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1 引言

在生命体内,各类小分子(含中性分子和离子)物质的生物活性功能都是通过他们与生物大分子相互作用而展现的,因此,小分子与生物大分子相互作用是研究所有生命过程经常涉及的基本问题之一。小分子与生物大分子(核酸、蛋白质、多肽等)之间非共价键的相互作用研究已成为当前公认的化学理论与应用技术的前沿课题,对其本质的研究有助于理解在生命科学、医学、药学领域中涉及到的分子之间的相互作用以及相互识别过程[1,2]。

在生物体内,蛋白质是药物作用的主要靶向分子,药物与生物大分子作用的形式和结合位点影响到生物分子的生理和物理化学性质[3]。蛋白质是生命的主要物质基础,是生命体内含量最丰富、功能最多的生物大分子,其功能对于很多生命现象都是重要的[4]。血清蛋白是血浆中含量最丰富的蛋白质,具有维持血浆胶体渗透压、增加血容量、调节血压以及运载功能和营养的作用,对维持正常生命活动发挥着重要作用[5]。通过荧光发射峰、荧光强度、能量转移及荧光寿命等研究可以为蛋白质的结构及所处的微环境提供有用信息[6]。血清蛋白能与许多内源及外源性化合物结合,是药物发挥药效的重要载体和靶点[7]。药物在进入循环系统后首先与血清蛋白结合,然后才能被运输至全身各部位发挥药效[8]。在所有血清蛋白中,牛血清白蛋白(Bovine Serum Albumin,简称BSA)含有580个氨基酸残基单链多肽,具有与人血清白蛋白很类似的结构,许多水溶性差的物质包括胆红素、前列腺素、金属离子等都可以通过与牛血清白蛋白的结合而被运输。牛血清白蛋白与某些有机小分子(如药物、染料等)相互作用后能够生成对其内源荧光具有猝灭效果的配合物。因此,许多光谱法用其研究有机小分子对牛血清白蛋白的内源荧光猝灭现象获取蛋白质携带小分子后对其结构和构象的变化,以揭示小分子与牛血清白蛋白的作用机制[9]。有机小分子与生物大分子的相互作用远不仅限于二者之间,必然要受到其他共存金属离子的影响。因此,研究金属离子存在下食品添加剂与血清白蛋白的相互作用具有重要的理论意义。

血清白蛋白含有色氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸残基,具有荧光发射性质,因而具有内源荧光[10]。它能在340到350nm左右有荧光发射峰,并且能吸收270到300nm的紫外光,因此可以用蛋白质的荧光光谱和紫外吸收进行分析研究。测定蛋白质含量的方法有很多,如浊度发、凯式定氮法、吸光光度法、荧光光度法、化学发光法、电化学法以及共振瑞利散射法等[11]。但是,蛋白质的分子巨大,结构复杂,使得蛋白质作用机理的研究及其应用受到限制。为此,人们借助于能与蛋白质发生作用的小分子作

为探针来对蛋白质进行研究,如染料探针[12,13],二聚体探针[14],金属离子探针[15],其他探针等。

山梨酸钾[16,17](Potassium sorbate,PSS),结构式:,化学名2,4-己二烯酸钾,分子式C6H7O2K,分子量为150.22,别名E202、BB粉,俗称防腐剂。它无色或白色至浅黄色鳞片状结晶、结晶状粉末或颗粒,无臭或稍有臭味。在空气中不稳定,长时间放置时吸湿并氧化分解而着色,常温下密封保存不会分解。山梨酸钾易溶于水,67.6g/100ml(20 ℃);5%食盐水,47.5g/100ml(室温);25%糖水,51g/100ml(室温)。溶于丙二醇,5.8g/100ml;乙醇,0.3g/100ml。1%山梨酸钾水溶液的PH7~8。山梨酸钾是肉制品中使用很广泛的一种化学防腐剂。由于是一种不饱和脂肪酸,可以在体内参与新陈代谢最终被分解为二氧化碳和水,几乎没有毒性。山梨酸钾对霉菌、酵母菌及需氧菌有一定的抑制作用,而对革兰氏厌氧性芽孢菌几乎没有抑制作用。GB2760—1996食品添加剂使用及其标准中规定山梨酸钾可以在肉、鱼、蛋、禽类制品中使用。2002年又增补山梨酸钾在罐肠类肉制品中最大使用量为1.5g/kg,而火腿类产品继续执行最大使用量0.075g/kg 的标准[18]。

铁在人体中的含量仅为0.004%,是构成血红蛋白、肌红蛋白、细胞色素和其他酶系统的重要成分。还有少量以铁蛋白的形式贮存于肝脏、脾脏和骨髓的网状内皮系统。铁还参与体内氮体交换和组织呼吸过程,参与脂类从血液中转运及药物在肝脏中的解毒。它还能催化胡萝卜素转换为维生素A催化胶原蛋白的合成,催化抗体的产生,提高各种杀菌酶,吞噬细胞的活性,提高免疫力。

铝不是人体必须元素,摄入过量的铝,会对人体的骨骼、大脑造成损伤,妨碍人体的消化吸收功能,导致视觉、记忆、注意力下降。

铬是人体必须的微量元素,在酶的催化和加强糖代谢方面有重要的作用。缺铬可使组织对胰岛素的敏感性降低,补充适量的有机铬的化合物可以达到降低血糖、改善糖耐量的目的[19]。

本文用荧光光谱法在生理条件下研究了Fe3+,Al3+,Cr3+存在下山梨酸钾(PSS)与牛血清白蛋白(BSA)的相互作用,获得了一些有价值的信息,为以后药物合成、临床用药提供了有益参考。

2 实验部分

2.1 仪器与试剂

CARY Eclipse荧光分光光度计(自带恒温装置)(美国V ARIAN公司)

电子天平(瑞士普利赛斯XS系列原装天平)

pHS-2ST数显酸度计(上海天达仪器有限公司)

山梨酸钾(天津市博迪化工有限公司):称取一定质量的山梨酸钾用蒸馏水溶解定容,配成1.0×10-3mol/L的储备液,使用时适当稀释。

牛血清白蛋白(BSA)(国药集团化学试剂有限公司):蒸馏水配制1.0×10-4mol/L 的储备溶液,使用时适当稀释。

Fe3+(北京五七六O一部队化工厂):称取一定质量的Fe(NO3)3用蒸馏水溶解定容,配成1.0×10-2mol/L的储备液,使用时适当稀释。

Al3+ (北京化工厂):称取一定质量的Al(NO3)3用蒸馏水溶解定容,配成1.0×10-2mol/L的储备液,使用时适当稀释。

Cr3+(天津市天大化工实验厂):称取一定质量的Cr(NO3)3用蒸馏水溶解定容,配成1.0×10-2mol/L的储备液,使用时适当稀释。

Britton-Robison缓冲溶液:在100ml的三酸混合液(H3BO3,H3PO4,HA C,浓度均为0.04mol/L)中,加入相应体积的NaOH(0.2mol/L),准确pH用pHS-2ST数显酸度计确定。

其余药品均为分析纯;实验用水为一次蒸馏水;所用的溶液均于4℃下保存。2.2 实验方法

2.2.1 PSS-BSA-Fe3+,Al3+,Cr3+的荧光光谱

在10mL比色管中依次加入0.5mLBSA储备液,0.5mL1×10-4mol/LFe3+,Al3+,Cr3+储备液,不同量的PSS储备液,1.0mLpH=7.43的B-R缓冲溶液,然后定容至5ml,放置30min,在λex=280nm,λem=348nm处,1cm比色皿,激发和发射狭缝均为5nm,扫描PSS-BSA-Fe3+,Al3+,Cr3+体系的荧光光谱。

3 结果与讨论

3.1 Fe3+,Al3+,Cr3+存在下PSS-BSA的荧光猝灭光谱[20]

模拟生理环境,选用中性pH=7.43的条件,研究Fe3+,Al3+,Cr3+存在下PSS与牛血清白蛋白的相互作用,固定BSA、Fe3+、Al3+、Cr3+的浓度均为1.0×10-5mol/L,改变PSS的浓度,按实验方法测得Fe3+,Al3+,Cr3+存在时不同浓度的PSS与BSA荧光光谱如图1、2、3所示。

由图可见,Fe3+,Al3+,Cr3+存在下不同浓度的PSS与BSA的荧光猝灭的影响程度不同。在Fe3+,Al3+,Cr3+存在下PSS的猝灭光谱图中,BSA的峰形变化不大,发射峰的位置λem没有显著移动。表明PSS与BSA发生了相互作用。

