Q-PCR实验步骤
Q-PCR实验步骤
——测定沉积物中产甲烷菌的数量
（1）DNA提取
沉积物总DNA根据DNA提取试剂盒(MoBio, Carlsbad, CA)说明书来提取。
（2）目的片段PCR扩增
引物：mlas(5′ -GGTGGTGTMGGDTTCACMCARTA-3′)
mcrA-rev(5′ -CGTTCATBGCGTAGTTVGGRTAGT-3′)；
扩增片段长度为409 bp。
以沉积物总DNA为模板，用甲烷菌特异性引物进行PCR反应。
PCR反应体系为（50μL）：
10×buffer（含Mg2+） 5μL
dNTP（L） 4μL
上、下游引物（10μmol/L） 1μL
Ex Taq 酶（5U/μL）μL
DNA模板（10ng/μL） 1μL
ddH
O μL
2
PCR循环参数：95°C预变性3min；接着30个循环为95°C变性30 s，55°C 低温退火45 s，72°C延伸30s；72°C延伸10min，4°C 保温。
（3）重组标准质粒的制备
按照琼脂糖凝胶DNA片段回收纯化试剂盒说明对PCR产物进行纯化、回收。
按照pMD 19-T载体试剂盒的说明书将纯化的PCR产物与pMD 19-T载体连接。
连接体系为：μL 水，μL PCR产物，μL pMD 19-T载体，μL Solution Ⅰ（注：按顺序添加，并在冰上操作），于16℃过夜反应（放PCR仪上）。
转化：①把感受态细胞（ Competent Cells）置于冰中融化；
②把25μL的感受态细胞移至灭菌处理的离心管内；
③加入用于转化的DNA（10ng以下）；
④冰中放置30min；
⑤42°C放置60s；
⑥冰中放置2-3min；
⑦加入37°C预温好的LB培养基250μL；
⑧37°C振荡培养1h（160-225rpm）；
⑨取适量涂布琼脂平板培养基（160μL）（先涂150μL Amp，干后用前涂80μL X-gal）；
⑩37°C过夜培养，直至可观察到菌落为止；
挑选单个白色菌斑至3mL 含Amp的LB培养基，37°C摇菌培养，直至培养液变浑浊。
分别以原有 PCR引物（mlas和mcrA-rev）和M13（M13R和M13F）引物对菌液进行扩增，根据扩增特异条带的位置鉴定阳性克隆，抽提两种引物扩增均为阳性的样品，按照质粒 DNA 提取试剂盒的操作要求提取质粒 DNA。
以M13为引物的PCR反应体系为（20μL）：
10×buffer 2μL
Mg2+ μL
dNTP μL
上、下游引物μL
R Taq 酶μL
DNA模板μL
ddH
O μL
2
（4）实时荧光定量PCR：抽提PCR为阳性克隆的重组质粒DNA，测定其浓度（ng/μL），根据各质粒的分子量与质量浓度，计算成拷贝数，制得标准品。将标准品按10倍梯度稀释成105-109，用作模板在实时定量PCR仪上进行扩增，建立反映Ct值与质粒拷贝数浓度对应关系的定量标准曲线。按照试剂盒说明书建立反应体系和反应条件，自动采集荧光。
反应体系（20μL）：
SYBR Premix Ex Taq Ⅱ(2×) 10μL
PCR Forward Primer (mlas) μL
PCR Reverse Primer (mcrA-rev) μL
DNA 模板 2μL
O μL
ddH
2
反应条件：PCR循环参数：95°C预变性3min；接着30个循环为95°C变性30 s，55°C低温退火45 s，72°C延伸30s；
按仪器操作说明选择熔解曲线分析：95°C 15 s，60°C 15 s，95°C 15 s。
参考文献
[1]Steinberg, L. M., and J. M. Regan. 2008. Phylogenetic comparison of the methanogenic communities from an acidic, oligotrohic fen and an anaerobic digester treating municipal wastewater sludge. Appl. Environ. :6663–6671.
[2]Steinberg, L. M., and J. M. Regan. 2009. mcrA-Targeted real-time quantitative PCR method to examine methanogen communities. Appl. Environ. Microbiol. 75(13):4435-4442.
