石蜡切片机使用流程

石蜡包埋、切片机使用流程

石蜡包埋使用方法：

1．石蜡包埋机通电源，打开机器面板上的开关，调至所需要的温度（一般情况下设置温度不变）。

注：确认包埋机上部有足够的石蜡。

2．包埋盒放置在包埋台面上预热；同时开冷冻台预冷。

3．包埋好后将包埋盒放置在冷冻台上凝固成型，必要时补蜡。

4．用后整理包埋台面。

注：包埋盒不得放置在台面过夜，必要时放置在包埋机下面的抽屉中，及时处理包埋后标本。

5．石蜡包埋情况登记。

石蜡切片机使用方法：

1．使用前，请先打开切片机和展片机/烤片机的电源，放下手摇柄的固定器，用机器左侧的选择按钮调整标本与刀片之间的距离。

注：避免刀片与标本夹具之间的距离过近，引起机器损伤；不要随意调整展片机的温度，如有特殊需要调整后，在用完后及时调整回原来温度。

2．将包埋好的石蜡标本固定于夹具上；刀片固定在刀具上。

3．再次调整刀片与石蜡标本之间的距离。

4．首先用20－40um的修片厚度进行修片，切到目标部位时，调整至正常的切片厚度（7um 左右，根据自身组织进行调整）。

5．切好的石蜡片放于右侧展片机上展平，再用写好标本名字的玻片捞片、烤片。

6. 用毕调整回夹具与刀片的距离，卸下刀片；登记。

注意事项：

1．展片机用毕后将展片用的水清理并换上新的单蒸水。

2．每次使用完毕后应彻底清理实验垃圾，保持清洁。

石蜡切片的基本操作流程

石蜡切片的基本操作流程 一、取材选取目的组织块，修剪到合适的大小； 二、固定 将组织块放入福尔马林固定液（10%甲醛溶液），固定时间由组织块大小而定，一般不少于24h；体积1cm3的组织块，一般为3-7天； 三、冲水自来水洗几下，泡1小时； 四、系列酒精脱水 50%酒精，1h； 70%酒精，1h； 80%酒精，1h； 90%酒精，1h； 100%酒精（I），1h； 100%酒精（II），1h； 五、透明 酒精：二甲苯=1：1溶液，过夜； 二甲苯，1h； 六、包埋 二甲苯：石蜡=1：1，65-70 ℃，2h； 新鲜石蜡（I），65-70 ℃，1h； 新鲜石蜡（II），65-70 ℃，4h； 新鲜石蜡包埋； 七、切片切片厚度为5-7um； 八、展片温水（40-42 ℃）展片； 九、捞片将展好的片子贴于载玻片上； 十、烘片42 ℃将片子上的水烘干； 十一、烤片60 ℃烤片12-24h； 十二、脱腊 二甲苯（I）：2min； 酒精：二甲苯=1：1溶液：2min； 十三、水化 100%酒精（I）：1min； 100%酒精（II）：1min； 95%酒精：1.5min； 80%酒精：1.5min； 70%酒精：1.5min； 50%酒精：1.5min； 自来水洗：2min 十四、H&E染色 Hematoxylin染色3-5min(2.5min时取出观察染色效果)，自来水洗3次，盐酸分化（2/3杯玻璃缸+3滴1N盐酸），10s；自来水洗蓝化，镜下观察染色效果；（伊红）Eosin染色30-50s，直接脱水（90%酒精-----100%酒精I，100%酒精II各1分------酒精：二甲苯=1：1溶液：1-1.5min）；十五、脱水 90%酒精-100%酒精-100%酒精，各1min； 十六、透明 二甲苯：酒精：1-1.5min；二甲苯：2min；

石蜡切片详细步骤

石蜡切片 1.仪器 石蜡切片机、烘箱、显微镜、染色缸、小培养皿、镊子、毛笔、吸水纸、纱布、载玻片、盖玻片等。 2. 试剂 FAA固定液(70%酒精90ml、冰醋酸5ml、福尔马林5ml)、10%番红水溶液、0.5%固绿（用95%的酒精配制）、酒精（100%、95%、80%、70%、50%）、二甲苯、蒸馏水、甘油、中性树胶等。 3.取材 幼嫩的油菜植株叶片和茎 4.方法与步骤(参照) 1．固定： FAA固定液固定48小时以上。 2．脱水： 50%酒精→70%酒精→83%酒精→95%酒精→100%酒精→100%酒精。每级2h。100%酒精中1.5h。其中70%酒精处可长期保存。 3．透明： 1/2二甲苯+1/2无水乙醇 (2h) →纯二甲苯(1.5h) →纯二甲苯(1.5h) 4．浸蜡： 将处理的材料置于1/2石蜡(固体粉末状)+1/2二甲苯中，40℃烘箱敞口过夜。 5．包埋： 先提升恒温箱的温度至60℃，换纯蜡3次，每次1-2h，用硬的电光纸、牛皮纸叠纸盒，置于45-60℃的烫板上，倒入材料，摆放好材料，把标签（正面向外置于底部），补足石蜡，倒好后轻轻的置于冷水盆中，注意底面要接触盆中凉水，待石蜡全部凝固后可取出晾干，也可在凉水盆中放置过夜。 6．切片 对包埋的材料进行修块、粘块、整修后，保证材料四周都有石蜡包围。但不可太多。切面的上、下边平行。用加热的解剖刀蘸取少许石蜡碎屑，并迅速将石蜡块四周的碎屑烫平，使石蜡块牢固地粘在台木上。检查切片机，安装切片刀、调整好刀的角度，调整石蜡块与刀口之间的角度与位置后开始切片。

7．粘片 将粘贴剂置簿玻片上，再取切片浮置粘片剂上，然后置烘片台上，使切片展开烫平，材料不现皱纹为度。最后将切片依次排好，用滤纸吸去多余水分，同时以记号笔在玻片上编号，放入温箱中烘干，温度30～40℃中过夜。 8．脱蜡 脱蜡用二甲苯，把烤好的载玻片放于盛二甲苯的染缸中：纯二甲苯(10-20min)→纯二甲苯(5-10min) 9．染色 将纯二甲苯脱蜡完全的材料，1/2 二甲苯十1/2纯酒精→100%酒精→95％酒精→85％酒精→70％酒精→50％酒精→1%番红染色(4h以上) →50％酒精→70％酒精→85％酒精→95％酒精→0.5%固绿(1min)→95％酒精→100%酒精→100％酒精(未注明时间各级均为3min) 10．胶封 滴加加拿大树胶封藏。 11.镜检，拍照

