染色体制片方法

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(六)植物细胞有丝分裂

一、实验目的

(1) 学习和掌握植物根尖细胞压片技术。

(2) 观察植物细胞有丝分裂过程中染色体的形态特征和动态变化。

二、实验原理

有丝分裂是植物细胞增殖的主要方式，在有丝分裂过程中，细胞核内的染色体能准确地复制，并能有规律地均匀分配到两个子细胞中去，使子细胞遗传组成与母细胞完全一样。从而可推断生物性状的遗传与染色体的准确复制和均等分配有关，支配生物性状的遗传物质主要存在于细胞核内的染色体上。

高等植物有丝分裂主要发生在根尖、茎生长点及幼叶等部位的分生组织，根尖取材容易，操作和鉴定方便。通过对根尖的固定、染色和压片，可在显微镜下观察到大量处于有丝分裂各个时期的细胞和染色体，看到染色体的变化特点和染色体的形态特征，进行染色体计数。为了获得更多的中期染色体图像，可以采用药物处理或冷冻处理的方法，阻止纺锤体的形成，使细胞分裂停止在中期，同时还可以使染色体缩短，易于分散，便于观察研究。另外，通过对细胞组织进行酸性水解或酸处理除去细胞之间的果胶层，并使细胞软化，便于细胞彼此分开，有利于压片和染色。

三、实验材料

小麦( Triticum Spp ．) 、玉米( Zea mays ) 、大蒜( Aillumsativum ) 、洋葱(Aillum cepa ) 、蚕豆(Vicia faba ) 等。

四、实验器具和药品

1 ．器具冰箱，恒温箱，显微镜，水浴锅、分析天平、扭力天平、电炉、温度计、剪刀、镊子、刀片、量筒、量杯、三角瓶、烧杯、漏斗、培养皿、酒精灯、滴瓶、载玻片、盖玻片、滤纸、标签、胶水等。

2 ．药品无水酒精、95 ％酒精、70 ％酒精、45 ％酒精、0.5 ％醋酸洋红、

0.5 ％苏木精液、4 ％铁明矾液、苯酚，亚硫酸、二甲苯、秋水仙素、对二氯苯、8- 羟基喹啉、α－溴萘、lmol/L 盐酸、25 ％纤维素酶和2.5 ％果胶酶混合液、加拿大树胶等。

五、实验步骤

1 ．培养

(1) 大蒜和洋葱根尖：将大蒜或洋葱置于盛清水的小烧杯口上，使根茎部与水接触，然后转移到25 -28 ℃的条件下培养．待根尖长到2cm 左右时，在上午9 －10 时剪去根尖约lcm 备用。

(2) 玉米或小麦，蚕豆根尖：用温水将蚕豆种子浸种2 天，玉米及小麦种子浸种1 天，侍吸水膨胀后转移到铺有几层吸水纸的培养皿或塘磁盘中，上面盖双层湿纱布并加入少许水，放在25 -28 ℃条件下培养．待根尖长到2cm 左右时．在上午9 一l0 时或下午3-5 时取下根尖备用。

2 ．预处理为了有利于对有丝分裂中染色体的观察和计数，在固定之前应对剪下的根尖进行预处理，这样可以改变细胞质的粘度，抑制和破坏纺锤丝的形成．促使染色体缩短和分散。预处理的方法有低温预处理和药物预处理。

(1) 低温预处理：将剪取的根尖浸入盛有蒸馏水的烧杯内，置于4 ℃的冰箱中进行低温处理24 小时。此法效果很好。对染色体无破坏作用，染色体缩短均匀．简便易行，各种作物都适用。

(2 ) 药物预处理：常用药物有秋水仙素溶液、对二氯苯溶液、8 —羟基喹啉等。

3 ．固定借助于物理方法或化学药物的作用，迅速渗入组织和细胞将之杀死，使其形态结构和内含物尽可能保持生活时的完整和真实状态。固定时，将预处理过的根尖用蒸馏水冲洗两次( 约5 分钟) 。然后移入卡诺氏固定液中，在

4 —1

5 ℃条件下固定20 一24 小时后用70 ％酒精冲洗2 次转入70 ％酒精中．在4 ℃冰箱内保存，保存时间最好不超过二个月．经过较长时间保存的材料，进行观察前可以换用固定液再处理一次效果较好。或将预处理过的根尖放入0.075mol/L KCI 溶液中低渗20 分钟．然后在蒸馏水中冲洗2 —3 次( 约10 分钟) 待用。

4 ．解离使分生组织细胞间的果胶质分解．细胞壁软化或部分分解．使细胞和染色体容易分散压平。解离有酸解和酶解两种方法：

(1) 酸解：将根尖从固定液中取出，用蒸馏水漂洗．然后放入已经在60 ℃水浴锅中预热的1 mol/L HCI 中，在60 ℃恒温条件下解离10 —15 分钟，当根尖透明呈米黄色时取出，用蒸馏水冲洗2 — 3 次。

(2) 酶解：将根尖从固定液中取出，放在0.1mol ／L 醋酸钠中漂洗，用刀片切除根冠以及延长区( 根尖较粗的蚕豆，可以把分生组织切成2-3 片) ，把根尖分生组织放到醋酸钠配制的 2.5 ％的纤维素酶和果胶酶的等量混合液中．在25 —28 ℃条件下处理 4

—5 小时。此时组织已被酶液浸透而呈淡褐色，质地柔软而仍可用镊子夹起，用滴管将酶液吸掉．再滴上0.1 mol ／L 醋酸钠，使组织中的酶液渐渐渗出，再放入45 ％醋酸。

5 ．后低渗将解离后的根尖放在蒸馏水中冲洗2 —3 次( 约10 分钟) 。酶解后的根尖放入蒸馏水中浸泡10 －15 分钟，然后再冲洗2 —3 次。一定要冲洗干净，否则影响染色。低渗后的根尖放入70% 酒精后备用。

6 ．染色与压片

(1) 醋酸洋红染色制片：取一处理好的根尖置于载玻片中间，用吸水纸吸去多余的保存液，用刀片将根尖分生组织切1 ：。将其切成薄片，加一小滴醋酸洋红染色液．约5 分钟后加盖玻片。用吸水纸放在盖玻片上面，左手按住载玻片，用右手拇指在吸水纸上对准根尖部位施加压力。或用铅笔的橡皮头轻敲盖玻片即可，使材料均匀分散，细胞分离压平。压力要适当，注意不要移动盖片。为增强染色效果，可将载玻片在酒精灯上稍加热，但不使其沸腾。以免染料沉淀。加热的作用不仅可以使材料软化和易于着色．而且可以破坏部分细胞质，使核和染色体有一个比较清爽的背景。如果整个细胞染色较浅，可沿盖片一侧，滴加少许染色液，使其慢慢渗入．放置片刻再进行加热，如此反复进行染色。

醋酸洋红常用于染色体的临时制片，其着色不强，分色效果也不甚佳，故不宜制作永久制片，

(2) 醋酸地衣红染色制片：由于地衣红很容易溶于酒精。所以材料从保存液中取出后，应当充分洗净后浸入45 ％醋酸中再进行染色。染色时，将材料置于小试管中，加入含盐酸的2 ％地衣红使材料浸没，在酒精灯上加热2 － 3 秒钟．静置约半小时或更长时间，取出材料置载玻片上，加一滴不含盐酸的l ％醋酸地衣红染色液。如醋酸洋红法操作进行压片。地衣红染色液染色，着色力比洋红强，染色较深，尤其对根尖等体细胞染色体的染色比洋红更显优越。