[3]Cai, H., and N. Jiao. 2008. Diversity and abundance of nitrate assimilation genes in the northern South China Sea. Microb Ecol. 56:751-764.
分子生物学实验室常用仪器及使用方法
实验指导 目录 实验一分子生物学实验室常用仪器及使用方法实验二质粒DNA的提取－碱裂解法 实验三琼脂糖凝胶电泳 实验四限制性内切核酸酶的酶切与鉴定 实验五大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 实验六动物组织细胞基因组 DNA提取 实验七 DNA的定量 实验八 PCR基因扩增 实验九琼脂糖凝胶电泳分离与纯化目的DNA 实验十 DNA重组 实验十一动物组织细胞总RNA的提取 实验一分子生物学实验室常用仪器及使用
事实证明，在科学飞速发展的今天，无论从事哪个领域的研究，要想突破，除了有良好的理论基础外，更重要的是依赖于先进的技术和优良的仪器设备以及良好的研究环境。一个标准的分子生物学实验室除了具有一般生物学实验室的常规仪器设备外，还具有一些特殊用途的仪器，这些仪器一般较精密，价格昂贵。下面介绍这些仪器的使用方法和注意事项。 一、冷冻离心机 低温分离技术是分子生物学研究中必不可少的手段。基因片段的分离、酶蛋白的沉淀和回收以及其它生物样品的分离制备实验中都离不开低温离心技术，因此低温冷冻离心机成为分子生物学研究中必备的重要仪器。在国内，有多个厂家生产冷冻离心机，本实验室的高速冷冻离心机为GL-20G-Ⅱ型（上海安亭），落地式。配有角式转头：6×50ml、12×10ml和12×1.5ml。极限转速20000rpm。 1. 安装与调试 离心机应放置在水平坚固的地面上，应至少距离10cm以上且具有良好的通风环境中，周围空气应呈中性，且无导电性灰尘、易燃气体和腐蚀性气体，环境温度应在0～30℃之间，相对湿度小于80%。试转前应先打开盖门，用手盘动转轴，轻巧灵活，无异常现象方可上所用的转头。转子准确到位后打开电源开关，然后用手按住门开关，再按运转键，转动后立即停止，并观察转轴的转向，若逆时针旋转即为正确，机器可投入使用。 2. 操作程序 （1）插上电源，待机指示灯亮；打开电源开关，调速与定时系统的数码管显示的闪烁数字为机器工作转速的出厂设定，温控系统的数码管显示此时离心腔的温度。 （2）设定机器的工作参数，如工作温度，运转时间，工作转速等。 （3）将预先平衡好的样品放置于转头样品架上，关闭机盖。 （4）按控制面板的运转键，离心机开始运转。在预先设定的加速时间内，其运速升至预先设定的值。 （5）在预先设定的运转时间内（不包括减速时间），离心机开始减速，其转速在预先设定的减速时间内降至零。 （6）按控制面板上的停止键，数码管显示dedT，数秒钟后即显示闪烁的转速值，这时机器已准备好下一次工作。 3. 注意事项 （1）离心机应始终处于水平位置，外接电源系统的电压要匹配，并要求有良好的接地线，机器不使用，要拔掉电源插头。
简单的科学小实验
简单的科学小实验 (1)神奇的牙签 思考：放在水里的牙签，会随着放在水里的方糖游动，还是随着放在水里的肥皂游动？ 材料：牙签、一盆清水、肥皂、方糖 操作： 1. 把牙签小心地放在水面上。 2. 把方糖放入水盆中离牙签较远的地方。牙签会向方糖方向移动。 3. 换一盆水，把牙签小心地放在水面上，现在把肥皂放入水盆中离牙签较近的地方。牙签会远离肥皂。 讲解： 当你把方糖放入水盆的中心时，方糖会吸收一些水分，所以会有很小的水流往方糖的方向流，而牙签也跟着水流移动。但是，当你把肥皂投入水盆中时，水盆边的表面张力比较强，所以会把牙签向外拉。 创造：请你试一试，如果将糖和肥皂换成其它物质，牙签会向哪个方向游去 (2)有孔纸片托水 思考：有孔的纸为什么能拖住水? 材料：瓶子一个、大头针一个、纸片一张，有色水一满杯 操作： 1、在空瓶内盛满有色水。 2、用大头针在白纸上扎许多孔。 3、把有孔纸片盖住瓶口。 4、用手压着纸片，将瓶倒转，使瓶口朝下。 5、将手轻轻移开，纸片纹丝不动地盖住瓶口，而且水也未从孔中流出来。 讲解： 薄纸片能托起瓶中的水，是因为大气压强作用于纸片上，产生了向上的托力。小孔不会漏出水来，是因为水有表面张力，水在纸的表面形成水的薄膜，使水不会漏出来。这如同布做的雨伞，布虽然有很多小孔，仍然不会漏雨一样。 手绢的秘密
