植物组织培养作业

2010年植物组织培养作业

一、填空题

1、组织培养的理论依据是：植物细胞的全能性

2、植物组织培养的类型有：植物组织培养分愈伤组织培养、器官培养、细胞培养、原生质体培养。

3、植物快速繁殖的类型无菌短枝型丛生芽增值型器官发生型胚状体发生型原球菌型。

4、1943年， white 提出了植物细胞全能性学说，并出版了《植物组织培养手册》，从而使植物组织培养为一门新兴学科。

5、组织培养实验室必要的设备有超净工作台、高压灭菌器、空调机、天平、显微镜、蒸馏水发生器、酸度计。

6、培养基成分主要包括无机营养成分、有机营养成分、植物生长调节物质、碳水化合物、其它物质。

7、糖在植物组织培养中是不可缺少的，它不但作为离体组织赖以生长的离体组织赖以生长的碳源，而且还能还能维持培养基渗透压。

8、琼脂在固体培养时，是作为培养基的凝固剂和支持物，一般用量为6-10g／L之间。9、常用的生长素有 IAA(吲哚乙酸) 、 IBA （吲哚丁酸）、NAA （萘乙酸）、 2,4-D （二氯苯氧乙酸）等，常用的细胞分裂素 6-BA 、2ip 、 ZT 。

