食用菌菌种的制作与培养

食用菌菌种的制作与培养

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一、母种制作

（一）母种培养基制作

1.母种培养基的种类

母种是菌种生产的关键，要求纯度高，不能混生杂菌，同时母种的菌丝体较为纤细，分解培养料的能力较弱。因此，母种菌丝体需要培养在营养丰富，易被吸收，表面光滑易于鉴别有无杂菌感染的琼脂培养基上。适合母种菌丝生长的琼脂培养基种类很多，常用的有下列几种：

（1）马铃薯—葡萄糖—琼脂培养基

马铃薯（去皮）200克琼脂20克葡萄糖（或蔗

糖）20克水1000毫升

（2）麦芽汁—葡萄糖—琼脂培养基

干麦芽250克琼脂15～20克葡萄糖（或蔗糖）10克水1000毫升

（3）胡萝卜—葡萄糖—琼脂培养基

胡萝卜100克琼脂20克葡萄糖（或蔗糖）20克水1000毫升

（4）蘑菇汁—葡萄糖一琼脂培养基（适用于蘑菇）

鲜蘑菇250克琼脂20克葡萄糖（或蔗糖）20

克水1000毫升

（5）蛋白胨—葡萄糖—琼脂培养基

蛋白胨2克葡萄糖20克磷酸氢二钾2克维生素B1（硫胺素）0.5毫克磷酸二氢钾0.5克琼脂18克硫酸镁0.5克水l000毫升

2.母种培养基的制法

以最常用的马铃薯—葡萄糖—琼脂培养基的制法为例介绍如下：

先将马铃薯去皮，洗涤，切成小块加水1000毫升，煮沸15～20分钟，取双层纱布过滤，取其滤液，加入琼脂和葡萄糖（或蔗糖），用文火加热使其溶化，最后补足水分，使其容量仍为1000毫升。趁热分装于试管中，装量约为试管长度的1/5左右，装管时要注意不使培养基沾污试管壁和试管口。试管口塞上大小合适的棉花塞，塞入试管口内的长度为棉塞总长的3/5。塞好棉塞后，每10

支作一捆，用牛皮纸包扎好后，臵铁丝网笼中，然后进行高压

灭菌。

如作为孢子分离用，则将培养基分装于三角瓶或培养皿中，然后高压灭菌。

3.母种培养基的消毒灭菌：

母种培养基通常用高压蒸汽灭菌锅来消毒灭菌，常用的高压蒸汽灭菌锅有直式、卧式和手提式三种。将配制好后的母种培养基移入上述任何一种高压蒸汽灭菌锅中，在15公斤/平方厘米压力下，灭菌30分钟。

高压蒸汽灭菌主要是依靠提高蒸汽的温度来灭菌的，因此灭菌时，应将锅内的冷空气全部排除。否则，尽管压力表上的压力已达到要求，然而，灭菌锅内的温度却未达到所需的温度。排除冷空气的方法是加热后当压力表上指针上升到0.5公斤/平方厘米时，打开排气阀，放气至指针仍回到“零”的位臵。灭菌的时间是以排除冷空气后，压力回升到1.5公斤/平方厘米时才开始计算。每次灭菌之后，要等压力降到“零”时，才打开锅盖，否则，灭菌的液体会因突然减压而外溢，玻璃器皿也会因突然降温而破裂。

高压灭菌后将试管取出排成斜面备用。

（二）母种分离材料的选择

1.子实体的选择无论是用作孢子分离或组织分离的子实体，都要从产量高，长势好，适应性强，无杂菌虫害的群体中，选择朵大，生长健壮的单生子实体作为分离的材料。

选作分离的子实体，成熟度要适当，如蘑菇、草菇具有菌膜，最好选菌膜将破而未破的成熟度，这种子实体发育已成熟，子实层又未受污染，因此能很快散出大量的无菌孢子。对没有菌膜或菌膜自幼已破的食用菌，如香菇、平菇等，则以选取八分熟，正在释放孢子的个体为最好；因为刚从担子弹射出来的孢子基本上也是无菌的。

2.菇木和耳本的选择木生食用菌如香菇、银耳、黑木耳等，可以从它们生长的基质，即菇木和耳木作为分离的材料。选择时，应从野生或人工栽培场所挑选子实体生长健壮，朵大，长势好，菌丝在段木中发育旺盛，材质较为结实，尚未腐烂，一般是接种后一年内已出菇、出耳而无杂菌害虫感染的幼龄菇木或耳木为最好。采去子实体后，截取适当部位，挂于通风处风干后，供分离时用。

（三）母种的分离方法

1.孢子分离法是利用食用菌的有性孢子或无性孢子，萌发成菌丝，获得细菌种的一种方法。按分离时挑取孢子的数目不同，又分为单孢子分离法和多孢子分离法两种。蘑菇、草菇等由于孢子没有

性的区别，采用单孢子分离获得纯菌种，有结实能力，而其它食用菌如香菇、银耳、黑木耳等由于孢子有性别之分，单孢子分离得到的菌丝不能结实，所以，只在育种上采用，生产上很少采用多孢子分离法，是把许多孢子接种于同一培养基上，让它们萌发，自然交配而获得纯种。

2.组织分离法

是用食用菌幼嫩的组织块直接分离培养成纯菌种的方法。选用的子实体先经0.1％开汞水或70％酒精表面消毒后。用无菌水冲洗并用无菌纱布擦去表面水分。分离香菇时用无菌解剖刀自菌柄处切开少许，再用手将子实体掰开为二，在菌盖与菌褶交界处，切取0.3～0.4立方厘米的一小块菌肉，移放在斜面培养基中央。如已开伞的种菇、则选菌盖与菌柄交界处的菌肉。分离草菇时，用无菌解剖刀把菌蕾纵切少许；再用手把菌盖轻轻剥开，在菌柄上方和菌盖交界处，切取1～5毫米的细块，接在斜面培养基中。如种菇已受雨淋，吸水较多，应取菌褶作为接种材料。组织分离后将试管外面放在恒温箱中培养。待组织块周围萌发出菌丝，并向培养基蔓延生长后，再挑取生长健壮的菌丝进行转管培养。组织分离法操作简便，又不易带入杂菌，容易获得纯菌种。但对银耳、黑木耳等胶质菌；因其子实体中菌丝的含量极少，如用组织分离培养，则往往不易成功。

3.基内菌丝分离法

是利用食用菌生长的基质一菇木和耳木作为分离材料，而培养成纯菌种的方法。特别是银耳、黑木耳采用这种方法，成功率高，性状也较稳定，为生产上经常采用的方法。具体做法是从野生或人工栽培的场所，选择子实体发生早，生长旺盛，朵大，无病虫害的菇木或耳木，锯取一小段，让其充分风干后备用。分离时如为香菇的菇木，先锯取1厘米的薄片，切去四周用0.1％升汞水表面消毒1～2分钟，用无菌刀将其劈成小木片，再切成0.5平方厘米的小木条，移入试管斜面培养基上，经25～27℃培养，菌丝生长后，再行转管培养。

分离时如为银耳的耳木，先从长有子实体部位，锯取1～2厘米厚的木片，剔除树皮及耳基，再用0.1％升汞水或75％酒精涂擦表面消毒，通过耳基着生处，把耳木纵切为二，用无菌刀在耳基着生处，削取极小的木屑，移入试管斜面培养基上。接种后放在20～28℃的温度下培养，数天后接种块的周围开始长出纤细的白色菌丝，延伸到培养基后，培养基的颜色逐渐变黄转黑，表面出现浅灰色斑纹，这就是羽毛状菌丝。一星期后，小木屑上出现白色短绒毛状菌丝，同时分泌白色或淡黄色水珠，这就是银耳的发育菌丝。挑

取银耳发育菌丝和少许羽毛状菌丝转接于新的斜面培养基上进行扩接，一星期后，菌丝长满试管，即成为母种。在实际分离中往往不可能得到银耳菌丝与羽毛状菌丝两者兼有的母种。或纯为银耳菌丝；或纯为羽毛状菌丝；或酵母状分生孢子，还有相当数量是感染杂菌或不长任何菌丝的。纯银耳菌丝和纯羽毛状菌丝，经适当配合后，就可应用于生产。

黑木耳的耳木分离，其操作方法与银耳大致相同，但不象银耳有多种类型的菌丝。耳木接入试管后，一般放在22～28℃培养2～3天，可见菌丝长出。选生长健壮、清楚、两端展整齐的，进行转管纯化2～3次培育成母种。在培养过程中，有时培养基背面会出现乳白色或淡褐色，这是正常现象。

（四）母种的扩大培养

从分离获得或外地引入的优良母种，由于数量有限不能满足生产上的需要，应进行扩大繁殖培养。其方法是以无菌操作把斜面培养基连同菌丝体切成短米粒大的小块，移接到新的斜面培养基上，在适温条件下培养，待菌丝长满斜面时即成。一般每支母种试管可扩大繁殖60～80支新管。扩大母种第一次应多些，以避免多次转管，造成菌丝生活力降低，结菇（耳）少，影响产量和质量。一般要求转管不要超过五次。

