鱿鱼墨多肽对SKBR3细胞的增值抑制究【毕业开题、综述、正文】

开题报告

药学

鱿鱼墨多肽对SKBR3细胞的增值抑制研究

一、综述本课题国内外研究动态，说明选题的依据和意义

癌症已经成为影响人类生命健康与致死的重要因素,经典的化疗药物虽然可以在一定程度上抑制肿瘤生长，但同时也损害了患者的正常细胞与器官，给病人带来极大的痛苦。随着海洋药物和肿瘤细胞分子生物学研究的快速进展，恶性肿瘤的细胞内信号转导、细胞凋亡的诱导、细胞的转移、血管生成以及细胞与胞外基质的相互作用等各种基本过程正逐渐被阐明。以一些与肿瘤细胞分化增殖相关的细胞信号转导通路的关键酶(蛋白酪氨酸激酶、芳香化酶、拓朴异构酶I等)作为药物筛选靶点已经被大量研究,并由此发现了选择性地作用于特定靶位的高效、低毒、特异性强的新型抗肿瘤药,即分子靶向药(Molecular targeted drugs， MTD) 和抗体靶向药(Antibody targeted drugs，ATD)，该类型药物已成为当今世界各国抗肿瘤药物研发的重要方向。

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，其发病率在我国女性恶性肿瘤中居第二位，且呈明显上升的趋势，尤其在一些沿海发达地区，如上海市，其发病率在2000年已跃居女性恶性肿瘤发病率之首。所以能找到一种特定靶位的高效、低毒、特异性强的新型抗肿瘤药尤为重要。

生物活性肽（biologically active peptides）是指那些具有特殊生理活性的肽类，是世界上药物及保健品研究的热点，目前通过提取生产的活性肽主要来源于陆地的蛋白源，如牛乳酯蛋白、大豆蛋白、玉米醇溶蛋白等。海洋生物为了适应高盐、高压、低温、缺氧等极端的海洋生境，其蛋白质的氨基酸组成或序列都与陆地生物蛋白有很大的不同，在种类和数量上也远远超过陆地蛋白资源。近年来对海洋生物活性肽 ,特别是抗肿瘤活性肽的研究取得了很大进展。人们现如今所提取的抗肿瘤蛋白主要有从海鞘、海绵、软体动物、珊瑚中提取的环行多肽，从贝类、海参、乌贼墨等中提取的糖蛋白，还有从海藻、鲎、鲨鱼软骨中提取的多肽。但是由于海洋资源的开发利用较晚，海洋活性肽尚未形成规模产业，因此，借鉴陆地活性肽开发的酶工程技术，以海洋生物蛋白资源为原料，通过对酶解、

制备等工艺的综合研究，即可研制出陆地蛋白源和化学合成所无法生产的系列天然、高效、新颖的生物活性肽。

鱿鱼盛产于我国渤海、黄海等海域，现代研究表明，鱿鱼蛋白质含量较高，并含有丰富的维生素、微量元素及较高含量的不饱和脂肪酸，被作为防治动脉粥样硬化及预防高血压的保健食品。已有研究表明,鱿鱼蛋白提取物有抗肿瘤、抗衰老、抗病毒和抗菌等功能，具有增加机体免疫能力、降低血脂含量的功效。浙江海洋学院地处海岛，附近海域鱿鱼十分丰富，仅嵊泗县鱿鱼年产量就达5吨左右，样品采集方便，价格较低。长期以来，对于鱿鱼的开发利用以鲜品为主，部分被加工成为干品及罐装品，所有这些产品都未能使鱿鱼的药用价值得到利用。近年来，研究人员开始从鱿鱼中提取多糖、蛋白质、多肽等活性物质，试图开发利用其在疾病治疗与预防方面的功能，但是对于鱿鱼酸解多肽抗肿瘤的研究在国内外尚属空白。

二、研究的基本内容，拟解决的主要问题：

主要内容：

1. 酸解工艺部分：选取四种常见的酸，通过正交实验，确定鱿鱼的最佳酸解条件。本人对该部分的见解：首先，正交实验中各因素与水平的选择要合理；其次，实验号的选择要具有随机性；最后，为了尽可能的减少误差，每个实验号做三个平行实验，取其平均值。

2. 分离纯化部分：以抑制乳腺癌细胞增殖率以及在显微镜下观察的细胞形态为评价标准，通过超滤法、色谱层析等技术分离纯化出具有较强抗乳腺癌细胞增殖的酸解多肽。本人对该部分的见解：该部分的关键点是色谱柱平衡缓冲液及洗脱液的选择，洗脱流速及洗脱液的收集。

3.酸解物抗乳腺癌作用：选用HE染色法、MTT法、流式细胞术等技术方法，研究酸解多肽对乳腺癌细胞形态的影响、酸解多肽作用浓度对乳腺癌细胞增殖率及凋亡率的影响。本人对该部分的见解：本部分在三个部分当中具有重要的位置，该部分所采用的方法和技术是整个实验成败的关键，因为本研究的最终目的是分析酸解多肽抗乳腺癌细胞的作用，从而为将来抗肿瘤保健品和药品的开发提供理论和技术支持

4.采用mtt法培养肿瘤细胞，研究其抑制作用。

拟解决的主要问题：

1.酸解技术的研究。

2.分离纯化过程中超滤技术、层析技术、高效液相色谱等技术的研究。

3.凝胶电泳技术的研究。

4.细胞培养技术、HE染色技术、MTT法、流式细胞术。

三、研究步骤、方法及措施：

步骤：

1. 选用4种酸进行比较，考虑到酸提料液比、酸的种类、酸解温度及酸解时间对鱿鱼墨多肽的影响，最终确定酸解鱿鱼墨多肽的最佳条件。

2. 利用超滤法、凝胶层析法、离子交换层析法、反相高效液相色谱法等分离纯化出具有高效抗乳腺癌活性的酸解多肽。

3.鱿鱼墨多肽对SKBR3细胞的增值抑制研究。MTT法研究不同浓度的鱿鱼墨多肽对SKBR3细胞的增值抑制率， HE染色法后在显微镜下观察鱿鱼墨多肽作用后SKBR3细胞的形态。

措施：购买鱿鱼，提取分离出鱿鱼多肽粗提物，。分析各种因素对于对鱿鱼多肽提取量的影响。

四、参考文献

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毕业论文文献综述

药学

鱿鱼多肽对SKBR3细胞的增值抑制研究

摘要:鱿鱼墨多肽含丰富的维生素和矿物质，具有一定的生理活性，经研究发现多肽对肿瘤细胞还有一定的抑制作用，该实验就是针对SKBR3细胞的增值抑制研究，来说明对肿瘤细胞的抑制作用。

关键词:鱿鱼墨多肽;肿瘤细胞;生理活性

近几十年来，生物活性多肽抗肿瘤作用研究一直是国内外研究热点，已从多种陆地生物及海洋生物中分离出了抗肿瘤多肽，部分已应用于临床。海洋生物具有物种及活性物质富于多样性的特点，当前已被做为各国研究开发的热点，其中抗肿瘤活性物质的筛选进展迅速，大量具有抗肿瘤活性的多肽被分离出来[1-20]。而在活性多肽的提取方法上，目前的研究已越来越多地集中在蛋白酶解上[2]。

本文以检索项为“题名”，检索词为“活性肽、抗肿瘤”对中国期刊全文数据库、中国优秀硕士学位论文全文数据库和中国博士论文全文数库进行检索，共检索出35篇文章；以检索项为“题名”，检索词为“酸解”对中国期刊全文数据库、中国优秀硕士学位论文全文数据库和中国博士论文全文数据库进行检索，共检索到1586篇相关文献，其中大多数文献是有关酸解工艺的研究。英文文献在"ScienceDirect"网站检索，检索词为：hydrolysate and marine和antitumor and marine，其检索出2946篇文章。本文重点描述海洋生物抗肿瘤活性肽的研究现状，海洋生物蛋白酸解多肽的生物活性功能及分离纯化方法。

1 生物活性肽的抗肿瘤活性

生物活性肽是具有优化机体代谢环境、有益于机体健康的一类活性多肽。这类多肽的活性功能依赖于其分子量大小和氨基酸组成成份及排列顺序，它们通常作用于机体的消化系统、心血管系统、免疫系统和神经系统等多种生命代谢系统，最终起到提高机体免疫力、减少慢性疾病发生的作用。目前，从海洋中获得的抗肿瘤活性肽大多以天然存在于生物体内的活性肽为主，其宿主来源主要集中在海绵、海鞘、海藻、海兔、芋螺、海葵等生物中。

1.1海鞘多肽

目前从海鞘中分离出的活性肽大多为环状多肽,少数为线性肽类。自1980年从海鞘Lissoclinum patella中发现环肽Ulithiacyclamide以来,又从加利福尼亚海域及加勒比海群体海鞘Trididenum sp.中分离出3 种环肽Didemin A～C, 从Lissoclinum属海鞘中分离出环肽

Lissodinamide 4～8 ,从Lissoclinum bistratum属海鞘中分离得到环肽Bistratamide A,B[23]。

1.2海绵多肽

截止目前对海绵活性功能研究最多的主要集中于离海绵目、外射海绵目、石海绵目、软海绵目以及硬海绵目等海绵中的环状多肽，已分离出上百种的抗肿瘤多肽。如来源于Trididemnum solidum 的环肽Didemnin B对L1210白血病细胞的IC50为7. 5×10- 4 mg/ L , 临床研究结果表明它对非何杰金淋巴瘤(non-Hodykins) 和神经胶质母细胞具有较好抑制效果；Cycloxazoline 是来源于Lissoclinum bistratum 的环六肽, 具3个呈对称分布的恶唑啉环，对MRC5CV1成纤维细胞和T24膀胱癌细胞的IC50均为0. 5mg/ L；来源于Botryllus sp.二肽Caledonin 对KB细胞和P388细胞有弱细胞毒性[24]。

1.3鲨鱼软骨多肽

鲨鱼软骨中存在一类多肽, 能通过阻止肿瘤周围毛细血管生长而达到抑制肿瘤的作用,对肺癌、肝癌、乳腺癌、消化道肿瘤、子宫颈癌、骨癌等均有抑制作用。陈建鹤等2000年用盐酸胍抽提姥鲨软骨蛋白,采用超滤和分子筛柱层析等方法分离纯化获得新生血管抑制因子Sp8。Sp8 在体外能抑制血管内皮细胞增殖, 抑制新生血管生长, 体内能抑制小鼠移植S180肉瘤生长[25]。