思考：在水龙头下把手帕撑开摊平，打开水龙头，水是不是透过手帕而流下去呢？材料：玻璃杯1个、手帕1条、橡皮筋1条 流程： 1、把手帕盖住杯口，用橡皮筋绑紧。 2、让水冲在手帕上。 3、水流进杯子里约七、八分满后关闭水龙头。 4、杯口朝下，把杯子迅速倒转过来。 说明： 1、从杯子上面冲水时，水会透过手帕流入杯内。 2、杯子倒转过来时，由于大气压力的关系，水不会流出来。 延伸： 如果盖住杯口手帕的布料不同（例如棉布或是毛巾、麻布），水的进出情形会怎样呢？ 1．做测量实验，体验生活 学了用天平测物体的质量后，先估计一个鸡蛋的质量，然后用天平进行测量，看你估计的是否准确。再用天平称出10个鸡蛋的质量，算出每个鸡蛋的平均质量，与你估计的值进行比较。 2．做惯性实验，有惊无险 在盛半杯水的玻璃杯口上放一张硬纸片，再在纸片上放一个鸡蛋，用手把硬纸片突然弹出去，鸡蛋会安全地掉进玻璃杯。 3．做惯性实验，判断准确 用生熟鸡蛋各一个，分别放在桌面上，同时以相同的速度旋转，因为熟鸡蛋的蛋黄和蛋清固定，所以旋转平稳，而生鸡蛋由于惯性，摇晃不定，很快停止转动，由此可准确判断生鸡蛋熟鸡蛋。 4．做压强实验，直观明了
RT-PCR的实验原理与操作步骤复习课程
R T-P C R的实验原理与 操作步骤
提取组织或细胞中的总RNA，以其中的mRNA作为模板，采用Oligo(dT)或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR 扩增，而获得目的基因或检测基因表达。RT-PCR使测的灵敏性提高了几个数量级，使一些极为微量RNA样品分析成为可能。该技术主要用于：分析基因的转录产物、获取目的基因、合成cDNA探针、构建RNA高效转录系统。 (一) 反转录酶的选择 1. Moloney鼠白血病病毒(MMLV)反转录酶：有强的聚合酶活性，RNA酶H活性相对较弱。最适作用温度为37℃。 2. 禽成髓细胞瘤病毒(AMV)反转录酶：有强的聚合酶活性和RNA酶H活性。最适作用温度为42℃。 3. Thermus thermophilus、Thermus flavus等嗜热微生物的热稳定性反转录酶：在Mn2 存在下，允许高温反转录RNA，以消除RNA模板的二级结构。 4. MMLV反转录酶的RNase H-突变体：商品名为SuperScript 和 SuperScriptⅡ。此种酶较其它酶能多将更大部分的RNA转换成cDNA，这一特性允许从含二级结构的、低温反转录很困难的m模板合成较长cDNA。 (二) 合成cDNA引物的选择 1. 随机六聚体引物：当特定mRNA由于含有使反转录酶终止的序列而难于拷贝其全长序列时，可采用随机六聚体引物这一不特异的引物来拷贝全长mRNA。用此种方法时，体系中所有RNA分子全部充当了cDNA第一链模板，PCR引物在扩增过程中赋予所需要的特异性。通常用此引物合成的cDNA中96%来源于rRNA。 2. Oligo(dT)：是一种对mRNA特异的方法。因绝大多数真核细胞mRNA具有3’端Poly(A )尾，此引物与其配对，仅mRNA被转录。由于Poly(A )RNA仅占总RNA的1-4%，故此种引物合成的cDNA比随机六聚体作为引物和得到的cDNA 在数量和复杂性方面均要小。 3. 特异性引物：最特异的引发方法是用含目标RNA的互补序列的寡核苷酸作为引物，若PCR反应用二种特异性引物，第一条链的合成可由与mRNA 3’端最靠近的配对引物起始。用此类引物仅产生所需要的cDNA，导致更为特异的PCR扩增。生物科研https://www.sodocs.net/doc/b7758804.html, 二、实验耗材与试剂 1．RNA提取" target="_blank" >RNA取试剂 2．第一链cDNA合成试剂盒