二、原种的制作

（一）原种常用培养基

1.原种培养基的种类

（1）木屑-米糠培养基（适用于各种食用菌）

木屑78%、米糠或麸皮20%、白糖1%、石膏1%、水适量。

（2）木屑培养基（适用于木耳、香菇）

木屑98%、葡萄糖1%、尿素0.3%、硫酸镁0.05%、磷酸二氢钾0.2%、高锰酸钾0.05%、碳酸钙0.4%、水适量。

（3）棉籽壳培养基（适用于多种食用菌，如平菇、猴头）

棉籽壳100%、水适量。

（4）棉籽壳-木屑培养基（适用于木耳、香菇、银耳、金针菇、灵芝、猴头等）

棉籽壳70%、木屑28%、糖1%、石膏1%，水适量。

（5）棉籽壳-麸皮培养基（适用于多种食用菌）

棉籽壳80%、麸皮18%、糖1%、石膏1%，水适量。

（6）玉米芯-麸皮（米糠）培养基（适用于平菇、木耳、猴头等）

玉米芯78%、麸皮（米糠）20%、过磷酸钙1%、石膏1%，水适量。

（7）稻草（麦麸）-麸皮培养基（适用于平菇、草菇、凤尾菇等）

干稻草（麦草）78%、麸皮20%、过磷酸钙1%、石膏1%、水适量。

（8）草粪培养基（适用于双孢蘑菇、草菇等）

稻草或麦麸20ｋｇ，粪肥（干）30ｋｇ水适量。

现将草、粪、石膏混合均匀，加适量水发酵好后，取稻草或麦秸切成２ｃｍ的长度，调整水分，装瓶灭菌。

（9）麦粒种培养基（适用于平菇、猴头、白灵菇、杏鲍菇、金针菇等）

小麦1000ｇ、白糖10ｇ、石膏10ｇ。

先将小麦浸泡4ｈ，加热煮沸20～30ｍｉｎ，煮时加白糖，煮至麦粒熟而不开花，过滤后，摊开晾晒。不粘手时拌入石膏粉，即可装瓶灭菌。

（二）原种培养基的制作方法

首先结合当地原料情况，选适宜的培养料。根据上述配方，凡加糖的，应先将糖溶于水中，其余原料混合均匀后，用糖水拌料。拌均匀后，培养料的含水量用手测，即手握培养料，指缝间有水渗出，但不滴为宜（料的含水量达60％～70％）。含草粪的培养料，最好经发酵出处理，料的ｐｈ调为6.5～8.然后把培养料装入已洗净的菌种瓶、罐头瓶或制菌种用的塑料袋内，装的松紧适度，上下一致。装料高度以齐瓶肩为宜。装好后，即可装锅灭菌。灭菌时由于培养基体积较大，数量较多，瓶壁又厚，故灭菌时间要适当延长，在0.15MPa的压力下灭1.5～2ｈ，可达到灭菌目的。也可用常压灭菌锅进行灭菌8～10ｈ，达到灭菌效果。

三、栽培种的制作

栽培种培养基配方的配制，制作方法与灭菌方法与原种培养基相同。但最好不用麦粒种，因栽培用量大。另外用常压灭菌锅进行灭菌，也不易灭彻底。做栽培种培养基所用的容器可采用制种用的低压聚乙烯或聚丙烯塑料袋（简称菌种袋），也可以采用瓶装。但在生产上多采用菌种袋，袋的大小一般为15～18cm×30～35cm。装培养料时，尽量装得松紧适度，四周紧中间松，装入量占袋子2/3为宜。袋口可用塑料圈，也可用绳子直接扎住，但不要扎的过紧，以防灭菌时爆袋。

四、食用菌接种与培养技术

（一）、食用菌的接种技术

接种是食用菌制种工作中的一项最基本的操作，无论是食用菌的传代，分离、鉴定还是进行食用菌的形态、生理等方面的研究都

离不开接种操作。接种的关键是严格无菌操作，根据不同的目的、不同的菌类及同一菌类的不同菌种容器，接种方法都有所区别，但在无菌条

件进行严格的无菌操作这一点是必须共同遵守的。

１.无菌操作规程

（１）接种前对接种箱（室）进行清洁消毒，准备好接种工具。将待接的母种培养基或原种培养基或栽培种培养基放入接种箱内或室内，用药物熏蒸消毒，有条件也可用紫外线灯、净化设备消毒灭菌；

（２）换好清洁的工作衣，取少许药棉，蘸上75%的酒精擦拭双手，菌种容器表面，工作台面及接种工具；

（３）点然酒精灯开始接种操作。酒精灯火焰周围8cm半径范围的空间为无菌区，接种操作必须在无菌区内进行。

２.接种方法

（１）母种接种

按上述要求做好无菌操作准备后，进行接种。

ａ．用75%酒精棉球涂擦工作人员的手和菌种试管外壁进行消毒，放入接种箱或接种室内；

ｂ．用酒精棉涂擦接种针，再在酒精灯上烧红；

ｃ．左手排握着菌种和斜面试管，右手握持接种针，用中指与无名指、无名指与小指；分别把菌种和斜面培养基上的试管棉塞拔开；

ｄ．用接种钩伸入菌种管割取菌种，不宜过大，米粒大小，迅速转接入斜面培养基中央；将试管口在酒精灯火焰上灼烧一下；塞好试管棉塞；

ｅ．接上菌种的斜面试管贴上标签，注明菌名和接种日期等。整个转管过程应在酒精灯火焰8-10c㎡范围的无菌区进行。转接后的试管，放入适宜的温度下培养至长满斜面。

（２）原种接种

要求做好无菌操作准备后，进行接种。

a. 将灭过菌的菌种瓶、母种和接种钩等一起放入接种箱消毒后开始接种。母种接原种，一般一支斜面试管可接原种4～6瓶。接种时严格按无菌操作规程。双手要用75%酒精棉球表面消毒，拔开母种棉塞，试管口用酒精灯火焰封口。接种钩要经过火焰灭菌。然后将母种（菌丝）连同培养基用接种钩分成4～6段，每一段母种迅速转移到原种培养基上。

b. 接完种后，将待培养的菌种瓶移入培养箱或光线暗淡的培养室，平卧或立在瓶架上发菌，根据各种菌类的生长要求，调整适

宜的温度。培养初期逐日观察菌丝定植生长和杂菌污染情况。如接种5天仍未见菌丝萌发则应及时补接母种，如发现杂菌应及时清除。同时要经常调瓶的位臵，以利于菌丝生长一致，当菌长满瓶后及时使用。若暂时不用刻放低温、干燥、避光的环境下短期保存，一般棉子皮原种25天左右长满瓶，麦粒原种15天左右。

（３）栽培种接种

要求做好无菌操作准备后，进行接种。

a. 装箱

将灭过菌的栽培袋（瓶），接种用的器具，原种等放入接种箱中。将待接的栽培袋（瓶）臵于接种箱一端，袋横卧码好，瓶立码。然后进行空间消毒。

b. 接种

原种瓶口应用75%酒精棉球擦拭，进行瓶口消毒。然后用火焰灭过菌的接种钩清理原种表皮的均被，再将长满菌丝的培养料挖成粒（块）状。在酒精灯火焰旁，解开袋绳结，用接种钩将原种颗粒（块）移植到栽培种的培养料袋（瓶）内。一般每瓶原种可接35～50袋（瓶）

c. 培养

接完种后，将待培养的菌种袋（瓶）臵培养室发菌，在培养过程中定期向地面喷洒化学消毒药品，防止空气污染。接种后3～10天经常观察菌丝生长情况，菌种30天左右即可长满。菌丝长满一周后，即可栽培。

３.接种注意事项

（１）接种前要准备一些无菌棉塞，一起放入无菌室（箱内），以便在所用棉塞受潮时更换；

（２）接种时切勿使试管口、瓶口向上，切勿离开酒精灯火焰的无菌区进行；人在室内尽量少走动，减少空气流动扬起的灰尘、减少污染；

（３）接种时留下的污物，如用过的酒精棉、菌种碎屑等要及时清除，以免污染；

（４）如一次接种不同菌种时，要注意做好标记，以免搞混。

（二）培养技术

接种后的原种或栽培种根据不同食用菌菌丝发育的最适温度进行培养。培养2～3天后，菌丝开始生长时，要每天定期检查，如发现黄、绿、橘红、黑色杂菌时，要及时拣出清理。尤其是塑料袋菌种，检查工作到菌丝长满为止。培养室切忌阳光直射，但不要完全黑暗；注意通风换气，室内保持清洁，空气相对湿度不要超过65%；同时菌种瓶，袋不要堆叠过高，瓶间要有空隙，以防温度过

高造成菌丝衰老，活力降低。

特别是对加温的培养室要注意：一要保持室内温度稳定，因在温差较大的情况（特别是母种培养）会形成冷凝水，而使菌丝倒伏变黄。有条件的话，可以根据菇类的菌丝生长对温度的要求，按品种分开放在不同的温度培养室（箱）内培养。同时要注意经常调换原种、栽培种排放的位臵以使同一批菌种菌丝生长一致。二要注意通风换气，以免室内二氧化碳浓度过高影响菌丝生长。