0 100 200 300 400 500 600 700 800 900 1000

290

310 330 350 370 390 410 430

If

10

1

0 100 200 300 400 500 600 700 800 900 1000 290

310 330 350 370 390 410 430

10

1

If

图2.Al 3+存在下PSS 对BSA 的荧光猝灭光谱

Fig.2 The effect of PSS on fluorescence of BSA in the presence of Al 3+

C PSS =0,2,4,6,8,10,12,14,16,18(×10-6mol/L) [BSA]=1.0×10-5mol/L [Al 3+]=1.0×10-5mol/L

λ(nm)

λ(nm)

图1.Fe 3+存在下PSS 对BSA 的荧光猝灭光谱

Fig.1The effect of PSS on fluorescence of BSA in the presence of Fe 3+

C PSS =0, 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18(×10-6mol/L) [BSA]=1.0×10-5mol/L [Fe 3+] =1.0×10-5mol/L

3.2 Fe 3+,Al 3+,Cr 3+存在下BSA 的荧光猝灭机理及猝灭常数的测定[21-23]

3.2.1荧光猝灭方程

蛋白质的基本组成单位为氨基酸,构成天然。蛋白质的氨基酸共约 20种。除脯氨酸外,均为 α-氨基酸,即羧酸分子中α-碳原子上的一个氢原子被氨基取代而成的化合物。各种蛋白质所含的氨基酸的数目和种类都各不相同。每一种天然的蛋白质都有自己特有的空间结构,而这种空间结构通常称为蛋白质的构象。为了表示蛋白质结构的不同组织层次,科学家们采用了专门的术语:一级结构指组成蛋白质分子的氨基酸的排列顺序。二级结构即多肽链的局部在一维空间上的排布(构象)关系,其中最常见的类型是α-螺旋和β-折叠片。三级结构指多肽链借助各种次级键(非共价键)盘绕成具有特定肽链走向的紧密球状构象。如果蛋白质由一条以上多肽链构成,称为四级结构,它涉及多肽亚基的空间排布和它们之间相互作用的性质。

蛋白质分子中因为含有色氨酸、酪氨酸等氨基酸残基而产生较强的荧光。蛋白质等荧光体与其它物质相互作用而导致荧光体荧光强度降低的现象称为荧光猝灭作用,能猝灭荧光体荧光强度的物质称为荧光猝灭剂。一些金属离子及其配合物、有机小分子化合物(如天然药物或者合成药物)等都是荧光猝灭剂,当它们在溶液中与蛋白质作用时,能不同程度地降低蛋白质的荧光强度。荧光猝灭作用通常分为动态猝灭作用和静态猝灭作用两类,并可以分别用动态猝灭常数K SV ( 即Stern-V olmer 猝灭常数) 和

0 100 200 300 400 500

600 700 800 900 290 310 330 350 370 390 410 430

If 1

10

图3.Cr 3+存在下PSS 对BSA 的荧光猝灭光谱

Fig.3 The effect of PSS on fluorescence of BSA in the presence of Cr 3+

C PSS =0,2,4,6,8,10,12,14,16,18(×10-6mol/L)

[BSA]=1.0×10-5mol/L [Cr 3+]=1.0×10-5mol/L

λ (nm)

静态猝灭结合常数K LB来描述荧光体分子与猝灭剂分子之间相互作用的程度和作用机制。是动态猝灭还是静态猝灭作用,可根据结合常数K SV和K LB随温度的变化关系加以判断。对于动态猝灭作用,温度升高将有利于荧光体和荧光猝灭剂分子之间的有效碰撞,并可以促进电子的转移过程,K SV随温度的升高而增大;若是静态猝灭,温度升高,产物的稳定性降低,静态猝灭常数K LB减小。在动态猝灭过程中,一般情况下各类猝灭剂对生物大分子荧光寿命衰减速率影响的Kq值不会大于2. 0 × 1010 L·mol-1·S- 1。动态猝灭是一种能量转移或电子转移的过程,不影响蛋白质的结构和生理活性。静态猝灭是由于发生了配合反应,通常是产生了不发荧光的配合物,对蛋白质的二级结构可产生影响,并可能影响其生理活性。对于动态猝灭,由于与分子扩散有关,随着温度的升高,将增加离子有效碰撞的数目,加剧能量的转移,使荧光物质的猝灭常数随温度升高而增大,若是静态猝灭,温度升高则降低形成配合物的稳定性,使猝灭常数减小。对于动态猝灭符合Stern-V olmer碰撞猝灭理论:

F0/F =1+K SV[Q]=1+Kqτ0[Q](1)

其中F0为猝灭剂不存在时的荧光强度,F为加入猝灭剂后的荧光强度。Kq为扩散速率常数。τ0为荧光体分子的平均寿命,约为10-8S[23],[Q]为猝灭剂的浓度,K SV= Kqτ0是Stern-V olmer猝灭常数。按Stern-V olmer方程作图如得一直线,表明只存在一类

结合部位,并且对于猝灭体都是可接近的。需要指出Stern-V olmer方程作图是直线并不一定就是发生了碰撞猝灭,因为对于荧光物质与猝灭剂之间形成1:1配合物的情况下,静态猝灭也符合上述Stern-V olmer猝灭方程。即:

F0/F=1+ K A[Q](2)

对于静态猝灭,猝灭常数K A为给体-受体(猝灭体-荧光体)的形成常数。由式(2)作图得一直线,可求得该反应的形成常数K A。显然对应于动态猝灭式(1)中的猝灭常数K SV。

另外将(2)式变形静态猝灭还可以用Lineweaver-Burk双倒数方程:

1/(F0-F)=1/F0+K D/(F0[Q])(3)

式中解离常数K D=1/K A由(3)式中的1/(F0-F)对[Q]-1作双倒数曲线,即可求得解离常数K D。

3.2.2荧光猝灭机理及猝灭常数的确定

为阐明PSS对BSA的内源荧光的猝灭机理,分别测定不同温度下的PSS和BSA 作用的荧光猝灭光谱,以式(1)中的(F0/F)~[Q]作Stern-V olmer曲线,图4、5、6所示。以式(3)的1/(F0-F)对[Q]-1作Lineweaver-Burk双倒数曲线,图7、8、9所

示。其线性回归方程、猝灭常数K SV 、解离常数K D 及相关系数r 如表1、表2和表3所示。从图4、5、6的PSS 与BSA 的 Stern-V olmer 曲线可以看出,呈现良好的线性关系。据此可以判断PSS 与BSA 只存在一类结合部位,并且猝灭体都是可接近的,随着PSS 的加入,可使BSA 的荧光均匀的猝灭。从图7、8、9的双倒数曲线可见也呈现良好的线性关系。

0.9

1.3 1.7

2.1 2.5 0

5

10

15 20

26℃

16℃ 36℃

0.9

1.3 1.7

2.1 2.5 0

5

10

15 20

26℃

16℃ 36℃

C PSS (×10-6mol/L)

图4 Fe 3+存在下PSS 对BSA 不同温度下的Stem-Volmer 曲线

Fig.4 Stem-Volmer curves of BSA and PSS at different temperature in the presence of

3+

C PSS (×10-6

mol/L)

图5 Al 3+存在下PSS 对BSA 不同温度下的Stem-Volmer 曲线

Fig.5 Stem-V olmer curves of BSA and PSS at different temperature in the presence of Al 3+

F 0/F

F 0/F

表1 Stern-V olmer 线性方程及相关系数

Table 1 Stern-V olmer equation and correlation coefficient

体系

温度

t/℃ 回归方程

相关系数r

PSS-BSA-Fe 3+

16℃

F 0/F=0.0798×106C+0.9495 0.9975 26℃ F 0/F =0.0782×106C +0.9586 0.9973 36℃ F 0/F=0.0754×106 C +0.9651 0.9982 PSS-BSA-Al 3+

16℃

F 0/F=0.0789×106C+0.9624 0.9980 26℃ F 0/F=0.0777×106C+0.9577 0.9974 36℃ F 0/F=0.0742×106C+0.9554 0.9975 PSS-BSA-Cr 3+

16℃

F 0/F=0.0787×106C+0.9501 0.9982 26℃ F 0/F=0.0772×106C+0.9468 0.9976 36℃

F 0/F=0.0751×106C+0.9517

0.9980

0.9

1.3 1.7

2.1 2.5 0

5

10

15 20

26℃

16℃ 36℃

C PSS (×10-6mol/L)

