TRIZOL说明书

trizol 中文说明书

trizol 试剂是一种从组织及细胞中提取总rna的专用试剂。这种试剂是一种酚和硫氰酸

胍的单相溶液，是将chomczynski 和sacchi发明的一步rna提取法的改进。在样品匀浆或

分析过程中，trizol 试剂可在分裂细胞及溶解胞膜的同时保持rna的完整。在匀浆后加入氯

仿，可将溶液分为水相和有机相。rna均在水相中。吸取水相加入异丙醇，得到rna沉淀。

去除水相后，样品中的dna及蛋白质可通过进一步连续的沉淀而得到。中间相加入乙醇可沉

淀dna而有机相加入异丙醇则能沉淀出蛋白质。dna的再纯化可能对标化样品的rna产量有

作用。

2．这一技术可以用于人，动物，植物或细菌株的微量组织（50—100mg）及细胞（5

×106），也可以用于大量检材（≥1g）及细胞(﹥107).该方法简便易行,可用于同时检测大量

样品,全部过程1小时内可以完成.用trizol 试剂分离的rna 没有dna及蛋白质成分.这种

rna可用于northern印迹分析,斑点杂交,多聚(a)+检出及vitro转移, rna酶蛋白分析及分

子克隆.用于pcr反应时,当两个引物位于同一外显子时应用扩增特异dna酶i处理提取出的

rna.

3． trizol 试剂可用于分子量从大到小的各种rna的提取.例如,大鼠肝脏提取出的rna,

经琼脂糖凝胶电泳,eb染色后可显现出7kb和15kb的大分子量的rna谱带(包括mrna和

hnrna), 位于～5kb(28s)和～2kb (18s)的两条主要的核糖体rna谱带及大小在0.1kb-0.3kb

之间的低分子量rna(trna,5s).分离出的rna当溶于双蒸水中时a260/280为1.6-1.8之间.

每毫克组织所能提取的rna量约为:肝和脾,6-10μg;肾,3-4μg;骨骼肌和脑,1-5μg;胎

盘,1-4μg.从1×106培养细胞中提取的rna量约为:上皮细胞,8-15μg;成纤维细胞,5-7μg.

需要但未提供的试剂:

1. 氯仿

2. 异丙醇

3. 75%乙醇(depc处理水配制)

4. 无rna酶水或0.5%sds溶液(制备无rna酶水:将水倒进无rna酶的玻璃容器中,加入

depc至0.01%(v/v)放置过夜后高压灭菌). sds溶液必须用depc处理后高压灭菌的水配制.

rna分离提取步骤:

1．匀浆

a. 组织每50-100mg组织加入1ml的trizol 试剂后用匀浆机或玻璃棒匀浆。样品的

体积不要超过匀浆使用的trizol 试剂体积的1/10。

b. 单层培养细胞在一个直径3.5cm的培养皿中加入1mltrizol 试剂来溶解细胞，用

移液器反复吸打细胞溶液。加入的trizol 试剂的量取决于培养皿的表面积（每10cm2加入

1ml）而不是取决于细胞的数目。如果trizol 试剂的量不足，提取的rna中会混有dna。

c. 悬液中培养细胞离心沉淀细胞，吸取细胞，反复吹打使溶解于trizol 试剂中。每

5～10×106个动物，植物或酵母细胞，每1×107个细菌细胞加入1ml trizol 试剂。应该避

免在加入trizol 试剂前洗细胞，因为会增加mrna的变性。破坏某些酵母或细菌细胞需要使

用匀浆机。

2．选择采用的步骤：对于含有大量蛋白质，脂肪，多糖或其他细胞外物质的样品如

肌肉，脂肪，植物的块茎等可能需要再加上一个步骤。匀浆后，2℃～8℃条件下12，000×g

离心10分钟去除不溶物质。沉淀中包含有细胞外膜，多糖，大分子量dna，rna在上清中。

来源于脂肪组织的样品，最上层是脂肪层应该弃去。在每一种情况下，将纯净后的匀浆溶液

放在一新管里，加入氯仿即可以有如后面所描述的分层。

3．有机相与无机相的分开将匀浆后的样品在15℃～30℃孵育5分钟使核酸蛋白质混

合物分裂彻底。每1mltrizol 试剂加入0.2ml氯仿。小心盖上离心管盖，用手剧烈振摇15

秒，15℃～30℃孵育2～3分钟。2℃～8℃条件下，以低于12，000×g离心15分钟。样品分

成几层，

最下层红色的酚-氯仿层，中间层及无色的上层水相。rna均在水相中。水相的体积约是

用于匀浆的trizol 试剂体积的60%。

4． rna沉淀将水相转移至一个新试管中，如果需要提取dna或蛋白质可以保存有机

相。用异丙醇从水相中沉淀rna。匀浆时每使用1ml的trizol的试剂加入0.5ml异丙醇沉淀

rna。样品在15℃～30℃孵育10分钟后，2℃～8℃条件下，以低于12，000×g离心10分钟。

离心后rna沉淀通常即可见到，在管底或管壁上形成了胶样的小团块。

5． rna洗涤弃去上清，用75%乙醇洗涤rna沉淀一次，匀浆时每使用1ml的trizol

试剂至少加入1ml75%乙醇。涡旋混匀样品，2℃～8℃条件下，以低于7，500×g离心5分钟。

6． rna的再溶解在步骤最后，暂短干燥rna沉淀（空气干燥或真空干燥5-10分钟），

不要在真空下离心干燥rna。很重要的一点是，不要让rna团块完全干燥，因为这会大大降

低其溶解性。不完全溶解的rna a260/280＜1.6。用无rna酶水或0.5%sds溶液溶解rna，可

以用吸头反复吹打，55℃～60℃孵育10分钟（当rna用于酶学反应时不用sds）。rna也可用

100%formamide（去离子）溶解储存于-70℃。

dna提取步骤

在水相被完全吸取后，正如在rna分离步骤中所述一样，最初离心后在中间相和酚相中

的dna可以被提取。在沉淀及洗涤后，dna溶于8mm naoh。trizol试剂可以用于从组织及培

养细胞中分离dna并分析样品中dna含量的实验，同时，提取基因组 dna可以用于northern

分析的标化，这是因为可以用每个基因组dna替代更容易变化的总rna或组织重量。（根据来

源不同，在下一步反应前有些获得的dna沉淀可能需要进一步纯化。

需要但未提供的试剂

1．乙醇2．溶于10%乙醇中的0.1m柠檬酸钠3． 75%乙醇4． 8mm naoh 步骤：1． dna沉淀弃去在中间相上残存的水相，用乙醇沉淀中间相和水相中的dna。

匀浆时每使用1ml的trizol试剂加入0.3ml100%乙醇，颠倒混匀样品。将样品在15℃～30℃

放置2-3分钟后，2℃～8℃条件下，以低于2，000×g离心5分钟沉淀dna。（小心弃去水相

对提取的dna的质量十分关键）

2． dna洗涤弃去酚-乙醇组成的有机相上清，如果需要，则保留此上清用于提取蛋白

质。用溶于10%乙醇的0.1m柠檬酸钠溶液洗涤dna沉淀两次。匀浆时每使用1ml的trizol

试剂，加入1ml上述溶液。每次洗涤时，使dna沉淀在洗涤溶液中室温（15℃～30℃）30分

钟（隔一段时间混匀一次），2℃～8℃条件下，2，000×g离心5分钟。洗涤两次后，将dna

团块置于75%乙醇（每1ml的trizol试剂加入1.5-2ml75%乙醇）室温放置10-20分钟（隔一

段时间混匀一次）之后，2℃～8℃下，2，000×g离心5分钟。（如果dna团块很大，含有＞

200μg dna或大量非dna组成，可以多用溶于10%乙醇的0.1m柠檬酸钠溶液洗涤一次）

3． dna的再溶解打开管盖，空气中干燥dna 5-10分钟（不要离心条件下干燥，否则

极难溶解）。将dna溶于8mmnaoh中，dna浓度为0.2-0.3μg/μl。例如，对从107细胞或

50-70mg组织中提取的dna加入300-600μl的8mmnaoh溶解。由于提取的dna在水或tris

缓冲液中溶解不好，所以需要将其溶于弱碱溶液中。8mmnaoh的ph值约为9，dna一旦溶于

其中其ph值很容易用te或hepes来校准。这一步中，dna沉淀（尤其来源于组织的dna）可

能带有不溶性的胶状物（碎片或细胞膜等）。大于12，000×g离心10分钟去除不溶物。将含

有dna的上清液移至一个新管中。溶于8mmnaoh的dna在4℃可以稳定保存几个月，在-20℃

可以保存一年以上，在-70℃则可以长期保存。

dna的产量

取出一定量溶解在8mmnaoh的dna，用水稀释混匀后测定上述溶液的a260值。用双链dna

的a260值计算dna含量。一单位a260相当于每毫升含50微克双链dna。当计算被检测样品中的细胞数目时，假定人，大鼠及小鼠的每1×106个双倍体细胞中所含dna量分别为7.1μg,6.5μg,5.8μg。每mg组织中dna的量约为：肝及肾，3-4μg；骨骼肌，脑及胎盘，2-3μg。来源于人，大鼠及小鼠的每1×106个培养细胞中dna的量约为5-7μg。

用途

pcr扩增用dna 将dna溶于8mmnaoh后，用0.1m hepes调节ph值到8.4。在pcr反应液中每管加入0.1μg至1.0μg的dna样品后进行标准pcr程序。