五、优质菌种应具备的条件及目测标准

（一）具备条件

1.菌丝洁白，有光泽，分支浓密，茸毛状菌丝多，很少出现索状菌丝

2.香气很浓，烘干后也有香气；

3.无可疑杂菌；

4.菌丝生活里强，具有抗逆性强，高产、优质等特点。

（二）目测标准

a.不同母种的质量标准：

1.平菇、姬菇、金针菇、白灵菇、杏鲍菇、鲍鱼菇、阿魏菇

菌丝密集、洁白，爬壁力强，菌丝壮、旺，培养基无干缩、气生菌丝不倒伏，反面观察除接种块点外无任何斑点、条纹或阴影；

2.鸡腿菇

菌丝灰白，较平菇稀疏，菌丝成熟后略有土黄色，接种块色素较重，其余同平菇；

3.草菇

菌丝灰兰，伸长度大，呈半透明状，成熟后大多发生厚垣孢子；

4.猴头菇

菌丝白色、稍发暗，培养基不丰富时呈节状生长，气生菌丝少，爬壁力弱；

5.双孢菇、姬松茸

菌丝白色、初期呈绒球状，后期绒毛状生长，气生菌丝数量多，充盈整个试管；

6．杨树菇、柳松菇、大肥菇、大球

菌丝白色，稍有土黄暗色，营养不良或水分偏大时呈树枝状生长，其余同平菇。

b.不同原种质量标准：

１.平菇、姬菇、金针菇、白灵菇、杏鲍菇、鲍鱼菇、阿魏菇菌瓶洁白，上下基本一致，瓶口处气生菌丝旺盛，瓶底部菌丝特浓白，普通旧罐头瓶个重550克—600克，无任何斑点、条纹或

异色；

２.鸡腿菇

菌瓶色泽一致，瓶口处有气生菌丝，较平菇稀疏、纤细。其它同平菇等；

３.草菇

透过菌瓶明显可见菌丝，一般品种菌丝成熟后即发生厚垣孢子；

４.猴头菇

菌丝纤细、节短，色泽白，成熟后瓶壁发生白点如同蕾点；

５. 双孢菇、姬松茸

外观洁白、整齐，同平菇类；

６.杨树菇、柳松菇、大肥菇、大球

瓶壁可见菌丝色泽暗白色，瓶口处气生菌丝数量较少，无任何斑点、条纹或暗点。

c.不同栽培种质量标准

１.平菇、姬菇、金针菇、白灵菇、杏鲍菇、鲍鱼菇、阿魏菇菌袋洁白一致，两头接种口处菌丝稍疏，手感硬实，手敲有弹性，一般150×0．05规格、长35厘米的料袋，发菌后重约800克—900克。无任何斑点、条纹或异色；

２．鸡腿菇

色泽同原种，其它同平菇等；

３．草菇

瓶装、袋装表现同原种，但厚垣孢子发生量少，菌丝成熟后纽结从接种口处伸出，结菇；

４．猴头菇

同原种；

５.双孢菇、姬松茸

同原种；

６.杨树菇、柳松菇、大肥菇、大球

同原种。

食用菌生产技术课程标准

食用菌生产课程标准 卢占龙 （一）课程名称《食用菌生产技术》 （二）建议课时90 ，学分4， （三）课程定位（课程体系中的角色） 本课程是高职高专生物技术、园艺专业的一门专业课程（公共必修课、公共选修课、专业课、专业核心课、专业选修课、素质拓展课）。其功能在于培养学生掌握有关食用菌生产的基础理论知识。基本方法，为学生学生学习食用菌菌种制作和栽培管理过程中的一些基本操作技能。，同时注意培养学生的社会能力和方法能力（职业核心能力和职业道德）。 （四）课程设计思路 1.课程开设的依据和内容选择标准（课程内容与职业标准对接） 综合考虑学生发展的需要、社会需求和学生自身发展的需要三个方面，《食用菌生产技术》选择了常见的食用菌栽培、菌种生产作为课程的主要内容。《食用菌生产》规定的情感态度与价值观、知识和能力的目标，需要通过学生主动地、多样化的学习活动才能逐步达到，因此，课程内容标准建设建议教师采用形式多样的教学活动。 课程目标： 通过一学期的食用菌生产课程的学习，学生将在以下几方面得到发展。 掌握各种食用菌形态结构、菌种培养、各种食用菌的栽培技术等基本知识 讲清有关概念、教学主要以“菌种培育工”、“食用菌生产工”等职业岗位需求和创业需求为导向，以食用菌实际生产过程为主线，重点培养学生的职业能力。 2.课程内容设计 改革过去食用菌栽培的编排和讲授体系，首先以应用技能为突破口，尝试多媒体教学方法，充分利用本教研组现有的电化教学设施，展现信息、电子所赋予食用菌生产的新内涵，基本抛弃原有的教学模式，实现基地教学模式，以实验室为教学基地。

（五）先修和后续课程 先修课程是：基础化学、植物及植物生理、微生物学等。 后续课程是：微生物遗传、蔬菜栽培 （六）教学目标要求 本课程的目标主要是： 1.知识目标：要求系统掌握食用菌代谢、生理、形态的理论知识，菌种的制作方法 2.技能（能力）目标：学会食用菌制种，会栽培三种食用菌。 3.社会能力和方法能力目标：收集处理信息的能力、自主获取知识的能力、创造性的思维能力。操作与解决问题的能力目标 （七）教学内容介绍（教学过程与生产过程对接）教科书是主媒体，学生必需从头到尾系统通读，最好两遍。从学期开始就制定阅读计划。应当指出，教科书只提供了大专学生必须学习的内容。 录像教材是结合图片、标本讲解重点、难点及学科的发展。帮助学生理解、记忆食用菌栽培技术的内容。学生可以通过提供的媒体，自主选择，经过刻苦学习，学好本课程也是完全可以达到的。 1绪论 2第一章食用菌学基础知识 3第二章菌种的制作 4第三章木腐型食用菌的栽培 5第四章草腐型食用菌的栽培 6第五章其它食用菌的栽培技术简介 7第六章食用菌的病虫害及其防治 8第七章食用菌产品的储藏及加工 第一章食用菌学基础知识 [教学内容] 第一节食用菌的形态结构和分类 一、菌丝体的形态结构 二、子实体的形态结构 三、食用菌的分类地位 第二节食用菌的生长发育与生活史 一、食用菌的生长 二、食用菌的生活史 三、食用菌生长发育的环境条件 第三节食用菌对营养物质的要求 一、食用菌的营养类型 二、食用菌对营养物质的要求 第四节菌种保藏 一、菌种的保藏方法 二、菌种退化的原因和复壮措施 [教学要求] 掌握：食用菌的形态结构；食用菌生长发育的环境条件。

菌株保藏方法介绍

菌种保存方法 微生物具有容易变异的特性，因此，在保藏过程中，必须使微生物的代谢处于最不活跃或相对静止的状态，才能在一定的时间内使其不发生变异而又保持生活能力。 低温、干燥和隔绝空气是使微生物代谢能力降低的重要因素，所以，菌种保藏方法虽多，但都是根据这三个因素而设计的。 保藏方法大致可分为以下几种： 1．传代培养保藏法 又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等（后者作保藏厌氧细菌用），培养后于4—6℃冰箱内保存。 2．液体石蜡覆盖保藏法 是传代培养的变相方法，能够适当延长保藏时间，它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡，一方面可防止因培养基水分蒸发而引起菌种死亡，另一方面可阻止氧气进入，以减弱代谢作用。 3．载体保藏法 是将微生物吸附在适当的载体，如土壤、沙子、硅胶、滤纸上，而后进行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。 4．寄主保藏法 用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物，如病毒、立克次氏体、螺旋体等，它们必须在生活的动物、昆虫、鸡胚内感染并传代，此法相当于一般微生物的传代培养保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法与冷冻干燥保藏法进行保藏。 5．冷冻保藏法 可分低温冰箱（-20—-30℃，-50—-80℃）、干冰酒精快速冻结（约-70℃）和液氮（-196℃）等保藏法。 6．冷冻干燥保藏法 先使微生物在极低温度（-70℃左右）下快速冷冻，然后在减压下利用升华现象除去水分（真空干燥）。

有些方法如滤纸保藏法、液氮保藏法和冷冻干燥保藏法等均需使用保护剂来制备细胞悬液，以防止因冷冻或水分不断升华对细胞的损害。保护性溶质可通过氢和离子键对水和细胞所产生的亲和力来稳定细胞成分的构型。保护剂有牛乳、血清、糖类、甘油、二甲亚砜等。 三、器材 细菌、酵母菌，放线菌和霉菌； 肉膏蛋白胨斜面培养基，灭菌脱脂牛乳，灭菌水，化学纯的液体石蜡，甘油，五氧化二磷，河沙，瘦黄土或红土，冰块、食盐，干冰，95％酒精，10％盐酸，无水氯化钙； 灭菌吸管，灭菌滴管，灭菌培养皿，管形安瓿管，泪滴形安瓿管（长颈球形底），40目与 100目筛子，油纸，滤纸条（0．5×1．2cm），干燥器，真空泵，真空压力表，喷灯，L形五通管，冰箱，低温冰箱（-30℃），液氮冷冻保藏器。 四、操作步骤、各保藏法的应用范围及优缺点 下列各法可根据实验室具体条件与需要选做。 1．斜面低温保藏法 将菌种接种在适宜的固体斜面培养基上，待菌充分生长后，棉塞部分用油纸包扎好，移至2—8℃的冰箱中保藏。 保藏时间依微生物的种类而有不同，霉菌、放线菌及有芽孢的细菌保存2—4个月，移种一次。酵母菌两个月，细菌最好每月移种一次。 此法为实验室和工厂菌种室常用的保藏法，优点是操作简单，使用方便，不需特殊设备，能随时检查所保藏的菌株是否死亡、变异与污染杂菌等。缺点是容易变异，因为培养基的物理、化学特性不是严格恒定的，屡次传代会使微生物的代谢改变，而影响微生物的性状；污染杂菌的机会亦较多。 2．液体石蜡保藏法 （1）将液体石蜡分装于三角烧瓶内，塞上棉塞，并用牛皮纸包扎，1．05kg/cm2>，121．3℃灭菌30分钟，然后放在40℃温箱中，使水汽蒸发掉，备用。 （2）将需要保藏的菌种，在最适宜的斜面培养基中培养，使得到健壮的菌体或孢子。