图6 Cr 3+存在下PSS 对BSA 不同温度下的Stem-Volmer 曲线

Fig.6 Stem-V olmer curves of BSA and PSS at different temperature in the presence of Cr 3+

F 0/F

0 0.4 0.8 1.2 1.6

0.1

0.2

0.3

0.4 0.5 0.6

26℃ 36℃

16℃

0 0.4 0.8 1.2 1.6 0

0.1

0.2

0.3

0.4 0.5 0.6

26℃ 36℃ 16℃

图7 Fe 3+存在下PSS 对BSA 不同温度下的Lineweaver-Burk 曲线

Fig.7 Lineweaver-Burk double-reciprocal curves under different temperatures

of BSA with PSS in the presence of Fe 3+

1/C PSS (10-6mol/L)

(1×10-2)/(F 0-F )

图8 Al 3+存在下PSS 对BSA 不同温度下的Lineweaver-Burk 曲线

Fig.8 Lineweaver-Burk double-reciprocal curves under different temperatures

of BSA with PSS in the presence of Al 3+

(1×10-2)/(F 0-F )

1/C PSS (10-6mol/L)

表2 不同温度下Lineweaver-Burk 线性方程和相关系数

Table 2 Lineweaver-Burk equation at different temperatures and correlation coefficient

体系

温度t/℃ 回归方程

相关系数r PSS-BSA-Fe 3+

16℃

(F 0-F)-1=1.7903×10-6C -1+0.0801 (F 0-F)-1=2.0001×10-6C -1+0.0762 0.9996 0.9964 26℃ 36℃ (F 0-F)-1=2.333×10-6C -1

+0.0847

0.9964 PSS-BSA-Al 3+

16℃

(F 0-F)-1=1.6793×10-6C -1+0.0859 0.9997 26℃ (F 0-F)-1=1.97×10-6C -1

+0.0775

0.9984 36℃ (F 0-F)-1=2.6232×10-6C -1+0.0614 0.9974 PSS-BSA-Cr 3+

16℃

(F 0-F)-1=2.015×10-6C -1+0.0835 0.9999 26℃ (F 0-F)-1=2.2444×10-6C -1+0.087 0.9999 36℃

(F 0-F)-1=2.7018×10-6C -1+0.089

0.9995

0 0.4 0.8 1.2 1.6

0.1

0.2

0.3

0.4 0.5 0.6

1/C PSS (10-6mol/L)

图9 Cr 3+存在下PSS 对BSA 不同温度下的Lineweaver-Burk 曲线

Fig.9 Lineweaver-Burk double-reciprocal curves under different temperatures of

BSA with PSS in the presence of Cr 3+ (1×10-2)/(F 0-F )

26℃

36℃ 16℃

表3 猝灭常数和热力学参数

Table 3 Quench constants and thermodynamic coefficient

体系

温度

t/℃猝灭常数

K SV/(L/mol)

猝灭速率常数

K q/L/(mol.S)

解离常数

K D(mol/L)

ΔH

KJ/mol

ΔS

J/mol . K

ΔG

KJ/mol

PSS-BSA-Fe3+16℃

26℃

0.798×105

0.782×105

0.798×1013

0.782×1013

2.235×10-5

2.625×10-5-14.883 10

3.30

-16.536

-17.569 36℃0.754×1050.754×1013 2.754×10-5-18.602

PSS-BSA-Al3+16℃0.789×1050.789×1013 1.955×10-5

14.249 110.19

-1.6256 26℃0.777×1050.777×1013 2.542×10-5-1.6589 36℃0.742×1050.742×1013 4.272×10-5-1.7110

PSS-BSA-Cr3+16℃0.787×1050.787×1013 2.413×10-5

16.040

-1.7863 26℃0.772×1050.772×1013 2.580×10-5106.08 -2.8473 36℃0.751×1050.751×1013 3.036×10-5-3.9085

根据表3的结果可知Fe3+,Al3+,Cr3+存在下PSS对BSA的荧光猝灭过程的速率常数远大于扩散控制的Kq(2.0×1010L·mol-1·S-1)可以初步判断该过程主要是静态猝灭;由于随着温度升高Fe3+,Al3+,Cr3+存在下PSS与BSA作用的猝灭曲线斜率降低,也可以进一步说明该过程为静态猝灭。

3.3 Fe3+,Al3+,Cr3+存在下PSS与BSA作用的结合常数K A、结合位点数n[24,25]

设生物大分子与有机小分子成键时有n个等同的独立的结合部位,且已结合的有机小分子之间无相互作用,荧光强度与猝灭剂的关系可由荧光分子与猝灭剂分子之间的结合常数表达式推导求出。设生物大分子B有n个相同且独立的结合位点,则其与小分子间的猝灭反应可表示为:

nQ+B=Q n B

其结合常数为K A,K A=[Q n B]/[Q]n[B] (4)

式中[B]是游离荧光体浓度,[Q]是猝灭剂浓度,[QnB]是配合物浓度,若荧光体总浓度为[B0],则[B0]=[QnB]+[B],代入(4)式得:

K A=([B0]-[B])/[Q]n[B] (5)

静态猝灭中,体系的荧光强度F 与其游离浓度成正比,可得:

log((F 0-F)/F)=logK A +nlog[Q] (6)

其中n 为结合位点数。

一定浓度的BSA 溶液中加入一定浓度的Fe 3+,Al 3+,Cr 3+,不同浓度的PSS 溶液,根据式(5)由log((F 0-F)/F) 对log[Q]作图(图10、11、12),根据公式(5)由直线截距可得结合常数K A 由直线斜率可求得结合位点数n ,不同温度下的结果列于表4

-1 -0.6 -0.2 0.2 -5.9

-5.7 -5.5 -5.3 -5.1 -4.9 -4.7 -4.5

26℃ 16℃ 36℃

图10.Fe 3+存在下不同温度时结合位点对数曲线

Fig.10.The binding constants and binding sites of BSA and PSS at

different temperature in the presence of Fe 3+

㏒C PSS

㏒[(F 0-F )/F ]

-1.2

-0.8 -0.4 0

0.4 -5.9

-5.7 -5.5 -5.3

-5.1 -4.9 -4.7 -4.5

-1 -0.6

-0.2

0.2 -5.9

-5.7 -5.5 -5.3

-5.1 -4.9 -4.7 -4.5

㏒C PSS

㏒[(F 0-F )/F ]

图11.Al 3+存在下不同温度时结合位点对数曲线 Fig.11.The binding constants and binding sites of BSA and PSS at

different temperature in the presence of Al 3+

㏒C PSS

图12.Cr 3+

存在下不同温度时结合位点对数曲线 Fig.12.The binding constants and binding sites of BSA and PSS at

different temperature in the presence of Cr 3+

㏒[(F 0-F )/F ]

26℃ 16℃

36℃

26℃ 16℃

36℃

表4不同温度下BSA与PSS 的结合位点数与结合常数

Table 4 The binding constants and binding sites of BSA and PSS at different temperatures

体系温度

t/℃

回归方程

㏒(F0-F)/F=㏒K A+n㏒[Q]

结合位

点数

n

K A×105(L.mol-1)

相关

系数

r

PSS-BSA-Fe3+16℃㏒(F0-F)/F=1.1105㏒[Q]+5.4138 1.1 2.5930 0.9995 26℃㏒(F0-F)/F=1.1025㏒[Q]+5.372 1.1 3.3550 0.9984 36℃㏒(F0-F)/F=1.1001㏒[Q]+ 5.3484 1.1 2.2305 0.9986

PSS-BSA-Al3+16℃㏒(F0-F)/F=1.0881㏒[Q]+ 5.3071 1.1 2.0281 0.9992 26℃㏒(F0-F)/F=1.1123㏒[Q]+ 5.4161 1.1 2.6068 0.9988 36℃㏒(F0-F)/F=1.1517㏒[Q]+ 5.5861 1.1 3.8557 0.9992

PSS-BSA-Cr3+16℃㏒(F0-F)/F=1.1269㏒[Q]+ 5.4888 1.1 3.0818 0.9996 26℃㏒(F0-F)/F=1.1332㏒[Q]+ 5.5086 1.1 3.2255 0.9996 36℃㏒(F0-F)/F=1.1369㏒[Q]+ 5.518 1.1 3.2961 0.9999

