D530A-100119[1]低分子量蛋白Marker

彩虹130广谱蛋白marker说明书

彩虹130广谱蛋白marker说明书 货号：PR1950 规格：20T(100μL)/50T(250μL)/100T(250μL×2)/500T(250μL×10) 保存：-20℃保存，有效期至少2年。 产品特点： ●三色预染，颜色鲜亮，条带整齐，便于观察。 ●用量少，节约成本，仅5ul即可完美呈现（1.5mm，10孔梳）。 ●广谱多带，一支即可满足多种实验需求。 产品简介： 本产品包含9种彩色预染的已知分子量标准蛋白，分子量范围为15kD-130kD，每种蛋白含量约为 0.2-0.4mg/ml。预染marker可以用于直接观察蛋白质电泳状况以及清晰地判断Western Blot的转膜效果。经SDS-PAGE凝胶电泳或转移到PVDF或NC膜上可得到清晰的9条彩色蛋白条带，其中70kD条带为红色，25kD条带为绿色，其余条带为蓝色。 使用说明： 1.本产品是即用型液体，可直接上样电泳。上样前无需加热，稀释或添加还原剂。 2.上样5ul，SDS-PAGE电泳过程及转膜后可看见清晰的彩虹条带。 3.建议分离胶浓度为15%。 电泳示意图说明： 第1页，共2页

第2页，共2 页注意事项： 1.本产品含有较高浓度甘油，常规-20℃保存为液体状态，可直接使用。若冰箱温度不稳，导致结冰，可 适当分装后置于4℃保存，至少稳定6个月。 2.Marker分离效果与PAGE胶浓度相关，若分离胶浓度低于15%，25kD以下条带不易分离，但不影响绿色 （25KD）及以上条带。如果目的条带小于25KD，建议分离胶浓度大于或等于15%。 3.转膜效果与转膜时间有关，需根据客户目的条带大小而定，如果转膜后较大分子量条带有部分未转膜 成功，属于正常现象。

彩虹245广谱蛋白marker使用说明

彩虹245广谱蛋白marker使用说明 货号：PR1920 规格：20T(100μ1)/50T(250μ1)/100T(250μ1×2)/500T(250μ1×10) 保存：-20℃保存，有效期至少2年。 产品特点： ●三色预染，颜色鲜亮，条带整齐，便于观察。 ●稳定性能突出，经检测4℃放置两年无明显降解。 ●用量少，节约成本，仅5ul即可完美呈现（1.5mm，10孔梳）。 ●广谱多带，一支即可满足多种实验需求。 产品简介： 彩虹245广谱蛋白marker包含12种彩色预染的已知分子量标准蛋白，分子量范围为 11kD-245kD，每种蛋白含量约为0.2-0.4mg/ml。预染marker可以用于直接观察蛋白质电泳状况以及清晰地判断Western Blot的转膜效果。经SDS-PAGE凝胶电泳或转移到PVDF或NC膜上可得到清晰的12条彩色蛋白条带，其中25kD为绿色条带，75kD为红色条带，其余10条是蓝色条带。 使用说明： 1.彩虹245广谱蛋白marker是即用型液体，可直接上样电泳。上样前无需加热，稀释或添加还原剂。 2.上样5ul，SDS-PAGE电泳过程及转膜后可看见清晰的彩虹条带。 3.建议分离胶浓度为15%。 电泳示意图说明：

彩虹245广谱蛋白marker经15%浓度的SDS-PAGE凝胶电泳后，转移至PVDF膜上。 注意事项： 1，本产品含有较高浓度甘油，常规-20℃保存为液体状态，可直接使用。若冰箱温度不稳，导致结冰，可适当分装后置于4℃保存，至少稳定6个月。 2，Marker分离效果与PAGE胶浓度相关，若分离胶浓度低于15%，25kD以下条带不易分离，但不影响绿色（25KD）及以上条带。如果目的条带小于25KD，建议分离胶浓度大于或等于15%。3，转膜效果与转膜时间有关，需根据客户目的条带大小而定，如果转膜后较大分子量条带有部分未转膜成功，属于正常现象。 相关试剂： P10154×蛋白上样缓冲液（含DTT） P1300-1SDS-PAGE凝胶制备试剂盒 T10705×Tris-甘氨酸电泳缓冲液 D106010×电泳转移缓冲液 PR1910彩虹180广谱蛋白marker

