对抗菌药物的敏感试验

对抗菌药物的敏感试验

抗菌药物（包括抗菌素、磺胺类药物、呋喃类药物和中草药）对于治疗禽类的疾病发挥了巨大的作用。但是，由于使用抗菌药物不当，常导致耐药菌珠的产生，或干扰机体内正常菌群的有益作用，反而给机体带来不良影响。因此，测定细菌对抗菌药物的敏感性，选择最有效的药物应用于临床治疗，对于防治禽病，减少无效药物的开支，对禽业有着非常重要的意义。

常用的药物敏感试验有纸片法，试管法，挖洞法，琼脂稀释法和泡沫塑料片法。

一、纸片法：

纸片法是生产中常用的药敏试验方法，他简便、易行、出结果快。

（一）试验材料

1、普通琼脂培养基或特殊培养基。

2、药敏试纸（市场购买或自制）

3、灭菌试管，棉拭和镊子等。

4、被试细菌。

（二）试验方法

1、用经火焰灭菌的铂耳或接种环挑起待试细菌的纯培养物（量要适当地多一点），以划线接种方式将挑取的细菌涂布到普通琼脂平板或鲜血琼脂平板培养基表面（越密越好）。也可以挑取待试细菌于少量灭菌生理盐水中制成细菌混悬液，用灭菌的棉拭子沾取菌液涂布到上述培养基表面，尽可能涂布的致密而均匀（磺胺类药物的药敏试验要用无胨肉汤琼脂平板）

2、用灭菌尖头镊子，镊取已制备好的各种干燥抗菌药纸片（见附录），分别密贴到上述培养基表面，为了使抗菌药纸片与培养基表面密贴，可使用镊子轻按下纸片，纸片在培养基上的分布，一般可为中央贴一种纸片，外周以等距离贴若干纸片，这样一个（直径90毫米）平板可贴6-7个抗菌药纸片。如果药敏纸片上没有标记，在每帖一种纸片后，应在平板底上用笔写上其药名或贴上标签。

3、将贴纸片的平板底部在下，置37℃温箱中培养24小时后，取出观察结果。

药敏试验判定标准

抑菌圈直径（毫米）敏感度

20以上极敏

15—20 高敏

10—14 中敏

10以下低敏

0 不敏感

（三）观察结果与判定标准

1、经培养后，凡对涂布的细菌有抑制能力的抗菌药物，在其纸片四周出现一个无菌生长的圆圈，称为抑菌圈。可用直尺测量抑菌圈的大小，抑菌圈越大，说明该菌对此药敏感性很大，反之越小若无抑菌圈，则说明该菌对此药具有耐药性。

2、判定结果时，应按抑菌菌直径大小（以毫米作计量单位）作为判定敏感度高低的标准。

多粘菌素抑菌圈在9毫米以上为高敏，6-9毫米为低敏，无抑菌圈者为不敏感。

3、经药敏试验后，应首先选择高敏药物进行治疗，也可选用两种药物协助应用，以减少耐药菌株的产生。

抗菌药物敏感性试验的技术要求

抗菌药物敏感性试验的技术要求 1 范围 本标准规定了临床抗菌药物敏感性试验的技术要求，包括常规药敏试验的药物选择和报告、药敏试验方法、各种属细菌药敏试验、常见菌特殊耐药表型检测、药敏试验的质量控制、商品化药敏试验检测系统的性能验证。 本标准适用于开展临床微生物学检验的各级临床实验室。 2 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 2.1 抗微生物药物敏感性试验Antimicrobial susceptibility testing 检测微生物（本文件特指细菌）对抗微生物药物（本文件特指抗菌药物）的体外敏感性，以指导临床合理选用药物的微生物学试验，简称药敏试验。 2.2 最低抑菌浓度Minimal inhibitory concentration；MIC 在琼脂或肉汤稀释法药物敏感性检测试验中能抑制肉眼可见的微生物生长的最低抗菌药物浓度。2.3 折点Breakpoint 能预测临床治疗效果，用以判断敏感、中介、剂量依赖型敏感、耐药、非敏感的最低抑菌浓度（MIC）或者抑菌圈直径（mm）的数值。 2.3.1 敏感Susceptible；S 当抗菌药物对分离株的MIC值或抑菌圈直径处于敏感范围时，使用推荐剂量进行治疗，该药在感染部位通常达到的浓度可抑制被测菌的生长，临床治疗可能有效。 2.3.2 中介Intermediate；I 当菌株的MIC值或抑菌圈直径处于中介时，该数值接近药物在血液和组织中达到的浓度，从而治疗反应率低于敏感菌群。该分类意味着采用高于常规剂量治疗时或在药物生理浓集的部位，临床治疗可能

有效。该分类同样可作为“缓冲域”，以防止由微小、不可控的技术因素导致的重大偏差，尤其是毒性范围较窄的药物。 2.3.3 剂量依赖型敏感Susceptible-dose dependent；SDD 细菌菌株对抗菌药物的敏感性依赖于抗菌药物的剂量。当某种药物对菌株的MIC或抑菌圈直径在SDD 范围时，临床可通过提高剂量和（或）增加给药频率等修正给药方案以达到临床疗效。 2.3.4 耐药Resistant；R 当抗菌药物对分离株的MIC值或抑菌圈直径处于该分类范围时，使用常规治疗方案，该药在感染部位所达到的药物浓度不能抑制细菌的生长，和（或）被测菌株获得特殊耐药机制，且治疗性研究显示该药临床疗效不确切。 2.3.5 非敏感Nonsusceptible；NS 对于那些因未现或罕现耐药，而仅具有敏感折点的抗菌药物，当该药对某分离株的MIC值高于或抑菌圈直径低于敏感折点时，此分类为非敏感。 2.4 流行病学界值Epidemiological cutoff value；ECV 将微生物群体区分为有或无获得性耐药的MIC值或抑菌圈直径，是群体敏感性的上限。根据ECV，可将菌株分为野生型和非野生型。 2.4.1 野生型 Wild-type；WT 根据ECV值，将抗菌药物（包括抗真菌药物）评估中未获得耐药机制或无敏感性下降的菌株定义为野生型。 2.4.2 非野生型Non-wild-type；NWT 根据ECV值，将抗菌药物（包括抗真菌药物）评估中获得了耐药机制或存在敏感性下降的菌株，定义为非野生型。 2.5 效价Potency 抗菌药物中具有抗菌活性的成分，通过同类标准物质测定得出。单位mg/g、IU/g或用百分比表示。