3.4 Fe3+,Al3+,Cr3+存在下PSS与BSA作用方式的热力学研究[26,27]

小分子与蛋白质之间的作用力包括氢键作用力,范德华力,静电作用和疏水作用。从热力学的角度来说,ΔH>0并且ΔS>0表明是疏水作用;ΔH <0并且ΔS<0说明是范德华力或氢键作用力;ΔH <0且ΔS>0表明是静电作用。由于在结合反应过程中温度的变化可以忽略不计,反应的焓变可以认为是常数。当温度变化不大时,PSS与BSA 的结合反应的焓变可看作为一个常数,故可根据热力学方程:

ΔG=ΔH-TΔS

ΔG=-RTlnK

lnK2/K1=(1/T1-1/T2)×ΔH/R(7)

可求得反应中的ΔH、ΔG、ΔS等热力学函数的变化。由Gibbs-Helmholtz方程计算得到热力学参数(结果见表3)。K为由温度T决定的结合常数值,各温度下的K A值见表4,R是气体常数。以lnK对1/T作图(如图13、14、15)。由直线的斜率和截距可计算出Fe3+存在下PSS与BSA作用的ΔH为-14.883KJ/mol,ΔS为103.30J/mol·K,Al3+存在下PSS与BSA作用的ΔH为14.249KJ/mol,ΔS为110.19J/mol·K,Cr3+存在下PSS 与BSA作用的ΔH为16.040KJ/mol,ΔS为106.08J/mol·K。可见Fe3+存在下PSS与BSA 分子之间的作用力主要是静电作用,Al3+存在下PSS与BSA分子之间的作用力主要是疏水作用,Cr3+存在下PSS与BSA分子之间的作用力主要是疏水作用。

12 12.2 12.4 12.6 12.8 13 0.02 0.03 0.04

0.05 0.06 0.07

12.2

12.4

12.6

12.8

0.02 0.03 0.04

0.05 0.06 0.07

图13.Fe 3+存在下热力学常数的Van ,

t Hoff 方程

Fig.13 Van’t Hoff equation of thermodynamic constants in the presence of Fe 3+

1/T(K -1×10-3)

图14.Al 3+存在下热力学常数的Van ,

t Hoff 方程

Fig.14 Van’t Hoff equation of thermodynamic constants in the presence of Al 3+

㏑K A

㏑K A

1/T(K -1×10-3)

4 结论

用荧光光谱法研究了山梨酸钾与BSA 的结合反应荧光特性。测定了Fe 3+,Al 3+,Cr 3+存在下16℃、26℃、36℃三个温度时的结合常数K A (Fe 3+存在下:2.5930×105L/mol 、3.3550×105 L/mol 、2.2305×105 L/mol )和结合位点数n (Fe 3+存在下:1.1、1.1、1.1);K A (Al 3+存在下:2.0281×105L/mol 、2.6068×105 L/mol 、3.8557×105 L/mol )和结合位点数n (Al 3+存在下:1.1、1.1、1.1);K A (Cr 3+存在下:3.0818×105L/mol 、3.2255×105 L/mol 、3.2961×105 L/mol )和结合位点数n (Cr 3+存在下:1.1、1.1、1.1)。结果表明:Fe 3+,Al 3+,Cr 3+存在下山梨酸钾对BSA 内源荧光的猝灭机理为静态猝灭;探讨了它们的相互作用机理,结果表明:Fe 3+存在下山梨酸钾主要以静电作用力与BSA 相互作用;Al 3+存在下山梨酸钾主要以疏水作用力与BSA 相互作用;Cr 3+存在下山梨酸钾主要以疏水作用力与BSA 相互作用;相同条件下Fe 3+,Al 3+,Cr 3+对山梨酸钾与BSA 荧光猝灭程度影响的大小为:Fe 3+>Al 3+>Cr 3+。

12.62

12.64 12.66 12.68 12.7 12.72 0.02 0.03 0.04

0.05 0.06 0.07

1/T(K -1×10-3)

图15.Cr 3+存在下热力学常数的Van ,

t Hoff 方程

Fig.15 Van’t Hoff equation of thermodynamic constants in the presence of Cr 3+

㏑K A

参考文献

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致谢

本论文是在蔡雪梅老师的耐心指导下完成的。这篇论文的每一个细节和每一个数据,都凝结着蔡老师的心血和汗水。蔡老师热情随和的态度让我能够轻松进入状态。在这期间,我从蔡老师身上学到许多专业知识,同时她严谨细致,一丝不苟的作风成为了我生活、学习中的榜样,她循循善诱的教导和不拘一格的思路给予我无尽的启迪。这所有的一切都为我以后的工作、学习打下了坚实的基础,在此表示崇高的敬意和深深的谢意。

四年大学生活即将结束,回忆这四年,各科老师都给了我很大的帮助,他们严格要求我们,使我们掌握了扎实的基础知识,具备了实验的基本技能,这些都是我能顺利完成此论文的基础,更是以后工作、学习顺利进行的前提。同时,许多老师值得崇敬的接人待物的态度也无形中影响着我们。这都将成为我们一生中最宝贵的财富。在此我向他们表示衷心的感谢。

这几个月来,李建晴老师,王永青、刘成等同学以及我的舍友们也给予了我真诚的帮助和鼓励,在此一并表示衷心的感谢。

本科生学年论文(设计)格式要求

本科生毕业论文(设计)格式要求 第一部分:扉页 论文题目(黑体二号,居中);其他填写内容在横线上居中(指导教师不需填写职称),使用宋体三号字。 注:扉页可从校园网教务处网页下载(“文件下载”→“本科毕业论文材料”→“本科生毕业论文(设计)扉页”)。 第二部分:中、英(外)文内容摘要 中、英(外)文内容摘要在第二页书写,如在一页之内不能书写完毕,连续书写在次页。 “内容摘要”四个字居中书写(宋体三号加粗),前后两个字之间空一个中文字符。 书写“内容摘要”四字之后,空一行(宋体小四号),再书写中文内容摘要(宋体小四号)。 书写中文内容摘要之后,在下一行书写中文关键词。书写“关键词”三字时,左缩两格添加冒号;“关键词”三个字使用宋体小四号加粗;关键词具体内容使用宋体小四号字;在前后两个中文关键词之间,空两个中文字符。 书写中文关键词之后,空一行(宋体小四号),再书写英(外)文内容摘要(ABSTRACT)和关键词(KEY WORDS)。书写英(外)文内容摘要和关键词的格式等要求,与中文内容摘要和关键词对应,但是,字体为Time New Roman ,小四号,关键词的内容全部用小写。 第三部分:目录 在书写第二部分即“中、英(外)文内容摘要”完毕的下一页,开始书写目录。 “目录”两字之间空两个中文字符,居中书写,使用宋体三号字加粗。 书写“目录”二字之后,空一行(宋体小四号),再书写目录的具体内容(即标题)及对应正文的起始页码。 目录的具体内容(即标题)要求标注到二级标题,即:(一)、(二)、(三)…。书写目录的具体内容时,一级标题使用宋体四号字加粗;二级标题使用宋体四号字。行距为“固定行间距22pt”。 第四部分:正文及参考文献 在书写第三部分即“目录”完毕的下一页,开始书写正文及参考文献。 一、书写格式 1.论文的结构 论文题目 论文的引言部分(书写论文题目之后,空一行<宋体小四号>,不需写“引言”

毕业论文样本(正文)

会计信息是由会计工作者提供的关于企业生产经营活动的过程和结果的一切会 计资料。保证会计信息的内容真实、数据准确、资料可靠,不仅是会计信息客观性特 征的总要求,而且也是会计核 算的一个基本目的和重要基础。 在社会主义市场经济体制下,企业会计信息对外公开披露是引导社会资源配置的 重要信号。市场能否把有限的社会资源优化配置, 使社会福利最大化,关键是企业披 --------- 露的会计信息是否真实、客观 近年来,会计信息失真问题在各行各业的一些单位中时常发生, 并成为全社会的 热门话题。自2001年底,美国安然公司(Enm 轰然倒塌后,美国的世通公司 (Woridcom )、施乐公司(Xerox )、默克公司(Merck )、蒂科国际公司(Tyco )等大 公司的一系列会计丑闻也相继被曝光。 美国的各大会计公司可以为了咨询费而默认公 司做假或助其做假:律师可以为了拉到公司业务而搞伪证; 董事可以为了自己的利益 而不顾广大中小股东的死活,道德准则丧失殆尽。有人说,美国企业文化最缺乏的就 是“耻”字,以耻为荣。一系列会计造假丑闻摧毁了美国“大型会计公司和政府监督 机构为投资者创造了安全投资场所”这一脆弱的信念。日本的 OriX 公司也同样存在 着会计造假问题。而我国又相继出现银广夏、麦科特蓝田股份等会计造假事件。 如银 广厦通过虚构7. 62亿元利润,创造“中国第一蓝筹股”神话,其停牌时的流通市值 比1998年增加了至少70亿元。因此,对于造假者而言只要造假成本低于造假收益, 造假者就有“博奕”的理由和冲动。由此可见,会计造假己成为一个全球性的难题。 页边距: 上 2.5cm ,下 2.5cm , 左 2.5cm ,右 2.5cm , 装订线(左)0.5cm 注:页码,居中,底部,宋体, 五号,正文起始页页码为 1, 正文宋体, 小四号,1.5 倍行间距, 段前0,段 后0 假账、假报表、假成本、假利润、

