抗体选择指南_抗体保存指南_抗体使用说明书样本
抗体选择指南
抗体保存指南
抗体说明书样本
一抗体选择指南
:检测任何目的靶蛋白都有不止一种抗体可供选择，为缩小抗体的选择范围选中合适的抗体，需要考虑如下几种因素：
1. 分析或应用的类型
2. 样本蛋白的结构性质
3. 样本的种属
4. 抗体宿主的种类
5. 抗体的标记和检测
1分析试验的应用类型一般抗体说明书都列出该抗体经试验验证过适用于何种分析类型，如：可以应用于WB IHC ICC ELASA分析等，如果抗体说明书没有提及的应用类型，并不意味着该抗体不适用于此种分析应用类型，而仅是说明尚未经过此种分析试验验证，如果抗体不适用某些分析试验，则会在抗体说明书上标注出来不适于某分析试验。
2 样本蛋白的结构性质了解样本蛋白的结构性质有助于选择最合适的抗体，至少两方面因素需要考虑
(1)..待测样本蛋白的结构域：抗体是由各种不同免疫原免疫宿主而制备得来，其中的免疫原包括：全长蛋白、蛋白片断、多肽、全有机体（如：细菌）或细胞，抗体说明书一般都有免疫原的描述，如果打算检测的是蛋白片断或一种特殊的同型物或蛋白全长的某一区域，则必须选择用含此片段域的免疫原制备出的抗体。如果打算用FACS流式检测活细胞的表面蛋白，则需要选择含该表面蛋白的胞外域来免疫制备的抗体。
(2)样本的提取或处理过程：某些抗体要求样本经过某些特殊处理，例如：许多抗体只识别还原和变性的、表位已暴露不受二级四级结构阻碍的蛋白样本，另一方面，某些抗体仅识别天然折叠状态的蛋白。当选择免疫组化的抗体时，应注意某些抗体只识别未固定的冷冻的组织，而另一些抗体则适用于无需抗原修复解交联步聚的甲醛固定石蜡包埋的组织，这些都会在抗体说明书上应用部分标示出来
3 样本的物种应选择物种相同或有交叉反应的抗体，抗体可能与不同物种的同种靶蛋白有交叉反应，因其氨基酸序列同源性较高，如果样本的种类未列入抗体说明书上的交叉反应种属表中，并不意味着该抗体不适用于检测该物种的蛋白，而只是表示该物种尚未用此抗体检测验证过，应通过序列比对的方法来预测交叉反应，可应用Expasy 和 NCBI BLAST来进行不同物种蛋白同源性比对。
4 一抗宿主物种的选择一般说来，在使用偶联二抗结合无偶联物的一抗时，一抗宿主动物的
物种选择较为重要，对于免疫组化而言，尽可能选择与样本不同种系物种的一抗，从而避免二抗与样本内源性免疫球蛋白产生交叉反应，例如：检测小鼠样本蛋白，则不应选择小鼠或大鼠源的一抗，最好选兔源的一抗，则二抗则可选择偶联了检测分子（酶、荧光素、生物素等）的抗兔IgG。如果选择有偶联物的一抗则不适用上述情况，除免疫组化外的其它对不含内源性免疫球蛋白样本的检测方法，则抗体宿主物种的影响不大，如对不含IgG的细胞裂解物样本的western blotting 检测，尽管如此，含有血清的组织裂解物和组织培养上清中含有免疫球蛋白，还原变性样本中含IgG，在western blot检测中则结合出现IgG分子50 and 25 kDa的重链和轻链条带。
5 二抗的选择二抗应选用与使用的一抗相同的物种来源，例如：如果你的一抗是小鼠的单克隆抗体，二抗则选抗小鼠的二抗anti-mouse secondary。建议检查二抗说明书确保该抗体适用于你的检测应用，二抗一般连接荧光素FITC或发光团。
6 双重染色抗体的选择用未偶联一抗进行细胞培养物或组织切片的双重免疫染色要求一抗
来源于不同物种并且二抗分别识别其中之一，二抗说明书应描述其与其它物种来源的免疫球蛋有否有交叉吸附。
7荧光和化学发光标记连接于二抗的标记物是为了检测抗体的结合，选择标记物依赖于几个参数：检测方法：荧光或着色沉淀，荧光标记物用特殊波长的光激发时发射出可见光，下表列出了几种荧光素的分子特征：
荧光素颜色激发波发射波长分子量Aminomethylcoumarin (AMCA) Blue 353 440 410
Fluorescein (FITC) Green 495 528 390
Fluorescein (DTAF) Green 495 528 530
Rhodamine (TRITC) Red 550 570 444
Texas Redtm Red 596 620 625
Cy2tm Green 489 505 897
Cy3tm Orange 552 565 949
Cy3.5tm Scarlet 581 596 1,286
Cy5tm Far-Red 650 667 975
Cy5.5tm Near Infra-Red678 703 1,312
Cy7tm Near Infra-Red743 767 1,001
R-Phycoerythrin (RPE) Red 488 575 240,000
B-Phycoerythrin (BPE) Red 545 575 240,000
C-Phycocyanin Red 618 640 110,000
R-Phycocyanin Red 615 620 110,000
二抗连接标记酶HRP and AP 与其底物产生有颜色的沉淀物 辣根过氧化物酶
Horseradish peroxidase (HRP) 碱性磷酸酶
Alkaline phosphatase (AP)
AEC (red) Fast red (pink) DAB (brown) INT (yellow / brown) NBT (brown / purple) New Fuchsin (red) TNBT (purple) Vega red (pink)
封片介质（仅免疫组化）. AEC, Fast Red, INT 或其它水性发光基团是可以醇溶的并要求水性封片. 除上述之外的发光基团是有机的所以最好使用有机性封片介质。
荧光素标记物要求水性封片介质，藻红蛋白(藻青素 / 藻红素要求不添加甘油的水性封片介质，因其有淬灭荧光的效应，
生物素化的抗体通常用于加强亲和素-生物素-酶或荧光素复合物（ABC 试剂 或亲和素或链霉亲和素连接酶或荧光素的信号）
封片介质
抗体保存指南
抗体保存得当与否，直接决定了抗体的活性和使用效果！如果抗体保存得当，大部分抗体活性都可以维持数月甚至数年。本指南以abcam抗体保存方法为主，同样也可以应用到其他绝大部分公司的抗体产品！
请谨记！无论何时请按照说明书推荐的保存条件正确保存抗体！
1. 收到抗体后请务必在12000rpm离心20-30s后再打开管盖进行分装和保存！
质优的抗体使用非常特殊的储存管，只有在12000rpm离心20-30s才能将附着在管壁或盖内的抗体全部离心下来。即使是在10000rpm离心也会导致离心不完全，导致出现抗体的量不足的现象！
o 2. 对于大部分抗体，比较合适的保存方式是分装后保存在 -20度 or -80度对绝大多数抗体来说，保存在-20度是完全足够了。没有任何证据显示保存在-80
度 会有更多的好处！
o分装可以最大程度的降低反复冻融对抗体活性的损害，同时也降低了由于多次从同一管中吸取抗体造成的污染可能性。
o分装的量以一次实验用完为好，最少不能少于10ul每份。因为分装体积越小，抗体的浓度越可能会受到蒸发以及管壁吸附的影响
o复融后的分装抗体如果一次用不完，将剩余母液保存在4度，避免再冻起来！
o抗体工作液应该当天配制当天用完，在4度 尽量不要超过1天。
o绝对避免将抗体保存在自动除霜冰箱中。尽量将抗体保存在冰箱里层，而不是门上
3. 大部分抗体收到后4度短暂保存1-2周对抗体活性是没有影响的。
如果抗体很快（1-2周）会使用，推荐在4度保存，这是为了避免反复冻融对抗体活性的损害。如果要长期保存则最好是在-20度 or -80度。最关键的一点是要根据说明书推荐的方式来正确的保存抗体！
但是，腹水形式的产品请在收到后立即冻起来！因为该类产品含有大量的蛋白酶，长期在4度保存会导致抗体的降解！
4. 大部分抗体的运输条件：一般的运输过程需要1-2周的时间，所以是在4度的条件下来完成的。