PH0302-超低分子量蛋白Marker II (3.4-100kD)使用手册

PH0302|超低分子量蛋白Marker II(3.4-100kD) Ultra Low Molecular Weight Protein Marker 货号：PH0302规格：?10T（50ul）保存：Store@-20℃ ◆产品简介 本产品包含5种多肽和3种低分子量蛋白质组成，分子量范围为3.4kD-100kD。可以用来判断SDS-PAGE上多肽和小蛋白的分子量。 ◆使用说明 第一次收到该产品，室温融化后，彻底混匀，离心快甩将溶液完全收集到管底，根据需要适量分装成小管，-20℃贮存，每次取一小管使用；本产品为即用型，融化后既能使用，不能95℃加热处理。 一.制胶： I配制分离胶 1．按照表一将不同体积的双蒸水、40%PAA（19:1）、凝胶缓冲液和乙二醇加入到小烧杯中混合。 2．加入10%APS和TEMED，立即混匀5-10秒，以使溶液充分混匀。 3．在凝胶模具中迅速灌入适量分离胶溶液，然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-3cm的水层，使凝胶表面保持平整。4．静置30-60分钟，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面表示凝胶已聚合。 表一（一块0.75mm mini胶用量） 分离胶浓缩胶 18％T,5%C/6.0ml5％T,3.3%C/2ml 40%PAA（19:1） 2.7ml/ 40%PAA(29:1)/0.25ml 4×凝胶缓冲液 1.5ml0.5ml 乙二醇（电泳级） 1.8ml/ ddH2O/ 1.25ml 10％APS50-65μl20μl TEMED6μl2μl 注：如非必须，不要使用1.0mm和1.5mm的凝胶，尽量使用厚度0.75mm的凝胶，这样会减少电泳后染色和脱色的时间。 II配制浓缩胶 去除覆盖在分离胶上的水层，用滤纸将残留的水吸去。 1．按照表一将不同体积的双蒸水、40%PAA（29:1）和凝胶缓冲液加入到小烧杯中混合。

蛋白质分子量测定：凝胶过滤层析法

蛋白质分子量测定：凝胶过滤层析法 一、目的： （1）初步掌握利用凝胶层析法测定蛋白质分子量的原理。 （2）学习用标准蛋白质混合液制作Ve，Kav对1gMr的“选择曲线”以及测定未知蛋白质样品分子量的方法。 二、原理： 凝胶层析法（即凝胶过滤法，gel filtration）是利用凝胶把分子大小不同的物质分离开的一种方法，又叫做分子筛层析法（molecular sieve chromatography），排阻层析法（exclusion chromatography）。凝胶本身是一种分子筛，它可以把分子按大小不同进行分离，好象过筛可以把大颗粒与小颗粒分开一样。但这种“过筛”与普通的过筛不一样。将凝胶颗粒在适宜溶剂中浸泡，使充分吸液膨胀，然后装入层析柱中，加入欲分离的混合物后，再以同一溶剂洗脱，在洗脱过程中，大分子不能进入凝胶内部而沿凝胶颗粒间的空隙最先流出柱外，而小分子可以进入凝胶内部，流速缓慢，以致最后流出柱外，从而使样品中分子大小不同的物质得到分离。分离过程中的示意见图17-1。 凝胶是由胶体溶液凝结而成的固体物质，不论是天然凝胶还是人工合成凝胶，它们的内部都具有很微细的多孔网状结构。凝胶层析法常用的天然凝胶是琼脂糖凝胶（agarose gel，商品名Sepharose），人工合成凝胶是聚丙烯酰胺凝胶（商品名为Bio-gel-P）和葡聚糖（dextran）凝胶，后者的商品名称为Sephadex型的各种交联葡聚糖凝胶，它是个有不同孔隙度的立体网状结构的凝胶，不溶于水，其化学结构式如图17-2所示。 这种聚合物的立体网状结构，其孔隙大小与被分离物质分子的大小有相应的数量级。在凝胶充分溶胀后，交联度高的，孔隙小，只有相应的小分子可以通过，适于分离小分子物质。相反，交联度低的孔隙大，适于分离大分子物质。利用这种性质可分离不同分子量的物质。 为了说明凝胶层析的原理，将凝胶装柱后，柱床体积称为“总体积”，以Vt（total volume）表示。实际上Vt是由Vo，Vi与Vg三部分组成，即： Vt=Vo+Vi+Vg Vo称为“孔隙体积”或“外体积”（outer volume）又称“外水体积”，即存在于柱床内凝胶颗粒外面空隙之间的水相体积，相应于一般层析法中柱内流动相的体积；Vi为内体 积（inner volume），又称“内水体积”，即凝胶颗粒内部所含水相的体积，相应于一般层析法中的固定相的体积，它可从干凝胶颗粒重量和吸水后的重量求得；Vg为凝胶本身的体积，因此Vt—Vo等于Vi+Vg 。它们之间的关系可用图17-3表示。洗脱体积（Ve，elution Volume）与Vo及Vi之间的关系可用下式表示： Ve=Vo+KdVi 式中Ve为洗脱体积，自加入样品时算起，到组分最大浓度（峰）出现时所流出的体积；Kd为样品组分在二相间的分配系数，也可以说Kd是分子量不同的溶质在凝胶内部和外部的分配系数。 它只与被分离物质分子的大小和凝胶颗粒孔隙的大小分布有关，而与柱的长短粗细无关，也就是说它对每一物质为常数，与柱的物理条件无关。Kd可通过实验求得，上式可改写成： 上式中Ve为实际测得的洗脱体积；Vo可用不被凝胶滞留的大分子物质的溶液（最好有颜色以便于观察，如血红蛋白，印度黑墨水，分子量约200万的蓝色葡聚糖-2000等）通过实际测量求出；Vi可由g·WR求得（g为干凝胶重，单位为克；WR为凝胶的“吸水量”，以毫升/克表示）。因此，对一层析柱凝胶床来说，只要通过实验得知某一物质的洗脱体积Ve，就可算出它的

