出异议，那么需方可以认为供方提出的产品应完全符合本招标书的要求。如有异议，不管是多么微小，都应在差异表中提出。 1.4 从签订合同之后至供方开始制造之日的这段时期内，需方有权提出因规程、规范和标准发生变化而产生的一些补充修改要求，供方应遵守这些要求。 1.5 本技术规范书所引用的标准若与供方所执行的标准发生矛盾时，按较高的标准执行。 1.6 供方对成套系统设备(含辅助系统与设备)负有全责，即包括分包（或采购）的产品。分包（或采购）的产品制造商应事先征得需方的认可。 1.7设备采用的专利涉及到的全部费用均已包含在设备报价中，供方保证需方不承担有关设备专利的一切责任。 1.8 本招标文件为订货合同的附件，与合同正文具有同等效力。 1.9 本工程采用KKS标识系统。供方提供的技术资料（包括图纸）和设备标识有KKS编码。具体标识要求由设计院提出，在设计联络会上讨论确定。
二、工程概况 2.1工业园区取供水工程，主要为园区内焦化锅炉等提供水源。 2.2 厂址条件 本期取供水工程，厂址设在临涣工业园内，所在区域地形系平原，地势平坦。设备通过公路和铁路运抵现场。 2.3气象特征值 2.3.1厂址： 2.3.2年平均大气温度13.0℃ 2.3.3年平均相对湿度64% 2.3.4极端最高气温41.1℃ 2.3.5极端最低气温-26.8℃ 2.3.6多年平均降水量608.2mm 2.3.7多年平均大气压力1008.6hPa 2.3.8最大积雪深度23cm 2.3.9多年平均风速 2.9m/s 2.3.10多年最大瞬时风速22.7m/s 2.3.11 10分钟平均最大风速22.3 m/s 2.3.12 地震基本烈度7度 2.4 厂区工程地质 厂址工程地质条件及稳定性良好，不易发生地质灾害，不压覆矿产，不压文物，适合工程建设。
milipure超滤管说明书
English Introduction Amicon? Ultra-15 10K centrifugal filter devices provide fast ultrafiltration, with the capability for high concentration factors and easy concentrate recovery from dilute and complex sample matrices. The vertical design and available membrane surface area provide fast sample processing, high sample recovery (typically greater than 90% of dilute starting solution), and the capability for 80-fold concentration. Typical processing time is 15 to 40 minutes. Solute polarization and subsequent fouling of the membrane are minimized by the vertical design, and a physical deadstop in the filter device prevents spinning to dryness and potential sample loss. The concentrate is collected from the filter device sample reservoir using a pipettor, while the ultrafiltrate is collected in the provided centrifuge tube. The device can be spun in a swinging-bucket or fixed-angle rotor. Amicon? Ultra-15 10K devices are supplied non-sterile and are for single use only. Intended Use The Amicon? Ultra-15 product line includes 5 different cutoffs (Molecular Weight Cutoff, MWCO), however, the