Leica_RM2265旋转薄切片机操作规程

Leica_RM2265旋转薄切片机操作规程Leica RM2265旋转薄切片机的使用步骤一、半薄切片(厚度0.25-5μm)使用 步骤 1、接通电源，打开主开关(仪器背面)，待仪器发出嘟嘟响声，将进行初0始化; 2、选择切片厚度: 在切片模式SECT显示下，切片厚度范围将显示:0.25-100μm; 在样品修整模式TRTM显示下，样品修整厚度将显示:1-600μm; 通过“+”、“-”调节厚度数值，单位:μm; 3、安放包埋块于切片头中央位置，旋转固定螺丝，将样品按要求固定夹紧; 4、安放粘有水槽的玻璃刀(务必锁定手轮后再上刀)，并将玻璃刀口对准样品; 5、选择切片模式:自动切片或手动切片;选择好切片模式后，仪器回零，切片计 数开始; 6、取切片的材料:将漂入水中的薄切片用铜网捞起来后，放于涂有聚状氨酸 的玻 片上，加热，用HCl脱树脂，在材料上滴一滴亚甲基蓝，着色后冲洗、封藏、烘干。 二、石蜡切片(厚度5-100μm)使用步骤 1、接通电源，打开主开关(仪器背面)，待仪器发出嘟嘟响声，将进行初始化; 2、选择切片厚度:通过“+”、“-”调节厚度数值，单位:μm; 3、安放削好包 埋鳞块于切片头中央位置，旋转固定螺丝，将样品按要求固定夹紧; 4、安放刀片刀座，将Leica719一次性刀片、或钨钢或一般用切片钢片(务必锁定手轮后再上刀)，并将刀口对准样品;

5、选择切片模式:自动切片或手动切片;选择好切片模式后，仪器回零，切片计 数开始; 6、取切片的材料:将蜡带用毛笔挑起，放入蜡带盒中; 7、粘片:用圆头小刀将蜡带切割，挑选结果完整的材料放入涂有蛋清干油的载玻 片(蛋清干油上滴注蒸馏水，使材料漂浮于其上); 8、烘片:在电热烘片台上，待材料平展后，将玻片放入摊片盘中，在36?恒温箱 中烘烤4天左右; 9、脱蜡、染色、封藏:用二甲苯脱蜡后，根据实验目的将材料染色后，用中性树 胶或加拿大树胶封藏烘干。 三、注意事项 1、在处理切片刀和更换刀片时必须十分小心，刀刃十分锋利，可能造成严重损伤; 2、在取出刀/刀片之前，必须将刀的固定器从仪器上分离，如果不使用刀，一定将刀 放回刀盒中; 3、禁止随处放置刀，并将刀刃朝上，禁止尝试接下落过程中的刃; 4、在夹紧刀或者刀片之前，务必将样本包块夹紧; 5、在处理刀或样本夹子，更换样本包块之前，以及所有的操作间隙时，务必锁定手 轮，并且用护刀器将刀刃覆盖;

术中冰冻与石蜡切片诊断准确性分析

XX医院病理科2010～2012年术中冰冻与石蜡切片诊断准确性分析 肿瘤手术中冰冻切片快速病理诊断具有十分重要的意义，它不仅是鉴别良、恶性肿瘤准确快速的方法，也是指导临床医生决定手术切除范围及制定下一步治疗方案的关键手段。比较冰冻切片快速病理诊断与石蜡切片病理诊断的符合率，分析可能导致误诊的原因。现 对我科2010年１月～2012年5月间所有冰冻切片诊断工作进行回顾性分析。 一、材料与方法 为防止制成的冰冻切片镜下组织形态发生改变，送检标本要求用干纱布包裹或置于不加任何液体的洁净容器内及时送达病理科，病理医师详细检查大体标本后取肉眼确认病变最明显区域1～2块组织，迅速置全自动恒冷切片机（英国产SHANDN ）上制作切片。切片厚4μm，经酒精固定，HE 染色，普通光镜（Olympus BX41）下观察。 二、结果

三、讨论 冰冻切片与石蜡切片诊断的符合率逐年有所提高，说明我科病理医生对冰冻切片诊断的知识面及经验都有所提高。误诊原因分析

1、科外因素： ⑴.术中标本送检时放入生理盐水或其它液体中，或用湿纱布包裹标本，或术者用水冲洗标本等，做冰冻切片时由于骤冷产生大量冰晶使组织呈空网状，使病理医师误认为是粘液或脂肪组织来源的肿瘤，被迫第二次取材。 ⑵.手术医师取材不当或取材错误，可造成冰冻切片诊断的准确率和预测值之间的差异，如滑膜肉瘤送检组织为纤维结缔组织；胰腺癌时切取正常胰腺组织送检；脑胶质瘤送检脓性坏死渗出物，从客观上导致假阴性。 ⑶.有些病变由于组织结构的特殊性，冰冻切片很难确诊，例如：①乳腺硬化性病变，包括某些类型的腺病（硬化性腺病）及放射状瘢痕。有人认为良性硬化性病变与硬癌的鉴别很困难，在冷冻切片中尤其如此。我们曾遇见过乳腺硬化性腺病的假浸润现象而诊断为乳腺癌的病例。②乳腺乳头状病变，包括导管内乳头状瘤与末梢导管的乳头状瘤病。③乳腺导管上皮增生性病变，包括不典型增生。本组有一例导管上皮增生呈“搭桥”样生长，并形成不规则的间隙，误诊为恶性。这些病变有时在石蜡切片中多处取材都可能难以确诊，不能苛求在一张切片短时间内作出确切诊断，必须等待石蜡切片最后确诊，特别是对年轻患者。 2、科内因素：

