人类染色体标本的制备与G显带核型分析报告

人类染色体标本的制备与G显带核型分析报告概述

核型分析是指通过对细胞的染色体观察，了解它们的数量、形态，从而判断个体的性

别以及是否存在染色体异常。本文将介绍人类染色体标本的制备方法以及采用G显带染色

技术进行核型分析的过程和结果。

材料与方法

标本制备：

1.通过体内生长的细胞系培养得到细胞，并将它们发送至染色体形态捕获系统实验

室。

2.将收到的细胞进行样品准备。先加入均浆剂净水，并初次混合。待与细胞量相等的5％高马尔谷酸(Na2HPO4)特性缓冲液和1％偏硫酸，最后混合。

3.轻轻转动管子，并且离开它说较长时间，使得细胞得以与溶液完全变淡。

4.通过四氯化碳进行固定，直至样品中的细胞结构都没有被损坏。

5.利用各种化学剂处理样本，以预处理出更好的结构。

G显带染色：

1.将钟室内的标本压片，使细胞的核形成按制定的标准排序，并在有机玻璃片底部粘贴。

2.加入如下染料：

a. Giemsa液：Giemsa指的是罗马帝国时期的波尔多区Giemsa教授。G显带染色技术将溶液中的Giemsa染色质直到他们的总量到达6倍于DNA总量。Giemsa染料在滴定时间内还要使染色质呈现某些将染色质透过玻片清楚可见的颜色。

b. Sorenson’s Buffer：Sørensen’s缓冲液是一种被设计为模仿人类体液的缓冲液。在G显带染色过程中，它发挥的作用是将不同颜色的细胞内组成分离出来，使得它们不会

在一幅核型图像中混杂在一起。

3. 在加入染料后将玻璃片封起来，等待颜料与核相结合。

4. 将镜头放置在显微镜底座中，并通过显微镜观察标本。

分析：

我们使用的显微镜是能见度很好的显微镜，能够让细胞结构非常清晰可见。我们可以在屏幕上观察到标本图像。

我们首先计算出图像中每个单独的染色体的数目以及它们的大小和形状。在一张图像上，我们可以很容易地区分每个单独的染色体，并根据它们的大小、形状和位置来确定它们在细胞核中的位置。

结果

我们的细胞核型分析结果显示，这个体细胞核内的染色体数目为46个。其中，22对为自动体染色体，1对为性染色体。根据染色体长度和颜色的不同，我们将每个染色体分类，并将它们打上标记标识，从而将核型信息呈现出来。

讨论

我们的结果显示，这个样本的核型正常，不包含任何染色体的数量、形态异常。我们的G显带染色技术也证明了这个样本的普通核型类型。这项研究的结果有助于了解人类染色体的结构与功能，为诊断基因疾病提供参考。但是，由于我们只用了一种样本，因此需要更多的研究来确保我们的结果是可靠的。

人类染色体G带制备

人类染色体Ｇ带标本制备及观察 一、实验目的和要求 初步掌握人类染色体标本培养制备的基本方法 初步掌握人类染色体G显带标本制备的方法及各号染色体G带带型 二、实验内容和原理 正常情况下，外周血中的小淋巴细胞，几乎都处在G1期或G0期，外周血细胞中是没有分裂相的。1960年，Nowell和Moorhead证实，外周血中的小淋巴细胞可以在植物血凝素(phytohaemagglutinin, PHA)和其它有丝分裂刺激剂的影响下，在形态上转变为淋巴母细胞，在培养中进行有丝分裂。在培养过程中加入秋水仙素可以破坏纺锤体结构，使细胞有丝分裂停止在中期，以便于染色体观察。通过低渗和固定处理，就可以迅速而又简便地获得体外生长的细胞群体和有丝分裂相。人体的1ml外周血中一般含有约（1～3）×106 个小淋巴细胞，足够染色体标本制备和分析之用。本节介绍人外周血淋巴细胞的悬浮培养法，以及染色体标本的制备。 G显带是指Giemsa染液染色后，使每条染色体上显示出深浅交替横纹的技术。A-T相对丰富的区域染为深带， G-C相对丰富的区域染为浅带。将已经过老化的染色体制片放到37℃胰酶中进行预处理，胰酶可以从染色体上抽取特定的疏水蛋白，然后用Giemsa染色。胰蛋白酶法制作简便，成本低廉，制作周期短，显示的带纹清晰，是研究分析染色体的主要常规方法之一。 三、主要仪器设备 实验材料：人外周血 (淋巴细胞) 实验器具：离心机、恒温培养箱、恒温水浴箱、培养瓶、离心管、注射器和针头（61/2号）、吸管、量筒、火材、洒精灯、载玻片、染缸、试管架、玻璃铅笔、显微镜、擦镜纸、吸水纸等。 药品和试剂：肝素、秋水仙素、低渗液、固定液、磷酸缓冲液、Giemsa工作液、RPMI 1640培养基、小牛血清、植物血凝素（PHA）等

染色体 实验报告

染色体标本的制备及组型实验 生命科学学院张瀛 【实验目的】 1．掌握染色体标本的制作方法。 2．认识不同生物染色体的特征，学会做染色体组型图。 【实验用品】 小白鼠，秋水仙素，生理盐水，0.3%KCl液，固定液，铜网，酒精灯，离心机，注射器，剪刀，镊子，载玻片，滴管，显微镜等。 【实验原理】 染色体标本制作的原理 细胞分裂中期染色体形状较为清楚，故使用中期细胞，并以每条染色体相对独立存在为 染色体标本制作的四大要点 1）PHA：促细胞分裂，使淋巴细胞返幼，变为淋巴母细胞。 2）秋水仙素：破坏微管装配，使纺锤体不能形成，使大量细胞停止在分裂中期。（相同作用：秋水仙胺、长春碱、鬼臼素） 3）低渗作用：水进入细胞内，使细胞内容空间变大，染色体间的距离拉大，易于染色体分散开。 4）空气干燥：使细胞和染色体展开。 5）固定：用camoy`s solution（甲醇：冰醋酸=3:1）作用使蛋白质变性，对染色体内的组蛋白来说，变形后硬度增加，保持了染色体的“即时形态”，对细胞膜蛋白来说，变形使细