4度运输最主要的目的是为了避免反复冻融对抗体活性的损害（如果使用干冰运输，那么收到时抗体是冻起来的，为了分装就需要解冻。这就多了一次冻融的过程）。所以运输过程中绝对避免干冰运输！
特殊抗体的保存条件：
1.酶联抗体：永远保存在4度，避免冻起来。否则会导致酶活性的下降或者丧失
2.偶联抗体：所有偶联抗体都是在棕色管中或使用锡箔纸避光保存。尤其是荧光抗体，对
光极为敏感，因此在所有的实验阶段也是要避光操作的！
3.IgG3的同型对照：永远保存在4度，避免冻起来。因为如果出现冻融过程，该抗体非常
容易形成多聚体
无论是保存还是运输，绝对避免反复冻融！
反复冻融会导致抗体变性，导致多聚体形成，从而降低抗体的结合能力！
抗体保存其它相关信息：
关于加入甘油保存：有些人会加50%的甘油到抗体中来避免反复冻融，甘油在-20度 会降低冰点。这对很多抗体可能是可行的。但是abcam仅对非常小的一部分抗体检测过其在这种条件下的稳定性；而abcam只对按照推荐条件保存的抗体提供质量保证！加入甘油的溶液不建议在-80度保存，因为这已经超过了甘油的冰点。如果您要加入甘油来保存抗体的话，请谨慎注意无菌操作，避免污染！
关于蛋白保护剂：
蛋白在高浓度时更不容易降解（1 mg/ml 或者更高），这就是为什么在抗体中加入BSA之类作为稳定剂的原因了；另一方面，加入的蛋白也可以减少抗体由于管壁吸附所造成的损失。但是如果抗体要用来标记的话，则不能加入蛋白稳定剂，因为这些稳定剂会和抗体一起竞争结合标记物。
关于叠氮化钠（sodium azide）的使用：
为了防止微生物污染，叠氮化钠经常被加入到抗体中（终浓度0.02% (w/v)）。Abcam的很多抗体已经含有了0.02％-0.05%的叠氮化钠，在说明书的“Storage buffer”中有标明的。
在下述情况中不能使用叠氮化钠：
?如果抗体用于染色或处理活细胞，用于体内研究：
叠氮化钠在抵抗微生物的同时，对其它大部分有机物也是有毒的，因为它阻断了线粒体的cytochrome electron transport system.
?要偶联带有氨基基团的抗体：
叠氮化钠会干扰任何含有氨基基团的偶联，因此在进行偶联之前，应将叠氮化钠去除。偶联后的抗体可以加入叠氮化钠保存，但是浓度只能是0.01％。对于需要偶联的抗体，thimerosal (merthiolate)可以替代叠氮化钠作为保护剂！
注：叠氮化钠的去除方式：
可以通过凝胶电泳或过滤的方式去除！IgG的分子量是150kDa (IgM 是~ 600kDa); 叠氮化钠的分子量只有65Da。使用cut off 14kDa的滤膜即可将叠氮化钠从抗体中去除
抗体说明书样本
Product Name NFkB p105 / p50 antibody [E381] (注:E381是指克隆号)
Product type Primary antibodies
Description Rabbit monoclonal [E381] to NFkB p105 / p50 Immunogen A synthetic peptide corresponding to residues in the
nuclear factor NFkB p50 subunit.
Reacts with Hu, Ms, Rat (注:人小鼠大鼠)
Specificity This antibody will detect both forms: p50 and p105.
Tested applications Flow Cyt, ICC, IHC-P, WB(流式细胞分析免疫细胞化学免疫组织化学-石蜡包埋 western bloting)
Application notes Recommended dilutions
Flow Cyt: 1/30.
ICC: 1/250 - 1/500.
IHC-P: 1/250 - 1/500.
WB: 1/5000. Detects bands of approximately 50 and 105 kDa
(predicted molecular weight: 50 and 105 kDa).
Is unsuitable for IP.
Not yet tested in other applications.
Optimal dilutions/concentrations should be determined by the end
user.
Positive control HeLa cell lysate; human prostate carcinoma
Cellular localization Nuclear, but also found in the cytoplasm in an inactive form
complexed to an inhibitor (I kappa B).
Research areas Cancer>>Signal transduction>>Nuclear signaling>>NFkB pathway
Chromatin>>Transcription>>Transcription Factors
Nuclear Signaling>>Nuclear Signaling Pathways>>NFkB pathway
Nuclear Signaling>>Transcription>>Other factors
Cell Biology>>Signal Transduction>>Nuclear Signaling>>NFkB
Pathway
Immunology>>Innate Immunity>>Macrophage / Inflamm.
Cell Biology>>Apoptosis>>Intracellular>>NFkB>>p50
Relevance NFkB is a transcription regulator that is activated by various intra and
extra cellular stimuli such as cytokines, oxidant free radicals,
ultraviolet irradiation, and bacterial or viral products. NFkB is a family
of transcription factors that consists of homo and heterodimers of
NFkB1/p50 and RelA/p65 subunits, and controls a variety of cellular
events including development and immune responses. All members
share a conserved amino terminus domain that includes dimerization,
nuclear localization, and DNA binding regions, and a carboxy terminal
transactivation domain. Serines 529 and 536 in the transactivation
domain of RelA/p65 are phosphorylated in response to several stimuli
including phorbol ester, IL1 alpha and TNF alpha as mediated by IkB
kinase and p38 MAPK. Serine 529 is located in a negatively charged
region (amino acids 422-540) that is phosphorylated in response to
phorbol myristate acetate plus calcium ionophore activation.
