PCR实验室新冠核酸检测结果判读及上报流程

PCR实验室新冠核酸检测结果判读及上报

流程

依据《感染的肺炎实验室检测技术指南》，建议报告检测结果为“阳性”或“阴性”，并对结果进行充分的解释和下一步工作的建议。判读为“阳性”的条件包括：ORFIab和N基因同时阳性，或仅ORF1a或N基因其中之一检测结果阳性且经复查后仍为阳性，或采用其他试剂成方法进行确认。判读为“阴性”的处理是两个检测位点无Ct值或Ct≥40（具体参照试剂说明书），并应结合临床分析。处于“灰度区”的结果应重新提取原标本的核酸，并与该标本前一次提取的核酸同时扩增检测。实验室可采取核查检验过程、更换不同厂家的试剂盒或采用敏感度更高的方法进一步确定、建议临床重新采集标本或更换部位采集标本再次检测等措施。

PCR实验室(新冠核酸检测实验室)SOP文件

XXX医院检验科 基因扩增实验室标准操作规程 适用部门：基因扩增实验室 XX医院

目录 第一部分工作制度及程序 (1) PCR实验室各区工作制度及程序 (1) PCR实验室人员配置及培训程序 (4) PCR实验室清洁程序 (5) PCR实验室废弃物处理程序 (6) PCR实验室生物安全防护程序 (7) 抱怨的处理程序 (8) PCR实验室应急处理程序 (9) 第二部分标准操作规程 (11) 临床标本的采集及处理操作程序 (11) 标本接收、拒收及保存程序 (12) 实验室化学试剂的管理和配制标准操作程序 (14) 标本前处理(核酸纯化)标准操作程序 (16) 新型冠状病毒核酸检测标准操作程序 (18) 人乳头瘤病毒分型检测（基因芯片法）标准操作规程 (24) 核酸扩增及产物分析检测的操作程序 (30) 检测结果分析的标准操作程序 (31) 检测结果报告程序 (34) 实验记录管理程序 (35) 第三部分设备SOP文件 (36) AU1001-96全自动核酸提取仪（96 通道）操作流程、校准及维护保养程序 (36) 乐普Lepgen-96全自动医用PCR 分析系统操作流程、校准及维护保养程序 (41) 净化工作台SW-CJ系列操作流程及维护保养程序 (48) 博科生物安全柜操作流程及维护保养程序 (49) 多恒DHG-9053BS-III电热恒温鼓风干燥箱操作流程及维护保养程序 (54) 多恒HH-100干式恒温器（金属浴）操作流程、校准及维护保养程序 (56) 多恒TD4Z低速离心机操作流程及维护保养程序 (60) 多恒DH18R台式高速冷冻离心机操作流程及维护保养程序 (66)

新冠核酸检测扩增检测操作规程

新冠核酸检测扩增检测操作规程 一、实验室准备工作： 1.确保实验室环境清洁、整洁，并进行必要的消毒处理。 2.检查实验室设备、试剂和耗材的质量和有效期，确保其正常运转和 可靠性。 3.建立样本接收、登记和保管的规范流程，确保样本信息准确无误。 二、样本处理： 1.使用符合规定的个人防护装备，如手套、口罩、防护眼镜等。 2.从接收到的样本中提取核酸，可以采用自动提取仪或手动提取的方法。 3.打开样本进行提取时，注意避免交叉污染，严格按照操作规程进行 操作。 4.使用质量控制样本进行质检，确保提取出的核酸质量良好。 三、扩增检测： 1.制备反应体系，包括引物、酶、试剂等，确保反应体系的组分和浓 度正确。 2.将提取出的核酸样本与制备好的反应体系混合，进行PCR扩增反应。根据需要的扩增循环数和条件进行设定。 3.缺少模板对照、阴性对照和阳性对照的样本，用来进行质控，确保 反应的准确性和可靠性。