石蜡切片

3.脱水。乙醇是常用的脱水剂，用乙醇脱水的过程中，以低浓度逐渐过渡到高浓度乙醇（70%、80%、95%、无水乙醇），来除去材料块中的水分。脱水时间跟材料块的大小而定（70% 1.5h，85% 1.5h，95% 2h(可以过夜)，100% 1.5h ，100% 1.5h） 4.透明。透明剂为二甲苯。透明剂的作用是置换乙醇，让材料透明，有利于石蜡向材料内部的渗透。从1/2无水乙醇+1/2二甲苯（1.5h,若脱水不彻底，会出现乳白色浑浊）→二甲苯(1.5h)→二甲苯(1.5h) 5.低温浸蜡。目的是慢慢除去材料中的二甲苯，而代之以石蜡。将已透明的材料和二甲苯（约5ml）一起倒入包埋用的小烧杯中，把事先切碎的石蜡放入小烧杯中，使二甲苯正好浸没石蜡，盖上盖子，放入40℃的恒温箱中14h。 6.高温浸蜡。将小烧杯中的石蜡和二甲苯混合液全部倒干净，注意不要把材料倒掉，马上倒入提前溶解好的熔点为54-56℃的纯石蜡，不要盖盖子，再把恒温箱的温度调到58℃，时间为4h-5h。在两小时时换一次石蜡。 7.包埋。即用纯石蜡将渗透好的材料封埋成蜡块，便于切片。将溶解好的54-56℃的石蜡倒入事先准备好的蜡船中，用镊子将材料放入蜡船中，每隔1.5-2.0cm放一个材料，用镊子将材料扶正，动作要迅速，不能产生气泡。然后放入装有冷水的脸盆中，使蜡迅速凝固。待石蜡完全凝固后，取出蜡船阴干。 8.切片。切片是用石蜡切片机把蜡块连同材料切成薄片。具体步骤： ①蜡块的修正与粘附。将材料用解剖刀修成宝塔形，材料在中央。将宝塔粘附到载物块上，并用石蜡烫牢。 ②安装切片刀和调节切片厚度。装上切片刀，使刀身与材料切面平行（若不平行再将材料重新修平行），并略向内倾斜（约15°）调节切片的厚度为14微米。 ③切片室4手摇切片机摇柄，左手持毛笔接蜡带，摇转速度要均匀，以没分钟40-50片为宜。 9.粘片。肉眼观察或镜检，将看上去完整的切片进行粘片。方法： 取干净的载玻片，滴三滴粘片剂（明胶1g+水100ml+碳酸2g+甘油15ml）与载玻片中央，加一滴蒸馏水，用手涂匀，用镊子将切片平铺在载玻片上，将多余的粘片剂用吸水纸吸干，然后将载玻片放在展片台（35℃）上，约1-1.5h，至蜡片全部展开为止。然后将片子放在干净，通风的地方干燥3-4天。 10.脱蜡染色。步骤： ①脱蜡。即染色前用二甲苯将石蜡溶去。将切片放入染色缸中，加入二甲苯，将染色缸放入45℃的恒温箱中45分钟，每15分钟换一次二甲苯。 ②复水。将切片依次经过1/2二甲苯+1/2无水乙醇→无水乙醇→无水乙醇→95%乙醇→80%乙醇→70%乙醇，各级5-10分钟， ③番红-固绿重染。番红用71%乙醇溶解（0.5g+100ml70%乙醇），固绿用95%乙醇溶解（0.1g固绿+100ml95%乙醇）。将切片放入番红染液中3-4h，然后取出切片，依次经过 70%（20s） →85%(20s)→95%(20s)→固绿(20s)→95%(将固绿冲洗干净，3-4s)→无水乙醇(5-10min)→无水乙醇 (5-10min)→1/2二甲苯+1/2无水乙醇(5-10min)→二甲苯(5-10min)→二甲苯(5-10min) 11.封片。光学树胶（光学中性树胶+二甲苯比例为1：1）。将切片从二甲苯中取出后迅速滴一滴光学树胶，盖上盖玻片，（注意不要产生气泡，树胶也不要太多。）放在干净，通风处，自然干燥。 12.贴标签。最后在做好的切片的左边贴上标签，注明材料的名称，日期和制作者。 注意事项1.无水乙醇有硬化组织的作用，所以在无水乙醇中不宜浸得过久。=zD7 2. 透明时，材料在二甲苯中不要放的太久，二甲苯易使材料变硬变脆。 3 所采用的石蜡熔点不宜太高，否则材料块会高度收缩变形，且高温浸蜡时间不要过长。

冰冻切片和石蜡切片各自的优劣之处

创作编号： GB8878185555334563BT9125XW 创作者：凤呜大王* 冰冻切片和石蜡切片各自的优劣之处是什么 1、从一抗的选择方面来看。有的一抗既能做石蜡切片又能做冰冻切片，而有的一抗只能做冰冻切片，关键取决于所要检测的 抗原稳定性，有的抗原不稳定，经过组织固定，脱水、透明、浸蜡、包埋、脱蜡等一系列的做石蜡切片的步骤，所检测的抗原易被破坏，这时只能用冰冻切片来做，检测这类抗原的一抗只能做冰冻切片，而那些稳定的抗原，能经受住石蜡切片的的考验，一般来讲也可以用冰冻切片来做，总得来讲，对于既可以用冰冻切片也可以用石蜡切片检测的抗原，用石蜡切片检测的染色效果要比冰冻切片好一些。 2、从研究目的来看。石蜡切片对组织细胞的定位很准确，而长期冻存组织的冰冻切片可能因冰晶的形成破坏组织细胞形 态的结构，并造成抗原的弥散，从而定位不准确。 3、从抗原的保真性来看。冰冻切片对抗原的保真很好，而石蜡切片在组织固定，脱水、透明、浸蜡、包埋、脱蜡等过程 中可能会对抗原的性质造成影响。 4、从操作步骤的繁琐程度看。染色过程冰冻切片简单，而石蜡切片要求脱蜡入水、抗原修复等过程，比较繁琐。 5、总之，石蜡切片对标本的长期保存较合适，且组织细胞形态结构保持好；而冰冻切片适合对新鲜组织的制片，然后立 即固定、染色效果较好，且免疫荧光中可以相对避免石蜡自发荧光的干扰。 冰冻切片（frozen section）是一种在低温条件下使组织快速冷却到一定硬度，然后进行切片的方法。因其制作过程较石蜡切片快捷、简便，而多应用于手术中的快速病理诊断。冰冻切片的种类较多，有低温恒冷箱冰冻切片法，二氧化碳冰冻切片法，甲醇循环制冷冰冻切片法等。这些方法，随着时代的变迁，科技的发展，许多年前被认为是非常重要的技术，现在也逐步被淘汰了。当然有些技术，如低温恒冷箱冰冻切片法，正在受到青睐。 编辑本段冰冻切片的应用

一、切片机的技术参数如下

一、切片机的技术参数如下： 1、封闭罩壳；手动式轮转控制； 2、样品夹可任意调节，样品最大值不少于3X5CM（高X宽）。 3、★可加配钢刀刀座，并能一次性刀片和钢刀同时使用。 4、切片厚度能达到1—60um，并可在此范围内任意调节。 二、恒温摊片烤片机的技术参数如下： 1★、摊片时，水底透光性能好，方便观察切片拉直、摊展状态；2、烤片时，载物片能呈600C斜插角盛放，烘片托盘能随距离而逐渐升温，保证烘片时的温度均匀； 3、摊片水温：30——850C内任意调节； 4、烘片温度：30——850C内任意调节； 5、烤片温度：30——850C内任意调节； 6、电源：220V. 三、生物组织自动脱水机的技术参数如下： 1、★大屏幕液晶显示，全中文菜单； 2、可预存10——12套程序，供选择； 3、机器内安置空气内循环过滤系统，消除有害气体； 4、★标本保护系统，无论何种情况，都能确保标本盛放篮进入液缸保护，杜绝吊篮悬于空中，使标本风干； 5、可自由选择编程系统，可使标本从任意缸开始，到任意缸结束； 6、液缸数量：不少于12个，最后3个缸必须为石蜡缸； 7、延时起缸时间：1——10天内任意设定；