胞膜硬度增强，形成屏障作用，防止了细胞内物质外溢和丢失。 染色体标本制作的意义 根据染色体的特征（数目、形态、大小等）制作染色体组型图。 染色体标本制作的应用 1） 生物学方面：根据染色体特征鉴别生物及种类。 染色体数目：兔-44条，猫-38条，狗-78条，马-64条，人-46条，小鼠-40条（18对端着丝粒染色体，第17、18对为亚端着丝粒染色体），大鼠-42条，鸡-78条。 2） 临床医学方面：主要用于遗传性疾病的诊断及研究。 因此，染色体组型实验广泛应用于胎儿遗传性疾病早期诊断中（抽取羊水）。 染色体组型 把真核生物的一个体细胞中的各个染色体按其长度、形状和着丝粒的位置排列成一定顺序的过程，即为染色体组型。 染色体核型 染色体组型是染色体核型的模式表达。 染色体组型及分群依据 主要根据染色体的相对长度，着丝粒的位置，其次是臂的长短，以及次级缢痕或随体的有无等方面。 描述染色体的四个参数 相对长度：可用来表示每条染色体的长度。 臂指数：可用来确定臂的长度。 为了更准确的区别压中部和亚端部着丝粒染色体，Levan 提出划分标准： 1．0-1．7之间：中部着丝粒染色体（M ） 1．7-3．0之间：亚中部着丝粒染色体（SM ） 3．0-7．0之间：亚端部着丝粒染色体（ST ） 7．0以上：端部着丝粒染色体（T ）

人类染色体标本的制备与G显带核型分析报告

人类染色体标本的制备与G显带核型分析报告概述 核型分析是指通过对细胞的染色体观察，了解它们的数量、形态，从而判断个体的性 别以及是否存在染色体异常。本文将介绍人类染色体标本的制备方法以及采用G显带染色 技术进行核型分析的过程和结果。 材料与方法 标本制备： 1.通过体内生长的细胞系培养得到细胞，并将它们发送至染色体形态捕获系统实验 室。 2.将收到的细胞进行样品准备。先加入均浆剂净水，并初次混合。待与细胞量相等的5％高马尔谷酸(Na2HPO4)特性缓冲液和1％偏硫酸，最后混合。 3.轻轻转动管子，并且离开它说较长时间，使得细胞得以与溶液完全变淡。 4.通过四氯化碳进行固定，直至样品中的细胞结构都没有被损坏。 5.利用各种化学剂处理样本，以预处理出更好的结构。 G显带染色： 1.将钟室内的标本压片，使细胞的核形成按制定的标准排序，并在有机玻璃片底部粘贴。 2.加入如下染料： a. Giemsa液：Giemsa指的是罗马帝国时期的波尔多区Giemsa教授。G显带染色技术将溶液中的Giemsa染色质直到他们的总量到达6倍于DNA总量。Giemsa染料在滴定时间内还要使染色质呈现某些将染色质透过玻片清楚可见的颜色。 b. Sorenson’s Buffer：Sørensen’s缓冲液是一种被设计为模仿人类体液的缓冲液。在G显带染色过程中，它发挥的作用是将不同颜色的细胞内组成分离出来，使得它们不会 在一幅核型图像中混杂在一起。 3. 在加入染料后将玻璃片封起来，等待颜料与核相结合。 4. 将镜头放置在显微镜底座中，并通过显微镜观察标本。 分析：

我们使用的显微镜是能见度很好的显微镜，能够让细胞结构非常清晰可见。我们可以在屏幕上观察到标本图像。 我们首先计算出图像中每个单独的染色体的数目以及它们的大小和形状。在一张图像上，我们可以很容易地区分每个单独的染色体，并根据它们的大小、形状和位置来确定它们在细胞核中的位置。 结果 我们的细胞核型分析结果显示，这个体细胞核内的染色体数目为46个。其中，22对为自动体染色体，1对为性染色体。根据染色体长度和颜色的不同，我们将每个染色体分类，并将它们打上标记标识，从而将核型信息呈现出来。 讨论 我们的结果显示，这个样本的核型正常，不包含任何染色体的数量、形态异常。我们的G显带染色技术也证明了这个样本的普通核型类型。这项研究的结果有助于了解人类染色体的结构与功能，为诊断基因疾病提供参考。但是，由于我们只用了一种样本，因此需要更多的研究来确保我们的结果是可靠的。

人类外周血培养及染色体核型分析

人类外周血培养及染色体核型分析 一、实验目的： 1.学习外周血淋巴细胞悬浮培养的原理和方法； 2.利用培养后进行分裂的细胞制备人类染色体标本； 3.利用人类染色体核型分析软件进行核型分析。 二、实验原理： 1、植物血凝素的作用 外周血中的淋巴细胞几乎都是处在G0或G1期，一般情况下是不分裂的。当在培养基中加入植物血凝素(PHA)时，这种小淋巴细胞受到刺激后转化为淋巴母细胞，进而开始进行有丝分裂。 2、秋水仙素的作用： 秋水仙素(colchicines)可以抑制细胞纺锤体的形成，使处在分裂的细胞停留在中期。因此利用秋水仙素处理可以获得许多同步的中期分裂细胞。 使用秋水仙素处理会引起染色体在一定程度上的收缩，因此在处理时间和浓度上要合适。 3、低渗的原理： 徐道觉(T.C.Hsu)等于1952年发现在固定细胞之前使用低渗液进行处理，可以使细胞的核膜吸水膨胀，滴片后细胞破裂，染色体分散开来，在显微镜下易于观察和统计，染色效果也明显提高。 这种技术被广泛采用后，使人类染色体分析技术得到了发展。 4、核型和带型： 核型(karyotype)： 是指染色体组在有丝分裂中期的表型, 是染色体数目、大小、形态特征的总和。 在对染色体进行测量计算的基础上, 进行分组、排队、配对, 并进行形态分析的过程叫核型分析。 将一个染色体组的全部染色体逐条按其特征画下来，再按长短、形态等特征排列起来的图称为核型模式图，它代表一个物种的核型模式。 带型（banding pattern） 即染色体带型。借助细胞学的特殊处理程序，使染色体显现出深浅不同的染色带。染色带的数目、部位、宽窄和着色深浅均具有相对稳定性，所以每一条染色体都有固定的分带模式，即称带型。 常用的显带技术所显示的带有Q带、G带、C带、R带、T带等。就每一种分带技术而言，每一染色体的带型是高度专一和恒定的。 三、实验用具及试剂： 1.实验仪器及用具： 恒温培养箱、离心机、恒温水浴箱、冰箱、显微镜、显微数码摄像系统、染色体分析仪； 培养瓶、注射器、微量移液器、枪头、吸管、离心管(10ml)、载玻片、烧杯、量筒。 2. 实验试剂： 外周血淋巴细胞培养基 2%碘酒 75%酒精 20µg/ml秋水仙素 0.075 mol/L KCl溶液