次高分子量蛋白质 Marker (43kD-200kD)使用说明

次高分子量蛋白质Marker(43kD-200kD)使用说明 货号：PR1500 规格：10T 保存：-20℃可保存至少六个月。避免反复冻融，建议分装保存。 产品简介： 次高分子量蛋白质Marker包含5种蛋白质混合物，分子量范围为43kD-200kD，每种蛋白的含量约为20ug。经SDS-PAGE电泳，用考马斯亮蓝染色后可以得到分布均匀密度相近的5条带。可以用来判断SDS-PAGE电泳后蛋白质的分子量。 本产品配有一支蛋白上样缓冲液（150ul）。 使用说明： 将两支试剂开启，取110ul蛋白上样缓冲液加入蛋白Marker干粉中，混匀，取出液体，置于 1.5ml离心管中，100℃沸水浴加热5分钟，冷却后根据需要分装成小管，建议每管分装10μl，-20℃贮存，每次取一管使用。 注：如长期贮存后使用，使用前最好取分装后的小管99℃预热3分钟后再上样电泳。 用考马斯亮蓝G-250染色后可见5条蛋白带（见下示意图）。

注意事项： 1.建议分离胶浓度7%，浓缩胶浓度4%，制胶时先配制分离胶，聚合后再配制浓缩胶。电泳时，80v电压大约跑1小时后，待指示剂沿到达分离胶上沿时，将电压调至120v，直到电泳结束。整个电泳过程大约需3-4个小时。 2.电泳之后可将胶进行染色观察，如果使用配方进行染色时效果不好或考虑其毒性，可以选择考马斯亮蓝蛋白胶快速染色液，具有染色快，无毒，灵敏性高等特点，是常规染色液的替代品。 相关试剂： P10154×蛋白上样缓冲液（含DTT） T10705×Tris-甘氨酸电泳缓冲液 P1300-1SDS-PAGE凝胶制备试剂盒 P1300-500考马斯亮蓝快速染色液

蛋白标准品(Marker)知识汇总

蛋白Marker可分为：一、未预染的Marker即宽分子量蛋白标准、高分子量蛋白标准以及低分子量蛋白标准;二、预染的Marker即单色预染和多色预染。 在western blot 过程中，分子量Marker就像个螺丝钉一样没虽然是个小细节，然而就是这样一个小细节对实验结果有着不可忽视的作用。这个Western Blot 参照家族的一员的作用主要是用来指示蛋白条带所对应的分子量大小，只有标准量精确无误了，实验结果才有说服力，除此之外，蛋白标准还有表示转移成功或者蛋白在凝胶上的电泳程度等等的作用，所以选择正确的蛋白Marker也是western blot实验成功的必要条件之一。 总体来说，蛋白分子量标准可以分成未染蛋白分子量标准、预染蛋白分子量标准二个级别。以下是关于蛋白分子量标准的小叙： 一. 未染色(pre mixed)蛋白分子量标准 未染色的蛋白分子量标准是最简单，也是最准确的一种。由于没有附带染料分子或者是标记分子，所示大小正好是蛋白原本的大小，是精确判断蛋白大小必须的。现在的Marker多数都选用预混和的Marker，方便不同大小的蛋白比较。预混的Marker通常有几条带加倍浓度作为指示，因为混合的条带越多，越不好记，谁知道哪条是那条!数到眼都花了。所以当看到特别浓的那几条标志带就记得是哪里了。不过要记得，小带通常都不那么容易看清楚的。在选择上来说，当然是选择其中至少有一条条带和自己的目的蛋白大小相近的最好，越近越好。如果你的蛋白不幸在两条跨度较大Marker条带之间，选别的Marker吧。预混的Marker 使用上不如预染Marker(pre-stained)好用，因为电泳过程中完全看不到，要和目标蛋白一起等到最后染色才―开蛊‖，无法对实验起预示参照作用。完全属于―后知后觉‖型的，当然还是比―不知不觉‖不做对照的要好。 ①宽分子量蛋白标准

低分子量蛋白质Marker(14.4kD-97.4kD)使用说明

低分子量蛋白质Marker（14.4kD-97.4kD)使用说明 货号：PR1400 规格：20T 保存：-20℃可保存至少一年。避免反复冻融，建议分装保存。 产品简介： 低分子量蛋白质Marker包含6种蛋白质混合物的冻干粉，分子量范围为14.4kD-97.4kD，每种蛋白的含量约为20-30μg。经过SDS-PAGE（聚丙烯酰胺凝胶）电泳后，用考马斯亮蓝染色可以得到分布均匀密度相近的6条带。可以用来判断SDS-PAGE电泳后蛋白质的分子量。 使用说明： 1.开封后，溶于400μL体积的1×蛋白上样缓冲液（含巯基还原剂），于沸水浴中加热5分钟，冷却后可根据需要进行小量分装，每管20μL，-20℃贮存，每次取一管使用。 2.如长期贮存后使用，使用前最好取分装后的小管沸水浴预热3-5分钟后再上样电泳，用考马斯亮蓝G-250染色后可见6条蛋白带(见下示意图)。 注意事项： 1.建议分离胶浓度12%，浓缩胶浓度5%，制胶时先配制分离胶，聚合后再配制浓缩胶。电泳时，80v电压大约跑1小时后，待指示剂沿到达分离胶上沿时，将电压调至120v，直到电泳结

束。整个电泳过程大约需3-4个小时。 2.电泳之后可将胶进行染色观察，如果使用配方进行染色时效果不好或考虑其毒性，请选择考马斯亮蓝蛋白胶快速染色液，该试剂具有染色快，无毒，灵敏性高等特点，是常规染色液的替代品。 相关试剂： P10154×蛋白上样缓冲液（含DTT） P10164×蛋白上样缓冲液（含巯基还原剂） T10705×Tris-甘氨酸电泳缓冲液 P1300-1SDS-PAGE凝胶制备试剂盒 P1300-500考马斯亮蓝快速染色液