2 酶解多肽的活性功能

饮食当中的生物活性肽常常以非活性状态存在于蛋白质的氨基酸序列中，通常以3种方式从宿主蛋白质中释放出来发挥活性功能，即肠道消化酶的消化作用、微生物的蛋白水解作用和外源性动植物以及微生物蛋白酶的水解作用[26]。根据文献报道[27]，生物活性肽一般由2到20个氨基酸残基组成，一种活性肽可以同时表现出多种活性功能。近几十年来，运用酶解方式从动植物蛋白中获取生物活性肽一直是国内外研究的热点[28-48]，如今酶解蛋白来源正从陆地生物向海洋生物转变，多种海洋生物蛋白被酶解，提取出了具有抗氧化、抗肿瘤、降血压、抗凝血等多种生物活性功能的多肽。

2.1 抗氧化活性肽

海洋生物蛋白酶解多肽抗氧化活性的相关报道很多。Song等[49]使用中性蛋白酶、碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶对毛蚶Arca subcrenata蛋白进行酶解，通过正交试验优化酶解条件，经测定各酶解液对DPPH和H2O2自由基的清除作用，证实在所选用的3种蛋白酶中，碱性蛋白酶酶解液对2种自由基的清除能力最强，EC50分别为6.23mg/ml和19.09mg/ml。Hsu等[50]从枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis中提取出一种肽链内切酶Orientase，用该酶酶解金枪鱼Thunnus tonggol蒸煮液,考查随着酶解时间的改变酶解物的抗氧化性能，结果证实，当酶解时间为60min 时，酶解物的抗氧化性能最强。将所获得的酶解物经SephadexG-25凝胶柱（2.5×50cm）和2

次高效液相色谱（RP-18(e)，4×250mm；RP-18，4.6×33mm)洗脱后，最终得到3个多肽组分，它们的氨基酸序列分别为：Pro-Val-Ser-His-Asp-His-Ala-Pro-Glu-Tyr、Pro-Ser-Asp-His-Asp-His-Glu和Val-His-Asp-Tyr，分子量分别是1305Da、938Da和584Da。经测定，这3个多肽均具有很好的抗氧化性。据该研究人员推测，3个多肽的抗氧化性能可能是由于存在His、Pro和Tyr的原故。Kim等[51]用胃蛋白酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、碱性蛋白酶及中性蛋白酶分别在各自最适酶解条件下对新西兰无须鳕Johnius belengerii的骨蛋白进行酶解，分别测定各酶解物对脂质过氧化的抑制作用，并采用电子自旋共振（Electron spin resonance）技术测定各种酶解物对DPPH自由基、羟基、过氧化氢自由基及超氧化物自由基的抑制作用，经比较分析证实，胃蛋白酶酶解物具有最强的抑制脂质过氧化及清除各自由基的作用。对该酶解物经超滤膜（截取分子量分别为10kDa、5kDa、3kDa和1kDa）、离子交换色谱（HiPrep14/10CMFF）、高效液相色谱（HPLC）（Capcell Pak C18 UG-120,20×250mm）分离纯化后，得到1种酶解多肽APHPH，经质谱分析，该肽的分子量为1801Da，氨基酸序列为Glu-Ser-Thr-Val-Pro-Glu-Arg-Thr-His-Pro-Ala-Cys-Pro-Asp-Phe-Asn。体外培养人胚肺成纤维细胞BRC-5，采用MTT法测定APHPH对t-BHP诱导的细胞毒作用，结果显示，MRC-5细胞存活率与APHPH的作用浓度成正相关，当浓度增加到55.5μM时，细胞的存活率达到91.1%。此外，为了进一步评价APHPH的抗氧化活性，该研究测定了APHPH对羟自由基诱导DNA 损伤的保护作用，在浓度为2.78-55.5μM范围内，APHPH对羟自由基诱导的DNA损伤的保护作用呈剂量依赖性。Bougatef等[52]收集沙丁鱼Sardinella aurita的头部和内脏等加工废弃物蛋白，使用来自于地衣芽孢杆菌Bacillus licheniformis和Bacillus licheniformis NH1的碱性蛋白酶、从棒曲酶Aspergillus clavatus ES1中制备的粗蛋白酶及从矶沙丁鱼Sardina pilchardus的内脏中提取的粗蛋白酶对该蛋白进行酶解，经测定，4种酶解物的酶解度和抗氧化活性不同，其中，从S.pilchardus内脏中提取的内源性蛋白酶酶解物抗氧化活性最强，当该酶解液的水解度为6%时，清除DPPH自由基的活性最大，为87±2.1%。对此酶解多肽经SephadexG-25凝胶柱（2.5cm×54cm）和反相高效液相色谱（RP-HPLC）（VydacC18，10mm×250mm）洗脱后得到7个抗氧化多肽，其中氨基酸序列为Leu-His-Tyr的多肽对DPPH自由基清除率最大，在浓度为150μg/ml时，清除率为63±1.57%。Qian等[53]用肠道消化酶（胃蛋白酶和胰蛋白酶）分别在最适酶解条件下对长牡蛎Crassostrea gigas进行酶解，经Hiprep16/14 DEAE FF阴离子交换柱和HPLC（Primesphere 10 C18，20mm×250mm；Synchropak RPP-100，10mm×250mm）纯化后，得到1个多肽组分，该肽分子量为1600Da，氨基酸序列为Leu-Lys-Gln-Glu-Leu-Glu-Asp-Leu-Leu-Glu-Lys-Gln-Glu，具有很强的抑制脂质过氧化和清除自由基的作用。经MTT法测定，该肽对人MRC-5细胞和鼠RAW264.7细胞都没有细胞毒性，

极具有作为食品添加剂及医药试剂应用的潜力。Byun等[54]分别用碱性蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶和胰蛋白酶等6种蛋白酶酶解海洋轮虫Brachionus rotundiformis,通过比较对DPPH自由基的清除能力来判断各蛋白酶酶解多肽的抗氧化活性，结果证实，在所选用的6种蛋白酶中，胃蛋白酶酶解多肽抗氧化能力最强，经Sephadex G-25(2.5cm ×70cm）、RP-HPLC（Grom-sil 120 ODS-5 ST,10mm×250mm）分离纯化后，得到2个具有较强清除DPPH自由基的多肽，EC50分别为189.8和167.7μM，氨基酸序列分别为Leu-Leu-Gly-Pro-Gly-Leu-Thr-Asn-His-Ala和Asp-Leu-Gly-Leu-Gly-Leu-Pro-Gly-Ala-His，分子量分别是1076Da和1033Da。Klompong等[55]用碱性蛋白酶和风味蛋白酶分别在各自最适反应条件下水解金带细鲹（Selaroides leptolepis），研究结果发现，随着水解度的增加，碱性蛋白酶酶解多肽清除DPPH自由基的能力降低(p<0.05），而风味蛋白酶解多肽对该自由基的清除能力没有发生明显改变（p>0.05)，但是2种蛋白酶酶解物对金属的鏊合能力与水解度的大小正相关且差异显著（p< 0.05），其中风味蛋白酶酶解物对金属的鏊合能力大于碱性蛋白酶。当水解度为5%时，碱性蛋白酶酶解多肽清除DPPH自由基的能力大于风味蛋白酶，而当水解度为25%时，出现相反的结果。因此，该研究作者认为，S. leptolepis蛋白酶解多肽的抗氧化能力的强弱是由所选择的酶及其水解度决定的。

2.2 抗高血压活性肽

高血压是一种世界性多发病，它提高了许多慢性病的发病风险，如动脉粥样硬化、中风、心肌梗塞、肾终末期疾病等[56]。血管紧张素转换酶（ACE）在血压调节中起到重要作用，它可以将无活性的血管紧张素I转换为具有强烈收缩血管作用的血管紧张素II，并且使血管扩张缓激肽失活，通过对该酶的抑制可以有效的降低血压[57]。当前临床上应用的ACE抑制药物多为人工合成，尽管这类药物降血压效果很好，但是副作用很多，因此，对于天然ACE抑制剂的研发成为近几十年来国内外研究的热点。

Wang等[58]首先使用硫酸胺沉淀法从牡蛎Crassostrea talienwhanensis Crosse组织中提取蛋白，用胃蛋白酶对该蛋白进行水解后，经超滤、Sephadex LH-20凝胶柱（2.7cm×80cm）和RP-HPLC（Hypersil BDS C18柱，4.6mm×210mm）分离纯化出具有ACE抑制活性的9肽，IC50为66μmol/ml，经质谱分析，该肽的氨基酸序列为Val-Val-Tyr-Pro-Trp-Thr-Gln-Arg-Phe，进一步研究发现，此肽对温度和PH值的变化具有稳定性，而且具有抵抗肠道消化酶消化的特性，具有很大的产品开发潜能。Wu等[59]从芽孢杆菌Bacillus sp. SM98011中提取蛋白酶SM98011，用此酶水解鲨鱼肉，经超滤、SephadexG-15凝胶柱（1.6cm×80cm）、RP-HPLC（HIQ Sil C18-20，10mm×250mm）分离纯化后，得到4个具有高效抑制ACE的2肽，它们的氨基酸序列分别为：Cys-Phe、Glu-Tyr、Met-Phe、Phe-Glu，相应的分子量分别为267Da、308Da、

295Da、294Da，对ACE抑制作用的IC50分别为1.98±0.1μM、2.68±0.12μM、0.92±0.05μM、和1.45±0.07μM。Zhao等[60]从海参Acaudina molpadioidea体壁中提取出凝胶质，用菠萝蛋白酶和碱性蛋白酶顺序进行水解，水解液经超滤、SP Sephadex C-25离子交换柱（16mm ×300mm）、Sephadex G-15凝胶柱（16mm×300mm）、RP-HPLC（Zorbax C18，1.0mm×250mm）纯化后得到1个分子量为840Da的多肽，该肽抑制ACE的IC50为0.0142mg/ml，对肾源性高血压的小鼠经口灌注1个月后，小鼠的收缩压与舒张压均明显下降。Je[61]等首先用碱性蛋白酶、中性蛋白酶和复合蛋白酶等3种肽链内切酶分别对金枪鱼Katsuwonus pelamis的肝脏进行酶解，然后再用1种肽链外切酶风味蛋白酶进行酶解，得到3种蛋白酶解物组分的分子量多在1000-3000Da范围内，并且都具有抑制ACE的活性功能。Zhao等[62]采用反复水提方法从A.molpadioidea体壁中提取出蛋白，首先用菠萝蛋白酶酶解，然后用碱性蛋白酶再次酶解，将酶解多肽经超滤膜（2kDa）、Sephadex G-25凝胶柱（1.6cm×30cm）、SP Sephadex C-25离子交换柱（2.6cm×30cm）、RP-HPLC（Zorbax C18，9.4mm×250mm）分离纯化，得到1个活性多肽，该肽抑制ACE的IC50为15.9μM，经肠道消化酶作用后活性增加，IC50减少到4.5μM。此外，将该肽作用于自发性高血压的小鼠后，具有明显的降低小鼠血压的作用。Tsai等[63]首先用热水法提取文蛤Meretrix lusoria肉组织中的活性成份，然后将提取后的残余部分用风味蛋白酶进行酶解，比较热水提取液与酶解液对ACE的抑制作用，IC50分别为1.090mg/ml和0.036mg/ml。对酶解多肽进行分离纯后得到1个氨基酸序列为Tyr-Asn的2肽，该肽对ACE 具有很好的抑制作用，IC50是0.015mg/ml。