限制性核酸内切酶反应

讨论结果：trizol 能同步抽提 rna 和 dna；其中 rna 的质量很高，而 dna 用于某些实验是需要进一步纯化的。基本上，trizol 抽提的 dna，蛋白质残留是比较多的，所以比值低。按照标准操作，无论怎么仔细，结果都差别不大，这是tizol方法上的问题。篇二：trizol 中文说明书

trizol

2-8℃避光保存

产品包装：100ml蓝色透明液体

产品简介：

trizol试剂适用于从细胞和组织中快速分离rna。trizol试剂有多组分分离作用,trizol 使样品匀浆化，细胞裂解，溶解细胞内含物，同时保持rna的完整性。在加入氯仿离心后，溶液分为水相和有机相，rna在水相中。取出水相用异丙醇沉淀可回收rna；用乙醇沉淀中间层可回收dna；用异丙醇沉淀有机相可回收蛋白质。

trizol试剂可用于小量样品（50~100mg组织、5×10细胞）也适用于大量样品（≥1g 组织、>1067细胞）。对人，动物，植物组织，细菌均适用，整个提取过程在一小时内即可完成。分离的总rna无蛋白质和dna污染，可用于northernblot，dotblot，ploya筛选，体外翻译，rnase保护分析和分子克隆。在用于rt-pcr时如果两条引物存在于一个单一外显子内，建议用无rnase的dnaseⅰ处理rna样品，避免出现假阳性。共纯化的dna可用作标准，比较不同样品rna的得率，也可用于pcr和酶切。蛋白质可用于westernblotting。

注意事项：

请勿直接接触皮肤或吞咽，以免灼伤。如接触皮肤应立即用洗涤剂和大量水冲洗。忌用乙醇擦洗，乙醇会加重灼伤。

预防rnase污染注意事项：

1．经常更换新手套，皮肤上常带有的细菌，霉菌可能成为rnase的来源。

2．使用灭过菌的rna专用塑料制品避免交叉污染。

3．rna在trizol试剂中时不会被rnase污染，但提取后继续处理过程中应使用不含rnase 的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150℃烘烤4小时，塑料制品可在0.5mnaoh中浸泡10分钟，然后用水彻底清洗，高压灭菌，即可去除rnase。

4．配制溶液应使用无rnase的水（将水加入处理过不含rnase的玻璃瓶中，加入depc 至终浓度0.01℅v/v,放置过夜,高压灭菌。注：depc有致癌之嫌，需小心操作。）

rna的提取

准备试剂：氯仿，异丙醇，75℅乙醇，无rnase的水或0.5℅sds(溶液均需用depc处理过的水配制) 操作步骤:

1.匀浆处理:a.组织将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1mltrizol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过trizol体积10℅。

b.单层培养细胞直接在培养板中加入trizol裂解细胞，每10cm面积加1ml，

用移液器吸打几次。trizol的用量应根据培养板面积而定，不取决于细胞数。trizol

加量不足可能导致提取的rna有dna污染。 2 c．细胞悬液离心收集细胞，每5-10×10动物、植物、酵母细胞或1×10细菌

细胞加入1mltrizol，反复吸打。加trizol之前不要洗涤细胞以免mrna降解。一些酵

母和细菌细胞需用匀浆仪处理。

2．将匀浆样品在室温（15-30℃）放置5分钟，使核酸蛋白复合物完全分离。

3．可选步骤：如样品中含有较多蛋白质，脂肪，多糖或胞外物质（肌肉，植物结节部分

等）可于2-8℃10000×g离心10分钟，取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜，多糖，高

分子量dna，上清中含有rna。处理脂肪组织时，上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进

行下一步操作。

5.每使用1mltrizol加入0.2ml氯仿，剧烈振荡15秒，室温放置3分钟。

6.2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层：底层为黄色有机相，上层为无色水相和

一个中间层。rna主要在水相中，水相体积约为所用trizol试剂的60℅。

7.把水相转移到新管中（如要分离dna和蛋白质可保留有机相），用异丙醇沉淀水相中的

rna。每使用1mltrizol加入0.5ml异丙醇，室温放置10分钟。

8.2-8℃10000×g离心10分钟，离心前看不出rna沉淀，离心后在管侧和管底出现胶状

沉淀。移去上清。

9.用75℅乙醇洗涤rna沉淀。每使用1mltrizol至少加1ml75℅乙醇。2-8℃不超过7500

×g离心5分钟，弃上清。

10.室温放置干燥或真空抽干rna沉淀，不要晾得过干，否则不易溶解，大约晾5-10分

钟。加入25-200μl无rnase的水或0.5℅sds,用枪头吸打几次,55-60℃放置10分钟使rna

溶解.如rna用于酶切反应,勿使用sds溶液。rna也可用100℅的去离子甲酰胺溶解，-70℃

保存。

注意事项：

1.从少量样品（1-10mg组织或10-10细胞）中提取rna是可加入少许糖原以促进rna沉

淀。例如加800mltrizol匀浆样品，沉淀rna前加5-10μgrnase-free糖原。糖原会与rna

一同沉淀出来，糖原浓度不高于4mg/ml是不影响第一链的合成，也不影响pcr反应。

2．匀浆后加氯仿之前样品可在-60—-70℃保存至少一个月。rna沉淀可保存在75%酒精

中2-8℃一个星期以上或-5--20℃一年以上。

3．分层和rna沉淀时也可使用低速台式离心机，2600×g离心30-60分钟。

预期产量：1mg组织或1×10细胞提取rna分别为：

肝和脾6-10μg,肾3-4μg,骨骼肌和脑组织1-1.5μg,胎盘1-4μg,上皮细胞8-15μg,

成纤维细胞5-7μg.

常见问题分析：

得率低：a.样品裂解或匀浆处理不彻底

b．rna沉淀未完全溶解

a260/a280<1.65：a.检测吸光度时，rna样品没有溶于水，而溶于了te中。低离子

浓度和低ph值条件下a280值偏高。 62467 b．样品匀浆时加的试剂量太少。

c．匀浆样品时未在室温放置5分钟。

d．吸取水相时混了有机相。

e．rna沉淀未完全溶解。

rna降解：a.组织取出后没有马上处理或冷冻

c.细胞在胰酶处理时过度

d.溶液或离心管未经rnase去除处理

e.电泳时使用的甲醛ph值低于了3.5 dna污染:a.样品匀浆时加的试剂量太少

b.样品中含有有机溶剂(如乙醇,dmso等),强缓冲液或碱性溶液

蛋白聚糖和多糖污染:沉淀rna的过程中作以下改进可去除这些污染，步骤7中,每使用

1mltrizol在水相中加0.25ml异丙醇和0.25ml高盐溶液(0.8m柠檬酸钠和1.2mnacl)混合离

心,按之前操作进行。这种方法可使蛋白聚糖和多糖留在溶液中，高效沉淀出纯rna。从含有

大量多糖的植物中提取rna时应在匀浆后离心，并加上以上操作步骤。

dna的分离

准备试剂：乙醇0.1m柠檬酸钠(含10%乙醇)75%乙醇8mmnaoh 操作步骤:

1.样品加氯仿分层后,移去上层水相,用乙醇沉淀中间层和有机相中的dna。每使用

1mltrizol加0.3ml无水乙醇混匀，室温放置3分钟，2-8℃不超过2000×g离心5分钟。

2.移去上清，（如需要分离蛋白质，可保留，进一步操作见后）用含10%乙醇的0.1m柠

檬酸钠洗涤dna沉淀。每用1mltrizol加入1ml柠檬酸钠，室温放置30分钟，2-8℃2000×g

离心5分钟，弃上清，重复一次。

3.用75%乙醇再洗一遍dna沉淀，每使用1mltrizol加入1.5-2ml75%乙醇,室温放置10-20

分钟(不时颠倒混合)2-8℃2000×g离心5分钟,弃上清。

4.室温放置晾干dna5-15分钟，用8mmnaoh溶解dna。从50-70mg组织或10细胞中分离

的dna溶于300-600μl8mmnaoh，dna的浓度通常为0.2-0.3μg/μl。提取的dna沉淀不易

溶于水和tris缓冲液中，建议用弱碱溶解，8mmnaoh的ph值为9，溶解dna后可用te，hepes

调节ph。从某些样品（尤其是组织）中提取的dna中可能包含一些胶状不溶物可>12000

×g离心10分钟除去。

dna的定量：取一份溶于8mmnaoh的dna加水测a260值。一单位a260值相当于50μg/ml

双链dna。根据dna产量可估计细胞数，人，大鼠，小鼠1×10二倍体细胞含dna的量分别

为7.1μg,6.5μg,5.8μg。

预期产量：1mg组织或1×10细胞提取dna分别为肝和肾3-4μg骨骼肌，脑组织，胎盘

2-3μg人，大鼠，小鼠培养细胞（1×10）5-7μg,成纤维细胞5-7μg 应用：1.用于pcr溶于8mmnaoh的dna用0.1mhepes调ph至8.4,取0.1-1μgdna用作