4.操作过程中，注意反应混合物的温度和时间控制，确保反应体系在恒定的温度和时间下进行。 5.反应结束后，分析PCR产物的扩增曲线，根据扩增曲线的特征判断样本是否为阳性、阴性或无效。 四、结果解读与报告： 1.根据分析结果，判断样本是否为新冠病毒阳性。阳性样本需进一步进行序列分析，确认其是否为新冠病毒感染。 2.缺乏阳性扩增结果的样本，需进行二次扩增或其他检测手段进行确认。 3.结果解读完毕后，及时填写样本报告，包括样本信息、实验结果和解读、操作人员等相关信息。 4.样本报告的结果应及时通知相关部门和个人，做好信息的追踪和记录工作。 以上就是新冠核酸检测扩增检测操作规程（之江）的主要内容。在进行实验室操作时，需要注意严格遵守操作规程，确保操作的准确性和安全性。另外，在操作过程中，要加强个人防护，保护自身的健康。

新冠核酸检测标准

新冠核酸检测标准 近年来，新冠病毒（COVID-19）的爆发已经成为全球关注的焦点。针对新冠病毒的迅速传播和严重危害，核酸检测成为了一种重要的工具，用于早期诊断、追踪和控制病毒的传播。本文将详细介绍新冠核酸检测的标准，以及其在疫情防控中的重要作用。 一、新冠核酸检测的原理 新冠核酸检测主要依靠实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）技术，通过检测患者体内的病毒核酸是否存在来判断感染情况。该方法基于病毒基因组的特异性扩增，能够在短时间内准确地检测出病毒的存在。 二、样本采集与处理 1. 样本类型：目前常用的样本类型包括咽拭子、鼻拭子、唾液和气道吸引物等。 2. 采样技术：从咽部或鼻腔采集样本时，需要使用专业的采样棉签或拭子，在相应部位进行刮拭，确保充分接触到黏膜表面。对于唾液样本，患者需在采样容器中咳嗽或流口水至少2ml。气道吸引物则需要由专业医护人员使用合适的设备进行采集。 3. 样本保存与运输：采集后的样本应立即置于特定的保存液中，并尽快送往实验室进行处理。在运输过程中，需要严格遵循规定的温度和时间要求。 三、实验室操作流程 1. 样本提取：将采集到的样本进行离心等处理，将病毒核酸从样本中提取出来，并纯化以去除干扰物质。 2. 反转录：使用逆转录酶将病毒RNA转录成相应的DNA。 3. PCR扩增：使用特异性引物和荧光探针，将目标DNA片段在PCR反应中进行扩增，并通过荧光信号监测病毒核酸的存在。 4. 结果解读：根据荧光信号的强度和阈值周期数，判断样本中是否存在新冠病毒核酸。 四、结果判读与分析 1. 阳性判定：当荧光信号明显超过阈值周期数，并且符合相关标准时，判定为阳性结果，表示样本中存在新冠病毒核酸。 2. 阴性判定：当荧光信号未超过阈值周期数，或未达到相关标准时，判定为阴性结果，表示样本中不存在新冠病毒核酸。

荧光pcr检测新冠核酸的流程

荧光pcr检测新冠核酸的流程 新冠状病毒核酸检测是诊断新冠状病毒感染的常规检测方法，其中荧光PCR检测技术 是当前病毒核酸检测的普遍方法。荧光PCR检测新冠核酸的流程依次为： 第一步：采集样本 新冠状病毒检测采用的样本主要是呼吸道病毒实验室检测所用的痰液标本，从患者口腔、鼻腔或气道中采集痰液，采用痰液采集器密封，并严格符合条件，用标本盒加固并运 输至实验室检测，存放在-20℃冰箱中。 第二步：提取病毒 从痰液中提取新冠病毒核酸，主要是使用RNA提取试剂盒，将痰液中的RNA与细胞器 官及其它物质分离，提取病毒核酸，通常采用体外柱析的方法，将提取的核酸存放在-20℃的冰箱中备用。 第三步：荧光PCR检测 将提取的核酸进行荧光PCR检测，采用荧光qPCR检测设备和定量荧光PCR试剂盒， 核酸样品和探针建立反应系统，通过双螺旋定量荧光PCR，酶分解待检样本引物，实现病 毒核酸特异性检测，通过检测曲线中各次Cq（转录-逆转录聚合酶反应最佳倍体数量）值 的形成和斜率，实现电路和计算机联网监控，可以准确高效地反映新冠病毒核酸的浓度。 第四步：结果判定 通过荧光PCR技术检测核酸后，根据定量值获得结果出来，如果Cq值小于检测的灵 敏度标准，则检测出来的核酸就存在，若Cq值大于检测的灵敏度标准，则检测出来的核 酸就不存在。 第五步：报告 数据完成判定后，一般根据检测示结果出具报告，报告内容涉及检测项目、客户资料、样本提取状况、特异性检测、结果判定等内容，报告出来后，向患者及其医生进行新冠病 毒核酸检测结果的传递，供相关人员进一步判断和诊断。 综上所述，荧光PCR检测新冠病毒核酸的流程为：样本采集→提取病毒→荧光PCR检 测→结果判定→报告。荧光PCR技术以其灵敏、快速、可靠的特性检测出新型冠状病毒， 为新型冠状病毒检测提供了有效手段。