3 结语

生物活性肽的提取方法正从直接提取天然活性肽向酶解蛋白获取活性肽转变，对于海洋生物蛋白酶解主要使用的蛋白酶有植物来源的蛋白酶、动物来源的蛋白酶及微生物来源蛋白酶，所使用多肽分离纯化方法主要有超滤法、离子交换层析法、分子筛交换层析法及反相高效液相技术，分离提取的活性多肽主要有抗氧化、抗高血压、抗血栓形成、抗肿瘤等多种活性功能。

近些年来，世界各国研究者对于海洋生物蛋白酶解多肽的研究已给予一定的关注，但与陆地来源的蛋白相比，相关研究还显得较为不足。对于酶解多肽的活性功能研究主要集中在抗氧化和抗高血压方面，而对于抗菌、抗肿瘤、抗病毒等活性功能方面的研究还颇少。研究范围较狭窄。海洋生物物种的多样性，使其蛋白来源比陆地生物蛋白更为丰富，而海洋环境的高压、高盐、低温等特殊环境的存在，又使其蛋白质的结构组成与陆地生物蛋白之间具有很大的区别，因此，对海洋生物蛋白活性物质的筛选对于各种功能药物及保健类食品的开发具有极其重要的意义。

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本科毕业论文

（20 届）

鱿鱼墨多肽对SKBR3细胞的增值抑制究

专业：药学

目录

摘要 (3)

关键词 (3)

ABSTRACT (4)

1 前言 (4)

2 实验材料、主要仪器与实验试剂 (5)

2.1 实验材料 (5)

2.2 主要实验仪器 (5)

2.3 实验试剂 (6)

3 试验方法 (6)

3.1 鱿鱼墨多肽提取工艺 (6)

3.2 鱿鱼墨多肽脱脂提取工艺 (6)

3.3 鱿鱼墨多肽酸法提取正交实验 (7)

3.4 MTT法测定细胞增值抑制率 (7)

3.4.1 细胞培养 (7)

3.4.2 细胞增值抑制率的测定 (7)

3.4.3 细胞形态学观察 (7)

4 研究结果与分析 (8)

4.1 正交实验及数据处理 (8)

4.2 鱿鱼墨多肽对SKBR3细胞增殖的作用 (8)

4.3 HE染色观察SKBR3细胞形态 (9)

5 小结 (11)

参考文献 (11)

致谢 (12)

附录Ⅰ英文翻译 (13)

附录Ⅱ中文翻译 (16)

鱿鱼墨多肽对SKBR3细胞的早期凋亡抑制研究

[摘要]目的：研究鱿鱼墨多肽对SKBR3细胞的早期凋亡抑制研究。方法：首先用酸法提取鱿鱼墨多肽，然后取在最佳酸解条件下的鱿鱼墨多肽用MTT法检测细胞增值抑制率，经HE染色后在显微镜下观察细胞形态。结果：鱿鱼墨多肽的最佳酸解条件是0.01 mol/L盐酸，酸提料液比1：2，酸解时间72h，酸解温度35°C。ml时，鱿鱼墨多肽对SKBR3有增值抑制作用并诱导SKBR3细胞凋亡。结论：鱿鱼墨多肽能破坏细胞结构，诱导乳腺癌SKBR3细胞凋亡。[关键词]鱿鱼墨多肽；SKBR3细胞；增值抑制

Squid ink peptides on SKBR3 cells of early

apoptosis

[Abstract]Objective :Of squid ink peptides on SKBR3 cells of early apoptosis. Methods: First, squid ink extraction with acid peptide, and then take the best under the conditions of acid hydrolysis peptides squid ink detected by MTT cell proliferation inhibition by HE staining and cell morphology was observed under the microscope. Results: The best acid peptide squid ink solution conditions 0.01 mol / L hydrochloric acid, liquid ratio of 1:2 acid extracted, acid hydrolysis time of 72h, acid hydrolysis temperature 35 ° C. ml, squid ink value-added peptides on the inhibition of SKBR3 and SKBR3 cells induced apoptosis. Conclusion: The squid ink can damage the cell structure of peptides and induce apoptosis of breast cancer SKBR3 cells

[Key words]Squid ink; Extracted peptides; Anti-tumor activity

1前言

鱿鱼，属软体动物门，头足纲，二鳃亚纲，十腕目，广泛分布于大西洋、印度洋和太平洋各海区，是重要的海洋经济头足类[1]。近年来，随着鱿鱼钓船只数量和吨位的不断增加，以及鱿钓技术的逐渐成熟，鱿鱼成为国内主要的远洋渔捞品种，成为我国重要的水产加工原料。

近几十年来，生物活性多肽抗肿瘤作用研究一直是国内外研究热点，已从多种陆地生物及海洋生物中分离出了抗肿瘤多肽，部分已应用于临床[2]。海洋生物具有物种及活性物质富于多样性的特点，当前已被做为各国研究开发的热点，其中抗肿瘤活性物质的筛选进展迅速，大量具有抗肿瘤活性的多肽被分离出来[3]。而在活性多肽的提取方法上，目前的研究已越来越多地集中在蛋白酶解上。

海洋是一个巨大的天然产物宝库，占地球表面积71%。据估计约有50余万种动物和13000余种植物栖息于海洋环境之中，海洋生物物种远高于陆地生物。生长在海洋特殊环境(高盐、高压、缺氧、缺少光照等)中的海洋生物，在其生长和代谢过程中，产生大量具有特殊化学结构特殊生理活性功能的物质[4]。21世纪人类社会面临着“人口剧增、资源匮乏、环境恶化”三大问题的严峻挑战。随着陆地资源的日益减少，开发海洋，向海洋索取资源变得日益迫切，而开发海洋药物已迫在眉睫。

近年来,国外出现大量涉及药物、食品、功能食品、化妆品、酶制剂、生物工具药方面的海洋天然产物专利产品。海洋活性物质的药理活性作用主要包括影响中枢神经、抗肿瘤、抗菌抗病毒、心脑血管系统、抗炎、镇痛、抗氧化、降血糖等作用,许多化合物具有新药开发潜力[5]。国际上已投入应用的经典海洋药物有头孢霉素、阿糖腺苷、阿糖胞苷等,这些也是最早开发成功的现代海洋药物,现正广泛用于临床。近年来开发成功的典型药物是来源于印度-太平洋竽螺的镇痛药物Ziconotide，其前体化合物是竽螺的肽类毒素ω-contoxin,是一种可通过合成获得的药源，该药于2000年6月获得美国FDA证书,显示了广阔的应用前景。目前国际上有约20种海洋天然产物或其结构类似物正在临床研究阶段，多为抗癌药物。更多的化合物则处于临床前研究阶段。

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，其发病率在我国女性恶性肿瘤中居第二位，且呈明显上升的趋势，尤其在一些沿海发达地区，如上海市，其发病率在2000年已跃居女性恶性肿瘤发病率之首[6]。因此，研究鱿鱼类动物的抗乳腺癌的活性功能，对海洋药物的开发利用具有重大意义，对新型的高效、低毒的抗癌药物的开发也具有很大的意义。

2 实验材料、主要仪器与实验试剂

2.1 实验材料

将鱿鱼里的黑囊取出，经高速捣碎机捣碎，收取墨汁，贮藏在-20℃待用。

2.2 主要实验仪器

实验仪器

仪器名称型号厂家

容量瓶10mL，50mL，100mL 中国医药（集团）上海化学试剂公司量筒10mL，100mL，250mL 中国医药（集团）上海化学试剂公司圆底烧瓶50mL，1000mL 中国医药（集团）上海化学试剂公司超声波清洗器KS-80D

培养箱DHP-9032

电子天平JY3001 上海民侨精密科学仪器有限公司

电子天平BS110S 北京赛多利斯天平有限公司

电热恒温鼓风干燥箱DGC-9140A 上海森信实验仪器有限公司

电热恒温鼓风干燥箱DHG-9053A型上海惊宏实验设备有限公司

恒温磁力搅拌器85-2 常州国华电器有限公司

超净工作台SW-CJ-IBU 苏州净化设备有限公司

台式离心机TG16-WS 长沙湘智离心机仪器公司

精密pH计pHS-250 上海精密科学仪器有限公司

恒温水浴锅SSW-420-2S 上海一恒科学仪器有限公司

低温离心机TG16-WS 长沙湘智离心机仪器有限公司

冷冻干燥机LGJ-18 北京松源华兴科技发展有限公司

高速冷冻离心机CF16RXⅡ日本日立

海尔冰箱BCD-215DC 青岛海尔股份有限公司

旋转蒸发仪RE-2000A 上海亚荣生化仪器厂

倒置显微镜日本OLYMPUS公司

酶标仪美国Bio-Rad公司

2.3实验试剂

实验试剂

试剂名称规格生产厂家

甲醇分析纯国药集团化学试剂有限公司盐酸化学纯国药集团化学试剂有限公司柠檬酸化学纯中国上海试剂总厂

醋酸化学纯国药集团化学试剂有限公司甲醛化学纯国药集团化学试剂有限公司

无水乙醇分析纯国药集团化学试剂有限公司

氢氧化钠化学纯国药集团化学试剂有限公司2—水磷酸氢钠分析纯国药集团化学试剂有限公司12—水磷酸氢二钠分析纯国药集团化学试剂有限公司MTT 美国SIGMA公司

3实验方法

3.1鱿鱼墨多肽提取工艺

将预处理过的鱿鱼墨取10.0mL，与适量的酸提料比，在一定时间和温度下净提，最后对净提液离心得到的清夜即为多肽粗品。

3.2鱿鱼墨多肽脱脂提取工艺

将预处理过的鱿鱼墨取10.0mL，与适量的酸提料比，再加适量丙酮，在一定时间和温度下净提，最后对净提液离心得到的清夜即为多肽粗品[7-8]。

3.3鱿鱼墨多肽酸法提取正交实验

表 1 因素水平表

水平

因素

酸的种类酸料液比酸解时间（h）酸解温度（°C）

1 0.01 mol/L盐酸1:

2 48 35

2 0.5 mol/L柠檬

酸

1:3 72 45

3 0.5 mol/L醋酸1:

4 96 55

在100.00ml容量瓶中加入20.00g的样品溶液，定容，混匀，吸取20.00ml置于200.00ml 烧杯中，加60.00ml蒸馏水，在不断搅拌下用0.05mol/L的NaOH标准溶液滴定至pH8.2，记录消耗NaOH的mL数；再加入10.0mL浓度为20%的中性甲醛，混匀。用上述NaOH标准溶液继续滴定至pH9.2,记录消耗NaOH标准溶液的mL数，同时取等量蒸馏水做试剂空白实验[9]。

氨基态氮含量计算:X=（V1- V2）×C×0.014×100/(5×V)

式中： V1为样品稀释液在加入甲醛以后滴定至终点(pH=9.2 )所消耗的NaOH标准溶液的体积；V2为空白实验加入甲醛后滴定至终点所消耗的NaOH标准溶液的体积；C为NaOH标准溶液的浓度；0.014为氮的毫摩尔质量；

3.4MTT法测定细胞增值抑制率

3.4.1细胞培养

选取乳腺癌SKBR3细胞（原购自中科院上海细胞库，由本实验室传代保存），用含10%

小牛血清的RPMI1640完全培养基于5%CO2，37℃培养箱中培养至对数生长期[10]。

3.4.2细胞增值抑制率的测定

采用MTT法进行检测。配制浓度分别为5 mg/mL、10 mg/mL、15 ml/mL、20 mg/mL、25 mg/mL、

30 mg/mL的鱿鱼墨多肽溶液。取对数生长期的细胞制成悬液，接种至96孔板，每孔200.00μL，于5% CO2，37 ℃培养24h,弃去培养液，加入不同浓度多肽，对照组置同环境下培养24h，吸弃培养液，加入1mg/mL MTT200.00μL继续培养4h,弃去培养液，加DMSO150μL,震荡，置酶联免疫检测仪在490 nm测吸光度，计算细胞增殖抑制指数（IR），按下列公式计算[11]。

IR=[(未加药组值—加药组值)/（未加药组值—空白组值）]×100%

3.4.3细胞形态学观察

用洁净的盖玻片，70%乙醇中浸泡后，用无菌的镊子放置到6孔板内，然后用无菌的生理盐水、PBS或培养液洗去残留的乙醇。然后种入H1299细胞进行培养，再加入提取物，培养48小时，待细胞贴在盖玻片上生长良好后，即可进行固定等后续操作[12-13]。

用HE染色法进行染色[14]。将细胞生长良好的盖玻片放入培养皿中，倒入95%的酒精，固定15min，用PBS清洗二次，每次1min；把盖玻片浸入苏木素染色液，染色5—10min，再用自来水浸洗，自来水冲洗，使细胞核蓝化；把盖玻片浸入伊红染液中，染色0.5—1min，自来水浸洗；经梯度50%—100%酒精脱水，各5min；把盖玻片放入二甲苯透明3次，各1min，用吸水纸吸干液体；中性树胶封片[15]。

4研究结果与分析

4.1正交实验及数据处理

实验采用酸的种类、酸提料液比、酸解时间、酸解温度4个因素，每个因素取3个水平，将处理后的鱿鱼墨置室温下，每份取10.0mL鱿鱼墨在不同条件下反应，结果见表2。

表 2 影响鱿鱼墨多肽提取的L9（34）实验结果分析表

实验号

因素氨基

态氮

(g/100ml) 酸的种类酸提料液比酸解时间

（h）

酸解温度

（℃）

1 0.01mol/L盐酸1:

2 48 35 0.3618

2 001 mol/L盐酸1:

3 72 45 0.2953

3 0.01 mol/L盐

酸1:4 96 55

0.1973

4 0.50mol/L柠檬

酸1:2 72 55

0.2693

5 0.50mol/L柠檬

酸1:3 96 35

0.2275

6 0.50mol/L柠檬

酸1:4 48 45

0.1959

7 0.5 0mol/L醋

酸1:2 96 45

0.3144

8 0.5 0mol/L醋1:3 48 55

0.1757

9

0.50 mol/L 醋酸 1:4 72 35 0.2241 k1

0.8544 0.9455 0.7334 0.8134 — k2

0.6927 0.8375 0.7887 0.8056 — k3

0.7142 0.6173 0.7392 0.6423 — R

0.1617 0.3288 0.0553 0.1711 —

从表2中的极差R 值可以看出，影响酸法提取鱿鱼墨多肽的各因素的主次顺序为酸提

料液比> 酸解温度> 酸的种类> 酸解时间。即酸提料液比是酸法提取鱿鱼墨多肽条件中影响最大的因素，而酸解时间的对提取鱿鱼墨多肽的影响最小。用酸法提取鱿鱼墨多肽最佳条件是0.01 mol/L 盐酸，酸提料液比1：2，酸解时间72h ，酸解温度35°C。

4.2鱿鱼墨多肽对SKBR3细胞增殖的作用

不同浓度的鱿鱼墨多肽作用于SKBR3细胞24h ，MTT 法测定其对细胞增值抑制率，结果显示鱿鱼墨多肽对SKBR3细胞有显著的增值抑制作用，且随着鱿鱼墨多肽浓度的增加，抑制率逐渐升高，存在明显的剂量依赖性（见表3，图1）。

表 3 鱿鱼墨多肽对SKBR3细胞的增值抑制作用

Group

content （mg/ml ） OD(x ±s) Inhibit rate （%） 0

0 0.227±0.018 __ 1

5mg/ml 0.197±0.019 13.223 2

10mg/ml 0.211±0.010 32.112 3

15mg/ml 0.230±0.009 44.659 4

20mg/ml 0.199±0,010 56.379 5

25mg/ml 0.223±0.018 64.550 6

30mg/ml 0.224±0.020 77.225

鱿鱼墨多肽对SKBR3细胞增长的抑制率

0.00

20.00

40.0060.0080.00100.00120.0051015202530

content(mg/ml)

I n h i b i t r a t e (%)

图 1 鱿鱼墨多肽对SKBR3细胞增殖抑制的量效关系

4.3 HE染色观察SKBR3细胞形态

显微镜下观察，对照组细胞呈多边形，细胞核大小不一，呈圆形或卵圆型，核分裂相多，核仁数目多，核浆比例高。鱿鱼墨多肽作用后可见细胞形态不规则，异型性明显，部分细胞质出现大小数目不等的空白，核仁数目减少，细胞轮廓模糊，细胞质碱性降低，巨核细胞增多，染色质凝聚，核固缩(图2)。

A

B

C

图 2 鱿鱼墨多肽作用SKBR3细胞形态（24h）HE染色×200

A、对照组；

B、用鱿鱼墨多肽10 mg/ml，细胞形态不规则，出现早期凋亡现象；

C、用鱿鱼墨多肽20 mg/ml，异型性明显，部分细胞质出现大小数目不等的空泡，染色质凝聚，细胞核固缩，细胞凋亡明显；

图3-4用鱿鱼墨多肽30 mg/ml，核仁数目减少，细胞轮廓模糊，细胞质碱性降低，核固缩，细

细胞生物学课程论文

无限增殖的小鼠胚胎成纤维细胞系胰高血糖素样免疫反应的 建立及特性描述 XXX 湖北师范学院生命科学学院生物科学专业 1101班 201111XXXXXXX 摘要 1.背景: Hh信号是一种保守的形态形成通路,它在胚胎发育中扮演至关重要的角色,新兴的证据也支持这一角色在治疗和修复过程以及肿瘤发生中的作用。胰高血糖素样免疫反应性家族的转录因子(Gli1,2和3)通过调节下游靶基因的表达来调解刺猬形态形成的信号。我们以前用来自小鼠胰高血糖素样免疫反应性的一系列胚胎成纤维细胞来描述Gli蛋白在Hh目标基因调节中的个体与合作的角色。 2.结果: 本文中,我们描述了缺乏单个和多个Gli基因自发地无限增值的老鼠胚胎成纤维(iMEF)细胞系的建立。这些非无性繁殖系的细胞系概括了独特的配体介导的转录响应早期的MEFs。然而许多Gli1对目标基因的诱导不起作用,已发现的Gli2空细胞会减弱目标基因的感应而Gli3空细胞表现出提高基底部并促进配体诱导的表达。在Gli1 - / 2 - / - iMEFs中的目标基因反应严重地降低而Gli2 - / 3 / - iMEFs 不能引发转录反应。然而,我们发现Gli1 / 2 - / -和Gli2 / 3 - / - iMEFs对Hh配体都表现出强劲的白三烯依赖性的综合迁移,这证明了这种反应不是依赖性的转录。

3.结论: 本研究提供了一系列Gli-null iMEFs转录和非转录的Hh反应的基本特征。向前推移,在Hh 反应程控中，这些细胞系被证明是一套有价值的工具，用来研究独特功能的调控。 背景 对于多种多样的生物过程，包括发育模式和器官形成，Hh信号通路是一个至关重要的调控子。这条路径从上游的Hh配体结合起始，到跨膜转运受体的碎片蛋白(Ptc1)。这减轻了碎片蛋白介导对Smoothened(Smo)的抑制,引发了复杂的下游信号级联(综述[1]]。Gli1和Ptc1是保守的Hh目标基因并且其表达水平被认为是路径活动的可靠指标。大多数Hh信号介导的生物学效应似乎都是通过Hh目标基因的转录调控被调节的,就连最近的一个非转录反应也被确定[2、3]。 在确定Hh在生长和组织与器官的形态发生中发放信号的角色时，空小鼠模型是至关重要的。在探索在通路调节中个体Hh信号介质的功能时，这些模型也被证明是很有价值的。在细胞分析中,Gli1的过度表达已经被发现可以诱导Hh目标基因的表达。小鼠的Gli1 发育正常的这一发现,推断Gli1的功能对于正常发育是可有可无的[4]。小鼠的Gli2 表现出神经管缺陷并且证明减退的Hh目标基因表达在几个组织中[5 - 7]。它支持来自基于细胞分析的研究结果[8]，即把Gli2的功能作为一个关键的目标基因的激活剂。对于Gli3空小鼠，在来自于野生型的器官中，增加的目标基因的表达暗示，Gli3的功能是抑制转录。