模板。 6667 2.酶切反应用hepes或1mmedta调节ph至适当值。每μgdna使用3-5单位的酶，80-90%

的dna是可消化的。

注意事项：

1.dna在中间层和有机相中时可在2-8℃保存过夜。

2．dna沉淀在75%乙醇中2-8℃可保存几个月。

3．dna在8mmnaoh溶液中4℃可放置过夜，如长期保存需用hepes调节ph至7-8并且加

edta至1mm可置于4℃或-20℃长期保存。

常见问题分析：

得率低：a.样品匀浆和裂解的不彻底

b．最终得到的dna沉淀没有完全溶解

b．酚除去的不彻底，可用0.1m柠檬酸钠（含10%乙醇）再洗一遍dna沉淀。

dna降解：a.组织取出后没有马上处理或冷冻

c．样品匀浆时使用了高速匀浆仪

rna污染：a.氯仿分层后水相去除的不干净

b．dna沉淀用0.1m柠檬酸钠（含10%乙醇）洗的不彻底

蛋白质的提取

准备试剂：异丙醇含0.3m盐酸胍的95%乙醇无水乙醇1%sds 操作步骤：

1.取沉淀dna后剩余的上清，用异丙醇沉淀蛋白质。每使用1mltrizol加1.5ml异丙醇，

室温放置10分钟，2-8℃12000×g离心10分钟弃上清。

2．用含0.3m盐酸胍的95%乙醇洗涤蛋白质沉淀。每使用1mltrizol加2ml洗涤液，室

温放置20分钟，2-8℃7500×g离心5分钟，弃上清，重复两次。用2ml无水乙醇同样方法

再洗一次。

3．真空抽干蛋白质沉淀5-10分钟，用1%sds溶解蛋白质，反复吸打，50℃温浴使其完

全溶解，不溶物2-8℃10000×g离心10分钟除去。分离得到的蛋白质样品可用于westernblot

或-5--20℃保存备用。

注意事项：

1.蛋白质沉淀可保存在含0.3m盐酸胍的95%乙醇或无水乙醇中2-8℃一个月以上或

-5--20℃一年以上。

2．用0.1%sds在2-8℃透析三次，10000×g离心10分钟取上清即可用于westernblot。

常见问题分析：

得率低：a.样品裂解或匀浆处理不彻底

b．最后得到的蛋白质沉淀未完全溶解

蛋白质降解：组织取出后没有马上处理或冷冻

电泳时条带变形：蛋白质沉淀洗涤不充分篇三：invitrogen trizol试剂盒的说明书

从组织中提取总rna

1)液氮研磨，组织块直接放入研体中，加入少量液氮，迅速研磨，待组织变软，再加少

量液氮，

再研磨，如此三次，按50-100mg组织/mltrizol加入trizol，转移入离心管进行第2

步操作。

2) 匀浆：组织样品按50-100mg/mltrizol 加入trizol，另外，组织体积不能超过trizol

体积

的10%，否则匀浆效果会不好，用电动匀浆器充分匀浆约需1-2分钟。

从细胞中提取总rna

1) 培养贴壁细胞：不须消化，可直接用trizol进行消化、裂解，trizol体积按10cm2/ml

比例加入。

2) 悬浮细胞可直接收集、裂解，每1ml trizol可裂解5×106动物、植物或酵母细胞，

或107细菌细胞。

2．细胞或组织加trizol后，室温放置5min，使其充分裂解。注：此时可放入-70℃长

期保持。

3．12000rpm 离心5min，弃沉淀。

4．按200ul氯仿/ml trizol加入氯仿，振荡混匀15分钟，室温放置15min。注：禁用

漩涡振荡器，

以免基因组dna断裂。

5．4℃12000g离心15min。

6．吸取上层水相，至另一离心管中。

注：1）千万不要吸取中间界面。

2)若同时提取dna和蛋白质，则保留下层酚相存于4℃冰箱,若只提rna，则弃下层酚相。

7．按0.5ml异丙醇/ml trizol 加入异丙醇混匀，室温放置5-10min。

8．4℃ 12000g离心10min，弃上清，rna沉于管底。

9．按1ml 75%乙醇/ml trizol加入75%乙醇，温和振荡离心管，悬浮沉淀。

10．4℃ 8000g离心5min，尽量弃上清。

11．室温晾干或真空干燥5-10min。注：rna样品不要过于干燥，否则很难溶解。

12．可用50ul h2o，te buffer或0.5%sds溶解rna样品，55-60℃5-10min。

注：h2o、te或0.5%sds均须用depc处理并高压。

12、测o.d值定量dna浓度。

注：1）此方法提取rna a260/a280值在1.6-1.8之间。

2) 产率估计：组织标本：（ug rna/mg组织）1-10ug，培养细胞（ug rna/106 cell）：

5-15ug。注：1、组织或细胞量过少，可酌情减少trizol用量。

2、组织或细胞用量过多，会引起dna对rna的污染。

3、高蛋白，脂肪或多糖类组织，肌肉组织或块状植物组织等，组织匀浆或液氮研磨后

须4℃ 1200离心10min去掉不溶物，再进行下面操作，若顶层有脂肪物，则

也须去掉。

4、热天提rna，带手套是必须的，手是rnase的主要来源。

5、组织块用液氮研磨，效果最好，若没有液氮或电动匀浆器，可用手动匀浆器代替，此

时组织块不宜过大，且需先用眼科剪将组织绞碎，然后再充分研磨。篇四：invitrogen trizol

rna抽提说明书

rna抽提全过程(trizol) 一，准备工作

1，实验器具与材料：

（1）移液枪：1ml、200ul、10ul （2）吸头：1ml、200ul、20ul （3）吸头台：放置1ml吸头的一个，放置200ul和20ul的吸头一个

（4） ep管1.5ml、100ul （5）玻璃研磨器

（6）容量瓶：1000ml

（7）盐水瓶：100ml

（8） 15ml塑料管一个（配75％乙醇用）

2，实验器具的处理与准备

（1）塑料制品：（包括吸头、ep管等）

将塑料制品逐个浸泡于1‰depc水中（必要时小枪头需要用吸管打入depc水）37℃过夜，

然后送至高压3次，后在80℃烘烤箱中烘干（或置于37℃中8小时左右烘干），试验前将枪

头放入吸头台。或直接购买经depc处理的枪头和ep管,每盒大约30元,基本上试剂公司都可

以购买。

（2）玻璃制品：（主要是玻璃研磨器）

先泡酸过夜，冲洗干净后，在1‰depc水中泡8小时左右，37℃烘干，用蒙锡纸包裹送

至干烤3次（或180度干烤）。

（3）金属制品：（镊子等）

先洗干净，再送干烤3次。（不需要泡depc水）

3，试剂配制和准备：

（1） depc水：泡实验器具的depc水的配制：1000ml双蒸水中加1mldepc，放在1000ml

容量瓶中静置4小时后备用。配75％乙醇的depc水的配制：100ml盐水瓶内装40ml双蒸水，

加40uldepc，37℃过夜，送至高压。

（2） 75％乙醇（要在抽提时现配）：用无水乙醇和depc水配制（depc水:无水乙醇＝

1:3），然后放于-20℃备用。

（3）异丙醇：放入棕色瓶

（4）氯仿：放入棕色瓶

（5） trizol：100ml/瓶存放于4℃

二，抽提时注意事项：

全程佩戴一次性手套和口罩，手套要勤换，避免戴上的一次性的手套接触可疑污染物。

三，抽提步骤

1．匀浆化作用

取约100mg鼠脑组织放于玻璃研磨器内，先加0.2ml的trizol溶液，研磨组织后，倒入

1.5mlep管中，再在研磨器内加入0.8ml的trizol溶液洗，后全部再倒入ep管中。颠

倒混匀10下，室温静置5分钟。

2．分离阶段

每1mltrizol中加0.2ml氯仿。盖紧样品管盖，用手用力摇晃试管15秒，使其充分混匀，

室温静置5分钟。后12000rmp离心15分钟。

3． rna的沉淀

将上层水相转入新的1.5mlep管中（约400-500ul），加入0.5ml异丙醇，混匀后放于-20℃

中1小时，后12000rmp离心10分钟。

4． rna的洗脱

小心倒掉上清，留取沉淀。加1ml现配的75%的乙醇（预冷）振荡洗涤rna沉淀一次，

后7500rmp离心5分钟。

5． rna的再溶解

小心倒掉上清，取沉淀置超净工作台开风机吹干（约30分钟，此时rna沉淀变透明）。

注意不能让rna沉淀完全干燥（会极大地降低它地可溶性）。再在管中加20ul的depc水溶解，

在55-60℃下孵育10分钟助溶。

6，rna的保存

提取的rna保存于-70℃超低温冰箱中，或立即用于逆转录。

trizol法抽提总rna 组织100mg

↓

加1mltrizol

↓

研磨，匀浆（研磨时倒入液氮，研磨完后从研钵转入ep管中，）

（组织匀浆量>100mg时分装1ml/每ep管）

↓

颠倒混匀10下，室温5分钟

↓

加氯仿1/5体积（0.2ml）（必须按总体积的1/5）

↓

颠倒混匀15s，室温5分钟

↓

4℃，离心12000rmp，15分钟

↓

转上层水相（约400-500μl）于另一新1.5mlep管中（注意勿吸入中间那层）

↓

加等体积异丙醇（约400 -500μl）

↓

4℃，离心12000rmp，10分钟↓弃上清

↓

加冰预冷的75%乙醇（用高压后的depc水配）1ml ↓

4℃离心7500rmp，5分钟

↓

弃上清，超净工作台开风机干燥约30分钟（不能完全干燥）

↓

溶于depc水中至50μl（此处可按照实际情况修改，有人用50，也有人用100）（可

在55-60℃水中，<10分钟助溶）

↓

立即保存于-70℃超低温冰箱中，或立即用于逆转录

rna纯度检测及定量

从36μl中取6μl，用无rna酶的水稀释100倍至600μl，用du70型分光光度仪分别

测定样品在260nm、280nm波长的光密度值，计算出rna的浓度（μg/ml）。

纯rna样品的a260/a280比值为1.7-2.1，若低于此值，表明存在蛋白质污染，需重新