Amicon? Ultra-15 10K device (10,000 MWCO) is the only device intended for in vitro diagnostic use. It can be used to concentrate serum, urine, cerebrospinal fluid, and other body fluids prior to analysis. For information on other Amicon? Ultra-15 cutoffs, go to https://www.sodocs.net/doc/7e11463206.html, and enter Amicon Ultra-15 in the search box. User Guide Amicon ? Ultra-15 10K Centrifugal Filter Devices for volumes up to 15 mL UFC901008UFC901024UFC901096 C V
超滤管使用注意事项
超滤管使用注意事项 1、选择合适的超滤管。通常应截留分子量不应大于目的蛋白分子量的1/3，比如目的蛋白分子量为35kDa，就可以选择10kDa截留分子量的超滤管。若目的蛋白分子量为10kD 左右，则可以用截留分子量3kD的超滤管。认真阅读使用说明书，注意超滤膜对各种化学物质的耐受程度有所不同。 2、新买来的超滤是干燥的，使用前加入超纯水，水量完全过膜，冰浴或冰箱里预冷几分钟。然后将水倒出，即可加入蛋白液，加入的多少，以不超过管顶的白线为准。操作要轻，加入蛋白液前，超滤管需要插在冰上预冷。 3、平衡。质量和重心二者都要达到平衡。注意转速和加速度不可太快，否则直接损坏超滤膜。开始离心超滤（离心机预冷至4度）。不同离心机的转速rpm换算成g之后，有所不同。离心机的加速度调至最低档，减小对膜的压力。注意，一定要等离心机达到目的转速之后，方可离开离心机，否则离心机出问题时，无法第一时间处理。膜与转轴的方向根据说明书调整（角转离心机的情况是膜与轴垂直）。在实际使用中，一般转速开的比说明书里的要低，这样可以延长离心管的使用寿命。 4、当浓缩到剩下1ml时，取50ul缓冲溶液，加入10ul流穿，看有没变蓝色，以此判断超滤管是否漏掉蛋白。如果管漏了，将上层和流穿重新倒入新管中开始超滤。要精确判断是否漏管，用5mgml的BSA离心10min，再取流穿，跑蛋白胶或Bradford粗测，继续加入剩下的蛋白液浓缩（在冰上操作，防止蛋白受热），直到所有浓缩液都加完为止。离心过程中注意是否发生蛋白沉淀，导致堵管。若发生沉淀，要确定沉淀的具体原因，是蛋白浓度过高还是Buffer不合适；前者可用多根超滤管同时超滤，降低浓度的办法解决，后者的方法是换不同的Buffer，直到蛋白不发生沉淀为止。 5、前面几步用以浓缩蛋白，如果要换Buffer，在总蛋白液浓缩至1ml左右的时候，轻轻加入新的Buffer（经0.22um超滤膜超滤），再浓缩至1ml左右，连续三次，最后一次的浓缩终体积根据需要的蛋白浓度而定，一般不多于500ul，也有浓缩至200ul以内的情况。按照每次至少10倍左右的体积浓缩算，三次达到1000倍以上，基本上可以达到换buffer 的目的。 自来水过滤器家用超滤机：
超滤管保养方法
超滤管保养和使用方法 超滤管的作用： 1）浓缩；2）脱盐；3）换Buffer；4）具有部分纯化的效果。 1、新的超滤管可以直接使用，不需要其他处理； 2、超滤管不能高温灭菌； 3、换浓缩蛋白时超滤管的处理 超滤管可以重复使用，用0.1M的NaOH浸泡1－2h，用水清洗，再在离心机上用相关溶液（灭菌水或PBS）清洗3次，即可用于浓缩新的蛋白； 4、平常放臵超滤管的处理 经常使用的超滤管，在用0.1M的NaOH浸泡1－2h，用水清洗，用灭菌水浸泡，务必保持滤膜润湿，不能长菌； 5、长时间放臵超滤管的处理 较长时间不使用的超滤管，在用0.1M的NaOH浸泡1－2h，用水清洗，用20％的乙醇浸泡保存，务必保持滤膜润湿，不能长菌； 6、超滤管使用的离心转速 离心转速一般采用4000rpm（一般建议为3000g，最大不能超过4000g）离心5－8分钟，即可将4ml样品浓缩至1ml以下至几十微升；速度过高，目的蛋白会离下，导致目的蛋白丢失；速度过低，耗时，工效低； 7、枪头伸入超滤管中时注意事项 