(3) 铁矾—苏木精染色制片法：这是用在根尖细胞有丝分裂染色体计数中效果最好的一种方法，对各种植物的染色体均可染上较深的颜色，分色清晰，照像效果较好．利于标本长期保存。

将解离冲洗后的材料置于4 ％的铁矾水溶液中染色2 —4 小时，如加温(30 一40 ℃) 媒染，则可缩短至0.5 － 1 小时。换水洗涤 4 － 5 次．每次约 5 分钟，务必将残留的铁矾充分洗净。再置于5 ％苏木精水溶液中染色2 － 4 时。如在染色时发现染色液混浊，则表示铁矾未洗净，需重新放入水中洗涤后再行苏木精染色。染色后的材料用水冲洗 5 —10 分钟左右，移入45 ％的醋酸内进行分色和软化10 一20 分钟，方可压片。压片时，用镊子取根尖置于载玻片上，切下根尖分生组织。将其切成薄片，滴一小滴45 ％的醋酸，迅速捣碎根尖，加盖玻片压片，具体方法同醋酸洋红法。

铁矾—苏水精染色时，媒染要充分，媒染后水洗要彻底；在此基础上，苏木精染色也要充分，醋酸分色软化要适宜，位染色体成深兰色，而细胞质退淡。

7 ．境检压好的片子先在低倍镜下观察，可观察到有丝分裂过程中不同分裂时期的染色体。选取不同分裂时期的典型细胞，换高倍镜观察，注意细胞核及染色体，纺缍体等的

变化动态。

8 ．制备永久片

六、实验作业

(1) 制作1 一2 张合格的有丝分裂玻片，交1 —2 张注明分裂时期及染色方法的永久制片。

{2} 绘制2 －4 张有丝分裂时期的简图。

植物染色体制片与观察实验报告

植物染色体制片与观察实验报告（洋葱组） 姓名：蔡梦雅 1230170010 同组成员：曹鉴云陈锦容刘艳马彦霞 一、中文摘要：染色体（Chromosome），是细胞内具有遗传性质的物体，易被碱性染料染成深色，又叫染色质。其本质是脱氧核甘酸，是细胞核内由核蛋白组成、能用碱性染料染色、有结构的线状体，是遗传物质基因的载体。这里我们用洋葱染色体作为代表使用压片法制片并且进行观察。 二、关键词：染色体洋葱压片法 三、引言：洋葱（onion）是百合科（Liliaceae）葱属中以肉质鳞片和鳞芽构成鳞芽的2年生草本植物，其学名为Allium cepa L，染色体数为2n=2x=16。由表1和图1可见,洋葱的8对染色体中,有7对(第1~7对)染色体,臂比在1·01~1·70之间,为中部着丝点染色体,1对(第8对),臂比为4·74,为近端部着丝点且带随体的染色体;依据STEB-BINS[4]的核型分类标准,洋葱的染色体核型在遗传进化上属较古老的2A型。100多年来有关染色体与染色体组结构功能的研究一直是生命科学最活跃的研究领域之一，现今人们完成基因组测序后回到对染色体上进行基因定位和作图，因此有关染色体的研究在基因组合功能基因组时代都有重要意义，陈瑞阳教授历时25年的研究完成的《中国主要植物染色体研究》对我国2834种植物染色体数目进行了报道，完成了1045种植物的核型分析，积累了宝贵的染色体基础数据创建了我国植物染色体研究信息平台。研究染色体进化与生物进化的有不可分割的关系,国际对染色体的化学成分,DNA含量,碱基组成和以染色体数目、形态、结构、大小等为特征的核型进化与物种形成和演化关系的研究,为揭示生物进化趋势提供染色体方面的科学资料，总的来说对染色体的研究在各类学科领域内都有着重要的意义。国内外对洋葱的研究主要在其成分和药用方面，在细胞遗传上张自力和陈瑞阳等对洋葱的C带显示法进行过研究，田秋元等对洋葱的核型分析及有关制片方法进行了探讨。植物根尖的分生细胞的有丝分裂，每天都有分裂高峰时间，此时把根尖固定，经过染色和压片，再置放在显微镜下观察，可以看到大量处于有丝分裂各时期的细胞核染色体。我们设计了不同的实验方案探究如何制作优良的植物染色体玻片，掌握染色体技术。 四、材料与方法： 1.取材 洋葱（Aillum cepa）的鳞茎 2.实验器具和药品 2.1器具 a.载玻片 b.盖玻片 c.烧杯 d.量筒 e.培养皿 f.滤纸 g.玻璃棒 h.镊子i.手术刀 2.2药品 a.0.1mol/L醋酸钠溶液 b.0.25%秋水仙素 c.冰醋酸 d.无水乙醇 e.1mol/LHcl f.纤维素酶 g.果胶酶 h.卡宝品红 2.3试剂配制 卡诺固定液：用3份无水酒精，加入1份冰醋酸（现配现用）。 酸解液：一份无水乙醇与一份1mol/L 盐酸1:1进行配制。 酶解液：用0.4g的纤维素酶和0.15g的果胶酶溶解在20ml蒸馏水里。

人类染色体的识别及核型分析

生命与环境科学学院实验报告 实验课名称遗传学实验实验名称人类染色体的识别及核型分析成绩______________ 姓名王大锤实验报告系列年级学号组别一时间2015.温度6℃ 实验原理及目的 实验目的 1、学习并掌握染色体核型的分析方法； 2、熟悉人类染色体的特征； 3、了解人类染色体结构畸变的表示方法。 实验原理 1．染色体组型（核型）的基本含义 含义：生物体细胞所有可测定的染色体表型特征的总称。 包括：染色体的总数，染色体组的数量，每个染色体组内染色体基数，每条染色体的形态、长度、着丝粒的位置，随体或次缢痕等。 染色体组型是物种特有的染色体信息之一，具有很高的稳定性和再现性。 2．人类染色体特征 Denver体制 1960年，在美国Denver市召开了第一届国际遗传学会议，讨论并确定正常人核型（karyotype）的基本特点即Denver体制，成为识别人类各种染色体病的基础。 3.染色体显带标本 显带技术（banding technique）：用各种不同方法，以及用不同染料处理染色体标本后，每条染色体上出现明暗相间或深浅不同带纹的技术。 每条染色体带纹相对固定，可用于鉴别。 显带技术种类：Q带、G带、C带、R带、T带. G带是目前被广泛应用的一种带型。主要是被Giemsa染色后而显带，故称之为G显带技术，其所显示的带纹分布在整个染色体上。 4.遗传学中一些常用于对染色体和核型分析的指标描述 界标(landmark)：稳定、明显标记的指标.包括末端、着丝粒和带. 区（region）：两相邻界标之间. 带（band）：着色处.（浅、深；亮、暗）. 臂（arm）：p、q 实验材料、仪器及试剂 1.人类染色体标本——非显带标本和显带标本 2.直尺，剪刀，计算机等。 实验步骤 ①染色体制片 制片方法：植物染色体——压片法（酸解、酶解） 动物染色体——滴片法（骨髓细胞、外周血细胞）标本种类：非显带染色体；显带染色体 图片要求：染色体分散；数目全；形态好 ②选择最佳图象拍照 ③测量、计算 ④配对 ⑤剪贴 ⑥排列 排列原则：从大到小；短臂向上；着丝粒在一条线上；性染色体单排。