用酚/氯仿抽提。rna样品的a260/a230比值应大于2.0，若低于该标准，提示有变性缓冲液

残留需重新用乙醇沉淀rna，然后用750ml/l的乙醇洗涤，以除去残留的变性缓冲液。

rna电泳

用无rnase水配tae电泳液，称1.0g新开封的琼脂糖，加tae电泳液至100ml，煮沸，

加溴乙锭20μl ，降至室温后灌胶置depc水处理过的电泳槽中，凝固20min，加tae 缓

冲液浸没胶块。取15μl rna加6×rna专用上样缓冲液3μl ，混匀，用移液枪将样品加入

上样孔内，待溴酚蓝迁移至理想位置后，终止电泳，紫外灯下观察、拍照。

上传rna电泳条带如下

最下面条带代表5s

色浅代表rna基本无降解

如出现拖把状条带则为降解较严重情况

但有时这种情况也可以照样rt－pcr 我们同学就有在低温冰箱放了几个月的组织照样可以出结果的篇五：trizol中文说明书

trizol使用说明

一、分离纯化的基本原理

研究基因的表达和调控时常常要从组织和细胞中分离和纯化rna。rna质量的高低常常影

响cdna库，rt-pcr和northern blot等分子生物学实验的成败。trizol是一种新型总rna

抽提试剂，内含异硫氰酸胍等物质，能迅速破碎细胞，抑制细胞释放出的核酸酶。

二、用户需自备的试剂和材料

无水乙醇、异丙醇、氯仿、glycogen（可能需要）、1.5ml eppendorf管（rnase-free）、

tips（rnase-free）

三、准备工作

rnase酶非常稳定，是导致rna降解最主要的物质。它在一些极端的条件可以暂时失活，但限制因素去除后有迅速复性。用常规的高温高压蒸气灭菌方法和蛋白抑制剂都不能是rnase完全失活。它广泛存在于人的皮肤上，因此，在与rna制备有关的分子生物学实验时，必须戴手套。 rnase的又一污染源是取液器，根据取液器制造商的要求对取液器进行处理。一般情况下采用用depc配制的70%乙醇擦洗取液器的内部和外部，基本达到要求。取rnase-free的物品时必须戴手套。

1、料制品的处理

尽可能使用无菌，一次性塑料制品，已标明rnase-free 的塑料制品，如没有开封使用过通常没有必要再次处理。对于国产塑料制品，原则上都必须处理方可使用。处理步骤如下： 1）在玻璃烧杯中注入去离子水，加入depc使depc的终浓度为0.1%。注意：depc为剧毒物，活性很强，小心在通风柜中使用。

2）处理的塑料制品放入一个可以高温灭菌的容器中，注入depc水溶液，使塑料制品的所有部分都浸泡到溶液中。

3）在通风柜中室温处理过夜。

4）将depc水溶液小心倒到废液瓶中，用铝箔封住含已depc水处理过的塑料制品的烧杯，高温高压蒸气灭菌至少30分钟。

5）烘箱用合适的温度烘拷至干燥。置于干净处备用。

2、璃玻和金属物品

250°c烘烤3小时以上。

四、操作步骤

1、匀浆制备

1)液氮研磨：组织块直接放入研钵中，加入少量液氮，迅速研磨，待组织变软，再加少量液氮，再研磨，如此三次，按50-100mg组织/ml trizol加入trizol，转入离心管进行第2步操作。

2) 匀浆：组织样品按50-100mg/mltrizol 加入trizol。另外，组织体积不能超过

trizol体积的10%，否则匀浆效果会不好，用电动匀浆器充分匀浆约需1-2分钟。

2、细胞或组织加trizol后，室温孵育5min，使其充分裂解（核酸蛋白复合体完全分离）。注：此时可放入-70℃长期保持。

3、按200ul氯仿/ml trizol加入氯仿，盖紧，手摇混匀15 second，室温孵育2-3min.注：禁用漩涡振荡器，以免基因组dna断裂。

4、4℃ 12,000g离心15min。注：混合物被分成：下层酚-氯仿，中间间层，上层是清澈的水相，大概占总体积的50%，rna存在于水相中。

5、45°倾斜吸取上层水相，至另一离心管中。注：千万不要吸取中间界面；若同时提取dna和蛋白质，则保留下层酚相存于4℃冰箱,若只提rna，则弃下层酚相。

6、按0.5ml异丙醇/ml trizol 加入100%异丙醇混匀，室温孵育10min。

7、4℃ 12,000g离心10min，弃上清，rna沉于管底。注：离心前一般是看不到rna的，离心后可以看到有凝胶状的沉淀物。

8、按1ml 75%乙醇/ml trizol加入75%乙醇，温和振荡离心管，悬浮沉淀。注： rna 在-20℃，至少可以在75%乙醇中储存一年，在4℃下至少储存一周。 9、4℃ 7500g(或8,000g)离心5min，尽量弃上清。

10、室温晾干或真空干燥（不要真空离心）5-10min。注：rna样品不要过于干燥，否则很难溶解，部分溶解的rna的a260/280＜1.6。

11、可用20-50ul h2o，te buffer或0.5% sds溶解rna样品（用枪头上下吹打几次）

55-60℃,孵育5-10min。（如果rna要用于随后的酶反应，请不要用0.5% sds溶解）。

注：h2o、te或0.5%sds均须用depc处理并高压。

12、测o.d值定量rna浓度。（此方法提取rna a260/a280值在1.6-1.8之间；产率估计：组织标本：（ug rna/mg组织）1-10ug，培养细胞（ug rna/106 cell）：5-15ug）注：组织或细胞量过少，可酌情减少trizol用量；组织或细胞用量过多，会引起dna 对rna的污染；高蛋白、脂肪或多糖类组织，肌肉组织或块状植物组织等，组织匀浆或液氮研磨后须4℃ 12,000g离心10min去掉不溶物，再进行下面操作，若顶层有脂肪物，则也须去掉；热天提rna，带手套是必须的，手是rnase的主要来源；组织块用液氮研磨，效果最好，若没有液氮或电动匀浆器，可用手动匀浆器代替，此时组织块不宜过大，且需先用眼科剪刀将组织剪碎，然后再充分研磨。

TRIZOL说明书

trizol 中文说明书 trizol 试剂是一种从组织及细胞中提取总rna的专用试剂。这种试剂是一种酚和硫氰酸 胍的单相溶液，是将chomczynski 和sacchi发明的一步rna提取法的改进。在样品匀浆或 分析过程中，trizol 试剂可在分裂细胞及溶解胞膜的同时保持rna的完整。在匀浆后加入氯 仿，可将溶液分为水相和有机相。rna均在水相中。吸取水相加入异丙醇，得到rna沉淀。 去除水相后，样品中的dna及蛋白质可通过进一步连续的沉淀而得到。中间相加入乙醇可沉 淀dna而有机相加入异丙醇则能沉淀出蛋白质。dna的再纯化可能对标化样品的rna产量有 作用。 2．这一技术可以用于人，动物，植物或细菌株的微量组织（50—100mg）及细胞（5 ×106），也可以用于大量检材（≥1g）及细胞(﹥107).该方法简便易行,可用于同时检测大量 样品,全部过程1小时内可以完成.用trizol 试剂分离的rna 没有dna及蛋白质成分.这种 rna可用于northern印迹分析,斑点杂交,多聚(a)+检出及vitro转移, rna酶蛋白分析及分 子克隆.用于pcr反应时,当两个引物位于同一外显子时应用扩增特异dna酶i处理提取出的 rna. 3． trizol 试剂可用于分子量从大到小的各种rna的提取.例如,大鼠肝脏提取出的rna, 经琼脂糖凝胶电泳,eb染色后可显现出7kb和15kb的大分子量的rna谱带(包括mrna和 hnrna), 位于～5kb(28s)和～2kb (18s)的两条主要的核糖体rna谱带及大小在0.1kb-0.3kb 之间的低分子量rna(trna,5s).分离出的rna当溶于双蒸水中时a260/280为1.6-1.8之间. 每毫克组织所能提取的rna量约为:肝和脾,6-10μg;肾,3-4μg;骨骼肌和脑,1-5μg;胎 盘,1-4μg.从1×106培养细胞中提取的rna量约为:上皮细胞,8-15μg;成纤维细胞,5-7μg. 需要但未提供的试剂: 1. 氯仿 2. 异丙醇 3. 75%乙醇(depc处理水配制) 4. 无rna酶水或0.5%sds溶液(制备无rna酶水:将水倒进无rna酶的玻璃容器中,加入 depc至0.01%(v/v)放置过夜后高压灭菌). sds溶液必须用depc处理后高压灭菌的水配制. rna分离提取步骤: 1．匀浆 a. 组织每50-100mg组织加入1ml的trizol 试剂后用匀浆机或玻璃棒匀浆。样品的 体积不要超过匀浆使用的trizol 试剂体积的1/10。 b. 单层培养细胞在一个直径3.5cm的培养皿中加入1mltrizol 试剂来溶解细胞，用 移液器反复吸打细胞溶液。加入的trizol 试剂的量取决于培养皿的表面积（每10cm2加入 1ml）而不是取决于细胞的数目。如果trizol 试剂的量不足，提取的rna中会混有dna。 c. 悬液中培养细胞离心沉淀细胞，吸取细胞，反复吹打使溶解于trizol 试剂中。每 5～10×106个动物，植物或酵母细胞，每1×107个细菌细胞加入1ml trizol 试剂。应该避 免在加入trizol 试剂前洗细胞，因为会增加mrna的变性。破坏某些酵母或细菌细胞需要使 用匀浆机。 2．选择采用的步骤：对于含有大量蛋白质，脂肪，多糖或其他细胞外物质的样品如 肌肉，脂肪，植物的块茎等可能需要再加上一个步骤。匀浆后，2℃～8℃条件下12，000×g 离心10分钟去除不溶物质。沉淀中包含有细胞外膜，多糖，大分子量dna，rna在上清中。 来源于脂肪组织的样品，最上层是脂肪层应该弃去。在每一种情况下，将纯净后的匀浆溶液 放在一新管里，加入氯仿即可以有如后面所描述的分层。 3．有机相与无机相的分开将匀浆后的样品在15℃～30℃孵育5分钟使核酸蛋白质混 合物分裂彻底。每1mltrizol 试剂加入0.2ml氯仿。小心盖上离心管盖，用手剧烈振摇15

