蛋白质的盐析与透析

蛋白质的分离纯化

一、实验目的

1.了解蛋白质的分离纯化方法

2.掌握蛋白质的盐析及透析方法

二、实验原理

在蛋白质溶液中加入一定浓度的中性盐，蛋白质即从溶液中沉淀析出，这种作用称为盐析。盐析法常用的盐类有硫酸铵、硫酸钠等。

蛋白质用盐析法沉淀分离后，需脱盐才能获得纯品，脱盐最常用的方法为透析法。蛋白质在溶液中因其胶体质点直径较大，不能透过半透膜，而无机盐及其它低分子物质可以透过，故利用透析法可以把经盐析法所得的蛋白质提纯，即把蛋白质溶液装入透析袋内，将袋口用线扎紧，然后把它放进蒸馏水或缓冲液中，蛋白质分子量大，不能透过透析袋而被保留在袋内，通过不断更换袋外蒸馏水或缓冲液，直至袋内盐分透析完为止。透析常需较长时间，宜在低温下进行。

三、实验材料和试剂

10%鸡蛋白溶液，含鸡蛋清的氯化钠蛋白溶液，饱和硫酸铵溶液，硫酸铵晶体，1%硝酸银溶液，双缩脲试剂

四、实验步骤

（一）蛋白质盐析

取10%鸡蛋白溶液5ml于试管中，加入等量饱和硫酸铵溶液，微微摇动试管，使溶液混合后静置数分钟，蛋白即析出，如无沉淀可再加少许饱和硫酸铵溶液，观察蛋白质的析出；

取少量沉淀混合物，加水稀释，观察沉淀是否会再溶解。

（二）蛋白质的透析

注入含鸡蛋清的氯化钠蛋白溶液5ml于透析袋中，将袋的开口端用线扎紧，然后悬挂在盛有蒸馏水的烧杯中，使其开口端位于水面之上。

经过10分钟后，自烧杯中取出1ml溶液于试管中，加1%硝酸银溶液一滴，如有白色氯化银沉淀生成，即证明蒸馏水中有Cl-存在。

再自烧杯中取出1ml溶液于另一试管中，加入1ml 10%的氢氧化钠溶液，然后滴加1-2滴1%的硫酸铜溶液，观察有无蓝紫色出现。

每隔20分钟更换蒸馏水一次，经过数小时，则可观察到透析袋内出现轻微混浊，此即为蛋白质沉淀。继续透析至蒸馏水中不再生成氯化银沉淀为止。

实验报告记录透析完毕所需的时间。

蛋白质的盐析与透析

蛋白质的盐析与透析 一、实验目的 1.了解蛋白质的分离纯化方法 2.掌握蛋白质的盐析及透析方法 二、实验原理 在蛋白质溶液中加入一定浓度的中性盐，蛋白质即从溶液中沉淀析出，这种作用称为盐析。盐析法常用的盐类有硫酸铵、硫酸钠等。 蛋白质用盐析法沉淀分离后，需脱盐才能获得纯品，脱盐最常用的方法为透析法。蛋白质在溶液中因其胶体质点直径较大，不能透过半透膜，而无机盐及其它低分子物质可以透过，故利用透析法可以把经盐析法所得的蛋白质提纯，即把蛋白质溶液装入透析袋内，将袋口用线扎紧，然后把它放进蒸馏水或缓冲液中，蛋白质分子量大，不能透过透析袋而被保留在袋内，通过不断更换袋外蒸馏水或缓冲液，直至袋内盐分透析完为止。透析常需较长时间，宜在低温下进行。 三、实验材料和试剂 10%鸡蛋白溶液，含鸡蛋清的氯化钠蛋白溶液，饱和硫酸铵溶液，硫酸铵晶体，1%硝酸银溶液。 四、实验步骤 （一）蛋白质盐析 取10%鸡蛋白溶液5ml于试管中，加入等量饱和硫酸铵溶液，微微摇动试管，使溶液混合后静置数分钟，蛋白即析出，如无沉淀可再加少许饱和硫酸铵溶液，观察蛋白质的析出； 取少量沉淀混合物，加水稀释，观察沉淀是否会再溶解。 （二）蛋白质的透析 注入含鸡蛋清的氯化钠蛋白溶液5ml于透析袋中，将袋的开口端用线扎紧，然后悬挂在盛有蒸馏水的烧杯中，使其开口端位于水面之上。 经过10分钟后，自烧杯中取出1ml溶液于试管中，加1%硝酸银溶液一滴，如有白色氯化银沉淀生成，即证明蒸馏水中有Cl-存在。 再自烧杯中取出1ml溶液于另一试管中，加入1ml 10%的氢氧化钠溶液，然后滴加1-2滴1%的硫酸铜溶液，观察有无蓝紫色出现。 每隔20分钟更换蒸馏水一次，经过数小时，则可观察到透析袋内出现轻微混浊，此即为蛋白质沉淀。继续透析至蒸馏水中不再生成氯化银沉淀为止。 实验报告记录透析完毕所需的时间。 附：胶棉半透膜的制备 市售5%的胶棉液，加入干燥的150mL锥形瓶中，将锥形瓶横斜不断转动，使瓶的内壁和瓶口都均匀沾有胶棉液。倒出多余的胶棉液，然后倒置约1min使乙醚、乙醇不断蒸发，直到干燥。逐步剥离瓶口的薄膜，沿瓶壁薄膜夹缝注入蒸馏水，使薄膜逐步跟瓶壁胶离，轻轻取出，浸入蒸馏水中备用。 如有侵权请联系告知删除，感谢你们的配合！