细菌药物敏感试验实验报告

细菌药物敏感试验实验报告 药物敏感性试验的基本原则 1药敏试验检测获得性耐药，不必测试天然耐药： 天然耐药是细菌菌种固有的特征，耐药基因一般位于染色体，可以长期稳定遗传，表现为对某类或某种药物的天然耐药。天然耐药信息一般由基础医学和临床文献提供。部分天然耐药，体外试验条件下可能无法检测出来，因而导致假敏感，如果报告将成为极重要错误，严重误导临床。常见菌种对各类药物的天然耐药见文献。实验室全体人员应熟知这些信息，可将其发给临床学习和参考。 2药敏试验测试的前提条件： 实验室应具备相应检测的人员能力、客观条件、结果解释依据。标本处理、菌株分离鉴定、药敏试验操作等环节规范、标准、结果可信；具备对结果的解释能力，能够提供临床会诊服务。临床常规工作，分离株(可能)有临床意义而非定植或污染时，才可进行药敏试验。 错误示例：来自痰标本的溶血葡萄球菌，未作标本质量评估和半定量培养，进行药敏试验；来自粪便标本肠球菌属进行药敏试验等。 3测试结果应准确： 实验室应遵照CLSI文件或相关规范建立本医院药敏试验的质量管理

体系。质控菌株、频率、质控范围符合相关要求；定期参加实验室室间比对项目。建议保留菌株，以便复核。 具体的专业要求 1标本类型 临床微生物学的一大特点是标本种类繁多，而不同药物在这些部位的分布不同。标本的规范采集、质量保证、立即运送和有效保藏有赖于临床、实验室以及相关各方的密切合作。在规范临床送检的前提下，实验室进行药敏试验和报告药敏结果时，应首先考虑标本的特殊性。实际工作中需重点考虑的标本如下。 1．脑脊髓液： 正常和疾病状态不能穿透血脑屏障的药物，常规不应报告。报告审核时，对于分离自脑脊髓液的菌，下列药物不能报告：仅有口服剂型的抗菌药物、一、二代头孢菌素(除外静脉用头孢呋辛)、头霉素类、克林霉素、大环内酯类、四环素类和喹诺酮类。

不常见非发酵菌对常见抗菌药物敏感性分析

不常见非发酵菌对常见抗菌药物敏感性 分析 （作者:___________单位: ___________邮编: ___________） 作者：邬全会卓超苏丹虹陈冬梅袁锦屏 【摘要】目的了解临床分离的伯克霍尔德菌属、金色杆菌属、产碱杆菌属等不常见非发酵菌的耐药性。方法从2004年～2006年临床各种标本中分离到的不常见革兰阴性杆菌用VITEK-2全自动微生物分析仪进行检测鉴定，药物敏感性试验采用纸片扩散法。数据分析采用WHONET5.4软件进行处理、统计和分析。结果两年中中山大学第一附属医院共收集患者首次分离株118株，其中伯克霍尔德菌属47株(其中洋葱伯克霍尔德菌41株，皮氏伯克霍尔德菌6株)，金色杆菌属44株(其中脑膜脓毒性金黄杆菌17株，产吲哚金黄杆菌23株)，产碱杆菌属27株(其中粪产碱杆菌13株，木糖氧化无色杆菌12株)。 96.6%的菌株来源于痰标本。对伯克霍尔德菌属有较强体外抗菌活性的依次为：复方磺胺甲口恶唑(87.2%)、哌拉西林/三唑巴坦(87.0%)、左氧氟沙星(85.3%)、头孢吡肟(83.0%)、头孢他啶(78.6%)和头孢哌酮/舒巴坦(78.3%)。对金色杆菌属有较强体外抗菌活性以复方磺胺甲口恶唑(87.5%)最高。对产碱杆菌属敏感性较高的药物分别为头孢哌

酮/舒巴坦(84.6%)和美罗培南(77.8%)。结论头孢哌酮/舒巴坦对三种非发酵菌都有较高体外抗菌活性。常规实验室鉴定方法易将三种菌相互混淆，甚至与氧化酶阴性的非发酵菌混淆，这可能是造成各地报道药敏结果差异的原因之一。 【关键词】伯克霍尔德菌属；金色杆菌属；产碱杆菌属；敏感性；头孢哌酮/舒巴坦； ABSTRACT Objective To investigate the antimicrobial susceptibility of uncommon nonfermenting Gram-negative bacilli such as Burkholderi spp., Chryseobacterium spp. and Alcaligenes spp. from a hospital in Guangzhou from 2004 to 2006. Methods Disc diffusion test (KB methods) was employed to study the antimicrobial susceptibility. WHONET 5.4 was applied for date analysis. Results In two years of study from 2004 to 2006, 118 strains were isolated firstly from each patient, including 44 strains of Burkholderia spp. (41 strains of Burkholderia cepacia), 41 strains of Chryseobacterium spp. (17 C. meningosepticum and 23 C.indologenes), 27 strains of Alcaligenes spp. (13 A.faecailis and 12 A.xylosoxidans), 96.6% of strains were isolated from sputum. The susceptibility rates of Burkholderia spp. to trimethoprim/sulfamethoxazole (SMZ/TMP), piperacillin/tazobactam, levofloxacin, cefepime, ceftazidime and cefoperazone/sulbactam were 87.2%, 87.0%,