Phosphorylation of serines 529 and 536 is critical for RelA/p65
transcriptional activity. Activated NFkB translocates into the nucleus
and stimulates the expression of genes involved in a wide variety of
biological functions. Inappropriate activation of NFkB has been
associated with a number of inflammatory diseases while persistent
inhibition of NFkB leads to inappropriate immune cell development or
delayed cell growth.
Alternative names for NFkB p105 / p50 antibody [E381] (ab32360) Database links The links below go to external sites and will open in a new browser
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Entrez Gene 4790 (Human) 18033 (Mouse) 81736 (Rat)
GeneCar d GC04P103880 (Hum an)
Omim164011 (Human) SwissPr
ot
P19838 (Hum
an)
P25799 (Mous
e)
Q63369 (Rat) Unigene431926 (Huma
n)
Raised in Rabbit
Clonality Monoclonal
Clone number E381
Isotype IgG
Purity Protein A purified
Storage buffer Preservative: 0.01% Sodium Azide
Constituents: 40% Glycerol, 0.05% BSA, 0.15M Sodium chloride,
50mM Tris glycine. pH 7.4
Material safety datasheets (MSDS) for this product:
Form Liquid
Storage instructions Shipped at 4°C. Upon delivery aliquot and store at -20°C. Avoid freeze
/ thaw cycles.
NFkB p105 / p50 antibody [E381] images:
Western blot - NFkB p105 / p50 antibody [E381] (ab32360)
NFkB p105 / p50 antibody [E381] (ab32360) at 1/5000 dilution + HeLa cell lysate
Predicted band size : 50 kDa
Observed band size : 50,105 kDa
Immunohistochemistry (Paraffin-embedded sections) -NFkB p105 / p50 antibody [E381] (ab32360)
Paraffin-embedded human prostate carcinoma
ab32360 at 1/250 dilution
鸡新城疫抗体(NDV-Ab)说明书
鸡新城疫抗体（NDV-Ab）酶联免疫分析（ELISA） 试剂盒使用说明书 本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定鸡血清，血浆及相关液体样本中新城疫抗体（NDV-Ab）的含量。 实验原理： 本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中鸡新城疫抗体（NDV-Ab）水平。用纯化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，往包被单抗的微孔中依次加入新城疫抗体（NDV-Ab），再与HRP标记的抗原结合，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的新城疫抗体（NDV-Ab）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中鸡新城疫抗体（NDV-Ab）浓度。 试剂盒组成： 试剂盒组成48孔配置96孔配置保存 说明书1份1份 封板膜2片（48）2片（96） 密封袋1个1个 酶标包被板1×481×962-8℃保存 标准品：1800ng/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存 20倍浓缩洗涤液20ml×1瓶30ml×1瓶2-8℃保存 样本处理及要求： 1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上 清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。 2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心 20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。 3.尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程 中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。 4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/ 分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
常用的单克隆抗体检测方法
常用的单克隆抗体检测方法 通过杂交瘤技术制备单克隆抗体，在杂交瘤制备完成后，需要对抗体进行一个检测，本文介绍了几种常用的抗体检测的方法（1）免疫酶技术免疫酶技术是将抗原抗体反应的特异性和酶对底物显色反应的高效催化作用有机结合而 成的免疫学技术。由于它特异性强，灵敏度高，现已广泛用于筛选和鉴定单抗。①器材和试剂a、包被缓冲液：碳酸盐缓冲液：取0.2mol/L Na2CO3 8ml，0.2mol/L NaHCO3 17ml 混合，再加75ml蒸馏水，调PH至9.6。Tris-HCl缓冲液（PH8.0，0.02mol/L）：取0.1mol/L Tris 100ml，0.1mol/L HCl 58.4ml混合，加蒸馏水至1000ml。b、洗涤缓冲液（PH7.2的PBS）：KH2PO4 0.2g，KCl 0.2g，Na2HPO4·12H2O 2.9g，NaCl 8.0g，Tween-20 0.5ml，加蒸馏水至1000ml。c、稀释液和封闭液：牛血清白蛋白（BSA）0.1g，加洗涤液至100ml；或用洗涤液将小牛血清配成5-10%使用。d、酶反应终止液（2mol/L H2SO4）：取蒸馏水178.3ml，滴加浓硫酸（98%）21.7ml。e、底物缓冲液（PH5.0，磷酸盐-柠檬酸缓冲液）：取0.2mol/L Na2HPO4 25.7ml，0.1ml/L柠檬酸24.3ml，再加50ml蒸馏水。柠檬酸溶液及配成的底物缓冲液不稳定，易形成沉淀，因此一次不宜配制过多。f、底物使用液：OPD底物使用液（测490nm的OD值）：OPD 5mg，底物缓冲液10ml，3% H2O2
