常用的电泳液

常用染料、电泳缓冲液、凝胶加样液和杂交液的配制：

1.1%溴酚蓝（bromophenol blue）:加1g水溶性钠型溴酚蓝于100ml水中，搅拌或涡旋混合直到完全溶解。

2.1%二甲苯青FF（xylene cyanole FF）:溶解1g二甲苯青FF于足量水中，定容到100ml。

3.5mg/ml的溴化乙锭（EB，ethidium bromide）：小心称取0.5g溴化乙锭，转移到广口瓶中，加100ml水，用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。用铝箔包裹装液管，于4℃储存。工作浓度

0.5mg/L水溶液。

一、DNA电泳

1. Tris-乙酸（TAE：Tris/Acetate/EDTA）

浓贮存液/L（50×）：2mol/L Tris-碱，1 mol/L 乙酸，50 mmol/L EDTA

方法：242.2 g Tris-碱，用300mL水加热搅拌溶解后，加57mL冰乙酸，加入100mL 0.5mol/L EDTA（pH8.0），用冰乙酸调pH值至8.0，定容为1L。

2. Tris-硼酸（TBE：Tris/Borate/EDTA）

浓贮存液/L (5×) : 90mmol/L Tris-碱，890mmol/L 硼酸盐，20mmol/L EDTA(pH8.0)

方法：54g Tris碱、27.5硼酸、20ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)，水定容至1L。

使用液：（0.5×）：0.045mol/L Tris-磷酸，0.001mol/L EDTA

注：进行聚丙烯酰胺凝胶电泳使用的是1×TBE，琼脂糖凝胶电泳使0.5×TBE，这是因为聚丙烯酰胺凝胶垂直槽的缓冲液槽较小，需加强离子强度，提供稍高一些的电流。

3. Tris-磷酸（TPE）

浓贮存液/L（10×）：0.9mol/L Tris-磷酸、0.02mol/L EDTA

方法：108g Tris碱、15.5ml 85%磷酸（1.679g/ml）、40ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)，水定容至1L。

使用液（1×）：0.09mol/L Tris-磷酸、0.002mol/L EDTA

4. Tris-甘氨酸（Tris-甘氨酸缓冲液用于SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳。）

浓贮存液/L（5×）：125mmol/L Tris 、1.25mol/L EDTA、0.5%SDS

方法：15.1g Tris碱、9.4甘氨酸（电泳级）（pH8.3）、50ml 10%SDS（电泳级）

使用液（1×）：25mmol/L Tris 、250mmol/L EDTA、0.1%SDS

5.TBS 电泳缓冲液：100ml TBE，0.5ml的10% SDS。

6.6×上样液：0.25%溴酚蓝（BPB），40%蔗糖，10mmol/L EDTA（pH8.0）。即2.5ml 1%溴酚

蓝，2.5ml 1%二甲苯青FF，4g蔗糖，补足水到10ml，4℃保存。

二、RNA电泳

1.RNA标准相对分子质量：如28S和18SrRNA以及9S兔β-球蛋白mRNA，其RNA大小为6333、2366和710个核苷酸。

2.DEPC（焦碳酸二乙酯）处理水：

0.1% DEPC，水，即加1ml DEPC（diethlpyrocarbonate）于1L水中，使DEPC的体积分数为0.1%。在37℃温浴至少12h，然后在15psi条件下高压灭菌20min，以使残余的DEPC 失活。DEPC会与胺其反应，不可用DEPC处理Tris缓冲液。

3.5×FGRB（formaldehyde gel-running buffer）：

100mmol/L 3-（N-吗啉代）-丙磺酸（MOPS，pH7.0），40mmol/L醋酸钠，5mmol/L EDTA

（pH8.0）。即准确称取20.93g MOPS用DEPC处理水溶解，再加入13.3ml的3 mol/L NaAc（pH7.0），10ml的0.5 mol/L EDTA（pH8.0），最后定容至1000ml，过滤灭菌后避光保存（pH7.3）。

4.RNA凝胶上样缓冲液：

50%甘油、1mmol/L EDTA（pH8.0）、0.25%溴酚蓝、0.25%二甲苯青FF。即2.5ml甘油、10μL 0.5 mol/L EDTA（pH8.0），1.25ml 1%溴酚蓝，1.25ml 1%二甲苯青FF，用DEPC处理水定容至5ml，分装后-70℃保存。

5.RNA胶（1%）:

1g琼脂糖加62ml DEPC水，加热溶化后冷却至60℃，再加20ml的5×FGRB和17.8ml 的37%甲醛，混匀后制胶。

6.甲酰胺（去离子）：

将10ml甲酰胺和1g离子交换树脂混合，室温搅拌1h后用Whatman滤纸过滤，等分成1ml于-70℃贮存。

7.其他试剂：

37%甲醛、80%乙醇（利用DEPC处理水配制）。

三、蛋白质电泳

1.电泳用标准蛋白Marker

2.10%（M/V）过硫酸铵（APS）：

1g APS加ddH2O至10ml。使用时尽量现配现用，4℃存则两周内用完，最多不能超过一个月。-20℃可存两个月，但一旦解冻后尽快用完。

3.TEMED和DTT（dithiothretol）：置于棕色瓶中,存放在4℃冰箱。

蛋白质样品溶解液：SDS 100mg，巯基乙醇0.1 mL，甘油1.0mL，溴酚蓝2mg，Tris-HCL 缓冲溶液2mL，加蒸馏水至总体积10mL。

4.30%胶母液（Acr-Bis）：

30% Acrylamide、0.8%bis，即Acrylamide 30g、bis 0.8g定容至100ml，可在4℃存放数月。

5.分离胶缓冲液（pH8.8）：

3mol/L Tris，即Tris 36.3g，加入1mol/L HCl溶液48.0mL，pH8.8，定容100ml。

6.浓缩胶缓冲液（pH6.8）：

1mol/L Tris，即Tris 12.1g，pH6.7，定容100ml。

7.10×电极缓冲液：

50mmol/L Tris、384mmol/L甘氨酸、1%SDS。即Tris 6g、Glycine28.8g、SDS 10g，调pH 至8.3，定容至1L。

8.4×SDS上样缓冲液：

200mmol/L Tris-HCl（pH6.8）、8%SDS、0.04%溴酚蓝、40%甘油、400mmol/L DTT（或8%β-巯基乙醇），4℃保存。

9.2×SDS上样缓冲液：

0.1 mol/L Tis（pH6.8）、4%SDS、0.02%溴酚蓝、20%甘油、200mmol/L DTT（或4%β-巯基乙醇），4℃保存。

10.染色液：1g考马斯亮蓝R-250、500ml甲醇、100ml冰醋酸，定容至1L。

11.脱色液：50ml甲醇、75ml冰醋酸，加水定容至1L。

⑹蛋白电泳试剂及其配制

分离胶缓冲溶液：Tris 36.3g，加入1mol/L HCl溶液48.0mL，再加入蒸馏水到100mL，pH8.9。

浓缩胶缓冲溶液：Tris 5.98g，加1mol/L HCL溶液48.0mL，加蒸馏水到100mL，pH6.7。

凝胶贮液：Acr 30.0g，Bis0.8g，加蒸馏水到100mL。

电极缓冲溶液：SDS 1g，Tris 6g，甘氨酸28.8g，加蒸馏水至1000mL，pH8.3。

固定液：取50%甲醇454mL，冰醋酸46mL，混匀。

SDS染色液：1.25g考马斯亮蓝R-250，加454mL 50%甲醇溶液和46mL冰醋酸，混匀。

脱色液：取乙醇250ml，冰醋酸100mL，加蒸馏水到1000mL，600C脱色。

生物实验常用缓冲液和酶的配制

实验室常用技术参数资料 一、核酸及蛋白质常用数据 1．核苷三磷酸的物理常数 2．常用核酸的长度与分子量

3．常用核酸蛋白换算数据（1）重量换算 1μg=10-6g1pg=10-12g 1ng=10-9g 1fg=10-15g （2）分光光度换算： 1A260双链DNA=50μg/ml 1A260单链DNA=30μg/ml 1A260单链RNA=40μg/ml （3）DNA摩尔换算： 1μg 100bp DNA=1.52pmol=3.03pmol末端 1μg pBR322 DNA=0.36pmol 1pmol 1000bp DNA=0.66μg 1pmol pBR322=2.8μg 1kb双链DNA（钠盐）=6.6×105道尔顿 1kb单链DNA（钠盐）=3.3×105道尔顿 1kb单链RNA（钠盐）=3.4×105道尔顿 （4）蛋白摩尔换算： 100pmol分子量100，000蛋白质=10μg 100pmol分子量50，000蛋白质=5μg

100pmol分子量10，000蛋白质=1μg 氨基酸的平均分子量=126.7道尔顿 （5）蛋白质/DNA换算： 1kb DNA=333 个氨基酸编码容量=3.7×104MW蛋白质 10，000MW蛋白质=270bp DNA 30，000MW蛋白质=810bp DNA 50，000MW蛋白质=1.35kb 100，000MW蛋白质=2.7kb DNA 4．常用蛋白质分子量标准参照物

5．常用DNA分子量标准参照物 续上表

二、常用缓冲液 1．分子克隆常用缓冲液 2．磷酸缓冲液 （1）25℃下0.1mol/L磷酸钾缓冲液的配制※

前处理和电泳的基础知识-不错的学习资料

涂装前处理及电泳基础知识 一、前处理常规工艺路线： 热水洗（喷淋）→预脱脂（喷淋）→脱脂（浸）→自来水洗→自来水洗→表调→磷化→ 自来水洗→自来水洗→循环纯水洗→纯净纯水洗（不同生产线有所不同，但基本内容是一样的） 1.热水洗：目的○1提前给工件（车身）加温，减少预脱脂降温。 ○2洗掉工件表面的灰尘异物。 ○3软化工件表面的油污，提高脱脂效果。 温度：一般是65+5℃。 常出问题：1 堵喷头，要经常清理检查喷头。 2 生锈，提前加少量的脱脂剂进去调整PH值到9-10。 3、定期清理槽底沉淀物。 2.预脱脂：目的○1除油 ○2影响脱脂效果的几个因素a.脱脂剂的质量b.脱脂槽液的浓度、温度、喷淋压力、喷淋的时间、喷头的角度、油水分离器的效果等。 3.脱脂：目的○1进一步彻底除油。除去内腔、死角等喷淋不到的部位的油污。○2影响脱脂效果的因素a脱脂剂的质量b.脱脂槽液的浓度、温度、全浸的时间c.槽液搅拌情况、油污含量等。 4-5自来水洗：洗去工件上残留的脱脂剂 常出问题：返锈。工件清洗太干净或不干净均易生锈，要调整好水的“污染度”保

持碱度“2-5”点最好。如果是新换的水，可以加入少量的脱脂剂，最好是加磷化液的中和剂和促进剂（少量），可解决生锈问题。 6表调：目的，改善工件表面的金属状态，提供很多的磷化结晶核，可以改善磷化的均匀性、磷化速度，减少沉渣，降低膜厚等作用。一般表调都是“胶肽”类表调剂，效果好，但寿命低，一般只有5-6天。如果水洗不干净，带入杂质离子太多，失效速度更快，补加也无效，必须换槽重配。它是一种胶体溶液，应该具备“丁达尔现象”。否则就失效了。应经常检测。此序很重要i。 7磷化：要求均匀，致密、薄，灰色或深灰色，不能发花、发黄、挂灰。一般在阴极电泳线上，均采用“三元磷化”即“锌、锰、镍”的磷化。它的特点是致密均匀，有一定的硬度。耐碱性能好，不易在电泳中返溶，P比高（≥85％），一般只有2～4um,膜重大约在1-3g/㎡，结晶细密，只有2～7um左右。 管理要点：①要求厂家每月全面检测磷化液一次，要测出：Fe+2、Zn2+、Mn2+、Ni+1 No3-、Po4-3,等重要成分的浓度（游离酸、总酸）发现失调及时调整。 ②日常检测游离酸、总酸，促进剂含量。特别注意，不是游离酸、总酸都在要求范围内就可以了。一定要注意“酸比”，它对磷化的质量影响很大。一般要控制在20-25之间为好。（酸比小易造成磷化膜粗糙、厚、返黄、沉渣多；酸比大，易造成膜薄、磷化不上的可能） 发生问题的对策：①发花：脱脂不干净，加强前序脱脂质量。促进剂过高，Fe+2太高。（变成铁系磷化了，或成为氧化膜而非磷化膜，不好。） ②发黄：可能是温度低；游离酸高；促进剂少；总酸度太低（酸比过小）

5.缓冲液离子强度对电泳速度的影响

缓冲液离子强度对电泳速度的影响 目标：⒈阐述电泳的基本原理及注意事项。 ⒉初步掌握电泳技术（以血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳为例）。 ⒊观察并比较不同缓冲液离子强度对电泳速度的影响。 实验用品：电泳仪，电泳槽，醋酸纤维薄膜（2×8cm），点样器（X胶片），滤纸，无齿小镊子，pH8.6（I0.06和0.03）的巴比妥缓冲液等。 试剂：1、I0.06pH8.6的巴比妥缓冲液： 巴比妥钠12.76g 巴比妥 1.66g 蒸馏水1000ml 2、I0.03pH8.6的巴比妥缓冲液： 巴比妥钠 6.38 巴比妥0.83 蒸馏水1000ml 或用I0.06pH8.6的巴比妥缓冲液加蒸馏水稀释一倍即成。 3、氨基黑10B染色液： 氨基黑10B0.5g 冰醋酸10ml 乙醇50ml 蒸馏水40ml 4、漂洗液： 乙醇45ml 冰醋酸 5.0ml 蒸馏水50ml 实验原理： 由于血清中各种蛋白质等电点（pI）不同，所以在同一PH8.6缓冲液中电离程度不同，因而带电荷的多少不同。再则不同蛋白质其分子大小、形状等差异，把它放入同一电场中其电泳的迁移率（是指带电颗粒在单位电场强度下的电泳速度）不同而分离。蛋白质分子大而带电荷少的移动速度慢，如此将血清蛋白从正极到负极依次分为A、α1、α2、β、γ五个区带，经染色、漂洗、脱色，然后计算各蛋白质区带的迁移率，得出电泳缓冲液离子强度对电泳速度是如何影响的。 操作步骤： 1.一般电泳装置：示教 2.电泳操作： ①酸纤维薄膜的准备：在距一端1.5cm处用铅笔画一条细线，然后浸泡于I0.06PH8.6的巴比