新冠检测步骤和方法

新冠检测步骤和方法 新冠病毒检测步骤和方法 随着新冠病毒的全球爆发，疫情防控工作变得尤为重要。而准确、快速地进行新冠病毒检测，是控制疫情蔓延的关键。本文将介绍新冠病毒检测的步骤和方法，帮助读者了解如何进行有效的检测。 一、新冠病毒检测的步骤 新冠病毒检测通常包括样本采集、核酸提取、核酸扩增和结果分析等步骤。 1. 样本采集 样本采集是新冠病毒检测的第一步。目前常用的样本包括鼻咽拭子、咽拭子、唾液等。采集时需要注意使用无菌的采集器，并按照规定的方法采集样本。采集完毕后，将样本放入无菌容器中，并迅速送往实验室进行后续处理。 2. 核酸提取 核酸提取是将样本中的病毒核酸提取出来的过程。常用的提取方法包括磁珠法、硅胶膜法和酚酸法等。核酸提取的关键是要确保提取出的核酸质量良好，并且不受到污染。 3. 核酸扩增

核酸扩增是将提取出的病毒核酸进行复制的过程。目前主要采用的方法是聚合酶链反应（PCR）技术。通过PCR技术，可以在短时间内扩增出足够数量的病毒核酸，以便后续的结果分析。 4. 结果分析 核酸扩增后，需要对扩增产物进行结果分析。常用的结果分析方法包括荧光定量PCR、实时荧光聚合酶链反应和基因测序等。这些方法可以准确地检测出样本中是否存在新冠病毒，并判断病毒的数量。 二、新冠病毒检测的方法 新冠病毒检测主要采用核酸检测和抗体检测两种方法。 1. 核酸检测 核酸检测是通过检测病毒核酸（RNA）来判断样本中是否存在新冠病毒。核酸检测的优点是准确性高，可以提供病毒的数量信息，能够在感染初期就进行检测。常用的核酸检测方法包括RT-PCR、LAMP和CRISPR等。 2. 抗体检测 抗体检测是通过检测人体对新冠病毒感染后产生的抗体来判断样本中是否存在新冠病毒。抗体检测的优点是操作简单、快速，可以判

新冠检验流程表(xxxxxxxx-多批)

新冠检验流程表(xxxxxxxx-多批) Quality Management Document Table No。01-3-01 for PCR Laboratory Records of Clinical Gene n Laboratory 2019-nCoV Test Process Record Table XXX。the operator in charge of the new coronavirus XXX and turn on the n system and air ning to check the air pressure in each area: Area 1: / Area 2: / Area 3: /。The new coronavirus XXX (outside). Before conducting the experiment。the following checks should be made: the eight-tube。centrifuge tube。and filter-tipped pipettes have passed the quality n。the n instrument。sampler。XXX。the filter membrane of the logical safety XXX the valid use d。the disinfectant is within the valid d。and the XXX 70uw/cm2. XXX area (Area 1)。the operator should wear a white work uniform。hat。mask。and gloves。The temperature (15°C~32°C) and humidity (30%~80%) should be checked。as well as the

PCR实验室新冠核酸检测结果判读及上报流程(干货)

PCR实验室新冠核酸检测结果判读及上报 流程(干货) PCR实验室新冠核酸检测结果的判读和上报流程非常重要。根据《感染的肺炎实验室检测技术指南》，建议报告结果为“阳性”或“阴性”，并且需要进行充分的结果解释和提出下一步的工作建议。 对于判读为“阳性”的条件，需要满足以下任意一条：(1) ORFIab和N基因同时阳性时，判定为阳性；(2) 若仅ORF1a 或N基因其中之一检测结果阳性时，需重新采样复查，复查后ORPlab或N基因仍为阳性时，判定为阳性，或采用其他试剂成方法进行确认(如基因测序法)。 对于判读为“阴性”的结果的处理，需要注意两个检测位点无Ct值或Ct≥40(具体参照试剂说明书)。在这种情况下，可以报告“阴性”，并对结果进行解释。但是，阴性结果不能完全排除2019nCaV感染，因为可能是病毒载量低于检出限，需要结合临床分析。当临床表现及其他检查高度怀疑2019-CaV感染时，建议重新采集标本或更换部位采集标本再次检测。