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质分子量

实验六报告： SDS- 聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质分子量 1.研究背景及目的 根据自然界中普遍存在的电泳现象，以及实践应用的需求，科学家不断完善了电泳技术，从移界电泳法、垂直管型盘状电泳、垂直板型电泳、垂直柱型盘状电泳到水平板型电泳。电泳技术广泛地应用于样品的分析鉴定。蛋白质分子量的测定在理论和实践中具有很重要的意义，比如临床中对于尿液中蛋白质分子量的测定可以监测人体内的某些疾病（肾小管损坏、多发性骨髓瘤等）。这种需要促进了相关技术的发明。具体过程见原理。蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中电泳时，它的迁移率取决于它所带净电荷以及分子的大小和形状等因素。从活性电泳到变性电泳经过了很多思考。从活性如果加入一种试剂使电荷因素及分子的形状消除，那电泳迁移率就取决于分子的大小，就可以用电泳技术测定蛋白质的分子量。 1967年，Shapiro等发现阴离子去污剂十二烷基硫酸钠（SDS）具有这种作用[1] 。 通过向样品中添加入巯基乙醇和过量SDS，使蛋白质变性解聚，并让SDS与蛋白质结合成 带强负电荷的复合物，掩盖了蛋白质之间原有电荷的差异。SDS与蛋白质分子结合，不仅 使蛋白质分子带上大量的负电荷，而且使蛋白质分子的形状都变成短棒状，从而消除了蛋白质分子之间原有的电荷差异和分子形状的差异。因此蛋白质在SDS-PAGE中的时迁移率 主要取于其分子大小。由于SDS与蛋白质的结合，电泳迁移率在外界条件固定的情况下，只取决于蛋白质分子量大小这一因素，使得SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳具有分辨率高、重复性好等特性，因此广泛应用于未知蛋白质分子量测定。通过本次实验，学习和掌握垂直板型聚丙烯酰胺凝胶电泳的原理和方法，进一步学习和应用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质分子量。 2.原理 由于技术的发展，理论上可以通过测序测出蛋白质分子量的真值，但是实际操作过于繁琐，且生物大分子的数量级是KDa，实际中往往不需要特别精确。所以转向寻求其它方法，如果两种性质具有相关性，就会有相关理论基础和技术，发现分子量与迁移速率有关，于是寻找相关方面的技术。通过沉降平衡法测定分子量，但是需要很大的转速，且要考虑安全性和造价，于是舍弃；分子筛层析主要以分子量差异进行分离，可以用来测定分子量，但是需要很长的分离柱，分离速度较慢，还要测定OD值，操作麻烦，浪费时间，而且带 来的经济效益也不是很大；与此同时，电泳技术也发展起来，电泳相对时间较短，造价低，可操作性强。电泳与分子量、分子形状以及所带电荷量有关，其中含有分子量，理论上就可行了，于是用电泳测定分子量。首要矛盾是消除电荷差异和分子形状差异，从数学上彻底消除电荷效应是不可能的，使带电量相同也不可能实现，只有使分子带上非常大的电荷量从而使分子间的电荷差异可以忽略。想到通过引入外来物形成复合物，定量引入，定量结合，且结合后分子间差异并未发生改变。关于引入负电还是引入正电的问题，蛋白大多为球状，若结合后仍未球状，静电结合不稳定；双亲性物质彻底结合后破坏空间结构，所以引入负电，结合稳定。于是开始筛选阴离子去污剂，在众多的物质试验中，发现十二烷基硫酸钠（SDS）具有很好的效果。SDS通常与蛋白质以1.4:1的重量比结合，所引入净电 荷量约为蛋白质本身静电荷 10倍的静电荷，从而形成具有均一电荷密度和相同荷质比的SDS-蛋白质复合物，该复合物所带的电荷远远超过蛋白质原有的净电荷，从而消除或大大降低不同蛋白质之间所带净电荷

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)测定蛋白质分子量

实验七SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）测定蛋白质分 子量 实验数据： 标准蛋白质条带第一条第二条第三条第四条第五条 溴酚蓝前沿距离/cm 4.70 距离/cm 0.50 0.95 1.60 2.10 3.95 相对迁移率mr 0.11 0.20 0.34 0.45 0.84 分子量Mr 97400 66200 43000 31000 14400 LgMr 4.99 4.82 4.63 4.49 4.16 样品 1 2 3 溴酚蓝前沿/cm 4.90 4.80 4.60 样品迁移距离/cm 4.20 1.20 1.70 相对迁移率mr 0.86 0.25 0.37 标准曲线： y=5.05-1.10x