妥缓冲液或I0.03PH8.6的巴比妥缓冲液中约20min。 ②取出，用滤纸吸走多余的缓冲液。 ③用点样器蘸取血样点于薄膜上。 ④将点好样的薄膜置于电泳槽上，点样面朝下，点样端置电场中的负极。 ⑤电泳：电压110~160V、时间35~40分钟。 ⑥染色：氨基黑10B或丽春红S染液染色2~3分钟。 ⑦漂洗：3~4次，背景变白，图象清晰。 结果观察与分析： 1.比较用I=0.03和I=0.06的缓冲液进行电泳时的结果，观察图形，判断用哪种离子强度好。 2.利用所记录的电泳电压（V），支持物有效长度（CM），电泳时间（S）和清蛋白移动距离（CM），分别计算用离子强度0.03和0.06的清蛋白迁移率，判断离子强度对电泳速度的影响。 ※迁移率（μ）是指带电颗粒在单位电场强度下的电泳速度（V）。 即：μ=V/E，∵V=d/t （cm/S）（t—时间d—移动距离cm） E=U/L(V/cm) (U—电压L—支持物有效长度) ∴μ=V/E=（d/t）/(U/L)=dL/Ut (cm2/vs) 结论：

常见缓冲液的配方

一.常用贮液与溶液 1mol/L亚精胺（Spermidine）: 溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。 1mol/L精胺（Spermine）：溶解3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。 10mol/L乙酸胺（ammonium acetate）：将77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。 10mg/ml牛血清蛋白(BSA）：加100mg的牛血清蛋白（组分V或分子生物学试剂级，无DNA酶）于9.5ml水中（为减少变性， 须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白），盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。 1mol/L二硫苏糖醇（DTT）：在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水，分成小份贮存于-20℃。或转移100mg的二硫苏糖醇至微量离心管，加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。 8mol/L乙酸钾（potassium acetate）：溶解78.5g乙酸钾于足量的水中，加水定容到100ml。 1mol/L氯化钾（KCl）：溶解7.46g氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。3mol/L乙酸钠（sodium acetate）：溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中，用冰乙酸调溶液的pH至5.2，再加水定容到100ml。 0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液（0.5mol/L），混合后形成EDTA的三钠盐。或称取186.1g的Na2EDTA?2H2O和20g的NaOH，

涂装前处理及电泳线方案介绍

第一部分涂装前处理及电泳线 供货内容及分项设备方案描述 （方案图附后） 一、供货范围 1.供货设备一览表 序号设备名称数量交货时间交货地点 1 涂装前处理及喷粉线1套 2.供货程度：完成以上供货设备一览表中所列各项设备的设计、制造、运输、安装、调试（试运行）、培训、陪产以及售后服务等工作，整个项目为交钥匙工程。 3.交货地点： 4.项目进度： 方案会审： 预验收： 到厂时间： 安装调试： 试生产： 二、分项设备方案描述 一、设计输入条件 1. 工艺设计依据 1.1 产品为真空阀体。 1.2 阀体参数: 参数 序号工件 外型尺寸重量 Φ395×46 50 1 真空阀体 150×150×36 40

2. 车间现状 2.1 长度（不限）×宽7米×高6.5米 3．设计边界条件 3.1气象条件 3.1.1环境温度： 夏季：最热月平均温度 28℃；最高温度 38℃ 冬季：最冷月平均温度 8 ℃；最低温度 -1℃ 3.1.2环境湿度：90%（Max）。相对湿度：最大95%。 3.2车间动能条件 3.2.1电源：380V±10%、220V±10%、50HZ±5%。 3.2.2蒸汽：10 KPa 3.2.3压缩空气： 0.5～0.6Mpa。经过初级过滤。4．车间任务及生产纲领 4.1车间任务 承担真空阀体前处理及喷粉任务。 4.2生产纲领 年产24万件。 4.3 产品特点 最大车外形尺寸：Φ395×46 最大重量： 50Kg。 最大面积： 0.21m2。 5.工作制度和年时基数 全年工作日：312天 工作班制：一班制 班工作时制：8小时 设备开动率：90% 生产节拍：0.56分钟/件。

生物化学常用缓冲液

生物化学常用缓冲液 （一）基本概念 ⑴ Bronsted-Lowry酸碱理论（酸碱质子理论）: 1923年由丹麦化学家J.N.Brφnsted和英国化学家T.M.Lowry同时提出了酸碱质子学说，认为凡能释放质子的分子或离子（如：H2O，HCl，NH4+，HSO4- 等）称为酸，凡能接受质子的分子或离子（如：H2O，NH3，Cl-等）称为碱。因此，一种酸释放质子后即成为碱，称为该酸的共轭碱，同样一种碱与质子结合后，形成对应的酸，称为该碱的共轭酸。 如盐酸在水中的解离： HCl Cl- ＋H+ HCl是酸，Cl-是它的共轭碱。 pH = pKa+log{[质子受体]/[质子供体]} ⑵缓冲体系的设计： 1960年，N.E.Good和他的同事们提出，适合生命科学研究使用的缓冲体系应具有以下特性： ① pKa值在6-8之间； ②在水中的溶解度高； ③不易穿透生物膜； ④盐效应小； ⑤离子浓度、溶液组成和温度对解离的影响小； ⑥不与金属离子生成复合物或沉淀； ⑦该缓冲剂化学稳定； ⑧紫外和可见光波长范围内光吸收小； ⑨易制得高纯度的盐。 （二）生物化学常用缓冲液 ⑴磷酸盐缓冲液： 磷酸盐是生物化学研究中使用最广泛的一种缓冲剂，由於它们是二级

解离，有二个pKa值，所以用它们配制的缓冲液，pH范围最宽： NaH2PO4： pKa1＝2.12， pKa2＝7.21 Na2HPO4： pKa1＝7.21， pKa2＝12.32 配酸性缓冲液：用NaH2PO4，pH＝1-4， 配中性缓冲液：用混合的两种磷酸盐，pH＝6-8， 配碱性缓冲液：用Na2HPO4，pH＝10-12。 用钾盐比钠盐好，因为低温时钠盐难溶，钾盐易溶，但若配制SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的缓冲液时，只能用磷酸钠而不能用磷酸钾，因为SDS（十二烷基硫酸钠）会与钾盐生成难溶的十二烷基硫酸钾。 磷酸盐缓冲液的优点为： ①容易配制成各种浓度的缓冲液； ②适用的pH范围宽； ③pH受温度的影响小； ④缓冲液稀释后pH变化小，如稀释十倍后pH的变化小于0.1。 其缺点为： ①易与常见的钙Ca++离子、镁Mg++离子以及重金属离子缔合生成沉淀； ②会抑制某些生物化学过程，如对某些酶的催化作用会产生某种程度的抑制作用。 ⑵ Tris（三羟甲基氨基甲烷）缓冲液： Tris缓冲液在生物化学研究中使用的越来越多，有超过磷酸盐缓冲液的趋势，如在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳中已都使用Tris缓冲液，而很少再用磷酸盐。 Tris缓冲液的常用有效pH范围是在“中性”范围，例如： Tris-HCl缓冲液： pH＝7.5-8.5 Tris-磷酸盐缓冲液： pH＝5.0-9.0 Tris-HCl缓冲液的优点是： ①因为Tris的碱性较强，所以可以只用这一种缓冲体系配制pH范围由