果蝇唾腺染色体标本的制备和观察

果蝇唾腺染色体标本的制备和观察 摘要本实验通过用黑腹果蝇的三龄幼虫的唾腺，来观察果蝇的唾腺染色体。目的在于学会辨认果蝇的唾腺的特征和识别各条不同的染色体以及掌握其基本的特征。了解唾腺染色体的作用和意义。 １．引言 果绳唾睬染色休为多线染色休,形成原因是由于染色休不断复制,但细胞不分裂从而形成了多线染色休,其上每一横纹相当于一个顺反子,横纹的形态特征有着种的特异性和稳定性。因此果蝇唾睬染色休成为了研究染色休结构、基因定位、基因功能的重要实验材料。1881年Ba}biani首次在摇蚊幼虫的唾腺细胞中发现多线染色体.20世纪30年代Painter首先用果蝇唾腺体作为遗传学数据在细胞学上的验证材料,他研究了多线染色体上的横纹跟基因的关联性以及染色体的物种特异性。Bridges也对果蝇唾腺体进行了广泛详细的研究,制成一系列与已有的基因连锁图相对应的果蝇细胞学图。 ２．实验材料和方法 ２．１实验材料 受精的雌果蝇、盖玻片和载玻片、镊子、解剖针解剖镜和显微镜、醋酸地衣红染液、指甲油 生理盐水、香柏油、镜头纸。 ２．２实验方法 ２．２．１实验材料的获取和处理 （1）三龄幼虫的培养：取20-30只受精的雌果蝇于培养基中，在22摄氏度的恒温冰箱中饲养7天得到肥大的果蝇三龄幼虫。

（2）唾腺的剥取和制片：取果蝇三龄幼虫于一滴加了生理盐水的载玻片上，用两根解剖针，一根扎住口器，一根扎住体前1/3处像两端拉唾腺腺体随之而出。唾腺是一对透明的茄子状腺体，外有白色的脂肪组织（不透明）在腺体的前端各延伸出一细管汇合在一起与口器相连，相对于其他组织唾腺最为透明因此在黑色背景下其他组织呈白色,而唾腺是半透明的,辨别时应在明亮的光源下进行，果蝇的唾腺细胞很大，在解剖镜下可以看见其轮廓。幼虫被拉断时唾腺也可能随之被拉出,也可能仍连在口器上,这时可用解剖针轻轻将其挤压出来。拉出的腺体有可能仍为完整的左右对称的长茄状囊体,也可能分开、断裂。去除幼虫其它组织部分，并把唾腺周围的白色脂肪剥离干净。快速的将唾腺染色体转移到另一干净的载玻片上，每片2-3个，然后用醋酸地衣红染液染色10-15分钟，用吸水纸吸去多余的染液盖好盖玻片，敲散细胞，压匀，涂上指甲油。然后镜检。 ３．实验结果 理想情况下，果蝇的唾腺染色体应该是清晰的5条长臂加一条短臂。5条长臂分别为X、2R、2L、3R、3L和短臂4号染色体。X染色体明显的特征是在接近末端有一段永久性的膨突，另外，X染色体和4号染色体都仅仅只有一条臂且X染色体是除了4号染色体之外的最短的一条臂。4号染色体最短，很容易分辨出来；其次2号和3号的染色体的两条臂不容易区别，但是，仔细的看还是有差别的，根据理想的染色体图，我们可以发现，一般情况下3L末端有一个缢缩，杨大翔在“果蝇唾腺染色体的制备与观察实验”的背景知识一文中用图片的形势展示了各条臂的末端的主要的特点，可以根据图示来辨别各条臂。

植物染色体的制片与观察

植物染色体的制片与观察以及核型分析组员：郑石悦陈雨佳吴俊强 植物染色体的制片与观察 一.实验目的： 1.了解预处理，固定，解离，染色，烤片，及压片的步骤和作用。 2.掌握植物有丝分裂染色体常规制片技术。 3.观察有丝分裂过程中染色体的形态特征以及动态变化。 二．实验原理： 1.植物根尖分生组织的细胞有丝分裂比较旺盛，每天都有分裂高峰时期。 2.不同植物分裂高峰时期是不同的。大蒜和洋葱细胞的有丝分裂高峰时期通常在上午九点到十一点。 3.把分裂时期的根尖用固定液固定，再经染色后压片，在显微镜下进行观察，就能看到处于有丝分裂各时期的细胞和染色体。 4.预处理可以使染色体缩短变粗，易于计数。同时抑制细胞分裂过程中纺锤丝的形成，使更多细胞停留在分裂中期。这时，染色体分散在整个细胞质中，有利于染色体的形态数目观察。 三．实验材料： 洋葱 实验用具： 显微镜，载玻片，盖玻片，玻璃皿，镊子，解剖针，恒温培养箱，恒温水浴箱，棉签，刀片 试剂： 95%乙醇，冰醋酸，盐酸，醋酸洋红染色液，秋水仙素，2甲苯 四.实验步骤： 1.材料的培养：洋葱置于盛有湿沙的托盘中，20~25度培养至根长1~2厘米时取材。取材时使用解剖针及镊子。 2.预处理： （1）化学药物处理：0.05%~0.2%秋水仙素水溶液在室温条件下处理2~4个小时（注意时间不能过长，过长染色体会变得很短，不利于研究）

（2）冷冻处理：将根尖置于盛有冰雪混合物的烧杯中，保存于1~4度的冰箱20~24个小时（化学药物处理对染色体有破坏。冷冻处理无破坏，对禾本科植物效果良好） 3.固定:将材料再用蒸馏水冲洗两次，转入卡诺氏固定液（乙醇和冰醋酸以三比一混合）中固定24个小时（注意取材和固定时要在有丝分裂高峰期）。 4.解离：将根尖用蒸馏水冲洗后放入已经在60度恒温水浴箱中预热的1mol每升的盐酸中，60度水浴约十分钟，当根尖的伸长区变透明而分生区呈米黄色或乳白色时即可取出，用蒸馏水冲洗后备用。 5.染色及压片：取出根尖，去掉伸长区，留1~2mm的分生组织区滴一滴醋酸洋红染色液，染色2~3分钟，然后盖上盖玻片，在酒精火焰上方加热至手背触摸盖玻片时感到微烫（酒精灯加热的作用是 1.软化细胞，易于压片2.使细胞质颜色变浅，使染色体颜色反差加大，利于观察）。在盖玻片上盖上吸水纸，用左手大拇指和二拇指固定盖玻片两端，右手拿棉签垂直敲击盖玻片几下，使材料分散。然后用右手大拇指用以按压盖玻片，将材料压成一层。 6.观察：将压好的片现在低倍镜下观察，找到处于分裂时期的细胞后，再转换到高倍镜下观察染色体的形态特征，观察不同分裂时期的细胞即可了解染色体在整个细胞分裂时期的动态变化特点。 核型分析实验

植物细胞染色体制片及有丝分裂观察

实验报告 学生姓名： 学号： 专业: 年级、班级： 课程名称： 遗传学实验 实验项目：植物细胞染色体制片及有丝分裂观察 实验目的 1.学习和掌握植物根尖细胞有丝分裂染色体压片技术 2.观察有丝分裂过程中染色体的形态特征和动态变化 实验原理 1. 在有丝分裂过程中，细胞核内染色体能准确地复制，并能有规律地均匀分配到两个子细胞中去，使子细胞遗传组成与母细胞完全一样，从而保证了性状的发育和遗传的稳定性。 2. 有丝分裂是一个连续的过程，可分为前期、中期、后期和末期。高等植物的有丝分裂主要发生在根尖、茎尖及幼叶等部位的分生组织。经过适当的取材处理、固定、离析、染色、压片等步骤，可获得清晰的植物细胞有丝分裂染色体动态变化的装片。 实验材料 无水乙醇、70%乙醇、冰乙酸、饱和对二氯苯水溶液、0.1%秋水仙素、0.1N 盐酸、洋葱根尖 实验步骤 材料培养 取材 预处理 固定 解离（酸解） 实验结果 醋酸洋红染色 染色 改良品红染色 压片 镜检