结果： 样品 1 2 3 Mr 12706 59566 43954 mr 4.104 4.775 4.643 一. 实验目的和要求 1 学习SDS-PAGE测定蛋白质分子量的原理。 2 掌握垂直板电泳的操作方法。 3 运用SDS-PAGE测定蛋白质分子量及染色鉴定。 二 .实验原理 带电质点在电场中向带有异相电荷的电极移动，这种现象称为电泳。 区带电泳是在半固相或胶状介质上加一个点或一薄层样品溶液，然后加电场，分子在支持介质上或支持介质中迁移。支持介质的作用主要是为了防止机械干扰和由于温度变化以及大分子溶液的高密度而产生的对流。 区带电泳使用不同的支持介质，早期有滤纸、玻璃珠、淀粉粒、纤维素粉、海砂、海绵、聚氯乙烯树脂；以后有淀粉凝胶、琼脂凝胶、醋酸纤维素膜，现在则多用聚丙烯酰胺（PAGE）和琼脂糖凝胶。 PAGE根据其有无浓缩效应，分为连续系统和不连续系统两大类，连续系统电泳体系中缓冲液pH值及凝胶浓度相同，带电颗粒在电场作用下，主要靠电荷和分子筛效应。不连续系统中由于缓冲液离子成分，pH，凝胶浓度及电位梯度的不连续性，带电颗粒在电场中泳动不仅有电荷效应，分子筛效应，还具有浓缩效应，因而其分离条带清晰度及分辨率均较前者佳。 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS（十二烷基磺酸钠）， SDS能断裂分子内和分子间氢键，破坏蛋白质的二级和三级结构，强还原剂能使半胱氨酸之间的二硫键断裂，蛋白质在一定浓度的含有强还原剂的SDS溶液中，与SDS分子按比例结合，形成带负电荷的SDS-蛋白质复合物，这种复合物由于结合大量的SDS，使蛋白质丧失了原有的电荷状态形成仅保持原有分子大小为特征的负离子团块，从而降低或消除了各种蛋白质分子之间天然的电荷差异，由于SDS与蛋白质的结合是按重量成比例的，因此在进行电泳时，蛋白质分子的迁移速度取决于分子大小。当分子量在15KD到200KD之间时，蛋白质的迁移率和分子量的对数呈线性关系，符合下式：logMW=K-bX，式中：MW为分子量，X为迁移率，k、b均为常数，若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量对数作图，可获得一条标准曲线，未知蛋白质在相同条件下进行电泳，根据它的电泳迁移率即可在标准曲线上求得分子量。 SDS电泳的成功关键之一是电泳过程中，待别是样品制备过程中蛋白质与SDS的结合程度。影响它们结合的因素主要有三个： 1) 溶液中SDS单体的浓度，当单体浓度大于1mmol/L时大多数蛋白质与SDS结合的重量比为1:1.4，如果单休浓度降到0.5 mmol/L以下时，两者的结合比仅为1: 0.4这样就不能消除蛋白质原有的电荷差别，为保证蛋白质与SDS的充分结合，它们的重量比应该为1:4或1:3 2) 样品缓冲液的离子强度。SDS电泳的样品缓冲液离子强度较低，通常是10～ 100mmol/L 3) 二硫键是否完全被还原

碱基与蛋白换算

碱基与蛋白换算 创建者: zizip 最后修改: 2010-6-4 23:05:47 状态: 公开 核酸数据 (Nucleic Acid Data) Kd是kilodaltons的缩写，既千道尔顿。是氨基酸的分子量单位。 Kbs是千碱基对的意思，是核酸的单位名称。 1个脱氧核糖核酸碱基的平均分子量为333 Daltons（道尔顿） 1个核糖核酸碱基的平均分子量为340 Daltons（道尔顿） DNA与表达蛋白之间分子量换算： 1 kb DNA = 333 amino acid ≈3.7 × 104 Da（道尔顿） 10,000 Da Protein ≈ 270 bp DNA 30,000 Da Protein≈ 810 bp DNA 50,000 Da Protein ≈1350 bp DNA 100,000 Da Protein ≈ 27 kb DNA 一个DNA碱基对（钠盐）的平均分子量= 650 道尔顿 1.0 A260 unit ds DNA = 50 μg/ml = 0.15 mM (in nucleotides) 1.0 A260 unit ss DNA = 33 μg/ml = 0.10 mM (in nucleotides) 1.0 A260 unit ss RNA = 40 μg/ml = 0.11 mM (in nucleotides) 双链DNA分子的分子量(道尔顿) = 碱基对数目×650 双链DNA分子的末端摩尔数= 2 ×DNA质量（克）/ DNA分子量（道尔顿）限制性内切酶酶切后的DNA末端摩尔数: a) 环状DNA分子: 2 × DNA摩尔数×位点数 b) 线性DNA分子: 2 × DNA摩尔数×位点数+ 2 × DNA摩尔数 1 μg 1000 bp DNA = 1.5 2 pmol = 9.1 × 1011 molecules 1 μg pUC18/19 DNA (2686 bp) = 0.57 pmol = 3.4 × 1011 molecules

中分子量蛋白Marker

中分子量蛋白Marker I 使 用 说 明 书 包 装 量： 浓 度：每种蛋白约0.1－0.2mg/ml 在1×loading Buffer 储运温度：收到产品后分装冻存，避免反复冻融降解蛋白，-20℃ (长期保存请置于-70℃ )(用于小胶5μl/次 可用20次 用于大胶10μl /次 可用10次) 制品说明：本产品是由6种蛋白质分别纯化后混合而成的蛋白质溶液，分子量范围为14KD －94KD ，经SDS －聚丙烯酰胺凝胶电泳后，用考马斯亮蓝R －250（Coomassie Blue R-250）染色后可得清晰的7条蛋白带。建议使用分离浓度为12%～15%。 适用胶浓度：最优适用于12% (37.5:1 丙烯酰胺:双丙烯酰胺)的聚丙烯酰胺凝胶。 该Marker 也可用于8-15%的胶。胶浓度为8-10% 时蛋白Marker 中低分子量的蛋白易于同染料前沿跑在一条线上不易区分，在12-15%的胶上及梯度电泳中，所有的条带都能锐利清晰分开。 推荐上样量： 上样量 胶厚度大小 5μl 0.75mm thick mini 10μl 1.5mm thick mini 0.75mm thick large 20μl 1.5mm thick large 操作步骤： 1. 室温融解Marker 或37- 40°C 温浴几分钟使之融解，混匀均一，不要高温加热。 2. 为避免污染最好分装保存以备使用，取所需体积的Marker 置于一干净离心管中并封好口。 3. 上样并进行 SDS-PAGE 电泳。