0.15ml。TMBS或TMB底物使用液（测450nm的OD值）：TMBS或TMB（1mg/ml）1.0ml，底物缓冲液10ml，1% H2O2 25ul。ABTS底物使用液（测410nm的OD值）：ABTS 0.5mg，底物缓冲液1ml，3% H2O2 2ul。g、抗体对照：以骨髓瘤细胞培养上清作为阴性对照，以免疫鼠血清作为阳性血清。h、抗原：可溶性抗原：尽量纯化，以获得高特异性。病毒感染的传代细胞或全菌抗原。淋巴细胞等悬液。i、酶标抗鼠抗体或酶标SPA或其他类似试剂。j、细胞固定液：-20℃丙酮；或丙酮-甲醛固定液：Na2HPO4 100mg，KH2PO4 500mg，蒸馏水150ml，丙酮225ml，甲醛125ml；或丙酮-甲醛溶液（1；1）；或-20℃甲醇。k、聚苯乙烯微孔板：40孔、96孔、或条孔；硬板或软板均可使用。l、酶联免疫阅读仪；或光镜。m、吸管、加样器及水浴箱、离心机等。②可溶性抗原的酶联免疫吸附试验（ELISA）a、纯化抗原用包被液稀释至1-20ug/ml。 b、以50-100ul/孔量加入酶标板孔中，置4℃过夜或37℃吸附2小时。 c、弃去孔内的液体，同时用洗涤液洗3次，每次3-5分钟，拍干。 d、每孔加200ul封闭液4℃过夜或37℃封闭2小时；该步骤对于一些抗原，可省略。 e、洗涤液洗3次；此时包被板可-20℃或4℃保存备用。 f、每孔加50-100ul 待检杂交瘤细胞培养上清，同时设立阳性、阴性对照和空白对照；37℃孵育1-2小时；洗涤，拍干。 g、加酶标第二抗体，每孔50-100ul，37℃孵育1-2小时，洗涤，拍干。 h、加底物
多克隆抗体的制备,纯化及检测
实验九 多克隆抗体的制备，纯化及免疫电泳 【实验目的】 ⒈ 加深对抗体基本知识的了解。 ⒉ 了解多克隆抗体的制备及纯化的基本方法。 ⒊ 了解免疫电泳的基本过程和实验依据。 一、多克隆抗体的制备 【实验原理】 当将抗原注射入实验动物体内时，一系列抗体生成细胞会不同程度的与抗原结合，受抗原刺激后在血液中产生不同类型的抗体，这种由一种抗原刺激产生的抗体称为多克隆抗体。多克隆抗体中不同的抗体分子可以以不同的亲和能力与抗原分子表面不同的部分—抗原决定簇相结合。 将抗原导入敏感动物体内后，可刺激网状内皮细胞系统，尤其是淋巴结和脾脏中的淋巴细胞大量增殖。如图所示，实验动物对初次免疫和二次免疫的应答有明显的不同。通常初次免疫应答往往比较弱，尤其是针对于易代谢，可溶性的抗原。首次注射后大约7天，在血清中可以观察到抗体但抗体的浓度维持在一个较低的水平，在大约10天左右抗体的滴度会达到最大值。但同种抗原注射而产生的二次免疫应答的结果明显不同，和初次免疫应答相比抗体的合成速度明显增加并且保留时间也长。 免疫应答的动力学结果取决于抗原和免疫动物的种类，但初次和二次免疫应答之间的关系是免疫应答的一个重要特点。三次或以后的抗原注射所产生的应答和二次应答结果相似：抗体的滴度明显增加并且血清中抗体的种类和性质发生了改变，这种改变被称为免疫应答的成熟，具有重要的实际意义。通常在抗原注射4-6周后会产生具有高亲和力的抗体。 【实验材料】 ⒈ 实验动物 初次抗原注射后的周次 0 1 2 3 4 5 6 7 初次免疫 二次免疫 血 清 中 抗 体 的 水 平
成年兔。 ⒉实验器材 特制兔盒；刀片；25G针头；1ml注射器；20 ml 血液收集管；药铲；离心机以及塑料离心管；加样器及加样管；烧杯。 ⒊实验试剂 ⑴抗原；乙醇；20mM 磷酸缓冲溶液pH7.2。 ⑵福氏完全佐剂和福氏不完全佐剂： 【实验方法】 ⒈抗原的制备 抗原制备的主要目的在于在免疫动物体内产生最强、最适当的抗体。由于纯化的抗原适合产生抗体，因此在注射前通常采用一些经典的方法，比如柱层析、分级萃取、亚细胞分离等进行抗原的分离和纯化。如果多肽抗原在SDS/PAGE中为可见的单一带，抗原从凝胶中的抽提可作为纯化的最后一个步骤。 ⒉预放血 轻轻的将兔子放在特制兔盒中，处于放松状态的兔子采血会较容易。按压兔子耳根部直至血管突出,然后将针头插入耳部血管的中上部，观察到进针后小心推出活塞收集血液1ml -5ml。结束收集后，退出针头并按压伤处以制止血流，再用乙醇消毒。取收集的血液在37°C 恒温箱中放置30分钟以防止激活补体系统，再将试管在4°C放置过夜使血液凝固。用药铲将血凝块从管壁上拨落，将血液转移至塑料离心管中，4°C，10,000g离心10分钟，收集上清液在4°C保存。 ⒊注射抗原 ⑴准备两只成年兔，将100μg抗原/兔溶入1ml磷酸缓冲溶液中待用。在1ml福氏不完全佐剂中加入分枝杆菌制成完全佐剂，并加入1ml抗原溶液，剧烈震荡使之充分乳化，用3ml注射器抽取该乳化液，接上25G针头，排除注射器中的气泡。从笼中取出兔子放在平坦处，在4个不同的部位进行皮下注射，两处在后背，两处在大腿处。抚去注射处的兔毛并用乙醇消毒暴露的皮肤。捏出皮肤，将针头以相对皮肤15度的角度进针，进针深度为1cm-2cm，小心不要刺入肌肉中，在4个不同部位分别各注射约500μl抗原溶液。注射结束后，将针在注射处放置几秒钟后再轻轻拔出，并用乙醇在注射处消毒。在4个部位重复上述操作。用相同方法免疫另一只家兔。 ⑵每4-6周注射抗原，并在注射后的7天-10天按照步骤2收集血液。将收集的血液与注射前收集的血液进行比较，检查是否有抗体产生。待确定产生抗体后可大量收集血液，但每只兔子收集血液不能多于40ml以防止休克。 ⒋收集血液 ⑴将家兔轻轻放入固定架上,二甲苯涂于耳部血管的上中部，用刀片倾斜45°在该处切出0.23cm-0.3cm的切口使血液能自由的流出。用消毒后的管收集滴出的血液，若在结束之前出现凝固可用温水轻擦切口处，再继续收集。收集适量血液后可用消毒后的纱布轻擦患处，轻按患处10秒-20秒确定血流停止后方可结束。
抗体纯化的方法有哪些
抗体纯化的方法有哪些？ 抗体制备出来之后，需要进一步纯化得到纯的多抗或单抗，既有利于保存也有利于排除杂蛋白对结果的影响。常规用于纯化的材料是腹水和细胞培养上清，而通常经过免疫制备的 硫酸铵沉淀法： 基本原理：高浓度的硫酸铵通过与球蛋白竞争水分子破坏蛋白表明的水化膜，降低球蛋白的溶解性，是分离免疫球蛋白的常用方法，而且不同的免疫球蛋白适宜的硫酸铵浓度也稍有差别，一般用来分离抗体的硫酸铵饱和度在33~50%。 适用于：鼠抗所有亚类、其他种属抗体、任何种属的IgM、IgG、IgA 基本操作： 1.过滤、离心腹水或者培养上清得上清； 2.加入饱和硫酸铵至终浓度45%，静置沉淀蛋白； 3.沉淀蛋白用最小体积PBS或硼酸盐缓冲液溶解，用PBS或硼酸盐缓冲液透析除盐； 4.过聚丙烯酰胺葡聚糖凝胶柱，PBS或硼酸盐（含0.02%叠氮钠）缓冲液洗脱； 5.电泳检测分子量大小，分光光度法测定抗体浓度； 6.抗体保存浓度在0.1-30 mg/mL适宜，-20℃保存不超过一个月，避免反复冻融。 亲和层析法 基本原理：基因工程改造的protein A和protein G能特异性结合哺乳动物IgG的Fc区段，将protein A和protein G结合到柱料上，通过亲和层析的方式，可将IgG及其亚类与片段纯化出来。 成员介绍：protein A分离自Staphylococcus aureus的细胞壁，分子量42 kDa，由spa 基因编码，具有五个同型的免疫球蛋白结合结构域，每个结构域由三个α螺旋构成。 protein A的B结构域