加蛋白液或Buffer到超滤管时，可以用蓝枪头；但从超滤管底吸取浓缩好的目的蛋白时，必须用黄枪头；用枪头伸入超滤管中时，必须防止碰到滤膜，以免戳破滤膜； 8、减少超滤管对蛋白的吸附损失 超滤管的滤膜能吸附蛋白，会导致目的蛋白减少可达30％左右；为减少蛋白损失，在吸尽目的蛋白液后，再用蛋白Buffer吹洗超滤管的管底，可以将滤膜吸附的蛋白洗下大部分而减少目的蛋白的损失；如纯化的蛋白较浓时，注意浓缩的体积不可过小；一般无论如何离心，底部会保留有200 μl左右的蛋白液； 9、如何界定超滤管失效 在正常使用下，滤膜没有被戳破时，浓缩蛋白液中不含有蛋白或量很低（包括目的蛋白），而第一次的滤下液中含有目的蛋白，则说明滤膜失效，需要换新的超滤管。 不同MWCO的离心转速要求不同。当然转速越大，时间越长，透过就越多。 而且速度也和料液性质有关，一般只能根据你的蛋白溶液进行试验，看flux是多少，而且随着透过体积增加，flux会逐渐降低。 以使其达到想要的浓缩倍数。sartorius的离心管保证有最小体积不会滤干，具体要看不同的厂家。 离心条件说明书上应该有推荐值，一般至少要3000g以上，注意控制过程中的温度以保证蛋白活性。 可以反复用几次，次数多了就不行了，管和膜都可能会破。不用的时候，20% EtOH保存以免长菌。 我用的是millpore的超滤离心管要求的分之量10k的，体积15ml 要求的转速低于4000g 不过这个很容易破基本上是一次性的另外注意不要让膜干了
超滤操作手册
一、超滤系统简介 1.1超滤（UF） 超滤是一种膜分离技术，其膜为多孔不对称结构。过滤过程是一抹两侧压差为驱动力，以机械筛分原理为基础的一种溶液分离过程，使用压力通常为0.03～0.6MPa，筛分孔径从0.005～0.1μm，截流分子量为1000～500000道尔顿左右。 1.2诺芮特超滤膜 我公司选用的是荷兰诺瑞芮特的外置错流管式超滤膜，型号：38CRH-XLT F5385。生化池的渗滤液通过外置管式超滤膜实现泥水分离，直接得到高质量的超滤产水，浓水回流至生化池。 该管式膜以其优异的强度、PVDF裁量的耐污染性和运行维护简便性得到认可，设计通量高达70~100L/(m2?h)，过滤精度可达30nm，8mm的大通道可以将污泥有效截留并且不会造成膜管堵塞。膜的高效截留作用使得生化池内的污泥浓度可高达25g/L，微生物菌群活性及微生物降解效率大大提高，因此废水中的绝大多数难降解有机物得以有效去除，特别适合于垃圾渗滤液等高浓度污水的深度处理。 外置式管式膜生物反应器（简称TMBR）是一种主要针对垃圾渗滤液等高浓度浓水处理的MBR工艺，主要由生化系统和外置式管式超滤膜系统组成。在外置式膜生物反应器中生物反应器与膜单元相对独立，通过混合液循环泵使得处理水通过膜组件后外排，其中的生物反应器与膜分离装置之间的相互干扰较小。 目前垃圾渗沥液处理中采用的外置式膜生化反应器，超滤膜一般均选用错流式管式超滤膜。即循环泵为混合液（污泥）提供一定的流速（3.5-5m/s），使混合液在管式膜中形成紊流状态，避免污泥在膜表面沉积。错流过滤与传统全流过滤不同，传统过滤是将溶液垂直通过过滤介质来除去其中的悬浮固体，所有的液体在通过滤媒后由同一出口流出。此类过滤装置包括袋式过滤器，砂滤等，粗过滤法只能去除超过1um的不溶性颗粒。传统过滤中被截留的物质积累在过滤介质上，必须定期清洗更换介质。薄膜分离系统可以去除小颗粒及溶盐其原理是：加压的原液平行通过薄膜表面，部分的水流通过薄膜，被截留的颗粒在剩余的水流中浓度越来越高。由于溶液是连续性地
超滤说明书
超滤系统操作维护手册
一、超滤技术介绍 1、超滤是什么 在膜分离领域，按照分离精度划分有微滤（MF）、超滤（UF）、纳滤（NF）、反渗透（RO）四种分离过程。 其中，超滤（Ultrafiltration）：介于微滤和纳滤之间的一种膜过程，使用压力通常为0.02~0.3MPa，膜孔径在0.002~0.1μm，截留分子量约为1000~500,000道尔顿左右，超滤是一种能够将溶液进行净化、分离、浓缩的膜分离技术，超滤过程通常可以理解成与膜孔径大小相关的筛分过程，以膜两侧的压力差为驱动力，以超滤膜为过滤介质。超滤膜可有效去除水中的悬浮物、胶体微粒、细菌和大部分病毒等，对有机物的去除率为20~60%，对小分子有机物和无机离子几乎不截留。目前在饮用水、工业用水处理、饮料、环保、化工、冶金、食品等已得到广泛应用。尤其在海水淡化、纯水、超纯水等生产中作为反渗透的预处理，确保反渗透及后续设备运行稳定。 