不常见非发酵菌对常见抗菌药物敏感性分析

文章编号:100128689(2007)1220741204不常见非发酵菌对常见抗菌药物敏感性分析 邬全会1　卓超2,3　苏丹虹2　陈冬梅1　袁锦屏2 (1中山大学附属第一医院,　广州510080; 2广州呼吸疾病研究所,　广州510120) 摘要:　目的　了解临床分离的伯克霍尔德菌属、金色杆菌属、产碱杆菌属等不常见非发酵菌的耐药性。方法　从2004年～2006年临床各种标本中分离到的不常见革兰阴性杆菌用V IT EK22全自动微生物分析仪进行检测鉴定,药物敏感性试验采用纸片扩散法。数据分析采用W HON ET5.4软件进行处理、统计和分析。结果　两年中中山大学第一附属医院共收集患者首次分离株118株,其中伯克霍尔德菌属47株(其中洋葱伯克霍尔德菌41株,皮氏伯克霍尔德菌6株),金色杆菌属44株(其中脑膜脓毒性金黄杆菌17株,产吲哚金黄杆菌23株),产碱杆菌属27株(其中粪产碱杆菌13株,木糖氧化无色杆菌12株)。9616%的菌株来源于痰标本。对伯克霍尔德菌属有较强体外抗菌活性的依次为:复方磺胺甲口恶唑(8712%)、哌拉西林 三唑巴坦(8710%)、左氧氟沙星(8513%)、头孢吡肟(8310%)、头孢他啶(7816%)和头孢哌酮 舒巴坦(7813%)。对金色杆菌属有较强体外抗菌活性以复方磺胺甲口恶唑(8715%)最高。对产碱杆菌属敏感性较高的药物分别为头孢哌酮 舒巴坦(8416%)和美罗培南(7718%)。结论　头孢哌酮 舒巴坦对三种非发酵菌都有较高体外抗菌活性。常规实验室鉴定方法易将三种菌相互混淆,甚至与氧化酶阴性的非发酵菌混淆,这可能是造成各地报道药敏结果差异的原因之一。 关键词:　伯克霍尔德菌属;　金色杆菌属;　产碱杆菌属;　敏感性;　头孢哌酮 舒巴坦; 中图分类号:R378 文献标识码:A An ti m icrob i a l susceptib il ity of uncomm on nonferm en ti ng Gram-nega tive bac ill i W u Q uan2hu i1,　Zhuo Chao2,　Su D an2hong2,　Chen Dong2m ei1　and　Yuan J in2p ing2 (1T he F irst A ffiliated Ho sp ital,Sun Yat2Sen U n iversity,　Guangzhou510080; 2Guangzhou In stitu te of R esp irato ry D iseases,　Guangzhou510120) ABSTRACT　Objective　To investigate the an ti m icrob ial su scep tib ility of uncomm on nonferm en ting Gram2negative bacilli such as B u rkhold eri spp.,Ch ry seobacterium spp.and A lca lig enes spp.from a ho sp ital in Guangzhou from2004to2006.　M ethods　D isc diffu si on test(KB m ethods)w as em p loyed to study the an ti m icrob ial su scep tib ility.W HON ET5.4w as app lied fo r date analysis.　Results　In tw o years of study from2004to2006,118strain s w ere iso lated firstly from each p atien t,including44strain s of B u rkhold eria spp. (41strain s of B u rkhold eria cep acia),41strain s of Ch ry seobacterium spp.(17C.m en ing osep ticum and23 C.ind olog enes),27strain s of A lca lig enes spp.(13A.f aeca ilis and12A.xy losox id ans),9616%of strain s w ere iso lated from sp u tum.T he su scep tib ility rates of B u rkhold eria spp.to tri m ethop ri m su lfam ethoxazo le (S M Z TM P),p i p eracillin tazobactam,levofloxacin,cefep i m e,ceftazidi m e and cefop erazone su lbactam w ere 8712%,8710%,8513%,8310%,7816%and7813%,resp ectively.S M Z TM P w as the m o st active agen t again st Ch ry seobacterium spp.w ith the su scep tib le rates of8715%.Cefop erazone su lbactam and m erop enem had the m o st activity again st A lca lig enes spp.w ith su scep tib le rates8416%and7718%,resp ectively. Conclusion　Cefop erazone su lbactam w as the better agen t again st the th ree sp ecies and these sp ecies w ere no t distingu ishal by rou tine labo rato ry test,oven so w ith oxydase2negative non2ferm en ting Gram2negatine bactilli w h ich m ay be one of reason s cau sing the differen t su scep tib le rates am ong vari ou s labo rato ries. KEY WORD S　B u rkhold eri spp.;　Ch ry seobacterium spp.;　A lca lig enes spp.;　A n ti m icrob ial su scep ti2 b ility;　Cefop erazone su lbactam 收稿日期:2006210213 修回日期:2007202228 基金项目:广州市科技局重点攻关项目(编号:20006Z12E0141)。 作者简介:邬全会,男,生于1959年,主管技师。 3通讯作者,Chao-sheep@https://www.sodocs.net/doc/d38409262.html,

实验11-抗生素的抑菌试验

实验十一抗生素的抑菌试验 一目的要求 1、掌握纸片法测定抗生素抗菌作用的基本方法 2、了解抗生素的抗菌谱 二实验原理 抗生素是某些植物与微生物生长到对数期前后所产生的次生代谢产物，其在低浓度下可其它微生物生长具抑制作用或杀死作用的物质。抗生素对敏感微生物的作用机理分为抑制细胞壁的形成、破坏细胞膜的功能、干扰蛋白质合成及阻碍核酸的合成。 由于不同微生物对不同抗生素的敏感性不一样，抗生素的作用对象就有一定的范围，这种作用范围成为抗生素的抗菌谱，作用对象广的抗生素称为广谱抗生素，作用对象少的抗生素称为窄谱抗生素。而且当某种抗生素长时间用于敏感微生物生长后，即使同一种菌的不同菌株对不同药物的敏感性也常发生改变，甚至出现耐药菌株，亦即产生抗性菌株，则抗生素将失去对抗性菌株生长的抵制，只以采用新的抗生素才可能控制抗性菌株的生长与繁殖，因而不断开发新的抗生素是保健人类身体健康的重要工作。新抗生素产生菌的分离筛选应通过拮抗菌发酵，然后以发酵产物进行抗菌活性实验，根据实验结果而获得产新抗生素的菌株。微生物代谢产物的抗菌活性常以管碟法与纸法进行检测，根据透明抑菌圈的有无与大小作为依据。 三实验器材 1、菌种枯草杆菌、大肠杆菌。 2、培养基MH（Mueller-Hintion）琼脂。 3、试剂青霉素、链霉素。 四方法步骤 1、无菌滤纸片以孔径6mm打孔器将滤纸打为圆形纸片，放入培养皿内，121℃蒸汽湿热灭菌，100℃烘干2h。 2、抗生素溶液制备将取适量青霉素、链霉素，以无菌水溶解。 3、指示菌悬浮液的制备枯草杆菌、大肠杆菌斜面菌种分别以无菌水洗下菌苔细胞，到入无菌三角瓶内，制备适宜浓度的细胞悬浮液。 4、混菌平板制备取批示菌细胞悬浮液1mL加入无菌培养皿内，再加入温度为43~45℃的PDA培养基或牛肉膏蛋白胨琼脂培养基20mL，立即振荡使细胞与培养基混合均匀，静置冷凝。 5、平板加抗生素溶液将滤纸片在抗生素溶液中充分浸泡2min以上，然后将纸片放于混菌平板上，每皿呈三角形放3点，每点贴放纸片2张。 6、培养与观察将平板放于33℃左右的温度培养，每24h测量一次透明抑菌圈直径，共测量3次。