对于处于“灰度区”的结果的处理，需要注意Ct值在37-40 之间时为灰度区(具体情况参照试剂说明书)。可能存在以下情况：(1) 2个位点的检测结果均处于“灰度区”；(2) 1个位点判 读为阳性，另1个位点的结果处于“灰度区”；(3) 1个位点判读为阴性，另1个位点的结果处于“灰度区”。在这种情况下，宜 重新提取原标本的核酸，并与该标本前一次提取的核酸同时扩增检测。分析两次检验结果，单个位点两次阳性或两个位点为阳性，则报告“阳性”，两次结果均处于“灰度区”则报告“阴性”。 当检测结果处于“灰度区”时，实验室可以采取以下措施：(1) 核查检验过程是否有影响，如样本质量、标本类型、样本 采集时机(是否处于病毒载量较低的时期)、标本保存、运输和 标本处理是否存在问题等；(2) 更换不同厂家的试剂盒重复实验，或在条件允许时采用敏感度更高的方法进一步确定(如数 字PCR方法)；(3) 建议临床重新采集标本或更换部位采集标 本再次检测，甚至多次采样进行检测。

核酸检测阳性处置流程

新冠肺炎核酸检测疑似阳性处置流程 为了加强医疗安全，根据《国卫办疾控函[2020]152号新型冠状病毒肺炎实验室检测技术指南》的要求，处置发现疑似阳性结果、可疑结果，结合我院情况制定： 一、疑似阳性结果、可疑结果结果判断(依据试剂盒说明书判断)与上报。 1、同一份标本中新型冠状病毒至少ORFlab靶标加N 或E中的任一靶标实时荧光RT-PCR检测结果均为检出。用同一种试剂与另一种试剂进行复检,若结果仍为检出,则向临床反馈疑似阳性结果,并立即上报院部疫情指挥中心。 2、如仅有一个靶标阳性或检测结果落在灰区的标本需复测或另一种试剂再测,仍然可疑向临床反馈可疑结果,并立即上报院部疫情指挥中心。 二、疑似阳性结果、可疑结果的复检 1、疑似阳性结果、可疑结果均需要重新采样(包括不同部位及样本类型)检测,为提高阳性检出率,重新采样可对同一个病人多采集多个部位,每个部位多采几根采样拭子放于同一管采样液中,提高检出率。含3毫升采样液的采样管最多可放五根采样拭子。 2、疑似阳性结果重新采样标本与原标本均应送月亮县CDC复检,复检阳性的送太阳市CDC复检。 3、可疑结果如果复检阴性,按阴性报告;复检仍为可疑

或为疑似阳性结果则按程序重新采样标本与原标本送月亮县CDC复检,复检阳性的送太阳市CDC复检。 4、疑似阳性结果、可疑结果病人均应按阳性病人隔离管控,直致上级部门复检结果反馈阴性方可解除隔离管控。上级部门复检为疑似阳性结果、可疑结果则病人按阳性病人标准转移至上级指定新冠救治医院。 三、疑似阳性样本、可疑样本的保存 1、所用器材：生物安全柜、移液器、带螺旋盖的塑料管及可密封的标本保存罐、转运箱。注意:疑似阳性样本、可疑样本使用专用标本保存罐。 2、风险点识别：阳性、可疑样本若保存不当,易造成人员或环境污染。 3、风险控制措施：按照三级生物安全防护要求做好个人防护;样本的保留在生物安全柜内进行,动作要轻缓;咽拭子标本检测后放A类标本保存罐,双人双锁管理,送月亮县CDC、太阳市CDC,未能及时送检,置-20℃以下冰箱内保存。 四、疑似阳性样本、可疑样本的运送 1、所用器材：带螺旋盖的塑料管、95千帕样品运输罐、A类标本运输箱(UN2814冷藏箱)、运送车辆。 2、风险点识别：若包装不符合相应生物安全等级的要求,或运输工具无安全保障,则易造成污染扩散,甚至样本丢失。 3、风险控制措施：阳性、可疑样本运送应严格执行规