微生物实验操作步骤
微生物试验操作步骤 1.前期准备工作（红色字体需要购买） 10ml离心管（80管）、培养皿（预实验36板，正式试验648板，共计684板）、EP管（预实验36管，正式试验108管，144管）、枪头（5ml、1ml、200ul）、生理盐水现配现用（0.85）2.，灭菌处理 将离心管、枪头、生理盐水、培养基放入高压灭菌锅中灭菌处理后待用。 3.制备不同梯度的样品溶液 预实验 a.梯度稀释试验前一天晚上取置于-80℃盲肠食糜样品于4℃冰箱融化，将需要用到的离心管和EP管分别编号待用。试验期间取盲肠食糜0.5~1g于灭菌后的10ml离心管中，按1：10比例加入生理盐水，制成10-1浓度的样品溶液。然后取0.5ml10-1浓度的样品溶液于下一离心管，按1：10比例加入生理盐水，制成10-2浓度的样品溶液。然后然后取0.1ml10-2浓度的样品溶液于EP管中，按1：1010-3比例加入生理盐水，制成10-3浓度的样品溶液。然后依次如上分别配制10-4、10-5、10-6、10-7、10-8样品溶液。每一次取样前离心管和EP管都要在微型振荡器上震荡混匀。 b.接种和培养：按照平板涂布法进行。分别取各稀释管溶液100μl接种到选择性培养基，大肠杆菌选择性培养基置普通培养箱，37℃培养24h。乳酸菌选择性培养基置5%CO2培养箱，37℃培养48h。双歧杆菌选择性培养基置厌氧发酵罐内，37℃培养48h。沙门氏菌选择性培养基置普通培养箱，37℃培养24h。 c. 微生物计数与鉴定：采用常规微生物平板菌落计数法，选择长有30-300个菌落的平板较为合适，用每克肠道内容物中细菌个数的对数表示( 1gCFU /g) 正式试验 按照预实验操作步骤及适宜梯度进行试验。 4.培养基 总需氧菌营养琼脂（NA）34567 乳酸菌MRS琼脂碱性厌氧234567 双歧杆菌BL琼脂厌氧234567产气袋 大肠杆菌麦康凯需氧234567 沙门氏菌XLD 需氧2345
实验三 进程的创建和简单控制(学生
实验三进程的创建和简单控制 实验目的： 1.掌握进程的概念和进程的状态，对进程有感性的认识； 2.掌握进程创建方法； 3.认识进程的并发执行，了解进程族之间各种标识及其存在的关系； 4.熟悉进程的创建、阻塞、唤醒、撤销等控制方法。 实验内容： 1.了解有关Linux进程的属性和进程的层次结构； 2.学习有关Linux的前台和后台进程； 3.学习有关Linux命令的顺序执行和并发执行； 4.学习有关挂起和终止进程； 5.了解并发程序的不可确定性，进行简单并发程序设计。 实验步骤： (一)Shell下的进程控制 1.进入Linux系统。 2.用ps查看进程。 a)linux的ps命令是用来监视系统进程和资源使用情况的命令，可显示 瞬间进程的动态。 b)ps 的参数非常多，常用的参数有： i.-A 列出所有的进程； ii.-w 显示加宽可以显示较多的信息； iii.-au 显示较详细的信息； iv.-aux 显示所有包含其他使用者的进程。
3.用kill终止某些进程。 a)kill命令通过向进程发送指定的信号来结束进程。 b)先使用ps查到进程号，再使用kill杀出进程。
4.用pstree命令显示系统中进程层次结构。 a)pstree指令用ASCII字符显示树状结构，清楚地表达进程间的相互关 系。 b)语法格式pstree [-acGhlnpuUV][-H <程序识别码>][<程序识别 码>/<用户名称>]
(二)Linux简单进程编程 1.理解系统调用fork()的使用。 a)fork()会产生一个与父程序相同的子程序，唯一不同之处在于其进程 号，如图1所示。 图 1 系统调用fork() b)编辑下面的程序，要求实现父进程产生两个子进程，父进程显示字 符“a”、两个子进程，分别显示字符“b”、“c”，如图2所示。 #include
RT-PCR实验方法总结大全.