2、超滤膜组件的结构形成 目前市场上超滤膜有平板式、卷式、管式和中空纤维式四种结构型式，特点如下：平板式，其比表面积小，处理能力偏低，不适合工程放大。 卷式，不可反洗，且预处理要求高。 管式，装填密度低、单位体积内膜面积小，且能耗大。 中空纤维式，装填密度高，能耗低，通量大，寿命长，且可以反洗，在工程实际中用得比较多。 表 1 各种结构形式膜组件之间 卷式中空管式平板式 的比较比较项目 填充密度（m2.m-3）200-800 1200 60 30-500 组件结构复杂复杂简单很复杂 膜更换方式组件组件膜或组件膜 膜更换成本较高较高中低 料液预处理高较高低低 抗污染性中等一般非常好中等 清洗效果一般至难易优良 工程放大难易中中易难
超滤机操作说明
超滤机操作说明 1 .第一步：本超滤机使用380V交流电，接通电源后必须看电机是否为箭头所指方向转动，电机空转时间不宜过长。 2 .第二步：将超滤管两头共三个密封圈取开，以保持管道和超滤管接口处畅通（本机已取开密封圈试过机）。 3 . 第三步：超滤时请先关闭反冲冼阀门3和阀门4，向进口软管内灌槽液，边灌边开泵，使过滤器和泵内都进槽液将空气挤出，灌满槽液后打开阀门1、2、5、6，观察真空表的指针是否上升，如上升到0.1至0.15之间，电机运转声音正常，超滤液就会流出，如真空表指数在0.1以下超滤液排不出或排出量很小，请检查阀门是否在正常开关状态，按一下过滤器出气阀，或将阀门5再调整一下，使槽液出口流量变小，超滤液排出量则会变大。如真空表的指针在0.1或者小于0.1时，将阀门1关小，使管内压力增加至0.15左右才能正常超滤。管内压力不能超过0.15（真空表指针不能大于0.15），如指针指示大于0.15时，则应将阀门1调整大，以免压力过大将膜管损坏。 4 .第四步：当超滤液出口无超滤液或甚微时，便无需继续超滤。停止超滤后必须先进行正冲洗，进行正冲洗时将阀门1、2、5、6打开，关闭反冲洗阀门3、4，启动开关进行正冲洗，当正冲洗进行至5分钟左右后关闭正冲洗。再进行反冲洗，进行反冲洗时，应先打开反冲洗阀门3和阀门4，关闭阀门1、2、5、6，将进口管插入自来水容器中，启动本机开关进行反冲洗，当出水管流出全部是清水时即可停止反冲洗。每次超滤后必须及时进行正冲洗和反冲洗以确保超滤管内无滞留的电泳漆，否则超滤膜会被干枯的漆粘堵，超滤机须置换昂贵的超滤管后才能正常工作。每次冲洗完后，膜管内的水不能放掉，以保持膜管内的湿润。 注：如有不清楚的地方请随时与我公司联系；联系电话0519--83052882
管式超滤说明书
1.0引言 1.1超滤 超滤就是让水和低分子量物质通过特别的半透膜，而聚合物和其他高分子的物质不透过膜的一种物理分离过程，它是通过加压，并根据分子的大小及形状来分离溶液的。 1.2超滤的特点及用途 a.由于分离过程中没有相当变化，则不需要加热，能耗小； b.在常温下操作，不易破坏热敏感之物质； c.不需要加化学药物处理。 由于上述特点，因此在视频，医药、生物、化工、环保等方面都能应用，作为对溶液进行分离、浓缩、提纯处理的手段。 1.3 NG型管束式超滤器和膜管的描述 NG系列内压膜管式超滤器具有占地少，膜面积打，结构紧凑，操作方便等优点。其运行性能与美国考希—阿贝科（koch—abcor）公司的同类产品接近。 其先进性表现在以下几个方面： 1.运行过程中的流体状态得到了改善膜面不再受到横向冲击力，元件使用寿命延长。 2.备有自动清洗系统，提高了工作效率。 3.各组件管独立，可单独调换。 4.安装操作方便，占地面积小，能量利用率高。
NG 膜组件，膜被刮在一个圆形的具有保护作用的多孔支撑管的内表面上，支撑体被密封在一个塑料外壳内。塑料管内含有七根膜管，在塑料外壳两端刻有螺纹的接头，便于与系统相连。并且对膜管有撑和定位作用。膜及支撑体用特定物质被密封在塑料外壳内，这样就达到了把透过液与主流体隔开的目的。开机时，透过液穿过膜，汇集在塑料外壳与保护密封圈的环形空间内，最后从透过口流出。 定位花板 外壳 管接头 透过夜出口 膜管 1.4电泳涂装超滤的应用 超滤器应用于电泳涂装，就是允许水、溶液，小分子量树脂和盐类通过，但颜料和胶体质点通不过。透过水作为后冲洗用水或排放控制漆槽稳定，在绝大多数电泳沉淀应用中，管式超滤器最适合。 阴极漆用超滤膜，其基材为一种亲水性高分子物质，通过电解质
Millipore的超滤管使用经验