invitrogen trizol试剂盒的说明书

从组织中提取总RNA 1)液氮研磨，组织块直接放入研体中，加入少量液氮，迅速研磨，待组织变软，再加少量液氮， 再研磨，如此三次，按50-100mg组织/mlTrizol加入Trizol，转移入离心管进行第2步操作。 2) 匀浆：组织样品按50-100mg/mlTrizol 加入Trizol，另外，组织体积不能超过Trizol 体积 的10%，否则匀浆效果会不好，用电动匀浆器充分匀浆约需1-2分钟。 从细胞中提取总RNA 1) 培养贴壁细胞：不须消化，可直接用Trizol进行消化、裂解，Trizol体积按10cm2/ml 比例加入。 2) 悬浮细胞可直接收集、裂解，每1ml Trizol可裂解5×106动物、植物或酵母细胞，或107细菌细胞。 2．细胞或组织加Trizol后，室温放置5min，使其充分裂解。注：此时可放入-70℃长期保持。 3．12000rpm 离心5min，弃沉淀。 4．按200ul氯仿/ml Trizol加入氯仿，振荡混匀15分钟，室温放置15min。注：禁用漩涡振荡器， 以免基因组DNA断裂。 5．4℃12000g离心15min。 6．吸取上层水相，至另一离心管中。 注：1）千万不要吸取中间界面。 2)若同时提取DNA和蛋白质，则保留下层酚相存于4℃冰箱,若只提RNA，则弃下层酚相。7．按0.5ml异丙醇/ml Trizol 加入异丙醇混匀，室温放置5-10min。 8．4℃ 12000g离心10min，弃上清，RNA沉于管底。 9．按1ml 75%乙醇/ml Trizol加入75%乙醇，温和振荡离心管，悬浮沉淀。 10．4℃ 8000g离心5min，尽量弃上清。 11．室温晾干或真空干燥5-10min。注：RNA样品不要过于干燥，否则很难溶解。 12．可用50ul H2O，TE buffer或0.5%SDS溶解RNA样品，55-60℃5-10min。 注：H2O、TE或0.5%SDS均须用DEPC处理并高压。 12、测O.D值定量DNA浓度。 注：1）此方法提取RNA A260/A280值在1.6-1.8之间。 2) 产率估计：组织标本：（ug RNA/mg组织）1-10ug，培养细胞（ug RNA/106 Cell）：5-15ug。注：1、组织或细胞量过少，可酌情减少Trizol用量。 2、组织或细胞用量过多，会引起DNA对RNA的污染。 3、高蛋白，脂肪或多糖类组织，肌肉组织或块状植物组织等，组织匀浆或液氮研磨 后须4℃ 1200离心10min去掉不溶物，再进行下面操作，若顶层有脂肪物，则 也须去掉。 4、热天提RNA，带手套是必须的，手是RNase的主要来源。 5、组织块用液氮研磨，效果最好，若没有液氮或电动匀浆器，可用手动匀浆器代替， 此时组织块不宜过大，且需先用眼科剪将组织绞碎，然后再充分研磨。

Trizol法提取RNA实验步骤与原理(新手详细注释版)

Trizol法使用步骤 一、分离纯化的基本原理 研究基因的表达和调控时常常要从组织和细胞中分离和纯化RNA。RNA质量的高低常常影响cDNA库，RT-PCR和Northern Blot等分子生物学实验的成败。Trizol是一种新型总RNA抽提试剂，内含异硫氰酸胍等物质，能迅速破碎细胞，抑制细胞释放出的核酸酶。 二、用户需自备的试剂和材料 无水乙醇、氯仿、Glycogen（可能需要）、 1.5ml Eppendorf管（RNase-free）、Tips（RNase-free） 三、准备工作 RNase酶非常稳定，是导致RNA降解最主要的物质。它在一些极端的条件可以暂时失活，但限制因素去除后有迅速复性。用常规的高温高压蒸气灭菌方法和蛋白抑制剂都不能是RNase完全失活。它广泛存在于人的皮肤上，因此，在与RNA制备有关的分子生物学实验时，必须戴手套。 RNase的又一污染源是取液器，根据取液器制造商的要求对取液器进行处理。一般情况下采用用DEPC(焦炭酸二磷脂，一种RNase抑制剂)配制的70%乙醇擦洗取液器的内部和外部，基本达到要求。取RNase-free的物品时必须戴手套。 1、料制品的处理 尽可能使用无菌，一次性塑料制品，已标明RNase-Free 的塑料制品，如没有开封使用过通常没有必要再次处理。对于国产塑料制品，原则上都必须处理方可使用。处理步骤如下： 1）在玻璃烧杯中注入去离子水，加入DEPC使DEPC的终浓度为0.1%。注意：DEPC为剧毒物，活性很强，小心在通风柜中使用。 2）处理的塑料制品放入一个可以高温灭菌的容器中，注入DEPC水溶液，使塑料制品

的所有部分都浸泡到溶液中。 3）在通风柜中室温处理过夜。 4）将DEPC水溶液小心倒到废液瓶中，用铝箔封住含已DEPC水处理过的塑料制品的烧杯，高温高压蒸气灭菌至少30分钟。 5）烘箱用合适的温度烘拷至干燥。置于干净处备用。 2、璃玻和金属物品 250°C烘烤3小时以上。 四、从组织中提取总RNA 1)液氮研磨：组织块直接放入研钵中，加入少量液氮，迅速研磨，待组织变软，再加少量液氮，再研磨，如此三次，按50-100mg组织/ml Trizol加入Trizol，转入离心管进行第2步操作。 （液氮既能使各种组织成分不易被破坏或降解,又能使组织变硬,脆性增加易于磨碎。终止细胞内外一切生物反应，防止RNA酶的降解反应） 2) 匀浆：组织样品按50-100mg/mlTrizol 加入Trizol。另外，组织体积不能超过Trizol体积的10%，否则匀浆效果会不好，用电动匀浆器充分匀浆约需1-2分钟。 五、从细胞中提取总RNA 1) 培养贴壁细胞：不须消化，可直接用Trizol进行消化、裂解，Trizol体积按10cm2/ml比例加入。 2) 悬浮细胞可直接收集、裂解，每1ml Trizol可裂解5×106动物、植物或酵母细胞，或107细菌细胞。 六、操作步骤 1、细胞或组织加Trizol后，室温放置5min，使其充分裂解。注：此时可放入-70℃长期保持。

trizol-LS-试剂使用中文说明书

TRIzol LS 试剂(ambion)（中文说明书） 货号规格室温贮存 10296-010 100ml 10296-028 200ml 产品描述 TRIzol LS试剂适用于液体样品，如人、动植物、酵母、细菌或者病毒来源的液体样品，提取高质量的总RNA（DNA和蛋白质也可以）全过程只需1小时。TRIzol LS试剂里含有酚、异硫氰酸胍和其它成分，由于在摇匀样品过程中能很有效地抑制RNase活性，所以TRIzol LS试剂能维持RNA完整性。TRIzol LS试剂允许同时处理大量的样品。 TRIzol LS试剂能从一个样品里有序分离提取RNA、DNA和蛋白质。TRIzol LS试剂均质化样品后，加入氯仿，能看见分层现象，上层是透明的含RNA的水相，中间层，下层是红色的有机相（含有DNA和蛋白质）。水相RNA用异丙醇能沉淀分离；中间层或者下层中的DNA用乙醇沉淀分离；异丙醇沉淀能使蛋白质从酚-醇相的上清液中沉淀出来。沉淀出的RNA、DNA 和蛋白质洗脱杂质，重悬后用于下游。 分离的RNA可以用于RT-PCR, Northern Blot analysis, Dot Blot hybridization, poly(A)+ selection, in vitro translation, RNase protection assay, and molecular cloning 分离的DNA可以用于PCR, and Restriction Enzyme digestion, and Southern Blots. 分离的蛋白质可以用于Western Blots, recovery of some enzymatic activity, and some immunoprecipitation. 注意：TRIzol LS试剂适用于液体样品（如，血液和病毒制品）。TRIzol LS试剂与TRIzol试剂仅在它们成分的含量上不同，TRIzol LS试剂的浓度更高，因此相对于同个样品时，TRIzol LS试剂需要量更少。不要将未稀释的TRIzol LS试剂用于固体样品。处理固体样品时，TRIzol LS 试剂没有TRIzol试剂效果好，收率要低些。 警告 TRIzol LS试剂含有的成分具有毒、腐蚀性和刺激性，如果处理不慎会有危害健康。请在通风橱里操作，并穿好实验服、戴好手套和安全眼镜。避免直接接触TRIzol LS试剂，会导致皮肤、眼睛或者呼吸道等暴露部位的化学灼伤。如果万一接触了皮肤或者眼睛，请立即用大量水冲洗15min，必要时去医院护理。如果吸入了气体，立刻到通风地方呼吸新鲜空气，必要时去医院护理。 内容和贮存 TRIzol LS试剂有100ml和200ml两种规格的，室温运输和贮存。妥善保管，1年内性质都很稳定。 使用目的 仅用于研究，不能用于人或动物的诊断或治疗。 需要材料 分离RNA、DNA和蛋白质还需要下列材料，但是我们未提供 分离RNA时，需要：氯仿；异丙醇；75%乙醇（DEPC水处理过）；无RNase水或者0.5%SDS；能达到12,000*g的高速离心机；聚丙烯微量离心管；水浴槽（55-60℃）。 分离DNA时，需要：氯仿；100%乙醇；75%乙醇；0.1M柠檬酸钠（10%乙醇）；8mM NaOH；能达到12,000*g的高速离心机；聚丙烯微量离心管。 分离蛋白质时，需要：氯仿；异丙醇；100%乙醇；0.3M盐酸胍（95%乙醇）；1%SDS；能达到12,000*g的高速离心机；聚丙烯微量离心管。 样品准备 样品均质化