8、每缸处理时间：1分钟——240小时内任意设定； 9、温度：室温——990C内任意设定； 10、起缸停留滴漏时间：1——200秒可调； 11、抖动搅拌：抖动次数可调，不少于15秒一次； 12、★停电后石蜡能保持融化，继续工作10——15个小时； 13、15个工作日内交货； 14、保修一年，终身维修； 带★内容为设备先进性体现必须满足，如有一项不满足视为谈判无效。 大庆市中医医院 2005年9月14日

HE石蜡切片步骤-使用

石蜡切片制作 一、木精-伊红对染法 ——paraffin section 一、器材及试剂： 1. 器材： 切片刀，切片机，恒温箱，蜡杯，酒精灯，解剖刀，解剖剪，解剖盘，培养皿，镊子，单面刀片，毛笔，包埋盒，染色缸，盖玻片，载玻片，玻片盘，树胶，树胶瓶，显微镜，温度计，脸盆，水浴锅。 切片机，切片刀，温台，恒温箱，解剖刀，镊子，剪刀，解剖针，单面刀片，小台木，洒精灯，包埋纸盒，染色缸，烧杯，水盆，熔蜡炉，蜡杯。 2．试剂： 中性福尔马林固定液、各种浓度的酒精、二甲苯、石蜡、蜂蜡、木精染液，1%伊红酒精溶液，1%盐酸酒精溶液，甘油蛋白粘片剂，中性树胶。 卡诺（Carnoy）固定液，埃利希木精染液，1%伊红酒精溶液，1%盐酸乙醇液，各级酒精（30%、50%、70%、80%、90%、95%、100%），二甲苯，中性树胶。 3. 材料： 鼠肝、肾、心肌、骨骼肌或其他组织、大豆或小麦、绿豆、洋葱、大蒜、蚕豆的根、茎、叶等。 二、实验原理： 石蜡切片是最基本的切片技术，冰冻切片和超薄切片等都是在石蜡切片基础上发展起来的。木素与伊红对比染色法（简称H.E.对染法）是组织切片最常用的染色方法。这种方法适用围广泛，对组织细胞的各种成分都可着色，便于全面观察组织构造，而且适用于各种固定液固定的材料，染色后不易褪色可长期保存。经过HE染色，细胞核被木素染成蓝紫色，细胞质被伊红染色呈粉红色。 三、试剂配法： 1．中性甲醛固定液： 甲醛（37%-40%，市售，本所购买即为此浓度） 100mL 磷酸氢二钠 6.5 磷酸二氢钾（钠） 4g

双蒸水 900mL 2．木精、伊红染色液为碧云天产品 3．1%盐酸乙醇液 盐酸 1份 70%酒精 100份 四、实验步骤： 1．取材 颈椎脱臼法处死小鼠，打开腹腔，剪取肝组织（或其他组织）。 切取的组织块不宜太大，以利于固定剂穿透，通常以5mm×5mm×2mm或10 mm×10 mm×2 mm为宜。取下所需要的肝组织，切成一小块2－3mm厚。 注意事项： （1）取材动作要迅速，不宜作太久的拖延以免组织细胞的成分、结构等发生变化。 （2）切片材料应根据需要观察的部位进行选择，尽可能不要损伤所需要的部分。 2．固定 将切好的肝组织用生理盐水组织洗一下，立即投入中性福尔马林固定液中 固定，固定30－50min。（4度过夜） 注意事项： （1）一般固定液，都以新配为好，配好后应贮存在阴凉处，不宜放在日光下，以免引起化 学变化，失去固定作用。 （2）有些混合固定液的成份之间会发生氧化还原作用，一定要在使用前才混合，如果混合 太早，固定时就没有作用了。 （3）固定材料时，固定液必须充足，一般为材料块的20~30倍，有些水分多的材料，中间 应更换1-2次新液。 （4）材料固定完毕后，保存于严密紧塞或加盖的容器里，同时在容器外上标签，并随同材 料在溶液中投入相应的标签，以免相互混淆。标签上注明固定液、材料来源、日期等。标签 上的文字，应用黑色铅笔或绘图黑墨水书写。 3. 洗涤 材料经固定后,流水冲洗，数小时或过夜。 4. 脱水

冰冻切片与石蜡切片的区别

1．冰冻切片是免疫组织化学染色中最常用的一种切片方法。其最突出的优点是能够较完好地保存多种抗原的免疫活性，尤其是细胞表面抗原更应采用冰冻切片。新鲜的组织及已固定的组织均可作冰冻切片。 冰冻时，组织中水份易形成冰晶，往往影响抗原定位。一般认为冰晶少而大时，影响较小，冰晶小而多时，对组织结构损害较大，在含水量较多的组织中上述现象更易发生。冰晶的大小与其生长速率成正比，而与成核率（形成速率）成反比，即冰晶形成的数量愈多则愈小，对组织结构影响愈严重。因此，应尽量降低冰晶的数量。Fish认为冰冻开始时，冰晶成核率较慢，以后逐渐增加，其临界温度为-33。C,从-30。C降至-43。C之间，成核率急剧增加达1018，然后再减慢。基于上述理论可采取以下措施减少冰晶的形成。 （1）速冻，使组织温度骤降，缩短从-33。C43。C的时间，减少冰晶的形成。其方法有二： ①干冰-丙酮（酒精）法：将150-200ml丙酮（酒精）装入小保温杯内，逐渐加入干冰，直至饱和呈粘稠状，再加干冰不再昌泡时，温度可达-70℃C，用一小烧杯（50-100ml）内装异戊烷约50ml，再将烧杯缓慢置入干冰丙酮（纯酒精）饱和液内，至异戊烷温度达-70℃时即可使用。将组织（大小为1cm××）投入异戊烷内速冻30-60s后取出，或置恒冷箱内以备切片，或置-80℃低温冰箱内贮存。 ②液氮法：将组织块平放于软塑瓶盖或特制小盒内（直径约2cm），如组织块小可适量加OCT包埋剂浸没组织，然后将特制小盒缓缓平放入盛有液氮的小杯内，当盒底部接触液氮时即开始气化沸腾，此时小盒保持原位切勿浸入液氮中，大约10-20s组织即迅速冰结成块。取出组织冰块立即置入-80℃冰箱贮存备用，或置入恒冷箱切片机冰冻切片。 （2）将组织置于20%-30%蔗糖溶液1～3天，利用高渗吸收组织中水分，减少组织含水量。 影响冰冻切片的因素较多，因此，技术难度较大，选择好的冰冻切片机是保证切片质量的关键。目前冰冻切片机有两类： ①恒慢冰冻切片机（Cryastat）：为较理想的冰冻切片机，型号很多，但其基本结构是将切片机置于-30℃C低温密闭室内，故切片时不受外界温度和环境影响，可连续切薄片至2-4μm，完全能满足免疫组织化学标记要求。切片时，低温室内温度以-15℃～18℃为宜，温度过低组织易破碎，抗卷板的位置及角度要适当，载玻片附贴组织切片，切勿上下移动。 ②开放式冰冻切片机：包括半导体致冷切片机和甲醇致冷切片以及老式的CO2、氯乙烷等冷冻切片机。切片时暴露空气中，温度不易控制，切片技术难度大，在高温季节，切片更加困难，且切片厚8～15μm，不易连续切片，但其优点是价廉，国内有生产。 冰冻切片后如不染色，必须吹干，贮存低温冰箱内，或进行短暂预固定后贮存冰箱保存。 2．石蜡切片其优点是组织结构保存良好，在病理和回顾性研究中有较大的实用价值，能切连续薄片，组织结构清晰，抗原定位准确。用于免疫组化技术的石蜡切片制备与常规制片略有不同：①脱水、透明等过程应在4℃。C下进行，以尽量减少组织抗原的损失。②组织块大小应限于2cm××，使组织充分脱水、透明、浸蜡。③浸蜡、包埋过程中，石蜡应保持在60℃以下，以溶点低的软蜡最好（即低温石蜡包埋）。 组织块脱水、透明、浸蜡时间参考表1-3： 表1-3 组织块处理时间表 1 70%乙醇4℃3～4h 2 80%乙醇4℃3～4h 3 90%乙醇4℃2～3h 4 95%乙醇Ⅰ4℃2～3h 5 95%乙醇Ⅱ4℃1～2h