人类G显带染色体核型分析

人类G显带染色体核型分析 引言 人类基因组中的染色体是遗传信息的主要载体。其中，性染色体在性别决定中 起着重要的作用。在人类中，性别由两种类型的性染色体决定：XX对应女性，XY 对应男性。正常情况下，人类的细胞核中共有46条染色体，其中44条为非性染 色体，另外2条为性染色体。本文将对人类G显带染色体核型进行分析。 G显带染色体 G显带染色体技术是一种常用的染色体核型分析方法，它使用某些特定的染色 剂对染色体进行染色，以便更好地观察和研究染色体的形态和结构。G显带染色技术具有高分辨率和高对比度的特点，可以清晰地显示出染色体上的各种条纹和细节，有助于鉴定染色体异常和进行核型分析。 人类G显带染色体核型 人类的G显带染色体核型是指对人类细胞中的染色体进行G显带染色后所观 察到的染色体图型。正常情况下，人类的核型为46,XX或46,XY，表示每个细胞核 中都包含有22对自动染色体和一对性染色体。其中，自动染色体按照从长到短的 顺序编号为1-22号染色体，性染色体用X和Y表示，女性的核型为46,XX，男性 的核型为46,XY。 核型异常与疾病关联 核型异常是指染色体在数量或结构上发生异常变化。在人类中，核型异常与一 些遗传性疾病的发生和发展密切相关。例如，唐氏综合征是由于21号染色体的三 体性引起的，患者的核型为47,XX(+21)或47,XY(+21)。爱德华综合征也是一种常 见的核型异常疾病，其核型为47,XXY。核型异常的检测对于某些疾病的早期诊断 和预防具有重要意义。 G显带染色体核型分析的步骤 进行G显带染色体核型分析需要经过以下几个步骤： 1. 细胞培养和处理 首先，需要从被检测的样本中提取出细胞，常用的样本包括外周血、羊水、胎 盘组织等。然后，将提取得到的细胞进行培养，使其增殖到一定数量。接下来，使用适当的方法处理细胞，使其进入到有利于显带形成的状态。

人类染色体标本制备及核型分析

人类染色体标本制备及核型分析 引言： 一、人类染色体标本制备步骤： 1.收集样本：收集需要研究的人类标本，可以是血液、组织、胎儿细 胞等。 2.细胞培养：将收集的样本进行细胞培养，通常采用体外培养的方式，如使用无菌培养皿和细胞培养基。 3.处理样本：细胞培养达到一定数量后，可以使用震荡器等设备将细 胞从培养皿上剥离下来，制备成单细胞悬液。 4.固定细胞：将细胞悬液进行固定处理，一般使用醋酸乙酯等有机溶 剂将细胞固定在载玻片上。 5.染色：染色是核型分析的关键步骤，可以使用吉姆萨染色法、G显 带染色法等多种染色方法，使染色体可见并呈现出特定的形态和颜色。 6.干燥和贴片：将染色的载玻片进行干燥处理，然后使用透明胶带将 玻片贴到载玻片上。 二、核型分析方法： 1.显微镜观察法：使用光学显微镜对染色体进行观察和分析，直接通 过目视的方式判断染色体的形态和数量。 2.数字图像分析法：使用计算机图像分析系统对染色体图像进行数字 化处理，通过计算机算法分析染色体的长度、形态、染色体异常等指标。

3.荧光原位杂交法（FISH）：利用标记有特定荧光标记物的探针与染 色体特定区域发生互补结合，从而通过荧光显微镜观察染色体的特定区域。 4.光学显微镜配合显影法：使用特定的显影剂，使染色的染色体呈现 出明亮的色带，详细观察和分析色带的大小、位置及形态等。 三、核型分析的意义： 1.遗传病诊断：染色体核型异常与一些遗传疾病有关，通过核型分析 可以确定染色体异常和遗传病的关联。 2.胎儿异常筛查：通过对孕妇的羊水或绒毛进行染色体核型分析，可 以早期发现胎儿的染色体异常，如唐氏综合征等。 3.种群遗传学研究：核型分析可以用于研究人类群体的遗传多样性和 进化关系，了解不同人群间的遗传差异。 4.基因定位：核型分析可以帮助确定染色体上的基因位置，进而研究 与之相关的遗传疾病或性状。 结论： 人类染色体标本制备及核型分析是一项重要的遗传学研究手段，通过 制备标本和观察分析染色体，可以了解人类的遗传信息和与染色体异常相 关的疾病。核型分析方法多样，包括显微镜观察法、数字图像分析法、FISH等，具有丰富的应用价值，用于遗传病诊断、胎儿异常筛查、种群 遗传学研究和基因定位等方面，为人类遗传学研究提供了重要依据。

染色体分析实验报告

染色体分析实验报告 染色体分析是一项关于细胞遗传物质的研究，旨在了解染色体的结构、数量以及可能的异常。本实验旨在使用不同的实验技术对染色体进行分析，以便更好地理解染色体的组成和功能。以下是实验的详细步骤和结果分析。 材料与方法： 1. 细胞培养：从人类或动物细胞中取得细胞样本，并在培养皿中进行初级培养。 2. 细胞收集：将培养皿中的细胞进行收集，并处理成单细胞悬液。 3. 染色体制备：利用适当的方法（例如，封闭空气干燥法或骨架制备法）制备染色体悬液。 4. 韧致染色：使用甲醇-冰醋酸固定法等方法将染色体保存在载玻片上。 5. 染色：使用各种染料（例如，吉姆萃、吉姆萃-安尼林染液等）对染色体进行染色。 6. 显微镜观察：使用适当放大倍率的显微镜观察染色体结构并进行图像捕捉。 结果与讨论： 在实验中，我们使用了人类细胞样本进行染色体分析。通过初级培养和细胞收集技术，我们成功地获得了单细胞悬液。随后，我们使用

封闭空气干燥法制备了染色体悬液，并将其进行了甲醇-冰醋酸固定以 保持染色体的完整性。接下来，我们使用吉姆萃和吉姆萃-安尼林染液 对染色体进行了染色。 在显微镜下观察到的染色体图像非常清晰。我们能够明显地看到染 色体的条带状结构和不同的染色区域。根据染色体染色的特性，我们 能够确定染色体的组成和数量。此外，我们还观察到了染色体可能存 在的异常。 染色体分析的结果对于研究遗传性疾病和遗传突变具有重要意义。 通过染色体分析，研究人员可以确定染色体异常与特定疾病之间的关联，并进一步探索相关的遗传机制。此外，染色体分析还可用于法医 学领域，例如确定人体交叉亲权和犯罪现场的DNA配对等。 总结： 染色体分析实验的结果表明，该技术对于了解细胞遗传物质的组成 和功能是非常有价值的。通过观察染色体的结构和染色区域，我们可 以揭示染色体可能存在的异常，并进一步研究与特定疾病之间的关联。染色体分析技术在医学和法医学领域具有广泛的应用前景，对于促进 人类健康和社会安全具有重要意义。 （字数：573）