DNA电泳相关试剂及缓冲液的配制

DNA 电泳相关试剂及缓冲液的配制

1. 0.5M EDTA(pH=8.0):在800ml 蒸馏水中加入186.1g 二水乙二胺四乙酸钠（EDTA-Na 2·2H 2O),充分搅拌，这时溶液为乳白色，加NaOH 调解pH 值至8.0，这时溶液颜色逐渐变为澄清。最后 定容至1L 。高压灭菌。 2. 5 X TBE:Tris 碱54g;硼酸27.5g;20ml0.5M EDTA(pH=8.0),加蒸馏水定容至1L 。高压灭菌。（不过我在实验中没有灭菌，实验结果影响不大）。1 X TBE:5 X TBE 缓冲液与蒸馏水按 1: 4 稀释就OK 。 配置方法方法1：1%的溴酚蓝 将托盘天平上称取1g 溴酚蓝定溶于100ml 无水乙醇中，转移入 滴瓶中，贴标签备用。 方法2：0.05% 的溴酚蓝 配western blot 用的2*SDS 上样缓冲液需要用到0.1% 的溴酚蓝，

2-DE中溴酚蓝一般也是配成0.1%母液。实际上，溴酚蓝在水中的溶解度不高，直接将0.1g溴酚蓝溶于100ml水是有困难的。下面是其较合适的配制方法： 0.05%的溴酚蓝配制方法：取溴酚蓝0.1g，加0.05mol/L氢氧化钠溶液3.0ml使溶解，再加水稀释至200ml，即得。变色范围pH2.8～4.6（黄→蓝绿）。只是不知道加入NaOH会不会影响2-DE实验。估计影响不大，因为指示剂用量毕竟很少。 方法3：1％溴酚蓝 加1g水溶性钠型溴酚蓝于100ml水中，搅拌或涡旋混合直到完全溶解。溴酚蓝其钠盐易溶解在水里。 相关词条 甲醇、乙醇、苯、有机化学、氢氧化钠 Western上样缓冲液配制整理

车身前处理电泳工艺流程

车身前处理电泳工艺流程 1、工艺流程 复验白车身→预清理→装挂→上件→预脱脂→脱脂→水洗1→水洗2→表调→磷化→水洗3→水洗4→纯水洗→平台沥水→电泳→UF1→UF2→DI水洗→平台沥水→下件→电泳烘干→强冷→检验 2、工艺程序及规范 （1）复验白车身：仔细观察白车身A面应平顺，凹凸度＜1mm，无锈蚀及砂轮打磨痕迹。其它部位无明显变形。各表面无重油、明显锈蚀、焊接 垃圾及杂物等。 （2）预清理：带乳胶手套，用棉纱蘸稀料擦拭车身内外表面油污，再用干净棉纱擦净，重点应保证A面不得留下污痕。 （3）装挂：车身运行到装挂工序自动下降到位后停止，手动控制遥控器将车身调正落放在浸式滑撬上使前后托架离开前后风窗口，用挂钩将车 身固定在滑撬上。打开吊具，手动放行自行小车。检查装挂安全、可 靠后按放车按钮，滑橇自动运行至上件工位。 （4）上件：待吊具自动运行到上件工位后，手动控制吊具上升吊起工件，用锁紧装置锁紧吊具，手动控制吊具上升到光电开关以上高度，按放 车按钮，吊具平稳上升到顶点，当下一工位无占位时，小车自动进入 前处理、电泳线。 （5）预脱脂： ①温度：50℃-60℃开线前半小时将槽液升温到规定范围内。A线 升温用蒸汽直接加热和电磁阀控制加热两种加热方式同时进行加热， 到温后用电磁阀自动控温。B线升温用天燃气液槽加热系统直接加热， 自动控温。 ②浸渍时间：3.0min ③出槽自动喷淋喷淋压力0.1～0.15Mpa喷嘴方向调整正确、无阻 塞，喷淋覆盖全车表面。随时清理液面，保持液面清洁无杂物。 （6）脱脂：同预脱脂 （7）第一水洗： ①浸洗1min 常喷，喷淋压力0.1～0.15Mpa,喷嘴方向调整正确，无

缓冲液的配制方法

核酸电泳相关试剂、缓冲液的配制方法 50×TAE Buffer (pH8.5) 组份浓度 2 M Tris-醋酸，100 mM EDTA 配制量 1 L 配制方法 3.加入57.1 ml的乙酸，充分搅拌。 4.加去离子水将溶液定容至l L后，室温保存。 10×TBE Buffer (pH8.3) 组份浓度 890 mM Tris-硼酸，20 mM EDTA 配制量 1 L 配制方法 3.加去离子水将溶液定容至l L后，室温保存。 10×MOPS(3-吗啉基丙磺酸)Buffer 组份浓度 200 rnM MOPS，20 mM NaOAc，10 mM EDTA 配制量 1 L 配制方法 1.称41.8 g MOPS，置于1 L烧杯中。 2.加约700 ml DEPC处理水，搅拌溶解。 3.使用2 N NaOH调节pH值至7.0。 6.用0.45 m滤膜过滤除去杂质。 7.室温避光保存。 注：溶液见光或高温灭菌后会变黄。变黄时也可使用，但变黑时不要使用。 溴乙锭 (10 mg/ml) 组份浓度 10 mg/ml溴乙锭 配制量 100 ml 配制方法 1.称量1 g溴乙锭，加入到100 ml容器中。 2.加入去离子水100 ml，充分搅拌数h完全溶解溴乙锭。 3.将溶液转移至棕色瓶中，室温避光保存。 4.溴乙锭的工作浓度为0.5 g/ml。

注意：溴乙锭是一种致癌物质，必须小心操作。 Agarose凝胶 配制方法 1.配制适量的电泳及制胶用的缓冲液(通常是0.5×TBE或1×TAE)。 2.根椐制胶量及凝胶浓度，准确称量琼脂糖粉，加入适当的锥形瓶中。 3.加入一定量的电泳缓冲液(总液体量不宜超过锥形瓶的50%容量)。 注：用于电泳的缓冲液和用于制胶的缓冲液必须统一。 4.在锥形瓶的瓶封上保鲜膜，并在膜上扎些小孔，然后在微波炉中 加热熔化琼脂糖。加热过程中，当溶液沸腾后，请戴上防热手套。 小心摇动锥形瓶。使琼脂糖充分均匀熔化。此操作重复数次，直 至琼脂糖完全熔化。必须注意，在微波炉中加热时间不宜过长， 每次当溶液起泡沸腾时停止加热，否则会引起溶液过热暴沸，造 成琼脂糖凝胶浓度不准，也会损坏微波炉。熔化琼脂糖时，必须 保证琼脂糖充分完全熔化，否则，会造成电泳图像模糊不清。 5.使溶液冷却至60℃左右，如需要可在此时加入溴乙锭溶液(终浓 度0.5 μg/ml)。并充分混匀。 注：溴乙锭是一种致癌物质。使用含有溴乙锭的溶液时，请戴好手套。 6.将琼脂糖溶液倒入制胶模中，然后在适当位置处插上梳子。凝胶 厚度一般在3~5 min之间。 7.在室温下使胶凝固(大约30 min~1 h)，然后放置于电泳槽中进行电泳。 注：凝胶不立即使用时，请用保鲜膜将凝胶包好后在4℃下保存， 一般可保存2~5天。 琼脂糖凝胶浓度与线形DNA的最佳分辨范围 6× Loading Buffer(DNA电泳用) 组份浓度