牙髓干细胞 研究进展综述

牙髓干细胞 1牙髓干细胞概念 牙髓组织位于牙齿内部的牙髓腔内，是牙体组织中唯一的软组织。2000年Gronthos[1]等通过对人牙髓细胞的研究，发现了一种与骨髓间充质干细胞有着极其相似的免疫表型及形成矿化结节能力的细胞，细胞中形态呈梭形，可自我更新和多向分化，有着较强的克隆能力。这些由牙髓组织中分离出的成纤维状细胞就称为牙髓干细胞(Dental Pulp Stem Cells,DPSCs)。现在普遍认为牙髓组织中具有形成细胞克隆能力和较强增殖能力的未分化间充质细胞即DPSCs[2]。 2牙源性干细胞 至今，已从人类牙齿相关组织中分离和鉴定出7种干细胞: (1)牙髓干细胞(dental pulp stem cell,DPSC)[1]，来自恒牙牙髓；张巍巍等[3]以人牙髓干细胞为种子细胞与PLGA支架材料在体外进行复合培养，表明PLGA 有利于于牙髓干细胞的粘附与增值。Lindroos等[4]得到DPSC与其他间充质源性干细胞具有相似的表面标志物和骨相关性的标志物的结论，支持DPSC在硬组织再生方面的可能性。从成人第三磨牙牙髓中分离的DPSC在适宜的条件下可诱导分化为有功能活性的神经细胞，并在基因和蛋白水平表达神经组织专有的标志物[5]，为治疗神经系统方面的疾病提供了新的途径。DPSCs不表达成牙本质细胞特征性蛋白DSP、DMP，则表明DP-SCs尚处于未分化状态[6]。我国学者通过对根髓和冠髓进行比较时发现：DPSCs 存在于全部牙髓之中,在根髓中的密度更高[7]。 (2)人类脱落乳牙牙髓干细胞(stem cell from the pulp of human exfoliated deciduous teeth, SHED),来自儿童脱落乳牙的牙髓;Miura等[8]研究发现，正常脱落的乳牙牙髓中的细胞经培养会表现出成纤维细胞样生长，其增殖率和群体倍增数均比骨髓基质干细胞(BMMSC)、DPSCs高，于是首次提出了SHED的概念。Shen YY等[9]发现SHED在体外培养过程中可以表达成骨细胞的标志，如RUNX-2、OCN、BSP，表明SHED在体外可以分化为成骨细胞;将SHED与人类牙齿切片复合后，在体外培养或是植入免疫缺陷小鼠皮下，均表达成牙本质细胞分化的标志( DSPP，DMP-1，MEPE)[10]。一系列实验表明SHED在体内只能诱导宿主细胞分化为成骨细胞[11]，而其自身无法分化为成骨细胞，但在体外培养过程中却可以分化为成骨细胞。SHED 可能还具有参与机体的免疫调节等功能[12]。李丽文[13]等用不同密度接种培养DPSCs,计算细胞产量、倍增次数, 观察细胞形态、检查克隆形成率和钙结节形成能力的方法得到，1.5～3cells/cm2低密度接种培养DPSCs 有利于细胞快速扩增,扩增后的细胞保持较高的增殖和分化潜能。SHED 的增殖能力、克隆形成效率和钙结节形成能力均优于DPSCs。 (3)根尖乳头干细胞(stem cell from the apical papilla,SCAP)[14,15]，来自牙根发育未完成的根尖乳头；Abe等[16]从人年轻第三磨牙根末端分离根尖周牙乳头，并采用酶消化法从中分离出细胞进行研究，结果发现这种细胞在低密度下培养时，

细胞生物学论文格式

细胞生物学 课程论文 题目鸡胚成纤维细胞原代培养及应用 班别生物技术101班学号 10114040132 姓名林海州 成绩

鸡胚成纤维细胞原代培养及应用 摘要:原代培养是指在体外模拟体内生理环境,使从体内取出的组织细胞生存、生长和传代,并维持原 有组织细胞的结构和功能特性。鸡胚成纤维细胞具有相对容易获得、增殖能力强、适应性强、良好的耐受性、 性状比较稳定等特点,使得其被广泛地应用于分子和细胞生物学研究的许多方面。论文综述了近年来有关 鸡胚成纤维细胞的培养技术,如鸡胚的取材、细胞的分离、纯化和培养,同时介绍了应用进展和未来研究方 向。 关键词:鸡胚成纤维细胞;原代培养;分离;纯化 1.前言 原代细胞培养因具有细胞刚刚离体,生物性状尚未发生很大变化,具备二倍体的遗传性、来源方便等优点而广泛应用于病毒学、细胞分化、药物测试等试验中。在禽类原代细胞培养中,鸡胚成纤维细胞(chicken embryo fibroblast , CEF) 得到普遍应用。CEF 的培养是在一定的条件下,在体外模拟体内生理环境,使从体内取出的成纤维组织细胞生存、生长和传代,并维持原有组织细胞的结构和功能特性。早年的组织培养工作者,如Carrel 等曾用鸡胚做过大量研究工作。与其他细胞相比,CEF 相对容易获得,而且增殖能力强,适应性强,具有良好的耐受性,性状比较稳定,不易发生转化。正是具备以上的特点,使得其被广泛地应用于分子和细胞生物学的研究的许多方面。 2 鸡胚成纤维细胞的制备 2. 1 取材 CEF 细胞的制备一般选用9 日龄～11 日龄的SPF 鸡胚,鸡胚日龄不宜过大,否则剪碎组织时候较为困难,而且杂细胞也会较多。可参考的方法是,分别用碘酒和酒精棉由鸡

细胞研究进展概述

细胞研究进展概述——干细胞技术 20092358 谢芬霏16120901 生物技术 摘要：干细胞是人体及各种组织细胞的最初来源，具有高度自我复制、高度增殖和多项分化的潜能。干细胞的研究正在向现代生命科学和医学等各个领域交叉渗透，干细胞的研究也成为了生命科学的热点，本篇就几个干细胞的研究方向的进展展开一些介绍。 关键词：干细胞；多能性；神经干细胞；造血干细胞 引言： 干细胞是一类具有自我复制能力的多潜能细胞，在一定条件下，它可以分化成多种功能细胞。根据干细胞所处的发育阶段分为胚胎干细胞(embryonic stem cell，ES细胞)和成体干细胞(somatic stem cell)。根据干细胞的发育潜能分为三类：全能干细胞(totipotent stem cell,TSC)、多能干细胞（pluripotent stem cell）和单能干细胞（unipotent stem cell）。干细胞(Stem Cell)是一种未充分分化，尚不成熟的细胞，具有再生各种组织器官和人体的潜在功能，医学界称为“万用细胞”。干细胞的形态上具有共性，通常呈圆形或椭圆形，细胞体积小，核相对较大，细胞核多为常染色质，并具有较高的端粒酶活性。胚胎干细胞(Embrtibuc stem cell)的发育等级较高，是全能干细胞（Totipotent stem cell），而成体干细胞的发育等级较低，是多能干细胞或单能干细胞。据最新研究发现，成体干细胞可以横向分化为其他类型的细胞和组织，为干细胞的广泛应用提供了基础。在胚胎的发生发育中，单个受精卵可以分裂发育为多细胞的组织或器官。在成年动物中，正常的生理代谢或病理损伤也会引起组织或器官的修复再生。胚胎的分化形成和成体组织的再生是干细胞进一步分化的结果。胚胎干细胞是全能的，具有分化为几乎全部组织和器官的能力，而成体组织或器官内的干细胞一般认为具有组织特异性，只能分化成特定的细胞或组织。 1 胚胎干细胞 1.1 胚胎干细胞的概念和生理学特性 胚胎干细胞（Embryonic Stem cell，ES细胞）。胚胎干细胞当受精卵分裂发育成囊胚时，内层细胞团（Inner Cell Mass）的细胞即为胚胎干细胞。胚胎干细胞具有全能性，可以自我更新并具有分化为体内所有组织的能力。胚胎干细胞的生物学特性有：①全能性，在体外培养的条件下, 胚胎干细胞可以诱导分化为机体的任何组织细胞。全能性的标志是细胞表面有胚胎抗原和Oct4蛋白【1】。②无限增殖性。胚胎干细胞在体外适宜条件下, 能在未分化状态下无限增殖。③胚胎干细胞具有种系传递的功能。④胚胎干细胞易于进行基因改造操作。⑤细胚胎干胞保留了正常二倍体的性质且核型正常。早在1970年Martin Evans已从小鼠中分离出胚胎干细胞并在体外进行培养【2】，而人的胚胎干细胞的体外培养直到最近才获得成功。进一步说，胚胎干细胞（ES细胞）是一种高度未分化细胞。它具有发育的全能性，能分化出成体动物的所有组织和器官，包括生殖细胞。研究和利用ES细胞是当前生物工程领域的核心问题之一。ES细胞的研究可追溯到上世纪五十年代，由于畸胎瘤干细胞（EC细胞）的发现开始了ES细胞的生物学研究历程。目前许多研究工作都是以小鼠ES细胞为研究对象展开的，如：德美医学小组在去年成功的向试验鼠体内移植了由ES细胞培养出的神经胶质细胞。此后，密苏里的研究人员通过鼠胚细胞移植技术，使瘫痪的猫恢复了部分肢体活动能力。随着ES细胞的研究日益深入，生命科学家对人类ES细胞的了解迈入了一个新的阶段。在98年末，两个研究小组成功的培养出人类ES细胞，保持了ES细胞分化为各种体细胞的全能性。这样就使科学家利用人类ES细胞治疗各种疾病成为可能。然而，人类ES 细胞的研究工作引起了全世界范围内的很大争议，出于社会伦理学方面的原因，有些国家甚至明令禁止进行

干细胞研究发展历程.