10、外植体污染原因从病源方面主要有细菌污染和真菌污染两大类。

11、防褐变的措施有取材母株预处理、培养基和培养条件、加入防褐剂、连续继代培养。

12、驯化的目的在于在于提高试管苗对外界环境条件的适应性，提高其光合作用的能力，促使试健壮，提高苗的移裁成活率。

13、离体叶片在诱导愈伤组织的培养基上培养，一般从叶缘切口或叶脉处容易发生愈伤组织。

14、热处理脱毒有温汤浸渍、热空气处理。

15、脱毒苗的鉴定方法有生物学检测、血清学检测、分子生物学检测。

16、茎尖大小与脱毒效果成反比。

17、病毒在植株体内的分布是不均匀的，其分布规律为随着植物组织的成熟而增加。

18、由愈伤组织再生植株有两条途径脱分化和再分化。

二、选择题

1、1902年，（ A ）提出了“细胞的全能性”设想。

A Haberlant

B Marshing

C Steward

D Schwawin

2、第1个植物病毒——烟草花叶病毒，是在( A )发现的。

A、1892年，俄国科学家伊万诺夫斯基

B、1898年，荷兰科学家贝杰林克

C、19世纪末期，德国的A．Mayer

D、1935年美国人Stanley和Bawden

3、1962，Mursashing和Shoog发现了（ A ）培养基

A MS

B Miller

C N6

D MT

4、20世纪30年代，植物组织培养领域有两大发现，一是（ B ）族维生素对植物生长的

重要性，二是生长调节物质的发现。

A A

B B

C C

D E

5、下列有关细胞全能性的含义，正确的是（ C ）

A 每个生物体内的所有细胞都具有相同的功能

B 生物体内的任何一个细胞可以完成该个体的全部功能

C 生物体的每一个活细胞都具有发育成完整个体的潜能

D 生物体的每个细胞都经过产生、分裂、分化、生长、衰老、死亡的全过程

6、植物组织培养形成的愈伤组织进行培养后，又可以分化形成根、芽等器官，这一过程称为（ C ）

A、脱分化

B、去分化

C、再分化

D、脱分化或去分化

7、下列不能作为植物组织培养的材料是：（ D ）

A、秋海棠的叶

B、马铃薯的块茎

C、成熟的花粉

D、木质部中的导管细胞

8、用植物组织培养技术可以培养或生产出（ D ）。

A、次生代谢产物

B、无病毒植物

C、人工种子

D、A，B，C均可

9、生长素与细胞分裂素在植物组织培养中的作用是（ B ）

A 生长素促进芽的生长，细胞分裂素促进根的生长

B 生长素促进根的生长，细胞分裂素促进芽的生长

C生长素与细胞分裂素均促进根的生长

D生长素与细胞分裂素均促进芽的生长

10、在生物体内，细胞没有表现出全能性，而是分化为不同的组织、器官，是因为（ B ）

A、细胞丧失了全能性

B、基因的表达有选择性

C、不同的细胞内基因不完全相同

D、在个体发育的不同时期，细胞内的基因发生了变化

11、下列细胞中，不具有细胞全能性特点的是（ D ）

A、叶肉细胞

B、花粉粒

C、茎的形成层细胞

D、木质部导管细胞

12、国际植物生理学会规定，植物必需元素，其浓度大于（ A ）的应属于大量元素。

A 0.5mmol/L

B 1.0 mmol/L

C 0.1 mmol/L

D 0.05 mmol/L

13、下列激素，（ D ）是天然的

A IBA

B NAA

C BA

D ZT

14、添加到培养基中既能吸附有毒物质，又能防止材料褐变的是（ B ）

A 激素

B 活性炭

C 琼脂

D 有机物

15、离体培养中，对温度的调控比对光照更为重要，培养室一般所用的温度是（ C ）