PCR实验室新冠实验室比对程序

1.目的 建立和实施新型冠状病毒核酸检测比对计划和程序，以确保新型冠状病毒核酸检验结果的可接受性。 2.范围 适用于本实验室手工操作的项目；同一个检测项目，在实验室有不同的方法学检测，或者在不同仪器上测试的项目；实验室都需要进行比对。 3.职责 3.1 实验室负责人负责组织各专业组长讨论并确定比对方案，并负责审批。 3.2 新冠实验室组长负责制定比对方案、比对计划、比对试验全过程质量。 3.3 相关检验人员负责实验室内部质量控制、仪器的使用及维护、标本的检测和原始数据的记录 4.比对程序 4.1 人员比对 4.1.1 比对条件：若一个项目在实验室是采用手工操作的，实验室必须进行人员操作的比对。 4.1.2 比对次数：每年至少进行1次。 4.1.3 比对样本的选择：比对要求用新鲜咽拭子，避免产生基质效应，最好使用当天采集的标本，每份标本应有足够的量。也可采用国家卫健委临检中心、省临检中心室间质评样本或商售的质控品或参考物质。 4.1.4 对样本的数量：每次比对至少需要5份样本，选择2份阴性样本（至少1份其它标志物阳性的标本），3份阳性样本（至少含弱阳性2份）。 4.1.5 比对的项目：新型冠状病毒核酸检测项目。 4.2 方法学比对 4.2.1 比对条件：若同一个检测项目，在实验室有不同的方法学检测，实验室必须进行方法学之间的比对。 4.2.2 比对次数：每年至少进行1次。 4.2.3 比对样本的选择：比对要求用新鲜新鲜咽拭子，避免产生基质效应，最好使用当天采集的标本，每份标本应有足够的量。也可采用国家卫健委临检中心、省临检中心的样本或者商售的质控品或参考物质。 4.2.4 比对样本的数量：每次比对至少需要5份样本，选择2份阴性样本（至少1份其它标志物阳性的标本），3份阳性样本（至少含弱阳性2份）。 4.2.5 需要进行方法学比对的项目：新型冠状病毒核酸检测项目。 4.3 实验数据处理及分析 4.3.1 不采用已明确有人为误差的结果。 4.3.2 实验一定要有内部质量控制，失控时结果必须重做。 4.3.3 以室间评估的允许误差为判断依据，比对结果符合率大于等于80%为可接受范围。 4.3.4 不同检测人员间比对结果临床不可接受时，查明比对结果不可接收的原因。若为人员操作能力

医疗机构新冠核酸检测工作手册(完整版)

医疗机构新冠状病毒酸检测工作手册 （试行） 为落实国务院应对新型冠状病毒感染肺炎疫情联防联控机制《关于做好新冠肺炎疫情常态化防控工作的指导意见》（国发明电〔2020〕14号）要求，进一步规范新型冠状病毒（以下简称新冠病毒）核酸检测的技术人员、标本采集、标本管理、实验室检测、结果报告等工作，保证检测质量，提高检测效率，满足新冠病毒核酸检测需求，特制定本手册。本手册适用于所有开展新冠病毒核酸检测的医疗机构。 一、技术人员基本要求 （一）采样人员。从事新冠病毒核酸检测标本采集的技术人员应当经过生物安全培训（培训合格），熟悉标本种类和采集方法，熟练掌握标本采集操作流程及注意事项，做好标本信息的记录，确保标本质量符合要求、标本及相关信息可追溯。 （二）检测人员。实验室检测技术人员应当具备相关专业的大专以上学历或具有中级及以上专业技术职务任职资格，并有2年以上的实验室工作经历和基因检验相关培训合格证书。实验室配备的工作人员应当与所开展检测项目及标本量相适宜，以保证及时、熟练地进行实验和报告结果，保证结果的准确性。 二、标本采集基本要求 （一）基本原则