食用菌生产技术名词解释

食用菌：在高等真菌中，能够形成大型肉质（或胶质）子实体的，真核类组织，并可供人类食用的菌类总称。 恒温结实性：有些食用菌，当菌丝体发育到生理成熟后，只需降温诱导原基形成，不需昼夜温差刺激便可结实。 变温结实性：有的食用菌，当菌丝体发育到生理成熟以后，不仅需要降温诱导原基形成，还需温差刺激才能结实。 生物转化率：每投入1斤干料所获得鲜菇的百分数。 单区制式栽培：发菌与出菇在同一场所进行的栽培方式。 双区制式栽培：发菌、出菇不在同一场所进行的栽培方式。 菌花：是乳白色、光滑的膜状物，是由酒花酵母菌产生的。 生物学效率：每投入1斤干料所获得的鲜菇百分数。 液体菌种：在无菌条件下，把母种接于合适的液体培养基中，给予合适的条件，通过振荡、搅拌等方式培养形成的菌丝球。 醭膜：醭膜是灰白色或乳黄色，具有皱纹的膜状物，浮在盐液面上，是由产膜酵母菌或伪酵母菌在盐液表面生长所产生的。 外菌幕：在子实体幼小时，子实体外包有一层菌膜，这层菌膜叫外菌幕。 内菌幕：有些食用菌在幼龄时，菌柄与菌盖边缘之间有一层包膜，这层包膜叫内菌幕。 菌托：当子实体长大后，外菌幕破裂，残留在菌柄基部的外菌幕就形成了菌托。菌环：当子实体长大后，内菌幕破裂，部分残留在菌盖边缘上，而另一部分残留在菌柄上形成菌环。 子实体：是食用菌的繁殖器官，是由分化的菌丝体组成，能产生孢子的菌体或菇体。 食用菌菌种：是以适当的培养基或培养料培养的纯菌丝体。 一级菌种（母种）：又称母钟，试管种、斜面种，以孢子分离培养或组织分离培养获得的纯菌丝体。 二级菌种（原种）：又称原种，由一级菌种扩大繁殖成的纯菌丝体。 三级菌种：又称栽培种，生产种，由二级菌种扩大繁殖成的纯菌丝体。 组织分离法：用食用菌的子实体、菌核、菌索等的一部分组织，在无菌条件下接种在适宜的培养基上培养成菌丝体的方法。 孢子分离法：用成熟的有性孢子或无性孢子萌发形成菌丝体获得纯菌种。 基内菌丝分离法：从生长子实体的培养料中分离菌丝体获得纯菌种的方法。 初生菌丝：由孢子萌发形成的菌丝，又称一级菌丝或单核菌丝。 次生菌丝：由两条可亲和的初生菌丝经过质配以后形成的菌丝，又名二级菌丝或双核菌丝。 三生菌丝：由二级菌丝进一步发育而形成的已组织化了的双核菌丝 复壮：恢复食用菌原有的生活力和培育发展其优良性状。 菌种分离：就是用无菌操作的方法将所需要的食用菌从混杂的微生物群体中单独分离出来的过程。 退菌：是在菌丝培养期内，当菌丝生长至培养料的中部或中底部时，从料面开始菌丝逐渐变弱，直至消失的现象。 断菌：是菌丝在培养料内生长过程中产生菌丝断层，断裂的现象。 菌丝徒长：培养料表面生长越旺，形成一层粗壮菌束网并且在培养料表面形成菌被。

枝条菌种制作

枝条菌种制作技术 一、什么是枝条菌种？ 枝条菌种是指用竹签、木条、雪糕棒等制作的食用菌菌种，通常枝条菌种用来制作三级种，也叫竹签菌种、小棒菌种。 在液体菌种没有普及之前，枝条菌种在杏鲍菇工厂化、黑木耳工厂化生产中广泛使用，随着液体菌种的普及，枝条菌种的使用逐渐减少，但是对于不具备液体菌种生产条件的小规模企业首选还是枝条菌种。 二、哪些品种可以使用枝条菌种？ 香菇、平菇、金针菇、杏鲍菇、黑木耳等常规品种都可以使用枝条菌种。 三、枝条菌种的优点和缺点 优点： 1、枝条菌种萌发较快，因为菌丝生长到枝条内部，不容易死亡和老化； 2、接种方便，速度快； 3、不需要打开全部袋口，培养基暴露的时间段，较少污染机会。 4、枝条可以深入培养基内部，发菌快。 缺点： 1、对制作技术要求相对较高；

2、对灭菌要求较高，最好采用高压灭菌的方式。 四、枝条菌种制作技术 1、材料准备 枝条：杨木、桑木、柞木、椴木、柳木等能够栽培食用菌的木材都可以制作枝条菌种，杨木的价格较低，较为常用。现在有专门生产食用菌专用枝条的厂家，也可以用雪糕棒，枝条长度一般12-15cm，宽0.5-0.7cm，厚0.5-0.7cm，枝条的规格要根据栽培袋的大小进行选择。 菌种：提前准备好二级种，二级种的纯度和活性直接影响到枝条菌种的质量，一定要做好。 菌袋：枝条菌种一般使用17cm×30cm，或者15cm×28cm的聚丙烯折角袋，聚丙烯的菌袋透明度好，便于观察菌丝长势和污染情况，如果采用高压灭菌则必须使用聚丙烯菌袋，可以用棉花封口，最好。 辅料准备：木屑、麦麸、白灰、石膏，用来填充枝条之间的空隙；白糖、磷酸二氢钾、硫酸镁，用来配置浸泡枝条的营养液。 2、浸泡枝条 营养液配置：白糖10g，磷酸二氢钾2g，硫酸镁1g，水1000ml，按照比例配置配置适量营养液，将枝条整捆放入营养液中浸泡15小时，浸泡时间要根据枝条的规格、气温进行调整，目的是枝条要泡透，可以将枝条敲碎，观察是否有白芯，如果有说明没有泡透。

《食用菌生产技术》实训指导教材

《食用菌生产技术》实训指导教材 实训一食用菌形状结构观看 一、目的要求 观看食用菌菌丝体的生长状态，利用显微镜认识食用菌的营养体和繁育体的微观结构，利用徒手切片观看食用菌子实体的微观结构，通过对食用菌子实体形状特点的观看，让学生们了解和熟悉各种食用菌子实体的类型和特点，并能按照子实体的外形进行分类。 二、实训预备 1、材料平菇、香菇、双孢蘑菇、草菇、金针菇、木耳、银耳、猴头菇、灵芝、密环菌、羊肚菌、虫草、茯苓等食用菌子实体或菌核浸浸标本或干标本、鲜标本及部分食用菌的菌丝体，担孢子等。 2、仪器工具光学显微镜（100～600倍）、接种针、无菌水滴瓶、染色剂（石炭酸复红或美蓝等）、酒精灯、75%酒精瓶、火柴、载玻片、盖玻片、刀片、培养皿、绘图纸、铅笔等。 三、内容和方法步骤 （一）菌丝体形状特点观看 1、菌丝体宏观形状观看。①观看平菇、草菇、金针菇、木耳、银耳及香灰菌、蘑菇、猴头、灵芝等食用菌的试管斜面菌种或PDA平板上生长的菌落，比较其气生菌丝的生长状态，并观看菌落表面是否产生无性孢子。 ②观看菌丝体的专门分化组织：蘑菇菌柄基部的菌丝束；密环菌的菌索；茯苓的菌核；虫草等子囊菌的子座。 2、菌丝体微观形状观看。①菌丝水浸片的制作：取一载玻片，滴一滴无菌水于载片中央，用接种针挑取少量平菇菌丝于水滴中，用两根接种针将菌丝拔散。盖上盖玻片，幸免气泡产生。②显微观看：将水浸片置于显微镜的载物台上，先用10倍的物镜观看菌丝的分支状态，然后转到40 倍物镜下认真观看菌丝的细胞结构等特点，并辩认有无菌丝锁状联合的痕迹。 （二）子实体形状特点观看