4.该Marker适用于考马斯亮蓝, 银染或其他蛋白染色方法。 注意：银染比考马斯亮蓝染色敏感度高10～100 倍，相应的银染需要减少用量。 5.变性蛋白Marker储存于-20°C。 6.在非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳中不要使用该Marker，因为在该Marker的储存缓冲液中存在SDS。 质量检测： 5μl 的该Marker 用于12% 的凝胶进行SDS-PAGE电泳(mini gel)并用考马斯亮蓝R-250染色,能得到6条亮度相同的锐利条带。 NOT FOR HUMAN OR DRUG USE

TaKaRa 蛋白质分子量标准(低)

? o Protocols o Standard Protocol o Manual/Datasheet ? Cat.# Product Size Note 3450 Protein Molecular Weight Marker (Low) 200 lanes 3451 Protein Molecular Weight Marker (High) 200 lanes 3452 Protein Molecular Weight Marker (Broad) 200 lanes Description Protein Molecular Weight Markers are designed for use in SDS-Polyacrylamide gel electrophoresis. There are 3 kinds of Protein Molecular Weight Marker, Low (Molecular weight range : 14.3 - 97.2 kDa) , High (Molecular weight range : 44.3 - 200 kDa) and Broad (Molecular weight range : 6.5 - 200 kDa). Each protein is proportioned to yield uniform band intensities when perform staining Coomassie Brilliant Blue R-250 after run on SDS polyacrylamide gel. 5μl of 20-fold diluted marker is loaded per lane of SDS-PAGE minigel for standard use. In this case, this marker is sufficient for 200 lanes. Electrophoresis Result Low(Cat.# 3450) High(Cat.# 3451) Broad(Cat.# 3452) 15% SDS-PAGE 7.5% SDS-PAGE 5-20% gradientSDS-PAGE Storage

蛋白质分子量标准(高)使用说明书

蛋白质分子量标准（高） Protein Molecular Weight Marker (High) 使用说明书 Takara Code : D531A 浓度: 10 μg/μl 制品内容（约200次量） Protein MW Marker（high）50 μl 5×Loading Buffer 1000 μl 1 M DTT（Dithiothreitol）100 μl 制品说明 Protein Molecular Weight Marker（High）是由五种纯化好的不同分子量的蛋白质组成的，它的分子量范围为：44.3 KDa～200KDa。进行聚丙烯酰胺凝胶电泳时，经考马斯亮蓝R－250染色后的各种蛋白质的条带强度均一。每微升本制品的蛋白量为10 μg，稀释20倍后进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，每次取5 μl（for SDS-PAGE mini gel）。以每次使用5 μl（20倍稀释液）计算时本制品约可使用200次。 保存条件 制品原液可在-20℃下长期保存，制品的20倍稀释液可在-20℃下保存2～3个月，制品的原液和制品的20倍稀释液都应避免多次反复冻融。 制品中的各种蛋白质种类 使用注意 推荐使用7.5～10％的聚丙烯酰胺凝胶。浓度太高，高分子量的蛋白分离效果不好，有可能聚集于分离胶的上部。使用方法 1. 首先按以下方法配制“稀释液”。 1 M DTT 2 μ l 5×Loading Buffer 20 μl * 稀释液可于室温下放置一个月左右。 2.按以下方法稀释本制品。 稀释液22 μl 灭菌蒸馏水73 μl * 20倍的制品稀释液可在-20℃下保存2～3个月，但应 避免多次反复冻融。如果一次稀释量较多时，可以小量 分装后在-20℃下保存，以避免反复冻融。 3. 均匀混合后，100℃加热处理5分钟，然后取5 μl进行7.5～10％ 的聚丙烯酰胺凝胶电泳（for SDS-PAGE mini gel）。 4. 7.5%、10%的聚丙烯酰胺凝胶电泳后，经考马斯亮蓝R-250染 色后的结果如下。 V2012,01 KDa 200.0 116.0 97.2 66.4 44.3 200.0 116.0 97.2 66.4 44.3 KDa 7.5% 10%

彩虹245广谱蛋白marker说明书

彩虹245广谱蛋白marker说明书 货号：PR1920 规格：20T (100μ1)/50T(250μ1) /100T(250μ1×2) /500T(250μ1×10) 保存：-20℃保存，有效期至少2年。 产品特点： ?三色预染，颜色鲜亮，条带整齐，便于观察。 ?稳定性能突出，经检测4℃放置两年无明显降解。 ?用量少，节约成本，仅5ul即可完美呈现（1.5mm，10孔梳）。 ?广谱多带，一支即可满足多种实验需求。 产品简介： 本产品包含12种彩色预染的已知分子量标准蛋白，分子量范围为11kD-245kD，每种蛋白含量约为0.2-0.4mg/ml。预染marker可以用于直接观察蛋白质电泳状况以及清晰地判断Western Blot的转膜效果。经SDS-PAGE凝胶电泳或转移到PVDF或NC膜上可得到清晰的10条彩色蛋白条带，其中25kD为绿色条带，75kD为红色条带，其余10条是蓝色条带。 使用说明： 1. 本产品是即用型液体，可直接上样电泳。上样前无需加热，稀释或添加还原剂。 2. 上样5ul，SDS-PAGE电泳过程及转膜后可看见清晰的彩虹条带。 3. 建议分离胶浓度为15% 。 电泳示意图说明：