切片机操作指示

文件题目：切片机操作指示第 2 页﹐共3页 1.目的 提供一套体系和指导，以及对切片机的一般保养。 2.定义 经压片后的电极片切成所需型号。 3.范围 此工作指示仅适合切片机操作及保养。 4.操作步骤 4.1 开启主电源开关及供应气源。 4.2 按“控制开” “纠偏开” “集尘开”按纽，灯亮即为打开，在备用状态。 4.3 将待切电极片用升降车运送到放卷固定架上，按“夹紧”按扭紧固。 4.4 确保收卷涨辊的连接叉口向外﹑拉下红色压杆，才能拉出涨辊，将收卷铝芯装至上下收卷轴上， 推进涨辊，压紧红色压杆。 4.5 按触摸屏“中文系统”进入，按“手动”画面进入，将“放卷制动器” “点动切刀运转” “点动收卷运转” 全部按“ON”打开，即可进入准备点动或脚制走带状态。 4.6 将收卷跟踪杆开关“进入自动，退“扭至“退”位置，跟踪杆退至起始点停止后，将开关扭返“自动” 位置。 4.7 将待切电极片经滚轮穿引至切口位置“点动”或踩脚制开关走带切割成条。经刀口面切出之小片经 滚轮导杆牵引至上方收卷，经刀背面切出小片经滚轮导杆牵引至下方收卷，用胶胝粘贴于铝芯并固定。 4.8 将纠偏控制器和张力控制器设定为自动状态按“AUTO”。 4.9 将开关：“前压料” “后压料” “夹送辊” “压带上”“压带下” “上压卷” “下压卷” “排废料”打开压住电 极片。 4.10按“张力（开/关）”将按钮灯熄灭或按触摸屏“手动”进入画面将“放卷制动器”按“OFF”。 4.11按“监视器”画面分别按“收卷长度复位” “收卷总长度复位”将长度计数器归零。 4.12以上程序完成后，按“蜂鸣器开” “低速开” “高速开”，机器已自动运行，再调整其转速器至所需转 速。 4.13如切片两边料宽度相差太大，则调整纠偏感应器位置，使其两端边料大致相同。 4.14如收卷料直径达到一定值后按停止将压料臂升高，扭开关“上压卷” 、“下压卷”将涨轴卸气，扭开 关“涨轴上” “涨轴下”，拉下红色压杆﹑拉出收卷涨辊﹑按真空包装机操作指示取出电极片包装。 4.15作业中断料或其它异常现象，经检视处理完成后应观察信号灯，若红灯亮，则按“呜笛关”才能重 新启动开机。 4.16 关机，按控制屏“纠偏开” “集尘开”将按纽灯熄灭关闭。 4.17 将总电源关闭，再关闭气源。 4.18 其它附属设备归位。 5.质量要求 5.1 确认两端边料切断后无毛边﹑皱纹现象。 5.2 已切之材料两边涂布良好﹑无金属面出现。 5.3 作业中断裂重新接合剪接长度须与原规格长度相同。 5.4 已切完成的电极片，必须有包装保护，防止刮伤及吸湿。

组织切片石蜡切片过程

石蜡切片过程 一、石蜡包埋: 1.脱水：组织水洗后便可酒精脱水，70% →80% →90% →95%→ 100%酒精（无水乙醇）→100%酒精，各级酒精脱水时间30-45 min。（注意：80%酒精内组织可留之较久，当天如果来不及做完就可以暂时保存一晚上，次日再继续做下去。70%的酒精可作为更久的保存剂。） 2.透蜡：脱水后组织：50%酒精+50%二甲苯30 - 45min. 二甲苯（组织透明即可停止) 15min. 50%二甲苯+50%石蜡20-30min. 纯石蜡1 45min. 纯石蜡2 45min.（透腊之前做好准备工作：准备腊杯，烘箱温度保持55—60℃左右，使石腊熔化，温度不宜过高，以免使组织发脆。） 3.包埋： a.折好纸盒，准备小镊子、酒精灯、解剖针、冷水等。 b.用温热吸管吸取石蜡注入纸盒。等待底稍微凝固，温镊子夹住样品放入盒子中央，面朝底(可以将蜡一次倒入纸盒，然后待蜡表面起膜后，用温镊子夹住样品放入蜡中，待冷却即可，整个操作过程中，切勿让蜡中起气泡)。 c.两手拿着两端，入冷水一半，吹气，使表面石蜡形成移较厚腊层，然后急速全部进入冷水中3分钟。 d.修正蜡块（上下两个面一定要平行并且光滑） e.固着蜡块