1.各医疗机构的检测能力应当与门急诊就诊人次、住院人次等诊疗量相匹配，并与采集的标本量相适应，避免采集数量明显超出检测能力导致的标本积压、标本失效、检测结果反馈迟缓等问题。 2.各医疗机构在采集标本时，要根据不同采集对象设置不同的采样区域，将发热患者与其他患者、“愿检尽检”人群分区采样，避免交叉感染。 3.标本采集应当在满足本机构发热门诊、住院患者、陪护人员及院内职工的检测需求基础上，进一步保障其他重点人群“应检尽检”和一般人群“愿检尽检”的要求。 （二）采样点设置 医疗机构设置新冠病毒采样点应当遵循安全、科学、便民的原则。采样点应当为独立空间，具备通风条件，内部划分相应的清洁区和污染区，配备手卫生设施或装置。采样点需设立清晰的指引标识，并明确采样流程和注意事项。设立独立的等候区域，尽可能保证人员单向流动，落实“1米线”间隔要求，严控人员密度。 （三）人员配置及防护要求 每个采样点应当配备1-2名采样人员。合理安排采样人员轮替，原则上每2-4小时轮岗休息1次。采样人员防护装备要求：N95及以上防护口罩、护目镜、防护服、乳胶手套、防水靴套；如果接触患者血

医疗机构新型冠状病毒核酸检测工作手册(试行)

一、技术人员基本要求 （一）采样人员。 从事新冠病毒核酸检测标本采集的技术人员应当经过生物安全培训（培训合格），熟悉标本种类和采集方法，熟练掌握标本采集操作流程及注意事项，做好标本信息的记录，确保标本质量符合要求、标本及相关信息可追溯。 （二）检测人员。 实验室检测技术人员应当具备相关专业的大专以上学历或具有中级及以上专业技术职务任职资格，并有 2 年以上的实验室工作经历和基因检验相关培训合格证书。实验室配备的工作人员应当与所开展检测项目及标本量相适宜，以保证及时、熟练地进行实验和报告结果，保证结果的准确性。 二、标本采集基本要求 （一）基本原则。 1.各医疗机构的检测能力应当与门急诊就诊人次、住院人次等诊疗量相匹配，并与采集的标本量相适应，避免采集数量明显超出检测能力导致的标本积压、标本失效、检测结果反馈迟缓等问题。 2.各医疗机构在采集标本时，要根据不同采集对象设置不同的采样区域，将发热患者与其他患者、“愿检尽检”人群分区采样，避免交叉感染。 3.标本采集应当在满足本机构发热门诊、住院患者、陪护人员及院内职工的检测需求基础上，进一步保障其他重点人群“应检尽检”和一

般人群“愿检尽检”的要求。 （二）采样点设置。 医疗机构设置新冠病毒采样点应当遵循安全、科学、便民的原则。采样点应当为独立空间，具备通风条件，内部划分相应的清洁区和污染区，配备手卫生设施或装置。采样点需设立清晰的指引标识，并明确采样流程和注意事项。设立独立的等候区域，尽可能保证人员单向流动，落实“1米线”间隔要求，严控人员密度。 （三）人员配置及防护要求。 每个采样点应当配备1～2名采样人员。合理安排采样人员轮替，原则上每2～4小时轮岗休息1次。采样人员防护装备要求：N95及以上防护口罩、护目镜、防护服、乳胶手套、防水靴套；如果接触患者血液、体液、分泌物或排泄物，戴双层乳胶手套；手套被污染时，及时更换外层乳胶手套。每采一个人应当进行严格手消毒或更换手套。（四）采样流程。 各医疗机构应当建立新冠病毒核酸检测采样操作流程制度，根据采样对象类别确定具体采样流程，包括预约、缴费、信息核对、采样、送检、报告发放等。 应当利用条码扫描等信息化手段采集受检者信息。标本采集前，采样人员应当对受检者身份信息进行核对，并在公共区域以信息公告形式告知核酸检测报告发放时限和发放方式。 每个标本应当至少记录以下信息：1.受检者（患者）姓名、身份证号、居住地址、联系方式；2.采样单位名称、标本编号，标本采集的日期、