蛋白质的盐析与透析

蛋白质的分离纯化 一、实验目的 1.了解蛋白质的分离纯化方法 2.掌握蛋白质的盐析及透析方法 二、实验原理 在蛋白质溶液中加入一定浓度的中性盐，蛋白质即从溶液中沉淀析出，这种作用称为盐析。盐析法常用的盐类有硫酸铵、硫酸钠等。 蛋白质用盐析法沉淀分离后，需脱盐才能获得纯品，脱盐最常用的方法为透析法。蛋白质在溶液中因其胶体质点直径较大，不能透过半透膜，而无机盐及其它低分子物质可以透过，故利用透析法可以把经盐析法所得的蛋白质提纯，即把蛋白质溶液装入透析袋内，将袋口用线扎紧，然后把它放进蒸馏水或缓冲液中，蛋白质分子量大，不能透过透析袋而被保留在袋内，通过不断更换袋外蒸馏水或缓冲液，直至袋内盐分透析完为止。透析常需较长时间，宜在低温下进行。 三、实验材料和试剂 10%鸡蛋白溶液，含鸡蛋清的氯化钠蛋白溶液，饱和硫酸铵溶液，硫酸铵晶体，1%硝酸银溶液，双缩脲试剂 四、实验步骤 （一）蛋白质盐析 取10%鸡蛋白溶液5ml于试管中，加入等量饱和硫酸铵溶液，微微摇动试管，使溶液混合后静置数分钟，蛋白即析出，如无沉淀可再加少许饱和硫酸铵溶液，观察蛋白质的析出； 取少量沉淀混合物，加水稀释，观察沉淀是否会再溶解。 （二）蛋白质的透析 注入含鸡蛋清的氯化钠蛋白溶液5ml于透析袋中，将袋的开口端用线扎紧，然后悬挂在盛有蒸馏水的烧杯中，使其开口端位于水面之上。 经过10分钟后，自烧杯中取出1ml溶液于试管中，加1%硝酸银溶液一滴，如有白色氯化银沉淀生成，即证明蒸馏水中有Cl-存在。 再自烧杯中取出1ml溶液于另一试管中，加入1ml 10%的氢氧化钠溶液，然后滴加1-2滴1%的硫酸铜溶液，观察有无蓝紫色出现。 每隔20分钟更换蒸馏水一次，经过数小时，则可观察到透析袋内出现轻微混浊，此即为蛋白质沉淀。继续透析至蒸馏水中不再生成氯化银沉淀为止。 实验报告记录透析完毕所需的时间。

