实验六 粉防己中粉防己碱和防己诺林碱的精制及检识

实验六粉防己中粉防己碱和防己诺林碱的精制及检识（2）【实验目的】

1、能够进行粉防己碱和防己诺林碱的分离和精制。

2、学会用化学法检识生物碱。

【实验原理】

本实验是根据粉防己生物碱可溶于一般有机溶剂的性质，先用乙醇提取得总碱，再利用粉防己碱、防己诺林碱及轮环藤酚碱的溶解性和极性差异进行分离。将总生物碱溶于稀酸水，碱化后用苯萃取出粉防己碱，再用三氯甲烷萃取防己诺林碱，轮环藤酚碱为水溶性生物碱，仍留在碱水层；或者将稀酸水碱化后用三氯甲烷萃取出粉防己碱和防己诺林碱。

【实验材料】

设备: 分液漏斗、长滴管、烧杯、25ml小锥形瓶、试管、

药品: 粉防己粗提物、1%氢氧化钠溶液、无水硫酸钠、丙酮、苯、10％盐酸、碘化铋钾试剂、碘化汞钾试剂、硅钨酸试剂、苦味酸试剂

【实验步骤】

1、脂溶性叔胺碱中酚性和非酚性生物碱的分离：三氯甲烷液置于1000ml分液漏斗中，先以1%氢氧化钠溶液洗两次后，再用水洗2～3次，碱水液和水洗液合并，为含酚性生物碱部分。三氯甲烷液用无水硫酸钠脱水，回收三氯甲烷至干，抽松，立即加入10～15ml丙酮，充分溶解抽松物，待完全溶解后用长滴管吸取瓶内液体，转移入25ml小锥形瓶中．残留的不溶物质可再用丙酮2～3ml清洗两次，洗涤液与丙酮溶液合并，再于此丙酮液中滴加适量蒸馏水，使溶液呈现微浊状态，于冰箱中放置析晶，待结晶完全之后过滤收集结晶，并用少许含水丙酮洗去结晶表面粘附的母液，自然晾干即得粗脂溶性非酚性碱（含粉防己碱和防己诺林碱的混合物）。

2、粉防己碱和防己诺林碱的分离精制：取上述粗脂溶性非酚性碱置于25ml锥形瓶中，加5倍量的冷苯，密闭冷浸，时时振摇，l小时后．过滤，以少量苯洗涤苯不溶部分，合并苯溶液，回收苯至无苯的臭味，残留物以丙酮重结晶，得针状结晶，为

粉防己碱。苯不溶物待挥发去残留的苯后，也用丙酮重结晶，可得粒状结晶，为防己诺林碱。

3、检识

沉淀反应：取实验产品（总碱或单体）少许，加10％盐酸1ml，振摇溶解，加蒸馏水3ml稀释，分别置于4支试管中，分别加入下列四种生物碱沉淀试剂[①碘化铋钾试剂、②碘化汞钾试剂、③硅钨酸试剂、④苦味酸试剂（试液应为中性）]1～2滴，观察各管产生的沉淀颜色和现象。

【注意事项】

1、提取总生物碱时，回收乙醇至稀浸膏状即可，不宜过干，否则加入1%盐酸水溶液后，易结成胶状团块，影响提取效果。

2、两相溶剂萃取法操作时应注意不要用力振摇，将分液漏斗轻轻旋转摇动，以免产生乳化现象。如果一旦发生乳化时，应及时消除乳化。振摇动作宜缓和，可适当延长振摇时间，但不要因为怕形成乳化而不敢振摇；或为防止乳化的发生而减少振摇的程度和时间，从而造成萃取分离不完全而损失有效成分。在进行两项溶液萃取时，力求萃取完全，提尽生物碱，防止生物碱丢失而影响收得率。

3、通常采用纸上斑点试验法来检查生物碱是否萃取完全，即取最后一次三氯甲烷萃取液1-2滴，滴在滤纸上，待三氯甲烷挥尽之后，喷洒改良碘化铋钾试剂，观察结果。若无红棕色斑点，表示已萃取完全。

【实验装置图】【实验结论】【实验注意】

实验六__乳粉中还原糖含量的测定

实验六乳粉中还原糖含量的测定—直接滴定法 一、目的要求 1、理解直接滴定法测定还原糖的原理及操作要点； 2、熟练称量、过滤、定容、滴定等基本操技术。 二、实验原理 将一定量的碱性酒石酸铜甲、乙液等量混合，立即生成天蓝色的氢氧化铜沉淀，这种沉淀很快与酒石酸钾钠反应，生成深蓝色的可溶性酒石酸钾钠铜络合物。试样经除去蛋白质后，在加热条件下，以次甲基蓝作指示剂，用样液滴定，样液中的还原糖与酒石酸钾钠铜反应，生成红色的氧化亚铜沉淀。稍过量的还原糖把次甲基蓝还原，溶液由蓝色变为无色，即为滴定终点。根据试样溶液消耗体积，计算还原糖量。反应方程式如下： CuSO4+2NaOH=Cu(OH)2↓+Na2SO4 COONa COONa ︱∣ CHOH CHO╲ ∣+Cu(OH)2= ∣Cu +2H2O CHOH CHO╱ ∣∣ COOK COOK COONa COONa ∣CHO ∣CHOH CHO╲∣CHOH ∣ 2∣Cu +(CHOH)4 +2H2O=2 ∣+ (CHOH)4+Cu2O↓ CHO╱∣CHOH ∣ ∣CH2HO ∣CH2OH COOK COOK 亚甲蓝氧化型+还原糖——→亚甲蓝还原型 (蓝色) （无色） 三、实验试剂 1、碱性酒石酸铜甲液：称取7.5g硫酸铜 ( CuSO 4?5H 2 O) 及0.025g次甲 基蓝，溶入水中并稀释至500mL。 2、碱性酒石酸铜乙液：称取25g酒石酸钾钠及37.5g氢氧化钠，溶于水中，再加入2g亚铁氰化钾，完全溶解后，用水稀释至500mL，贮存于橡胶塞玻璃瓶内。 3、乙酸锌溶液：称取10.95g乙酸锌，加1.5mL冰乙酸，加水溶解并稀释至50mL。 4、亚铁氰化钾溶液：称取5.5g亚铁氰化钾，加水溶解并稀释至50mL。