(完整版)Trizol法提取RNA实验步骤.doc

Trizol 法使用步骤 一、分离纯化的基本原理 研究基因的表达和调控时常常要从组织和细胞中分离和纯化RNA。 RNA 质量的高低常常影响 cDNA 库， RT-PCR和 Northern Blot等分子生物学实验的成败。Trizol 是一种新型总RNA 抽提试剂，内含异硫氰酸胍等物质，能迅速破碎细胞，抑制细胞释放出的核酸酶。 二、用户需自备的试剂和材料 无水乙醇、氯仿、Glycogen（可能需要）、 1.5ml Eppendorf 管（ RNase-free）、 Tips（ RNase-free） 三、准备工作 RNase酶非常稳定，是导致 RNA 降解最主要的物质。它在一些极端的条件可以暂时失活， 但限制因素去除后有迅速复性。用常规的高温高压蒸气灭菌方法和蛋白抑制剂都不能是 RNase 完全失活。它广泛存在于人的皮肤上，因此，在与RNA 制备有关的分子生物学实验 时，必须戴手套。 RNase 的又一污染源是取液器，根据取液器制造商的要求对取液器进行处理。用用 DEPC配制的 70%乙醇擦洗取液器的内部和外部，基本达到要求。取 时必须戴手套。 一般情况下采RNase-free 的物品 1、料制品的处理 尽可能使用无菌，一次性塑料制品，已标明 RNase-Free 的塑料制品，如没有开封使用过通常 没有必要再次处理。对于国产塑料制品，原则上都必须处理方可使用。处理步骤如下： 1）在玻璃烧杯中注入去离子水，加入 DEPC使 DEPC的终浓度为 0.1%。注意： DEPC为剧毒物，活性很强，小心在通风柜中使用。 2）处理的塑料制品放入一个可以高温灭菌的容器中，注入DEPC 水溶液，使塑料制品的所 有部分都浸泡到溶液中。 3）在通风柜中室温处理过夜。 4）将 DEPC水溶液小心倒到废液瓶中，用铝箔封住含已 DEPC水处理过的塑料制品的烧杯，高温高压蒸气灭菌至少 30 分钟。 5）烘箱用合适的温度烘拷至干燥。置于干净处备用。 2、璃玻和金属物品 250°C 烘烤 3 小时以上。 四、从组织中提取总RNA 1)液氮研磨：组织块直接放入研钵中，加入少量液氮，迅速研磨，待组织变软，再加少量液 氮，再研磨，如此三次，按 50-100mg 组织 /ml Trizol 加入 Trizol，转入离心管进行第 2 步操作。 2) 匀浆：组织样品按50-100mg/mlTrizol加入Trizol。另外，组织体积不能超过 10%，否则匀浆效果会不好，用电动匀浆器充分匀浆约需1-2 分钟。 Trizol 体积的 五、从细胞中提取总RNA 1) 培养贴壁细胞：不须消化，可直接用Trizol 进行消化、裂解，Trizol 体积按 10cm2/ml 比例

Trizol法提取RNA实验步骤及原理(新手详细注释版)

Trizoｌ法使用步骤 一、分离纯化得基本原理 研究基因得表达与调控时常常要从组织与细胞中分离与纯化ＲＮA。ＲNA质量得高低常常影响cＤNA库,ＲT-PCＲ与Ｎorthern Ｂloｔ等分子生物学实验得成败。Ｔrizol就是一种新型总ＲNＡ抽提试剂,内含异硫氰酸胍等物质,能迅速破碎细胞，抑制细胞释放出得核酸酶。 二、用户需自备得试剂与材料 无水乙醇、氯仿、Ｇlycｏgen(可能需要)、 1、５ｍｌ Eppeｎｄｏrf管(ＲNase-frｅe)、 Tips(ＲNase－free) 三、准备工作 RNａse酶非常稳定,就是导致ＲNＡ降解最主要得物质。它在一些极端得条件可以暂时失活,但限制因素去除后有迅速复性。用常规得高温高压蒸气灭菌方法与蛋白抑制剂都不能就是ＲＮase完全失活。它广泛存在于人得皮肤上,因此,在与RＮA制备有关得分子生物学实验时,必须戴手套。 RNase得又一污染源就是取液器,根据取液器制造商得要求对取液器进行处理。一般情况下采用用ＤEPC（焦炭酸二磷脂,一种ＲＮａse抑制剂)配制得7０％乙醇擦洗取液器得内部与外部,基本达到要求。取ＲＮａｓｅ－free得物品时必须戴手套。 1、料制品得处理 尽可能使用无菌,一次性塑料制品，已标明RNasｅ-Fｒee 得塑料制品，如没有开封使用过通常没有必要再次处理。对于国产塑料制品,原则上都必须处理方可使用。处理步骤如下: 1)在玻璃烧杯中注入去离子水，加入DEＰＣ使DEＰC得终浓度为０、1%。注意:DEP Ｃ为剧毒物,活性很强，小心在通风柜中使用。 2)处理得塑料制品放入一个可以高温灭菌得容器中,注入ＤEPC水溶液,使塑料制品得所有部分都浸泡到溶液中。 3)在通风柜中室温处理过夜。 4)将DEPC水溶液小心倒到废液瓶中,用铝箔封住含已ＤEＰＣ水处理过得塑料制品得

Trizol使用说明

TRIzol（Invitrogen）试剂的性能描述及注意事项 警告： TRIzol试剂与皮肤接触及吞咽有毒。可导致烧伤。与皮肤接触后，应立即用洗涤剂和大量清水冲洗。如感到身体不适，应就医（如需要，请出示本产品标签）。本产品含有苯酚和其他成分。已经证明TRIzol在室温下可稳定保存12个月。但我们建议在储存于2-8°C，以保证最佳性能。 性能描述： TRIzol试剂（美国专利号，5346994）是即用型细胞或组织总RNA提取试剂。该试剂是利用苯酚和异硫氰酸胍一步完成提取RNA的方法，是对Chomczynski和Sacchi开发的单步RNA提取法的改善。在匀质化或裂解样品中，TRIzol试剂可保持RNA的完整性，同时能破坏细胞并溶解细胞成分。加入氯仿离心后，溶液分离成水相和有机相。仅RNA存在于水相中。将水相转移后，RNA通过异丙醇沉淀回收。移去水相后，样品中DNA和蛋白质可通过相继沉淀回收。用乙醇沉淀可从中间相得到DNA，加入异丙醇沉淀可从有机相得到蛋白质。 此技术既可良好的应用于少量组织（50-100mg）和细胞（5×106），也可用于大量的组织（≥1g）和细胞（>107）的处理，组织和细胞不限于人、动物、植物或细菌。TRIzol试剂使用简单方便，可同时处理大量样本。整个过程可在一小时内完成。用TRIZOL提取总RNA可避免蛋白质和DNA污染。提取的RNA可用于Northern blot分析、斑点杂交、poly（A）+选择、体外翻译、RNA酶保护分析和分子克隆。 TRIzol试剂方便提取不同种类、不同分子大小的RNA。例如，从大鼠肝中提取RNA，经琼脂糖凝胶电泳和溴化乙锭染色，高分子量RNA离散带长度可高达7kb和15kb，(组成mRNA’s和hnRNA’s)，两个主要的核糖体RN A 带在~5kB（28S）和~2Kb（18S）。低分子量RNA介于0.1和0.3kB

Trizol法提取RNA实验步骤

T r i z o l法提取R N A实验 步骤 Prepared on 22 November 2020

Trizol法使用步骤 一、分离纯化的基本原理 研究基因的表达和调控时常常要从组织和细胞中分离和纯化RNA。RNA质量的高低常常影响cDNA库，RT-PCR和NorthernBlot等分子生物学实验的成败。Trizol是一种新型总RNA抽提试剂，内含异硫氰酸胍等物质，能迅速破碎细胞，抑制细胞释放出的核酸酶。 二、用户需自备的试剂和材料 无水乙醇、氯仿、Glycogen（可能需要）、管（RNase-free）、Tips（RNase-free） 三、准备工作 RNase酶非常稳定，是导致RNA降解最主要的物质。它在一些极端的条件可以暂时失活，但限制因素去除后有迅速复性。用常规的高温高压蒸气灭菌方法和蛋白抑制剂都不能是RNase完全失活。它广泛存在于人的皮肤上，因此，在与RNA制备有关的分子生物学实验时，必须戴手套。 RNase的又一污染源是取液器，根据取液器制造商的要求对取液器进行处理。一般情况下采用用DEPC配制的70%乙醇擦洗取液器的内部和外部，基本达到要求。取RNase-free的物品时必须戴手套。 1、料制品的处理 尽可能使用无菌，一次性塑料制品，已标明RNase-Free的塑料制品，如没有开封使用过通常没有必要再次处理。对于国产塑料制品，原则上都必须处理方可使用。处理步骤如下： 1）在玻璃烧杯中注入去离子水，加入DEPC使DEPC的终浓度为%。注意：DEPC为剧毒物，活性很强，小心在通风柜中使用。 2）处理的塑料制品放入一个可以高温灭菌的容器中，注入DEPC水溶液，使塑料制品的所有部分都浸泡到溶液中。 3）在通风柜中室温处理过夜。 4）将DEPC水溶液小心倒到废液瓶中，用铝箔封住含已DEPC水处理过的塑料制品的烧杯，高温高压蒸气灭菌至少30分钟。 5）烘箱用合适的温度烘拷至干燥。置于干净处备用。