二、切片 1.切片（切片时，可以在刀片以及刀片周围涂上一点甘油） 2.贴片烤片（甘油蛋白=1/2甘油+1/2鸡蛋清）（在贴片时，用细吸管取一点点甘油蛋白（越少越好）于载玻片上，然后用手抹匀，手一定要干净。将切片放在载玻片（光亮面朝向下），然后滴几滴冷水使切片悬于水上。接着将载玻片放在37℃上烘烤。 常见问题分析： 1.切片分离不能形成蜡带：?室温过低，蜡过硬。 2.蜡带弯曲：?蜡块口下面不平行，或蜡块不与刀刃平行所致。 3.切片厚薄不一:?切片刀或蜡块未固定紧。 4.切成片后，组织与蜡块脱离：?脱水不干净等。 5.蜡片易粘在切片上或蜡片萎缩：?室温太高或蜡太软或刀的角度 太小。 6.切片破裂：?浸蜡不足或浸蜡温度过高，或在脱水剂、透明剂中 时间过长，引起组织发脆或有杂质，材料脱钙不完全，此种无法补救。 7.蜡片上卷，切过刀口即破裂：?刀口太钝或沾有石蜡或刀的角 度过大或蜡太硬。 *：包埋时，时间长会使标本变质，过短则石蜡不能透进标本。石蜡包埋过程中，注意控制温度保持在58-60℃，石蜡不能融化。

石蜡切片的制作

石蜡切片的制作 一：试验目的 掌握石蜡切片的制作 二：器材和试剂 实验动物、手术刀、手术剪、镊子、托盘、标本缸、石蜡切片机、恒温箱、水浴锅、温度计、烧杯、电磁炉、石蜡、包埋纸盒、毛笔、载玻片、盖玻片、中性树胶、染色架、鸡蛋清、甘油、甲醛、各级浓度的酒精(50%、70%、80%、85% 、90%、95%、100%)、二甲苯、苏木精、伊红、盐酸、蒸馏水、30%三氯化铁液。 三：试剂配制 苏木精染液：甲液：苏木精1g、无水酒精100ml;乙液：30%三氯化铁液4ml、蒸馏水 100ml、盐酸1ml。使用时将甲液、乙液等量混合。 伊红染液：伊红1g、95%酒精100ml、冰醋酸1-2滴。 1%盐酸酒精：盐酸1ml、70%酒精99ml。 福尔马林：甲醛10ml、蒸馏水90ml。 蛋白甘油1:1配制 四：实验步骤 1.取材和固定 处死实验动物，迅速取出所需的组织，清洗干净放入福尔马林中固定，12h后换福尔马林。 注意事项： （1）取材动作要迅速，不宜作太久的拖延以免组织细胞的成分、结构等发生变化。 （2）切片材料应根据需要观察的部位进行选择，尽可能不要损伤所需要的部分。 （3）材料固定完毕后，保存于严密紧塞或加盖的标本缸里，同时在容器外上标签。标签上注明固定液、材料来源、日期等。 ⑷如需清洗的材料可用生理盐水轻轻擦洗。 2.清洗 材料固定后，用清水清洗4小时 2.脱水： 50%酒精12h,在依次经70%、85%、95%、100%各级酒精溶液脱水1-2h。 注意事项： (1)脱水必须在有盖的玻璃品中进行，防止吸收空气中的水分和酒精挥发。 (2)在低浓度酒精中，每级停留不宜太长，否则易使组织变软，助长材料的解体。

石蜡切片教学文档

石蜡切片（paraffin section）组织学常规制片技术中最为广泛应用的方法。石蜡切片不仅用于观察正常细胞组织的形态结构，也是病理学和法医学等学科用以研究、观察及判断细胞组织的形态变化的主要方法，而且也已相当广泛地用于其他许多学科领域的研究中。教学中，光镜下观察切片标本多数是石蜡切片法制备的。活的细胞或组织多为无色透明，各种组织间和细胞内各种结构之间均缺乏反差，在一般光镜下不易清楚区别出；组织离开机体后很快就会死亡和产生组织腐败，失去原有正常结构，因此，组织要经固定、石蜡包埋、切片及染色等步骤以免细胞组织死亡，而能清晰辨认其形态结构。 石蜡切片制作基本技术石蜡切片法包括取材、固定、洗涤和脱水、透明、浸蜡、包埋、切片与粘片、脱蜡、染色、脱水、透明、封片等步骤。一般的组织从取材固定到封片制成玻片标本需要数日，但标本可以长期保存使用，为永久性显微玻片标本。 1.取材应根据要求选取材料来源及部位。例如植物细胞有丝分裂多选取洋葱根尖，细胞分裂快又便于切取；猪的肝小叶边界清晰明确；耳蜗以豚鼠的内耳易于定位和剥离。材料必须新鲜，搁置时间过久则产生蛋白质分解变性，导致细胞自溶及细菌的滋生，而不能反映组织活体时的形态结构。 2.固定用适当的化学药液——固定液浸渍切成小块的新鲜材料，迅速凝固或沉淀细胞和组织中的物质成分、终止细胞的一切代谢过程、防止细胞自溶或组织变化，尽可能保持其活体时的结构。固定能使组织硬化，有利于切片的进行，而且也有媒浸作用，有利于组织着色。固定液的种类很多，其对组织的硬化收缩程度以及组织内蛋白质、脂肪、糖类等物质的作用各不相同。 3.洗涤与脱水固定后的组织材料需除去留在组织内的固定液及其结晶沉淀，否则会影响以后的染色效果。多数用流水冲洗；如果组织经酒精或酒精混合液固定，则不必洗涤，可直接进行脱水。固定后或洗涤后的组织内充满水分，如不除去水分就无法进行以后的透明、浸蜡与包埋，因为透明剂多数是苯类，苯类和石蜡均不能与水相融合，水分不脱尽，苯类不能浸入。酒精为常用脱水剂，它既能与水相混合，又能与透明剂相混，为了减少组织材料的急剧收缩，应使用从低浓度到高浓度递增的顺序进行，通常从30％或50％酒精开始，经70％、85％、95％直至纯酒精（无水乙醇），每次时间为1～数小时，如不能及时进行各级脱水，材料可以放在70％酒精中保存，因高浓度酒精易使组织收缩硬化，不宜处理过久。正丁醇、叔丁醇、丙酮及二氧陆环等也可做脱水剂。 4.透明纯酒精不能与石蜡相溶，还需用能与酒精和石蜡相溶的媒浸液，替换出组织内的酒精。材料块在这类媒浸液中浸渍，出现透明状态，此液即称透明剂，透明剂浸渍过程称透明。常用的透明剂有二甲苯、苯、氯仿、正丁醇等，各种透明剂均是石蜡的溶剂。通常组织先经纯酒精和透明剂各半的混合液浸渍1～2小时，再转入纯透明剂中浸渍。透明剂的浸渍时间则要根据组织材料块大小及属于囊腔抑或实质器官而定。如果透明时间过短，则透明不彻底，石蜡难于浸入组织；透明时间过长，则组织硬化变脆，就不易切出完整切片，最长为数小时。 5.浸蜡与包埋用石蜡取代透明剂，使石蜡浸入组织而起支持作用。通常先把组织材料块放在熔化的石蜡和二甲苯的等量混合液浸渍1～2小时，再先后移入2