粉防己最佳采收期的确

粉防己最佳采收期的确定 一直以来遂川的药农都是习惯在每年的10月到次年的3月中下旬对野生粉防己进行采挖。 表粉防己不同采收期有效成分积累试验 采收期 含量% 总量粉防己碱粉防己诺林碱 9月18日0.63 1.22 1.85 10月18日0.71 1.20 1.91 11月18日0.67 1.25 1.92 12月18日0.72 1.29 2.01 次年1月18日0.70 1.21 1.90 次年2月18日0.68 1.29 1.97 以上试验样品药材于2004年至2005年，采于江西翔云药业有限公司的盆珠乡西垅粉防己种植基地的人工栽培品种。 防己GAP产品主要质量标准（企业） 外观性状本品呈不规则圆柱形、半圆柱形或块状，多弯曲，长5～10cm，直径约1～5cm。表面淡灰黄色，在弯曲处常有深陷横沟而成结节状的 瘤块样。体重，质坚实，断面平坦，灰白色，富粉性，有排列较稀 疏的放射状纹理。气微，味苦。 有效成分本品按干燥品计算，含粉防己碱（C38H42N2O6）和防己诺林碱（C37H40N2O6）总量不得少于1.6%（0.9%）。 水分照水分测定法(2005 版药典一部附录IX H)测定不得过12.0%。 灰分灰分测定法(2005 版药典一部附录IX K)测定，不得过4.0%。 重金属含重金属不得过百万分之二十。含铅量不得过百万分之五；含镉量不得过千万分之三；含砷量不得过百万分之二；含汞量不得过千万 分之二；含铜量不得过百万分之十；含铬量不得过百万分之五。 农药残留六六六（BHC）不得过千万分之二；滴滴涕（DDT）不得过千万分之二；五氯硝基苯（PCNB）不得过千万分之一；艾氏剂不得过千万分 之二。 其它包装统一整洁，产地、日期、标志清楚，有检验合格标志。

实验一 还原糖和总糖含量的测定

实验一还原糖和总糖含量的测定 （3,5-二硝基水杨酸比色法） 一．目的 1.掌握还原糖定量测定的基本原理； 2.学习比色定糖法的基本操作； 3.熟悉分光光度计的使用方法。 二．原理 在碱性的条件下，还原糖与3,5-二硝基水杨酸共热，3,5-二硝基水杨酸被还原为3-氨基-5-硝基水杨酸（棕红色物质）,还原糖的量与棕红色物质颜色深浅的程度成一定的比例关系，在540nm波长下测定棕红色物质的消光值，查对标准曲线并计算，便可分别样品中还原糖和总糖的含量。 三．仪器.试剂和材料 1.仪器： （1）25ml刻度试管（2）玻璃漏斗（3）三角瓶（4）100ml容量瓶3个（5）刻度吸管（1ml,2ml,3ml）（6）恒温水浴（7）沸水浴（8）电子天平（9）分光光度计2.试剂； （1）1mg/ml葡萄糖标准液（2）3,5-二硝基水杨酸试剂（3）碘碘化钾溶液（4）酚酞指示剂（5）6ml/L HCI （6）6ml/L NaOH 3.材料：食用面粉 四．操作步骤 将各管摇匀，在沸水中加热5min，取出后立即放入盛有冷水的烧杯中冷却至室温，再以蒸馏水定容至25min，用试管塞塞住试管口，颠倒混匀。在540nm波长下，用0号试管调零，分别读取1~6号管的吸光度。以吸光度为纵坐标，葡萄样毫克数为横坐标，绘制标准曲线。

2.样品中还原糖和总糖含量的测定 （1）样品中还原糖的提取：准确称取3g使用面粉，放在100ml三角瓶中，先以少量蒸馏水调成糊状，然后加50ml蒸馏水，搅匀，置于50℃恒温水中保温20min，使还原糖浸出。过滤，用20ml蒸馏水定容至刻度，混匀，作为还原糖待测液。 （2）样品中总糖的水解和提取：准确称取1g使用面粉。放在100ml的三角瓶中，加入10ml 6mol/L HCI及15ml蒸馏水，置于水浴中加热水解30min。待三角瓶中水解液冷却后，加入1滴酚酞指示剂。以6mol/LNaOH中和至微红色，过滤，再用少量蒸馏水冲洗三角瓶及滤纸，将滤纸全部收集砸100ml的容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，混匀。精确吸取10ml 定容过的水解液，移入另一100ml的容量瓶中，以水稀释定容，混匀，作为总糖待测液。 六、结果处理 （1）由管○1、○2吸光度平均值在葡萄糖标准曲线查出相应的还原糖毫克数为：0.167mg

粉防己生物碱的提取分离和鉴别

粉防己生物碱的提取分离和鉴别 粉防己为植物防己科粉防己Stephania tetrandrd S.Moore的根，又名汉防己，是祛风解热镇痛药物，其有效成分为生物碱，主要是汉防己甲素和汉防已乙素。汉防己生物碱具有降低血压及镇痛的作用，临床上除用作治疗高血压、心绞痛、神经性疼痛、抗阿米巴原虫外，还将粉防已生物碱的碘甲基、或溴甲基化合物作为肌肉松弛剂应用，此外汉防已甲素在动物实验中有抗癌、扩冠和解热抗炎的作用。 一、实验目的 1．掌握生物碱的提取原理和实验操作方法； 2．掌握生物碱的基本鉴别法； 3．掌握生物碱结构与一般性质的关系； 4．熟悉用柱层析分离纯化生物碱单体的方法。 二、仪器与试药 （一）仪器 RE-52旋转蒸发仪 SHB-循环水式多用真空泵分液漏斗（250mL） HHS型电热恒温水浴锅玻璃仪器气流烘干器圆底烧瓶（1000mL） ZF-2型三用紫外仪电热恒温干燥箱移液管（10mL、5mL）蒸发皿 小玻璃蒸发器玻璃层析柱（2.0cmⅹ40cm） （二）试药 粉防己乙醇盐酸氯仿无水硫酸钠滤纸丙酮中性三氧化二铝 无水硫酸钠甲醇浓氨水硅胶G 凡士林脱脂棉漏斗 CMC-Na 改良碘化铋钾试液汉防已甲素和汉防已乙素对照品丙酮苦味酸 碘化汞钾试液雷氏铵盐试液 三、主要成分的结构和性质 汉防已根中总生物碱含量为1～3%，主要为汉防已甲素，含量约1～2%，汉防已乙素，含量约0.5%；轮环藤酚碱，含量为0.4%；以及其它数种微量生物碱。

轮环藤酚碱 四、实验原理： 1．提取：利用游离的伯、仲、叔胺生物碱具有亲脂性，能溶于乙醇的性质，用乙醇提取总生物碱； 2．分离：利用水溶性生物碱（季铵类生物碱）易溶于水而难溶于有机溶剂的性质进行二者的分离； 3．粉防己甲、乙素的分离：利用甲、乙素在结构上的不同（二者极性大小不同）用氧化铝柱层析来分离甲、乙素。 五、生物碱的提取分离 1．总生物碱的提取、亲脂性与亲水性生物碱的分离 95%乙醇300mL水浴回流提取1小时，过滤N OCH3 OR OCH3 O CH3O N CH3 CH3 H H R=CH3 R=H 汉防己甲素 汉防己乙素 O N OH OCH3 CH3O HO OH CH3