血液透析患者如何补充蛋白质

血液透析患者如何补充蛋白质：血液透析患者是特殊的人群，在蛋白质的补充上，要从食物蛋白质的质量、一定蛋白质含量的食物的体积和摄入蛋白质的同时磷、钾的摄入等几个方面来进行考虑，如此才能降低血液透析对患者的身体伤害。那么血液透析患者如何补充蛋白质呢?下面由长沙普济肾病医院为大家详细介绍。 一、摄入优质蛋白，减少废氮产生。 评价食物蛋白质的营养价值，有很多指标和方法。对于血液透析患者来说最重要的要数蛋白质生物学价值(BV)了。蛋白质生物学价值是指蛋白质经消化吸收后，进入机体后可以储留和利用的部分。 蛋白质生物学价值=储留氮/吸收氮*100% 吸收氮=摄入氮-粪氮 储留氮=吸收氮-尿氮 食物蛋白质生物学价值的高低取决于食物中必需氨基酸的含量和比值。 肾脏功能正常的人的废氮(吸收氮-储留氮)可以通过肾脏的作用由尿液排出体内，但血液透析患者肾脏功能衰竭，尿量减少或无尿，废氮不能自主排出，淤积于体内形成尿素氮等毒素。因此血液透析患者在摄入充足蛋白质的时候选择废氮产生少，食物蛋白质生物学价值(BV)高的食物会减少废氮产生减少毒素积蓄体内。 二、在保证饱腹感的同时选择蛋白丰富体积小的食物。 人有正常的食欲其中重要的一点就是要满足饱腹感，吃完食物后要有吃饱的满足感。对于血液透析患者中食欲和食量大的患者选择满足蛋白质充足摄入的食物就相对宽松，可以多吃谷物;对于食欲差、食量小的患者，就要充分考虑食物的体积，尽量选择体积小蛋白质含量高的食物;对于进食困难的患者就要采用一些蛋白质的营养补充食品;对于不能进食的患者就要采用管饲和肠外营养了。 选择营养丰富体积小的食物还有一个好处就是减少水分的摄入，减少透析前体内水分的增长，减少身体负担和并发症的发生几率。 三、摄取足量蛋白质的同时尽量减少钾、磷的摄入。 钾、磷是血液透析患者严格限制摄入的电解质，但富含蛋白质的食物，钾、磷的含量一般情况还较高，所以我们要了解食物的钾、磷的含量，在既保证充足蛋白质营养的同时减少钾、磷的摄入。 四、适宜食物搭配达到最佳蛋白质生理价值。 如果把不同种类的食物混合食用，这些食物中所含的蛋白质有互补作用，因

蛋白质透析

蛋白质透析 在蛋白质的研究中，经常要进行蛋白质脱盐，即将蛋白质同其它盐类小分子分离开。蛋白质脱盐的方法很多，各有优缺点。以下仅介绍常用的透析和凝胶过滤方法，可根据实验条件和要求选用。 （一）蛋白质透析 一.目的 学习透析的基本原理和操作。 二.原理 蛋白质是大分子物质，不能透过透析膜而小分子物质可以自由透过。在分离提纯蛋白质的过程中，常利用透析的方法使蛋白质与其中夹杂的小分子物质分开。 三.仪器、试剂、材料 1.仪器 烧杯；玻棒；离心机；离心管；冰箱；电炉。 2.试剂 1％氯化钡溶液；硫酸铵粉末；1mol/L EDTA；2%NaHCO3。 3.材料 透析管（宽约2.5cm，长12－15cm）或玻璃纸;皮筋；鸡蛋清溶液：将新鲜鸡蛋的蛋清与水按1：20混匀，然后用六层纱布过滤。 四.操作方法 1.透析管（前）处理：先将一适当大小和长度的透析管放在1mol/L EDTA溶液中，煮 沸10分钟，再在2％NaHCO3溶液中煮沸10分钟，然后再在蒸馏水中煮沸10分 钟即可。 2.取5ml蛋白质溶液于离心管中，加4g硫酸铵粉末，搅拌使之溶解。然后在4℃下静 置20分钟，出现絮状沉淀。 3.离心：将上述絮状沉淀液以1000转/分的速度离心20分钟。 4.装透析管：离心后倒掉上清夜，加5ml蒸馏水溶解沉淀物，然后小心倒入透析管中， 扎紧上口。 5.将装好的透析管放入盛有蒸馏水的烧杯中，进行透析，并不断搅拌。 6.每隔适当时间（5－10分钟），用氯化钡滴入烧杯的蒸馏水中，观察是否有沉淀现象。 五.结果处理 记录并解释实验现象。 六.注意事项 1. 硫酸铵盐一定要充分溶解，才能使蛋白质沉淀下来。 七.思考题 在透析袋处理过程中，EDTA和NaHCO3起何作用？