1、子实体宏观形状观看。认真观看各种类型的食用菌子实体的外部形状特点，并比较各种子实体的要紧区不，专门注意菌盖、菌柄、菌褶（或菌孔、菌刺）、菌环、菌托的特点，并对之进行比较、分类。 2、子实体微观形状观看。①菌褶切片观看：取一片平菇菌褶置于左手，右手持刀片，横切菌褶若干薄片漂浮于培养皿的水中，用接种针先取最薄的一片制作水浸片，显微观看平菇担子及担孢子的形状特点。②有性、无性孢子的观看：灵芝担孢子水浸片观看；羊肚菌子囊及子囊孢子水浸片观看；草菇厚垣孢子水浸片观看；银耳芽孢子水浸片观看（以上各类孢子的观看可用标本片代替）。 四、作业 1、描述菌丝体的生长状态，并画出所观看菌丝、无性孢子、担子及担孢子的形状结构图。 2、列表讲明所观看各种类型的食用菌子实体的形状特点，如：伞状、头状、耳状、花絮状、肾状、扇状、蛋形、钟形等。 3、绘制一种食用菌子实体的形状图，用绘图笔或钢笔（黑）绘制生物图，要求图形真实、准确、自然，画面整洁。 实训二食用菌母种培养基的配制 一、目的要求 了解高压蒸汽灭菌锅的构造，了解食用菌母种培养基的配方，熟悉高压蒸汽灭菌锅的使用方法，把握母种培养基（PDA或PSA）的配制方法 二、实训预备 1、配制培养基材料马铃薯、葡萄糖（或蔗糖）、琼脂、水等。 2、仪器用具高压蒸汽灭菌锅（手提式或立式）、可调式电炉、铝锅（20cm）、汤勺、切刀、切板、量杯、纱片、漏斗（带胶管和玻璃管）、止水夹、漏斗架、试管（18mm×180mm或20mm×200mm）、1cm厚的长形木条（摆放斜面时垫试管用）、棉花（未脱脂）、捆扎绳、标签、天平等。 三、内容和方法步骤

食用菌生产技术 食用菌的菌种保藏

实验六食用菌菌种保藏 一,实验目的和内容 目的:了解并掌握菌种保藏的常用方法及其优缺点. 内容:1,学习斜面传代保藏方法. 2,学习液体石蜡保藏方法. 二,实验材料和用具 斜面菌种;原种；栽培种；老化菌种；干缩菌种；污染菌种 无菌水,液体石蜡,; 无菌试管,无菌滴管,接种环,干燥器,冰箱等, 三, 操作步骤 下列各方法可根据实验室具体条件与需要选做. (一)斜面传代保藏法 l.贴标签取各种无菌斜面试管数支,将注有菌株名称和接种日期的标签贴上,贴在试管斜面的正上方,距试管口2～3cm处. 2.斜面接种将待保藏的菌种用接种环以无菌操作法移接至相应的试管斜面上,； 3.培养：将菌种置于20℃-28℃培养5～7d. 4.保藏斜面长好后,可直接放入4℃冰箱保藏.为防止棉塞受潮长杂 菌,管口棉花应用牛皮纸包扎,或换上无菌胶塞,亦可用熔化的固体石蜡熔封棉塞或胶塞. 保藏时间依种类而不同，可保存2～6个月,移种一次;.此法的缺点是容易变异,污染杂菌的机会较多. (二)液体石蜡保藏法 l.液体石蜡灭菌在250mL三角烧瓶中装入100mL液体石蜡,塞上棉塞,并用牛皮纸包扎,12l℃湿热灭菌30min,然后于40℃温箱中放置l4d(或置于105～110℃烘箱中lh),以除去石蜡中的水分,备用. 2.接种培养同斜面传代保藏法. 3.加液体石蜡用无菌滴管吸取液体石蜡以无菌操作加到已长好的菌 种斜面上,加入量以高出斜面顶端约1cm为宜.

4.保藏棉塞外包牛皮纸,将试管直立放置于4℃冰箱中保存. 利用这种保藏方法,可保藏1～2年. 5. 活化恢复培养用接种环从液体石蜡下挑取少量菌种,在试管壁上 轻靠几下,尽量使油滴净,再接种于新鲜培养基中培养.由于菌体表面粘有液体石蜡,生长较慢且有粘性,故一般须转接2次才能获得良好菌种. (三) 原种保藏法 l. 原种制作按原种操作步骤制作谷粒原种或短枝条原种； 2. 贴标签将注有菌株名称和接种日期的标签贴在菌种瓶或袋上, 3. 培养：将菌种置于适宜温度下培养20～60d. 4.保藏：挑选生长健壮的,可直接放入4℃冰箱保藏.为防止棉塞受潮长杂菌,瓶口棉花应用牛皮纸包扎,或用熔化的固体石蜡熔封棉塞。 保藏时间依种类而不同，可保存6～12个月,移种一次;.此法的缺点是容易老化,四问题和思考 1.如何防止菌种管棉塞受潮和杂菌污染 2. 你选用什么方法保存菌种试设计一个实验方案. 3.试述各种菌种保藏方法的优,缺点.

食用菌复习题及答案

《食用菌生产技术》试卷一 一、名词解释：（每个4分，共20分） 1、菌种： 2、初生菌丝： 3、代料栽培： 4、无菌操作： 5、灭菌： 二、填空：（每空1分，共16分） 1、按食用菌的生活方式不同，可将其分为_____、______、______，三种类型，大部分食用菌属于_____。 2、菌种保藏在生产中应用最多的是_____保藏法，保藏温度为_____度。 3、食用菌的营养物质种类繁多，根据其作用和性质可能分为_____、_____、_____、_____。 4、食用菌菌丝体，生长阶段和子实体生长阶段对环境条件要求呈现出一定规律性，对温度要求一般是前_____后_____，对湿度、光线、氧气要求一般是前_____后_____。 5、在菌种分离过程中多采用_____法，对菌肉肥厚的子实体多采用_____组织进行分离进行接种； 三、判断题：（每个２分，共16分） 1、一般来说，食用菌是属于耐高温，怕低温的生物。（）

2、食用菌菌丝体阶段和子实体阶段适宜温度相同。（） 3、人们通常所指的菌种，实际上就是指经过人工方法培养的纯菌丝体。（） 4、食用菌菌丝体生长阶段在黑暗或弱光下均可生长良好，而子实体形成阶段必需有散射光的刺激。（） 5、利用紫外线杀菌时在黑暗条件下使用比白天使用杀菌效果好。（） 6、鸡腿菇菌丝体具有不覆土不出菇的特点。（） 7、在灭菌的时为防止高温季节培养料发酵变酸无论是常压还是高压灭菌在开始烧火时都应旺火猛攻。（） 8、食用菌生产中，只有双核菌丝才具有结实性。（） 四、问答题：（48分） 1、食用菌菌种保藏原理、目的和方法？（8分） 2、试述金针菇的栽培技术要点？（10分） 3、试述堆料、发酵的机理、方法及注意事项？（10分） 4、香菇袋料栽培的主要步骤？（10分） 5、生料栽培平菇在气温较高季节如何进行发菌管理？以防出现杂菌污染？（10分） 《食用菌生产技术》试卷一答案 一、名词解释：（每个4分，共20分） 1、菌种：是指能够进一步繁殖的纯的菌丝体。 2、初生菌丝：是由孢子萌发形成的单核菌丝，又称一级菌丝。 3、代料栽培：在食用菌生产中，用农作物秸杆、废料等代替段木进行栽培的一种食用菌栽 培形式，如袋料、畦床栽培。 4、无菌操作：采用物理、化学的方法，将环境、用具中的杂菌彻底杀灭，使之形成无菌的

食用菌液体菌种生产方法(发酵罐法)

食用菌液体菌种生产方法（发酵罐法） 传统菌种生产工艺，一般是由试管母种扩繁成二级种、三级种，生产周期长、污染率高、成本高、需大量人工、管理困难。液体菌种生产具有纯度高、活力强、繁殖快的特点，接种到培养料内有流动性好、萌发点多，发菌迅速等特种点。应用于生产与固体菌种相比有以下优点： 1．菌种生产周期短。固体种一般需25—40天，而液体种仅需3—7天。 2．接种后，萌发点多萌发点多、发菌快、出菇周期短。接种24小时菌丝布满料面，3—15天长满菌袋，一般品种10天左右可出菇。 3．接种方便、成本低。用液体菌种接种一般每袋成本是1—3分，每人每小时可接800袋以上，提高效益4—5倍。 4．适宜工厂化生产。可直接用于栽培料进行出菇，大批量生产菌袋。为食用菌集约化、标准化生产创造了条件。因此，适宜我国国情的液体菌种设备的出现，必将在食用菌生产领域引发一场新的革命。 液体菌种具有固体（颗粒）菌种无可比拟的优势，但是液体菌种生产设备是近几年刚发展起来并逐渐成熟的，因此很多人对此很陌生。在这里我们对此进行简单介绍 一、液体菌种设备基本原理 任何一种食用菌自身的生长必须满足其对温度、湿度、需氧量、养分等的需要，同时必须避免杂菌感染。在深层发酵技术上称之为选