直接滴定法测食品中还原糖实验报告

1.目的 掌握直接滴定法测还原糖的原理、操作、条件及注意事项。 2.原理 样品经前处理提取还原糖，在加热条件下，直接滴定一定量的碱性酒石酸铜标准溶液，以次甲基蓝作指示剂，根据样液消耗体积，计算样品中还原糖量。3.试剂 3.1碱性酒石酸铜标准溶液（还原糖因数f/mg·10mL-1） 3.1.1甲液:称取23.10g硫酸铜（CuSO4·5H2O）及0.05g次甲基蓝，溶于水中 并稀释至100mL 3.1.2乙液: 称取115.33g酒石酸钾钠及33.30氢氧化钠，溶于水中，用水稀 释至1000mL，贮存于橡胶塞玻璃瓶中瓶中 3.2乙酸锌溶液：称取21.9g乙酸锌，加3mL冰乙酸，加水溶解并稀释至 100mL. 加水溶解并稀释至100mL 3.3亚铁氰化钾溶液（106g/L）：称取10.6g亚铁氰化钾，加水溶解并稀释 至100mL 3.4盐酸 3.5葡糖糖标准溶液：精密称取7.0000g经过98~100℃干燥至恒量的纯葡 萄糖加水溶解，并以水稀释至1000mL.此溶液每毫升相当于7mg葡糖 糖 4.仪器 碱式滴定管、电炉 5.样品 硬糖（m样=5.8002g） 6.操作 6.1样品处理 称取样品5.8002g置于小烧杯中，加40mL水，40℃微热溶解，冷却后加40mL水，调节PH至中性，加水定容至100mL，过滤后收集滤液即为样品溶液。 6.2标定碱性酒石酸铜溶液 吸取5.0mL碱性酒石酸铜甲液及5.0mL乙液，置150mL三角锥形瓶中，加水10mL，加入玻璃珠2粒，置于电炉上加热至沸（要求控制在2min内沸腾），然而趁热以每秒1滴的速度继续滴加葡萄糖标准溶液，直至溶液蓝色刚好褪去为终点，记录消耗葡萄糖的总体积。同时平行操作三份，取其平均值，计算每10mL（甲液乙液各5mL）碱性酒石酸铜溶液相当于葡萄糖的质

亚砷酸联合粉防己碱抗乳腺癌的作用机制研究

亚砷酸联合粉防己碱抗乳腺癌的作用机制研究研究目的和意义:近年来,中医药治疗乳腺癌在临床治疗和基础研究方面都取得了很好的进展,从中药中筛选抗肿瘤药物已成为国内外研究的热点。目前研究发现砷剂和粉防己碱(Tetrandrine,Tetra)均具有较好的抑癌作用,然而砷剂的毒性问题对其临床应用造成了一定的困扰,亟待解决。 本课题根据“防己杀雄黄毒”理论,将这两味药的有效成分砷和粉防己碱联合应用于乳腺癌细胞,从抑制乳腺癌细胞增殖的角度探讨相杀配伍是否具有协同增效以减毒的作用?并进一步从凋亡、自噬、坏死以及细胞周期阻滞等方面探索亚砷酸钠(NaAsO2)联合粉防己碱(Tetra)诱导乳腺癌细胞增殖抑制的相关分子机制,挖掘MAPK信号通路及活性氧(Reactive oxygen species,ROS)在联合用药诱导细胞死亡过程中的作用。同时,研究NaAs02联合Tetra能否诱导乳腺癌细胞分化,并探索其诱导分化的具体分子机制;以及联合用药对人外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞的影响。 以期为临床应用NaAs02联合Tetra治疗乳腺癌提供实验依据,对中药药对的推广应用具有重要的理论和实际意义。研究方法:(1)NaAsO2联合Tetra对乳腺癌细胞增殖、凋亡、自噬、坏死以及细胞周期阻滞的影响分别以梯度浓度NaAsO2、Tetra单用及联用干预乳腺癌MDA-MB-231及T47D细胞,以XTT法检测细胞增殖情况,以流式细胞术分析检测凋亡率、细胞周期,Western-Blot法检测自噬相关蛋白、线粒体凋亡通路相关蛋白、MAPK信号通路蛋白的表达。 分别检测自噬抑制剂Wortmannin、ROS抑制剂NAC及Trolox、MAPK各信号通路抑制剂对MDA-MB-231增殖抑制率、细胞凋亡率、坏死率、细胞周期以及自

实验一,3,5-二硝基水杨酸比色法-还原糖和总糖的测定

实验一还原糖和总糖的测定——3,5-二硝基水杨酸比色法 一、实验目的 掌握还原糖和总糖测定的基本原理，学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用。 二、实验原理 还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（还原糖以葡萄糖含量计）。 还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。 三、实验材料、主要仪器和试剂 1．实验材料 小麦面粉；广范pH试纸。 2．主要仪器 （1）大试管：2×20cm×14 （2）烧杯：100mL×3 （3）三角瓶：100mL×1 （4）容量瓶：100mL×3 （5）移液管：1mL×3；2mL×2；10mL×4 （6）吸耳球、玻璃棒 （7）恒温水浴锅 （8）漏斗、滤纸 （9）白瓷缸、电炉 （10）精度天平

（11）分光光度计 3．试剂（已制备） （1）1mg/mL葡萄糖标准液 准确称取90℃烘至恒重的分析纯葡萄糖100mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到100mL容量瓶中，用蒸馏水定容至100mL，混匀，4℃冰箱中保存备用。 （2）3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂 将6.3g 3,5-二硝基水杨酸（DNS）和2mol\L NaOH溶液262mL，加到500mL含有185g酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g重蒸酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000mL，贮于棕色瓶中，7-10天后才能使用。 （3）6mol/L HCl和6mol/L NaOH 。 四、操作步骤 1．制作葡萄糖标准曲线 取7支2×20cm大试管编号，按表1分别加入浓度为1mg/mL的葡萄糖标准液、蒸馏水和3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂，配成不同葡萄糖含量的反应液。 将各管摇匀，在沸水浴中准确加热5min，取出，用流动水冷却至室温，用蒸馏水补充至20mL （即各加入16.5mL蒸馏水），震荡混匀，在分光光度计上进行比色。调波长540nm，用0号管调零点，测出1~6号管的吸光度值。以吸光度值为纵坐标，葡萄糖含量（mg）为横坐标，在坐标纸上绘出标准曲线。 2．样品中还原糖和总糖的测定 （1）还原糖的提取 准确称取3.00g食用面粉，放入100mL烧杯中，先用少量蒸馏水调成糊状，然后加入50mL蒸馏水，搅匀，置于50℃恒温水浴中保温20min，使还原糖浸出。将浸出液用100mL容量瓶定容，混匀，过滤，滤液作为还原糖提取液，待测。 （2）总糖的水解和提取 准确称取1.00g食用面粉，放入100mL三角瓶中，加15mL蒸馏水及10mL 6mol/L HCl，置沸水浴中加热水解30min。待三角瓶中的水解液冷却后，用6mol/L NaOH中和（大约10mL左右），用广范pH试纸测试中和到pH=7，用蒸馏水定容在100mL容量瓶中，混匀。将定容后的水解液过滤，取滤液1 mL，移入另一9mL水的试管中，混匀，稀释10倍作为总糖待测液。 （3）显色和比色 取7支2×20cm大试管，编号，按表2所示分别加入待测液和显色剂，用7号管进行空白调零。加热、定容和比色等其余操作与制作标准曲线相同。