生物化学常用缓冲液

生物化学常用缓冲液 ⑴ 磷酸盐缓冲液 磷酸盐是生物化学研究中使用最广泛的一种缓冲剂，由於它们是二级解离，有二个pK a 值，所以用它们配制的缓冲液，pH范围最宽： NaH 2PO 4 ： pK a1 ＝2.12， pK a2 ＝7.21 Na 2HPO 4 ： pK a1 ＝7.21， pK a2 ＝12.32 配酸性缓冲液：用 NaH 2PO 4 ，pH＝1～4， 配中性缓冲液：用混合的两种磷酸盐，pH＝6～8， 配碱性缓冲液：用 Na 2HPO 4 ，pH＝10～12。 用钾盐比钠盐好，因为低温时钠盐难溶，钾盐易溶，但若配制SDS-聚丙烯 酰胺凝胶电泳的缓冲液时，只能用磷酸钠而不能用磷酸钾，因为SDS（十二烷基硫酸钠）会与钾盐生成难溶的十二烷基硫酸钾。 磷酸盐缓冲液的优点为：①容易配制成各种浓度的缓冲液；②适用的pH范围宽；③pH受温度的影响小；④缓冲液稀释后pH变化小，如稀释十倍后pH的 变化小于0.1。 其缺点为：①易与常见的钙Ca++离子、镁Mg++离子以及重金属离子缔合生成沉淀；②会抑制某些生物化学过程，如对某些酶的催化作用会产生某种程度的抑制作用。 ⑵Tris（三羟甲基氨基甲烷，N-Tris(hydroxymethyl)aminomethane）缓冲 液 Tris缓冲液在生物化学研究中使用的越来越多，有超过磷酸盐缓冲液的趋势，如在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳中已都使用Tris缓冲液，而很少再用磷酸盐。 Tris缓冲液的常用有效pH范围是在“中性”范围，例如： Tris-HCl缓冲液： pH＝7.5～8.5 Tris-磷酸盐缓冲液： pH＝5.0～9.0 配制常用的缓冲液的方法有两种：①按书后附录中所列该缓冲液表中的方法，分别配制0.05mol/L Tris和0.05mol/L HCl溶液，然后按表中所列体积混合。由于标准浓度的稀盐酸不易配制，所以常用另一种方法；②若配1L 0.1mol/L 的Tris-HCl缓冲液：先称12.11g Tris碱溶于950mL～970mL 无离子水中，边 搅拌边滴加4N HCl，用pH计测定溶液pH值至所需的pH值，然后再加水补足到1L。 Tris-HCl缓冲液的优点是：①因为Tris碱的碱性较强，所以可以只用这 一种缓冲体系配制pH范围由酸性到碱性的大范围pH值的缓冲液；②对生物化学过程干扰很小，不与钙、镁离子及重金属离子发生沉淀。 其缺点是：①缓冲液的pH值受溶液浓度影响较大，缓冲液稀释十倍，pH值的变化大于0.1；②温度效应大，温度变化对缓冲液pH值的影响很大，即： △pK a ／℃＝－0.031 ，例如：4℃时缓冲液的pH＝8.4，则37℃时的pH＝7.4，所以一定要在使用温度下进行配制，室温下配制的Tris-HCl缓冲液不能用于 0℃～4℃。③易吸收空气中的CO 2 ，所以配制的缓冲液要盖严密封。④此缓冲液对某些pH电极发生一定的干扰作用，所以要使用与Tris溶液具有兼容性的电极。

凝胶电泳缓冲液的配制

2．测序凝胶加样缓冲液 98%去离子甲酰胺 10mol/L EDTA(pH8.0) 0.025%二甲苯青FF 0.025%溴酚蓝 甲酰胺：许多批号的试剂级甲酰胺，其纯度符合使用要求，无须再进行处理。不过，一旦略呈黄色，则应用在磁力搅拌器上将甲酰胺与Dowex XG8混合床树脂共同搅拌1小时进行去离子处理，并用Whatman 1号滤纸过滤2次，去离子甲酰胺分装成小份，充氮存于-70℃。 3．常用的电泳缓冲液

说明： ①TBE溶液长时间存放后会形成沉淀物，为避免这一问题，可在室温下用玻璃瓶保存5×溶液，出现沉淀后则予以废弃。 以片都以1×TBE作为使用液（即1：5稀释浓贮液）进行琼脂糖凝胶电泳。但0.5×的使用液已具备足够的缓冲容量。目前几乎所有的琼脂糖胶电泳都以1：10稀释的贮存液作为使用液。 进行聚丙烯酰胺凝胶垂直槽的缓冲液槽较小，故通过缓冲液的电流量通常较大，需要使用1×TBE以提供足够的缓冲容量。 ②碱性电泳缓冲液应现用现配。 ③Tris-甘氨酸缓冲液用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳。 4．2×SDS凝胶加样缓冲液 100mmol/L Tris·HCl(6.8) 200mmol/L二硫苏糖醇（DTT） 4%SDS（电泳级） 0.2%溴酚蓝 20%甘油 不含DTT的2×SDS凝胶加样缓冲液可保存于室温，应在临用前取1mol/L 贮存液现加于上述缓冲液中。 5．凝胶加样缓冲液

使用以上凝胶加样缓冲液的目的有三：增大样品密度；以确保DNA均匀进入样品孔内；使样品呈现颜色，从而使加样操作更为便利，含有在电块中能以可预知速率向阳极泳动的染料。溴酚蓝在琼脂糖中移动的速率约为二甲苯青FF的2. 2倍，而与琼脂糖浓度无关。以0.5×TBF作电泳液时，溴酚蓝在琼脂糖中的泳动速率约与长300bp的双链线状DNA相同，而二甲苯青FF的泳动则与长4kb的双链线状DNA相同。在琼脂糖浓度为0.5%～1.4%的范围内，这些对应关系受凝胶浓度变化的影响并不显著。 选用哪一种加样染料纯属个人喜恶。但是，对于碱性凝胶应当使用溴甲酚绿作为示踪染料，因为在碱性pH条件下其显色较溴酚更蓝为鲜明。