蛋白浓缩和换Buffer通常使用的超滤管，可重复使用，使用一次就扔掉太浪费。常用Millipore的Amicon-Ultra-15超滤管（MWCO10kD）。也有其它型号的、不同体积大小和MWCO超滤管可选，视目的蛋白的分子量与浓缩前体积、浓缩目标体积而定。以下是个人总结的使用方法和注意事项。 1、选择合适的超滤管，主要考虑MWCO和浓缩体积，最常见的是Ultra-15（10kD）。到底选择多大截留分子量比较合适呢？10kDa、5kDa、还是30kDa？通常应截留分子量不应大于目的蛋白分子量的1/3，比如目的蛋白分子量为35kDa，就可以选择10kDa截留分子量的超滤管。若目的蛋白分子量为10kD左右，则可以用截留分子量3kD的超滤管。认真阅读使用说明书，注意超滤膜对各种化学物质的耐受程度有所不同，表格中有。 2、新买来的超滤是干燥的，使用前加入MilliQ水，水量完全过膜，冰浴或冰箱里预冷几分钟。然后将水倒出，即可加入蛋白液，加入的多少，以不超过管顶的白线为准。操作要轻，加入蛋白液前，超滤管需要插在冰上预冷。 3、平衡。质量和重心二者都要达到平衡。注意转速和加速度不可太快，否则直接损坏超滤膜。开始离心超滤（离心机预冷至4度）。不同离心机的转速rpm 换算成g之后，有所不同。具体可参阅附件里的说明书。离心机的加速度调至最低档，减小对膜的压力。注意，一定要等离心机达到目的转速之后，方可离开离心机，否则离心机出问题时，无法第一时间处理，后果不可预测！膜与转轴的方向根据说明书调整（角转离心机的情况是膜与轴垂直）。在实际使用中，一般转速开的比说明书里的要低，这样可以延长离心管的使用寿命。 4、当浓缩到剩下1ml时，【取50ul国产Bradford溶液，加入10ul流穿，看有没变蓝色，以此判断超滤管是否漏掉蛋白。如果管漏了，将上层和流穿重新倒入
腹水超滤浓缩回输操作流程
腹水超滤浓缩回输操作流程及注意事项 1、连接管路：抽出腹水管路（红色带泵管）与透析器上端相连，回输管路（兰）与透析器下端相连，透明的废液管（带泵管）与透析器侧孔连接。 2、安装泵管：将抽出腹水管路（红）泵管安装到泵1上，将废液管泵管安装到 泵2上，注意泵管方向不要接反。 3、管路预冲：将透析器固定在机器上，用肝素盐水（20mg/1000ml盐水）预冲，充分将气体排净，具体操作如下： （1）抽出腹水管通过针头连接 500ml盐水瓶，设置泵1流量120ml/min，泵2不转（泵盖打开）。 （2）启动泵1将盐水引入抽出腹水管内，当盐水流至透析器上端时，将透析器倒置以排空中空纤维内腔气体，当盐水从透析器兰端流出时适当 进行震荡以尽量排净气体。 （3）将透析器上端（红端）向上固定在夹子上使侧孔保持最高点，设置泵2流量为80ml/mim，启动泵2，夹住回输管（兰管），使盐水充满透 析器外腔及废液管。 4、腹腔穿刺：协助患者取舒适半坐卧位或平卧位，用静脉留置针进行双侧腹腔穿刺（带侧孔针穿左下腹与红管连接），固定好穿刺针后分别与回输管路的动、静脉端连接，开启泵Ⅰ及泵Ⅱ进行腹水滤过浓缩回输腹腔治疗。泵Ⅰ与泵Ⅱ的 流速比通常为1∶0.5，例如：泵1流量为150 ml/min，泵2为100ml/min。 5、术中观察： （1）水滤过浓缩回输过程中注意监测患者的血压、心率及管路是否通畅，注意为患者保暖 （2）在治疗过程中严密观察患者的生命体征变化，穿刺部位有无渗血、渗液及皮下漏液现象，要保证管路的通畅。 6、结束治疗：出量达到预定目标时，关闭泵Ⅰ及泵Ⅱ，拔除静脉留置针。穿刺部位覆盖消毒纱布并给予腹带包裹。 7、腹水超滤浓缩回输并发症处理 （1）水电解质紊乱
渗滤液超滤系统操作规范
渗滤液超滤系统 1.超滤系统简介 1.1.超滤（UF） 1.1.1.超滤是一种膜分离技术，其膜为多孔不对称结构。过滤过程是一抹两侧压差为驱动力，以机械筛分原理为基础的一种溶液分离过程，使用压力通常为0.03～0.6MPa，筛分孔径从0.005～0.1μm，截流分子量为1000～500000道尔顿左右。 1.1. 2.诺芮特超滤膜 我们选用的是德国BERGHOH的外置错流管式超滤膜。生化池的渗滤液通过外置管式超滤膜实现泥水分离，直接得到高质量的超滤产水，浓水回流至生化池。 1.1.3.该管式膜以其优异的强度、PVDF裁量的耐污染性和运行维护简便性得到认可，设计通量高达70~100L/(m2?h)，过滤精度可达30nm，8mm的大通道可以将污泥有效截留并且不会造成膜管堵塞。膜的高效截留作用使得生化池内的污泥