A 15-35℃

B 23-32℃

C 25±2℃

D 20-23℃

16、组培苗驯化移栽时，湿度、光照、温度的控制非常重要，其中湿度控制要求是（ C ）。

A 由高到低

B 由低到高

C 保持高湿85％

D 湿度恒定50％

17、外植体表面灭菌可选择的表面灭菌剂的种类较多，但灭菌效果最好的是（ C ）

A 2％次氯酸钠

B 0.1％氯化汞

C 70％酒精

D 吐温80

18、增殖培养阶段，每周期增殖的倍数是x；全年可增殖的周期数为n；则年增殖率y为（ A ）

A x n

B xn

C n x

D 12xn

19、生根培养一般可采用1／2或者1／4MS培养基，，并加入适量的（ D ）。

A 2.4-D

B 赤霉素

C 细胞分裂素

D 生长素

20、下列培养基中（ C ）无机盐的浓度最低。

A MS培养基

B B5培养基

C White培养基

D N6培养基

21、影响培养基凝固程度因素有（ D ）

A 琼脂的质量好坏

B 高压灭菌的时间与温度

C 培养基的PH

D 以上都是

22、下列不属于大量元素的盐是（ C ）

A NH4NO3

B KNO3

C ZnSO4.7H2O

D MgSO4.7H2O

23、脱落酸（ABA）需要用（ C ）法灭菌。

A 灼烧灭菌

B 干热灭菌

C 过滤灭菌

D 高压湿热灭菌

24、外植体的大小应根据培养的目的而定。如果用于脱毒，则外植体要（ A ），如果用于快繁则外植体宜（）。

A 小，大

B 大，小

C 小，小

D 大，大

25、接种操作中一方面要建立（ A ）的概念，对可能有菌的地方进行严格消毒处理，另一方面操作时干净利落，不可拖泥带水。

A 无菌

B 污染

C 科学

D 灭菌

26、外植体的成苗途径有（ D ）。

A先形成愈伤组织，然后再分化成完整的植株的

B先形成胚状体，再发育成完整植株的

C经诱导后直接形成根与芽，发育成完整的植株的

D以上三种都有可能

27、在组织培养中，月季、菊花是通过（ D ）方式快繁；蝴蝶兰是通过（）方式快繁的。

A 无菌短技型，原球茎发生型 B原球茎发生型，无菌短技型

C 无菌短技型，器官发生型 D胚状体发生型，原球茎发生型

28、对培养间环境要求描述错误的是（ A ）。

A 培养间一般温度控制在恒温30℃左右

B 培养间内安装日光灯时选用电子整流器，发热量小

C培养间可配置一定数量的紫外消毒灯，以便定期对培养间进行消毒杀菌

D 一般植物而言，光照时间每天12—16h，光照强度在2000—3000lx

29、生产规模与生产计划的制定时，每次继代的增殖系数≥3，继代周期（）为宜。

A ≥30天

B ≤30天

C ≥50天

D ≤50天

30、为了诱导芽的形成，培养基中细胞分裂素与生长素的浓度（ A ）

A 比值大

B 比值小

C 比值相等

D 比值的大小没有关系

31、为了诱导根的形成，培养基中细胞分裂素与生长素浓度（ B ）

A 比值大

B 比值小

C 比值相等

D 比值的大小没有关系

32、一般情况下，培养的愈伤组织需要每（ B ）周继代一次。

A 1-2

B 2-3

C 4-5

D 6-7

33、一般选择很（ A ）的愈伤组织的材料进行悬浮培养

A 疏松

B 致密

C 疏密适中

D 幼嫩

34、离体叶片在诱导愈伤组织的培养基上培养，一般从（ A ）处容易发生愈伤组织。

A 叶缘（切口）或叶脉

B 叶柄基部

C 叶尖

D 叶缘（切口）

35、愈伤组织通过器官发生形成再生植株的方式最好的是( D ).