防己中药材详细说明书

防己 药材名称： 防己 拼音名称： FANGJI 别名： 土防己、青藤根、青藤香、钻骨龙、金锁匙。 科属： 为防己科植物粉防己或马兜铃科植物广防己的干燥根。前者药材称为汉防己，后者称木防己。 产地： 浙江、安徽、江西、福建、广东、广西等地。生于山野丘陵地、草丛或矮林 边缘。 性味： [性味、归经]苦、辛，寒。入膀胱、肺经 功效： 祛风湿，止痛，利水消肿。 中成药： 共有72种中成药使用防己:复方罗布麻片复方罗布麻片Ⅱ复方罗布麻片I汉 防己甲素片复方罗布麻片(Ⅱ)汉防己甲素注射液萘哌地尔分散片复方罗布麻片Ⅰ醒脑再造胶囊风痛安胶囊等。 应用：

1、用于水肿，小便不利。防己苦寒降泄，能利水消肿，使内蕴之水湿下行，为水湿所致水肿病的常用药。治水肿不能平卧，脉证俱实者，配甘遂、葶苈子等，如《圣济总录》防己九；若脾失运化，水溢皮肤，致患皮水，四肢浮肿， 水气在皮肤中，四肢聂聂动者，配黄芪、桂枝、茯苓等，以健脾益气，温阳利水，如《金匮要略》防己茯苓汤；若因卫气不固，风水外客，致患风水，脉浮 身重，汗出恶风者，配黄芪、白术、甘草等，以益气固表，利水消肿，如《金 匮要略》防己黄芪汤；若水饮内结，肠间有水气，腹胀满，大便秘结，小便不利，口舌干燥，喘咳者，配椒目、葶苈子、大黄等，以攻逐水饮，利水通便， 如《金匮要略》己椒苈黄九。本品治湿热阻滞经络，脚气肿痛，常与黄柏、木瓜、薏苡仁等配伍同用，有清利下焦湿热之功。 2、用于风湿痹痛。防己辛散苦泄，故能祛风除湿，通络止痛。风寒湿痹，历节疼痛者，配乌头、桂心等，如《千金要方》防己汤；若风湿热痹，关节红肿 疼痛者，每与薏苡仁、蚕砂、栀子等配伍，以清热祛风除湿，如《温病条辨》 宣痹汤。其清湿热之功，亦用治湿热所致的疥癣疮肿，可与金银花、地肤子等 配伍。 此外，防己又有降血压作用，高血压病属于肝阳上亢者，配决明子、茺蔚子 等同煎服。 用法用量： 内服：煎汤，4.5～9G；或入丸、散 注意事项： 该品苦寒较甚，不宜大量使用，以免损伤胃气。食欲不振及阴虚无湿热者忌用。 采收加工： 秋季采挖，修去芦梢，洗净或刮去栓皮，切成长段，粗根剖为2～4瓣，晒干。 炮制工艺： 1、防已片：除去杂质，稍浸，洗净，润透，切厚片，干燥。 2、炒防己：取防己片，置锅内用文火加热，炒至微焦表面微黄色，取出放凉。现代研究：

实验三 粉防己生物碱的提取分离与鉴定

实验三粉防己生物碱的提取分离与鉴定 1 实验目的 1.1生物碱的一般提取方法。 1.2 用低压柱层析分离，纯化单体的方法及薄层层析鉴定 2 实验原理 2.1 生物碱大都能溶于氯仿、甲醇、乙醇等有机溶剂，除季铵碱和一些分子量较低或含极性基团较多的生物碱外，一般均不溶或难溶于水，而生物碱与酸结合成盐时则易溶于水和醇。基于这种特性，可用不同的溶剂将生物碱从中药中提取。常用的提取方法包括有溶剂提取法、直接提取法（水溶性生物碱、季铵碱）、离子交换树脂法（如麦角新碱类、东莨菪碱、咖啡因等）和沉淀法。 2.2 一种植物中往往含有几种或几十种生物碱。因此，提取出来的总生物碱还需进一步分离，去除杂质、排除干扰物，保证分析结果的准确性。一般纯化的方法可析出结晶的生物碱用重结晶法；挥发性生物碱可用水蒸气蒸馏法；易升华的生物碱用升华法提取得到单体。由不同沸点组成的液体生物碱总碱，往往可通过常压或减压分馏分离。如毒芹中的毒芹碱和羟基毒芹碱，石榴皮中的伪石榴皮碱、异石榴皮碱和甲基异石榴皮碱等都可通过减压分馏法分离出来。许多生物碱的盐比游离碱更易于结晶。因此，可利用其在各种溶剂中的不同溶解度进行分离，之后再转变成游离碱。 3 实验材料 材料：汉防己 4实验步骤 4.1 生物碱的提取分离 4.1.1 总生物碱的提取和亲脂性与亲水性生物碱的分离 汉防己粗粉100g 0.5%H2S O4液渗漉（注一） 倍量V/V） pH9~10，静置，抽滤 泥黄色沉淀碱水液 （水溶性季铵碱及水溶性杂质） 将沉淀与静砂拌匀（注二） 80℃烘干，置索氏提取器中用乙醚（约180m l）提取至 提尽生物碱（注三） 回收乙醚（注四） 乙醚提取物 用95%乙醇40~60m l回流热溶后 倾入500m l水中，加30gN aC l盐析 水溶上加热至凝结，静置 抽滤 白色沉淀（亲脂性叔铵总碱，以汉防己甲素、乙素为主）

065 防己中粉防己甲素和乙素的提取分离与鉴定

防己中粉防己甲素和乙素的提取分离与鉴定[适用对象]环境科学、药学、药物制剂专业 [实验学时] 24学时 一、实验目的 学习生物碱类成分的一般提取分离法，通过实验要求： （1）掌握生物碱的溶剂提取法和粉防己碱与防己诺林碱的分离方法。 （2）熟悉生物碱的一般理化性质。 （3）熟悉粉防己碱和防己诺林碱的检识方法。 （4）掌握回流法、萃取法、结晶法等的基本操作过程及注意事项。 二、实验原理 本实验是根据粉防已碱和防已诺林碱游离时难溶于水，易溶于氯仿，成盐后易溶于水，难溶于氯仿的性质提取得到总生物碱。再利用两者在冷苯中的溶解度不同，使之相互分离。 三、仪器设备 （单口，双口）园底烧瓶，冷凝管，铁架台，分液漏斗，三角烧瓶，滤纸，微量抽滤器，布氏漏斗，层析槽，毛细管等。 四、相关知识点 防已为防已科植物粉防已Stephania tetrandra S.Moore的干燥根。总生物碱含量约为1.5~2.3%，主要为粉防已碱和防已诺林碱。 1、粉防已碱（tetrandrine），又称汉防已甲素，分子式C38 H42 N2 O6，在防已中的含量约为1%，为无色针状结晶（乙醚），mp.217~218℃。易溶于甲醇、乙醇、丙酮、氯仿，溶于乙醚、苯等有机溶剂，几乎不