择性发酵技术，如啤酒生产技术当属此例，而白酒生产则是生物菌群发酵技术。 液体菌种发酵设备（包括四大系统，温控系统由控制器、电热管等组成；供气系统由空气压缩机、输送管道、空气过滤器等组成；冷却系统由热交换器、进出水管道组成；搅拌系统由射流器、提升管等组成。 二、液体菌种生产的关键技术 1、溶氧量 液体菌种生产中最关键的是培养液中氧的溶解量，因为在菌丝生长过程中，必须不断的吸收溶解其中的氧气来维持自身的新陈代谢，氧气在液体（水）中的溶解量与压力、温度有关，同时与培养液的接触面积、渗透压有很大的关系。因此我们设计发酵设备时有效地解决了这些问题，如安装射流器使气泡细碎度增加等。 2、空气过滤 技术的关键就是保证进入的空气无菌度高，因此必须选择孔径小、材料先进的过滤膜。一般细菌直径在0.5-5um,酵母菌在1-10um，病毒一般在20-400mu，所以选择过滤膜时应综合考虑以上因素。当然如果选的太小，成本将大幅度提高。另外环境对于空气影响很大,在空气压缩机房、制种车间必须保持环境清洁。 3、培养液 培养液是菌丝生长发育的营养源，要求营养全面均衡。不同的菌种对营养要求偏重不同。配制原料有糖、麸皮、磷酸二氢钾、硫酸镁、

菌种保藏的方法

菌种保藏的方法 菌种是国家重要的生物资源，鉴于其自身的遗传性和变异性，在菌种保藏过程中，如何降低菌种的衰亡速度，防止杂菌污染，保持菌种遗传性状不变异，使优良高产菌株长期在生产中应用，成为食用菌领域一项重要的课题。为适应群众性生产的需要，为适应群众性生产的需要，本文介绍了几种简单易行、实用效果好的菌种保藏方法。 一、菌种保藏基本原理 通过低温、干燥、缺氧和饥饿等手段来达到最大限度降低菌丝体的生理代谢。首先要挑选优良纯菌种，包括菌丝体和它们的孢子；其次，根据其生理、生化特点，人为创造低温、干燥或缺氧等条件，抑制微生物的代谢作用，使其生命活动降低到极低的程度或处于休眠状态，从而延长菌种生命以及使菌种保持原有的性状，防止变异。 二、菌种保藏的方法 试管斜面菌种系列保存方法 1低温定期移植保藏法 将需要保藏的菌种接种在适宜的斜面培养基上，适温培养，当菌丝健壮地长满斜面时取出，放在3~5℃低温干燥处或4℃冰箱中保藏，每隔3~6个月移植转管1次，具体应根据菌种特性决定。保藏时要注意环境湿度不能太高，以防霉菌通过棉塞进入管内。因此，若用棉塞，可用干净的塑料薄膜或牛皮纸包扎棉塞，也可用无菌的白胶塞，并用石蜡涂封，即可减少污染的机会，也可防止培养基干燥。除草菇外，大多食用菌菌种都能采用此法保藏。 2液体石蜡保藏法

取化学纯液体石蜡装于三角瓶中高压灭菌后，放入40℃恒温箱中，蒸发其中水分，至石蜡油完全透明为止。将处理好的石蜡油移接在空白斜面上，28～30℃下培养2～3d，证明无杂菌生长方可使用。然后将母种接在斜面培养基上，当菌丝在斜面上生长丰满后，将液体石蜡注在斜面上，注入量以高出斜面1cm为宜，使菌种与空气隔绝，降低其新陈代谢能力。管口用灭过菌的白胶塞塞紧，并用石蜡涂封，直立放在室内干燥处或冰箱内保藏。一般可保存1年以上，在低温下保藏时间还可延长。使用时从斜面上挑取菌丝少许，移接到新鲜斜面培养基上，经培养即可。由于菌丝体沾有液体石蜡而影响其生长，需再经1次移接才能恢复正常生长。 3白胶塞封口保存法 选择与试管口径相符的白胶塞，用%煤酚皂溶液洗涤，浸泡在酒精内待用。当试管斜面长满菌丝后，在无菌条件下拔去棉塞，取浸泡的白胶塞1个，通过火焰迅速塞入试管口内，并用石蜡熔封。此法能达到与石蜡油封存相似的效果。用该法保存菌种可存活1～3年，但以每年移植1次为好。 4蒸馏水保藏法 将8成熟试管菌种放在接种箱内，注入蒸馏水，将培养基斜面全部淹没至管口2cm。管口用白胶塞塞紧，并用石蜡涂封，常温下置于阴凉处立放，可以保藏1年左右。 非斜面固体菌种系列保存法 1麦麸保藏法 将麦麸和水按∶1充分拌匀后，装入试管高压灭菌，经无菌检查合格后接种，适温下培养至菌丝体发育好后，将试管放入真空干燥器内，用真空泵将麦麸培养基内水分抽干，然后移入盛有硅胶的干燥器内，用凡士林密封在常温下保存，可保藏3～5年。

羊肚菌菌种制作技术

羊肚菌菌种制作技术 羊肚菌是世界上珍贵的稀有食用菌之一，属高级营养品。它富含蛋白质、碳水化合物、多种维生素及20多种氨基酸，特别是有机锗含量高，具有补肾、壮阳、补脑、提神的功能；主治精肾亏损、阳痿不举、性欲冷淡；对头晕失眠、肠胃炎症、脾胃虚弱、消化不良、饮食不振有良好的辅助治疗作用；还可以防癌抗癌、预防感冒、增强人体免疫力，在医学上有重要的开发价值。由于它功能齐全，香味独特，食疗效果显著，目前国内每千克售价800～1000元，尤其在西欧国家供应十分紧俏，价格更昂贵。 因羊肚菌与其它食用菌不同，栽培适应性较差，特别是在异地栽培稳定性差。因此，利用当地的羊肚菌品种分离制出的菌种，能适应当地环境，可避免异地购种的地区性差异和邮寄途中的影响，建议种植户最好分离当地的品种。它能适应当地环境，但也要注意羊肚菌的菌种隔年使用效果不好，有变异现象。这就给大面积栽培和推广带来了困难。所以羊肚菌的菌种最好每年分离、驯化。这是迄今尚未实现商品化栽培的原因之一，加上栽培管理或环境达不到要求就会不出菇。这就是羊肚菌人工栽培困难的奥秘。 一、制种注意事项 羊肚菌的菌种性能与其它食用菌不同，菌种分离方法和育种手段及栽培管理技术与其它食用菌也有很大差异。最大的缺点就是容易退化、变异、生霉。这对栽培羊肚菌带来很大困难。对此，首先要控制菌种传代，无论母种、原种、栽培种，若违反技术要求，多传一代就会出现上述不良反应或不长子实体。母种只能经过原种栽培种，到栽培中的一次流程和3次破菌愈合才能保住质量；若超过3次菌丝断裂而重新萌发的新菌丝，会失去或降低酶的分解作用，以致抗病力差，易生杂菌，不出菇。 二、母种制作 （一）培养基配方 ①黄豆芽500克（煮汁），白糖20克，琼脂20克，羊肚菌基脚～50克，水1升。 ②黄豆芽500克（煮汁），白糖20克，琼脂20克，水1升。 ③栎木屑500克（煮汁），白糖20克，琼脂20克，水1升。 ④马铃薯200克（煮汁），白糖20克，琼脂20克，蛋白胨0.5克，牛肉膏0.5克，水1升。 ⑤蛋白胨1克，葡萄糖20克，琼脂20克，酵母膏1克，磷酸二氢钾1克，硫酸镁1克，维生素B1，1克，水1升。pH值自然。 上述配方任选一组。将木屑或豆芽加水1升煮30分钟，过滤取汁，并将余下的水补足1升，加入其它原料，煮至溶化后，按母种制作常规方法，分装于18毫米×180毫米或20毫米×200毫米试管的1/5，塞上棉塞，使用高压灭菌锅彻底灭菌；在0.68千克压力下维持60分钟，自然冷却至指针回到原位才可打开，放成斜面备用。 （二）菌种分离 首先要具有食用菌专业基础知识、多年的菌种分离经验及菌丝鉴别能力，其次要购置母种培养基、无菌接种箱、恒温培养箱、冰箱、高倍显微镜等必要设备。根据当地羊肚菌生长季节，趁羊肚菌生长旺盛时做菌种分离工作。 1.分离方法。羊肚菌的分离方法与其它食用菌大不相同。它需要一种助生菌与羊肚菌菌丝共生时才能出菇。这种助生菌长期活动在土壤中，有时以芽孢菌形式出现，有时以菌丝形式出现。它为羊肚菌的原基形成和子实体生长发育起着至关重要的作用。因此，从土壤中分离该菌比其它任何方式分离要好些。但从土壤分离难度太大，成功率不到万分之一，并