抗菌药物敏感性分析

一概况 2011年第二季度我院送检的细菌培养标本共766份，阳性203例（阳性率26.5%）阳性率较一季度略有上升；其中血培养225例，阳性34例（阳性率15.1%）；其他培养541份，阳性193例（阳性率35.7%）。阳性率排在前几位的细菌依次是：1）肠杆菌科细菌共57例，其中：大肠埃希菌25例，肺炎克雷伯菌12例，沙雷菌7例，阴沟肠杆菌5例，奇异变形杆菌6例，产气肠杆菌2例； 2）非发酵菌55例，其中铜绿假单胞菌26例，鲍氏不动杆菌18例，洋葱伯克霍尔德菌11例；3）真菌47例（其中白色念珠菌37例，光滑8例，克柔2例；4）葡萄球菌属34例（其中金葡8例，凝固酶阴性葡萄球菌26例）。 二本季度常见细菌抗生素敏感性分析 表1葡萄球菌属（共32例）抗生素敏感性分析 抗生素 金葡菌（n=8）凝固酶阴性葡萄球菌（n=24）敏感株数敏感率% 敏感株数敏感率% PEN 青霉素0 0 1 4.2 TSU 复方新诺明7 87.5 16 66.7 GEN 庆大霉素 4 50 11 45.8 ERY 红霉素0 0 4 16.7 CLI 克林霉素 3 37.5 10 41.7 TET 四环素 5 62.5 17 70.8 MIN 米诺环素7 87.5 21 87.5 VAN 万古霉素8 100 24 100 RFA 利福平 5 62.5 20 83.3 NOR 诺氟沙星 3 37.5 10 41.7 LVX 左氧氟沙星 5 62.5 11 45.8 FUR 呋喃妥因8 100 24 100 QDA 喹奴普汀达福普汀8 100 23 95.8 本季度检出的革兰染色阳性球菌未发现万古霉素耐药株；MRSA的检出率为62.5%（5/8），MRCNS的检出率为75%（18/24）。由表1可见，二季度金葡菌和凝固酶阴性葡萄球菌的药物敏感性相似，葡萄球菌属对万古霉素、呋喃妥因、喹奴普汀达福普汀、米诺环素及复方新诺明的敏感率较高，而对青霉素、庆大霉素、红霉素、克林霉素及诺氟沙星的耐药性较为普遍，说明该几种药物已不适宜用于葡萄球菌引起的感染。

纸片法抗菌药物敏感实验操作标准

纸片法抗菌药物敏感实验操作标准 4.３标准比浊管 用硫酸钡比浊管(０、5麦氏比浊标准),标定接种菌液浓度。比浊管制备方 法如下:(１)0、048mｏl/L BaＣｌ 2,(１、175% w／v BaＣｌ 2 ·2H 2 O)0、５ml, 加到99、5ml的０、18 mol/Ｌ(0.3６N)H 2SＯ 4 (1％v/ｖ)溶液中,制成比浊管;(2) 用光径为1cｍ的分光光度计测定光吸收来标定比浊管。0、5麦氏标准比浊管在６25nｍ波长的吸收光度应为0、0８-0、1;(3)选管径与制备菌液试管相同的螺口试管,每管分装4-6ml;(4)将试管帽拧紧,放室温暗处保存;(5)用前,将比浊管在旋转振荡器上混匀。如出现大颗粒,应更换;(6)每个月更换比浊管或复检比浊管的浊度。 ５操作步骤 5、1 制备接种菌液 5、1、１增菌法步骤如下:(1)选琼脂平板上形态相同的菌落至少4-5个,用接种环挑其顶部,移至4－5ml肉汤或大豆酪蛋白消化液中;(２)置35℃培养至菌液浓度达到或超过比浊管浓度(一般需2－6小时),浓度约1－２×10８CFU/ml;(３)用生理盐水或肉汤校正菌液浓度,与比浊管相同。可用光电比浊。目测比浊须在适当光照下以黑色线条为反衬。 5、１、2 直接菌悬液法步骤如下:(1)做常规药敏试验,可直接用过夜培养的菌落(必须用无选择性培养基平板,如普通琼脂培养基)在盐水或肉汤中制备接种菌液。菌液浓度调至0、5麦氏管;(2)此法适用于在肉汤培养基中生长不好的细菌如嗜血杆菌、淋病奈瑟氏菌与链球菌及葡萄球菌的甲氧苯青霉素或苯唑青霉素的耐药试验;(３)当用此法做复方磺胺药的试验时,从平板上直接挑菌落时会携带相当量的拮抗剂,造成敏感菌株的抑菌环内出现轻微的生长菌膜。 ５.2 接种平板步骤如下:(1)校正的菌液须在15分钟内使用。用一无菌棉试子蘸取菌液并在上端管壁旋转挤压几次,去掉过多的菌液;(2)用试子涂布整个琼脂平板表面,反复涂布几次,每次将平皿旋转60度,保证涂布均匀。(3)将平皿盖打开3-5分钟,使培养基表面的水份吸收掉。然后贴药敏纸片;(4)注意:避免用过浓的菌液,禁用未经稀释菌或其她不标准菌液接种平板。 5、３贴纸片 (1)接种平板后,贴上药敏纸片。用镊子或针尖压一下纸片使其与培养基表面贴牢。纸片要贴得均匀,纸片与纸片中心距离不得小于24mm。原则上,直径150ｍm得平板贴１2张纸片,直径100mm平板贴5张纸片。纸片贴后不应再移动,因为有些药物会立即扩散;(2)贴上纸片15分钟内,须把平板倒放在35℃恒温箱中。因为抑菌环解释标准就是在普通环境中标定的,所以除嗜血杆菌与淋病 奈瑟氏菌外,平板不可放在高CO ２的环境中。ＣO 2 与某些因素作用可使抑菌环增 大。 5、4 读取结果 (１)经16-18小时培养后,观察结果。菌液浓度适合且涂得好,抑菌环规则,细菌呈融合生长。如果出现单个菌落,说明接种量小,需重做试验,测量抑菌环直径须包含纸片直径:手持平皿从背面目测检查每块平板,借反射光(黑色无放光背景),用卡尺、普通尺或特制的模板量取抑菌环直径,单位为毫米。培养基中如果加了血液,须打开平皿盖,借反射光,从正面量抑菌环。如果就是葡萄球菌或肠球菌,须培养２4小时后,经投射光检查苯唑青霉素与万古霉素的抑菌