溶于水和石油醚。 N C H 3 Me O N C H 3O R O Me O Me O O 2、防已诺林碱（fangchinoline），又称汉防已乙素，分子式C37 H40 N2 O6，在防已中的含量约为0.5%，六面体粒状结晶（丙酮），mp.237~238℃。溶解度与粉防已碱相似，但因较粉防已碱多一个酚羟基，故极性较粉防已碱稍大，因此在冷苯中的溶解度小于粉防已碱，可利用此性质相互分离。 五、实验步骤 （一）总生物碱的提取 称取粉防已粗粉150克，置1000 ml圆底烧瓶中，加95%乙醇以浸透并盖没生药为度（约需400 ml）。水浴加热回流1小时（加热期间振摇数次），滤出提取液，药渣再加95%乙醇以浸没为度（约需300 ml），如上法再热提一次，滤出提取液，最后将瓶内药渣倒在布氏漏斗上抽滤压干，药渣弃去。合并两次乙醇提取液，放冷后如有絮状物析出，再抽滤一次，澄清液回收乙醇，浓缩至糖浆状无乙醇味为止，得乙醇总提取物。 （二）生物碱的分离 1、亲脂性生物碱和亲水性生物碱的分离 糖浆状总提取物移至大三角烧瓶中，逐渐加入1 %盐酸稀释，充

实验五食品中还原糖的测定

实验八食品(炼乳)中还原糖含量的测定

一、实验目的 1、了解食品中还原糖的含量； 2、学习直接滴定法测定还原糖的原理，并掌握其定糖方法。 3、通过对实验结果的分析，了解影响测定准确性的因素。 二、原理， 食品中的还原糖主要指具有还原性的葡萄糖、果糖、戊糖、乳糖、麦芽糖等，还原糖之所以具有还原性，是由于其分子中含有游离醛基(-CHO)或酮基(>C=O)。 测定还原糖的经典化学方法都是以其能被多种试剂氧化为基础的。在这些方法中，以各种根据碱性酒石酸铜溶液氧化作用改进方法的应用最广。本实验就是采用使用碱性酒石酸铜作为氧化剂的直接滴定法。 碱性酒石酸铜溶液A、B二液等体积混合时生成的天蓝色Cu(OH)2沉淀后，立即与酒石酸钾钠起反应生成深蓝色的酒石酸钾钠铜络合物。此络合物与还原糖共热时，二价铜即被还原糖还原为一价的红色氧化亚铜沉淀，氧化亚铜沉淀与亚铁氰化钾反应，生成可溶性化合物，达到终点时，稍微过量的还原糖将蓝色的次甲基蓝还原成无色，溶液呈淡黄色而指示滴定终点，根据还原糖标准溶液标定碱性酒石酸铜溶液相当于还原糖的质量，以及测定样品液所消耗的体积，计算还原糖含量。反应式如下： CuSO4＋2NaOH→Cu(OH)2↓＋Na2SO4 COOK COOK ││ CHOH CHO │＋Cu(OH)2→│Cu＋2H2O CHOH CHO ││ COONa COONa COOK COOK │CHO COOH │ CHO ││CHOH │Cu＋(CHOH)4 →(CHOH)4 ＋│＋Cu2O↓ CHO ││CHOH │CH2OH CH2OH │ COONa COONa 三、仪器与试剂 1、仪器 (1)容量瓶100 ml、250 ml (2)三角瓶250 ml (3)碱式滴定管50 ml或25 ml (4)烧杯100m1 (5)吸管5 ml、50 ml (6)分析天平 (7)电炉1KW可调 (8)恒温水浴锅 2、试剂 (1) 碱性酒石酸铜溶液A液：称取15.00 g硫酸铜(CuSO4·5H2O)(AR)及0.05g次甲基蓝，溶于蒸馏水中并稀释至1000 ml。

天然药物化学第三章生物碱

第十章生物碱 【习题】 （一）选择题 [1-220] A型题[1-58] 1.生物碱不具有的特点是 A.分子中含N原子 B. N原子多在环内 C. 具有碱性 D. 分子中多有苯环 E.显著而特殊的生物活性 2.具有莨菪烷母核的生物碱是 A. 甲基麻黄碱 B. 小檗碱 C. 阿托品 D. 氧化苦参碱 E. 乌头碱 3.属于异喹啉生物碱的是 A. 东莨菪碱 B. 苦参碱 C. 乌头碱 D. 小檗碱 E. 麻黄碱 4.在常温下呈液体的生物碱是 A. 槟榔碱 B. 麻黄碱 C. 苦参碱 D. 乌头碱 E. 莨菪碱 5. 具有挥发性的生物碱是 A. 吗啡碱 B. 小檗碱 C. 苦参碱 D. 麻黄碱 E. 乌头碱 6. 具有升华性的生物碱是 A. 烟碱 B. 咖啡因 C. 小檗胺 D. 益母草碱 E. 氧化苦参碱 7. 生物碱的味多为 A. 咸 B. 辣 C. 苦 D. 甜 E. 酸

8. 具有颜色的生物碱是 A. 小檗碱D. 莨菪碱C. 乌头碱 D. 苦参碱 E. 麻黄碱 9. 无旋光性的生物碱为 A. 伪麻黄碱 B. 小檗碱 C. 烟碱 D. 乌头碱 E. 长春新碱 10. 表示生物碱碱性的方法常用 A. pkb B. Kb C. pH D. pka E. Ka 11. 生物碱碱性最强的是 A. 伯胺生物碱 B. 叔胺生物碱 C. 仲胺生物碱 D. 季铵生物碱 E. 酰胺生物碱 12.水溶性生物碱主要指 A. 伯胺生物碱 B. 仲胺生物碱 C. 叔胺生物碱 D. 两性生物碱 E. 季铵生物碱 13. 溶解脂溶性生物碱的最好溶剂是 A. 乙醚 B. 甲醇 C.乙醇 D. 氯仿 E. 水 14.生物碱沉淀反应呈桔红色的是 A. 碘化汞钾试剂 B. 碘化铋钾试剂 C.饱和苦味酸试剂 D. 硅钨酸试剂 E. 碘-碘化钾试剂 15. 生物碱沉淀试剂反应的介质通常是 A. 酸性水溶液 B. 碱性水溶液 C. 中性水溶液 D. 盐水溶液 E. 醇水溶液 16.水溶性生物碱分离的常用方法是