食用菌复习题及答案

1、菌种：是指能够进一步繁殖的纯的菌丝体。 2、初生菌丝：是由孢子萌发形成的单核菌丝，又称一级菌丝。 3、代料栽培：在食用菌生产中，用农作物秸杆、废料等代替段木进行栽培的一种食用菌栽培形式，如袋 料、畦床栽培。 4、无菌操作：采用物理、化学的方法，将环境、用具中的杂菌彻底杀灭，使之形成无菌的状态，在这种 无菌的条件下进行食用菌生产操作称无菌操作。 5、灭菌：采用物理或化学的方法杀灭所有微生物（杂菌）的操作。 6、大型真菌：真核细胞型微生物，有典型的细胞核和完善的细胞器，不含叶绿素，无根、茎、叶的分化 的菌类。 7、杂菌：指含有对真菌生长有害的其他微生物，如（放线菌、细菌等）。 8、发菌期：从接种到菌丝长满瓶或袋的时间。 3、发菌期：从接种到菌丝长满菌袋或菌瓶的时间。 9、排冷气：在利用高压锅灭菌前更将锅内的冷气排出，可以一次性排气，当气压上升至时当排气阀打开； 也可在先打开排气阀，当温度上升至一定时，再关闭排气阀。 10、常压灭菌：即在常压下，利用常压灭菌锅将培养基内部及表面微生物杀死的一种灭菌方法，一般是 100℃蒸汽蒸制8-12小时。 1、锁状联合:在双核菌丝上的横隔膜处产生的一个具有特征性的侧生突起，它往往发生在菌丝顶部双核细 胞的两核之间。 2、担子果:高等担子菌承载担子及担孢子的一种高度组织化的结构。 3、菌环:内菌幕遗留在菌柄上的环状物，常在菌柄的上部。 4、初生菌丝:担孢子萌发后先形成芽管，继而伸长，生长成为管状的菌丝，并形成隔膜，对于多数食用菌 来说，隔膜使其成为单核的多细胞菌丝，这种单核菌丝就称为初生菌丝。 5、食用菌菌种:在适宜基质上生长良好并已充分蔓延，可用作食用菌生产的种源菌丝体。 6、栽培种:由原种移植到固体或液体培养基上扩大繁殖的菌丝体。 7、代料栽培:利用木屑以及棉籽壳、甘蔗渣、玉米芯、麦麸等农副产品代替段木，以塑料袋、菌种瓶等为 容器栽培食用菌的技术。 8、灭菌:用物理或化学方法杀死物体表面和内部的所有微生物（包括细菌的芽孢），使之达到无菌状态。 9、食用菌的驯化:野生大型可食用真菌经人类引种栽培并不断选择，逐渐成为人类所需的栽培品种的过程。 10、非病原病害:食用菌生长过程中由于受到不适宜的环境条件的刺激而引起的病害。 4.堆料发酵——把料拌好键堆，依靠微生物似的活动发酵，使料堆温度升至60~ 65℃达到杀菌灭虫的目的 5.次生菌丝——由单核菌丝培养转化而成又称双核菌丝 2、母种：用组织分离法得到的第一代菌丝体，又称一级种或试管斜面母种。 4、代料栽培：用锯末、棉子壳、秸杆等代替段木栽培的方法。 5、反季节栽培：不按正常季节进行的栽培。 1、按食用菌的生活方式不同，可将其分为寄生型、腐生型、共生型，三种类型，大部分食用菌属于腐生型。 2、菌种保藏在生产中应用最多的是低温保藏法，保藏温度为0～4 ℃度。 3、食用菌的营养物质种类繁多，根据其作用和性质可能分为碳源，氮源，无机盐，生长因子。 4、食用菌菌丝体，生长阶段和子实体生长阶段对环境条件要求呈现出一定规律性，对温度要求一般是前__高__后__低_，对湿度、光线、氧气要求一般是前__少___后__多___。 5、在菌种分离过程中多采用__组织分离法___法，对菌肉肥厚的子实体多采用___子实体（菌内）__组织进行分离进行接种； 1、食用菌菌种的生产，一般需要经过母种、原种和栽培种三级培养过程。 2、在无菌条件下____，进行的菌种移植操作称为无菌操作。 3、食用菌都是__异养型的生物，绝大数为___腐_生，少数为___寄_生或共_生。 4、平菇栽培不需灭菌，这种栽培方式称生料栽培_ 5、菌盖下面片层状的结构称___菌褶 6、营养液中加入%~2%琼脂制成的培养基称____固体培养基_。 7、能够满足食用菌生长、繁殖和完成各种生理活动所需的物质称_营养物质。

ATCC菌种保藏方法

ATCC菌种保藏方法 微生物在使用和传代过程中容易发生污染、变异甚至死亡，因而常常造成菌种的衰退，并有可能使优良菌种丢失。菌种保藏的重要意义就在于尽可能保持其原有性状和活力的稳定，确保菌种不死亡、不变异、不被污染，以达到便于研究、交换和使用等诸方面的需要。菌种保藏的方法有哪些呢? 传代保存法 有些微生物当遇到冷冻或干燥等处理时，会很快死亡，因此在这种情况下，只能求助于传代培养保存法。传代培养就是要定期地进行菌种转接、培养后再保存，它是最基本的微生物保存法，例如酸奶等常用生产菌种的保存。 传代保存时，培养基的浓度不宜过高，营养成分不宜过于丰富，尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低。培养温度通常以稍低于最适生长温度为好。若为产酸菌种，则应在培养基中添加少量碳酸钙。 一般地，大多数菌种的保藏温度以5℃为好，像厌氧菌、霍乱弧菌及部分病原真菌等微生物菌种则可以使用37℃进行保存，而蕈类等大型食用菌的菌种则可以室温直接保存。 传代培养保存法虽然简便，但其缺点也很明显，如：①菌种管棉塞经常容易发霉;②菌株的遗传性状容易发生变异;③反复传代时，菌株的病原性、形成生理活性物质的能力以及形成孢子的能力等均有降低;④需要定期转种，工作量大;⑤杂菌的污染机会较多。 液体石蜡覆盖保存法 该法较前一种方法保存菌种的时间更长，适用于霉菌、酵母菌、放线菌及需氧细菌等的保存。此法可防止干燥，并通过限制氧的供给而达到削弱微生物代谢作用的目的。其具有方法简便的优点，同时也适用于不宜冷冻干燥的微生物(如产孢能力低的丝状菌)的保存，而某些细菌如固氮菌、乳酸杆菌、明串珠菌、分枝杆菌、红螺菌及沙门氏菌等和一些真菌如卷霉菌、小克银汉霉、毛霉、根霉等不宜采用此法进行菌种保藏。 悬液保存法 即使微生物混悬于适当溶液中进行保存的方法。常用的有： ① 蒸馏水保存法：适用于霉菌、酵母菌及绝大部分放线菌，将其菌体悬浮于蒸馏水中即可在室温下保存数年。本法应注意避免水分的蒸发。

食用菌栽培技术课程标准.doc

《食用菌栽培技术》课程标准（一）课程的性质与任务 《食用菌栽培技术》是中等职业学校设施农业生产技术专业 设施农业栽培专门化方向课程，是从事设施农业生产技术岗位工作的 必修课程。其任务是使学生掌握食用菌的基础理论及生产技术，并能利用其原理对生产技术进行实践及革新。在教学中利用丰富的教学手 段及开展生动活泼的教学活动，培养学生严谨的科学态度，创新精神与分析问题、解决问题的能力，培养学生甘于奉献、爱岗敬业的职业 道德，热爱农业、保护环境的职业情感。 （二）课程教学总体目标 本课程的教学目标是：使学生掌握食用菌生产的基础知识，能够对食用菌进行分类识别，熟练掌握食用菌的菌种生产技术，并能根据播种期与生产量，确定出合适的各级菌种的生产时间与制种量。通过该课程的学习，学生能够熟练掌握常见食用菌的生物学特性及其栽培管理关键技术，制订食用菌生产计划，解决食用菌生产中的技术问题，在此基础上形成以下职业能力。 职业能力目标： （1）了解食用菌菌种的概念，能够分辨出各食用菌种类。 （2）掌握食用菌菌种生产技术。 （3）掌握食用菌生产中常用消毒灭菌方法。 （4）熟悉平菇、香菇、木耳、双抱菇、鸡腿菇、金针菇等主要 食用菌的生物学特性，掌握其栽培关键技术。

（三）教学内容与要求 项目类别教学内容考核要求参考学时 绪论 1. 食用菌的概念和分类 1. 了解蔬菜食用菌的概念 2 项2. 发展食用菌生产的意义及分类 3. 食用菌的营养价值与药用价值 2. 熟悉食用菌的营养和药 目 4. 食用菌产业的现状与发展前景用价值 一 3. 了解食用菌产业的现状 与发展前景 食用菌基 1. 食用菌的形态结构 1. 熟悉食用菌的形态结构8 础 2. 食用菌的生长发育、繁殖及生活和食用菌生长发育的环境 史 3 条件 项. 食用菌的营养 2. 熟悉食用菌对营养物质 目 4. 影响食用菌生长发育的环境条件的要求 二 5. 食用菌遗传育种 3. 了解食用菌的生活史和 6. 实训育种方法 （1）食用菌形态结构观察 （2）食用菌抱子大小的测定 食用菌菌 1. 菌种生产的基本设备 2. 培养基 1. 熟悉食用菌菌种生产的10 种生产的配制 3. 消毒与灭菌 4. 接种与培设备和菌种生产过程 项养 5. 菌种分离方法 6. 菌种的保存 2. 掌握食用菌培养基的配 目与复壮 7. 液体菌种生产简介 8. 实制方法 三训（ 1）菌种培养基制作（ 2）接 3. 能够独立进行消毒与灭 种与培养菌、接种和培养、菌种分离 和菌种的保存 木腐型食 1. 香菇 1. 掌握香菇和平菇的栽培 用菌栽培（1）概述管理技术 （ 2）生物学特性 2. 熟悉黑木耳、银耳和金针 （ 3）栽培管理技术菇的栽培特点 2. 平菇 （1）概述 （ 2）生物学特性 （ 3）栽培管理技术 项 3. 黑木耳 目 （1）概述 四 （ 2）生物学特性 （ 3）栽培管理技术 4. 银耳 （1）概述 （ 2）生物学特性 （ 3）栽培管理技术 5. 金针菇 （ l ）概述