人类G显带核型分析

人类G显带核型分析 简介 人类基因组由一系列的染色体组成，其中包含有关个体遗传特征的信息。通过 分析人类染色体的形态和结构，可以获取有关个体的核型信息。在人类染色体核型分析中，G带染色体是一种常用的技术，它能够提供高分辨率的核型信息。 G带染色体技术 G带染色体技术是一种常用的核型分析方法，它能够显现染色体的带状结构。 该技术利用了染色体的染色质中富含的AT和GC碱基对的差异，通过特定染色剂 的作用，可以将染色体分成明显的带状结构。G带染色体技术通常与显微镜观察相结合，可以得到高分辨率的染色体核型图。 G带染色体核型分析步骤 G带染色体核型分析通常分为以下几个步骤： 1.细胞培养：首先需要从个体的脐带血、外周血或骨髓等获得细胞样本， 然后将其进行细胞培养，使细胞增殖到足够数量。 2.处理染色体：将细胞处理以使染色体展开，并进行固定。通常通过加 入适量的高渗液来使细胞膨胀，然后进行固定。 3.涂片制备：将处理后的细胞进行涂片制备，通常使用玻璃片或载玻片。 制备涂片时需小心操作，避免细胞损伤或重叠。 4.染色：将涂片进行染色，常用的染色剂包括吉姆萨染色剂或戈姆萨染 色剂。染色剂的选择会影响染色体的分辨率和对比度。 5.显微镜观察：使用显微镜观察染色后的涂片，通过对各染色体的形态 和带状结构进行分析，得到染色体的核型信息。 G带染色体分析的应用 G带染色体分析广泛应用于临床遗传学和生物学研究中，主要用于以下方面： 1.检测染色体异常：通过G带染色体分析，可以检测到染色体数目异 常、结构异常或重排。这些异常经常与遗传疾病相关，对于儿童发育异常或个体的生育能力评估具有重要意义。

人类外周血染色体标本制备及G带观察及核型分析

实验报告 课程名称：分子医学实验 指导老师： 成绩： 实验名称： 人类外周血染色体标本制备G 带观察及核型分析 同组学生姓名： 一、实验目的及原理 三、实验结果 二、操作步骤 四、讨论分析 一、 实验目的及原理 熟悉人类外周血淋巴细胞的培养方法。 初步掌握人类染色体标本培养和制备的基本方法。 通过实验掌握Ｇ带标本制备的基本方法，学会在显微镜下直接观察G 带分裂相。 在细胞周期的不同阶段，染色体的结构不同，在细胞分裂间期，染色体呈现细长的丝状结构，分散于细胞核中，且交织成网状，难以识别其数目和每个染色体特有的结构；在细胞有丝分裂中期,染色体凝缩形成短的棒状结构，排列在赤道板上，此时染色体的形态、数目最清楚，所以一般选择有丝分裂中期的细胞来观察染色体的形态、数目。 在人类遗传分析中，普遍采用外周血培养的方法制备染色体标本。但是在正常情况下，外周血中的淋巴细胞，几乎都处在G1期或G0期，因而外周血细胞中是没有分裂相的。在细胞培养过程中加入植物血凝素(phytohaemagglutinin, PHA) ，可以刺激外周血淋巴细胞转变为淋巴母细胞，进行有丝分裂，再通过秋水仙素处理，将细胞阻断在有丝分离中期。再通过离心、低渗、固定和滴片，就可以获得大量有丝分裂相。最后通过染色就可以观察染色体的结构和数目。本方法已为临床医学、病毒学、药理学、遗传毒理学等方面广泛应用。 有许多显示Ｇ带的方法，最常用的是将已经过老化的染色体制片放到37℃胰酶中进行处理，然后用Giemsa 染色。胰酶可以从染色体上抽取蛋白特定的组成部分。通过胰酶处理使Ｇ带区的疏水蛋白被除去或使它们构型变为更疏水状态。由此可见在Ｇ带区中抽取的蛋白往往是疏水蛋白。 关于显带机理有多种论点，总的来说，还不能完全解释显带的机理问题。 二、操作步骤 人类外周血染色体标本制备

人类显带染色体核型分析

医学遗传学实验报告 【实验题目】人类显带染色体核型分析 【实验目的】 掌握染色体核型分析的常用方法及G分带的带型特征，会初步识别G分带人类染色体。 【实验原理】 将一个细胞内的染色体按照一定的顺序排列起来构成的图像称为该细胞的核型（karyotype），这通常是用显微摄影得到的染色体相片剪贴而成。在显带技术问世以前，人们主要根据染色体的大小、着丝粒的位置，将人类染色体顺次由1编到22号，并分为7组。但要想精确、有把握地鉴别每条染色体是比较困难的。70年代初出现了染色体显带技术，不仅解决了染色体识别困难的问题，而且为深入研究染色体异常及基因定位创造了条件。将染色体标本用显带方法处理后，再用Giemsa染色，这类技术称为G分带，通过显微摄影，就可得到G带染色体的显微相片。 【实验方法和步骤】 （1）胰酶液的配制：称取胰酶0.2g溶于100mlHanks液中，搅拌30min，用1mol/L NaOH调pH值至7.0～7.2，冷冻保存（最好现配现用）。 （2）先将胰酶液水浴加热到37℃。 （3）将染色体标本浸入胰酶液中，作用时间几秒到几十秒不等，依标本存放时间长短而定（标本需预先经60℃～70℃烤2h，或37℃恒温老化5～7d。若标本太新鲜，则染色体有些毛糙）。 （4）取出玻片标本，在生理盐水中过一下，再用蒸馏水洗。 （5）Giemsa染液染色8min。 （6）自来水洗、晾干。 （7）镜检：选择分散及显带良好的分裂象，在油镜下观察。如观察到染色体变粗并显得边缘毛糙，有时甚至呈糊状，是处理过度了。观察细胞的标准： 1）细胞完整，轮廓清晰，染色体在同一平面上均匀分布。 2）染色体形态和分散良好，最好无重叠现象，即使染色体个别重叠，也要能明显辨别。