常见细菌药物敏感性试验报告规范

常见细菌药物敏感性试验报告规范中国专家共识 微生物学检验为感染性疾病的诊断、治疗和控制提供了必不可少的证据。因此微生物学检验报告是临床和实验室等多方共同关注的焦点。国内临床微生物学检验发展较为薄弱，报告存在着种种不足。同时，临床与实验室的沟通存在一定不足，密切协作非常必要。基于实际存在的问题，为规范国内临床微生物学检验药物敏感性试验报告，加强临床与实验室合作，发挥检验医师作用，特制订本共识，以期指导相关报告的规范化，减少错误，增加专业信息，提高服务质量，为临床医学诊、治、控提供坚实的科学依据。本共识限于常见细菌的药物敏感性报告。 一、药物敏感性试验的意义和基本原则 (一)意义 药物敏感性试验可以检测细菌对于抗细菌药物的敏感性，为临床用药、新药研究、监测耐药变迁、发现耐药机制等提供客观证据[1]。对于经验治疗，依据一方面来自医生自身的经验，一方面是实验室长期不断提供的数据积累。临床需要考虑不同感染的病原谱和常见病原对不同药物的敏感性；对于靶向治疗，特定分离株的具体药敏试验结果可以用于判断经验治疗选药合理性、经验治疗效果分析、调整治疗选药依据等。 (二)基本原则 1．药敏试验检测获得性耐药，不必测试天然耐药： 天然耐药是细菌菌种固有的特征，耐药基因一般位于染色体，可以长期稳定遗传，表现为对某类或某种药物的天然耐药[2]。天然耐药信息一般由基础医学和临床文献提供。部分天然耐药，体外试验条件下可能无法检测出来，因而导致假敏感，如果报告将成为极重要错误，严重误导临床。常见菌种对各类药物的天然耐药见文献[3,4]。实验室全体人员应熟知这些信息，可将其发给临床学习和参考。 2．药敏试验测试的前提条件[5]： 实验室应具备相应检测的人员能力、客观条件、结果解释依据。标本处理、菌株分离鉴定、药敏试验操作等环节规范、标准、结果可信；具备对结果的解释能力，能够提供临床会诊服务。临床常规工作，分离株(可能)有临床意义而非定植或污染时，才可进行药敏试验。错误示例：来自痰标本的溶血葡萄球菌，未作标本质量评估和半定量培养，进行药敏试验；来自粪便标本肠球菌属进行药敏试验等。 3．测试结果应准确： 实验室应遵照C L S I文件或相关规范建立本医院药敏试验的质量管理体系。质控菌株、频率、质控范围符合相关要求；定期参加实验室室间比对项目。建议保留菌株，以便复核。 二、具体的专业要求 (一)标本类型 临床微生物学的一大特点是标本种类繁多，而不同药物在这些部位的分布不同。标本的规范采集、质量保证、立即运送和有效保藏有赖于临床、实验室以及相关各方的密切合作。

细菌对抗菌药物敏感试验

怀化医专《微生物学检验》教案编号：10

细菌对抗菌药物敏感试验 药敏试验(antimicrobial susceptibility,AST) （一）概念：在体外检测药物抑制或杀死细菌能力的试验。 （二）检测意义： 1、疾病的治疗：指导用药。 2、耐药菌检测和流行病学调查。 3、评价新药抗菌作用。 4、某些菌种的鉴定。 第一节临床常用的抗菌药物 抗菌药物：是指具有杀菌或抑菌活性的抗生素和化学合成药物。 一、青霉素类抗生素： 青霉素种类抗菌活性 1、天然青霉素不产青霉素酶的G+G-球菌、普雷沃菌等。 青霉素G、青霉素V 2、耐青霉素酶青霉素产青霉素酶的G+G-球菌 甲氧西林、奈夫西林、苯唑西林等 3、广谱青霉素青霉素G敏感细菌、大部分大肠埃希菌、 氨苄西林、阿莫西林奇异变形杆菌、流感嗜血杆菌等G-菌 替卡西林、羧苄西林、氨苄西林无效的G-菌，产β-内酰胺酶 美洛西林、派拉西林克雷伯菌、铜绿假单胞菌、肠杆菌、厌氧菌 二、头孢菌素类抗生素： 1、第一代头孢菌素 （头孢噻啶、头孢噻吩、头孢氨苄、头孢唑啉、头孢羟氨苄等） 作用：对G+菌作用强，如金葡菌、链球菌等。 2、第二代头孢菌素 （头孢羟唑、头孢呋辛、头孢克洛、头孢尼西、头孢雷特等） 作用：产青β-内酰胺酶G-菌有作用，如肠杆菌科细菌，铜绿假单胞菌等。 3、第三代头孢菌素 注射用头孢噻肟、头孢曲松、头孢他啶、头孢派酮：对产青β-内酰胺酶G-菌有很大

抗菌活性。 口服用头孢克肟、头孢布坦等：对肠球菌、铜绿假单胞菌及不动杆菌无用。 4、第四代头孢菌素（头孢匹罗、头孢匹美） 作用：对肠杆菌科细菌和铜绿假单胞菌作用强。 三、其它β-内酰胺类抗生素： 1、单环β-内酰胺类抗生素（氨曲南、卡芦莫南） 对G-菌作用强 2、头霉素类：对G+菌、厌氧菌作用较好 氧头孢烯类抗生素：抗菌谱广，对产β-内酰胺酶G-菌作用强，对产酶的金葡菌有效3、碳青酶烯类抗生素（亚胺培南、米洛培南等） 广谱（最广），抗菌活力强 4、β-内酰胺酶抑制剂（克拉维酸、舒巴坦、他唑巴坦） 与β-内酰胺类抗生素联用能增强后者的抗菌活性。 四、氨基糖苷类抗生素： 链霉素、卡那霉素、妥布霉素、庆大霉素、奈替米星、阿米卡星等 作用：对需氧G-杆菌有强大抗菌活性 对沙雷菌属、气单胞菌属、产碱杆菌、不动杆菌属、分枝杆菌属也有一定抗菌活性。但对G-球菌效果差。 五、喹诺酮类抗生素： 第一代：（新恶酸等）窄谱抗生素（G-） 第二代：（环丙沙星、氧氟沙星、诺氟沙星等）对G+G-菌均有作用。 第三代：（斯帕沙星、妥舒沙星、左氟沙星等）超广谱抗生素。 六、大环内酯类抗生素： 红霉素、麦迪霉素、乙酰螺旋霉素等 作用：和青霉素相似，主要是G+菌、厌氧菌。 新一代：克拉霉素、罗红霉素、地红霉素、氟红霉素、阿齐霉素等。 七、四环素、氯霉素、林可酰胺类抗生素： 八、糖肽类抗生素 九、磺胺类药物及其增效剂