protein A的各个结构域 protein A可结合多数免疫球蛋白的Fc段（尤其是人的IgG1、IgG2、IgG4，豚鼠，猕猴，鼠类IgG2a、兔）以及人VH3家族的Fab段。基因工程改造的protein A通常使用大肠杆菌作为表达宿主，表达产物仍含有五个Fc结合结构域。对其结构上的改造主要是为了增加与多孔性材料的偶联性能，也有的改造protein A含有四个或六个同型Fc结合结构域，另外结构域数目较少的protein A能得到更好的抗体纯化效果。 protein G分离自G Streptococcus的细胞壁，分子量65 kDa，由spg基因编码，可结合抗体的Fc段、Fab段以及血清中的白蛋白。基因工程改造的protein G去掉了与白蛋白的结合位点仅仅保留Fc结合结构域，其结合力较protein A更强。 protein G的B结构域 protein G的各个结构域 还有一种protein A/G蛋白，是基因工程改造产物，是将protein A的4个Fc结合结构域与protein G的2个Fc结合结构域融合表达得到的。protein A/G结合了二者的特性，能结合人和鼠的IgG所有亚型，不结合鼠的IgA、IgM。 ①proteinA亲和层析 适用于：人（IgG3除外）、兔、豚鼠、猪的抗体； 基本操作： 1.过滤、离心腹水或者培养上清得上清； 2.调节pH到8.0：腹水以10倍体积pH8.0 PBS稀释、培养上清用pH8.0 PBS透析或强氧化钠调节； 3.过proteinA琼脂糖凝胶柱，pH8.0 PBS洗杂； 4.柠檬酸缓冲液洗脱抗体（小鼠IgG1用pH6.5，IgG2a用pH4.5，IgG2b和IgG3用pH3.0），并注意收集管内需加入Tris缓冲液中和滴下的抗体溶液； 5.用PBS透析；
重组抗人PD-1人源化单克隆抗体说明书
K E X I N科昕生物 北京科昕生物科技有限公司 重组抗PD-1全人单克隆抗体(细胞培养级别) Recombinant anti-Human PD-1 Functional Monoclonal Antibody （Cell Culture Grade） 产品说明： PD1 全人单抗可以有效地封闭PDL1 和PD1 的结合，并且不会引起 HAMA 反应（人抗鼠抗体反应）。PD1 的抗体已作为广谱性抗肿瘤药物被接受，也可能成为最有效地平衡细胞治疗的工具。PD1 是激活的T细胞、B 细胞以及髓样细胞膜表面重要的免疫调控受体。与配体PDL1和PDL2 结合，抑制T 细胞增殖和细胞因子分泌，影响细胞治疗的效果。近来研究发现，DC 细胞含有PDL1，DC‐CIK 联合治疗时，PDL1 可能是潜在的细胞治疗的负调节因素。PD‐1 主要在活化的T、B 和NK 等细胞上呈诱导性表达,PD‐1 有PD‐L1(B7‐H1,CD274)和PD‐L2(B7‐DC,CD273)两个配体。PD‐L1 广泛组成性表达于多种实质器官组织、免疫细胞以及多种类型的肿瘤细胞上,而PD‐L2 仅表达于活化的巨噬细胞、树突状细胞、骨髓来源的基质细胞和个别肿瘤细胞株。PD‐1 随T 细胞活化程度逐步上调表达,与PD‐L 结合后引发抑制信号的产生，致使效应性T 细胞失能并及时进入凋亡。 本产品系由单克隆细胞株表达并高度纯化后的抗体经超滤换液分装制成。 本产品为无菌澄明液体，由含有 10mM PBS pH为 7.2的蛋白溶液经0.2um过滤后分装。 规格参数： 货号：kx10-1 体积：50ul/500ul/1ml 浓度：1mg/ml. 质量控制： 纯度：经高效液相色谱（SEC-HPLC）和SDS-PAGE检测，纯度大于98.0%. 内毒素：小于1EU/mg. 使用说明： 建议长期-80℃分装保存，无菌条件下操作，避免污染。 具体用量需通过预实验确定。 1
单克隆抗体Gazyva(obinutuzumab)注射液使用说明书
单克隆抗体Gazyva(obinutuzumab)注射液使用说明书 2013年第一版 Gazyva(obinutuzumab)注射液使用说明书2013年第一版 新生物制品 批准日期：2013年11月1日；公司：Genentech 药物是第一个具有突破性的治疗指定获得FDA批准 Gazyva是具有突破性的治疗指定获得FDA批准第一个药物。这个指定被承办单位请求和在递交给FDA支持上市批准的生物制品许可申请后很快被授权。在承办单位请求时如果初步临床证据表明药物可能对有严重或危及生命疾病患者可能提供超过可得到治疗重大改善时，FDA可以指定某个药物是突破性治疗。 优先审评，孤儿产品指定 FDA的药物评价和研究中心血液学和肿瘤学产品室主任Richard Pazdur，M.D.说：“今天的批准代表对有CLL患者一个重要的新添加治疗”“这个批准反映对突破性治疗指定程序的承诺，允许我们与公司合作加快发展，审查和提供重要的新药物。”。 https://www.sodocs.net/doc/8a14926700.html,/drugsatfda_docs/label/2013/125486s000lbl.pdf 处方资料重点 这些重点不包括安全和有效使用GAZYVA所需所有资料。请参阅GAZYVA完整处方资料。 GAZYVA(obinutuzumab)注射剂，为静脉输注 美国初次批准：2013
适应证和用途 GAZYVA(obinutuzumab)是一种针对CD20溶细胞抗体和适用于与苯丁酸氮芥[chlorambucil]联用，为有既往未治疗过慢性淋巴性白血病患者的治疗。(1，14) 剂量和给药方法 （1）用糖皮质激素，对乙酰氨基酚[acetaminophen]和抗组织胺预先给药。(2.2) （2）为静脉输注稀释和给药。不要静脉推注或丸注。(2.1) （3）对6个疗程推荐剂量(28天疗程)： 1）在疗程1第1天100 mg 2）在疗程1第2天900 mg 3）在疗程1第8和15天1000 mg 4）在疗程2-6第1天1000 mg (2.1) 剂型和规格 1000 mg/40mL (25 mg/mL)单次使用小瓶. (3) 禁忌证 无。 警告和注意事项 （1）输注反应：患者用糖皮质激素，对乙酰氨基酚和抗组织胺预先给药。输注期间严密监视. 对反应中断或终止输注。(2.2，5.3) （2）肿瘤溶解综合征：预料肿瘤溶解综合征;用抗高尿酸血症药物预先给药和充分水化尤其是对有高肿瘤负荷和/或高循环淋巴细胞计数患者。纠正电解质异常，提供支持性医护和监视肾功能和液体平衡。(5.4) （3）中性粒细胞减少：对感染监视。(5.6) （4）血小板减少：监视血细胞计数和出血。出血的处理可能需要血液制品支持。(5.7) （5）免疫接种：不要给活病毒疫苗GAZYVA给予前或期间。(5.8) 不良事件 最常见不良事件(发生率≥10%)是：输注反应，中性粒细胞减少，血小板减少，贫血，发热，咳嗽，和肌肉骨骼疾病。(6) 完整处方资料
多克隆抗体的制备方法
多克隆抗体的制备方法 多克隆抗体的概念：由多个B淋巴细胞克隆所产生的，受到多种抗原决定簇刺激并可与多种抗原表位结合的抗体。多克隆抗体的制备主要包括以下几个步骤：免疫动物、佐剂、免疫原、免疫、取血等。 多克隆抗体的制备步骤 一、器材 剪刀(剪兔毛用)一把、弯头眼科手术镊子(游离血管用)一把、直头眼科手术剪(剪血管用)一把，手术刀架，手术刀片，注射器(1ml、10ml，25ml)附针头，兔子固定架，灭菌三角烧瓶(200ml)或平皿(直径18cm)、弯头止血钳四把，直头止血钳两把，手术缝合线，塑料放血管，纱布等。 二、试剂 生理盐水(或PBS) 弗氏完全佐剂(Freund’s complete adjuvant，FCA) 弗氏不完全佐剂(Freund’s incomplete adjuvant，FIA) 二甲苯，酒精棉，脱脂棉，2% NaN3 三、免疫原：蛋白或KLH偶联的多肽。每次免疫100-200μg免疫原。 四、兔子的选择 兔子的重量应在四斤以上，两耳光滑，明显可见耳静、动脉，健康。 五、免疫 用生理盐水稀释免疫原，然后与相应的佐剂进行1:1混合。抗原和佐剂完全混合形成稳定的乳剂，将该乳剂在兔子双肩周围的皮肤下进行皮下注射和后大腿进行肌肉注射。每个区域大约用1/4的免疫原。这样免疫原可以持久存在从而提高免疫应答。 注：