实验十 人类染色体G显带技术及G带核型分析

实验十人类染色体G显带技术及G带核型分析实验目的 1、初步掌握染色体G带标本的制备技术。 2、了解人类染色体的G显带的带型特征。 实验用品 1、材料：常规方法制备的中期人类染色体标本（标本片龄不超过30天为宜）。 2、器材：显微镜、恒温培养箱、烤箱、恒温水浴箱、冰箱、染色缸、小镊子、玻片架、香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸。 3、试剂：0.125％胰蛋白酶溶液、0.02％EDTA溶液、胰蛋白酶一EDTA混合液、0.85％生理盐水、蒸馏水、Giemsa原液、Giemsa稀释液、1／15mol ／L磷酸缓冲液。 实验原理 人们将用各种不同的方法，以及用不同的染料处理染色体标本后，使每条染色体上出现明暗相间，或深浅不同带纹的技术称为显带技术（banding technique）。本世纪70年代以来，显带技术得到了很大发展，且在众多的显带技术中（Q带、G带、C带、R带、T 带），G带是目前被广泛应用的一种带型。因为它主要是被Giemsa染料染色后而显带，故称之为G显带技术，其所显示的带纹分布在整个染色体上。 研究发现，人染色体标本经胰蛋白酶、Na0H、柠檬酸盐或尿素等试剂处理后，再用Giemsa染色，可使每条染色体上显示出深浅交替的横纹，这就是染色体的G带。每条染色体都有其较为恒定的带纹特征，所以G显带后，可以较为准确的识别每条染色体，并可发现染色体上较细微的结构畸变。关于G显带的机理目前有多种说法，例如，Lee等（1973）认为染色体上与DNA结合疏松的组蛋白易被胰蛋白酶分解掉，染色后这些区段成为浅带，而那些组蛋白和DNA结合牢固的区段可被染成深带。有人认为，染色体显带现象是染色体本身存在着带的结构。比如用相差显微镜观察未染色的染色体时，就能直接观察到带的存在。用特殊方法处理后，再用染料染色，则带更加清楚，随显带方法不同，显出来的带特点也不一样，说明带的出现又与染料特异结合有关。一般认为，易着色的阳性带为含有AT多的染色体节段，相反，含GC多的染色体段则不易着色。总的来说，G显带的机理还未搞清。 内容与方法 一、人类染色体G显带标本制备 1、胰蛋白酶法 ①将常规制备的人染色体玻片标本（未染色的白片）置70℃烤箱中处理2小时，然后转入37℃培养箱中备用，一般在第3～7天进行显带。 ②取 2.5％的胰蛋白酶原液 2.5ml加生理盐水至50ml，配成0.125％的工作液并用NaHCO3调pH值至7左右。 ③将配好的胰蛋白酶工作液放入37℃水浴箱中预热。 ④将玻片标本浸入胰蛋白酶中，不断摆动使胰蛋白酶的作用均匀，处理1～2分钟（精确的时间自行摸索）。 ⑤立即取出玻片，放入生理盐水中漂洗两次。 ⑥染色。将标本浸入37℃预温的Giemsa染液（1:10的Giemsa原液和pH6.8的磷酸缓

人类染色体G带观察与核型分析

人类染色体G带观察与核型分析 一、实验目的 掌握人类体细胞染色体组型分析的方法 二、实验原理 ○1核型： 染色体组型又称核型，是指将动物、植物、真菌等的某一个体或某一分类群(亚种、种、 属等)的体细胞内的整套染色体，按它们相对恒定的特征排列起来的图像。核型模式图是指将一个染色体组的全部染色体逐个按其特征绘制下来，再按长短、形态等特征排列起来的图像。核型( karyotype )是指一个细胞内的整套染色体按照一定的顺序排列起来所构成的图像,通常是将显微摄影得到的染色体照片剪贴面成。正常细胞的核型能代表个体的核型。组型( idiogram )是以模式图的方式表示,它是通过对许多细胞染色体的测量取其平均值绘制而成的,是理想的、模式化的染色体组成。它代表了一物种染色体组型的特征,核型的研究对人类医学遗传研究及临床应用,对探讨动植物起源、物种间亲缘关系、鉴定远缘杂种等方面都有重大意义。 ○2带染色技术也称为改良的 iemsa 染色法。因用 iemsa 染色,所以称为带。它是目前应用最广泛的染色体分带技术之一。染色体标本放到37℃胰酶中是带显示的一种预处理方式,它可以从染色体上抽取蛋白质特定的成分,从而经 iemsa 染色后获得良好一致的分带类型。带的形成与 iemsa 染料的组成及染色特性分不开。 iemsa 染料即噻嗪-曙红染料,染色首先取决于两个噻嗪分子同DNA 的结合,在此基础上它们结合一个曙红分子,其次取决于一个有助于染料沉淀物积累的疏水环境。通过胰前预处理可以使阴性带区的疏水蛋白被除去或使它们的构型变为更疏水状态。从而造成了染色体蛋白质的差异,这种差异就是明暗相间的染色体带。 染色体带技术为染色体遗传病诊断、杂种细胞检定、特殊细胞株标记、染色体的识别等开创了一系列检测方法,大大加速了染色体研究的进展。 ○3对任何一个染色体的基本形态学特征来说，重要的参数有3个：描述染色体的三个参数: 1.相对长度：指单个染色体长度与包括X（或Y）染色体在内的单倍染色体总长之比，以百分率表示。(相对长度可以用来表示每条染色体的长度) 相对长度= 每条染色体长度x100% （单倍常染色体+X染色体）总长度 2. 臂指数：指长臂同短臂的比率(臂指数可以用来确定臂的长度) 臂指数= 长臂的长度q x100% 短臂的长度p 为了更准确地区别亚中部和亚端部着丝粒染色体，1964年Levan 提出了划分标准: ○1 1.0-1.7之间，为中部着丝粒染色体(M) ○2 1.7-3.0之间，为亚中部着丝粒染色体(SM) ○3 3.0-7.0之间，为压端部着丝粒染色体(ST) ○47.0以上，为端部着丝粒染色体( 3.着丝粒指数:指短臂占该染色体长度的比率，它决定着丝粒的相对位置。（着丝粒指数可以决定着丝粒的相对位置） 按Levan 划分标准: ○150.0-37.5 之间为M ○237.5-25.0之间为SM