微生物检验实验室药物敏感性试验标准操作规程

微生物检验实验室药物敏感性试验标准操作规程1．目的 规范药物敏感性试验标准操作规程，确保药敏结果准确。 2．原理 将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种待检菌的琼脂平板上，纸片中所含的药物吸取琼脂中的水分溶解后会不断的向纸片周围区域扩散，形成递减的浓度梯度，在纸片周围抑菌浓度范围内待检菌的生长被抑制，从而产生透明的抑菌圈。抑菌圈的大小反映检测菌对测定药物的敏感程度，并与该待检菌的最低抑菌浓度（MIC）呈负相关，即抑菌圈愈大，MIC愈小。 3．试剂 M-H培养基、无菌生理盐水、药敏纸片、无菌棉签、35℃孵育箱、标准比浊管或比浊仪。 4．质控 4.1 常用细菌药敏质控标准菌株参见CLSI规定。 4.2 质控菌株每日随临床标本一起进行药敏试验，测定质 控菌株的抑菌环。质控菌株的抑菌环在允许范围之内，说明结果可信。 4.3 质控的频率由于纸片法药敏试验是很稳定的，在不 失控的时候，可以每周作1～2次质控菌株的测定。如果发现有失控的情况，就必须每日做1次，寻找失控的原因

并予以纠正。如果连续30日失控<3次的，可以恢复每周1次。 5.操作步骤 5.1 挑取4～5个纯培养菌落，接种于3～5ml M-H肉汤（0.5麦氏单位）中，经35℃培养6～8h。 5.2 用无菌生理盐水或M-H肉汤校正菌液浊度，使其与标准比浊管的浓度相同。 5.3 用无菌棉拭蘸取校正过的菌液，在试管壁上挤压几次，压去多余的菌液，涂布整个M-H平板表面，再重复两次，每次旋转平板60°，使整个平板涂布均匀，最后用棉拭涂布平板四周缘一圈。 5.4 涂布菌液的平板于室温中干燥3～5分钟后，用纸片分配器或无菌镊子取药敏纸片，贴于平板表面，并用镊尖轻压一下纸片，使其贴平。每张纸片的间距不小于24mm，纸片的中心距平板的边缘不小于15mm，直径90mm的平板宜贴6张药敏纸片。 5.5 将贴好纸片的平板置35℃孵育18～24小时后，用卡尺量取抑菌圈直径。个别菌孵育温度，时间及条件应按照CLSI规定。 6.结果判断 7.根据CLSI M100最新标准将所测抑菌圈的大小，报告为敏感（S）、中介/中敏（I）或耐药（R）。

实验六抗菌药物的体外药效试验

实验六、抗菌药物的体外药效试验 （药敏试验） 各种病原菌对抗菌药物的敏感性不同，同种细菌的不同菌株对同一药物的敏感性有差异，检测细菌对抗菌药物的敏感性，可筛选最有疗效的药物，用于临床对控制细菌性传染病的流行至关重要。此外，通过药物敏感试验可为新抗菌药物的筛选提供依据。药敏试验的方法很多，普遍使用的有滤纸片扩散试验 （Kirby-BaueerDiceDiffusion）；最低抑菌浓度试验（MinimumInhibitoryConcentration,MIC）和最低杀菌浓度试验（MinimumBactericidalConcentration,MBC）。 ［目的要求］ 1、熟悉体外抗菌试验操作技术。 2、掌握药物抗菌能力体外测定的常用方法及其用途。 ［实验原理］ 常用的体外测定药物抑菌能力的方法有两大类：琼脂渗透法与浓度系列稀释法。琼脂渗透法时利用药物能够渗透至琼脂培养基的性能，将实验菌混入琼脂培养基后倾注成平板；或将试验菌均匀涂于琼脂平板的表面，然后用不同的方法将药物置于已含试验菌的琼脂平板上。根据加药的操作方法不同而有滤纸片法、打洞法、管碟法及挖沟法等。经适宜温度培养后观察药物的抑菌能力。浓度系列稀释法时把药物稀释成不同的系列浓度，混入培养基内，加入一定量的试验菌，经适宜温度培养后观察结果，求得药物的最低抑菌浓度（MIC）。 1、细菌：所用细菌应包括主要致病菌。革兰氏阳性球菌包括金黄色葡萄球菌(产酶与不产酶菌株)、表皮葡萄球菌，链球菌、肠球菌等。革兰氏阴性球菌如淋球菌等。革兰氏阴性杆菌包括流感杆菌、肠杆菌科细菌8～10种，绿脓杆菌与其它假单孢菌属及不动杆菌属等，厌氧菌包括脆弱类杆菌、消化球菌和消化链球菌等。对临床应用有代表性的菌株数量，创新药应不小于1000株。其它类新药根据新药抗菌谱宽窄可作200-500株。试验时应包括有国际公认质控菌株(如金葡菌ATCC25925，大肠杆菌ATCC25922和绿脓杆菌ATCC27853等)。

抗菌药物敏感试验、细菌耐药性检测题库1-1-6

抗菌药物敏感试验、细菌耐药性检测题库 1-1-6

问题： [单选,A2型题,A1A2型题]下列关于K-B纸片扩散法操作的描述错误的是（） A.各纸片中心距离不小于24mm B.纸片距平板内缘不应大于15mm C.直径90mm的平皿可贴6张纸片 D.纸片贴牢后避免移动 E.培养16~18小时后读结果 本题要点为纸片扩散法，其药物纸片各中心应相距24mm，纸片距平板内缘15mm，35℃培养16~18小时后阅读结果。

问题： [单选,A2型题,A1A2型题]培养基的pH过低时，其抑菌圈可扩大的是（） A.米诺环素 B.庆大霉素 C.红霉素 D.诺氟沙星 E.头孢菌素 本题要点为纸片扩散法的培养基要求，其pH值为7.2~7.4，过高或过低的pH值会影响药物效能。碱性可扩大氨基糖苷类药物的抑菌圈，酸性可扩大四环素类药物的抑菌圈，米诺环素为四环素类抗菌药物。

辽宁11选5 https://www.sodocs.net/doc/d38409262.html, 问题： [单选,A2型题,A1A2型题]ESBL菌株感染者治疗应选用（） A.青霉素 B.氨苄青霉素 C.头孢氨苄 D.亚胺培南-西司他丁 E.氨曲南 目前认为亚胺培南是治疗产ESBL菌感染的最佳选择，产ESBL菌重症感染的患者应首选亚胺培南治疗。