车身前处理电泳工艺流程讲课稿

车身前处理电泳工艺 流程

车身前处理电泳工艺流程 1、工艺流程 复验白车身→预清理→装挂→上件→预脱脂→脱脂→水洗1→水洗2→表调→磷化→水洗3→水洗4→纯水洗→平台沥水→电泳→UF1→UF2→DI水洗→平台沥水→下件→电泳烘干→强冷→检验 2、工艺程序及规范 （1）复验白车身：仔细观察白车身A面应平顺，凹凸度＜1mm，无锈蚀及砂轮打磨痕迹。其它部位无明显变形。各表面无重油、明显锈蚀、焊 接垃圾及杂物等。 （2）预清理：带乳胶手套，用棉纱蘸稀料擦拭车身内外表面油污，再用干净棉纱擦净，重点应保证A面不得留下污痕。 （3）装挂：车身运行到装挂工序自动下降到位后停止，手动控制遥控器将车身调正落放在浸式滑撬上使前后托架离开前后风窗口，用挂钩 将车身固定在滑撬上。打开吊具，手动放行自行小车。检查装挂安 全、可靠后按放车按钮，滑橇自动运行至上件工位。 （4）上件：待吊具自动运行到上件工位后，手动控制吊具上升吊起工件，用锁紧装置锁紧吊具，手动控制吊具上升到光电开关以上高 度，按放车按钮，吊具平稳上升到顶点，当下一工位无占位时，小 车自动进入前处理、电泳线。 （5）预脱脂：

①温度：50℃-60℃开线前半小时将槽液升温到规定范围内。A 线升温用蒸汽直接加热和电磁阀控制加热两种加热方式同时进行加 热，到温后用电磁阀自动控温。B线升温用天燃气液槽加热系统直 接加热，自动控温。 ②浸渍时间：3.0min ③出槽自动喷淋喷淋压力0.1～0.15Mpa喷嘴方向调整正确、无 阻塞，喷淋覆盖全车表面。随时清理液面，保持液面清洁无杂物。（6）脱脂：同预脱脂 （7）第一水洗： ①浸洗1min 常喷，喷淋压力0.1～0.15Mpa,喷嘴方向调整正确，无 堵塞，喷淋覆盖全车表面，随时清理液面，保持液面清洁无杂物。 槽液溢流，管路无阻塞，泵无异常。 ② PH值8-10 ③倒槽：连续过车300辆(或产量较小的高温天气3天)进行换槽，并 做好换槽记录。换槽时人工清洗水洗槽，将槽内清理干净后加新鲜 自来水至溢流口。 （8）第二水洗： 出槽自动喷淋，其他同第一水洗。 （9）表调： ①浸渍1min，常喷，喷淋压力0.1～0.15Mpa,喷嘴方向调整正确，无 堵塞，喷淋覆盖全车表面，随时清理液面，保持液面清洁无杂物。 检查液位是否正常，管路无阻塞，泵无异常

电泳缓冲液的作用

电泳缓冲液的作用 缓冲液在电泳过程中的一个作用是维持合适的pH。电泳时正极与负极都会发生电解反应，正极发生的是氧化反应（4OH--4e->2H2O+O2)，负极发生的是还原反应（4H++4e->2H2)，长时间的电泳将使正极变酸，负极变碱。一个好的缓冲系统应有较强的缓冲能力，是溶液两极的pH保持基本不变。电泳缓冲液的另一个作用是使溶液具有一定的导电性，以利于DNA 分子的迁移，例如，一般电泳缓冲液中应含有0.01-0.04mol/L的Na+离子，Na+离子的浓度太低时电泳速度变慢；太高时就会造成过大的电流使胶发热甚至熔化。电泳缓冲液还有一个组分是EDTA，加入浓度为1-2mmol/L，目的是螯合Mg2+ 等离子，防止电泳时激活DNA 酶，此外还可防止Mg2+离子与核酸生成沉淀。 TAE是使用最广泛的缓冲系统。其特点是超螺旋在其中电泳时更符合实际相对分子质量（TBE中电泳时测出的相对分子质量会大于实际分子质量），且双链线状DNA在其中的迁移率较其他两种缓冲液快约10%，电泳大于13kb的片段时用TAE缓冲液将取得更好的分离效果，此外，回收DNA片段时也易用TAE缓冲系统进行电泳。TAE的缺点是缓冲容量小，长时间电泳（如过夜）不可选用，除非有循环装置使两极的缓冲液得到交换。 TBE的特点是缓冲能力强，长时间电泳时可选用TBE，并且当用于电泳小于1kb的片段时分离效果更好。TBE用于琼脂糖凝胶时易造成高电渗作用，并且因与琼脂糖相互作用生成非共价结合的四羟基硼酸盐复合物而使DNA片段的回收率降低，所以不宜在回收电泳中使用。TPE的缓冲能力也较强，但由于磷酸盐易在乙醇沉淀过程中析出，所以也不宜在回收DNA片段的电泳中使用。

电泳缓冲液TAE的作用

电泳缓冲液TAE起什么作用呢? 缓冲液在电泳过程中的一个作用是维持合适的pH。电泳时正极与负极都会发生电解反应，正极发生的是氧化反应（4OH--4e->2H2O+O2)，负极发生的是还原反应（4H++4e->2H2)，长时间的电泳将使正极变酸，负极变碱。一个好的缓冲系统应有较强的缓冲能力，是溶液两极的pH保持基本不变。 电泳缓冲液的另一个作用是使溶液具有一定的导电性，以利于DNA分子的迁移，例如，一般电泳缓冲液中应含有0.01-0.04mol/L的Na+离子，Na+离子的浓度太低时电泳速度变慢；太高时就会造成过大的电流使胶发热甚至熔化。 电泳缓冲液还有一个组分是EDTA，加入浓度为1-2mmol/L，目的是螯合Mg2+ 等离子，防止电泳时激活 DNA酶，此外还可防止Mg2+离子与核酸生成沉淀。 TAE是使用最广泛的缓冲系统。其特点是超螺旋在其中电泳时更符合实际相对分子质量（TBE中电泳时测出的相对分子质量会大于实际分子质量），且双链线状DNA在其中的迁移率较其他两种缓冲液快约10%，电泳大于13kb的片段时用TAE 缓冲液将取得更好的分离效果，此外，回收DNA片段时也易用TAE缓冲系统进行电泳。TAE的缺点是缓冲容量小，长时间电泳（如过夜）不可选用，除非有循环装置使两极的缓冲液得到交换。 TBE的特点是缓冲能力强，长时间电泳时可选用TBE，并且当用于电泳小于1kb 的片段时分离效果更好。TBE用于琼脂糖凝胶时易造成高电渗作用，并且因与琼脂糖相互作用生成非共价结合的四羟基硼酸盐复合物而使DNA片段的回收率降低，所以不宜在回收电泳中使用。 TPE的缓冲能力也较强，但由于磷酸盐易在乙醇沉淀过程中析出，所以也不宜在回收DNA片段的电泳中使用。 人外周血单个核细胞总RNA的分离纯化 逆转录聚合酶链反应扩增细胞因子mRNA 琼脂糖凝胶电泳鉴定及DNA的胶回收 PCR扩增产物的克隆 感受态细胞的制备和重组DNA的转化 重组化的筛选和鉴定