实验五 人类染色体标本制备

实验五人类染色体标本制备 【目的要求】 1．熟悉人外周血淋巴细胞培养的原理。 2．初步掌握人类外周血淋巴细胞染色体标本的制备方法。 3．了解正常人非显带染色体核型特征及核型分析方法。 【实验原理】 人类间期细胞核中的遗传物质染色质，在细胞进入分裂期时，经逐级螺旋形成染色体。 在分裂期的中期，染色体达到最大程度的凝集，表现为短而粗的典型结构。人外周血的有形 成分中，只有白细胞有核，而白细胞中只有淋巴细胞(主要是小淋巴细胞)具有潜在的细胞分 裂能力。 培养液中加入有丝分裂刺激剂植物血凝素(PHA)可使处于G0期、具有潜在分裂能力的淋 巴细胞转化为具有分裂能力的淋巴母细胞，并进入旺盛的有丝分裂周期；加入纺锤体抑制剂 秋水仙素可使处于分裂过程的淋巴细胞停滞在分裂中期，在收获细胞时，用低渗剂0.075 mol/L KCl对细胞进行低渗处理，可使胞膜胀破，染色体均匀分散；经离心、固定、制片等 过程，最终可获得便于观察分析的染色体标本。 制备的染色体标本片，不经特殊处理，直接染色，在显微镜下观察识别，并进行核型分 析的过程称为染色体非显带核型分析。 【实验用品】 (一) 材料：人外周静脉血。 (二) 器材：吸管、刻度离心管、量筒、5ml注射器、6号针头、台式离心机、试管架、 冷藏载玻片（一端磨砂）、铅笔、酒精灯、超净工作台、恒温水浴箱、载玻片、止血带、酒 精棉球、显微镜、废液缸。 (三)试剂 1. RPMI1640培养液 (1) RPMI1640：RPMI1640固体培养基10.4 g,溶于1000 ml双蒸水中，抽滤除菌。 (2) RPMI1640培养液：每100 ml RPMI1640培养液中含RPMI 1640 80 ml、灭活的小牛血 清20 ml、PHA 50 mg、青霉素(终浓度100 U/ml)、链霉素10000 μg (终浓度100 μg /ml)， 15磅、20min高压灭菌的NaHCO3调pH至7.2～7.4，分装20小瓶，每瓶5 ml。 (3) 配制方法 配制过程所需的玻璃器具先用浅水洗刷干净，烘干，放入清洁液中浸泡2 d，取出后用自来水冲洗15次，蒸馏水冲洗3次，双蒸水冲洗1次，烤干后包装，15磅20 min高压灭菌。 新瓶塞等橡胶类制品用水洗刷后，用0.5mol/L NaOH煮沸20min，自来水冲洗；用0.5mol/L HCl煮沸20 min，自来水冲洗，蒸馏水冲洗，在双蒸水中浸泡24h；浸泡后取出晾干，包装后高

染色体核型分析实验报告

染色体核型分析实验报告 染色体核型分析实验报告 染色体核型分析是一项重要的实验技术，它能够帮助我们了解个体的遗传特征 以及染色体异常与疾病之间的关系。本次实验旨在通过染色体核型分析，观察 和分析不同个体的染色体组成，并探讨染色体异常与遗传疾病之间的关联。 实验过程中，我们选择了一组健康的个体作为研究对象，采集了其外周血样本。通过细胞培养和染色体制备技术，我们成功地制备出了染色体悬液。接下来， 我们使用高倍显微镜观察了染色体的形态和数量。 在观察过程中，我们发现了不同个体之间染色体的差异。正常情况下，人类细 胞核中的染色体应该为23对，其中包括22对常染色体和一对性染色体。常染 色体是指除性染色体以外的其他染色体，它们负责携带遗传信息，决定了个体 的大部分遗传特征。性染色体则决定了个体的性别。 通过观察，我们发现了某些个体的染色体数量存在异常。这种异常可能是由于 染色体缺失、重复或结构异常等原因引起的。染色体缺失是指染色体上的一部 分或整个染色体丢失，而染色体重复则是指染色体上的一部分或整个染色体重 复出现。染色体结构异常则是指染色体上的片段发生断裂、倒位、交换等变化。染色体异常与许多遗传疾病之间存在着密切的关系。例如，唐氏综合征是由于 21号染色体上的三个染色体引起的，患者通常具有智力发育迟缓、面部特征异 常等症状。另外，爱德华氏综合征是由于18号染色体异常引起的，患者通常出现心脏和肾脏畸形等问题。通过染色体核型分析，我们可以准确地检测出这些 染色体异常，为遗传疾病的诊断和治疗提供有力的依据。 除了遗传疾病，染色体核型分析还可以应用于其他领域。例如，它可以用于法

医学领域的亲子鉴定，通过比对父母与子女的染色体核型，确定亲子关系。此外，染色体核型分析还可以用于评估环境因素对染色体的影响，例如辐射和化 学物质对染色体的损伤程度。 总结起来，染色体核型分析是一项重要的实验技术，它可以帮助我们了解个体 的遗传特征以及染色体异常与疾病之间的关系。通过观察染色体的形态和数量，我们可以准确地检测染色体缺失、重复和结构异常等问题，并为遗传疾病的诊 断和治疗提供依据。此外，染色体核型分析还可以应用于亲子鉴定和环境因素 评估等领域。随着技术的不断进步，我们相信染色体核型分析将在未来发挥更 加重要的作用。

核型分析实验报告

核型分析实验报告 核型分析实验报告 引言： 核型分析是一种常用的生物学实验方法，通过观察和研究细胞的染色体形态和 数量，可以了解生物个体的遗传特征和进化关系。本实验旨在通过核型分析， 研究不同生物个体的染色体组成，为进一步研究生物的遗传机制提供基础数据。实验方法： 本实验选取了人类、小麦和果蝇作为研究对象，采用了不同的核型分析方法。 首先，我们从参与者的外周血中提取白细胞，并进行细胞培养。接着，使用染 色体抗体标记技术，对细胞进行染色体着色。对于小麦，我们采用了根尖细胞 的处理方法，通过醋酸铁染色技术，观察和记录染色体的形态和数量。对于果蝇，我们使用了显微镜观察和计数的方法，通过观察幼虫的唾液腺染色体，来 确定其核型。 实验结果： 在人类的核型分析中，我们观察到了46条染色体，其中包括22对常染色体和 1对性染色体。这与人类的常染色体数目为46，性染色体数目为2的正常核型 相符。小麦的核型分析结果显示，其染色体数目为42条，均为常染色体，这与小麦的正常核型相符。果蝇的核型分析结果显示，其染色体数目为8条，其中 包括6条常染色体和2条性染色体。这与果蝇的正常核型相符。 讨论与分析： 通过核型分析，我们可以了解不同生物个体的染色体组成和数量，从而揭示其 遗传特征和进化关系。人类的染色体数目为46条，其中包括22对常染色体和