RT-PCR实验方法总结大全 RT-PCR实验有三步:抽提RNA,RT,PCR。 要求: 1.做RT前必需测RNA浓度,逆转录体系对RNA量还是有一些要求,常用500ng 或1ug。 2. RT按要求做,一般不会出太大问题。 3. PCR,按常规。但如需扩长片段,则对前两步要求较高,需要有完整的cDNA 存在,不是单改变Mg2+浓度、退火温度能解决的。 1RT和PCR时的引物设计是不是一定要先知道目的基因的序列?必须 在RT时,引物设计有3种方法即a:Random 9mers;b:Oligo dT-Adaptor Primer;和c:特异的下游引物。如果用a和b方法,是扩增的所有的cDNA(理论上,还要用此产物做PCR 的模板继续扩增。 如果用c方法,那么要去那里查它的序列呢?https://www.sodocs.net/doc/b7758804.html,问题: 在做RT-PCR遇到一怪现象,即对同一动物不同组织扩增同一段基因,结果从一种组织中可以扩出我的目的基因,条带非常的好,而另一组织在同样的条件下却得到许多非特异性的条带,尝试其他条件同样无法得到满意的结果,百思不得其解!(注:已肯定该基因在两种组织中都表达,且内参照在两种组织都可扩增出来 从这两种组织中提取的RNA的量是不一样的,我测过吸光度,差异还很大,会不会和这有关呢?请高手指教! 解答: 1.RT-PCR有两种做法:
条件具备的话可用kit进行一步法进行;若条件不太好的话可分两步进行逆转录再PCR。但后来发现两步法的结果更加理想,条带特异性强且无拖尾现象,我推测是体系更加单一比较利于PCR的进行,当然也可能是我买的kit不太好。(promega。 2.RT-PCR应具备的条件 高质量的RNA(保留后可做5‘,3’RACE;引物的(最好产物短点;若涉及粗略定量的话还应考虑RNA的浓度或是cDNA的浓度(如果由内标分子更好,但我发现其实很不容易将RNA的浓度以及内标分子的表达量调整的完全一样;体系的均一性等。 3.RACE 我做过RACE(3’RACE是宝生物的Kit;5‘RACE是Gibico,但现在再进行另一个同源基因的3‘RACE时却怎么也P不出来,这两个基因是由同一对引物扩增出来的,其中一个已经获得了全序列(RACE的方法,而另一个基因的3’UTR 却增么也扩不出来,我推测是不是该基因的3‘UTR太长的缘故,我都快绿了,有无 RT-PCR的常用内标b-actin 和GAPDH的使用有选择性吗?比如不同的细胞,不同的刺激。 有关内参: RT-PCR内参照可以在一个管子里做(那样也是图好看一些,最好分开两管,把除了引物之外的mixture统一配,拍照后,算目的基因和内参的比值,这就是基因表达的相对浓度。 问:我曾经作过同一管的PCR,内有actin 和目的基因引物。虽然可见到两条均一条带但图片质量不理想(而且酶量、Mg2+加倍。请教mxbdna2003 ,你是如何处理同一管的PCR的各成分的浓度? 答: it should determined the amount of RNA. but it not for the quantitity of the PCR. it just was convienent to guess the amount ot the template<(for RT and PCR and bettrer for publication and editor if he don not know the preocedure much. but the amount just