1950：将骨髓细胞移植到遭受致死剂量辐射的动物，发现能够挽救生命，重建骨髓造血免疫系统 1960：真正认识和了解人和哺乳动物干细胞始于20世纪60年代 1961：Till 和Mc Culloch 提出多能干细胞概念 1967：多纳尔–托马斯完成第一例骨髓移植，后于1990年获得诺贝尔医学和生理学奖 1980：造血干细胞移植成为治疗多种疾病的重要手段 1981：Evans等首次成功建立小鼠胚胎干细胞系 1981：胚胎干细胞（embryonic stem cell，ES细胞）的分离和培养首先在小鼠中获得成功 1988：美国科学家James Thomson分离出人类胚胎干细胞 1998：美国两个科研小组分别报告从胚胎和生殖脊成功建立人类胚胎干细胞系，使人类胚胎干细胞能在体外生长和增殖 同年，美国科学家在《美国科学院院刊》上报告：小鼠肌肉组织的成体干细胞可以“横向分化为血液细胞”。此后，世界各国科学家相继证实，包括人类的成体干细胞具有可塑性，从而掀起了全球成体干细胞研究高潮。干细胞研究进展被《科学》杂志评选为该年度世界十大科学成就之首。人类ES (hES)细胞建系获得成功，由此推动了干细胞研究的兴起。 2000： 日本把以干细胞工程为核心技术的再生医疗列为“千年世纪工程”之一，当年投资108亿日元；同年，全世界有10622例造血干细胞移植。 成体干细胞移植使糖尿病大鼠恢复正常 神经干细胞能够进入脑组织并修复脑损伤 角膜干细胞有助于恢复视力 发现成人骨髓干细胞形成肝细胞 成人骨髓干细胞可以在合适的条件下转化为神经细胞 成人骨髓干细胞可以在体外大规模培养 证实成人骨髓干细胞可以形成多种类型组织

毕业设计论文开题报告模板以及范文.docx

毕业论文开题报告模板范文 [1]毕业论文开题报告 开题报告是指开题者对科研课题的一种文字说明材料。这是一种新的应用写作文体，这种文字体裁是随着现代科学研究活动计划性的增强和科研选题程序化管理的需要应运而生的。开题报告一般为表格式，它把要报告的每一项内容转换成相应的栏目，这样做，既便于开题报告按目填写，避免遗漏；又便于评审者一目了然，把握要点。 开题报告包括综述、关键技术、可行性分析和时间安排等四个方面。 开题报告作为毕业论文答辩委员会对学生答辩资格审查的依据材料之一。 由于开题报告是用文字体现的论文总构想,因而篇幅不必过大,但要把计划研究的课题、如何研究、理论适用等主要问题。 开题报告的总述部分应首先提出选题,并简明扼要地说明该选题的目的、目前相关课题研究情况、理论适用、研究方法。 开题报告是由选题者把自己所选的课题的概况(即"开题报告内容")，向有关专家、学者、科技人员进行陈述。然后由他们对科研课题进行评议。亦可采用"德尔菲法"评分；再由科研管理部门综合评议的意见，确定是否批准这一选题。开题报告的内容大致如下：课题名称、承担单位、课题负责人、起止年限、报名提纲。报名提纲包括： (1)课题的目的、意义、国内外研究概况和有关文献资料的主要观点与结论； (2)研究对象、研究内容、各项有关指标、主要研究方法(包括是否已进行试验性研究)； (3)大致的进度安排； (4)准备工作的情况和目前已具备的条件(包括人员、仪器、设备等)； (5)尚需增添的主要设备和仪器(用途、名称、规格、型号、数量、价格等)； (6)经费概算； (7)预期研究结果； (8)承担单位和主要协作单位、及人员分工等。 同行评议，着重是从选题的依据、意义和技术可行性上做出判断。即从科学技术本身为决策提供必要的依据。 [2]如何撰写毕业论文开题报告 开题报告的基本内容及其顺序：论文的目的与意义；国内外研究概况；论文拟研究解决的主要问题；论文拟撰写的主要内容（提纲）；论文计划进度；其它。 其中的核心内容是“论文拟研究解决的主要问题”。在撰写时可以先写这一部分，以此为基础撰写其他部分。具体要求如下： 1．论文拟研究解决的问题 明确提出论文所要解决的具体学术问题，也就是论文拟定的创新点。 明确指出国内外文献就这一问题已经提出的观点、结论、解决方法、阶段性成果、……。 评述上述文献研究成果的不足。 提出你的论文准备论证的观点或解决方法，简述初步理由。 你的观点或方法正是需要通过论文研究撰写所要论证的核心内容，提出和论证它是论文的目的和任务，因而并不是定论，研究中可能推翻，也可能得不出结果。开题报告的目的就是要请专家帮助判断你所提出的问题是否值得研究，你准备论证的观点方法是否能够研究出来。 一般提出3或4个问题，可以是一个大问题下的几个子问题，也可以是几个并行的相关问题。

细胞生物学论文

细胞生物学概述 摘要：细胞生物学是以细胞为研究对象，从细胞的整体水平、亚显微水平、分子水平等三个层次，（斯。诺。美。A11-走在生物医学的最前沿）以动态的观点，研究细胞和细胞器的结构和功能、细胞的生活史和各种生命活动规律的学科。细胞生物学是现代生命科学的前沿分支学科之一，主要是从细胞的不同结构层次来研究细胞的生命活动的基本规律。从生命结构层次看，细胞生物学位于分子生物学与发育生物学之间，同它们相互衔接，互相渗透。 英文摘要：Cell biology is to cell as the research object, from the three levels of the overall level of the sub microscopic level, cells, molecular level (,. Connaught. Beauty. A11- in the forefront of biomedical) from the dynamic point of view, the structure and function of cells, cell and organelle of the life history and various life activities of the discipline. Cell biology is one of the frontier branch of modern life science, mainly is the basic rule to study cell from different hierarchy of life activities of cells. From the life structure and arrangement, and developmental biology is located between cell biology molecular biology, their mutual connection, mutual penetration. 关键字：细胞学说显微技术遗传物质 前言：细胞是生命的基本单位，细胞的特殊性决定了个体的特殊性，因此，对细胞的深入研究是揭开生命奥秘、改造生命和征服疾病的关键。在我国基础学科发展规划中，细胞生物学与分子生物学，神经生物学和生态学并列为生命科学的四大基础学科。 主体：细胞生物学(cell biology)是研究细胞结构、功能及生活史的一门科学。现代细胞生物学从显微水平，超微水平和分子水平等不同层次研究细胞的结构、功能及生命活动。细胞生物学是现代生命科学的前沿分支学科之一，主要是从细胞的不同结构层次来研究细胞的生命活动的基本规律。从生命结构层次看，细胞生物学位于分子生物学与发育生物学之间，同它们相互衔接，互相渗透。一、细胞生物学简史 从研究内容来看细胞生物学的发展可分为三个层次，即显微水平、超微水平和分子水平。i从时间纵轴来看细胞生物学的历史大致可以划分为四个主要的阶段：

细胞生物学在药学方面的研究综述

细胞生物学在药学方面的研究综述 摘要：细胞是生命的基础，一切生命问题的真正解决都必须在细胞中得到真正解决。细胞生物学所面临的主要任务是探索药物在细胞中的作用机制，理解新的药物靶标的细胞学基础。细胞生物学采用现代细胞生物学的原理与技术，通过揭示细胞生命活动的本质，在细胞与分子水平研究药物的吸收、转运与作用机制，来解决新药筛选，细胞工程制药等方面的难题。 关键词：细胞生物学药物筛选制药 1.新药筛选 1.1细胞周期与抗肿瘤药物 癌症的进展涉及无休止的基因突变，并通过进化选择成为最具侵袭性的肿瘤表型。这些基因突变形成了癌症的几种特质：漠视增殖、分化停止信号的存在；具备无限增殖的能力；逃避凋亡；侵袭性；新生血管生成的能力。其中前三种特质与细胞周期密切相关并为诊断及临床治疗提供了思路。[1] 林晓钢等人据Hela 细胞中的芳香族氨基酸、嘌呤以及嘧啶在细胞分裂过程中的相应变化引起的光谱变化建立Hela细胞的紫外吸收光谱模型，并且可以通过该光谱模型判读出Hela 群体大致处于细胞周期的哪一时相。[2]通过此项研究可以从细胞分子水平的变化来了解肿瘤细胞增殖周期的规律。研究细胞周期的规律与调控机制对于探索肿瘤发生机制、抗癌药物的设计和作用机制具有重要的指导意义。 1.2DNA与靶向药物 脱氧核糖核酸(DNA)是生物的基本遗传物质，是遗传信息的载体。许多分子能与DNA结合，破坏DNA的模板作用，影响基因调控和表达功能，从而诱发很多生物效应。因此DNA与靶向药物分子相互作用的研究是分子生物学和生物化学的重要领域。DNA与靶向药物分子相互作用的研究不仅可以从分子水平阐明生命过程机理、疾病的致病机制，而且可以引导药物的设计与合成、药物体外筛选以及探讨药物的治病机理。另外，对双链DNA(或单链DNA)具有选择性结合或具有序列特异性结合的靶向药物分子可以作为DNA分子杂交与否或识别特定序列

国内外干细胞研究进展

国内外干细胞的研究进展 摘要：干细胞研究是近年来生物医学领域的热门方向之一，干细胞产业具有巨大的社会效益和市场前景，受到世界各国的高度重视。美国、欧盟、日本、韩国和中国在干细胞领域投入重金支持基础和临床研究，大力推动干细胞产业化发展。本文通过对比世界干细胞研究的热点领域，分析了中国在该学科取得的成绩和存在的差距，进一步提出了针对中国干细胞研究发展的政策建议。 关键词：干细胞，研究现状，前景与展望 Abstract: Stem cell research is one of the hot research fields in biomedicine nowada ys. Many countries attach importance to the stem cell industry because of the great s ocial benefits and market potential. USA,EU,Japan,Korea and China have increased the input of capital dramatically to promote the basic and clinical research of stem cel l as well as stem cell industry. By comparing the situation of stem cell research at ho me and abroad,we found that,in recent years,an obvious progress has been made in stem cell research, however, the gap between China andthe developed countries still exists. And further puts forward the policy suggestions in the development of stem c ell research in China. Key words：stem cells，research status，prospect 1、前言 20世纪90年代以来，随着细胞生物学技术的发展及体外分离、培养人胚胎干细胞的成功，干细胞经适当诱导分化可发育为不同类型的细胞、组织和器官，成为移植供体的新来源，作为“种子细胞”的干细胞可以通过细胞工程的方法在体外发育为各种特异性的细胞供移植和细胞替代所需，并可作为基因疗法的靶细胞用于治疗和研究。由于干细胞有广泛的应用前景，它已成为近年来医学和生物学领域研究的热点。 干细胞（stem cells）是人体及其各种组织细胞的最初来源，是一类具有自我更新、

细胞生物学论文.