实验六检测还原糖

实验六检测生物组织中还原糖的实验 一、教学目标 1、初步学会生物组织中还原糖的鉴定方法，领悟并能描述该实验的实验原理。 2、比较不同实验材料所做的实验结果，探索该实验的理想实验材料。 3、培养学生的动手操作能力，培养学生树立实事求是、认真严肃的的科学态度。 二、学情分析 学生在《第一节 - 细胞中的元素和化合物》的学习中，学生对糖的概念有了明确的认识，对于生物组织中哪些含糖类型，怎么鉴别还原糖还不清楚。通过本节实验教学让学生对颜色反应这一类验证实验有一个总体把握，再则让学生体会出生物学上一些典型的实验现象是要选择实验材料是关键，以及实验中要注意每一步实验方法。 三、实验原理 生物组织中普遍存在的还原糖种类较多，常见的有葡萄糖、果糖、麦芽糖。它们的分子内都含有还原性基团（游离醛基或游离酮基），因此叫做还原糖。蔗糖的分子内没有游离的半缩醛羟基，因此叫做非还原性糖，不具有还原性。本实验中，用斐林试剂只能检验生物组织中还原糖存在与否，而不能鉴定可溶性的非还原性糖。 斐林试剂由质量浓度为0.1 g／mL的氢氧化钠溶液和质量浓度为0.05g／mL的硫酸铜溶液配制而成，二者混合后，立即生成淡蓝色的Cu(OH)2沉淀。Cu(OH)2与加入的葡萄糖在加热的条件下，能够生成砖红色的Cu 2 O沉淀，而葡萄糖本身则氧化成葡萄糖酸。其反应式如下： 2NaOH+CuSO 4 Na 2 SO 4 +Cu(OH) 2 (淡蓝色沉淀) -CHO+2Cu(OH) 2-COOH+Cu 2 O(砖红色沉淀)+2H 2 O 用斐林试剂鉴定还原糖时，溶液的颜色变化过程为浅蓝色棕色砖红色(沉淀)。 本实验能利用还原糖能与斐林试剂发生颜色反应的特性，通过一系列实验检测生物组织中是否含有还原糖。

重要化学实验思考题答案

中药化学实验思考题答案 实验一：防己中生物碱的提取、分离与鉴定 1：粉防己碱和防己诺林碱在结构与性质上有何异同点？实验过程中，应怎样利用它么的共性及个性进行提取分离？请设计方案。 注（汉防己甲素就是粉防己碱）（汉防己乙素是防己诺林碱） 答：结构上粉防己碱的R基为甲基，防己诺林碱的的R基为氢，两者结构相似但防己诺林碱中有一个酚羟基，所以极性比粉防己碱稍高，在笨中的溶解度小于粉防己碱而在乙醇中又大于粉防己碱。藉此可以根据不同溶剂重结晶时其晶形和熔点的不同相互分离。分离方案（基本要点是在丙酮为溶剂粉防己碱是细针状结晶而防己诺林碱是六面粒状结晶，其mp值分别为217℃—218℃、134℃）：取结晶状混合物碱称重，置于50ml三角瓶中，加5倍量苯冷浸，时时振摇，冷浸半个小时后，过滤分开苯溶液和苯不溶液。苯溶液回收苯至尽，残留物以丙酮结晶，得细针状结晶，为粉防己碱；苯不溶物待挥发去残留的苯后，也用丙酮重结晶可得粒状结晶，为防己诺林碱。 2分离水溶性和脂溶性生物碱的常用方法有哪些？ 答：①沉淀反应（雷氏铵盐试剂） ②溶剂法 3从防己中分离脂溶性、水溶性碱，酚性、非酚性碱的依据是什么？ 答：①分离脂溶性和水溶性碱的依据是脂溶性碱溶于一般能溶于有机溶剂，特别易溶于氯仿而水溶性碱难容与亲脂性溶剂（包括氯仿）本实验就是用氯仿作为萃取剂来分离脂溶性和水溶性碱的 ②分离酚性和非酚性碱的依据是酚性碱溶于氢氧化钠溶液而非酚性碱不溶于氢氧化钠。 4、萃取过程中怎样防止和消除乳化？ 答：在萃取时，应注意不可用力振摇，应将分液漏斗轻轻旋转摇动，适当延长振摇时间，可避免乳化现象；倘若发生严重乳化现象难以分层时可用以下方法解决：将难以分层的乳化液置于三角烧瓶中，取定性滤纸少许揉成蓬松的团块，放入乳化液中，用玻璃棒搅拌片刻后，乳化液中的粘稠物质被吸附在滤纸团的周围，从而消弱和破坏乳化液的稳定性，克服了乳化现象，因而得到澄清的溶液。 5、生物碱的沉淀反应应在什么条件下进行，为什么？ 答：生物碱的沉淀反应应在酸水或酸性烯醇中进行，因为生物碱和生物碱沉淀剂均可溶于其中使反应易于进行且反应结果易于判断。

生物碱提取和分离方法的研究新进展之令狐文艳创作

生物碱提取和分离方法的研究新进展 令狐文艳 摘要: 生物碱是一类具有生理活性的物质，是许多药用植物的重要有效成分之一。如何从天然产物中提取与分离生物碱是生物碱制备的关键环节。它吸引了人们的广泛关注，其提取与分离方法也不断地改进和发展。本文综述了近年来，不同的提取和分离方法在生物碱制备中的应用和进展。随着众对生物碱药用价值的认识提高，生物碱的撮与分离方法将更加高效、迅速、完善。 关键词:生物碱；提取；分离；研究；进展 1.前言 生物碱是自然界中广泛存在的一大类碱性含氮化合物，具有广泛的生理功能，是许多药用植物的有效成分 ,目前运用于临床的生物碱药品已达80 种之多 ,相当多的生物碱具有抗肿瘤活性、低毒性和成本低之特性 ,因而引起了人们的广泛关注[1 ]。与此同时 ,人们对生物碱的提取和分离方法研究也在不断地深入和加强。随着各类生物碱的市场需求量的增加 ,经济效益的提高 ,提取分离生物碱的方法也在不断改进和提高。 2.生物碱提取方法的研究进展 绝大多数生物碱是利用溶剂提取法进行提取。生物碱及其盐类的溶解度与生物碱分子中氮原子的存在形式、极

性基团的有无及数目、溶剂种类都有密切关系。极性强的生物碱亲水性较强, 易溶于极性溶剂；弱极性生物碱亲脂性较强,易溶于弱极性溶剂。游离的生物碱大多亲脂性较强, 而生物碱盐一般亲水性较强。按极性强弱可将生物碱提取溶剂分为极性溶剂、半极性溶剂和非极性溶剂[2]。 2. 1 按所用溶剂不同可分为以下几种方法 2. 1. 1 水提取法(以水作溶剂) 直接以水作为溶剂 ,采用最佳的提取工艺来提取生物碱。此法操作简便 ,成本较低 ,但提取次数多 ,水用量大。如蒙药忠论— 5 汤提取[3 ]就是一个很好的例子。 2. 1. 2 酸性水溶液提取法 对于那些碱性较弱不能直接溶解于水的生物碱提取 ,就可采用偏酸性的水溶液 ,使生物碱与酸作用生成盐而得到提取。 2. 1. 3 碱性水溶液提取法 对于那些化学结构非常独特、化学性质与一般生物碱不同且在酸性或中性条件下不稳定的生物碱来说 ,可以采用此法。而原有的乙醇作为溶剂渗漉提取法 ,不仅存在成本高 ,而且存在防火等级高、提取时间长、能耗大等诸多问题 ,远不如使用稀NaOH溶液好。 2. 1. 4 有机溶剂提取法 (1) 乙醇提取法在生物碱的提取中应用较为普遍 ,对于游离生物碱及其盐类一般采用乙醇提取法。