图1 染色后低倍镜下洋葱根尖细胞全视野图图2 处于分裂间期的洋葱根尖细胞图3 处于有丝分裂前期的洋葱根尖细胞图4 处于有丝分裂中期的洋葱根尖细胞 图5 处于有丝分裂后期的洋葱根尖细胞图6 处于有丝分裂末期的洋葱根尖细胞

思考与分析 根据你的实验情况总结出制备好一张优良的细胞分裂标本应注意哪些问题？ 预处理方面 由于正常情况下细胞分裂中期持续的时间很短，且分裂现象较少，因此在预处理时可采用化学或物理方法使细胞分裂停止于中期，从而获得更好的观察效果。 解离方面 在酸解过程中一定要掌握好温度和时间，若解离不够，则压片不易分散，若解离过长则在下一步处理时由于材料过软而易将根尖丢失。 3.取材方面 只取2mm ～3mm 长的分生区 要细心区别根尖的前端和后端，若误取了根尖的后端，在观察时，则只会见到长方形的成熟区细胞，见不到方形的分生区细胞。材料经解离、冲洗后根尖前端分生区部分呈乳白色、比较圆滑，后端部分则较透明和粗糙（取根时不用剪刀而改用镊子夹取则更明显）。 4.染色方面 ⑴使用醋酸洋红染色时，可以在酒精灯上稍加热，这样可以使材料更易着色和染色背景更清晰。 ⑵媒染一定要充分，媒染后的水洗也要充分，洗不足时影响染色效果，并会在组织内外产生大量沉淀，制成的片子污浊。 图7 有丝分裂中期的洋葱根尖细胞绘制图（10x40） 图8 有丝分裂后期的洋葱根尖细胞绘制图 （10x40）

植物染色体制片与观察实验报告审批稿

植物染色体制片与观察 实验报告 YKK standardization office【 YKK5AB- YKK08- YKK2C- YKK18】

植物染色体制片与观察实验报告（洋葱组） 同组成员：曹鉴云陈锦容刘艳马彦霞 一、中文摘要：染色体（Chromosome），是细胞内具有遗传性质的物体，易被碱性染料染成深色，又叫染色质。其本质是脱氧核甘酸，是细胞核内由核蛋白组成、能用碱性染料染色、有结构的线状体，是遗传物质基因的载体。这里我们用洋葱染色体作为代表使用压片法制片并且进行观察。 二、关键词：染色体洋葱压片法 三、引言：洋葱（onion）是百合科（Liliaceae）葱属中以肉质鳞片和鳞芽构成鳞芽的2年生草本植物，其学名为Allium cepa L，染色体数为2n=2x=16。由表1和图1可见,洋葱的8对染色体中,有7对(第1~7对)染色体,臂比在1·01~1·70之间,为中部着丝点染色体,1对(第8对),臂比为4·74,为近端部着丝点且带随体的染色体;依据STEB-BINS[4]的核型分类标准,洋葱的染色体核型在遗传进化上属较古老的2A型。100多年来有关染色体与染色体组结构功能的研究一直是生命科学最活跃的研究领域之一，现今人们完成基因组测序后回到对染色体上进行基因定位和作图，因此有关染色体的研究在基因组合功能基因组时代都有重要意义，陈瑞阳教授历时25年的研究完成的《中国主要植物染色体研究》对我国2834种植物染色体数目进行了报道，完成了1045种植物的核型分析，积累了宝贵的染色体基础数据创建了我国植物染色体研究信息平台。研究染色体进化与生物进化的有不可分割的关系,国际对染色体的化学成分,DNA含量,碱基组成和以染色体数目、形态、结构、大小等为特征的核型进化与物种形成和演化关系的研究,为揭示生物进化趋势提供染色体方面的科学资料，总的来说对染色体的研究在各类学科领域内都有着重要的意义。国内外对洋葱的研究主要在其成分和药用方面，在细胞遗传上张自力和陈瑞阳等对洋葱的C带显示法进行过研究，田秋元等对洋葱的核型分析

染色体核型分析系列之三大技术介绍

染色体核型分析三大技术介绍 ·概念 是细胞遗传学研究的基本方法，是研究物种演化、分类以及染色体结构、形态与功能之间关系所不可缺少的重要手段。经行核型分析后，可以根据染色体结构和数目的变异来判断生物的病因。染色体核型分析技术，传统上是观察染色体形态。但随着新技术的发现与应用，染色体核型分析三大技术包括：GRQ带技术、荧光原位杂交技术、光谱核型分析技术。 ·三大技术介绍 一、GRQ带技术 人类染色体用Giemsa染料染色呈均质状,但是如果染色体经过变性和(或)酶消化等不同处理后,再染色可呈现一系列深浅交替的带纹,这些带纹图形称为染色体带型。显带技术就是通过特殊的染色方法使染色体的不同区域着色,使染色体在光镜下呈现出明暗相间的带纹。每个染色体都有特定的带纹,甚至每个染色体的长臂和短臂都有特异性。根据染色体的不同带型,可以更细致而可靠地识别染色体的个性。染色体特定的带型发生变化,则表示该染色体的结构发生了改变。一般染色体显带技术有G显带(最常用),Q显带和R显带等。 百奥赛图提供的小鼠染色体核型分析服务，就是利用Giemsa染色法，对染色体染色后进行显带分析，保证基因敲除小鼠在染色体水平阶段没有发生变异，从而确保基因敲除小鼠可以正常繁殖。

二、荧光原位杂交技术 荧光原位杂交(fluorescenceinsituhybridization,FISH)是在20世纪80年代末在放射性原位杂交技术的基础上发展起来的一种非放射性分子细胞遗传技术,以荧光标记取代同位素标记而形成的一种新的原位杂交方法,探针首先与某种介导分子结合,杂交后再通过免疫细胞化学过程连接上荧光染料。FISH的基本原理是将DNA(或RNA)探针用特殊的核苷酸分子标记,然后将探针直接杂交到染色体或DNA 纤维切片上,再用与荧光素分子耦联的单克隆抗体与探针分子特异性结合,来检测DNA序列在染色体或DNA纤维切片上的定性、定位、相对定量分析，可判断单个碱基突变。此时，一个染色体核型，即为一个碱基。近年来，采用荧光原位杂交技术，将荧光素标记的探针进行染色体核型特定位点的检测和标记，可以精确地检测染色体上DNA链中，单个碱基的突变，从而大大提高了染色体核型分析的精度。 三、光谱核型分析技术 SKY(spectralkaryotying)光谱染色体自动核型分析是一项显微图像处理技术,SKY通过光谱干涉仪,由高品质CCD获取每一个像素的干涉图像,形成一个三维的数据库并得到每个像素的光程差与强度间的对应曲线,该曲线经傅立叶变换之后得到该像素的光谱,再经由软件分析之后用分类色来显示图像或将光谱数据转换成相应的红绿蓝信号后以常规方式显示。