A 先根后芽

B 先芽后根

C 根、芽同时发生

D 胚状体发生

36、在茎段培养中，促进腋芽增殖用（ B ）该激素是最为有效的，依次为Kt和Zt等。

A NAA

B 6-BA

C Kt

D Zt

37、对植物病毒类型描述错误的是（ D ）

A、植物病毒大部分属于单链RNA病毒，少数为DNA病毒

B、基本形态有杆状、丝状和等轴对称的近球形二十面体

C、绝大多数植物病毒是由核酸构成的核心与蛋白质构成的外壳组成的，极少数还含有脂肪和非核酸的碳水化合物

D、大多数植物病毒是由多种外壳蛋白组成

38、植物病毒入侵植物细胞的方式是（ A ）

A、必须通过寄主的伤口方能侵入

B、通过繁殖进入植物茎尖的分生组织

C、直接入侵植物细胞

D、其他

39、已知的植物病毒种类达一千多种，绝大多数种子植物易发生病毒病（ C ）。

A、一种病毒只侵染一种植物，植物病毒具有专一性

B、一种病毒可侵染许多植物，而同种植物又可被许多病毒侵染

C、一种病毒可侵染许多植物，而同种植物只被专一病毒侵染

D、一种病毒只侵染一种植物，而同种植物又可被许多病毒侵染

40、植物病毒病害防治上，植物病毒脱毒技术得到了广泛的应用，下列脱毒技术效果最好、应用最广泛的是（ A ）。

A、热处理脱毒法

B、茎尖培养脱毒法

C、热处理与茎尖培养相结合的脱毒法

D、基因工程技术脱毒法

41、茎尖培养中最主要的影响因素就是切取茎尖的大小，一般要求茎尖长度小于（ A ）。

A、1mm

B、5mm

C、10mm

D、5cm

42、热处理法中，最主要的影响因素是（ D ）。

A、温度

B、时间

C、湿度

D、温度和时间

43、花药培养属器官培养，花粉培养属细胞培养，但花药培养和花粉培养的目的一样，都是（ B ）。

A、得到无病毒双倍体植株

B、形成愈伤组织，发育成植株

C、形成无病毒种子

D、要诱导花粉细胞发育成单倍体细胞，最后发育成单倍体植株

44、经过脱毒处理的植株是否还存在病毒，必须经过病毒学检测才能确定。指示植物检测法是（ B ）。

A、直接观察植株茎叶有无某种病毒引起的可见症状

B、借助于对某些病毒敏感的植物而进行的病毒鉴定方法

C、根据特异性的抗原抗体反应可检测植物病毒的存在

45、根据特异性的抗原抗体反应可检测植物病毒的存在，这种检测方法是（ C ）。

A、直接鉴定法

B、电子显微镜鉴定法

C、血清学鉴定法

D、分子生物学鉴定法

46、生根培养一般可采用1／2或者1／4MS培养基，，并加入适量的（ D ）。

A 2.4-D

B 赤霉素

C 细胞分裂素

D 生长素

47、组培苗驯化移栽时，湿度、光照、温度的控制非常重要，其中湿度控制要求是（ C ）。

A 由高到低

B 由低到高

C 保持高湿85％

D 湿度恒定50％

三、简答题

1、简述植物组织培养的理论依据？

答：植物组织培养的理论依据是细胞全能性学说，即植物体的每一个细胞都携带有一套完整的基因组，并具有发育成为完整植株的潜在能力。

2、植物组织培养的概念？

答：在无菌和人工控制的环境条件下，利用人工培养基，对植物的胚胎（成熟和未成熟的胚）、器官（根、茎、叶、花、果实、种子等）、组织（分生组织、形成层、木质部、韧皮部、表皮、皮层、胚乳组织、薄壁组织、髓部、花药组织等）、原生质体等进行离体培养，使其再生发育成完整植株的过程。

3、为什么顶端分生组织一般是无毒或只携有浓度很低的病毒？

答：1934年White提出的“植物体内病毒梯度分布学说”。虽然病毒侵入植物后是全身展开的，但不同组织和部位，病毒的分布和浓度有很大差异。一般而言，病毒粒子随着植物组织的成熟而增加，顶端分生组织是不带病毒的。

顶端分生组织一般是无毒或只携有浓度很低的病毒可能是因为①在一个植物体内，病毒易于通过维管系统而移动，但在分生组织中不存在维管系统。病毒在细胞间移动的另一个途径是通过胞间连丝，但它的速度很慢，难以追赶上活跃生长的茎尖；②在旺盛分裂的分生细胞中，代谢活性很高，使病毒无法进行复制；③倘若在植物体内确实存在着‘病毒钝化系统’的话，它在分生组织中应比在任何其他区域都有更高的活性，因而分生组织不受侵染；④在茎尖中存在高水平内源生长素，可以抑制病毒的增殖。

4、什么叫细胞全能性？

答：一个细胞能产生一个完整植株的固有能力，或植物细胞具有全部的遗传信息，不论是性细胞还是体细胞，在特定环境下，能进行表达而产生一个独立完整的个体。

5、什么叫细胞分化？

答：一个尚未特化的细胞发育出特征性结构和功能的过程。

6、什么叫细胞脱分化？

答：细胞脱分化也称去分化，是指离体培养条件下生长的细胞、组织或器官经过细胞分裂或不分裂，逐渐失去原来的结构和功能而恢复分生状态，形成无组织结构的细胞团或俞伤组织或成为未分化细胞特性的细胞的过程。将已分化组织的已停止分裂的细胞从植物体的抑制性影响下解脱出来，恢复细胞的分裂活性。一个成熟的细胞转变为分生状态的过程叫脱分化。

7、什么叫细胞再分化？

答：离体培养的植物细胞核组织可以由脱分化状态重新进行分化，形成另一种或几种类型的细胞、组织、器官，甚至形成完整植株，这个过程（现象）称为再分化。

8、什么叫器官发生？

答：由愈伤组织或外植体诱导形成不定根或不定芽，再获得再生植株的方法。

9、在植物组织培养中，通过哪些途径可以得到完整的植株？

(1) 外植体→愈伤组织→根、芽→试管苗

①同时长芽和根

②先长芽，再长根

③先长根，再长芽

(2) 外植体→胚状体→试管苗

(3) 外植体→根、芽→试管苗。

10、培养基一般包含哪些成分？

答：培养基可分为固体培养基和液体培养基。固体培养基成分主要包括水、无机盐类、有机营养成分、植物生长调节物质、天然物质、碳源、凝固剂等，液体培养基不添加凝固剂。

（1）水分

培养基中的主要成分是水，在植物组织培养中，水分既是培养物生命活动必须的成分，也是各种成分溶解所必须的介质，同时提供O、H两种元素。以科研为目的，应采用去离子水、蒸馏水或重馏水。如果以生产为目的，也可以使用水质好的自来水，以节约成本，但应注意水的硬度和酸碱度。