实验一还原糖的鉴定教案

实验一、生物组织中还原糖的鉴定[教案] 一、课型：新授课 二、教学目标： 1、知识与技能目标 （1）掌握还原糖的鉴定方法。 （2）体验实验操作过程中的操作问题，讨论实验指导的关键。（3）培养学生分析、解决问题的能力，坚持实事求是的科学态度。 2、过程与方法 （1）通过简单演示实验，创建情景，引入新课题。 （2）通过PPT、探究学习和讨论等方法来获得信息。 （3）通过讲解、演示、PPT展示、课堂练习以及课后习题等，让学生加深对生物组织中还原糖的鉴定的理解。 3、情感态度与价值观 （1）通过学生实验和演示实验，进一步培养学生动手、观察、分析的实验能力。 （2）能将所学的知识与生活、环境、社会等实际问题相联系，并运用到生活中去，发展学习的兴趣 三、教学重、难点 （1）掌握还原糖的鉴定方法。 （2）通过实验的操作和设计培养学生的动手能力，掌握验证实验及探索实验的设计技巧，从而培养创新思维能力。

四、教具准备： 1、PPT课件。 2、实验材料：（1）实验仪器：解剖刀、研钵、漏斗、纱布、漏斗 架、烧杯、试管、试管架、酒精灯、石棉网、三脚架、试管、胶头滴管、量筒。 （2）实验材料：斐林试剂A液：0.1g/ml的NaOH 溶液、斐林试剂B液：0.05g/ml的CuSO4溶液SiO2、H2O、苹果、土豆、菠菜。 五、课时安排：1课时。 六、教学方法： 讲授法、讨论交流、练习法、问答法、演示法、多媒体辅助教学法等。 七、教学过程： 情境导入： 【老师】同学们，上课了。今天老师给大家带来了一个小魔术。 【展示】一个装有刚配好的斐林试剂的试管。 【老师】这是一种蓝色的溶液。 【展示】一个装有苹果汁的试管。 【设问】这是刚榨好的苹果汁，猜猜我要干什么？很简单，我要把苹果汁倒入蓝色溶液的试管中，那大家猜猜会有什么变化呢？ 【学生】思考回答 【老师】抽问

实验六 粉防己中粉防己碱和防己诺林碱的精制及检识

实验六粉防己中粉防己碱和防己诺林碱的精制及检识（2）【实验目的】 1、能够进行粉防己碱和防己诺林碱的分离和精制。 2、学会用化学法检识生物碱。 【实验原理】 本实验是根据粉防己生物碱可溶于一般有机溶剂的性质，先用乙醇提取得总碱，再利用粉防己碱、防己诺林碱及轮环藤酚碱的溶解性和极性差异进行分离。将总生物碱溶于稀酸水，碱化后用苯萃取出粉防己碱，再用三氯甲烷萃取防己诺林碱，轮环藤酚碱为水溶性生物碱，仍留在碱水层；或者将稀酸水碱化后用三氯甲烷萃取出粉防己碱和防己诺林碱。 【实验材料】 设备: 分液漏斗、长滴管、烧杯、25ml小锥形瓶、试管、 药品: 粉防己粗提物、1%氢氧化钠溶液、无水硫酸钠、丙酮、苯、10％盐酸、碘化铋钾试剂、碘化汞钾试剂、硅钨酸试剂、苦味酸试剂 【实验步骤】 1、脂溶性叔胺碱中酚性和非酚性生物碱的分离：三氯甲烷液置于1000ml分液漏斗中，先以1%氢氧化钠溶液洗两次后，再用水洗2～3次，碱水液和水洗液合并，为含酚性生物碱部分。三氯甲烷液用无水硫酸钠脱水，回收三氯甲烷至干，抽松，立即加入10～15ml丙酮，充分溶解抽松物，待完全溶解后用长滴管吸取瓶内液体，转移入25ml小锥形瓶中．残留的不溶物质可再用丙酮2～3ml清洗两次，洗涤液与丙酮溶液合并，再于此丙酮液中滴加适量蒸馏水，使溶液呈现微浊状态，于冰箱中放置析晶，待结晶完全之后过滤收集结晶，并用少许含水丙酮洗去结晶表面粘附的母液，自然晾干即得粗脂溶性非酚性碱（含粉防己碱和防己诺林碱的混合物）。 2、粉防己碱和防己诺林碱的分离精制：取上述粗脂溶性非酚性碱置于25ml锥形瓶中，加5倍量的冷苯，密闭冷浸，时时振摇，l小时后．过滤，以少量苯洗涤苯不溶部分，合并苯溶液，回收苯至无苯的臭味，残留物以丙酮重结晶，得针状结晶，为

实验一 总糖和还原糖的测定

实验一总糖和还原糖的测定（3，5-二硝基水杨酸法） 171850044钱诗晨 一、实验目的 掌握还原糖和总糖的测定原理，学习用3，5-二硝基水杨酸法测定还原糖的方法。 二、实验原理 单糖和某些寡糖含有游离的醛基或酮基，有还原性，属于还原糖；而多糖和蔗糖等属于非还原性糖。利用多糖能被酸水解为单糖的性质可以通过测定水解后的单糖含量对总糖进行测定。 还原糖在碱性条件下被氧化成糖酸及其他产物，3，5-二硝基水杨酸（DNS）则被还原为红棕色的3-氨基-5-硝基水杨酸。在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈橘红色，在540nm处一定浓度范围内还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中的含糖量和总糖的含量。 三、实验器材 1.面粉 2.试管 3.吸管 4.水浴锅 5.电炉 6.紫外可见分光光度计 7.PH试纸 8.容量瓶 9.量筒、研体、三角烧瓶、玻璃漏斗 10.电子分析天平 面粉里含多糖淀粉，遇碘变蓝 四、实验试剂 1.标准葡萄糖溶液（1.0mg/ml）：准确称取干燥恒重的葡萄糖100mg，溶于蒸馏水并定容至100ml，混匀，4℃冰箱中保存备用。 2.3，5-二硝基水杨酸（DNS）试剂:将6.3gDNS和262ml2mol/L NaOH溶液，加到500ml含有185g酒石酸甲钠的热水溶液中，再加5g结晶酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000ml贮于棕色瓶中备用。 3.6mol/L HCl:取250ml浓HCl(35%~38%),用蒸馏水稀释到500ml。 4.6mol/L NaOH：称取24g NaOH溶于蒸馏水并稀释至100ml。 5.碘—碘化钾溶液：称取5g碘，10g碘化钾溶于100ml蒸馏水中。 五、实验操作 1.葡萄糖标准溶液曲线的制作 取干净试管6支，按表7进行操作。以吸光度为纵坐标，各标准液浓度（mg/ml）为横坐标作图得标准曲线