果蝇唾腺染色体的制片与观察资料讲解

果蝇唾腺染色体的制 片与观察

果蝇唾腺染色体的制片与观察 一、实验目的 1、练习果蝇幼虫唾腺分离技术及唾腺染色体的制片方法； 2、观察果蝇的唾腺染色体。 二、实验原理 1、唾腺染色体：唾腺染色体是双翅类昆虫唾腺细胞的间期核中所看到的巨 型染色体。唾腺染色体的显著特征是： （1）形状为带状，宽达5微米，长达2000微米它相当于普通染色体的100～200倍； （2）核不分裂，由于染色体不断复制，形成了多线性染色体，宽度增加，同时长度也增加，成为巨型染色体； （3）带的全长几乎都有明显的嗜碱性的横纹，横纹的宽度有大有小，密度有疏有密，但是它的数目，位置等等对于同源染色体来说却都是同样的。唾腺染色体的DNA含量达4，000—8，000c。横纹被认为是染色小粒横向排列而成的。横纹是详细研究染色体的部分缺失、倒位、重复、反复、易位等现象的标记； （4）由于2条同源体细胞染色体联会，在黑腹果蝇（2n= 8）中，V形的第二染色体和第三染色体各有两条臂，又各条染色体在异染色质多的着丝粒附近互相靠拢，与核仁一起在核的中央形成一个染色中心。唾腺染色体的一条或几条横纹常显著膨起，这部分称为Bal- biani环。一般把多线性的巨大染色体中的这种膨大起称为疏松结构。 许多双翅类以及二、三种脉翅类昆虫的食道、肠、马氏管和神经细胞中，以及在植物界的Rhinanthus（胡麻科）的胚盘细胞、虞美人草的反足细胞等都能看到具有这样特征的染色体（巨大染色体或多线染色体）。 果蝇唾液腺： 2、果蝇三龄幼虫的唾腺发育到一定阶段后，细胞的有丝分裂停留在间期，

构成一个永久间期系统。唾腺细胞数目不增加，但体积增大，其中每条染色体的常染色质区的核蛋白纤维（染色质纤维）不断复制，多则可达2的10次方至15次方次复制，其复制产物不分开，成千上万条染色质纤维平行而精巧地排列形成一大束宽而长的带状物，称为多线染色体。由于细胞分裂停止在间期，核物质螺旋化程度低而充分伸展，这种染色体比普通染色体大得多，宽约5um，长约2000um，是其体细胞中期染色体长度的100—200倍。伸展形式的DNA长度约为40000um，只需简单的染色和压片，就可以很容易地在光学显微镜下观察到。唾腺染色体处于体细胞染色体联会配对状态。并且唾腺染色体经过多次复制而并不分开，每条染色体大约有1000—4000根染色体丝的拷贝，经染色后，出现深浅不同、密疏各别的横纹，这些横纹的数目和位置往往是恒定的，代表着果蝇等昆虫的种的特征；如染色体有缺失、重复、倒位．易位等，很容易在唾腺染色体上识别出来。 在染色体臂上还可看到某些带纹通过染色体的界旋、膨大形成的疏松区和巴尔比尼环，其富含转录出来的RNA ，因此不着色，是基因活动的区域。在个体发育的不同阶段，疏松区或巴尔比尼环在染色体上出现的部位不同，因此可以研究基因的表达，开展各种染色体变异的研究等等。 果蝇共有4对染色体。其中一对为性染色体（XY或XX），XX染色体为顶端着丝粒染色体，呈杆状，Y染色体为“J”形；第二对、第三对染色体均为中央着丝粒染色体，呈“V”形；第四对染色体短小，为顶端着丝粒染色体，呈点状，附在染色盘边缘。由于唾腺染色体的假联会，X染色体的一端在异染中心上，另一端游离；而第二对、第三对染色体着丝粒在中央，可以从异染中心呈“V”字形向外伸展出四条臂（2L、2R、3L、3R），Y 染色体着丝粒附近的异染色质参与了染色中心的形成，所以理想的片子，不管雌雄果蝇的唾腺细胞在显微镜下均可见五条长臂（X、2L、2R、3L、3R)和一条短臂（第四条染色体臂不易观察）。雄果蝇唾腺细胞中的X染色体臂比雌果蝇的稍细。在染色体臂上可观察到许多明暗相间的带。

玉米染色体制片心得

甜玉米染色体制片心得 10科4 第二小组 成功之前总会经历失败，我们小组第一次实验整整持续了两天，用了低渗制片法，也用了压片法，但都看不到染色体，以失败告终，失败原因有以下几方面： 1.取材时根尖较长，分裂最旺盛期已过 2.酶液用水来配，酶解过程中会使细胞吸收涨破 3.酸解时间过长 4.低渗时转速设置不合理 5.染液染色效果差 6.整个实验时间安排欠合理 总结失败的原因，最后制定另一套实验方案，并严谨进行实验，最后终于看到较满意的染色体，实验步骤归纳如下： 实验步骤： 1.催芽培养（10.29下午） 将甜玉米11-6种子置于水中浸泡1小时后，放入铺有两层纱布的培养皿中，加适量水置于培养箱中培养。 2.预处理（11.1 18:20） ①配制0.1%秋水仙碱：将1%秋水仙碱稀释到0.1% ②取材：玉米根尖长到1~2cm，切根尖0.5cm ③处理：将根尖放入0.1%秋水仙碱中室温下进行预处理，当时时间为18:40 3.固定（11.1 21:40） 用蒸馏水冲洗3次，吸去蒸馏水，注入固定液（乙醇：酒精=3:1）固定 4.酶解（11.2 12:00） ①配酶液：各称取0.25g的果胶酶和纤维素酶溶解到刚配制好的0.1%醋酸钠中，定容至10mL. ②解离：将根尖从固定液中夹出置于酶液中酶解，当时时间为12:40 5.染色、观察（11.2 16:00-21:00） ①洗去酶液：将酶液吸掉（16:30完成），加入0.1mol/L醋酸钠将酶液渗出，然后转让45%醋酸中 ②染色：染色前用蒸馏水水洗根尖一次，然后加入改良品红染色12min. ③压片观察：敲破观察。 经过小组成员的配合和努力，本次实验总算有了个满意的结果，当然对于我们的成功，黎杰强老师功不可没，在这我代表小组全体成员对黎杰强老师百忙之中抽空过来给我们耐心指导表示万分感谢！。

果蝇唾腺染色体的制片与观察

果蝇唾腺染色体的制片与观察 一、实验目的 1、练习果蝇幼虫唾腺分离技术及唾腺染色体的制片方法； 2、观察果蝇的唾腺染色体。 二、实验原理 1、唾腺染色体：唾腺染色体是双翅类昆虫唾腺细胞的间期核中所看到的巨 型染色体。唾腺染色体的显著特征是： （1）形状为带状，宽达5微米，长达2000微米它相当于普通染色体的100～200倍； （2）核不分裂，由于染色体不断复制，形成了多线性染色体，宽度增加，同时长度也增加，成为巨型染色体； （3）带的全长几乎都有明显的嗜碱性的横纹，横纹的宽度有大有小，密度有疏有密，但是它的数目，位置等等对于同源染色体来说却都是同样的。 唾腺染色体的DNA含量达4，000—8，000c。横纹被认为是染色小粒横向排列而成的。横纹是详细研究染色体的部分缺失、倒位、重复、反复、易位等现象的标记； （4）由于2条同源体细胞染色体联会，在黑腹果蝇（2n= 8）中，V形的第二染色体和第三染色体各有两条臂，又各条染色体在异染色质多的着丝粒附近互相靠拢，与核仁一起在核的中央形成一个染色中心。唾腺染色体的一条或几条横纹常显著膨起，这部分称为Bal- biani环。一般把多线性的巨大染色体中的这种膨大起称为疏松结构。 许多双翅类以及二、三种脉翅类昆虫的食道、肠、马氏管和神经细胞中，以及在植物界的Rhinanthus（胡麻科）的胚盘细胞、虞美人草的反足细胞等都能看到具有这样特征的染色体（巨大染色体或多线染色体）。 果蝇唾液腺： 2、果蝇三龄幼虫的唾腺发育到一定阶段后，细胞的有丝分裂停留在间期， 构成一个永久间期系统。唾腺细胞数目不增加，但体积增大，其中每条染