新冠肺炎实验室建立文件系列之2 新型冠状病毒核酸检测标准操作程序

02 新型冠状病毒核酸检测标准操作程序 1 目的 规范PCR方法检测新型冠状病毒核酸的工作程序，保证实验结果的正确可靠。 2 范围 适合于检验科发热门诊。 3 职责 3.1 检验人员负责按照本检测细则对被检样本进行检测； 3.2 复核人员负责对检测操作是否规范以及检测结果是否准确进行复核； 3.3 专业组负责人负责对专业组综合管理和检测报告的审核。 4 程序、内容和要求 任何新型冠状病毒的检测都必须在具备适当条件的实验室由经过相关技术安全培训的人员进行操作。本程序中的核酸检测方法主要针对新型冠状病毒基因组中开放读码框1a/b （open reading frame 1ab，ORF1ab）和核壳蛋白（nucleocapsid protein，N）。 在实验室要确认一个病例为阳性，满足以下条件：同一份标本中新型冠状病毒2个靶标（ORF1ab、N）特异性PCR检测结果均为阳性。 阴性结果也不能排除新型冠状病毒感染，需要排除可能产生假阴性的因素，包括：样本质量差，比如口咽等部位的呼吸道样本；样本收集的过早或过晚；没有正确的保存、运输和处理样本；技术本身存在的原因，如病毒变异、PCR抑制等。 4.1 样本采集（推荐鼻/咽拭子） 4.1.1 咽拭子（使用透景样本保存液） 用2 根聚丙烯纤维头的塑料杆拭子同时擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁，将拭子头浸入样本保存液（也可使用等渗盐溶液、组织培养液或磷酸盐缓冲液）的管中，尾部弃去，旋紧管盖作为样本使用。 4.1.2 鼻拭子（使用透景样本保存液） 将1 根聚丙烯纤维头的塑料杆拭子轻轻插入鼻道内鼻腭处，停留片刻后缓慢转动退出。取另一根聚丙烯纤维头的塑料杆拭子以同样的方法采集另一侧鼻孔。上述两根拭子浸入同一

新冠核酸检测技术PCR实验室质量体系文件第三部份项目类SOP

文件审批者：发布日期：年月日

第三部分项目类SOP SOP_18-35 临床标本的处理（核酸纯化）程序 1.目的 保证标本处理标准化、规范化，使不规范操作因素对实验结果造成的影响减至最小。 2.范围 新冠病毒核酸提取。 3.职责 新冠病毒标本检测项目的工作人员按此文件操作执行。 4.工作流程 4.1接收样本 在接收样本前，检测人员需要按照三级防护标准穿戴好，穿着防护衣、护目镜、隔离衣，并戴上N95口罩、双层手套，穿上靴套等。然后用75%的乙醇对实验室内的生物安全柜的空间和台面以及核酸提取仪等进行消毒，还需对标本转运箱进行消毒，并核对被检样本姓名、性别、年龄、编号及检测项目等，待确认转运箱完好后将其放入生物安全柜。 4.2病毒灭活 已经使用含胍盐的灭活型标本采样管的实验室，这一环节无需进行灭活处理，直接进行核酸提取，而使用非灭活型标本采样管的实验室，则有56℃孵育30分钟热灭活的处理方式，病毒灭活后为避免开盖后气溶胶污染实验室和检测人员，常温静置15分钟以上再执行下一步操作。 4.3核酸提取 1) 标本操作人员穿戴三级防护用品，在生物安全柜内将离心管依次编号。 2）取出病毒提取试剂，对应标本编号。 3）用旋涡混匀器对标本进行混匀，把可能含有病毒核酸的细胞从拭子标本中洗脱下来。 4）在生物安全柜当中，一人开盖，一人加样，用移液器加混悬液200uL标本到提取液当中。 5) 裂解10分钟。 6）把裂解好的核酸提取盒放入半自动核酸提取仪当中，按预先设置好的程序提取核酸。

7）核酸提取完成后在生物安全柜内，将提取的核酸加至PCR扩增反应体系。 4.4 核酸分析，等待结果 在生物安全柜内，将提取的核酸加至PCR扩增反应体系，然后将构建好的扩增体系放入扩增仪，进行核酸扩增后分析。 4.5消毒，废物处理 一系列步骤完成后，需要对实验废物进行处理，并对实验仪器、桌面、地面进行消毒。待检测结果出来后，对检测到的阳性、可疑阳性样本按SOP_18-20《新型冠状病毒核酸检测结果分析与报告管理制度》、SOP_18-21《新型冠状病毒核酸检测疑似阳性结果、可疑结果处置应急预案》进行处置。 5相关记录 5.1 YCXZYY/JYK-JL-SOP_18-35-01 附表21 PCR实验室流程图