电泳前处理管理方法

缺陷及对策 1、可见残油工件表面局部或大面积有可见的残余油污，工件表面不亲水。序号形成原因解决措施 1 工件局部油污过重，尤其是粘度大的蜡 类、凡士林等油污 先用有机溶剂擦去或洗去重油污，再进行脱脂或提高 脱脂温度，延长脱脂时间 2 工件表面涂有难以去除的羊毛脂类防锈 油 同上 3 脱脂剂的脱脂能力弱，效果差更换脱脂能力强的脱脂剂 4 脱脂工艺掌握不好脱脂方法不对根据工件表面油污种类和严重程度及处理批量等重新 确定工艺条件和脱脂方法 5 脱脂温度过低，脱脂时间太短提高脱脂温度或延长脱脂时间 6 脱脂槽液表面油污太多，工件出槽时油 污重新沾附在工件表面上 对于乳化能力弱的脱脂剂，一般每天清理槽液上面油 污1－2次，且工件出槽后最好用热水冲洗 7 处理批量过大，槽液中有效槽液老化或 有效成分不足 检验和分析槽液指标是否在工艺范围内，补充脱脂剂 8 槽液老化更换槽液 9 脱脂剂浓度偏低提高脱脂剂的浓度 10 喷淋脱脂的压力偏低提高喷淋压力 11 脱脂后水洗不彻底加强水洗，水洗槽液最好保持溢流 12 喷嘴堵塞，流量不足定期清理喷嘴 13 浸渍脱脂的机械作用力小用泵循环槽液或摇动工件 14 脱脂槽液中含油量太高更换脱脂槽液 2、脱脂效率急剧下降脱脂剂消耗较快，脱脂效果明显下降。 序号形成原因解决措施 1 工件表面油污过重，脱脂剂消耗量大及时补充脱脂剂或先进行人工预脱脂 2 工件处理过大，脱脂剂补充不及时检验和分析脱脂槽各项指标，并及时补加脱脂剂 3 脱脂槽过入久放置，碱性成分已变质碱性脱脂槽停产时，最好加盖，以防止槽液变质 4 因操作或工件理结构等原因，工件带出 槽液过多 针对形成原因，减少槽液带出量 5 蒸气直接加热时，因冷凝水过多而稀释 脱脂槽液 当温度升至工艺范围时，停止通蒸汽或控制蒸汽量， 既保持恒温，又使槽液面增加不多 6 脱脂槽液老化更换槽液 3、用肉眼看不见的油膜工件表面有一层肉眼看不见的油膜，用水冲时工件表面有亲水现象。

三、核酸电泳相关试剂、缓冲液的配制方法

三、核酸电泳相关试剂、缓冲液的配制方法 50×TAE Buffer (pH8.5) 组份浓度 2 M Tris-醋酸，100 mM EDTA 配制量 1 L 配制方法 3.加入57.1 ml的乙酸，充分搅拌。 4.加去离子水将溶液定容至l L后，室温保存。 10×TBE Buffer (pH8.3) 组份浓度890 mM Tris-硼酸，20 mM EDTA 配制量 1 L 配制方法 3.加去离子水将溶液定容至l L后，室温保存。 10×MOPS(3-吗啉基丙磺酸)Buffer 组份浓度200 rnM MOPS，20 mM NaOAc，10 mM EDTA 配制量 1 L 配制方法 1.称41.8 g MOPS，置于1 L烧杯中。 2.加约700 ml DEPC处理水，搅拌溶解。 3.使用2 N NaOH调节pH值至7.0。 6.用0.45 m滤膜过滤除去杂质。 7.室温避光保存。 注：溶液见光或高温灭菌后会变黄。变黄时也可使用，但变黑时不要使用。溴乙锭(10 mg/ml) 组份浓度10 mg/ml溴乙锭 配制量100 ml 配制方法 1.称量1 g溴乙锭，加入到100 ml容器中。 2.加入去离子水100 ml，充分搅拌数h完全溶解溴乙锭。 3.将溶液转移至棕色瓶中，室温避光保存。 4.溴乙锭的工作浓度为0.5 g/ml。

注意：溴乙锭是一种致癌物质，必须小心操作。 Agarose凝胶 配制方法 1.配制适量的电泳及制胶用的缓冲液(通常是0.5×TBE或1×TAE)。 2.根椐制胶量及凝胶浓度，准确称量琼脂糖粉，加入适当的锥形瓶中。 3.加入一定量的电泳缓冲液(总液体量不宜超过锥形瓶的50%容量)。 注：用于电泳的缓冲液和用于制胶的缓冲液必须统一。 4.在锥形瓶的瓶封上保鲜膜，并在膜上扎些小孔，然后在微波炉中 加热熔化琼脂糖。加热过程中，当溶液沸腾后，请戴上防热手套。 小心摇动锥形瓶。使琼脂糖充分均匀熔化。此操作重复数次，直 至琼脂糖完全熔化。必须注意，在微波炉中加热时间不宜过长， 每次当溶液起泡沸腾时停止加热，否则会引起溶液过热暴沸，造 成琼脂糖凝胶浓度不准，也会损坏微波炉。熔化琼脂糖时，必须 保证琼脂糖充分完全熔化，否则，会造成电泳图像模糊不清。 5.使溶液冷却至60℃左右，如需要可在此时加入溴乙锭溶液(终浓 度0.5 μg/ml)。并充分混匀。 注：溴乙锭是一种致癌物质。使用含有溴乙锭的溶液时，请戴好手套。 6.将琼脂糖溶液倒入制胶模中，然后在适当位置处插上梳子。凝胶 厚度一般在3~5 min之间。 7.在室温下使胶凝固(大约30 min~1 h)，然后放置于电泳槽中进行电泳。 注：凝胶不立即使用时，请用保鲜膜将凝胶包好后在4℃下保存， 一般可保存2~5天。 琼脂糖凝胶浓度与线形DNA的最佳分辨范围 6× Loading Buffer(DNA电泳用) 组份浓度 配制量 配制方法 1.称量下列试剂，置于500 ml烧杯中。

电泳缓冲液TAE,TBE的区别

电泳缓冲液TAE,TBE 缓冲液在电泳过程中的一个作用是维持合适的pH。电泳时正极与负极都会发生电解反应，正极发生的是氧化反应（4OH--4e->2H2O+O2)，负极发生的是还原反应（4H++4e->2H2)，长时间的电泳将使正极变酸，负极变碱。一个好的缓冲系统应有较强的缓冲能力，是溶液两极的pH保持基本不变。 电泳缓冲液的另一个作用是使溶液具有一定的导电性，以利于DNA分子的迁移，例如，一般电泳缓冲液中应含有0.01-0.04mol/L的Na+离子，Na+离子的浓度太低时电泳速度变慢； 太高时就会造成过大的电流使胶发热甚至熔化。 电泳缓冲液还有一个组分是EDTA，加入浓度为1-2mmol/L，目的是螯合Mg2+ 等离子，防止电泳时激活DNA酶，此外还可防止Mg2+离子与核酸生成沉淀。 TAE是使用最广泛的缓冲系统。其特点是超螺旋在其中电泳时更符合实际相对分子质量（T BE中电泳时测出的相对分子质量会大于实际分子质量），且双链线状DNA在其中的迁移率较其他两种缓冲液快约10%，电泳大于13kb的片段时用TAE缓冲液将取得更好的分离效果，此外，回收DNA片段时也易用TAE缓冲系统进行电泳。TAE的缺点是缓冲容量小，长时间电泳（如过夜）不可选用，除非有循环装置使两极的缓冲液得到交换。 TBE的特点是缓冲能力强，长时间电泳时可选用TBE，并且当用于电泳小于1kb的片段时分离效果更好。TBE用于琼脂糖凝胶时易造成高电渗作用，并且因与琼脂糖相互作用生成非共价结合的四羟基硼酸盐复合物而使DNA片段的回收率降低，所以不宜在回收电泳中使用。 TPE的缓冲能力也较强，但由于磷酸盐易在乙醇沉淀过程中析出，所以也不宜在回收DNA 片段的电泳中使用。 50×Tris-乙酸（TAE）缓冲液终浓度配制1L溶液 成分各成分的用量 2mol/L Tris碱242g 1mol/L 冰乙酸57.1 ml EDTA （pH＝8.0）18.622g （200ml的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0））水补足1L