初中化学实验基本操作
初中化学实验基本操作一、认识仪器：
二、安全要求： 1、不要用手接触药品，也不要把鼻孔凑到容器口，去闻药品的气味和尝试任何药品的味道。 2、实验剩余的药品既不要放回原瓶，也不要随意丢弃，更不要拿出实验室，要放入制定
容器内。 3、实验中要特别注意保护眼睛。万一眼睛里溅入了药液（尤其是有腐蚀性或有毒的药液），要立即用水冲洗（切不可用手揉眼睛）。洗的时候要眨眼睛，必要时请医生治疗，提倡使用防护眼镜。 4.在使用酒精灯时，绝对禁止向燃着的酒精灯里添加酒精，也绝对禁止用酒精灯引燃另一只酒精灯，必须用灯帽盖灭，不可用嘴吹灭。向灯内添加酒精时，不能超过酒精灯容积的2/3。万一洒出的酒精在桌面燃烧起来，不要惊慌，应立刻用湿抹布扑火。 三、基本操作： （一）取药品 1、固体药品 （1）粉末状：一横二送三直立，全落底。 （2）块状：一横二放三慢竖，缓缓滑。 2、液体药品 （1）大量：倒，塞倒放，签朝手，口挨口，缓缓倒。 （2）少量：胶头滴管：滴加时在容器正上方，防止玷污试管和污染试剂，不要平放或倒置，不能放在桌子上，用完用清水冲洗（滴瓶上的除外） （3）定量：量筒：量液时，量筒放平，视线与量筒内液体凹液面的最低处保持水平。 俯视：度数偏大仰视：读数偏小 3、气体收集 （1）排气法：向上排气法，适用于密度比空气大的，且不与空气反应的。 向下排气法，适用于密度比空气小的，且不与空气反应的。 （2）排水法：适用于难溶或不易溶于水的气体，且不与水反应。 （二）加热 仪器：酒精灯 1、（1）灯内酒精不多于2/3 （2）用外焰加热 2、给固体加热： （1）仪器：试管，蒸发皿 （2）注意事项：A.先预热，再固定。 B.试管口略向下倾斜（防止冷凝水倒流回热的试管底部使试管炸裂） C.试管外壁不能有水（炸裂） D.热试管不用冷水冲洗（炸裂） E.试管不接触灯芯（防止炸裂） 3、给液体加热 （1）仪器：试管，蒸发皿，烧杯，烧瓶（其中，后两个须垫石棉网） （2）注意事项：A.先预热，一直预热（来回移动试管）。 B.试管内液体不超过容积的1/3 C.试管与桌面成45度 D.试管口不朝着有人的方向 （三）称量：用托盘天平 零件：托盘（两个）平衡螺母，指针，分度盘，游码，标尺，砝码。 称量步骤： 1、称量前先把游码放在标尺的零刻度处，检查天平是否平衡。如果天平未达到平衡，调节平衡螺母，使天平平衡。 2、称量时把称量物放在左盘，砝码放在右盘。砝码用镊子夹取，先加质量大的砝码，再加质量小的砝码，最后移动游码，直到天平平衡为止。记录所加砝码和游码的质量。
生物实验操作步骤
生物实验操作步骤 一、安装显微镜和对光： A 、操作步骤： 1.一手握住镜臂，一手托住镜座，把显微镜轻轻地放在实验台上，镜臂靠近身体略偏左，镜座距实验台边缘约5厘米。安装好目镜和物镜。 2.转动转换器，使低倍物镜对准通光孔。转动遮光器，使最大的光圈对准通光孔。 3、左眼注视目镜内，同时双手转动反光镜（光强用使用平面镜、光弱使用凹面镜），使光线反射到镜筒里，直到整个视野呈雪白色为止。 4.整理复位：把显微镜的外表擦拭干净。取下镜头放入镜盒内，并将镜筒缓缓下降到最低处。最后把显微镜放进镜箱里，放回原处。 