彩虹245广谱蛋白marker经15%浓度的SDS-PAGE凝胶电泳后，转移至PVDF膜上。 注意事项： ?本产品含有较高浓度甘油，常规-20℃保存为液体状态，可直接使用。若冰箱温度不稳，导致结冰，可适当分装后置于4℃保存，至少稳定6个月。 ?Marker分离效果与PAGE胶浓度相关，若分离胶浓度低于15%，25kD以下条带不易分离，但不影响绿色（25KD）及以上条带。如果目的条带小于25KD，建议分离胶浓度大于或等于15%。 ?转膜效果与转膜时间有关，需根据客户目的条带大小而定，如果转膜后较大分子量条带有部分未转膜成功，属于正常现象。 相关产品： P10154×蛋白上样缓冲液（含DTT） A101030%丙烯酰胺(29:1) P1300-1SDS-P AGE凝胶制备试剂盒 T10705×Tris-甘氨酸电泳缓冲液 D106010×电泳转移缓冲液 PR1910彩虹180广谱蛋白marker

蛋白质分子量测定方法的比较

蛋白质分子量测定方法的比较 梁永达 （复旦大学药学院，上海） 摘要：分子量是蛋白质主要的特征参数之一，近年来其测试方法发展十分迅速。该文概述了目前蛋白质分子量测定中最常用的几种方法，包括粘度法、凝胶过滤层析法、凝胶渗透色谱法、SDS-凝胶电泳法、渗透压法、电喷雾离子化质谱技术、基质辅助激光解吸电离质谱技术、光散射法、超速离心沉降法，并比较了这几种方法的优缺点。 关键词：蛋白质分子量粘度法凝胶过滤层析法凝胶渗透色谱法SDS-凝胶电泳法渗透压法电喷雾离子化质谱技术基质辅助激光解吸电离质谱技术光散射法超速离心沉降法 Comparison of the methods of molecular weight determination of proteins LiangYongda (School of Pharmacy in Fudan University, Shanghai) Abstract: Molecular weight is one of the most important characteristic parameters of proteins，which leads the methods to determine protein molecular weight to develope rapidly in recent years. In this paper，the mechanism and application are briefly overviewed for the most widely used technologies including viscosity method, gel filtration chromatography, gel permeation chromatography, SDS-gel electrophoresis, osmotic pressure method, electrospray ionization mass spectrometry, matrix-assisted laser desorption ionization mass spectrometry, light scattering, ultracentrifugation sedimentation. Plus, we compare these methods’advantages and disadvantages. Key words:molecular weight determination of proteins, viscosity method, gel filtration chromatography, gel permeation chromatography, SDS-gel electrophoresis, osmotic pressure method, electrospray ionization mass spectrometry, matrix-assisted laser desorption ionization mass spectrometry, light scattering, ultracentrifugation sedimentation 分子量是蛋白质的主要特征参数之一，当发现一种新的蛋白质时，首先应准确测定其分子量。蛋白质分子量的测定方法有多种，以下将对实验室最常用的几种方法进行介绍： 1.粘度法 一定温度条件下，高聚物稀溶液的粘度与其分子量之间呈正相关性，随着分子量的增大，聚合物溶液的粘度增大。通过测定高聚物稀溶液粘度随浓度的变化，即可计算出其平均分子量(粘均分子量)。 如果高聚物分子的分子量愈大，则它与溶剂间的接触表面也愈大，摩擦就大，表现出的特性粘度也大。特性粘度和分子量之间的经验关系式为： 式中，M 为粘均分子量；K为比例常数；α是与分子形状有关的经验参数。K和α值与温度、