trizol提取RNA说明书

Trizol 使用说明书 一、分离纯化的基本原理 研究基因的表达和调控时常常要从组织和细胞中分离和纯化 RNA。RNA 质量的高低常常影响cDNA 库，RT-PCR 和 Northern Blot 等分子生物学实验的成败。Trizol 是一种新型总 RNA 抽提试剂，内含异硫氰酸胍等物质，能迅速破碎细胞，抑制细胞释放出的核酸酶。 二、用户需自备的试剂和材料 无水乙醇、氯仿、Glycogen（可能需要）、 1.5ml Eppendorf 管（RNase-free）、 Tips（RNase-free） 三、准备工作 RNase 酶非常稳定，是导致 RNA 降解最主要的物质。它在一些极端的条件可以暂时失活，但限制因素去除后有迅速复性。用常规的高温高压蒸气灭菌方法和蛋白抑制剂都不能是 RNase 完全失活。它广泛存在于人的皮肤上，因此，在与 RNA 制备有关的分子生物学实验时，必须戴手套。 RNase 的又一污染源是取液器，根据取液器制造商的要求对取液器进行处理。一般情况下采用用DEPC 配制的 70%乙醇擦洗取液器的内部和外部，基本达到要求。取 RNase-free 的物品时必须戴手套。 1、料制品的处理 尽可能使用无菌，一次性塑料制品，已标明 RNase-Free 的塑料制品，如没有开封使用过通常没有必要再次处理。对于国产塑料制品，原则上都必须处理方可使用。处理步骤如下： 1）在玻璃烧杯中注入去离子水，加入 DEPC 使 DEPC 的终浓度为 0.1%。注意：DEPC 为剧毒物，活性很强，小心在通风柜中使用。

2）处理的塑料制品放入一个可以高温灭菌的容器中，注入 DEPC 水溶液，使塑料制品的所有部分都浸泡到溶液中。 3）在通风柜中室温处理过夜。 4）将 DEPC 水溶液小心倒到废液瓶中，用铝箔封住含已 DEPC 水处理过的塑料制品的烧杯，高温高压蒸气灭菌至少 30 分钟。 5）烘箱用合适的温度烘拷至干燥。置于干净处备用。 2、璃玻和金属物品250°C 烘烤 3 小时以上。 四、从组织中提取总 RNA 1)液氮研磨，组织块直接放入研钵中，加入少量液氮，迅速研磨，待组织变软，再加少量液氮，再研磨，如此三次，按 50-100mg 组织/ml Trizol 加入 Trizol，转入离心管进行第 2 步操作。 2) 匀浆：组织样品按 50-100mg/mlTrizol 加入 Trizol。另外，组织体积不能超过 Trizol 体积的 10%，否则匀浆效果会不好，用电动匀浆器充分匀浆约需 1-2 分钟。 五、从细胞中提取总 RNA 1) 培养贴壁细胞：不须消化，可直接用Trizol进行消化、裂解，Trizol体积按 10cm2/ml比例加入。 2) 悬浮细胞可直接收集、裂解，每 1ml Trizol可裂解 5×106动物、植物或酵母细胞，或 107细菌细胞。 六、操作步骤 1、细胞或组织加 Trizol 后，室温放置 5min，使其充分裂解。注：此时可放入-70℃长期保持。 2、12,000rpm 离心 5min，弃沉淀。 3、按 200ul 氯仿/ml Trizol 加入氯仿，振荡混匀后室温放置 15min。注：禁用漩涡振荡器，以免基因组 DNA 断裂。 4、4℃ 12,000g 离心 15min。 5、吸取上层水相，至另一离心管中。注：千万不要吸取中间界面；若同时提取

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TRIzol? Reagent Catalog Numbers 15596026 and 15596018 Doc. Part No. 15596026.PPS Pub. No. MAN0001271 Rev. A.0 WARNING! Read the Safety Data Sheets (SDSs) and follow the handling instructions. Wear appropriate protective eyewear, clothing, and gloves. Safety Data Sheets (SDSs) are available from https://www.sodocs.net/doc/022512046.html,/support. Product information Invitrogen? TRIzol? Reagent is a ready-to-use reagent, designed to isolate high quality total RNA (as well as DNA and proteins) from cell and tissue samples of human, animal, plant, yeast, or bacterial origin, within one hour. TRIzol? Reagent is a monophasic solution of phenol, guanidine isothiocyanate, and other proprietary components which facilitate the isolation of a variety of RNA species of large or small molecular size. TRIzol? Reagent maintains the integrity of the RNA due to highly effective inhibition of RNase activity while disrupting cells and dissolving cell components during sample homogenization. TRIzol? Reagent allows for simultaneous processing of a large number of samples, and is an improvement to the single-step RNA isolation method developed by Chomcynski and Sacchi (Chomczynski and Sacchi, 1987). TRIzol? Reagent allows to perform sequential precipitation of RNA, DNA, and proteins from a single sample (Chomczynski, 1993). After homogenizing the sample with TRIzol? Reagent, chloroform is added, and the homogenate is allowed to separate into a clear upper aqueous layer (containing RNA), an interphase, and a red lower organic layer (containing the DNA and proteins). RNA is precipitated from the aqueous layer with isopropanol. DNA is precipitated from the interphase/organic layer with ethanol. Protein is precipitated from the phenol-ethanol supernatant by isopropanol precipitation. The precipitated RNA, DNA, or protein is washed to remove impurities, and then resuspended for use in downstream applications.?Isolated RNA can be used in RT-PCR, Northern Blot analysis, Dot Blot hybridization, poly(A)+ selection, in vitro translation, RNase protection assay, and molecular cloning. ?Isolated DNA can be used in PCR, Restriction Enzyme digestion, and Southern Blots. ?Isolated protein can be used for Western Blots, recovery of some enzymatic activity, and some immunoprecipitation. TRIzol? Reagent can also be used with Phasemaker? Tubes to isolate RNA. Refer to TRIzol? Reagent and Phasemaker? Tubes Complete System User Guide (MAN0016163) for the full protocol. Contents and storage Required materials not supplied Unless otherwise indicated, all materials are available through https://www.sodocs.net/doc/022512046.html,. MLS: Fisher Scientific (https://www.sodocs.net/doc/022512046.html,) or other major laboratory supplier. Table 1 Materials required for RNA, DNA, and protein isolation Table 2 Materials required for RNA isolation Table 3 Materials required for DNA isolation Table 4 Materials required for protein isolation USER GUIDE

invitrogen trizol rna抽提说明书

RNA抽提全过程(TRIZOL) 一，准备工作 1，实验器具与材料： （1）移液枪：1ml、200ul、10ul （2）吸头：1ml、200ul、20ul （3）吸头台：放置1ml吸头的一个，放置200ul和20ul的吸头一个 （4）EP管1.5ml、100ul （5）玻璃研磨器 （6）容量瓶：1000ml （7）盐水瓶：100ml （8）15ml塑料管一个（配75％乙醇用） 2，实验器具的处理与准备 （1）塑料制品：（包括吸头、EP管等） 将塑料制品逐个浸泡于1‰DEPC水中（必要时小枪头需要用吸管打入DEPC水）37℃过夜，然后送至高压3次，后在80℃烘烤箱中烘干（或置于37℃中8小时左右烘干），试验前将枪头放入吸头台。或直接购买经DEPC处理的枪头和EP管,每盒大约30元,基本上试剂公司都可以购买。 （2）玻璃制品：（主要是玻璃研磨器） 先泡酸过夜，冲洗干净后，在1‰DEPC水中泡8小时左右，37℃烘干，用蒙锡纸包裹送至干烤3次（或180度干烤）。 （3）金属制品：（镊子等） 先洗干净，再送干烤3次。（不需要泡DEPC水）

3，试剂配制和准备： （1）DEPC水：泡实验器具的DEPC水的配制：1000ml双蒸水中加1mlDEPC，放在1000ml 容量瓶中静置4小时后备用。配75％乙醇的DEPC水的配制：100ml盐水瓶内装40ml双蒸水，加40ulDEPC，37℃过夜，送至高压。 （2）75％乙醇（要在抽提时现配）：用无水乙醇和DEPC水配制（DEPC水:无水乙醇＝1:3），然后放于-20℃备用。 （3）异丙醇：放入棕色瓶 （4）氯仿：放入棕色瓶 （5）Trizol：100ml/瓶存放于4℃ 二，抽提时注意事项： 全程佩戴一次性手套和口罩，手套要勤换，避免戴上的一次性的手套接触可疑污染物。三，抽提步骤 1．匀浆化作用 取约100mg鼠脑组织放于玻璃研磨器内，先加0.2ml的Trizol溶液，研磨组织后，倒入1.5mlEP管中，再在研磨器内加入0.8ml的Trizol溶液洗，后全部再倒入EP管中。颠倒混匀10下，室温静置5分钟。 2．分离阶段 每1mlTrizol中加0.2ml氯仿。盖紧样品管盖，用手用力摇晃试管15秒，使其充分混匀，室温静置5分钟。后12000rmp离心15分钟。 3．RNA的沉淀 将上层水相转入新的1.5mlEP管中（约400-500ul），加入0.5ml异丙醇，混匀后放于-20℃中1小时，后12000rmp离心10分钟。 4．RNA的洗脱