论文正文格式

1、正文格式具体要求如下: 1. 纸 型:A4纸 2. 页边距:上3cm ,下2.5cm ,左2.5cm 、右2.5cm ; 3. 页 眉:2.5cm ,页脚:2cm ,左侧装订; 4. 字 体:正文汉字全部为宋体、小四,正文英文为Times New Roman ,小四; 5. 行 距:每段落首行缩进2字符;1.5倍行距,段前、段后均为0行,取消网格对齐选项。 2、论文标题格式的说明 1. 标题可分为四级,分别用一、;(一);1、;(1)排序。作者可根据论文自身情况决定是否采用四级标题。 2. 一级标题格式:居左,首行缩进两字符,黑体,字号:三号,1.5倍行距,段前、段后均为0.5行。

3. 二级标题格式:居左,首行缩进两字符,黑体,居左,字号:小三,1.5倍行距,段前、段后均为0.5行。 4. 三级标题格式:居左,首行缩进两字,黑体,居左,字号:四号,1.5倍行距,段前、段后均为0.5行。 5. 四级标题格式:居左,首行缩进两字,宋体加粗,居左,字号:小四,1.5倍行距,段前、段后均为0.5行。 正文各级标题编号的字体规范如图所示:

(结束语正文)

(如采用文末注释,注释另起一页。如采用脚注,则不必) 注释的书写格式说明 1.注释在正文中采用脚注或文末注释方式,引用的文献在正文中用阿拉伯数字按顺序以右上角标形式标注在引用处。 2.注释按照在正文中引用的顺序进行连续编码。 3.作者一律姓前名后(外文作者名应缩写),作者间用“,”间隔。作者少于3人应全部写出,3人以上只列出前3人,后加“等”。 4.文末注释格式:宋体,居左,首行缩进2个汉字,字号:五号,行距:1.5倍行距,段前、段后均为0行。参考文献正文英文设置为字体:Times New Roman,居左,字号:五号,行距:1.5倍行距,段前、段后均为0行。 5.按照引用的文献类型不同使用不同的表示方法: (1)引用著作类的注释要求 基本规格:作者姓名、书名、卷次、版本(出版地、出版社名、出版年份)、页码。 (2)引用文章类的注释要求 基本规格:作者、文章题目、引自何种出版物、出版时间、页码。 文末注释的书写格式示例如下

10-毕业论文正文范本

前言[前言另起一页,“前言”二字为三号黑体,居中,字间空2格;下空一行。 论文正文内容:小4号宋体行间距选固定值25磅(下同)两端对齐(下同)段首行缩进2格(下同)] 知识产权质押贷款是我国近年来发展起来的一种新型融资模式,它打破了传统的担保贷款模式,是一种符合科技型中小企业发展的融资模式,因此自它出现以来,便得到了许多关注。多年来,国内政府及金融机构在业务开展方面不断探索和实践,知识产权质押贷款取得了很大的进展,并形成了一些典型的模式。 一、知识产权质押贷款首现[标题:3号黑体,上下各空一行,两端对齐。(不使用自动生成格式)] (一)知识产权质押贷款[次标题:小4号宋体,行间距固定值25磅(下同),段首行缩进2格。(不使用自动生成格式)] 1、知识产权质押贷款的出现,给科技型中小企业的发展带来了曙光。 2006年10月31 日,我国首例科技型中小企业知识产权质押贷款在北京诞生。北京科瑞生物医药技术有限公司不是用厂房、土地作抵押物,而是凭借其蛋白多糖生物活性物质的发明专利权从交通银行北京分行成功获得了150万的贷款,由此打破了传统的 担保贷款模式,为科技型中小企业解决融资难问题提供了新的思路,新的途径。【论文正文内容:小4号宋体行间距选固定值25磅(下同)两端对齐(下同)段首行缩进2格(下同)】 二、知识产权质押贷款的概念 知识产权是指人们对于自己的智力成果和经营管理活动中的标记、信誉依法享有的权利。[1]【文章中的注释一律用宋体小四加粗右上标】知识产权质押贷款则是指以知识

产权作为担保物的质押方式,即以知识产权作为质押的标的物,向金融机构申请贷款,在债务人到期不履行还贷义务时,金融机构作为债权人有权将该知识产权以折价、拍卖或变卖方式转让而优先受偿的一种新型质押融资方式。 结论[“结论”二字为三号黑体,居中,字间空2格;上下各空一行。内容:小4号宋体,行间距固定值25磅(下同),段首行缩进2格] 知识产权质押贷款突破了传统实物质押模式,是适应科技型中小企业自身发展特点的融资形式。实践证明,这是缓解科技型中小企业融资难题的一种行之有效的融资形式。由于这些模式都有一些难以克服的基本问题未得到有效解决,各模式都存在这样或那样的局限性,导致知识产权质押贷款不能真正有效发挥它的作用。如何化解知识产权质押贷款中面临的风险,需要政府、金融机构、企业多方的不断探索与实践。 致谢[“结论”二字为三号黑体,居中,字间空2格;上下各空一行。内容:小4号宋体,行间距固定值25磅(下同),段首行缩进2格] 本文在选题及进行过程中得到老师的悉心指导。论文行文过程中,刘老师多次帮助我分析思路,开拓视角,对论文进行多次细致入微的修改,使本文得以顺利完成。 感谢所有论文答辩的评委老师,感谢各位老师不辞辛苦来参加我的答辩。

论文正文主要引用格式

Chapter One Origins of Bronte Sisters’ Female Consciousness Every writer belongs to a specific period of history though his/her compositions may have a much longer standing, and hence the social conditions of his/her living time have an inevitable influence on him or her. The Bronte sisters are no exceptional, they were born in an age of reforms and the tremendous changes in Victorian time rooted in these reforms. 1.1 Victorian Background The Victorian Age in which they lived was featured with the cleavage between the wealthy and the poor. With the accomplishment of the industrialization and the development of capitalism in this era, the class antagonism between the proletariat and the bourgeoisie became acute and prominent. Even since the thirties of the 19th century, the struggle between the workers and capitalists became the contradiction in English social life. …… It is impossible to say when women begin to write fiction. Obviously, however, women are not supposed to pursue writing as the professional activity, as reviewed in Robert Southey’s letter to Charlotte Bronte “literature can not be the business of a women life, and it ought not to be. The more she is engaged in her proper duties, the less leisure will she have for it, even as an accomplishment and recreation” (Beer, 1980: 330) . The Bronte sisters are insisting on their dream and career, paving a way for awakening of women. Among the major social development of the Victorian Age, the change of the women’s status should not be overlooked especially

学年论文摘要、目录、论文正文、参考文献

摘要 改革开放30年以来,浙江省的加工贸易在政策引导下实现了跨越性发展,随着经济全球化的进一步加深,加工贸易在浙江省未来的贸易经济发展中将会起到更加重要的作用。目前浙江省加工贸易普遍存在产业规模较小、产品技术含量低、引进外资不足、监管模式效率低下等问题。针对这些问题,我们应该优化产业结构,引进外资,加强技术研究,加强政策引导,强化部门协调,改善经营环境,加强服务意识,进一步促进浙江省加工贸易平稳的发展。 关键词:加工贸易,浙江省,产业结构升级 Abstract Since 30 years of reform and opening up, Zhejiang Province's processing trade has realized the spanning development under the policy guidance, along with the further deepening of economic globalization, the processing trade will play a more vital role in the Zhejiang Province’s future trade economic development. At present the Zhejiang Province’s processing trade universally exists some problems, such as industry scale to be small, the technical content of product to be low, introduction of foreign capital to be insufficient, the efficiency of supervision pattern to be low and so on. In view of these questions, we should optimize the industrial structure, introduce the foreign capital, strengthen the engineering research, strengthen the policy guidance, strengthen departmental co-ordination, improve the condition of business, strengthen the service consciousness and further promotes the Zhejiang Province’s processing trade developed steadily. Key words:Processing trade, Zhejiang province, The upgrading of the industrial structure -I-