实验十一 蛋白质脱盐

实验十一蛋白质脱盐 (透析和凝胶过滤) 在蛋白质的研究中，经常要进行蛋白质脱盐，即将蛋白质同其它盐类小分子分离开。蛋白质脱盐的方法很多，各有优缺点。以下仅介绍常用的透析和凝胶过滤方法，可根据实验条件和要求选用。 （一）蛋白质透析 一.目的 学习透析的基本原理和操作。 二.原理 蛋白质是大分子物质，不能透过透析膜而小分子物质可以自由透过。在分离提纯蛋白质的过程中，常利用透析的方法使蛋白质与其中夹杂的小分子物质分开。 三.仪器、试剂、材料 1.仪器 烧杯；玻棒；离心机；离心管；冰箱；电炉。 2.试剂 1％氯化钡溶液；硫酸铵粉末；1mol/L EDTA；2%NaHCO3。 3.材料 透析管（宽约2.5cm，长12－15cm）或玻璃纸;皮筋；鸡蛋清溶液：将新鲜鸡蛋的蛋清与水按1：20混匀，然后用六层纱布过滤。 四.操作方法 1.透析管（前）处理：先将一适当大小和长度的透析管放在1mol/L EDTA溶液中，煮 沸10分钟，再在2％NaHCO3溶液中煮沸10分钟，然后再在蒸馏水中煮沸10分 钟即可。 2.取5ml蛋白质溶液于离心管中，加4g硫酸铵粉末，搅拌使之溶解。然后在4℃下静 置20分钟，出现絮状沉淀。 3.离心：将上述絮状沉淀液以1000转/分的速度离心20分钟。 4.装透析管：离心后倒掉上清夜，加5ml蒸馏水溶解沉淀物，然后小心倒入透析管中， 扎紧上口。 5.将装好的透析管放入盛有蒸馏水的烧杯中，进行透析，并不断搅拌。 6.每隔适当时间（5－10分钟），用氯化钡滴入烧杯的蒸馏水中，观察是否有沉淀现象。 五.结果处理 记录并解释实验现象。 六.注意事项 1. 硫酸铵盐一定要充分溶解，才能使蛋白质沉淀下来。 七.思考题

蛋白质透析

创作编号： GB8878185555334563BT9125XW 创作者：凤呜大王* 蛋白质透析 在蛋白质的研究中，经常要进行蛋白质脱盐，即将蛋白质同其它盐类小分子分离开。蛋白质脱盐的方法很多，各有优缺点。以下仅介绍常用的透析和凝胶过滤方法，可根据实验条件和要求选用。 （一）蛋白质透析 一.目的 学习透析的基本原理和操作。 二.原理 蛋白质是大分子物质，不能透过透析膜而小分子物质可以自由透过。在分离提纯蛋白质的过程中，常利用透析的方法使蛋白质与其中夹杂的小分子物质分开。 三.仪器、试剂、材料 1.仪器 烧杯；玻棒；离心机；离心管；冰箱；电炉。 2.试剂 1％氯化钡溶液；硫酸铵粉末；1mol/L EDTA；2%NaHCO3。 3.材料 透析管（宽约2.5cm，长12－15cm）或玻璃纸;皮筋；鸡蛋清溶液：将新鲜鸡蛋的蛋清与水按1：20混匀，然后用六层纱布过滤。 四.操作方法 1.透析管（前）处理：先将一适当大小和长度的透析管放在1mol/L EDTA溶液 中，煮沸10分钟，再在2％NaHCO3溶液中煮沸10分钟，然后再在蒸馏水 中煮沸10分钟即可。 2.取5ml蛋白质溶液于离心管中，加4g硫酸铵粉末，搅拌使之溶解。然后在4℃ 下静置20分钟，出现絮状沉淀。 3.离心：将上述絮状沉淀液以1000转/分的速度离心20分钟。 4.装透析管：离心后倒掉上清夜，加5ml蒸馏水溶解沉淀物，然后小心倒入透 析管中，扎紧上口。 5.将装好的透析管放入盛有蒸馏水的烧杯中，进行透析，并不断搅拌。

6.每隔适当时间（5－10分钟），用氯化钡滴入烧杯的蒸馏水中，观察是否有沉 淀现象。 五.结果处理 记录并解释实验现象。 六.注意事项 1. 硫酸铵盐一定要充分溶解，才能使蛋白质沉淀下来。 七.思考题 在透析袋处理过程中，EDTA和NaHCO3起何作用？ EDTA，二价金属离子螯合剂，除去钙镁等二价离子，防止他们跟目的样品螯合，影响活性 NaHCO3，中和乙酸，延长透析袋寿命。 创作编号： GB8878185555334563BT9125XW 创作者：凤呜大王*