（2）无机营养成分是植物发育所必需的化学元素

大量元素植物所需浓度大于0.5mmol\l的元素称之为大量元素或主要元素。

包括碳、氢、氧气、氮、硫、钙、钾、镁9种

微量元素植物所需浓度小于0.5mmol\l的元素称之为微量元素或次要元素。

包括铁、锰、铜、锌、砰和钼、氯等。

（3）有机营养成分

①含氮物质

维生素和氨基酸。各种维生素皆溶于水，唯叶酸例外，先要用少量稀氨水溶解，然后加蒸馏水定容。

一些天然物质，如水解酪蛋白、椰子汁、玉米胚乳、麦芽浸出物、番茄汁和酵母浸出物②碳源

糖类物质作为碳源，为细胞的呼吸代谢提供底物和能源，还可以维持培养基一定的渗透式。

最常用的碳源是蔗糖，浓度一般为2%-5%。

已知的植物能够利用的某些其他形式的碳源有麦芽糖、半乳糖、甘露糖和乳糖。

（4）植物生长物质

①生长素

目的：诱导离体细胞分裂形成愈伤组织和根的分化。

常用的生长素有：IAA、IBA、NAA、2,4-D和2,4,5-T

生长素一般溶于95%酒精或0.1mol\l的NAOH中，以后者的溶解效果更好。

②细胞分裂素

目的：主要是为了促进细胞分裂和由愈伤组织或器官上分化不定芽。

常用的细胞分裂素有：BAP、BA，2- ip,玉米素和激动素

细胞分裂素一般溶于0.5或1 mol\L的HCL或稀薄的NAOH中。

③赤霉素

目的：诱导离体芽的萌动和神长。

在组织培养中所用的是GA3 .最好以95%酒精配成母液在冰箱中保存。

（5）琼脂及其它固化剂

除液体悬浮培养外，培养基中需加入固化剂使液体凝固。使用最普遍的是琼脂，是一种由海藻提取来的多糖类物质，本身不含营养和能量，40℃凝固。

除琼脂外，在组织培养中用作固化剂的还有GELRITE、琼脂糖、卡拉胶等。

（6）其他成分

①活性炭

活性炭对物质吸附的选择性很低。一般用量为0.5%-0.3% 。

②硝酸银

硝酸银中的银离子通过竞争性结合于细胞膜上的乙烯受体蛋白，从而可起到抑制乙烯活性的作用。

③抗生素

目的：防止由外植体内生菌造成的污染。

常用的抗生素种类：青霉素、链霉素、土霉素、四环素、氯霉素、利福平、卡那霉素和庆大霉素等。

11、外植体怎样选择？

答：外植体的选择应遵循以下原则：

（1）再生能力强一般而言，分化程度越高的细胞，脱分化越难，再生能力越弱。因此，在外植体的选择上应尽量选择未分化或分化程度较低的植物材料。

（2）遗传稳定性好无论是大量繁殖还是遗传转化，保持原物种的优良性状是植物组织培养的基本要求。因此，在选择外植体时，应选取变异少的材料。

（3）来源丰富为了建立一个高效而稳定的植物组织培养体系，往往需要反复试验，并要求结果具有可重复性。因此，就需要外植体材料丰富并容易得到。

（4）灭菌容易在选择外植体时，应尽量选择带菌少的材料，减少培养中的染菌污染。通常植物地上组织比地下组织灭菌容易，一年生组织比多年生组织灭菌容易，幼嫩的组织比老龄和受伤的组织灭菌容易。温室材料比田间材料带菌少，灭菌容易。在人工光照培养箱中萌发的材料效果更好。