石蜡切片与冰冻切片

石蜡切片与冰冻切片 一、组织和细胞标本类型： （一）组织标本类： 1、石蜡切片：组织形态保存好 2、冰冻切片：抗原性保存好 （二）细胞标本类： 1、组织印片 2、细胞培养片（细胞爬片） 3、细胞涂片 二、组织取材 1、脑组织和神经组织应采用灌注固定后，再进行后固定。 2、组织取材注意事项： （1）标本新鲜：组织要求离体后30min~2h内浸入固定液，尤其是开展分子生物学工作。动物组织取材要求心脏还在跳动时取材。 （2）注意防止人为因素的影响刀和剪要快，避免挤压。 （3）组织块的大小厚为0.1~0.3cm，大小可根据需要而定。 三、活细胞标本的制备法 （1）细胞大量培养后，经消化将细胞制成悬液（106）涂在涂有切片粘合剂的载玻片上，凉干后固定。 （2）将细胞直接培养在盖玻片上。 （3）将细胞直接培养在6孔或9孔板上，经固定后可行IHC。 四、石蜡切片的制备 1、由于石蜡不溶于水和醇类试剂，只溶解在二甲苯类试剂中。因而，组织经固定和水洗后含大量水分，需用乙醇类试剂进行脱水，水脱完后，组织内含有大量的乙醇，还必须用能溶解乙醇的二甲苯来置换，最后经浸蜡，组织细胞内被大量石蜡支称，才使组织能用于石蜡切片。 2、小动物组织脱水、透明和浸蜡时间 75%乙醇30min，85%乙醇30min，95%乙醇Ⅰ1h，Ⅱ1h，Ⅲ过夜或2h；无水乙醇Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ各30min；二甲苯Ⅰ15min，Ⅱ10min，Ⅲ10min；石蜡Ⅰ30min，石蜡Ⅱ30min，石蜡Ⅲ1~2h。 五、冰冻切片的保存和使用 1、冰冻切片固定后-80℃保存备用 2 、冰冻切片从-80℃取出，凉干或电吹风吹干后可直接进行免疫组化标记。

基于PLC的泡沫塑料自动切片机控制系统设计

基于PLC的泡沫塑料自动切片机控制系统设计 陈德仙，王成福 (金华职业技术学院，浙江金华321007) 摘要：笔者设计了一个基于PL c控制的泡沫塑料自动切片加工控制系统。重点设计了自动切片控制系统的硬件电路图、控制程序方框图，并对P l_C进行了选型分析。 关键词：泡沫塑料；自动控制；切片；可编程控制器 中图分类号t TP271．4文献标识码：A文章编号：1008—8970一(2007)01—0088—02 随着泡沫塑料加工行业的迅速发展，由可编程控制器 控制的切片机在工业中应用越来越广泛，切片机可以把大 小，形状各异的同—物品切成一定厚度的成品。笔者所设计 的泡沫塑料自动切片机主要操作对象是工业中所用的塑料 泡沫，而采用自动控制技术，与手工切片相比在效率和切片 厚度上有了很大的提高。 一、系统组成 系统组成主要分为硬件电路与软件控制两部分。切割厚度由4位拨盘开关设定输入，范围为000．0～199．9m m。在刀架电机的转轴上装有测速齿轮，沿圆周均匀开5个槽，使用二线制接近开关，电机转轴每转1圈，向PC发出5个计数脉冲，转两圈刀架高度变化l m m，接近开关发出10个脉冲，根据设定的切割厚度可以简单地计算出PC应计的脉冲个数。电机轴转速为10转，秒，PC的计数频率应达N50t-I Z。 二、硬件电路设计 (一)主电路图 切片机控制系统的主电路如图1所示，采用380伏的三相电源，经交流接触器、热继电器等常用低压电器驱动三相电机运转。 它共有5个电机，带锯电机驱动刀片旋转；两个磨刀电机带动砂轮对刀片研磨，使刀片锋利；台面电机为直流电机(直流电由晶闸管直流调速装置供给)，驱动台面前移或后移；刀架电机通过蜗轮，蜗杆传动机构驱动左、右丝杆正转或反转，刀架随滑套上移或下移，刀架电机制动方式为电磁刹车，电磁刹车使用制动电磁铁；Q Fl控制5台电机的通断情况；FU l一FU3分别对4台电机起过载保护作用；当某台电机的电路出现故障时，空气开关Q F会自动跳闸，使故障电机与电路分离，便于维修人员的检修，又不影响系统的工作。 图1切片机主电路(a)切片机主电路(b) K M l一K M7为交流接触器的常开主触头，通过程序对交流接触器线圈通断的控制从而达到对电机的控制。FRl～FR2对各台电机起(过流、断相、短路、过载躲护作用，保证电路的正常工作。晶闸管直流调速装置主要控制直流电机M5的控制。 (二)PL c外部电路 1．PLC选型 本设计选用日本欧姆龙C P M2A系列可编程控制器控制电机的切片，切片机的工作方式有两种：自动和手动。 C PM2A是一台设有20点、30点、40点和60点I／O端子的PL C。它有两种输出方式分别为：继电器输出型和晶体管输出型，并有二种电源可用。为使PLc的I／O容量提高到最大的120点I／O，与C PU单元连接的扩展单元可多达3个。有3个扩展单元可用：20点帕单元、12点输入单元和8点输出单元。将3"个20点I／O单元与60内装I／O端子的C PU单元连接就得到120点I／O的最大I／O容量。本设计考虑到两种方式下的输入点共有30州输入端子有24个，输出端子有6个)，超出PL C本身24+输入点，由于手动和自动只能以一种方式工作，故某些输入点可以分时复用，一点顶两点用，还考虑留有15％～20％余量，所以本系统选用60点I／O端子的PLC。 输入单元：拨盘开关4个分别为小数位、个位、十位、百位；接近开关SW1A'-，选择开关s l1个；磨刀开关S21个；按钮SB0一SB9l O+；限位开关ST l一ST44个。 [收稿日期12006—10一18 昨者简介】1．陈德似1980一)，女，浙江磐安人，浙江工业大学在读硕士，金华职业技术学院教师，主要从事仪表检测及自动化装置的研究工作．以及应用电子技术专业教学工作；2．王成福(1962一)，男，浙江金华人，金华职业技术学院副教授，主要从事电子技术的教学研究。

石蜡切片的制作过程(精)