线粒体病的研究论文 12级生工一班蒋超（1202011023） 【摘要】线粒体产生细胞生存所必需的能量，是细胞质内带有遗传信息的细胞器。近年来，线粒体机能异常与人类疾病的关系逐渐受到人们关注，如线粒体脑肌病、线粒体心肌病、Parkinson病、Alzhcirner病等疾病相关。广义的线粒体病是指以线粒体异常为主要病因的一大类疾病。除线粒体基因组缺陷直接导致的疾病外，编码线粒体蛋白的核DNA突变也可引起线粒体病，但这种疾病变现为孟德尔遗传方式。目前还发现有一类线粒体疾病，可能涉及到mtDNA与nDNA的共同改变，认为是基因组间交流的通讯缺陷。通常所指的线粒体疾病为狭义的概念，即线粒体DNA突变所指的线粒体功能异常。 一、线粒体的功能 1.线粒体最主要的功能是氧化磷酸化氧化代谢产生的能量转化为电化学质子梯度，结果产出高能磷酸键生成ATP。在有氧条件下，电子从NADH传递到氧，获得的能量转移被用作两个线粒体膜之间质子泵。质子泵经电子向链下部传递用于能量释放并产生PH梯度和近60mv的电子梯度穿过线粒体内膜，复合物V(ATP)合成酶用这种梯度能量产生ATP。在氧化磷酸化期间，线粒体产生ROS，线粒体超氧化物歧化酶在去除反应性氧中起重要作用。ROS能损害蛋白质和核酸，如果不及时去除可引起线粒体和细胞损害。 2.线粒体在细胞凋亡中起重要作用多数凋亡前刺激需要线粒体外膜通透性，引起线粒体内膜释放蛋白质到胞浆。如细胞色素C和凋亡早期因子，这些因子释放的关键作用是通道开放（线粒体传递孔），孔的开放和凋亡活化与线粒体蛋白质降解相关。在此条件下凋亡的过度活化，线粒体氧化磷酸化与Leber遗传性视神经中细胞死亡有关。 3.线粒体在某些代谢通路中也起基本作用由于丙酮酸脱氢酶（PDH）引起丙酮酸氧化发生与线粒体内部，并提供乙酰辅酶A来燃烧Krebs循环。对Krebs循环、脂肪酸氧化、酮氧化和支链丙酮酸代谢酶全包含在线粒体内，尿素循环的某些步骤也位于线粒体内。因此线粒体功能丧失引起某些同路异常。

人胚胎干细胞研究进展

人胚胎干细胞的研究进展 周进学号10170807 【摘要】干细胞( Stem Cell)是一类具有分化潜能和自我复制的早期未分化细胞。胚胎干细胞( Embryonic stem cells, ES细胞)是一种早期胚胎内细胞（inner cell mass, ICM）或原始生殖细胞（primordial germ cell, PGC）经体外分化抑制培养，分离和克隆得到的具有发育全能性的高度未分化细胞。人类胚胎干细胞系的建立是人类发育生物学研究的重大突破,揭示了人体发生发展奥秘的进程,可能为现代临床医疗模式带来革命性的变化。现对人类胚胎干细胞的来源,建系、生物学特性、应用前景及所涉及的伦理学问题作一综述。 【关键词】胚胎干细胞；克隆；伦理学,医学;综述 1、胚胎干细胞的概念 胚胎干细胞是从哺乳动物早期胚胎内细胞团(ICM)或桑椹胚分离出来的、能在体外长期培养的、高度未分化的全能细胞系,可在适合的条件下分化为胎儿或成体的各种类型的组织细胞。 胚胎干细胞属全能干细胞。ESCs 这一名词因其来源于胚胎而得名, 但从研究角度来说, 其概念一直没有一个特殊的标准, 2001 年美国国立卫生院根据Austin Smith 对小鼠ESCs 的研究, 概括了ESCs 的一些基本特征, 对其概念提出了一系列标准[1]: ①、来源于内细胞团或囊胚上胚层; ②、能够无限地进行对称分裂并保持未分化状态( 长期自我更新) ; ③、显示并维持正常、完整( 二倍体) 和稳定的染色体核型; ④、全能的ESCs 能够分化成三个胚层( 内胚层、中胚层、外胚层) 来源的所有细胞类型;⑤、在发育过程中能整合到所有胚胎组织中( 体外经长期培养的小鼠ESCs, 被植入另一胚胎形成嵌合体动物后, 仍能产生所有组织) ; ⑥、具有能克隆形成胚胎细胞系的能力, 并能产生卵子或精子细胞; ⑦、基因克隆, 即一个单一的ESCs 能产生一群具有相同遗传特性的细胞( 克隆) , 这些细胞有着与亲代细胞

简述干细胞的形态特征及其研究进展

简述干细胞的形态特征及其研究进展 干细胞是一类具有自我复制能力的原始的未分化细胞，是形成哺乳类各组织器官的原始的多潜能的细胞。在一定条件下，它可以分化成多种功能细胞。干细胞在形态上具有共性，通常呈圆形或椭圆形，细胞体积小，核相对较大，细胞核多为常染色质，并具有较高的端粒酶活性。根据它所处的发育阶段可以分为胚胎干细胞和成体干细胞。 胚胎干细胞的发育等级较高，是全能干细胞，而成体干细胞的发育等级较低，是多能干细胞或单能干细胞。干细胞的发育受多种内在机制和微环境因素的影响。目前人类胚胎干细胞已可成功地在体外培养。 干细胞的形态特征： 干细胞具有自我更新复制的能力，能够产生高度分化的功能细胞。 1 胚胎干细胞：胚胎干细胞当受精卵分裂发育成囊胚时，内层细胞团的 细胞即为胚胎干细胞。具有全能性，可以自我更新并具有分化为体内所有组织的能力。进一步说，胚胎干细胞是一种高度未分化细胞。它具有发育的全能性，能分化出成体动物的所有组织和器官，包括生殖细胞。 2 成体干细胞：成年动物的许多组织和器官，比如表皮和造血系统，具 有修复和再生的能力。成体干细胞在其中起着关键的作用。在特定条件下，成体干细胞或者产生新的干细胞，或者按一定的程序分化，形成新的功能细胞，从而使组织和器官保持生长和衰退的动态平衡。 3 造血干细胞：造血干细胞是体内各种血细胞的唯一来源，它主要存在 于骨髓、外周血、脐带血中。造血干细胞的移植是治疗血液系统疾病、先天性遗传疾病以及多发性和转移性恶性肿瘤疾病的最有效方法。 4 神经干细胞:理论上讲，任何一种中枢神经系统疾病都可归结为神经 干细胞功能的紊乱。脑和脊髓由于血脑屏障的存在使之在干细胞移植到中枢神经系统后不会产生免疫排斥反应。除此之外，神经干细胞的功能还可延伸到药物检测方面，对判断药物有效性、毒性有一定的作用。 5 肌肉干细胞:可发育分化为成肌细胞，可互相融合成为多核的肌纤维，形成骨骼肌最基本的结构。

细胞生物学论文 收获 感悟

<细胞--一个和谐的社会>学期总结 xxxxxxxxxxxx 收获 （一）对细胞的认识 细胞生物学是现代生命科学的重要基础学科，它联系着生物科学的许多分支学科，尤其是与分子生物学、遗传学、生物化学等学科联系密切。从1665年英国人胡克发现第一个植物细胞后,历经170多年的研究探索,科学家们创立了被认为是19世纪的三大发现之一的细胞学说，细胞学说的创立对细胞学的发展起着极大的推动作用，在19世纪的最后25年的时间里，人们相继发现了有丝分裂、无丝分裂、减数分裂等细胞生命现象，同时还发现了染色体和多种细胞器，这段时间是细胞学的经典时期。1876年,亨特等发现了动物细胞的受精现象，于是实验细胞学得以迅速发展，人们广泛应用实验手段与分析方法来研究细胞学中的一些根本问题，于是开始出现了细胞遗传学、细胞生理学、细胞化学等生物学分支。20世纪50年代以来，电子显微镜与超薄切片技术相结合，产生了细胞超微结构这一新兴领域，大大地加深与拓宽了人们对细胞的认识，不仅对已知的细胞结构，诸如线粒体、高尔基体、细胞膜、核膜、核仁、染色体结构的了解出现了全新的面貌，而且发现了一些新的重要的细胞结构，如内质网、核糖体、溶酶体、核孔复合体与细胞骨架体系等，为细胞生物学学科早期的形成奠定了良好的基础。在这时期，生物化学与细胞学的相互渗透与结合，使人们对细胞结构与功能相结合的研究水平达到了前所未有的高度。20世纪60年代，“细胞生物学”以一门新的学科出现，70年代随着分子生物学的兴起，细胞生物学对细胞的研究由细胞、亚显微结构进入了分子水平。透射电子显微镜、扫描电子显微镜与扫描隧道显微镜的发明为细胞生物学学科的建立以及发展起着重要的推动作用。PCR技术的应用及序列分析手段的改进，使人类基因组计划得以提前5年完成。 （二）加深理解和拓宽了细胞生物学的理论知识 通过一学期的学习，我从知识的深度和广度上都有较大的提高。以下几方面是本人对新知识的理解和收获。 细胞通讯 细胞的生命活动是由通讯引发的一系列生理活动现象。细胞通讯有三种方式：通过信号分子传递信息、通过相邻细胞表面分子的黏着相联系、通过细胞与胞外基质的黏着发生关系。其中通过信号分子的细胞通讯是主要的方式，也是发现最早研究最深入的细胞通讯。信号分子按组成分有激素、局部介质和神经递质三种类型。细胞内受体主要位于细胞核内，有两个不同的结构域，一个是与DNA结合的结构域，另一个是激活基因转录的N端结构域。信号在转导过程中，具有级联放大效应，细胞在接收信号之后，通过信号分子水解、受体钝化、受体减量调节以及磷酸酶作用使信号分子终止，以维持细胞正常的生命活动。 蛋白质的合成和分选机理 蛋白质的合成和分选运输是细胞中最重要的生命活动之一。核糖体是蛋白质合成的场所，其中糙面内质网上合成的蛋白质提供给内膜系统、细胞质膜以及细胞外，而内膜系统外的部分所需蛋白质则由游离核糖体合成的蛋白质提供。核糖体上合成的蛋白质为其一级结构，在导肽、信号肽的指导下，具一级结构的蛋白质以核孔运输、跨膜运输或小泡运输的方式分选定位到细胞特定部位。在蛋白质运输经过内质网、高尔基体时，在分子伴侣的帮助下进行蛋白质的加工修饰和拆叠，形成特定的蛋白质空间构象。 细胞周期调控