1对性染色体。这与人类的正常核型相符，说明本实验中的参与者是一个正常个体。小麦的染色体数目为42条，均为常染色体，这与小麦的正常核型相符，说明小麦样本也是一个正常个体。果蝇的染色体数目为8条，其中包括6条常染色体和2条性染色体。这与果蝇的正常核型相符，说明果蝇样本也是一个正常个体。 核型分析的结果还可以为进一步研究生物的遗传机制提供基础数据。例如，在人类的核型分析中，如果发现染色体数目异常或存在结构异常，可能与染色体畸变相关的遗传疾病有关。通过进一步研究这些异常染色体，可以揭示这些疾病的发生机制和治疗方法。此外，在农业领域，对作物的核型分析可以了解不同品种的染色体组成和数量，为选育优良品种和改良作物提供依据。 结论： 通过本实验的核型分析，我们成功地确定了人类、小麦和果蝇的核型。人类的核型为46条染色体，小麦的核型为42条染色体，果蝇的核型为8条染色体。这些结果为进一步研究生物的遗传机制和进化关系提供了基础数据。核型分析的方法和结果对于揭示遗传疾病的发生机制、改良作物和选育优良品种具有重要意义。通过不断深入研究核型分析，我们可以更好地理解生物的遗传特征和进化规律，为人类和农业的发展做出贡献。

人类外周血染色体标本制备

整体实验安排：课堂教学主要进行五个独立的实验，包括：人类外周血染色体标本制备；人类染色体Ｇ带标本制备及观察；遗传病基因突变分析（SSCP）；进行性肌营养不良症（DMD）基因检测；人类染色体核型分析 实验一 1. 人类外周血染色体标本制备 1）实验目的： 通过实验初步掌握人类染色体标本培养和制备的基本方法。 2）实验原理： 正常情况下，外周血中的小淋巴细胞，几乎都处在G1期或G0期，外周血细胞中是没有分裂相的。1960年，Nowell和Morhead证实，外周血中的小淋巴细胞可以在植物血凝素(phytohaemagglutinin, PHA)和其它有丝分裂刺激剂的影响下，在形态上转变为淋巴母细胞，在培养中进行有丝分裂。这样经过短期培养，秋水仙素的处理，低渗和固定，就可以迅速而又简便地获得体外生长的细胞群体和有丝分裂相。 外周血是除骨髓之外的血液，临床上常用一些方法把骨髓中的造血干细胞释放到血 外周血液中，再在从血液中提取分离得到造血干细胞，我们把这样得到的干细胞成为外周血干细胞正常人外周血中一般看不见幼稚的干细胞的,只存在有极少量的造血干细胞，其含量为0.01%左右。如果幼稚细胞的比例大幅增加，有可能是类白血病。正因为存在0.01%的造血干细胞，可利用细胞分离的技术(血细胞自动分离机)，将外周血中含有造血干细胞的单个核细胞进行分离保存，重复数次达一定细胞数量后，回输给患者以之代替骨髓而进行的干细胞移植，称为外周血干细胞移植。

外周血培养基配制 一、配制用水 培养基的大部分是水，所以水的质量直接影响培养基的质量。按Waymouth标准，水的电阻应为200万欧姆，一般实验室里以玻璃蒸馏器制备的双蒸水或三蒸水可以符合使用条件。 二、培养基 培养基有天然、人工两种。一般实验室使用的是RPMI-1640粉末培养基，以双蒸或三蒸水配制。NaHCO3（或HCl）调pH至7.2～7.4，若pH值超过7.6或远低于6.8，则大多数细胞不能生长。RPMI-1640不耐高压灭菌，使用前需经灭菌0.22μm孔径滤膜滤过处理。 三、血清 培养中常使用小牛血清（或胎牛血清）。血清亦不能高压灭菌，无菌的小牛血清需在56℃水浴30分钟灭活补体，置4℃冰箱存放待用。配制时含量视培养细胞种类、时间而定，一般用10—15%。由于血清成分复杂、条件不易控制，可选用无血清培养基。 四、抗菌素 为防止培养时期细菌的污染，可在培养基中添加适当抗菌素，一般用量与组织细胞培养相同：卡那霉素100单位/毫升，或双抗--青霉素100单位/毫升，链霉素100微克/毫升。 五、植物血凝素（PHA） 非增殖期的细胞不能制备染色体，如人外周血淋巴细胞，但在离体培养过程中，在PHA的作用下，可被刺激转化为淋巴母细胞而进入有丝分裂。经实验测定其分裂高峰分别于培养后44—48小时和68—72小时。

核型分析实验报告

核型分析实验报告 一、实验目的。 本实验旨在通过核型分析，了解细胞的染色体组成和结构，掌握核型分析的基本原理和操作方法，为进一步研究细胞遗传学提供基础数据。 二、实验原理。 核型分析是通过染色体的形态、大小、数量等特征，来研究细胞的遗传信息。在实验中，首先需要制备细胞悬液，然后进行染色处理，最后观察染色体在显微镜下的形态和数量。 三、实验步骤。 1. 制备细胞悬液，取新鲜组织样品，加入适量生理盐水，用医用注射器吸取细胞悬液。 2. 染色处理，将细胞悬液滴于载玻片上，加入适量染色液，进行染色处理。 3. 染色体观察，将载玻片放置在显微镜下，通过调节镜头和光源，观察染色体在显微镜下的形态和数量。 四、实验结果。 经过核型分析，我们观察到不同细胞的染色体数量和形态存在差异。在正常细胞中，染色体呈现为一对一对的条状结构，而在异常细胞中，染色体数量可能增多或减少，形态也可能发生畸变。 五、实验分析。 通过对实验结果的分析，我们可以了解到染色体异常与某些疾病的发生有一定的关联。比如唐氏综合征患者的染色体数量异常，而某些癌细胞的染色体形态也存

在异常变化。因此，核型分析不仅可以用于基础细胞遗传学研究，还可以为临床疾病诊断提供重要依据。 六、实验总结。 本实验通过核型分析，使我们对细胞染色体的组成和结构有了更深入的了解。同时，也为我们今后在细胞遗传学和临床诊断方面的研究提供了基础数据。通过本次实验，我们不仅学习到了核型分析的基本原理和操作方法，还加深了对细胞遗传学的认识。 七、实验展望。 未来，我们将继续深入研究核型分析在疾病诊断和基因治疗中的应用，探索更多的细胞遗传学问题，为人类健康和疾病治疗做出更大的贡献。 总之，核型分析作为一种重要的细胞遗传学研究方法，对于我们深入了解细胞的遗传信息具有重要意义。希望通过本次实验，能够为大家对核型分析有一个清晰的认识，并对细胞遗传学的研究有所帮助。