石蜡切片的制作 目的要求:了解生物制片的基本原理和方法;了解石蜡切片制作的基本过程;学会制作石蜡切片。 一、生物制片的基本原理 (一生物制片的目的与发展概况 生物制片是研究生物有机体微观结构的基础方法,其目的是提供在显微镜下以适度的样品,有效地对其进行形态和功能观察研究。 (二生物制片的方法 当我们研究生物体的组织或细胞时,除了某些生物体可用相差显微镜或偏光显微镜等方法达到观察目的外,其余大部分生物体,因为组织较厚,光线不易透过内部等关系而达不到观察的要求,为了达到此目的,就必须将生物体的组织切成薄切片或不切片,经过一系列处理,使光线易于透过,即可进行观察。因此,根据标本的制作方法分为切片法和非切片法两种。这些方法,各有优缺点,应该适当的配合使用,才能获得比较理想的结果。 1.切片法 (1切片法的种类 切片法就是利用锐利的刀具,将器官组织或幼小个体分割成许多极薄的薄片,而制成切片标本的一种方法。切片法在切成薄片以前必须设法使组织内渗透某种支持物质。使组织保持一定的硬度,然后利用切片机进行切片。根据所用支持物质的不同切片法又可分为石蜡切片法、火棉胶切片法、冰冻切片法、炭蜡切片法等类型。现分述如下: ⅰ.石蜡切片法

石蜡切片法即用石蜡作为支持剂进行切片的方法。石蜡切片法是一般组织学、病理学等常规制片方法,因此用得最多,它有很多优点:比较省时间,容易操作,可切成极薄的切片(4um 以下,能制作连续切片,组织块可包埋在石蜡中永久保存。缺点是只能用于较小的组织块,较大的组织块不易切好,容易破碎,组织在脱水透明过程中产生收缩并易变脆。制片时间太长。 ⅱ.火棉胶切片法 火棉胶切片法是以火棉胶为支持剂进行切片的方法。此法的优点是包埋过程中不用二甲苯及石蜡,不经高温,可避免组织收缩及变脆,适于精细材料(如脑的切片,也引火棉胶有韧性切片不知有折卷或破裂,适宜于大块组织及多空洞的组织(脑、眼球,硬度较高的组织(骨、肌腱。缺点:手续麻烦、费时间,切片不能切薄,起码在10um以上,不能作连续切片,因此,在生物制片技术上已经不经常采用。 ⅲ.冰冻切片法 冰冻切片法是利用液体二氧化碳或其它药剂(如氯乙烷在变成气体时吸收大量的热使组织迅速结成冰块而后再进行切片的方法。目前国内外用半导体致冷调节器来代替二氧化碳的冰冻,冷冻速度更快更为方便。 冰冻切片法的优点是较前两种方法简便,组织不经脱水、透明、包埋等手续即可切片,因而可节省很多时间,十分钟左右即能制成切片。常用于临床病理手术诊断,银材料不经溶媒处理就可直接进行切片,材料不受试剂的激烈刺激及温度影响,所以组织没有显著的收缩,细胞形态不致有大的改变,也引冰冻切片不需有机溶剂处理,所以能保存脂肪、类脂等成分,所以冰冻切片法常用于组织化学,尤其是神经组织,临床病理学等方面的研究。 新鲜的组织或已经固定的组织,经短时间处理后即可进行切片。用任何固定及处理的材料均适合冰冻切片,但一般的经验用福尔马林固定的材料最适合冰冻切片,而用酒精、甘油保存的材料必须充分水洗后才易于冰冻,否则不易切成完整的切片

石蜡切片步骤

石蜡切片制作 大致步骤：取材、固定、洗涤和脱水、透明、浸蜡、包埋、切片和粘片、脱蜡、染色、脱水、透明、封片等步骤。 1、取材 植物材料选择时必须尽可能不损伤植物体或所需要的部分。 取材必须新鲜，尽可能割取所需要的组织块，并随即投入固定液。 取材时刀要锐利，避免因挤压细胞使其受到损伤。 切取的材料应该小而薄，便于固定剂迅速渗入内部。一般厚度不超过2mm，大小不超过5*5mm2。 2、固定 用适当的化学药液—固定液浸渍切成小块的新鲜材料，迅速凝固或沉淀细胞和组织中的物质成分、终止细胞的一切代谢过程、防止细胞自溶或组织变化，尽可能保持其活体时的结构。 固定液的选用：FAA固定液 FAA固定液配制：福尔马林（38%甲醛）5 ml 冰醋酸 5 ml 70%酒精 90 ml 5 ml甘油（丙三醇） 固定时间根据材料块的大小及松密程度而定。 3、洗涤与脱水 固定后的组织材料需要除去留在组织内的固定液及其结晶沉淀，否则会影响以后的染色效果。多数用流水冲洗：使用含有苦味酸的固定液固定的则需要用酒精多次浸洗；如果组织经酒精或酒精混合液固定，则不必洗涤，可直接进行脱水。 酒精为常用的脱水剂，为了减少组织材料的急剧收缩，应使用从低浓度到高浓度递增的顺序进行，通常从30%或50%酒精开始，经70%、85%、95%直至纯酒精（无水乙醇），每次时间为1-数小时，如不能及时进行脱水，材料可以放在70%酒精中保存，因高浓度酒精易使组织收缩硬化。 4、透明 选用二甲苯为酒精和石蜡的浸媒液，替换出组织内的酒精。通常组织先经过纯酒精和透明剂各半的混合液浸渍1-2小时，再转入纯透明剂中浸渍。时间根据材料块大小而定。 5、浸蜡与包埋 用石蜡取代透明剂，使石蜡浸入组织而起支持作用。通常把组织材料块放在熔化的石蜡和二甲苯的等量混合液浸渍1-2小时，再先后移入2个熔化的石蜡液中浸渍3小时左右，浸蜡应在高于石蜡熔点3℃左右的温箱中进行，以利于石蜡浸入组织内。浸蜡后的组织材料块放在装有蜡液的容器中（摆好在蜡中的位置），待蜡液表层凝固即迅速放入冷水中冷却，即做成含有组织块的蜡块。容器可用光亮且厚的纸折叠成纸盒或金属包埋框盒。如果包埋的组织块数量多，应进行编号，以免差错。石蜡熔化后应在蜡箱内过滤后使用，以免因含有杂质而影响切片质量，且可能损伤切片刀。 6、切片 包埋好的蜡块用刀片修成规整的四棱台，以少许热蜡液将其底部迅速贴附于小木块上，夹在轮转式切片机的蜡块钳内，使蜡块切面与切片刀刃平行，旋紧。切片刀的锐利与否、蜡块硬度适当都直接影响切片质量，可用热水或冷水等方法适当改变蜡块硬度。通常切片厚度为 4-7微米，切出一片接一片的蜡带，用毛笔轻托轻放在纸上。 7、贴片与烤片