B 、去年考卷： C 、评分标准： （1）安装好物镜和目镜（1分） （2）能将显微镜对好光观察（2分） 记录：雪白色或亮白色（1分） （3）整理器材（1分） 二、制作并观察洋葱鳞片叶临时玻片标本： A 、操作步骤： 1、用干净的纱布把载玻片和盖玻片擦干净。 2、用滴管在载玻片中央滴一滴清水。 3、用刀片在洋葱内表面划一个“井”字，用镊子撕下表皮，然后把它放在载玻片中央的水滴中，用解剖针轻轻地将其展平； 4、用镊子夹起盖玻片，使其一边接触载玻片上面的液滴，然后缓缓地盖在液滴上，盖片时要防止装片上出现气泡； 5、在载玻片的一侧滴一滴碘液，在另一侧用吸水纸吸引，重复几次，使染液浸润到整个标本； 6、安装显微镜和对光； 7、将制作的装片安放在显微镜的载物台上，然后将镜筒缓缓下降直到物镜接近玻片； 8、用左眼注视目镜，调节粗准焦螺旋使镜筒缓缓上升，直到在视野中看到细胞图像，然后旋转细准焦螺旋，使物像更清晰； 9、移动装片，在视野中找到一个完整的细胞进行仔细观察； 10、整理复位：取下玻片标本，平移方式（防止折断盖玻片）取下盖玻片并连同载玻片一起放回原处。取下镜头放入镜盒内，将镜筒下降到最低处，然后把显微镜放进镜箱里。把其他废弃物放入垃圾桶并把实验桌抹干净。 B 、去年考卷： C 、评分标准： （1）用纱布将载玻片、盖玻片擦拭干净（1分） （2）在载玻片中央滴一滴清水（1分） （3）用刀片切取一块洋葱鳞片叶，用镊子撕取鳞片叶的内表皮置于载玻片上清水中并用解剖针将表皮展平，盖上盖玻片（1分） （4）将一滴碘液滴在盖玻片的一侧，用吸水纸从对侧引流使碘液扩散到整个标本（1分） （5）将制作好的临时装片放在显微镜下观察（1分） 记录：气泡（1分） 细胞核（1分） 细准焦螺旋（1分） 左上方（1分） （6）整理器材（1分） 三、制作并观察口腔上皮细胞临时玻片标本： A 、操作步骤： 1、用干净的纱布把载玻片和盖玻片擦干净； 2、用滴管在载玻片中央滴一滴生理盐水； 3、用清水漱口，清除口腔中食物碎屑，用消毒牙签粗的一端在口腔侧壁上轻轻刮几下； 4、将牙签上附着的碎屑放在载玻片的生理盐水中涂抹几下； 用镊子夹起盖玻片让一侧先接触生理盐水在轻轻放平，避免出现 。 你观察到的细胞内染色最深的结构是 如果想让物像更清晰，应转动 。如果物像在视野的左上方，应将玻片标本向 移动，才能使物像移到视野中间。
简单的个人网站实验报告
《动态网页制作》 课程设计 姓名： 学号： 日期：2011.6.10
一、实验目的与要求 1、实现一个比较实用的个人网站 2、使用DIV+CSS对界面进行设置 3、网页界面美观 二、实验内容 1、前台： ⑴网站首页（最新公告、最新新闻、友情链接、登录等） ⑷聊天室 ⑸留言板 2、后台管理（从数据库中提取）： ⑴公告新闻的发布 ⑵留言的管理和回复 ⑶个人信息的设置（资料的更改、密码的找回等） 三、实验步骤 1、建立虚拟目录，用于存放你的所有网页及材料 2、新建站点，名称为站点1 3、创建数据库 4、登陆界面进入个人主页 5、个人主页界面包括：最新公告，最新新闻，最新电影，网上聊天室，留言板，涂鸦生活（身份证查询、email发送），网站计数器（记录该网站的点击次数）以及一些关于自己的信息链接功能。 6、实现各个功能。 Main.asp主页如下： ’数据库news的建立与打开 ’数据库gonggao的建立与打开
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