论文正文样本

毕业设计与论文注意: 1.选题要求:选题内容应与所学专业相关 2.论文正文:字数3000字以上,篇幅不得少于8页 3.字体:中文为宋体,西文和数字为New Roman,字符间距标准,正文行距为单倍行距(五号字) 4.页面A4,页边距上下2,左边2.5,右2 5.图和表、公式的编号方法:图1-1 xxx,图1-2 xxx….置于图下方居中;表1-1 xxx,表1-2 xxx;……,置于表上方居中(小五号字) 6.页码1、2、3…..居中从正文开始编排 7.开题报告内容包括毕业论文题目的确定、选题的意义、论文综述、论文大纲。字数要求在1000字以上。 8.应列入主要的文献要求5篇及以上。 9.章节编号方法应采用分级阿拉伯数字编号方法,第一级为"1"、"2"、"3"等,第二级为"2.1"、"2.2"、"2.3"等,第三级为"2.2.1"、"2.2.2"、"2.2.3"等,但分级阿拉伯数字的编号一般不超过三级,两级之间用下角圆点隔开,每一级的末尾不加标点。 各层标题均单独占行书写。正文中对总项包括的分项采用⑴、⑵、⑶…单独序号,对分项中的小项采用①、②、③…的序号或数字加半括号,括号后不再加其他标点。

绍兴职业技术学院 毕业论文 (2012届) 螺栓与螺钉的扭矩试验机的设计 学生姓名 学号 系别 专业 指导教师 完成日期

目录(宋体小三加粗) 引言 (1) 1 扭矩试验机的原理 (1) 1.2 扭矩试验机的造型设计 (1) 1.1.1 三维造型 (1) 1.1.2 三视图转换 (1) 2. 最小破坏扭矩 (2) 2.1扭矩计算公式 (2) 2.1.1三视图转换 (2) 结论 (2) 致谢 (2) 参考文献 (3) (行间距1.25 字体五号宋体)

论文正文格式及字体要求

摘要(中文):(宋体五号) 摘要(宋体三号) ####################################################################### ########################(宋体小四) 关键词:######; #####; ######; ########(黑体小四) 摘要(英文):(另起一页)(宋体五号) Abstract (三号) ######################################################################## #######################(宋体小四) Keywords: ###### ; ##### ; ###### ; ########(小四) 目录:(另起一页)(宋体五号) 目录(黑体三号) 第一章(黑体小四)……………………………………………………… 1(页码) ##### (1) 1.1.1 #####……….…………………………………………………………… 1.1.1.1 ####………………………….…………………………………………. 第二章 ##…………….…………………………………………………………. #####……………….……………………………………………………….. 2.1.1 #####…………………………….……………………………………… . 2.1.1.1 ####…………………………….……………………………….…… . 参考文献……………………………….………………………………………. . 附录…………………………….………………………………………………. . 谢辞…………………………….………………………………………………. . 正文:(另起一页) 第一章 ###(黑体三号) ##################################################################################### ##########(宋体五号) ###(宋体四号加粗)

论文日记学年论文日记)会计专业

论文日记关于论文题目,一直想了很久一直在纠结写什么。之前真的是一点头绪都没有,更不知如何下手。问了学姐,学姐的说法也有不同。每天在电脑上漫无目的的查找着资料。我看了很多关于会计方向的论文参考选题。我看了那些参考选题后,我大概知道自己想写关于会计理论方面的文章。我查阅了一些资料,我终于看到了我比较喜欢的论文题目。我又查了关于这个论文相关的东西,然后我确定我要写这个。我确定的论文题目是会计职业道德问题的探究。题目确定之后,我还需要问问指导老师的意见,看看老师觉得我的题目可不可以写。我很快就把题目发给指导老师了,指导老师回我的是这个可以考虑,但要写出新意,意思就是我的题目可以写。得到了老师的回复后我接下来就是写论文的提纲了。 昨天论文题目通过了,今天就迫不及待的来写提纲了。我在知网下载了很多关于会计职业道德的参考文献。我大概看了一下这些文献然后结合网上的资料,拟了一个我觉得比较细的提纲,弄好提纲我就发给指导老师看了。老师给我说提纲一般是四个大方面。一是绪论,二是现状或存在的问题,三是原因分析,四是对策建议。然后老师还分别给我解释了绪论和摘要。老师说摘要不在文章正文中。是对全体内容,论点,优缺点的总体描述。绪论是正文的一部分,将本文的主要理论等进行简要叙述。我按照老是的要求将提纲做了修改,然后又发给老师看了,这次提纲还是有问题,指导老师说我的一级标题变更了,对应的二级标题内容就要变化,我的内容上又不吻合。我觉得毛病还是有点大了,准备明天再次修改了发给老师看。 今天我准备把我一级标题下的二级标题全部修改。我去知网和万方下载了很

多与会计职业道德相关的参考文献。我主要参考他们写的会计职业道德的现状及对策和建议。我看了很多这些参考文献对会计职业道德的现状阐述都大同小异。我大概总结了一下他们写的现状和对策建议。然后参考着文献把二级标题全部修改了。这次的二级标题我觉得和一级标题的内容符合了,我写的二级标题都不是大范围的标题,是细化了的小标题,是具体的某点。我把还把绪论做了修改,我决定不要绪论,直接把第一个一级大标题会计职业道德的概述作为了开始。我想的是既然写的是会计职业道德相关的内容,会计职业道德的概述不能少。论文的提纲和之前的比简直是大换血,几乎所有提纲都修改了。我把修改的提纲发给老师看,老师对我说的是这个提纲看起来比 较陈旧了,你可以结合现在的事实情况再思考一下。虽然提纲又不符合老师的要求,不过上次的问题解决了,明天继续。 对于我之前提纲陈旧的问题,我觉得我今天要先参考资料然后再想提纲。既然提纲陈旧,搜集的资料肯定要比较新的,不能再参考陈旧的资料。新的资料才会有比较新的想法,才能符合我要的。我下载资料我就主要下载了去年和今年的参考资料,我主要下载了会计职业道德的现状及解决的对策。我把下载的资料一个一个的看,参考其中有没有新的想法。看完了下载的资料,觉得虽然是最新出来的资料,但是里面的东西大部分还是陈旧的,都是写烂的那几个东西,看了很多,我觉得新意的东西几乎没有什么。但是我还是选择了一些我觉得不那么陈旧的东西最为我的参考。我用这些参考的资料具体结合我的提纲,写了一个比较细的提纲,具体的到了哪一点。我把一级标题下的二级提纲几乎全部又做了修改。我把修改的提纲发给了指导老师,可能老师今天又是,一天都没回我。我还是希望我这次的提纲能够得到老师的认可。

论文样本格式要求

(中文题目 字体) 姓名:(四号宋体) 学号:(四号宋体) 系别:(四号宋体) 专业:(四号宋体) 年级:(四号宋体) 指导教师:(四号宋体) 年月日

闽南师范大学 学位论文原创性声明 本人郑重声明:所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容外,本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的成果作品。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。 作者签名:日期:年月日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅。本人授权闽南师范大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。 本学位论文属于 1、保密□,在______年解密后适用本授权书。 2、不保密□。 (请在以上相应方框内打“√”) 作者签名:日期:年月日 导师签名:日期:年月日

摘要(居中,小二号黑体) 政府、社会和高校分别代表着高等教育运行过程中的三种基本力量,也是高等教育质量保障的三大基本主体。相对于政府和高校的质量保障,社会的质量保障主要通过市场经济引导、社会舆论监督、社会中介组织评价等途径来实现。要充分发挥社会力量在高等教育质量保障中的作用,政府的放权与高校的自治是前提,市场的完善与文化的先进是关键,社会力量的整合与引导是手段 关键词(四号黑体):高等教育;分类;方法论(小四号宋体字) Abstract (小三号Arial Black 字体,居中) Government,society and university are not only the three kinds of basic power in the procedure of higher education operation,but also three basic bodies of higher educational quality https://www.sodocs.net/doc/0b4798781.html,pared with the quality assurance of government and that of universities.The society assurance is realized by the induction of market economy,the supervision of public opinion and the evaluation of social intermediary organization.In order to fully exert the function of the social participation in the higher educational quality assurance,the premise is the decentralization of the government and autonomy of universities; the perfection of the market and the advance of the culture is the key; the means is the Key words (小四号Arial Black 字体): higher educational quality;quality assurance; society assurance (小四号 Times New Roman 字体)