（5）外植体的大小培养效果是一个外植体细胞总体对各种培养因子的综合反应，因此外植体的表面积、体积、细胞数量等都会影响培养的效果。一般选择的外植体大小可以在0.5～1cm。外植体太大容易污染，过小不易启动或启动后仅仅产生愈伤组织或容易褐化死亡。在以植物脱毒为培养目的时，应选用较小的外植体，一般在0.2～0.5cm。如果选择的外植体过大，则达不到脱毒的目的。对于茎尖、胚、胚乳等培养，则以器官或组织为单位切离即可。

12、按种后离体培养物对光、温、湿有何具体要求？

答：(1) 光照：愈伤组织的诱导不需光照或弱光，器官分化需要光照，一般12－16h/d，光照度1000－5000lx。

(2) 温度：一般25±2℃

(3) 湿度：培养室内的湿度要求保持70％－80％的相对湿度。

（1）光照

植物组织培养是在含糖的培养基上进行的，因此光照的主要作用在于形态建成的诱导。

它对细胞、组织、器官的生长和分化分生作用。

在植物组织培养中，使用的光照强度范围为1000-6000LX，而常用的光照强度为

3000-4000LX。大多数植物在有光的情况下生长和分化较好，而对于有些植物，由于光的存在会抑制根的形成，可以在培养基中加入活性炭，提高根的形成率。

（2）温度

温度是影响外植体生长和分化的重要条件。大多数情况下，由于一个培养室内同时培养许多种类的植物，为了照顾不同植物的温度需求，培养室内的温度一般被设定在25℃左右，最高不高于35℃，最低不低于25℃。然而，由于植物长期进化的结果，不同起源的植物对环境温度要求各异。生长在高寒地区的植物，其最适生长温度较低；而生长在热点地区的植物，则要求较高的环境温度。因此，在条件允许的情况下，可以根据不同植物对环境温度的要求来设定培养室的温度。如果利用智能型光照培养箱，还可以采用变温培养。

（3）湿度

组织培养移栽前生长在容器内，培养容器内的湿度主要受培养基的影响，相对湿度接近100%。但培养室环境湿度可以影响培养基的水分蒸发，从而影响容器内的湿度。因此，环境湿度不宜过低，一般要求70%-80%，否则，培养基丧失大量水分，改变了培养基各组分的浓度，提高了渗透压，会影响组织的正常生长。湿度过高还会引起霉菌生长，造成污染。

13、什么是植物生长调节物质？

答：植物生长调节物质是人工合成的能调节植物的生长、分化、发育的化学物质，其中许多种类的结构及作用与天然植物激素相似。另一些如生长延缓物质，化学结构和生理作用与天然激素无明显关系。广义的生长调节物质也包括天然植物激素。

14、什么叫外植体？

答：由活体植物体上切取下来的，用于组织培养的各种接种材料。包括各种器官、组织、细胞或原生质体等。

15、什么叫外植体污染？

答：是指在组织培养过程中培养基和培养材料滋生杂菌，导致培养失败的现象。

16、什么叫外植体褐变？

答：在离体快繁的初代培养和启动省长中，往往会出现外植体接种到培养基中后，很快就出现外植体及其接触到培养基的部分变成褐色的现象，通常称为褐化。

17、什么叫玻璃化现象？

答：在继代培养和快速增值中，有时会出现一种试管苗变成肿胀、半透明、易折断的畸形苗现象，被称作试管苗的玻璃化现象。

18、简述茎段培养基本过程？

答：（1）外植体的选取和消毒：取生长健壮、无病虫害、正在生长的幼嫩茎段进行培养。就木本植物来说，茎段培养一般采用幼嫩的一年生茎段培养比多年生茎段容易成功。茎的基部比顶部切段、侧芽比顶芽的成活率低，所以应优先利用顶部顶芽作为外植体，

其次也可选用上部茎段的腋芽作为外植体。植物的芽有休眠期和生长期之别，最好不要在休眠期选取外植体，否则成活率甚低。

（2）接种：在无菌条件下，用无菌的小刀，将茎段切成0.5-1.0CM的带节切段，若是鳞茎则切取带小段鳞片的底盘，使每块底盘上都带有腋芽，然后接到培养基上。（3）培养基：常用的培养基为MS培养基，附加2%-4%蔗糖和0.7%琼脂。经过培养后在茎段基部的切口上产生愈伤组织，进一步分生芽，有时出现丛生芽。