浓度可高达25g/L，微生物菌群活性及微生物降解效率大大提高，因此废水中的绝大多数难降解有机物得以有效去除，特别适合于垃圾渗滤液等高浓度污水的深度处理。 1.1.4.外置式管式膜生物反应器（简称TMBR）是一种主要针对垃圾渗滤液等高浓度浓水处理的MBR工艺，主要由生化系统和外置式管式超滤膜系统组成。在外置式膜生物反应器中生物反应器与膜单元相对独立，通过混合液循环泵使得处理水通过膜组件后外排，其中的生物反应器与膜分离装置之间的相互干扰较小。 图1-1 外置式膜生物反应器原理图 1.2.目前垃圾渗沥液处理中采用的外置式膜生化反应器，超滤膜一般均选用错流式管式超滤膜。即循环泵为混合液（污泥）提供一定的流速（3.5-5m/s），使混合液在管式膜
中形成紊流状态，避免污泥在膜表面沉积。错流过滤与传统全流过滤不同，传统过滤是将溶液垂直通过过滤介质来除去其中的悬浮固体，所有的液体在通过滤媒后由同一出口流出。此类过滤装置包括袋式过滤器，砂滤等，粗过滤法只能去除超过1um的不溶性颗粒。传统过滤中被截留的物质积累在过滤介质上，必须定期清洗更换介质。薄膜分离系统可以去除小颗粒及溶盐其原理是：加压的原液平行通过薄膜表面，部分的水流通过薄膜，被截留的颗粒在剩余的水流中浓度越来越高。由于溶液是连续性地流过，被截留的颗粒不会沉积，反而会被浓缩液带走。因此，一进水流在通过薄膜后便分为两道：通过薄膜的溶液（渗透液）和残留的浓缩液。错流过滤这种过滤方式的主要优点是薄膜截留下来的物质被流体不断的带走，这在一定程度上相当于膜表面被连续的清洗，这样就延长了膜的寿命，并降低了维护和清洗的费用。
超滤+反渗透技术说明书
一、总则 1.1本技术规书适用于工业园区取供水工程超滤、反渗透及离子交换除盐水系统及其配套设备，它提出了该设备本体及辅助设备的功能设计、结构、性能、安装和试验等方面的技术要求。 1.2 需方在本招标文件中提出了最低限度的技术要求，并未规定所有的技术要求和适用的标准，供方应提供满足本招标文件和所列标准要求的高质量产品及其相应服务。 1.3 如果供方没有以书面对本招标书的条文提出异议，那么需方可以认为供方提出的产品应完全符合本招标书的要求。如有异议，不管是多么微小，都应在差异表中提出。 1.4 从签订合同之后至供方开始制造之日的这段时期，需方有权提出因规程、规和标准发生变化而产生的一些补充修改要求，供方应遵守这些要求。 1.5 本技术规书所引用的标准若与供方所执行的标准发生矛盾时，按较高的标准执行。 1.6 供方对成套系统设备(含辅助系统与设备)负有全责，即包括分包（或采购）的产品。分包（或采购）的产品制造商应事先征得需方的认可。 1.7设备采用的专利涉及到的全部费用均已包含在设备报价中，供方保证需方不承担有关设备专利的一切责任。 1.8 本招标文件为订货合同的附件，与合同正文具有同等效力。 1.9 本工程采用KKS标识系统。供方提供的技术资料（包括图纸）和设备标识有KKS编码。具体标识要求由提出，在设计联络会上讨论确定。 二、工程概况 2.1工业园区取供水工程，主要为园区焦化锅炉等提供水源。 2.2 厂址条件 本期取供水工程，厂址设在临涣工业园，所在区域地形系平原，地势平坦。设备通过公路和铁路运抵现场。 2.3气象特征值 2.3.1厂址： 2.3.2年平均大气温度13.0℃ 2.3.3年平均相对湿度64% 2.3.4极端最高气温41.1℃ 2.3.5极端最低气温-26.8℃ 2.3.6多年平均降水量608.2mm 2.3.7多年平均大气压力1008.6hPa 2.3.8最大积雪深度23cm 2.3.9多年平均风速 2.9m/s 2.3.10多年最大瞬时风速22.7m/s 2.3.11 10分钟平均最大风速22.3 m/s
蛋白超滤管的使用及回收
蛋白超滤管使用方法及回收再生 蛋白浓缩和换Buffer通常使用的超滤管，常用Millipore的Amicon-Ultra-15超滤管（MWCO10kD）。也有其它型号的、不同体积大小和MWCO超滤管可选，视目的蛋白的分子量与浓缩前体积、浓缩目标体积而定。可重复使用，使用一次就扔掉太浪费。 1、选择合适的超滤管，主要考虑MWCO和浓缩体积，zui常见的是Ultra-15（10kD）。到底选择多大截留分子量比较合适呢？10kDa、5kDa、还是 30kDa？通常应截留分子量不应大于目的蛋白分子量的1/3，比如目的蛋白分子量为35kDa，就可以选择10kDa截留分子量的超滤管。