人类染色体标本制备经验

第一部分 人类染色体研究的实验室建设 一、实验室要求 1、准备室（约30平方米）：供清洗玻璃仪器、配制试剂仪器包装消毒及制片场所，还必需配置耐酸碱水池、实验操作台、药橱等设施。并能合理放置冰箱、电热干燥箱、离心机、纯水器、消毒锅、天平等仪器，以方便使用。 2、无菌室（约25平方米）：用作细胞的接种培养、配备培养基。分为更衣室（约4平方米）、缓冲室（约6平方米）、接种室（约15平方米）。配备空调机、传递窗、离心机、倒置显微镜、超净工作台、臭氧发生器或紫外灯、培养箱等设备仪器。 3、分析室（约15平方米）：为观察分析核型、整理资料场所。配备高清晰度带照相装置的显微镜，电脑、打印机、办公桌等。 二、设备仪器 （一）仪器 1、超净工作台一台 2、光学显微镜二台（可以安装染色体软件分析系统） 倒置显微镜与带照相装置的正立显微镜各一台。倒置显微镜用作细胞培养；正立显微镜用作核型分析，有条件的单位可配备染色体分析软件、电脑、打印机等。 3、隔水式恒温培养箱一台 开展产前检查的单位，最好购买二氧化碳培养箱。 4、电热干燥箱一台 5、冰箱二台：普通冰箱和低温冰箱各一台 6、酸度计一台（可略）

7、纯水器（电阻率18兆欧姆）一台；（可略） 8、高压灭菌锅一台（可略） 9、电热磁力搅拌器一台（可略） 10、真空泵（无油）一台（可略） 11、电子天平二台（万分之一天平与普通天平各一台） 12、水平式离心机二台 转速0-4000转/分，10毫升/管，大容量与小容量各一台。大容量的供制片用，小容量的放置无菌室供细胞培养用。 13、可调移液器若干支：规格从5-5000微升若干支 14、超声波清洗器一台（可略） 15、水浴箱（0-100℃可调） （二）玻璃器皿与耗材 1、培养瓶：15毫升链霉素瓶，25毫升小方瓶（建议采用一次性培养瓶）。 2、刻度离心管（10毫升）50支 3、量筒（10-1000毫升）：各种规格各一个。 4、不锈钢滤器（各种规格各一个）及滤膜（孔径中0.25微米）一盒 5、注射器（1-20毫升）若干 6、盐水瓶（100-500毫升）若干 7、试剂瓶（磨口）10个 8、蒸馏水瓶（3万或5万毫升）2个 9、染色缸1个 10、研钵1个

染色体分析相关的实验

第三章染色体分析相关的实验 目前染色体的研究几乎深入到每个学科的每一个领域，因为染色体是把细胞与分子联系起来的重要桥梁，故在遗传学研究中或者在医学研究中被广泛重视及应用。近几年相继出现了脆性位点、热点、重排与癌基因激活及抑癌基因丢失，癌基因定位、抑癌基因定位及杂合位点缺失等与染色体相关的理论；另一方面与染色体畸变有关的各类遗传病的研究也使临床上染色体的分析上了一个新的台阶。 染色体分析相对较简单，细胞通常采用循环血中的淋巴细胞，胎儿采用羊膜液中的羊膜细胞或胎盘绒毛膜细胞。细胞经过培养，再用植物凝集素（PHA）刺激细胞分化。当每个染色体都复制成两个染色体单体时，随后加入秋水仙素，在分裂中期阻止细胞有丝分裂。位于载玻片上的细胞随后被染色，在显微镜下拍照或用计算机进行图像分析。根据染色体形态大小,剪下照片上的染色体，按序分类排贴在纸上,进行核型分析。 染色体显带通常通过G显带或Q（荧光）显带染色技术进行，增加其他染色方法可提高细胞遗传学诊断的准确性。 新的分子生物学技术使用DNA探针(含有荧光标记)来定位染色体上特定基因和DNA序列，荧光素标记的原位杂交技术可用于鉴别基因结构和寻找染色体缺失，重排及复制。 实验3-1 人类染色体标本的制备 一、实验目的 掌握人类外周血细胞培养方法及染色体标本的制备方法。观察人类染色体的形态和数目。 二、实验原理 血液中的T淋巴细胞在体外培养中经一定剂量的植物血凝素

（PHA）刺激，可以返幼进行细胞分裂，用秋水仙素积累分裂相，用 0.075 mol/L-1KCI进行低渗后，经固定、染色，可见到分散的染色体。 三、实验准备 超净工作台、酒精灯、无菌注射器（1ml、2ml、5m1）、针头、培养瓶、橡皮塞、75％酒精棉球、离心机、定时钟、试管架、量筒、刻度离心管、冰凉玻片，毛细滴管、恒温水浴锅、RPMI1640、小牛血清、肝素、秋水仙素、植物血凝素（PHA）、固定液（甲醇：冰乙酸为3∶1，现用现配）、0.075mol。L-1KCI低渗液、Giemsa染液、pH6.8磷酸缓冲液、恒温培养箱、吹风机、粗天平、5％NaHCO3、显微镜。 四、实验方法与步骤 （一）接种 取500单位/lml的肝素0。2ml湿润针筒后，取静脉血1～2ml，转动针筒以混匀肝素；随后立即插入灭菌小瓶内，送入超净工作台（消毒、灭菌等略），在火焰旁将血液滴入2～3个盛有5ml培养液（4ml RPMIl640、lml小牛血清，5mg PHA，用5％的NaHCO3调pH至7.0～7.4）的培养瓶内，每瓶0.2～0.3ml（7号针头13滴），盖上橡皮塞，轻轻摇动以混匀。 （二）培养 1．将培养瓶放在37℃恒温箱内培养72h。 2．在终止培养前2～4h，将0.01％的秋水仙素1～2滴（7号针头）加入培养瓶内，轻轻摇匀．放回温箱内，继续培养2～4h。 （三）收获 1．用吸管充分吹打瓶壁，吸取培养物移入刻度离心管内，相对离心管平衡后放入离心机，离心8min（1000转/分），吸去上清液，留下沉淀物。 2．低渗处理：加8ml预温（370C）的0.075mol。L-1KCI低渗液，用吸管打匀使细胞悬 浮于低渗液中，放回37℃恒温水浴锅中，静置15～20min，使白细胞膨胀，染色体分散、 红细胞解体。