抗原注射以前需要收集一些正常血清，已备检测抗体时作为阴性对照。待兔子在新环境中稳定，大概需要四天左右时间，可以进行耳动脉取血。取血量约5ml足矣。 免疫用的抗原必须纯化，否则影响抗体的质量。抗原经FCA或FIA充分乳化后才能注射。将抗原液与佐剂等比例混合后，置于混合器上使之剧烈振荡使抗原充分乳化，乳化过程比较费时、费力，但若乳化不充分，会影响免疫的效果，振荡后，1000rpm离心一分钟，如水相和油相不分层即可注射。首次免疫用FCA，以后都用FIA。 免疫方法可采用背部多点注射法。即于家兔脊柱两旁选4-6点皮下注射，每点注0.1ml，间隔2周后再于上述部位选不同点注射(不要选择临近位点，否则溃疡愈合不好)。每次免疫的抗原量约100μg。免疫次数在四五次即可，抗原用量大可以减少次数。 六、取血： 免疫一周后，可以耳动脉取血检测抗体效价。因为起初几次免疫产生的抗体的效价比较低，头两次取血，够检测用即可。在三次免疫后，可以获得较高效价的抗体，每次取血量可以在40ml，不要取太多，否则会造成兔子贫血。 前几次取血用19号针头对兔子进行耳动脉取血，室温过夜析出血清。 最后一次取血可以采用颈动脉放血，具体操作如下： 1、家兔仰卧于兔架上固定头部，用纱布固定四肢。头部略放低以暴露颈部。剃毛并消毒皮肤。 2、沿颈部中线用手术刀切开皮肤约10cm，分离皮下结缔组织，直至暴露出气管两侧的胸锁乳突肌(小心操作，如碰到小血管出血，可用止血钳止血)。 3、用直头止血钳分离胸锁乳突肌与气管间的颈三角区疏松组织，暴露出颈总动脉后用弯头眼科镊使之游离，剥离神经和结缔组织。 4、于动脉下套入两根黑丝线，分别置于远心及近心端。结扎远心端的丝线。近心端的动脉用血管夹夹住。 5、用小拇指垫在血管下，用尖头眼科手术剪在两根丝线间的动脉璧上剪一小口(勿剪断)，插入塑料放血管。再将近心端的丝线结扎固定于放血管上，以防放血管滑脱。 6、松开止血钳，使血液流入容器中。一般一只家兔可放血100-120ml。
抗体工程重点总结
简答题 1.简述鼠源性单抗的改造原则及常见类型 a)改造原则：降低其免疫原性、尽量保持其亲合力 b)常见类型：人鼠嵌合抗体、CDR移植抗体、小分子抗体 2.噬菌体抗体库技术的主要流程及优点 a)噬菌体抗体库技术：借助噬菌体展示技术，将抗体V基因与噬菌体外壳蛋白基因 融合表达于噬菌体表面，从而构建噬菌体抗体库，然后通过筛选获得特异性抗体的 V区基因。 b)主要流程： i.扩增全套抗体基因 ii.构建合适的重组噬菌体表达载体 iii.转化大肠杆菌并保存 c)优点： i.省时省力 ii.筛选容量大 iii.直接得到抗体基因 iv.可制备人源抗体和其它难于制备的抗体 v.可原核表达 d)缺点： i.库容受转化效率限制：一般不超过1010 ii.一些抗体分子会抑制宿主菌生长 iii.具极高亲和力的抗体与抗原结合后，难以洗脱，造成丢失 3.简述基因工程抗体的各表达系统的优缺点 a)哺乳动物细胞表达系统： i.优点： ①. 具有完整的转录、翻译后加工及分泌机制，抗体能被准确子合成、加工和 分泌 ②. 具有完全糖基化功能和完善的重折叠机制，可表达形成良好活性的抗体分 子 ③. 可实现抗体的分泌表达 ④. 既可表达完整的抗体分子，也适合表达其它形式的小分子基因工程抗体 ii.缺点： ①. 构建周期长，操作繁琐 ②. 表达量相对低，成本较高 ③. 大规模生产受限 ④. 具潜在致癌性和病毒核酸的污染可能 iii.常用的宿主细胞 ①. 淋巴细胞：主要是小鼠骨髓瘤细胞SP2/0、NSO ②. 非淋巴细胞：常有的细胞有CHO、COS b)大肠杆菌表达系统： i.优点： ①. 遗传背景清楚 ②. 产量高：130—150mg／L
caspase1抗体说明书
SANTA CRUZ BIOTECHNOLOGY, INC. caspase-1(14F468):sc-56036 Santa Cruz Biotechnology,Inc. 1.800.457.3801831.457.3800fax 831.457.3801Europe +https://www.sodocs.net/doc/8a14926700.html, BACKGROUND Caspase-1,originally designated ICE (for IL-1converting enzyme),is a member of the group of caspases with large prodomains.Caspase-1promotes matura-tion of interleukin IL-1βand interleukin18(IL-18)by proteolytic cleavage of precursor forms into biologically active pro-inflamatory cytokines.Active caspase-1,a (p20/p10)2tetramer,is necessary and sufficient for cleavage of precursor IL-1as well as for induction of apoptosis in some cell lines.The highly conserved family of caspases mediate many of the morphological and biochemical features of apoptosis,including structural dismantling of cell bodies and nuclei,fragmentation of genomic DNA,destruction of regulatory proteins and propagation of other pro-apoptotic molecules.The human cas-pase-1gene maps to chromosome 2q14and encodes a cytoplasmic protein expressed in liver,heart,skeletal muscle kidney and testis.caspase-1is implicated in inflammation,septic shock,and other situations such as wound healing and the growth of certain leukemias. REFERENCES 1.Alnemri,E.S.,et al.1995.Cloning and expression of four novel isoforms of human interleukin-1βconverting enzyme with different apoptotic activities.J.Biol.Chem.270:4312-4317. 2.Gu,Y.,et al.1995.Interleukin-1βconverting enzyme requires oligomer-ization for activity of processed forms in vivo .Embo J.14:1923-1931. 3.Tatsuta,T.,et al.2000.The prodomain of caspase-1enhances Fas-mediated apoptosis through facilitation of caspase-8activation.J.Biol.Chem.275:14248-1425 4. 4.Wang,J.,et al.2000.Role of caspases in apoptosis,development,and cytokine maturation revealed by homozygous gene deficiencies.J.Cell.Sci.113:753-757. 5.Eldadah,B.A.and Faden,A.I.2000.Caspase pathways,neuonal apopto-sis,and CNS injury.J.Neurotrauma 10:811-829. 