电泳缓冲液

电泳缓冲液 测序凝胶加样缓冲液 98%去离子甲酰胺 10mol/L EDTA(pH8.0) 0.025%二甲苯青FF 0.025%溴酚蓝 甲酰胺：许多批号的试剂级甲酰胺，其纯度符合使用要求，无须再进行处理。不过，一旦略呈黄色，则应用在磁力搅拌器上将甲酰胺与Dowex XG8混合床树脂共同搅拌1小时进行去离子处理，并用Whatman 1号滤纸过滤2次，去离子甲酰胺分装成小份，充氮存于-70℃。 常用的电泳缓冲液 说明： ①tbe溶液长时间存放后会形成沉淀物，为避免这一问题，可在室温下用玻璃瓶保存5×溶液，

出现沉淀后则予以废弃。 以片都以1×tbe作为使用液（即1：5稀释浓贮液）进行琼脂糖凝胶电泳。但0.5×的使用液已具备足够的缓冲容量。目前几乎所有的琼脂糖胶电泳都以1：10稀释的贮存液作为使用液。进行聚丙烯酰胺凝胶垂直槽的缓冲液槽较小，故通过缓冲液的电流量通常较大，需要使用1×tbe以提供足够的缓冲容量。 ②碱性电泳缓冲液应现用现配。 ③tris-甘氨酸缓冲液用sds聚丙烯酰胺凝胶电泳。 2×sds凝胶加样缓冲液： 100mmol/l tris·hcl(6.8) 200mmol/l二硫苏糖醇（dtt） 4%sds（电泳级） 0.2%溴酚蓝 20%甘油 不含dtt的2×sds凝胶加样缓冲液可保存于室温，应在临用前取1mol/l贮存液现加于上述缓冲液中。 电泳缓冲液 50×Tris-乙酸（TAE）缓冲液 成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量 2mol/L Tris碱 1mol/L 乙酸 100 mmol/L EDTA 水242g 57.1 ml的冰乙酸（17.4 mol/L） 200ml的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0） 补足1L 5×Tris-硼酸（TBE）缓冲液 成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量 445 mmol/L Tris碱 445 mmol/L 硼酸盐 10 mmol/L EDTA 水54g 27.5g 硼酸 20 ml的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0） 补足1L 染料 1％溴酚蓝（bromophenol blue） 加1g水溶性钠型溴酚蓝于100ml水中，搅拌或涡旋混合直到完全溶解。 1％二甲苯青FF（xylene cyanole FF） 溶解1g二甲苯青FF于足量水中，定容到100ml。 10mg/ml的溴化乙锭（ethidium bromide）

常用缓冲液的配制

常用缓冲液的配制 认为帖子很好，转帖，希望对大家有用 乙醇－醋酸铵缓冲液(pH3.7) 取5mol/L醋酸溶液15.0ml，加乙醇60ml和水20ml,用10mol/L氢氧化铵溶液调节pH值至3.7，用水稀释至1000ml，即得。 三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH8.0) 取三羟甲基氨基甲烷12.14g,加水800ml,搅拌溶解，并稀释至1000ml,用6mol/L盐酸溶液调节pH值至8.0,即得。 三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH8.1) 取氯化钙0.294g,加0.2mol/L三羟甲基氨基甲烷溶液40ml使溶解，用 1mol/L盐酸溶液调节pH值至8.1，加水稀释至100ml，即得。 三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH9.0) 取三羟甲基氨基甲烷6.06g,加盐酸赖氨酸3.65g、氯化钠5.8g、乙二胺四醋酸二钠0.37g，再加水溶解使成1000ml，调节pH值至9.0，即得。 乌洛托品缓冲液 取乌洛托品75g，加水溶解后，加浓氨溶液4.2ml，再用水稀释至250ml,即得。 巴比妥缓冲液(pH7.4) 取巴比妥钠4.42g,加水使溶解并稀释至400ml，用2mol/L盐酸溶液调节pH值至7.4，滤过，即得。 巴比妥缓冲液(pH8.6) 取巴比妥5.52g与巴比妥钠30.9g,加水使溶解成2000ml，即得。 巴比妥－氯化钠缓冲液(pH7.8) 取巴比妥钠5.05g,加氯化钠3.7g及水适量使溶解,另取明胶0.5g加水适量，加热溶解后并入上述溶液中。然后用0.2mol/L盐酸溶液调节pH值至7.8，再用水稀释至500ml，即得。 甲酸钠缓冲液(pH3.3)

取2mol/L甲酸溶液25ml，加酚酞指示液1滴，用2mol/L氢氧化钠溶液中和，再加入2mol/L甲酸溶液75ml,用水稀释至200ml,调节pH值至3.25～3.30,即得。 邻苯二甲酸盐缓冲液(pH5.6) 取邻苯二甲酸氢钾10g，加水900ml,搅拌使溶解，用氢氧化钠试液(必要时用稀盐酸)调节pH值至5.6,加水稀释至1000ml，混匀，即得。 枸橼酸盐缓冲液 取枸橼酸4.2g,加1mol/L的20％乙醇制氢氧化钠溶液40ml使溶解,再用20％乙醇稀释至100ml，即得。 枸橼酸盐缓冲液(pH6.2) 取2.1％枸橼酸水溶液，用50％氢氧化钠溶液调节pH值至6.2，即得。 枸橼酸－磷酸氢二钠缓冲液(pH4.0) 甲液：取枸橼酸21g或无水枸橼酸19.2g,加水使溶解成1000ml，置冰箱内保存。乙液：取磷酸氢二钠71.63g，加水使溶解成1000ml。取上述甲液61.45ml与乙液38.55ml混合，摇匀，即得。 氨－氯化铵缓冲液(pH8.0) 取氯化铵1.07g，加水使溶解成100ml，再加稀氨溶液(1→30)调节pH值至8.0，即得。 氨－氯化铵缓冲液(pH10.0) 取氯化铵5.4g，加水20ml溶解后，加浓氯溶液35ml，再加水稀释至 100ml，即得。 硼砂－氯化钙缓冲液(pH8.0) 取硼砂0.572g与氯化钙2.94g，加水约800ml溶解后,用1mol/L盐酸溶液约2.5ml调节pH值至8.0，加水稀释至1000ml，即得。 硼砂－碳酸钠缓冲液(pH10.8～11.2) 取无水碳酸钠5.30g,加水使溶解成1000ml；另取硼砂1.91g，加水使溶解成100ml。临用前取碳酸钠溶液973ml 与硼砂溶液27ml，混匀，即得。硼酸－氯化钾缓冲液(pH9.0) 取硼酸3.09g,加0.1mol/L氯化钾溶液500ml使溶解，再加0.1mol/L氢氧化钠溶液210ml，即得。