色体的

染色体核型分析

姓名程开源系年级2010级临床医学八年制同组者孙琳、孙晶鑫、窦云德 科目分子细胞生物学题目染色体核型分析学号201000232012 【实验目的】 1.了解小白鼠睾丸细胞染色体的形态及数目。 2.初步掌握小白鼠睾丸细胞染色体的玻片标本制作方法。 3.观察动物细胞染色体的数目和形态。 【实验原理】 染色体的制备在原则上可以从所有发生有丝分裂的组织和细胞悬浮液中得到。最常用的途径是从骨髓细胞、血淋巴细胞和组织培养的细胞中制备染色体。小型动物的染色体制片最好最有效的材料就是骨髓组织。骨髓细胞中，有丝分裂指数相当高，因此可以直接得到中期细胞而不必象淋巴细胞或其它组织那样要经过体外培养；对大型动物通常采用对骨骼、脊或胸骨穿刺术吸取红骨髓，小型动物多采用剥离术取股骨以获得骨髓细胞。 制作染色体标本的先决条件 1. 细胞具有旺盛的分裂能力 选择活跃的组织：胸腺，骨髓，睾丸，小肠 施加药物使细胞分裂：PHA 2. 设法得到大量的中期细胞：秋水仙素 (1) PHA：粗细胞分裂，使淋巴细胞返幼，变为淋巴母细胞 (2) 秋水仙素：破坏微管装配，使纺锤体不能形成，使大量细胞停止在分裂中期。 (3) 低渗作用：水进入细胞内，细胞内容空间变大，染色体间的距离拉大，易于染色体展开 (4) 空气干燥：使细胞和染色体展开 (5) 固定：用甲醇：冰醋酸=3:1作用使蛋白质变性，对染色体内的组蛋白讲，变性后硬度增加，保持了染色体的“及时形态”，对细胞膜蛋白讲，变性使细胞膜硬度增强，形成屏障作用，防止了细胞内物质外溢和丢失。 对于小鼠精巢染色体标本的制作，一般包括以下几个要点: 1. 用一定剂量的秋水仙素破坏纺锤丝的形成，使细胞分裂停滞在中期, 使中期染色体停留在赤道面处; 2. 用低渗法使将细胞膨胀, 以至于在滴片时细胞被胀破, 使细胞的染色体铺展到载玻片上; 3. 空气干燥法可使使细胞的染色体在载片上展平, 经Giemsa染色后便可观察到染色体的显微图象。 【实验材料】 1.材料：小白鼠。 2.试剂：秋水仙素、0.3%KCl溶液、甲醇、冰醋酸、磷酸缓冲液（pH=6.8）吉 姆萨原液。 3.器械：手术刀、手术剪、镊子、试管架、解剖盘、注射器、针头、吸管、离 心管、离心机、玻片(冰片)、天平、试镜纸、二甲苯、吸水纸、香柏油、烧杯、水浴锅。 【实验步骤】 4.取雄性小鼠以每克体重4ug注射秋水仙素，经14-16小时后，断头法杀死小 鼠，取出睾丸，用生理盐水（0.9%的NaCl）吸去血污。 5.放入装有1ml 0.3% KCl 液的小烧杯中剪碎（呈乳白色）。

植物细胞染色体制片及有丝分裂观察

实验报告 学生姓名：_____________ 学号： ________________________________ 专业： ___________ 年级、班级：_______________________________ 课程名称：遗传学实验实验项目：植物细胞染色体制片及有丝分裂观察 一、实验目的 1?学习和掌握植物根尖细胞有丝分裂染色体压片技术 2?观察有丝分裂过程中染色体的形态特征和动态变化 二、实验原理 1.在有丝分裂过程中，细胞核内染色体能准确地复制，并能有规律地均匀分配到两个子细胞中去，使子细胞遗传组成与母细胞完全一样，从而保证了性状的发育和遗传的稳定性。 2.有丝分裂是一个连续的过程，可分为前期、中期、后期和末期。高等植物的有丝分裂主要发生在根尖、茎尖及幼叶等部位的分生组织。经过适当的取材处理、固定、离析、染色、压片等步骤，可获得清晰的植物细胞有丝分裂染色体动态变化的装片。 三、实验材料 无水乙醇、70%乙醇、冰乙酸、饱和对二氯苯水溶液、0.1%秋水仙素、0.1N盐酸、洋葱 根尖 四、实验步骤 材料培养》取材二预处理>固定 *解离（酸解）* 醋酸洋红染色

改良品红染色五、实验结果 图2处于分裂间期的洋葱根尖细胞 图1染色后低倍镜下洋葱根尖细胞全视野图 间期的薛轉棍「工曲胞 图3处于有丝分裂前期的洋葱根尖细胞图4处于有丝分裂中期的洋葱根尖细胞

图7有丝分裂中期的洋葱根尖细胞绘制图 图8有丝分裂后期的洋葱根尖细胞绘制图 (10x40) (10x40) 六、思考与分析 1. 根据你的实验情况总结出制备好一张优良的细胞分裂标本应注意哪些问题？ 1. 预处理方面 由于正常情况下细胞分裂中期持续的时间很短，且分裂现象较少，因此在预处理时可采 用化学或物理方法使细胞分裂停止于中期，从而获得更好的观察效果。 2. 解离方面 在酸解过程中一定要掌握好温度和时间，若解离不够，则压片不易分散，若解离过长则 在下一步处理时由于材料过软而易将根尖丢失。 图5处于有丝分裂后期的洋葱根尖细胞 图6处于有丝分裂末期的洋葱根尖细胞

植物细胞染色体制片及有丝分裂观察

实验报告 学生姓名：学号： 专业: 年级、班级： 课程名称：遗传学实验实验项目：植物细胞染色体制片及有丝分裂观察 一、实验目的 1.学习和掌握植物根尖细胞有丝分裂染色体压片技术 2.观察有丝分裂过程中染色体的形态特征和动态变化 二、实验原理 1.在有丝分裂过程中，细胞核内染色体能准确地复制，并能有规律地均匀分配到两个子细胞中去，使子细胞遗传组成与母细胞完全一样，从而保证了性状的发育和遗传的稳定性。 2.有丝分裂是一个连续的过程，可分为前期、中期、后期和末期。高等植物的有丝分裂主要发生在根尖、茎尖及幼叶等部位的分生组织。经过适当的取材处理、固定、离析、染色、压片等步骤，可获得清晰的植物细胞有丝分裂染色体动态变化的装片。 三、实验材料 无水乙醇、70%乙醇、冰乙酸、饱和对二氯苯水溶液、0.1%秋水仙素、0.1N盐酸、洋葱根尖 四、实验步骤 材料培养取材预处理固定解离（酸解） 醋酸洋红染色

五、实验结果 染色 改良品红染色 压片镜检 图1 染色后低倍镜下洋葱根尖细胞全视野图图2 处于分裂间期的洋葱根尖细胞图3 处于有丝分裂前期的洋葱根尖细胞图4 处于有丝分裂中期的洋葱根尖细胞