论文摘要、正文

摘(空两格)要(黑体小2号加粗居中) (5号字空一行) 现代物流体系的建设不应局限于企业内部,而应该从整个供应链的角度出发,追求供应链物流的一体化。零售业可以依靠其在掌握顾客需求上的优势,引导供应链成员实现物流信息共享,建立稳定可靠的战略合作关系,建设零售业敏捷物流……。 本文运用……。 (宋体5号,1.25倍行距) (摘要内容和关键词之间空一行) 关键词(黑体小4):关键词1;关键词2;关键词3(宋体5号) (页面设置:上空2.5cm,下空2.0cm,左空2.5cm,右空2.0cm,左装订) 注意,从摘要(除英文摘要是1.5倍行距)开始,正文中的格式如下:(WORD中“格式”——“段落”) 一定要注意“缩进”和“间距”都是0。

ABSTRACT(Times New Roman 小2加粗居中) (小4号字空一行) In 21st century, retail is playing a principal role in supply chain, making a great impact on economic development and our life. Following foreign experience, retail in china also made progress, and it is becoming a vital impetus to economic development. Meanwhile, the importance of logistics as “the third source of profit” is revealed. Retail companies began to reform their logistics system. …………………………. (Times New Roman小4号,1.5倍行距) (小4号空一行) Key words(Times New Roman4号加粗): Retail logistics;Distribution center;Chain-store management(Times New Roman小4号)

学年论文正文、结论、参考文献等

1引言 随着我国国民经济的高速发展,作为市场竞争的有力武器——无形资产已成为企业持续发展的动力和源泉。专有技术、专利权等等的各种无形资产对企业的重要性越来越大,正确合理的确认与计量无形资产,对真实反映企业价值也越来越重要,在这一背景下,对无形资产会计的要求必然会被提到新的高度。企业无形资产的拥有程度和质量的高低也将成为企业在竞争中获胜的关键。 资源基础论认为,企业的竞争优势是构建在企业所拥有的异质性资源上的,资源在企业之间的非完全流动性使企业拥有稀有、独特、难以模仿的资源和能力。在当今发达的市场经济下,企业可以快速自由地从市场上获取那些有形资产资源,因此,有形资产一般是非稀缺的。根据资源基础论的基本思想,这种非稀缺的可模仿的普通资源,虽然可以用于确保企业的生存,增强企业的生存能力,但是不可能为企业创造持续竞争优势。既然有形资产一般不具有获取持续竞争优势的潜力,那么,能够为企业创造持续竞争优势的只能是某些无形资产了。因此,对无形资产实施有效的管理,对于企业建立持久的竞争优势无疑具有重要的意义。 无形资产是商品经济发展到一定阶段的产物,是由于交易中商品价值的技术含量不断提高而逐步萌芽、发展起来的,它是相对于固定资产、流动资产等具有确定存在形态的有形资产而言的,是企业全部资产的两大组成部分之一。同固定资产一样,对无形资产的管理离不开对其价值存量和流量的测度。只有在明确企业现有无形资产价值存量的基础上,才可能真正地对其进行有效的管理,从而防止资本配置效率低下、无效投资等问题的出现。 2无形资产的确认与计量 在经济全球化背景下,2006年财政部在借鉴国际会计准则的基础上,依据我国国情颁布了新企业会计准则,实现了与国际会计准则的趋同。新准则在关于无形资产的确认、计量等方面发生了较大的变化。 2.1 无形资产的确认 无形资产,是指企业拥有或者控制的没有实物形态的可辨认非货币性资产。这是财政部于2006年发布的《企业会计准则第6号———无形资产》中对无形资产界定的概念。资产满足下列条件之一的,符合无形资产定义中的可辨认性标准:一是能够从

毕业论文样本(正文)

企业会计信息对外公开披露是引导社会资源配置的使社会福利最大化,关键是企业披 近年来,会计信息失真问题在各行各业的一些单位中时常发生,并成为全社会的热门话题。自2001年底,美然公司(Enm )轰然倒塌后,美国的世通公司(Woridcom )、施乐公司(Xerox )、默克公司(Merck )、蒂科国际公司(Tyco )等大公司的一系列会计丑闻也相继被曝光。美国的各大会计公司可以为了咨询费而默认公司做假或助其做假:律师可以为了拉到公司业务而搞伪证;董事可以为了自己的利益而不顾广大中小股东的死活,道德准则丧失殆尽。有人说,美国企业文化最缺乏的就是“耻”字,以耻为荣。一系列会计造假丑闻摧毁了美国“大型会计公司和政府监督机构为投资者创造了安全投资场所”这一脆弱的信念。日本的OriX 公司也同样存在着会计造假问题。而我国又相继出现银广夏、麦科特蓝田股份等会计造假事件。如银广厦通过虚构7.62亿元利润,创造“中国第一蓝筹股”神话,其停牌时的流通市值比1998年增加了至少70亿元。因此,对于造假者而言只要造假成本低于造假收益,造假者就有“博奕”的理由和冲动。由此可见,会计造假己成为一个全球性的难题。假账、假报表、假成本、假利润、 ……

1 正文格式说明 理分明,文字图表清晰整齐,计算单位采用国务院颁布的《统一公制计量单位中文名称方案》中规定和名称。各类单位、符号必须在论文中统一使用,外文字母必须注意大小写,正斜体。简化字采用正式公布过的,不能自造和误写。利用别人研究成果必须附加说明。引用前人材料必须引证原著文字。在论文的行文上,要注意语句通顺,达到科技论文所必须具备的“正确、准确、明确”的要求。 1.1 1.1.1纸 A4纸; 1.1.2上 2.5cm ,下2.5cm ,左2.5cm ,右2.5cm ,装订线(左)0.5cm ; 1.1.3字 体 正文全部宋体、小四;英文为Times New Roman 、小四; 1.1.4行 距 多倍行距:1.5,段前、段后均为0,取消网格对齐选项。 1.1.5 …… (1①………… 1.22字;或者手动设置成每段落首行缩进2字,字体:宋体,字号:小四,行距:多倍行距 1. 5,间距:前段、后段均为0行,取消网格对齐选项。 模板中的正文容不具备自动调整格式的能力,如果要粘贴,请先粘贴在记事本编辑器中,再从记事本中拷贝,然后粘贴到正文中即可。或者使用手动设置,将粘贴容的格式设置成要求的格式。

1.1论文正文格式

本科毕业设计(论文) ( 2011 届 ) 题 目: 分 院: 电子信息分院 专 业: 信息管理与信息系统 班 级: 06信管本1 姓 名: 陈** 学 号: 06301023308 指导老师: 张** 完成时间: 2010年4月 中文黑体,英文和数字Times New Roman 、小二号、如果一行 水平居中排版,两行则左对齐, 垂直为顶端对齐,表格宽度不 能自行调整 中文宋体, 英文和数字 Times New Roman 、三 号、居中 专业名用全称 班级名用简称

摘要(黑体,五号,加粗,首行缩进2字符,段前0行,段后0行,行间距1.25倍):近年来,我国在引进FDI的过程中,出现了中外合资企业数量扩张减缓,发生产权普支和独资历化的倾向。本文在概述相关的理信纸研究成果的基础上,分析了外国投资者通过对中外合资企业公司治理结构的设计、技术和品牌控制、合资企业数量控制以及销售区域控制等手段的共同使用,基本上能够实现在控制权不完整条件下对合资企业的实质性控制。作者认为,除资本产权与管理技能外,技术资源优势也是控制权的一个重要来源,并且可能架空资本产权权利。凡此种种,决定了外商独资企业将成为我国引进FDI 的主要形式。合资企业正在不可避免地融入国外跨国公司所建立的全球生产体系之中,这一趋势对我国现行的政策体系构成了严峻挑战。(中文宋体,英文和数字Times New Roman,五号) [注:字数不超过300个汉字] 关键词(黑体五号加粗,首行缩进2字符,段前段后0行,行间距1.25倍):中外合资企业;非股权优势;实质性控制;独资化倾向(中文宋体,英文和数字Times New Roman,五号) 注: 页面设置上、下、左2.5,右2.0,封面不能有页码,页码居中,页码数字格式用“Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ…”,论文部分页码数字格式用“1,2,3…”,页码居中 页眉1.5cm,宋体,小五,居中 3–6个关键词,关键词之间用“;”