实验室菌种保存方法

实验室菌种保存方法 1、传代保存法：有些微生物当遇到冷冻或干燥等处理时，会很快死亡，因此在这种情况下，只能求助于传代培养保存法。传代培养就是要定期地进行菌种转接、培养后再保存，它是最基本的微生物保存法，例如酸奶等常用生产菌种的保存。 传代保存时，培养基的浓度不宜过高，营养成分不宜过于丰富，尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低。培养温度通常以稍低于最适生长温度为好。若为产酸菌种，则应在培养基中添加少量碳酸钙。 一般地，大多数菌种的保藏温度以5℃为好，像厌氧菌、霍乱弧菌及部分病原真菌等微生物菌种则可以使用37℃进行保存，而蕈类等大型食用菌的菌种则可以室温直接保存。 传代培养保存法虽然简便，但其缺点也很明显，如：①菌种管棉塞经常容易发霉；②菌株的遗传性状容易发生变异；③反复传代时，菌株的病原性、形成生理活性物质的能力以及形成孢子的能力等均有降低；④需要定期转种，工作量大；⑤杂菌的污染机会较多。 2、液体石蜡覆盖保存法：该法较前一种方法保存菌种的时间更长，适用于霉菌、酵母菌、放线菌及需氧细菌等的保存。此法可防止干燥，并通过限制氧的供给而达到削弱微生物代谢作用的目的。其具有方法简便的优点，同时也适用于不宜冷冻干燥的微生物（如产孢能力低的丝状菌）的保存，而某些细菌如固氮菌、乳酸杆菌、明串珠菌、分枝杆菌、红螺菌及沙门氏菌等和一些真菌如卷霉菌、小克银汉霉、毛霉、根霉等不宜采用此法进行保存。 3、载体保存法：即将微生物吸附在适当载体上进行干燥保存的方法。常用的有方法包括以下几种，如： ①土壤保存法：主要用于能形成孢子或孢囊的微生物菌种的保藏。方法是在灭菌的土壤中加入菌液，立即在室温下进行干燥或使菌体繁殖后再干燥，然后冷藏或在室温下密封保存。保存用的土壤原则上以肥沃的耕土为宜，土壤需风干、粉碎、过筛和灭菌。

菌种科学保藏常用方法

菌种科学保藏常用方法 中华保健食品商务网https://www.sodocs.net/doc/967052218.html, 2004-5-31 生产母种通常用PDA培养基，选用180×18毫米试管，制成斜面试管接种而成。PDA培养基配方： 土豆（去皮、去芽）200克（也可用淀粉，用量为6克/1000毫升） 葡萄糖20克 琼脂20克 磷酸二氢钾2克 复合维生素B 2克 旦白胨5克 硫酸镁0.3克 加水1300毫升 本刊记者高级农艺师丁湖广

菌种是国家重要的生物资源，是以微生物为对象的研究和生产所必不可少的材料。因此，世界各国对菌种的保藏极为重视，有55个国家专门设菌种保藏机构。国际微生物学会设有世界菌种保藏机构，简称WFCC，编写有《世界菌种保藏名录》。我国菌种保藏机构，有中国微生物菌种保藏管理委员会（设在北京），共保藏有8000多个菌株，其任务是收藏、供应各种优良菌种。 菌种保藏的目的是：使菌种长期保藏之后，仍然保持着原有的生命力、优良生产性能、形态特征，以及不污染杂菌和不发生虫害。菌种保藏的原理是通过低温、干燥、隔绝空气（真空）和断绝营养等手段，以达到最大限度地降低菌种的代谢强度，抑制菌丝的生长的繁殖。由于菌种的代谢相对静止，生命活动将处休眠状态，所以能够保藏较长时间。 现将菌种保藏的几种主要方法介绍如下。 一、斜面低温保藏这是一种常用最简便的保藏方法。首先将需要保藏的菌种移接到PDA培养基上。为了减少培养基水分散发，延长保藏时间，在配制时琼脂用量加到2.5％，再加入0.2％磷酸氢二钾、磷酸二氢钾及碳酸钙等缓冲剂，以中和保藏过程中产生的有机酸。如果是保藏香菇和木耳菌种，应把配方中的葡萄糖换成麦芽糖，培养基装入量不少于12毫升。菌种接种后置于用适宜温度下培养至菌丝长满斜面，然后选择菌丝生长健壮的试管，先用硫酸纸包扎好管口棉塞，再将若干支试管用牛皮纸包好。也可以用无菌胶塞代替棉塞，既能防止污染，又可隔绝氧气，避免斜面干燥。 具体做法是：选择大小合适的橡皮胶塞，洗净晾干，在75％酒精液中消毒1小时后，用无菌纱布吸去酒精，在火焰上方烧去残留的酒精液；于无菌条件下，将试管口在火焰上灼烧灭菌，拔出棉塞，换上胶塞，再用石蜡密封，放入4℃左右的电冰箱内保存。每隔3～4个月转管一次。如果用胶塞石蜡封口，转管期可延迟至6个月。 斜面低温保藏过程，冰箱内相对湿度应控制在40％～50％，尽量少启用冰箱，以免产生冷凝水而引起污染；若必须启用应边开、边取、边关，做到快速、短暂、熟练。对于个别不耐低温的菌种，如草菇菌丝在5℃下易于死亡，一般置10～12℃条件下保藏，或加质量分数0.1无菌甘油作防冻剂，然后置于4～6℃冰箱贮藏。低温贮藏法简单易行，适用于所有食用菌，是最实用贮藏方法，已得广泛应用。在冰箱较普及的情况下，食用菌专业户、菇农等均可采用。缺点是贮藏时间短，需经常继代培养，不但费时费工，而且传代多，易引起污染、衰退或造成差错。 二、液体石蜡保藏液体石蜡又名矿油，所以该法又称矿油保藏法。这种方法操作简便，只要在菌苔上灌注一层无菌的液体石蜡，即可使菌种与外界空气隔绝，达到防止培养基水分散失，抑制菌丝新陈代谢，推迟菌种老化，延长菌种生命和保存时间的目的。所以此种方法也称为隔绝空气保藏法。 具体操作：选用化学纯液体石蜡100毫升，装入250毫升锥形瓶内，瓶口加棉塞，置于0.103兆帕（1.055千克/厘米2）灭菌30～60分钟；然后置于160℃烘箱中处理1～2小时；或置40℃温箱内3天左右，见瓶内液体石蜡呈澄清透明，液层中无白色雾状物时即可。其目的是使灭菌时进入瓶内的水分得到蒸发。然后在无菌条件下，将液体石蜡倾注或用无菌吸管移入生长健壮、丰满的斜面菌种上，使液体石蜡高出斜面顶端1厘米左右；最后直立放置在洁净的室温下贮藏，转管时直接用刀切取1小块菌种，移接到新的斜面培养基中央，适温培养，余下的菌种仍在原液体石蜡中贮藏。 因经贮藏后的菌丝沾有石蜡，生长慢而弱，需再继代转接1次方可使用。贮藏场所应干燥，防止棉塞受潮发霉；定期观察，凡斜面暴露出液面，应及时补加液体石蜡。也可用无菌橡皮塞代替棉塞：或将棉塞外露部分用刀片切除，蘸取融化的固体石蜡封口，以减慢蒸发。此法贮藏时间可达1年以上，有的可达10年，效果好。 三、悬液保藏此法是将需要保种的菇类菌丝球或孢子保藏在适当的媒液中。现介绍3种媒液的保藏方法： 1、生理盐水保藏法：本法适合保藏深层培养的菌丝球，以无菌生理盐水作为媒液进行保藏。首先制备生理盐水，按常规法制备0.85％的生理盐水，健壮试管每管装约5毫升，经高压灭菌。将保藏的菌种接入马铃署、葡萄糖液体培养基中，250毫升三角瓶装入60毫升，振荡培养5～7天（27～28℃，180转/分）。然后吸取菌丝球4～5个放入上述试管中，管中加上无菌橡皮塞，并用固体石蜡封好，置于4℃下保藏。据黑龙江应用微生物研究所报道，用此法保藏香菇、紫芝菌种，可存活18个月：保藏双孢蘑菇、木耳、银耳、金针菇、茯苓、假蜜环菌、金顶磨、糙皮侧耳、猴头菌等菌种、可存活2年。 2、蒸馏水保藏法：这是保存斜面菌种和孢子最简单的方法，有效期可达1年以上。斜面蒸馏水贮藏：在锥形瓶内装入容量1/3左右的蒸馏水，加棉塞，在0.103兆帕（1.055千克/厘米2）121℃灭菌30分钟，冷却。在无菌条件下，将蒸馏水倾注入需保藏的斜面菌种内。加水量需高出斜面顶端1～2厘米，更换无菌橡皮塞，