六、 思考与分析 1. 根据你的实验情况总结出制备好一张优良的细胞分裂标本应注意哪些问题？ 1. 预处理方面 由于正常情况下细胞分裂中期持续的时间很短，且分裂现象较少，因此在预处理时可采用化学或物理方法使细胞分裂停止于中期，从而获得更好的观察效果。 2. 解离方面 在酸解过程中一定要掌握好温度和时间，若解离不够，则压片不易分散，若解离过长则 图5 处于有丝分裂后期的洋葱根尖细胞 图6 处于有丝分裂末期的洋葱根尖细胞 图7 有丝分裂中期的洋葱根尖细胞绘制图（10x40） 图8 有丝分裂后期的洋葱根尖细胞绘制图（10x40）

染色体核型分析

细胞遗传学（染色体核型）分析 克隆性染色体异常是诊断恶性血液病的重要依据。许多特异性染色体畸变和特定的恶性血液病亚型相联系，因而成为恶性血液病诊断分型的重要指标；诊断时的染色体核型对恶性血液病具有独立的预后价值，对于治疗方案的选择具有指导意义；同时染色体畸变可作为监测白血病缓解、复发及突变的重要参考指标，也为分子学研究提供了重要线索。比如t(9;22)异常的急性淋巴细胞白血病、复杂染色体异常的白血病预后很不好，应尽早进行异基因造血干细胞移植等。WHO制定的恶性血液病分型系统中，将染色体核型作为最重要的分型及诊断指标，发现重现性异常的染色体可提前作出AML的诊断。很多染色体异常导致特异性的白血病融合基因。染色体分析除用于各类恶性血液病患者，如急、慢性白血病、MDS、MPNs、淋巴瘤、多发性骨髓瘤(MM)患者外，还可用于儿童遗传性疾病、先天性畸形的染色体检测，以及习惯性流产、不孕不育等疾病的诊断。但是染色体分裂相的制备和分析具有一定的难度，需要时间长，因此导致临床染色体的诊断缺乏及时性，往往发报告时间需要一个月甚至更长的时间；染色体核型分析需要细胞分裂才能完成，因此需要细胞具有良好的分裂活性，部分患者的细胞不分裂就不能观察到可供分析的中期分裂相（正常染色体分裂相，核型排列后如图3和图4），在一定程度上影响了患者的确诊和治疗。此外染色体一般只能分析20-30个分裂相细胞，敏感性只有百分之一，当异常细胞比例较低时，也难以发现异常的染色体。异常染色体核型的判断需要经验丰富的技术人员，尤其对一些复杂染色体异常，或异常较小的染色体，往往难以正确判断。采用染色体全自动扫描暨自动核型分析系统可以加快染色体检测和发报告速度。通过加用一些促细胞分裂的试剂可增加可供分析的核型。

果蝇唾液腺染色体的制片与观察

果蝇唾液腺染色体的制片与观察 一、实验目的 1.观察果蝇的唾腺染色体，练习果蝇幼虫唾腺分离技术及唾腺染色体的制片方法。 2.观察了解果蝇唾液腺染色体的形态特征。 3.了解果蝇唾腺染色体在遗传学研究中的意义。 二、实验原理 1、本世纪初，D. Kastoffs用压片法首先在D. melanogaster 果蝇幼虫的唾液腺细胞核中发现了特别巨大的染色体——唾液腺染色体（salivary gland chromosome）。事实上，双翅目昆虫（如摇蚊、果蝇等）的幼虫期都具有很大的唾腺细胞，其中的染色体就是巨大的唾液腺染色体。这些巨大的唾液腺染色体具有许多重要特征，为遗传学研究的许多方面，如染色体结构、化学组成、基因差别表达等提供了独特的研究材料。 双翅目昆虫的整个消化道细胞发育到一定阶段之后就不再进行有丝分裂，而停止在分裂间期。但随着幼虫整体器官以及这些细胞本身体积的增大，细胞核中的染色体，尤其是唾液腺染色体仍不断地进行自我复制而不分开，经过许多次的复制形成约1000～4000拷贝的染色体丝，合起来达5m宽，400m长，比普通中期相染色体大得多（约100～150倍），所以又称为多线染色体（polytene chromosome）和巨大染色体（giant chromosome）。 唾液腺染色体形成的最初，其同源染色体即处于紧密配对状态，这种状态称为“体细胞联会”。在以后不断的复制中仍不分开，由此成千上万条核蛋白纤维丝合在一起，紧密盘绕。所以配对的染色体只呈现单倍数。黑腹果蝇的染色体数为2n=2×4，其中第II、第III染色体为中部着丝粒染色体，第IV和第I（X 染色体）染色体为端着丝粒染色体（图1）。而唾液腺染色体形成时，染色体着丝粒和近着丝粒的异染色质区聚于一起表成一染色中心（chromocenter），所以在光学显微镜下可见从染色体中心处伸出6条配对的染色体臂，其5条为长臂，1条为紧靠染色中心的很短的臂（图2,图3）。 图1 果蝇唾腺染色体核型图图2 果蝇唾腺染色体模式图 图3 果蝇唾腺染色体图

染色体制片方法

|首页|课程申报书|教学大纲|授课教案|参考书目|网络课程|习题|教学录像|发表论文|资源库| (六)植物细胞有丝分裂 一、实验目的 (1) 学习和掌握植物根尖细胞压片技术。 (2) 观察植物细胞有丝分裂过程中染色体的形态特征和动态变化。 二、实验原理 有丝分裂是植物细胞增殖的主要方式，在有丝分裂过程中，细胞核内的染色体能准确地复制，并能有规律地均匀分配到两个子细胞中去，使子细胞遗传组成与母细胞完全一样。从而可推断生物性状的遗传与染色体的准确复制和均等分配有关，支配生物性状的遗传物质主要存在于细胞核内的染色体上。 高等植物有丝分裂主要发生在根尖、茎生长点及幼叶等部位的分生组织，根尖取材容易，操作和鉴定方便。通过对根尖的固定、染色和压片，可在显微镜下观察到大量处于有丝分裂各个时期的细胞和染色体，看到染色体的变化特点和染色体的形态特征，进行染色体计数。为了获得更多的中期染色体图像，可以采用药物处理或冷冻处理的方法，阻止纺锤体的形成，使细胞分裂停止在中期，同时还可以使染色体缩短，易于分散，便于观察研究。另外，通过对细胞组织进行酸性水解或酸处理除去细胞之间的果胶层，并使细胞软化，便于细胞彼此分开，有利于压片和染色。 三、实验材料 小麦( Triticum Spp ．) 、玉米( Zea mays ) 、大蒜( Aillumsativum ) 、洋葱(Aillum cepa ) 、蚕豆(Vicia faba ) 等。 四、实验器具和药品 1 ．器具冰箱，恒温箱，显微镜，水浴锅、分析天平、扭力天平、电炉、温度计、剪刀、镊子、刀片、量筒、量杯、三角瓶、烧杯、漏斗、培养皿、酒精灯、滴瓶、载玻片、盖玻片、滤纸、标签、胶水等。 2 ．药品无水酒精、95 ％酒精、70 ％酒精、45 ％酒精、0.5 ％醋酸洋红、