毕业论文正文部分文本格式示范

摘 要:法律强制力是法律得以实施的保障之一。随着社会文明程 “命令——服从”向“服务——合作”转变。法律不再单纯以强烈的约束作用为依托,公安行政指导的广泛运用以及取得的成效便能很好地说明这一点。关键词:强制力;行政指导;有限性;协调作用;指导前置 Abstract : Compulsoriness is one of the characteristics of the law that guarantees its implementation. Improvement of the civilization of the society seen the government function switching from “ordering-obeying” to With the narrowing of the function scope of the law no longer simply relies on strong restraint, but more proportion on the roles of coordination and guidance, weakening compulsoriness of the law. In public security extensive use of administrative guidance and effect achieved are good of that point. In order to adjust social order and maintain social the main mission of public security is to obtain a correct words: compulsoriness ;administrative guidance ;in guiding the prearrangement 20世纪50的运用不是法律存在和法律实施的本质特征。那么,我国是否存在这种法律强制力弱化的现象,这种现象在公安工作中有什么指导意义呢?本文将以公安行政指导在治安方面的具体运用来分

毕业论文样本(正文)

序 ,企业会计信息对外公开披露是引导社会资源配置的使社会福利最大化,关键是企业披 近年来,会计信息失真问题在各行各业的一些单位中时常发生,并成为全社会的热门话题.自2001年底,美国安然公司(E nm )轰然倒塌后,美国的世通公司(Wori dco m)、施乐公司(X erox )、默克公司(Merck )、蒂科国际公司(Tyco )等大公司的一系列会计丑闻也相继被曝光.美国的各大会计公司可以为了咨询费而默认公司做假或助其做假:律师可以为了拉到公司业务而搞伪证;董事可以为了自己的利益而不顾广大中小股东的死活,道德准则丧失殆尽.有人说,美国企业文化最缺乏的就是“耻”字,以耻为荣。一系列会计造假丑闻摧毁了美国“大型会计公司和政府监督机构为投资者创造了安全投资场所”这一脆弱的信念.日本的OriX 公司也同样存在着会计造假问题。而我国又相继出现银广夏、麦科特蓝田股份等会计造假事件。如银广厦通过虚构7.62亿元利润,创造“中国第一蓝筹股”神话,其停牌时的流通市值比1998年增加了至少70亿元.因此,对于造假者而言只要造假成本低于造假收益,造假者就有“博奕”的理由和冲动。由此可见,会计造假己成为一个全球性的难题。假账、假报表、假成本、假利润、 ……

1 正文是论文的主体。正文要求论点正确,推理严谨, 明,文字图表清晰整齐,计算单位采用国务院颁布的《统一公制计量单位中文名称方案》中规定和名称.各类单位、符号必须在论文中统一使用,外文字母必须注意大小写, 正斜体。简化字采用正式公布过的,不能自造和误写。利用别人研究成果必须附加说明.引用前人材料必须引证原著文字.在论文的行文上,要注意语句通顺,达到科技论文所必须具备的“正确、准确、明确”的要求. 1.1 1。1。1纸A4纸; 1.1。2上2。5c m,下2.5cm,左2.5cm ,右2.5cm ,装订线(左)0.5cm ; 1.1.3字 体 正文全部宋体、小四;英文为Time s New R oma n、小四; 1.1.4行 距 多倍行距:1。5,段前、段后均为0,取消网格对齐选项。 1。1.5 …… (1①………… 1.2字;或者手动设置成每段落首行缩进2字,字体:宋体,字号:小四,行距:多倍行距 1. 5,间距:前段、后段均为0行,取消网格对齐选项. 模板中的正文内容不具备自动调整格式的能力,如果要粘贴,请先粘贴在记事本编辑器中,再从记事本中拷贝,然后粘贴到正文中即可。或者使用手动设置,将粘贴内容的格式设置成要求的格式。

毕业论文全套

开题报告、文献综述、外文翻译、论文反抄袭软件、论文目录,就差论文正文了,其他都全了!! 开题报告主要包括以下几个方面: (一)论文名称 论文名称就是课题的名字 第一,名称要准确、规范。准确就是论文的名称要把论文研究的问题是什么,研究的对象是什么交待清楚,论文的名称一定要和研究的内容相一致,不能太大,也不能太小,要准确地把你研究的对象、问题概括出来。 第二,名称要简洁,不能太长。不管是论文或者课题,名称都不能太长,能不要的字就尽量不要,一般不要超过20个字。 (二)论文研究的目的、意义 研究的目的、意义也就是为什么要研究、研究它有什么价值。这一般可以先从现实需要方面去论述,指出现实当中存在这个问题,需要去研究,去解决,本论文的研究有什么实际作用,然后,再写论文的理论和学术价值。这些都要写得具体一点,有针对性一点,不能漫无边际地空喊口号。主要内容包括:⑴研究的有关背景(课题的提出):即根据什么、受什么启发而搞这项研究。⑵通过分析本地(校)的教育教学实际,指出为什么要研究该课题,研究的价值,要解决的问题。(三)本论文国内外研究的历史和现状(文献综述)。 规范些应该有,如果是小课题可以省略。一般包括:掌握其研究的广度、深度、已取得的成果;寻找有待进一步研究的问题,从而确定本课题研究的平台(起点)、

研究的特色或突破点。 (四)论文研究的指导思想 指导思想就是在宏观上应坚持什么方向,符合什么要求等,这个方向或要求可以是哲学、政治理论,也可以是政府的教育发展规划,也可以是有关研究问题的指导性意见等。 (五)论文写作的目标 论文写作的目标也就是课题最后要达到的具体目的,要解决哪些具体问题,也就是本论文研究要达到的预定目标:即本论文写作的目标定位,确定目标时要紧扣课题,用词要准确、精练、明了。 常见存在问题是:不写研究目标;目标扣题不紧;目标用词不准确;目标定得过高, 对预定的目标没有进行研究或无法进行研究。 确定论文写作目标时,一方面要考虑课题本身的要求,另一方面要考率实际的工作条件与工作水平。 (六)论文的基本内容 研究内容要更具体、明确。并且一个目标可能要通过几方面的研究内容来实现,他们不一定是一一对应的关系。大家在确定研究内容的时候,往往考虑的不是很具体,写出来的研究内容特别笼统、模糊,把写作的目的、意义当作研究内容。基本内容一般包括:⑴对论文名称的界说。应尽可能明确三点:研究的对象、研究的问题、研究的方法。⑵本论文写作有关的理论、名词、术语、概念的界说。(七)论文写作的方法

论文正文格式模板

对于不爱举手发言孩子的教学方法和技巧 [摘要]在进行教学活动时,我发现有的孩子总是举手发言,而有的孩子却是默默地坐在小椅子上从不举手回答问题。而在集体活动中的我也总是喜欢叫举手的孩子,而很少让不举手的孩子回答,但在这之后我发现无形中导致这些不举手的孩子对活动的兴趣越来越淡,注意力不集中。于是我分析了这些不爱举手孩子的原因。在上课的时候,为了活跃课堂气氛,同时也是为了检查孩子们的听课情况,我会经常提出一些问题,让同学们回答。面对这种情况,有些孩子能够积极主动地发言,有些孩子却畏手畏脚,不敢举手,即使偶尔举起手来,说起话来也是吞吞吐吐,说了上句忘了下句。这样就形成了"爱举手的孩子更加踊跃,不举手的孩子总是沉默"的两极格局。对于举手发言,不同的孩子会有不同的想法,需要具体分析孩子的心理。 [关键词]缺乏自信;举手发言;表达能力;鼓励

目 录 引 言 (1) 一、自助旅游特征.......................................................................................1 (一)自助旅游成长的动力机制.....................................................................1 (二)自助旅游与大众旅游的区别 (4) 二、大学生自助旅游需求分析 (4) (一)需求调查 (4) (二)调查结果 (4) (三)市场需求原因透视..............................................................................7 结 论...................................................................................................13 参考文献 (13) 3号黑体 居中 上、下各空一行 小4号黑体 顶格 小4号宋体 缩进二格 小4号黑体 顶格

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