6.SWISS-PROT/TrEMBL (P29466).World Wide Web URL:http://www.expasy.ch/sprot/sprot-top.html CHROMOSOMAL LOCATION Genetic locus:CASP1(human)mapping to 11q23;Casp1(mouse)mapping to 9A1. SOURCE caspase-1(14F468)is a mouse monoclonal antibody raised against amino acids 371-390of caspase-1of human origin . PRODUCT Each vial contains 100μg IgG 1in 1.0ml of PBS with <0.1%sodium azide and 0.1%gelatin. STORAGE Store at 4°C,**DO NOT FREEZE**.Stable for one year from the date of shipment.Non-hazardous.No MSDS required. APPLICATIONS caspase-1(14F468)is recommended for detection of caspase-1of mouse,rat and human origin by Western Blotting (starting dilution 1:200,dilution range 1:100-1:1000),immunoprecipitation [1-2μg per 100-500μg of total protein (1ml of cell lysate)],immunofluorescence (starting dilution 1:50,dilution range 1:50-1:500)and immunohistochemistry (including paraffin-embedded sec-tions)(starting dilution 1:50,dilution range 1:50-1:500). Suitable for use as control antibody for caspase-1siRNA (h):sc-29235,caspase-1siRNA (m):sc-29922,caspase-1siRNA (r):sc-61878,caspase-1shRNA Plasmid (h):sc-29235-SH,caspase-1shRNA Plasmid (m):sc-29922-SH,caspase-1shRNA Plasmid (r):sc-61878-SH,caspase-1shRNA (h)Lentiviral Particles:sc-29235-V,caspase-1shRNA (m)Lentiviral Particles:sc-29922-V and caspase-1shRNA (r)Lentiviral Particles:sc-61878-V.Molecular Weight of caspase-1:45kDa. Positive Controls:HL-60whole cell lysate:sc-2209,HL-60+LPS cell lysate:sc-24704or Jurkat whole cell lysate:sc-2204. RECOMMENDED SECONDARY REAGENTS To ensure optimal results,the following support (secondary)reagents are recommended:1)Western Blotting:use goat anti-mouse IgG-HRP:sc-2005(dilution range:1:2000-1:32,000)or Cruz Marker?compatible goat anti-mouse IgG-HRP:sc-2031(dilution range:1:2000-1:5000),Cruz Marker?Molecular Weight Standards:sc-2035,TBS Blotto A Blocking Reagent:sc-2333and Western Blotting Luminol Reagent:sc-2048.2)Immunopre-cipitation:use Protein A/G PLUS-Agarose:sc-2003(0.5ml agarose/2.0ml).3)Immunofluorescence:use goat anti-mouse IgG-FITC:sc-2010(dilution range:1:100-1:400)or goat anti-mouse IgG-TR:sc-2781(dilution range:1:100-1:400)with UltraCruz?Mounting Medium:sc-24941.4)Immuno-histochemistry:use ImmunoCruz?:sc-2050or ABC:sc-2017mouse IgG Staining Systems. DATA RESEARCH USE For research use only,not for use in diagnostic procedures. caspase-1(14F468):sc-56036.Western blot analysis of caspase-1expression in HL-60(A ),LPS-treated HL-60(B )and THP-1(C )whole cell lysates. ----A B C Western blot analysis of caspase-1cleavage in untreated (A )and PMA (sc-3576)and LPS (sc-3535)treated (B )THP-1whole cell lysates.Antibody tested is caspase-1(14F468):sc-56036(A ,B ).Note cleavage of caspase-1in lane B . ––– – A B <
PD抗体使用指南民间版
PD1抗体使用指南民间版2 最近，生物315陆续接到一些想使用PD1的患者的咨询，主要是关于在使用PD1之前要不要做PDL1基因检测;另外，目前可以购买到的PD1抗体有keytruda和opdivo，二者差别大吗?我们总结了一些数据，希望能帮到大家。最后，附录总结了两个CTLA4抗体(依匹单抗)的临床试验，有兴趣的可以联系。 肿瘤组织PDL1检测结果和PD1抗体效果的关系 1 PDL1检测阳性的患者会更大概率会受益，检测阴性的患者也有受益可能 PDL1显然是目前跟ORR最有关联的指标，看临床数据的总结 这个表总结了目前常用的三个PD1通路抗体在不同肿瘤中对PDL1阳性和阴性的临床实验结果：从ORR上来看，PDL1阳性的效果比PDL1阴性的好很多;从PFS和OS看，PDL1阳性的还是有点优势;但是，即使是PDL1阴性的肿瘤患者也是部分有效的。需要指出的是：不同的临床试验对PDL1阳性和阴性的界定标准是不一样的，有1%的，有5%的，也有50%的(这个可能是另一套评价标准)，而且用来检测PDL1表达的抗体也是不一样的。 2 肿瘤组织中PDL1的检测方法和标准 看一组数据：
这是目前临床试验中检测PDL1表达的抗体、检测方法和阳性界定标准，不同公司用不同的方法在做检测，标准也不太一样，一锅粥一样的感觉。这里有一个问题，因为肿瘤浸润的免疫细胞(IC)也会表达PDL1，界定PDL1阳性率的时候要不要包括这些免疫细胞?肿瘤细胞表面的PDL1和IC细胞的PDL1哪一个更适合作为预测PD1效果的标准? 3 肿瘤细胞的PDL1表达 VS 肿瘤中免疫细胞(IC)中的PDL1表达 这是2014年4月的临床实验结果，分析了不同肿瘤患者肿瘤细胞和肿瘤浸润的免疫细胞中PD1/PDL1的表达跟ORR的关系，可以看出来肿瘤细胞的PDL1跟ORR的关系是最强的，p=;用TIL PDL1作为指标也是能预测效果，关联性稍差;但是PDL1阴性的患者依然是有受益的可能。
抗体保存知多少