植物染色体制片技术的比较研究

植物染色体制片技术的比较研究 摘要本文以韭兰为材料，对植物染色体常规压片、去壁低渗法制片技术染色效果进行了比较。实验表明：去壁低渗法获得细胞和染色体都较分散，Giemsa 染色使得背景与材料的对比度较大，便与观察。不足之处在于去壁低渗过程中，时间特别不易掌握，耗材多，且成功率较低，染色体容易丢失、形态也不太理想。常规压片耗材少，成功率较高，但不易做分带制片。 关键词植物染色体；常规压片；去壁低渗 一、材料与方法 1.供试材料试验用植株由校园内采集 2.根尖制片 （1）常规压片。首先在早上9：00—10：00采集韭兰的根，在室温下放入0.1%秋水仙素溶液中进行预处理处理8h。然后在常温下把材料放在卡诺氏固定液下固定10min，接下来就在1 mol/L盐酸溶液中解离到松软刚合适为止。最后用蒸馏水将韭兰根冲洗干净，这样前处理就结束。处理完后就可以用醋酸洋红染色或改良苯酚品红染色。压片/涂片后选取典型的染色体，在40倍物镜及油镜下显微照相。 （2）去壁低渗法。首先把材料放0.1%秋水仙素溶液中进行预处理处理8h。然后前低渗，即将根尖放在0.075tool/LKCI低渗液中，在20-25℃条件下处理0.5h。接下来就是最关键的去壁，倒去KCI溶液，加入2.5%混合酶液，在25-30℃温度下处理2-5h左右。去壁后要进行后低渗，使细胞完全膨胀，即是用20-30℃蒸馏水慢慢冲洗2-3次后，再将根尖放在0.075tool/LKCI低渗液中处理。将后低渗后的材料先经固定液固定后，就可以把去壁固定的根尖放在清洁的载片上，将材料夹碎，加1滴固定液。放于酒精灯上微微加热烤干。最后用Giemsa染色，后选取典型的染色体，在40倍物镜及油镜下显微照相。 二、结果与分析 1.常规压片法 常规压片法操作简单，醋酸洋红对于染色体染色均匀，由于它对RNA也有染色效果，以此种方法染色的染色体十分饱满，倘若制片操作合适，加上脱色、沉淀等步骤，能够制出背景清晰、效果良好的装片，可供染色体核型分析。但由于细胞壁的存在使染色体分散不完全，染色体易重叠。另外，由于染料原因，染色体与细胞质反差小，不易于照相。醋酸洋红的着色能力和分色效果会影响到显微摄影的效果。

遗传实验报告 果蝇唾腺染色体观察

姓名XXX 班级同组人 科目遗传学实验题目果蝇唾腺染色体标本制备和观察学号 —————————————————————————————————————————————————————【实验目的】 1.练习解剖果蝇幼虫的技术 2.掌握果蝇唾腺染色体的制片方法 3.了解果蝇唾腺染色体的形态结构特点 【实验原理】 果蝇为双翅目完全变态的昆虫，幼虫期分三龄。其幼虫期具有很大的唾腺细胞，其 中的染色体是巨大的多线染色体。 双翅目昆虫的整个消化管细胞发育至一定阶段后就停止有丝分裂，终止在分裂间期。 但随着幼虫整体器官以及这些细胞本身体积的增大，唾液腺细胞核的染色体仍不断地进 行自我复制而并不分开。经多次复制后，形成约1000~4000拷贝的染色体丝，比普通 中期相染色体大得多（约100~500倍），因此又称为多线染色体。 黑腹果蝇染色体数2n=8，存在体联会。 各染色体的着丝粒互相靠拢形成染色中心，由 染色体中心向外伸出5条很长的染色体臂和一 条极短的染色体。（如右图）染色体Ⅰ为端着 丝粒染色体，所以它的一端在染色中心上，另 一端游离；Ⅱ、Ⅲ染色体为中着丝粒染色体， 他们从染色中心呈V字形向外伸展，所以分别 能看到2L、2R、3L和3R 4条长而宽的“带状 物”；点状的第Ⅳ染色体很短小，为端着丝粒。 因此可以见到5条很长的和一条仅靠染色中心 的短小的染色体。在雄性幼虫中，唾腺染色体 上不见Y染色体，他捕鱼X染色体联会，而 且其着丝粒及其附近的异染色质参与染色中 心的形成。这可能是雄性幼虫唾腺染色体中的X染色体比其他几对染色体相对狭窄一 些的缘故。 果蝇唾腺染色体特点：巨大，是多线染色体；有丝分裂停在间期，DNA不断复制， 着丝点不分开；同源染色体紧密配对—体细胞联会，染色体呈单倍数。 整个唾腺染色体上分布着染色深浅不同、粗细各异的横纹，这意味着基因的排列。

果蝇唾腺染色体标本的制备与观察实验报告

果蝇唾腺染色体标本的制备与观察实验报告 一、实验原理 双翅目昆虫(摇蚊、果蝇等)幼虫期的唾腺细胞很大，其中的染色体称为唾腺染色体。这种染色体比普通染色体大得多，宽约5um，长约400um，相当于普通染色体的100—150倍，因而又称为巨大染色体。唾腺染色体处于体细胞染色体联会配对状态。并且唾腺染色体经过多次复制而并不分开，每条染色体大约有1000—4000根染色体丝的拷贝，所以又称多线染色体。多线染色体经染色后，出现深浅不同、密疏各别的横纹，这些横纹的数目和位置往往是恒定的，代表着果蝇等昆虫的种的特征；如染色体有缺失、重复、倒位．易位等，很容易在唾腺染色体上识别出来。各染色体的异染色质的着丝粒部分互相靠拢形成染色中心；横纹有深浅、疏密的不同，各自对应排列，这意味着基因的排列。唾腺染色体广泛应用于细胞遗传学、发生遗传学、进化遗传学及分子遗传学的研究中。 二、实验材料 果蝇的三龄幼虫 三、实验器材 双目解剖镜，生物显微镜，解剖针，载玻片，盖玻片，滤纸条，废物缸，托盘等。 四、实验试剂 生理盐水，盐酸，蒸馏水，改良苯酚品红染色液等。 五、实验步骤 1.剥离唾腺：在一干净的载玻片上滴一滴生理盐水，选择行动迟缓、肥大、爬在瓶壁上即将化蛹的三龄幼虫，或者选择经低温处理的果蝇三龄幼虫置于载玻片上。每只手各持一个解剖针，在解剖镜下进行操作。由于果蝇的唾腺位于幼虫体前1/3-1/4处，所以左手持解剖针按压住虫体前端三分之一的部位，固定幼虫，右手持解剖针扎住幼虫头部口器部位，适当用力向右拉唾腺腺体随之而出。剔除脂肪体并弃除无关物质。 2.解离：加一滴45%乙酸溶液于腺体上，作用5-7s。用滤纸吸干溶液。在唾腺组织上滴一滴1mol/lLHCl，解离30-40s，以松软组织，利于染色体的分散。 3.吸去 HCl，用水冲洗2-3次. 4.染色：滴加改良苯酚品红染液染色30min,染色时间不可过长，否则背景也着色。 5.加2滴乳酸-乙酸溶液，洗涤染好的腺体。重复2-3次，滤纸吸净剩余溶液，擦净腺体周围杂质。 6.压片：加1滴乳酸-乙酸溶液于载玻片中央的腺体上，盖上干净的盖片，并覆一层滤纸。将片子放在实验台上，用大拇指用力压住，并横向揉几次。（注意不要使盖片移动，用力和揉动是一个方向，不能来回揉。） 7.镜检：先用低倍镜进行观察，找到分散好的染色体再转用高倍镜进行观察。 六、思考题 1）染色中心：染色中心是染色后的果蝇唾腺染色体在显微镜下显示的深色部分，位于整个唾腺染色体的中部，是许多异染色质聚集在一起形成的结构。其实际上是由果蝇第二对与第三对染色的着丝粒部位相聚集而形成的一个深色中心。所有染色体都连接在这一点，其