干细胞研究进展综述

干细胞研究进展(综述) Advances in the research of stem cells（LR） 【摘要】：干细胞是人体及其各种组织细胞的最初来源,具有高度自我复制、高度增殖和多向分化的潜能。干细胞技术是生物技术领域最具有发展前景和后劲的前沿技术，其已成为世界高新技术的新亮点，势将导致一场医学和生物学革命。干细胞研究正在向现代生命科学和医学的各个领域交叉渗透,干细胞技术也从一种实验室概念逐渐转变成能够看得见的现实。干细胞研究作为一门新兴学科已成为生命科学中的热点。本文对近几年来国内外对干细胞的研究现况作一综述。 【关键词】：干细胞因子帕金森病神经干细胞糖尿病 ABSTRACT：Stem cells are the body and cells of various tissues of origin, has high self replication, high proliferation and multilineage differentiation potential. Stem cell technology is the field of biotechnology has the most development prospect and potential of cutting-edge technology, it has become a new bright spot in the world of high-tech, will lead to a revolution in medicine and biology. The research of stem cell is to modern life science and medical fields intersection, stem cell technology from a laboratory concept gradually transformed to be able to see the reality. Stem cell research as a new discipline has become the hotspot of life science. Based on the domestic and abroad in recent years on stem cell research summarizes. Keywords:Stem cell factor Parkinson disease Neural stem cells Diabetes mellitus 干细胞技术最显著的特征就是能再造一种全新的、正常的甚至更年轻的细胞、组织或器官。由此人们可以用自身或他人的干细胞和干细胞衍生组织、器官替代病变或衰老的组织、器官，并可以广泛涉及用于治疗传统医学方法难以医治的多种顽症。 干细胞研究是一门新兴的学科,干细胞生物学研究与应用几乎涉及所有的生命科学和生物 医学领域。 一、目前干细胞的主要研究热点

艺术设计毕业论文开题报告

毕业论文（设计）题目： 广告创意 毕业论文（设计）工作内容：随着社会的进步和科学技术的飞速发展,优秀的富有创意的招贴设计在视觉传达的领域起着越来越重要的作用。通过阐述招贴设计的特征,并结合对自己作品的评析,着重探讨了创意在招贴创作中的重要性。招贴是广告设计中的重要表现形式之一，在公共广告媒介中占有很重要的位置。招贴，又称海报、宣传画，是一种张贴在公共场合，传递信息，以达到宣传目的的印刷广告形式。招贴设计以它独特的方式出现在各种公共场合，远距离就能吸引社会公。众的注意力，具有时效性强、信息传递快等特点。创意是招贴设计的灵魂，彰显个性的构思，出奇制胜的表现，能够使招贴作品具有生命力。创意，是指通过创造性思维、联想、构思，创造出能够表现主题的具有实际意义的艺术化心理过程，是主题概念化、视觉化的思维过程和实际操作过程。创意依附与主题，主题通过创意来表现。 论文题目_____ 广告创意_________________________________________ 指导教师：（签名）年月日 教研室主任：（签名）年月日 学院院长：（签名）年月日 学生姓名：专业：指导教师： 本科毕业论文（设计）开题报告 学院（系）_________________ 专业________________________ 班级________________________ 姓名________________________ 学号________________________ 指导教师________________________ 填表日期________________________ 00 年月说明 1、毕业设计的开题报告是保证毕业设计质量的一个重要环节，为规范毕业设计的开题报告，特印发此表。 2、学生应在开题报告前，通过调研和资料搜集，主动与指导教师讨论，在指导教师的指导下，完成开题报告。 3、此表一式二份，交学院装入毕业设计（论文）档案袋。

国内近期干细胞研究进展

干细胞研究进展消息 干细胞是人体及其各种组织细胞的最初来源, 具有高度自我复制、高度增殖和多向分化的潜能。干细胞研究正在向现代生命科学和医学的各个领域交叉渗透, 干细胞技术也从一种实验室概念逐渐转变成能够看得见的现实。干细胞研究已成为生命科学中的热点。介于此, 本刊将就干细胞的最新研究进展情况设立专栏, 为广大读者提供了解干细胞研究的平台。 干细胞专题近期国外干细胞研究进展 Geron抗癌药GRN163L选择性瞄准癌症干细胞据美国BussinessWire 1月10日报道称, 杰隆(Ge-ron)发表临床前研究数据显示, 其端粒酶抑制剂药物imetelstat (GRN163L)在小儿科神经肿瘤当中可选择性瞄准癌症干细胞, 这一发现为儿童肿瘤的临床试验提供了支持。该研究发表于2011年1月1日的Clinical Cancer Research杂志上。近年来有关端粒酶抑制的研究日益增多, 成为癌症治疗的一个热点方向, GRN163L是此类药物开发中最前沿的一个候选药物。2002年3月, Geron从Lynx Therapcutics获得了用GRN163和GRN163L两种化合物的核心专利。早期研究显示, GRN163对十四种不同癌症细胞均表现出有意义的端粒酶活性抑制作用, 它可以抑制黑色素瘤等细胞的生长。因脂质修饰物GRN163L更易进入细胞发挥端粒酶抑制作用, 后续临床前及临床试验均为GRN163L。2005年, FDA同意GRN163L在患慢性淋巴细胞白血病患者的临床实验。2007年, Geron公司开始GRN163L单独治疗多发性骨髓瘤的I期临床试验。2008年开始了GRN163L治疗乳腺癌的I期临床试验。同年12月, Geron发布了有关GRN163L治疗再发的和难治的多发性骨髓瘤的暂时性临床试验数据。2009年, Geron发布了Geron163L对抗癌症干细胞的实验活动, 包括非小型细胞肺癌、乳癌、胰脏炎、前列腺癌、小儿科神经肿瘤。公司发表Geron163L治疗乳癌的假定癌症干细胞与胰脏炎症系数据。数据显示, 在以Geron163L治疗后, 人类乳癌细胞MCF7的假定干细 胞数量与自我再生的能力大幅减弱。目前Geron163L正处于临床II期试验中。(来源: 生物谷2011-01-11)Cell Stem Cell: iPS细胞具更高基因畸变频率加州大学圣地亚哥分校医学院及斯克里普斯研究所的干细胞科学家领导的跨国研究团队, 记录了在人类胚胎干细胞(hESC)和诱导功能干细胞(iPSC)系中特殊的基因畸变, 研究结果在1月7日的Cell Stem Cell上发表。该公布的发现强调了需要对多能干细胞进行频繁的基因检测以保证其稳定性和临床安全性。该研究的第一作者, 加州大学圣地亚哥分校再生医学系的路易斯·劳伦特博士认为, 人类多能干细胞(hESC和iPSC)比其他类型细胞有更高的基因畸变频率。最令人吃惊的是, 与其他非多能干细胞样本相比较, 观察到hESC的基因扩增和iPSC的缺失方面出现的频率更高。人类多能干细胞在人体内具有发展成其他类型细胞的能力, 可成为细胞替换治疗的潜在来源。斯克里普斯研究员再生医学中心主任珍妮·罗伦教授谈到, 由于基因畸变常常与癌症相关联, 免受癌症相关的基因突变对于临床使用的细胞系来说至关重要。研究团队确认了在多能干细胞系中可能发生突变的基因区域。对于hESC而言, 可观察到的畸变大多是靠近多潜能相关基因区域的基因扩增; 对于iPSC而言, 扩增主要涉及细胞增殖基因及与肿瘤 抑制基因相关的缺失。传统的显微技术, 如染色体组型分析可能无法检测到这些变化。研究组使用一种高分辨率的分子技术, 称为“单核苷酸多态性(SNP)”, 能观察到人类基因组里一百多万个位点里的基因变化。 劳伦特说, 我们惊喜地发现在较短时间培养中的基因变化, 例如在体细胞重编程为多能干细胞的343过程以及在培养中细胞的分化过程。我们不知道这会有怎样的影响, 如果有的话, 这些基因畸变都会对基础研究或者临床应用的结果产生影响, 对此应当深究。劳伦特总结到, 该研究结果解释了有必要对多能干细胞培养进行经常性的基因监控, SNP分析仍不失为人类胚胎干细胞和多能干细胞日常监控的一部分, 但是这一结果提醒我们应当予以重视。(来源: 中国干细胞网2011-01-12)美用胚胎干细胞制造出血小板美国先进细胞技术公司的实验证明, 使用人类胚胎干细胞研制出的血小板可修复实验鼠的受损组织, 人类未来有望源源不断地

毕业设计和开题报告说明

石家庄学院 毕业设计开题报告撰写说明 开题报告作为毕业论文答辩委员会对学生答辩资格审查的依据材料之一。此报告应在指导教师指导下，由学生在毕业设计（论文）工作前期完成，经指导教师审查签署意见后生效。学生查阅资料的参考文献应在5篇以上（不包括辞典、手册），开题报告字数不少于1500字。相关内容格式要求如下 1.字体字号要求 （1）开题报告要统一打印，采用计算机排版、A4纸纵向打印。正文用宋体小四号字，版面上下空2.5cm，左右空2.8cm，左侧装订； （2）标题用三号黑体字，加粗，居中； （3）一级标题用小三号黑体字，加粗； （4）二级标题用四号黑体字，加粗； （5）三级标题用小四号黑体字（不加粗）； （6）正文为小四宋体，行间距为18磅，外文用Times New Roman 字体,首行缩进。 （7）各层标题与段前、段后间距为0.5行，左对齐。 2.数字和日期时间 （1）测量、统计数据一律用阿拉伯数字并正确使用法定计量单位，如5.25 km，-123.09，21 337等； （2）4位以上的数字一般不采用千分位号，而采用四分之一字的空隙，如34 567 890而不写作34,567,890等； （3）小于10的数字时，一般不宜用阿拉伯数字； （4）固定用语、词组、缩略语等也不采用阿拉伯数字，如第三世界，三叶虫，相隔十万八千里等； （5）数字较大时，采用科学记数法，如：10 000可写成1×104等； （6）乘法符号一般不用“·”而使用“×”； （7）日期用阿拉伯数字，如20世纪90年代，2007年11月27日或2008-11-27等，不采用08年等表达方式。 （8）时刻表达一般采用中文计量单位，如上午8时45分，也可