实验七-食品中还原糖的测定(综合性)

实验七-食品中还原糖的测定(综合性)

实验七面粉中还原糖的测定（综合性实验） 课程：食品检验与分析班级：2011级食品1、2班地点：A13-0405 指导教师：蔺芳 （一）直接滴定法 一、实验原理 还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。还 原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是 还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，如乳糖和 麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。 样品经除去蛋白质后，在加热条件下，以次 甲基蓝作为指示剂，用样液直接滴定标定过的碱 性酒石酸铜溶液，达到终点时，稍过量的还原糖 把蓝色的次甲基蓝指示剂还原为无色，而显出氧 化亚铜的鲜红色。根据样品液消耗体积，计算出 样品中还原糖的含量。各步反应式（以葡萄糖为例）如下： (1) Cu 2SO 4 ＋2NaOH = 2Cu(OH) 2 ↓＋Na 2 SO 4 (2) Cu(OH) 2＋KNaC 4 H 4 O 6 = KNaC 4 H 2 O 6 Cu ＋2H 2 O (3) C 6H 12 O 6 ＋6KNaC 4 H 2 O 6 Cu＋6H 2 O = C 6 H 12 O 7 ＋ 6KNaC 4H 4 O 6 ＋3Cu 2 O↓＋H 2 CO 3 从上述反应式可知，1mol葡萄糖可以将

6mol Cu2＋还原为Cu+。但实际上此反应为非定量反应，即不能根据反应式直接计算出还原糖含量。因此在测定过程中要严格遵守所规定的操作条件，如热源强度(电炉功率)、锥形瓶规格、加热时间、滴定速度等。 二、适用范围及特点 本法又称快速法，特点是试剂用量少，操作和计算都比较简便、快速，滴定终点明显。适用于各类食品中还原糖的测定。但测定酱油、深色果汁等样品时因色素干扰，滴定终点常常模糊不清，影响准确性。本法是国家标准分析方法。三、试剂及玻皿配置 仪器 1. 200mL 烧杯 2 个 2. 100mL、250mL、1000mL 容量瓶各 1 个 3. 5.0mL 移液管 4 支 4. 25mL、 100mL 量筒各 1 个 5. 250mL 锥形瓶 4 个 6. 800W 电炉 1 个 7. 恒温水浴锅、干燥箱 8. 碱式滴定装置 1 套 9. 玻璃珠（适量） 10. 滤纸、漏斗及过滤装置 11. 分析天平 试剂 1. 碱性酒石酸铜甲液：称取 15g硫酸铜(Cu2SO4·5H2O )及 0.05g次甲基蓝，溶于水中

精选-食品分析实验水果硬糖中还原糖量的测定

实验六水果硬糖中还原糖量的测定 一、实验内容 用直接滴定法测定水果硬糖中还原糖的含量。 二、实验目的与要求 1、进一步巩固和规范氧化还原滴定操作。 2、理解还原糖测定原理及操作要点。 3、掌握水果硬糖中还原糖测定的操作技能。 4、学会控制反应条件，掌握提高还原糖测定精密度的方法。 三、实验原理 样品经除去蛋白质后，在加热条件下，直接滴定标定过的碱性酒石酸铜溶液，还原糖将二价铜还原为氧化亚铜。以次甲基蓝作指示剂，在终点稍过量的还原糖将蓝色的氧化型次甲基蓝还原为无色的还原型次甲基蓝。最后根据样品液消耗体积，计算还原糖量（用还原糖标准溶液标定碱性酒石酸铜溶液）。 四、试剂 （1）碱性酒石酸铜甲液：称取15.00 g硫酸铜（CuSO 4 ·5H 2 O）及0.05 g 次甲基蓝，溶于水中并稀释至1000 mL。 （2）碱性酒石酸铜乙液：称取50.00 g酒石酸钾钠及75 g氢氧化钠，溶于水中，再加入4g亚铁氰化钾，完全溶解后，用水稀释至1000 mL贮存于橡胶塞玻璃瓶中。 （3）葡萄糖标准溶液：精确称取1.0000 g经过（99±1）℃干燥至恒重的纯葡萄糖，加水溶解后加入5 mL盐酸，并以水稀释至1000 mL。此溶液每毫升相当于1.0mg葡萄糖。 五、仪器 酸式滴定管，可调式电炉（带石棉板）、电子天平（1mg）、150mL锥形瓶、250 mL容量瓶、玻璃珠 六、操作方法 1、样品处理：准确称取（准确至0.01g）样品（提前研成粉末）置于250 mL 容量瓶中加水溶解定容，摇匀，即为样液。 2、标定碱性酒石酸铜溶液

吸取5.0 mL碱性酒石酸铜甲液及5.0 mL乙液，置于150 mL锥形瓶中，加水10 mL，加入玻璃珠2粒，从滴定管滴加约9 mL葡萄糖标准溶液，控制在2 min 内加热至沸，趁沸以每1滴/2s 的速度继续滴加葡萄糖标准溶液或其他还原糖标准溶液，直至溶液蓝色刚好褪去为终点，记录消耗葡萄糖或其他还原糖标准溶液的总体积，同时平行操作3份，取其平均值，计算每10 mL（甲、乙液各5 mL）碱性酒石酸铜溶液相当于葡萄糖的质量或其他还原糖的质量（mg）。 ｍ 1＝Ｖ 1 ×ｍ 2 式中：ｍ 1 －10 mL碱性酒石酸铜溶液（甲、乙液各5 mL）相当于还原糖（以葡萄糖计）的质量，mg； Ｖ 1 －平均消耗还原糖标准溶液的体积，mL ｍ 2 －1mL还原糖标准溶液相当于还原糖的质量，1mg 3、样品液预测 吸取5.0mL碱性酒石酸铜甲液及5.0mL乙液，置于150mL锥形瓶中，加水10mL，加入玻璃珠2粒，控制在2 min内加热至沸，趁沸以先快后慢的速度，从滴定管中滴加样品溶液，并保持溶液沸腾状态，待溶液颜色变浅时，以每1滴/2s 的速度滴定，直至溶液蓝色刚好褪去为终点，记录样液消耗体积（样品中还原糖浓度根据预测加以调节，以0.1g/100g为宜，即控制样液消耗体积在10mL左右，否则误差大）。 4、样品溶液的测定 吸取5.0 mL碱性酒石酸铜甲液及5.0 mL乙液，置于150 mL锥形瓶中，加水10 mL，加入玻璃珠2粒，从滴定管加比预测体积少1mL的样品溶液，控制在2 min内加热至沸，准确沸腾30s，趁沸继续以每1滴/2s的速度滴定，直至蓝色刚好褪去为终点，记录样液消耗体积。同法平行操作3次，求平均消耗体积。 七、结果处理 1、数据记录