抗体保存知多少 通常情况下，抗体经恰当保存和处理，大多数应能保持活性数月乃至数年。当然，不同类型抗体，其保存的方法也可能不一样，以下就抗体的保存，提供一些参考! 一、保存温度和条件 对于很多抗体而言，保存在-20℃是完全足够了，没有任何证据显示保存在-80℃会有更多的好处!分装成小等份可最大程度减少由冻融造成的损伤，以及从单个试剂瓶中多次吸取而引入的污染。小等份只需冻融一次，如有剩余，可将剩余物保存于4oC. 在收到抗体时，在10,000 ×g 下离心20 秒以沉积截留于试剂瓶螺纹的溶液，并以小等份转移至低蛋白结合微量离心管中。小等份的量取决于实验人员在实验中通常采用的量。小等份应不小于10 μl; 等份越小，储液浓度因抗体蒸发及吸附于保存瓶表面而受到的影响越大。 在大多数情况下，收到抗体时在4oC 下保存一至两周，然后再冷冻进行长期保存是可接受的，但也许腹水液是例外，它可能包含蛋白酶，因而应该尽快冻存。同样，遵照说明书上的建议是重要的。
大部分抗体的运输条件：一般的运输过程需要1-2周的时间，所以是在4℃的条件下来完成的。 对于特殊的抗体，如酶、荧光素等偶联抗体、IgG3同型抗体等抗体的保存有其注意事项： 1、偶联抗体酶偶联抗体不应冻存，而应保存于4oC. 冻融不仅影响抗体结合能力，还会降低酶活性。无论偶联至荧光染料、酶还是生物素，偶联抗体都应保存于深色试剂瓶中或用金属箔包裹. 暴露于光线中将损害偶联物的活性。特别是荧光偶联物易受到光漂白影响，在实验的所有阶段都应避光。 2、IgG3的同型对照保存在4℃，避免冻起来。因为如果出现冻融过程，该抗体非常容易形成多聚体 二、用叠氮化钠防止污染 为了防止微生物污染，可将叠氮化钠加入抗体制备品中达到0.02% (w/v). 的终浓度。但是有时不能使用叠氮化钠，有以下两中情形：
Anti-SAA1-Serum Amyloid A抗体说明书
Rabbit Anti-SAA1/Serum Amyloid A Cat.Number:DM-24107R Quantity size:100ul Concentration:1mg/ml Buffer=0.01M TBS(pH7.4)with1%BSA,0.03%Proclin300and50% Glycerol. Background:This gene encodes a member of the serum amyloid A family of apolipoproteins. The encoded protein is a major acute phase protein that is highly expressed in response to inflammation and tissue injury.This protein also plays an important role in HDL metabolism and cholesterol homeostasis.High levels of this protein are associated with chronic inflammatory diseases including atherosclerosis,rheumatoid arthritis,Alzheimer's disease and Crohn's disease. This protein may also be a potential biomarker for certain tumors.Alternate splicing results in multiple transcript variants that encode the same protein.A pseudogene of this gene is found on chromosome11.[provided by RefSeq,Jun2012] Also known as:amyloid A,serum;Amyloid fibril protein AA;Amyloid protein A;MGC111216; PIG4;SAA;SAA2;Serum amyloid A protein;serum amyloid A-1protein;serum amyloid A1; TP53I4;Tumor protein p53inducible protein4. Specificity: ●Rabbit Polyclonal IgG,affinity purified by Protein A. ●Reacts with:Mouse,. ●Immunogen:KLH conjugated synthetic peptide derived from mouse SAA1/Serum Amyloid A. ●Predicted Molecular Weight:14kDa. Storage:Shipped at4℃,Store at-20℃(Avoid repeated freeze/thaw cycles). Application:WB=1:500-2000IHC-P=1:400-800IHC-F=1:400-800ICC=1:100-500 IF=1:100-500 Not yet tested in other applications. Optimal working dilutions must be determined by the end user. Important Note:This product as supplied is intended for research use only,not for use in human, therapeutic or diagnostic applications. 上海笃玛生物科技有限公司
多克隆抗体的制备方法1
抗体的制备方法与原理 一、抗血清的制备 有了质量好的抗原，还必须选择适当的免疫途径，才能产生质量好（特异性强和效价高）的抗体。 （一）用于免疫的动物 作免疫用的动物有哺乳类和禽类，主要为羊、马、家兔、猴、猪、豚鼠、鸡等，实验室常用者为家兔、山羊和豚鼠等。动物种类的选择主要根据抗原的生物学特性和所要获得抗血清数量，如一般制备抗r-免疫球蛋白抗血清，多用家兔和山羊，因动物反应良好，而且能够提供足够数量的血清，用于免疫的动物应适龄，健壮，无感染性疾患，最好为///雄性，此外还需十分注意动物的饲养，以消除动物的个体差异以及在免疫过程中死亡的影响。若用兔，最好用纯种新西兰兔，一组三只，兔的体重以2～3kg为宜。 （二）免疫途径
免疫途径有多种多样，如静脉内、腹腔内、肌肉内、皮内、皮下、淋巴结内注射等，一般常用皮下或背部多点皮内注射，每点注射0.1ml左右。途径的选择决定于抗原的生物学特性和理化特性，如激素、酶、毒素等生物学活性抗原，一般不宜采用静脉注射。 （三）佐剂 由于不同个体对同一抗原的反应性不同，而且不同抗原产生免疫反应的能力也有强有弱，因此常常在注射抗原的同时，加入能增强抗原的抗原性物质，以刺激机体产生较强的免疫反应，这种物质称为免疫佐剂。 佐剂除了延长抗原在体内的存留时间，增加抗原刺激作用外，更主要的是，它能刺激网状内皮系统，使参与免疫反应的免疫活性细胞增多，促进T细胞与B细胞的相互作用，从而增强机体对抗原的细胞免疫和抗体的产生。
常用的佐剂是福氏佐剂（Freund adjuvant）,其成分通常是羊毛脂1份、石腊油5份，羊毛脂与石腊油的比例，视需要可调整为1：2～9（V/V），这是不完全福氏佐剂，在每毫升不完全佐剂加入1～20mg卡介苗就成为完全佐剂。 配制方法：按比例将羊毛脂与石蜡油置容器内，用超声波使之混匀，高压灭菌，置4℃下保存备用。免疫前取等容积完全或不完全佐剂与免疫原溶液混合，用振荡器混匀成乳状，也可以在免疫前取需要量佐剂置乳钵中研磨，均匀后再边磨边滴加入等容积抗原液（其中加卡介苗3～4mg/ml或不加），加完后再继续研磨成乳剂，滴于冰水上5～10min内完全不扩散为止。为避免损失抗原，亦可用一注射器装抗原液，另一注射器装佐剂，二者以聚乙烯塑料管连接，然后二者来回反复抽吸，约数十分钟后即能完全乳化。检查合格后即以其中一注射器作注射用。 免疫佐剂