问题： [单选,A2型题,A1A2型题]可同时做测定某种药物对多株菌的MIC的方法为（） A.纸片琼脂扩散法 B.肉汤稀释法 C.琼脂稀释法 D.E试验 E.直接药敏试验 琼脂稀释法是将不同剂量的抗菌药物，加入融化并冷至50℃左右的定量MH琼脂中，制成含不同递减浓度抗菌药物的平板，接种受试菌，孵育后观察细菌生长情况，以抑制细菌生长的琼脂平板所含最低药物浓度为MIC。本法优点是可在一个平板上同时做多株菌MIC测定，结果可靠，易发现污染菌；缺点是制备含药琼脂平板费时费力。

抗菌药物敏感性试验及细节耐药检测

抗菌药物敏感性试验与细节耐药性监测 来源：检验医学在线2009-4-15 南网编辑2010-7-6 一、需氧菌及兼性厌氧菌的药物敏感试验 (一)纸片琼脂扩散法 纸片琼脂扩散法又称Kirby-Bauer试验，是操作最简易、使用最广泛的抗菌药物敏感性试验。 1．试验原理将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上。纸片中所含的药物吸收琼脂中的水分溶解后不断向纸片周围区域扩散形成递减的梯度浓度。在纸片周围抑菌浓度范围内测试菌的生长被抑制，从而形成透明的抑菌圈。抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度，并与该药对测试菌的最低抑菌浓度(MIC)呈负相关关系，即抑菌圈越大，MIC越小。 2．培养基和抗菌药物纸片 (1)培养基：水解酪蛋白(Mueller-Hin-ton，MH)培养基是CLSI/NCCLS采用的兼性厌氧菌和需氧菌药敏试验标准培养基，pH值为7.2～7.4，对那些营养要求高的细菌如流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌、链球菌等需加入补充物质。琼脂厚度为4mm。配制琼脂平板当天使用或置塑料密封袋中4℃保存，使用前应将平板置35℃孵育箱孵育，使其表面干燥。 (2)抗菌药物纸片：选择直径为6.35mm，吸水量为20ul的专用药敏纸片用逐片加样或浸泡方法使每片含量达到规定所示。含药纸片密封储存2～8℃或-20℃无霜冷冻箱内保存，β-内酰胺类药敏纸片应冷冻储存，且不超过l周。使用前将储存容器移至室温平衡l～2h，避免开启储存容器时产生冷凝水。 3．细菌接种细菌接种采用直接菌落或细菌液体生长方法。用0.5麦氏比浊标准的菌液浓度。校正浓度后的菌液应在15min内接种完毕。接种步骤如下：①用无菌棉拭子蘸取菌液，在管内壁将多余菌液旋转挤去后，在琼脂表面均匀涂片接种3次，每次旋转60°，最后沿平板内缘涂抹1周；②平板置室温下干燥3～5min，用纸片分离器或无菌镊将含药纸片紧贴于琼脂表面；③置35℃孵育箱孵育16～18h后阅读结果，对甲氧西林和万古霉素药敏感试验结果应孵育24h。 4．结果判断和报告用精确度为1mm的游标卡尺量取抑菌圈直径(抑菌圈的边缘应是无明显细菌生长的区域)，当葡萄球菌对苯唑西林的药敏试验或肠球菌对万古霉素的敏感试验，围绕纸片周围只要有极少细菌生长提示为耐药。对另外一些菌，在抑菌圈内散在菌落生长提示可能是混合培养，必须再分离鉴定及试验，也可能提示为高频突变株。变形杆菌迁徙生长使抑菌圈内生成的薄层菌可忽略不计。由于培养基内抗药成分使其对甲氧苄啶引起的轻微细菌生长，生长层小于20％可忽略不计。根据CLSI/NCCLS标准，对量取的抑菌圈直径判断病原菌对该药物的敏感性形式(敏感/中度敏感/中介、耐药)。

微生物检验实验室药物敏感性试验标准操作规程

微生物检验实验室药物敏感性试验标准操作规程 1．目的 规范药物敏感性试验标准操作规程，确保药敏结果准确。2．原理 将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种待检菌的琼脂平板上，纸片中所含的药物吸取琼脂中的水分溶解后会不断的向纸片周围区域扩散，形成递减的浓度梯度，在纸片周围抑菌浓度范围内待检菌的生长被抑制，从而产生透明的抑菌圈。抑菌圈的大小反映检测菌对测定药物的敏感程度，并与该待检菌的最低抑菌浓度（MIC）呈负相关，即抑菌圈愈大，MIC 愈小。 3．试剂 M-H培养基、无菌生理盐水、药敏纸片、无菌棉签、35℃孵育箱、标准比浊管或比浊仪。 4．质控 4.1 常用细菌药敏质控标准菌株参见CLSI规定。 4.2 质控菌株每日随临床标本一起进行药敏试验，测定质控菌株的抑菌环。质控菌株的抑菌环在允许范围之内，说明结果可信。 4.3 质控的频率由于纸片法药敏试验是很稳定的，在不失控的时候，可以每周作1～2次质控菌株的测定。如果次，

寻找失控的原因1发现有失控的情况，就必须每日做 并予以纠正。如果连续30日失控<3次的，可以恢复每周1次。 5.操作步骤 5.1 挑取4～5个纯培养菌落，接种于3～5ml M-H肉汤（0.5麦氏单位）中，经35℃培养6～8h。 5.2 用无菌生理盐水或M-H肉汤校正菌液浊度，使其与标 准比浊管的浓度相同。 5.3 用无菌棉拭蘸取校正过的菌液，在试管壁上挤压几次，压去多余的菌液，涂布整个M-H平板表面，再重复两次，每次旋转平板60°，使整个平板涂布均匀，最后用棉拭涂布平板四周缘一圈。 5.4 涂布菌液的平板于室温中干燥3～5分钟后，用纸片分 配器或无菌镊子取药敏纸片，贴于平板表面，并用镊尖轻压一下纸片，使其贴平。每张纸片的间距不小于24mm，纸片 的中心距平板的边缘不小于15mm，直径90mm的平板宜贴 6张药敏纸片。 5.5 将贴好纸片的平板置35℃孵育18～24小时后，用卡尺量取抑菌圈直径。个别菌孵育温度，时间及条件应按照CLSI 规定。 6.结果判断 7.根据CLSI M100最新标准将所测抑菌圈的大小，报告为。）