若目的蛋白分子量为10kD左右，则可以用截留分子量3kD的超滤管。认真阅读使用说明书，注意超滤膜对各种化学物质的耐受程度有所不同，表格中有。 2、新买来的超滤是干燥的，使用前加入MilliQ水，水量完全过膜，冰浴或冰箱里预冷几分钟。然后将水倒出，即可加入蛋白液，加入的多少，以不超过管顶的白线为准。操作要轻，加入蛋白液前，超滤管需要插在冰上预冷。 3、平衡。质量和重心二者都要达到平衡。注意转速和加速度不可太快，否则直接损坏超滤膜。开始离心超滤（离心机预冷至4度）。不同离心机的转速rpm 换算成g之后，有所不同。具体可参阅附件里的说明书。离心机的加速度调至zui低档，减小对膜的压力。注意，一定要等离心机达到目的转速之后，方可离开离心机，否则离心机出问题时，无法*时间处理，后果不可预测！膜与转轴的方向根据说明书调整（角转离心机的情况是膜与轴垂直）。在实际使用中，一般转速开的比说明书里的要低，这样可以延长离心管的使用寿命。 4、当浓缩到剩下1ml时，【取50ul国产Bradford溶液，加入10ul流穿，看有没变蓝色，以此判断超滤管是否漏掉蛋白。如果管漏了，将上层和流穿重新倒入新管中开始超滤。要判断是否漏管，用5mg/ml的BSA离心10min，再取流穿，跑蛋白胶或Bradford粗测】，继续加入剩下的蛋白液浓缩（在冰上操作，防止蛋白受热），直到所有浓缩液都加完为止。离心过程中注意是否发生蛋白沉淀，导致堵管。若发生沉淀，要确定沉淀的具体原因，是蛋白浓度过高还是Buffer不合适；前者可用多根超滤管同时超滤，降低浓度的办法解决，后者的方法是换不同的Buffer，直到蛋白不发生沉淀为止。 5、前面几步用以浓缩蛋白，如果要换Buffer，在总蛋白液浓缩至1ml左右的时候，轻轻加入新的Buffer（经0.22um超滤膜超滤），再浓缩至1ml左右，连续三次，zui后一次的浓缩终体积根据需要的蛋白浓度而定，一般不多于500ul，也有浓缩至200ul以内的情况。按照每次至少10倍左右的体积浓缩算，三次达到1000倍以上，基本上可以达到换buffer的目的。 6、取出zui终蛋白浓缩液的操作在冰上操作，用黄枪头（200ul）取，轻轻顺着边缘插入枪头，轻轻吹打、混匀蛋白液，注意不要碰到超滤膜，然后吸取浓缩液，每次吸接近200ul，直到吸完。管底剩下的zui后一点浓缩液不必吸
超滤离心管说明书Vivaspin 6 and 20 ml
Technical data and operating instructions Vivaspin 6 and 20 ml For in vitro use only 85030-511-57
Vivaspin 6 and 20 ml – Introduction Storage conditions|shelf life Vivaspin ultrafiltration spin columns should be stored at room temperature. The devices should be used before the expiry date printed on the box. Introduction Vivaspin concentrators are disposable ultrafiltration devices for the concentration and|or purification of biological samples. Vivaspin 6 is suitable for sample volumes of 2–6 ml and the Vivaspin 20 can handle samples up to 20 ml. Both products feature twin vertical membranes for unparalleled speed. Vivaspin 20 purification alternatives include a diafiltration cup that allows one step removal of salts and other contaminating micromolecules, and a gas pressure mode for increased flexibility and even faster processing. The innovative design (US Patent