GE SDS marker kit说明书

LMW-SDS marker kit (17-0446-01) SDS低分子量标准试剂盒 SDS低分子量标准试剂盒是由六种高纯度的已鉴定蛋白(分子量：14,400-97,000)的干粉混合物组成，用于SDS－PAGE电泳中分子量的测定。通过比较待测蛋白和试剂盒中已知分子量蛋白的电泳迁移率，推出未知蛋白的分子量。每瓶含有 576μg 蛋白混合物。该试剂盒储存于2－8°C 。 SDS 低分子量标准 (14 000?97 000) 蛋白 分子量 来源 量（ug) Phosphorylase b 97 000 rabbit muscle 67 Albumin 66 000 bovine serum 83 Ovalbumin 45 000 chicken egg white 147 Carbonic anhydrase 30 000 bovine erythrocyte 83 Trypsin inhibitor 20 100 soybean 80 α-Lactalbumin 14 400 bovine milk 116 两倍稀释后每个泳道上样3ul，采用自制的15％T，2.7%C凝胶在SE260电泳槽上20mA恒流电泳1小时55分钟,考染结果。 1. 重溶： 按下述方法直接重溶，六种标准蛋白将溶于25％蔗糖溶液中，所以样品缓冲液中不必加入密度增强剂。为了更好的重复性，避免反复冻溶蛋白溶液，最好将其分装，于-80oC可保存3个月。 考马斯亮兰染色： 对于Laemmli 胶,每支瓶加入 200 μl标准的1x样品缓冲液[0.0625 M Tris-HCl,2% SDS,10% (v/v) 甘油(可选的),0.1 M DTT 和 0.01% 溴酚蓝,pH 6.8]。 对于 PhastGel T M , ExcelGel T M 和 CleanGel T M 预制胶，每支瓶加入 200μl[10 mM Tris-HCl,2% SDS, 0.1 M DTT,0.01% 溴酚蓝和 1 mM EDTA, pH 8.0]。 银染： 像上述考染一样，每支瓶加入200ul相应的溶液，然后用1x样品缓冲液稀释50倍。 2.蛋白变性 将重溶的蛋白溶液于 95–100°C 加热 5 分钟。 3. 上样 从表中选择合适的上样量： 凝胶类型 上样量（ul) 小型垂直电泳（8 x 10cm) 1-8 标准垂直电泳（14x16cm) 2-8 Multiphor II 水平电泳 1-3 PhastSystem 水平电泳 0.3-4

所有的Fermentas蛋白Marker(新)

Fermentas 蛋白Marker/Ladder 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 编号 货号 名称 包装报价推荐上样量 使用次数 预染蛋白Marker/Ladder SM0671 2x250μl 870 1 SM067 2 PageRuler? Prestained Protein Ladder 10x250μl 3480 5/10ul （小/大） 100/50（大/小） SM1811 2x250μl 1100 2 SM1812 PageRuler? Plus Prestained Protein Ladder 10x250μl 4400 5/10ul （小/大） 100/50（大/小） SM1841 2x250μl 1000 3 SM1842 Spectra? Multicolor Broad Range Protein Ladder 10x250 μl 4500 10/20ul （小/大） 50/25（大/小） 4 SM1851 Spectra? Multicolor High Range Protein 2x250 μl 1300 10/20ul （小/大） 50/25（大/小） 5 SM1861 Spectra? Multicolor Low Range Protein 1x250 μl 1200 5/10ul （小/大） 50/25（大/小） 6 SM0441 Prestained Protein Molecular Weight Marker 2x250μl 400 5/10ul （小/大） 100/50（大/小） 非预染蛋白Marker/Ladder 7 SM0431 Unstained Protein Molecular Weight Marker 2x1000μl 400 5/10ul （小/大） 400/200（大/小）8 SM0661 PageRuler? Unstained Protein Ladder 2x250μl 500 5/10ul （小/大） 100/50（大/小） 9 SM1881 PageRuler? Unstained Broad Range Protein 2x250 μl 500 5/10ul （小/大） 100/50（大/小） 10 SM1891 PageRuler? Unstained Low Range Protein 2x250 μl 500 5/10ul （小/大） 100/50（大/小）

SDS-PAGE电泳测定蛋白质相对分子质量

SDS-PAGE电泳测定蛋白质相对分子质量 实验目的 了解SDS-PAGE垂直板型电泳法的基本原理及操作技术。 学习并掌握SDS－PAGE法测定蛋白质相对分子量的技术。 实验原理 SDS-PAGE电泳法，即十二烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳法，。 1．在蛋白质混合样品中各蛋白质组分的迁移率主要取决于分子大小和形状以及所带电荷多少。 2．在聚丙烯酰胺凝胶系统中，加入一定量的十二烷基硫酸钠（SDS），SDS是一种阴离子表面活性剂，加入到电泳系统中能使蛋白质的氢键和疏水键打开，并结合到蛋白质分子上（在一定条件下，大多数蛋白质与SDS的结合比为1.4gSDS/1g蛋白质），使各种蛋白质—SDS 复合物都带上相同密度的负电荷，其数量远远超过了蛋白质分子原有的电荷量，从而掩盖了不同种类蛋白质间原有的电荷差别。此时，蛋白质分子的电泳迁移率主要取决于它的分子量大小，而其它因素对电泳迁移率的影响几乎可以忽略不计。 3. 当蛋白质的分子量在15000～200000之间时，电泳迁移率与分子量的对数值呈直线关系，符合下列方程： 1gMr =K―bm R 式中：Mr为蛋白质的分子量；K为常数；b为斜率；mR为相对迁移率。在条件一定时，b 和K均为常数。 若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量的对数作图，可获得一条标准曲线。未知蛋

白质在相同条件下进行电泳，根据它的电泳迁移率即可在标准曲线上求得分子量。 仪器、原料和试剂 仪器：垂直板型电泳槽；直流稳压电源；50或100μl微量注射器、玻璃板、水浴锅，染色槽；烧杯；吸量管；常头滴管等。 原料：低分子量标准蛋白质按照每种蛋白0.5~1mg·ml-1样品溶解液配制。可配制成单一蛋白质标准液，也可配成混合蛋白质标准液。 试剂： （1）分离胶缓冲液（Tris-HCl缓冲液PH8.9）:取1mol/L盐酸48mL，Tris 36.3g,用无离子水溶解后定容至100mL。 （2）浓缩胶缓冲液（Tris-HCl缓冲液PH6.7）:取1mol/L盐酸48mL, Tris 5.98g,用无离子