抗菌药物敏感试验题库1-2-10

抗菌药物敏感试验题 库1-2-10

问题： [单选,A2型题,A1A2型题]下列可使K-B法抑制圈直径扩大的因素是（）. A.测量时未经过纸片中心 B.接种细菌浓度为1麦氏比浊 C.孵育时间36小时 D.药敏纸片失效 E.培养基厚度为3mm 纸片扩散法若菌悬液浓度若超过0.5麦氏浊度，若药敏纸片效力下降、测量时不经过纸片中心、细菌过度生长均可使抑菌圈变小，若MH培养基厚度不够4mm，则细菌生长不良使抑菌圈增大。

问题： [单选,A2型题,A1A2型题]耐甲氧西林表皮葡萄球菌是（）. A.MRS B.MRSA C.MRSE D.MRCNS E.SPA 耐甲氧西林表皮葡萄球菌（methecillinresistancestaphylococcusepidermidis），缩写即MRSE。

问题： [单选,A2型题,A1A2型题]容易引起过敏性休克的药物是（）. A.SMZTMP B.磷霉素 C.克林霉素 D.加替沙星 E.青霉素 青霉素或其降解产物、青霉素制剂中污染物所致过敏症。青霉素衍生物（如青霉酸）与蛋白质结合，形成青霉噻唑酰基衍生物，可作为半抗原，主要引起Ⅰ型超敏反应。 (辽宁11选5 https://www.sodocs.net/doc/d38409262.html,)

问题： [单选,A2型题,A1A2型题]下列既是ESBLs的主要产生菌，又是泌尿系统感染主要病原菌的是（）. A.大肠埃细菌 B.肺炎克雷伯菌 C.阴沟肠杆菌 D.铜绿假单胞菌 E.伤寒沙门菌 大肠埃希菌既是ESBLs的主要产生菌，又是泌尿系统感染的主要病原菌。

问题： [单选,A2型题,A1A2型题]K-B法试验中，头孢他定的抑菌环直径为20mm，头孢噻肟的抑菌环直径为22mm，正确判断是（）. A.报告头孢他定和头孢噻肟都敏感 B.报告头孢他定耐药，头孢嚷肟敏感 C.可排除该菌产生ESBLs D.怀疑该菌产生ESBLs E.可确认该菌为ESBLs菌株 筛选产ESBL菌时对头孢泊肟、头孢他啶抑菌圈≤22mm或氨曲南、头孢噻肟≤27mm时高度怀凝，需进行ESBL确证实验。

抗菌药物敏感性试验流程

抗菌药物敏感性试验流程 1. 目的：抗菌药物敏感性试验（药敏试验）的主要目的是检出细菌的耐药性，预测抗菌药物的临床治疗效果，并为临床医生针对某一特定的临床感染问题选用药物提供依据。 2. 适用范围 微生物实验室所有标本，环境。 3. 职责范围 微生物实验室各工作人员。 4. 药敏试验的一般规则 4.1 对任何感染的可疑病原菌，若不能从该菌的种属特征可靠地推知其对抗菌药物的敏感性，就需要进行药敏试验。如果感染是由公认的对某一高效药物敏感的微生物引起，常规不需要进行药敏试验，见附录6[技术说明（1）]。 4.2 同一患者连续分离培养出的同一种细菌，若最初药敏试验显示为敏感株，随后临床出现可疑的耐药表现，需重复进行药敏试验，见附录6 [技术说明（2）]。 4.3 进行细菌耐药性调查和抗生素疗效评估时需进行药敏试验。 4.4 除临床急症细菌学检查标本，并经直接涂片染色证实为单一致病菌外，一般不主张用临床标本直接做药敏试验。直接标本做药敏试验后，必须按标准方法重做一次。 4.5 当感染的性质不清楚、标本内含数种混合生长的细菌或正常菌群，而且这些细菌与感染的关系很小时，通常不必做药敏试验。 5. 常规药敏试验药物选择原则 5.1 选择适合的药物进行药敏试验一般应由临床微生物检验医师与感染科医师、药剂科、医院药事委员会和医院感染委员会成员共同协商作出决定。在选择抗菌药物时应考虑以下因素：

5.1.1 一般情况下，药敏试验所选用的抗菌药物应包含于本单位的处方手册中。 5.1.2 临床微生物实验室所服务的医疗机构的类型、规模及患者的构成不同，其所分离细菌的耐药谱不同，药敏试验的药物选择不同。 5.1.3 菌种类型不同，药敏试验的药物选择不同。 5.2 我国目前主要依照美国国家临床实验室标准化委员会（NCCLS）/临床实验室标准化研究所（CLSI）所制定的药敏试验执行标准作为选药指南（见附录1～2）。该指南针对每一菌群所推荐的药物都具有确切的临床疗效，其体外试验结果也可以接受。在附录1～2表内小格中的列出个小框中列出的一群类似药物，由于它们的解释结果和临床效力都很相似，因此不必每个都进行试验。另外，用“或”字表示的一群相关的药物，其抗菌谱和结果解释几乎完全相同，其交叉耐药性和交叉敏感性也几乎完全相同。因此，通常每个小框(组或相关的群)中只选择一种药物进行试验。 5.3 NCCLS文件每年都有补充和更新，为了保证药敏试验的正确性和对临床的指导性，进行药敏试验时应依照最新版本（本规范中提供的是2005年修订的第十五版）。 6. 药敏试验方法 6.1 纸片扩散法 6.1.1 抗菌药物纸片：一般应购买合格的商品化的药敏纸片进行试验，药敏纸片的贮存见附录6[技术说明（3）]。 6.1.2 琼脂培养基非苛养菌的常规药敏试验使用MH（Mueller-Hinton）琼脂，其制备、贮存和使用方法见附录6[技术说明（4）]。 6.1.3 菌悬液的浊度标准使用0.5麦氏（McFarland）标准管，见附录6[技术说明（5）]。 6.1.4 纸片扩散法的操作 6.1.4.1 接种物的制备 6.1.4.1.1 生长法：从琼脂平板上选取至少3～5个形态特征一致的菌落，用接种环接触每个菌落顶部后将细菌转移到含4～5 ml适宜的肉汤培养管（如胰酶消化大豆肉汤）中，将此肉汤培养物置35℃孵育至其浊度等于或超过0.5麦氏标准（通常需2～6小时）。用无菌盐水或肉汤将旺盛生长的肉汤培养基的浊度调整到相当于0.5麦氏标准，细菌数约为1～2×108 CFU/ ml。