No. 5,647,990, second patent pending), ease of use, speed and exceptional concentrate recoveries are the main features of the concentrators. Centrifugal Operation Vivaspin concentrators can be used in swing bucket or fixed angle rotors accepting standard conical bottom tubes. In a single spin, solutions can be concentrated in excess of 100 +. Samples are typically concentrated in 10 to 30 minutes with macromolecular recoveries in excess of 95%. The longitudinal membrane orientation and thin channel concentration chamber, provide optimum cross flow conditions even for particle laden solutions; the centrifugal force pulling particles and solids away from the membrane to the bottom of the device. Macromolecules collect in an impermeable concentrate pocket integrally moulded below the membrane surface, thereby eliminating the risk of filtration to dryness. Pressurised Operation When an appropriate centrifuge is unavail-able, or for single sample processing, Vivaspin 20 can be filled with up to 15 ml and pressurised for bench top concentration. For even faster processing, pressure can be combined with centrifugal force. “Pressure-Fugation” is particularly suitable for viscous samples such as serum, or when processing at low temperatures, and generaly when minimum process time is essential. Equipment Required A. For use with centrifuge 1. Centrifuge with swing bucket or fixed angle rotor (minimum 25°). 2. Pasteur or fixed volume pipettes for sample delivery and removal. Device Carrier Required Vivaspin 615 ml/17 mm d Vivaspin 2050 ml/30 mm d B. For use with Pressure (Vivaspin 20 only) 1. Vivaspin 20 Pressure Head (Product No. VCA200). 2. Charge Valve for Pressure Head (Product No. VCA005). 3. Air Pressure Controller (Product No. VCA002) or equivalent pressure regulator For use with Pressure and Centrifuge 1. All of the equipment shown in A. and B. above. 2|