Trizol说明书

Trizol说明书 产品简介： 本公司生产的Trizol试剂适用于从细胞或组织中分离总RNA，结果产量高、完整性好、纯度高，省时、省力。提取的总RNA可用于cDNA合成、RT-PCR、Northern Blot、Dot blot、Primer Extension、Poly A RNA筛选、体外翻译或其他基因工程用途。 该试剂能促进不同种属不同分子量大小的多种RNA的析出。例如，从大鼠肝脏抽提 （mRNA 的RNA琼脂糖凝胶电泳时，可见许多介于7kb和15kb之间不连续的高分子量条带， 和hnRNA成分）两条优势核糖体RNA条带位于~5 kb (28S)和~2 kb (18S)，28S与18S 电泳条带亮度比值约为2：1，低分子量RNA介于0.1 和 0.3 kb之间 (tRNA, 5S)。当抽提的RNA用TE稀释时其A260/A280比值≥1.8。 TRizol试剂保存于4℃可达12个月。 下图从K562细胞总提取的总RNA电泳效果图 下表从组织和细胞中提取的总RNA量 组织或细胞（mg、1×106 ）总RNA产量（ug） 肝、脾8~20 肾3~5 骨骼肌、脑组织1~5 胎盘1~5

上皮细胞8~20 纤维母细胞5~20 试剂盒组成 产品编号131904 131905 保存条件 Trizol 50ml 100ml 4℃ 说明书 1 份 操作者提供及注意事项 1、新的氯仿、异丙醇、70%酒精（0.1% DEPC-H2O配制）、4℃离心机（速度约12000rpm） 2、1.5ml离心管，1ml、200ul、20ul的吸头，需经过0.1% DEPC-H2O 37℃处理过夜，高压消毒烤干待用；研磨器用水洗干净后，需要180℃高温干烤3小时。 3、在抽提RNA过程中任一环节的不正确操作都可能导致RNA酶的污染。由于RNA 酶的活性很难完全抑制，预防其污染十分必要。全程佩戴一次性手套、口罩。皮肤经常带有细菌和霉菌，可能污染RNA的抽提并成为RNA酶的来源。 4、请勿接触皮肤或不慎吞服，会导致灼伤。一旦接触皮肤后立即以大量的洗涤剂和清水清洗。若感不适，看医生并寻求正确的治疗方案。 操作步骤 1、根据样品的类型，在室温（冰浴更佳）下，选择下面合适的处理方法，样品的体积请勿超过加入Trizol的10%，否则会引起裂解不充分，导致DNA污染RNA。 （1）组织匀浆或研磨 用匀浆器匀浆组织样品，每50~100mg组织加1ml Trizol。如果裂解物中，未研碎的组织过多，12000rpm离心3分钟，再取上清继续操作后续步骤。 （2）单层生长的贴壁细胞 吸掉培养基，用无菌的PBS液或Hank’s液轻轻冲洗后，弃掉上清，直接往培养瓶或培养板中加入1ml Trizol，用移液器或滴管吹打均匀。根据培养板的面积决定所需的Trizol的量，每10cm2加1ml Trizol。

Trizol总RNA抽提试剂盒

Trizol使用说明书 一、分离纯化的基本原理 研究基因的表达和调控时常常要从组织和细胞中分离和纯化RNA。RNA质量的高低常常影响cDNA库，RT-PCR和Northern Blot等分子生物学实验的成败。Trizol是一种新型总RNA抽提试剂，内含异硫氰酸胍等物质，能迅速破碎细胞，抑制细胞释放出的核酸酶。二、用户需自备的试剂和材料 无水乙醇、氯仿、Glycogen（可能需要）、 1.5ml Eppendorf管（RNase-free）、 ips （RNase-free） 三、准备工作 RNase酶非常稳定，是导致RNA降解最主要的物质。它在一些极端的条件可以暂时失活，但限制因素去除后有迅速复性。用常规的高温高压蒸气灭菌方法和蛋白抑制剂都不能是RNase完全失活。它广泛存在于人的皮肤上，因此，在与RNA制备有关的分子生物学实验时，必须戴手套。RNase的又一污染源是取液器，根据取液器制造商的要求对取液器进行处理。一般情况下采用用DEPC配制的70%乙醇擦洗取液器的内部和外部，基本达到要求。取RNase-free的物品时必须戴手套。 1、料制品的处理尽可能使用无菌，一次性塑料制品，已标明RNase-Free 的塑料制品，如没有开封使用过通常没有必要再次处理。对于国产塑料制品，原则上都必须处理方可使用。处理步骤如下： 1）在玻璃烧杯中注入去离子水，加入DEPC使DEPC的终浓度为0.1%。注意：DEPC 为剧毒物，活性很强，小心在通风柜中使用。 2）处理的塑料制品放入一个可以高温灭菌的容器中，注入DEPC水溶液，使塑料制品的所有部分都浸泡到溶液中。 3）在通风柜中室温处理过夜。 4）将DEPC水溶液小心倒到废液瓶中，用铝箔封住含已DEPC水处理过的塑料制品的烧杯，高温高压蒸气灭菌至少30分钟。 5）烘箱用合适的温度烘拷至干燥。置于干净处备用。 2、璃玻和金属物品 250°C烘烤3小时以上。 四、从组织中提取总RNA 1) 液氮研磨，组织块直接放入研钵中，加入少量液氮，迅速研磨，待组织变软，再加少 量液氮，再研磨，如此三次，按50-100mg组织/ml Trizol加入Trizol，转入离心管进行第2步操作。

invitrogen_TRIZOL_中文说明书

TRIZOL? Reagent Cat. No. 15596-026 Size: 100 ml Store at 2 to 8°C. 警告：在与皮肤接触及吞咽有毒。可导致烧伤。与皮肤接触后，应立即用洗涤剂和大量水冲洗。如感到身体不适，应就医（如需要，应出示本产品标签）。本产品含有苯酚（108-95-2）和其他成分（NJTSRN 80100437-5000P）。 已经证明TRIZOL 在室温下可稳定保存12个月。不过，我们建议在储存于2-8°C，以保证最佳性能。 描述： TRIzol试剂（美国专利号，5346994）是即用型细胞和组织总RNA提取试剂。该试剂是一步法苯酚和异硫氰酸胍解决方案，是对Chomczynski和Sacchi开发的单步RNA提取法（1）的改善。在匀质化或溶解样品中，TRIzol试剂可保持RNA的完整性，同时能破坏细胞及溶解细胞成分。加入氯仿离心后，裂解液分离成水相和有机相。RNA存在于水相。水相转移后，RNA通过异丙醇沉淀回收。移去水相后，样品中DNA和蛋白质可通过相继沉淀回收（2）。用乙醇沉淀可从中间相得到DNA，加入异丙醇沉淀可从有机相得到蛋白质（2）。与DNA的共纯化可能对不同样品得到的RNA的归一化有用。 此技术可完美应用于少量人类、动物、植物或细菌来源的组织（50-100毫克）和细胞（5×106），以及大量的组织（≥1 g）和细胞（>107）。该TRIzol试剂方法简单，允许大量样本同时处理。整个过程可在一小时内完成。用TRIZOL提取总RNA可避免蛋白质和DNA 污染。可用于Northern blot分析、斑点杂交、poly（A）+选择、体外翻译、RNA酶保护分析和分子克隆。聚合酶链反应（PCR反应）中，当两条引物位于单个外显子时，推荐使用扩增级DNA酶I(Cat. No. 18068)处理分离出的RNA。 TRIzol试剂方便提取不同种类、不同分子大小的RNA。例如，从大鼠肝中提取RNA，

Trizol法提取RNA实验步骤及原理(新手详细注释版)

Trizolxx使用步骤 一、分离纯化的基本原理 研究基因的表达和调控时常常要从组织和细胞中分离和纯化RNA。RNA质量的高低常常影响cDNA库，RT-PCR和Northern Blot等分子生物学实验的成败。Trizol是一种新型总RNA抽提试剂，内含异硫氰酸胍等物质，能迅速破碎细胞，抑制细胞释放出的核酸酶。 二、用户需自备的试剂和材料 无水乙醇、氯仿、Glycoge（可能需要）、1.5ml Eppe ndof 管（RNase-free）> Tips（RNase-free） 三、准备工作 RNase酶非常稳定，是导致RNA降解最主要的物质。它在一些极端的条件可以暂时失活，但限制因素去除后有迅速复性。用常规的咼温咼压蒸气火菌方法和蛋白抑制剂都不能是RNase完全失活。它广泛存在于人的皮肤上，因此，在与RNA制备有关的分子生物学实验时，必须戴手套。 RNase的又一污染源是取液器，根据取液器制造商的要求对取液器进行处理。一般情况下采用用DEPC焦炭酸二磷脂，一种RNase抑制剂）配制的70%乙醇擦洗取液器的内部和外部，基本达到要求。取RNase-free的物品时必须戴手套。 1、料制品的处理 尽可能使用无菌，一次性塑料制品，已标明RNase-Free的塑料制品，如没 有开封使用过通常没有必要再次处理。对于国产塑料制品，原则上都必须处理方可使用。处理步骤如下： 1）在玻璃烧杯中注入去离子水，加入DEPC使DEPC的终浓度为0.1%。注意: DEPC为剧毒物，活性很强，小心在通风柜中使用。 2）处理的塑料制品放入一个可以高温灭菌的容器中，注入DEPC水溶液，使塑料制品的所有部分都浸泡到溶液中。