19、无病毒苗培育的意义？

答：1、从根本上消除只靠种苗传播的病毒病的危害。

2、无病毒栽培可改善果树品质，提高丰产性，抗逆性及利用砧木的优良性状

3、减少农药的使用，降低生产成本，减少或避免对环境的污染。

植物组织培养实验基本步骤。。

植物组织培养实验基本步骤 一、母液的配置 1、MS大量元素母液的配制 将大量元素配制成10倍的母液，使用时再稀释10倍。按照配方表中用量依次分别称取扩大10倍的：NH4NO3 、KNO3 、KH2PO4 、 MgSO4·7H2O 、CaCl2·2H2O ，所有药品称取完毕后用蒸馏水逐个溶解，待全部溶解后，最后定容至500ml，转入500ml细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称、放大倍数、配制日期、配制人姓名，置于4℃冰箱中保存备用。 2、MS微量元素母液的配制 将微量元素配制成100倍的母液，使用时再稀释100倍。按照配方表中用量分别依次称取：MnSO4· 4H2O 、ZnSO4·7H2O 、 H3BO3 、KI 、CuSO4·5H2O 、CoCl2·6H2O ，用蒸馏水逐个溶解，待全部溶解后，用容量瓶定容至500ml，转入500ml细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称、放大倍数、配制日期、配制人姓名，置于4℃冰箱中保存备用。 3、MS铁盐母液配制 将铁盐配制成100倍的母液，使用时再稀释100倍。按照配方表中用量分别称取扩大100倍的：称

FeSO4·7H2O 和Na2·EDTA ，把FeSO4·7H2O和Na2·EDTA·2H2O分别置于200ml蒸馏水中，加热并不断搅拌使之溶解（磁力搅拌器，边加热，边搅拌）。保持加热，把FeSO4溶液慢慢倒入Na2·EDTA溶液中并不断搅拌，接近沸腾时停止加热，待溶液冷却后加蒸馏水到最终容积500ml，置于棕色细口瓶中，用力振荡1～2min，贴上标签，注明母液名称、放大倍数、配制日期、配制人姓名。在室温下避光保存一段时间令其充分反应后，再置于4℃冰箱中保存备用。 4、MS有机化合物母液的配制 将有机化合物配制成100倍的母液，使用时再稀释100倍。按照配方表中用量分别称取扩大100倍的：肌醇、维生素B1 、烟酸、甘氨酸、维生素B6 、蔗糖，用蒸馏水依次溶解并定容至500ml后，转入500ml 细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称、配制日期、配制人姓名，置于4℃冰箱中保存备用。 二、植物激素的配置 常见激素：二氯苯氧乙酸（2，4－D）、萘乙酸（NAA）、吲哚乙酸（IAA）、吲哚－3－丁酸（IBA）、激动素（6-糠氨基嘌呤、 KT）、6－苄氨基嘌呤（6－BA）、赤霉素（GA3）、 1、生长素类： （1）、生长素类在组织培养中的主要作用是：诱导细胞的分裂和根的分化，诱导愈伤组织

选修专题植物组织培养技术时作业堂堂清

专题三植物的组织培养技术 一、选择题 1.用菊花的茎尖植物组织培养可培育出试管苗。下面关于这一过程的说法正确的是 () A.进行培养时，一次性加足营养物质以防止污染 B.整个培养过程应在光下进行，有利于长叶 C.要根据培养过程的实际情况，更换培养基 D.整个培养过程都应在密闭条件下进行，以免杂菌的污染 解析：进行植物组织培养时，外植体不能进行光合作用，因此培养基中要加入有机物。一般来说，从接种外植体到出现愈伤组织，需要经过2周时间。2周以后，由于培养基中的营养成分已接近耗尽，必须更换培养基，进行继代培养。20 d以后，可以根据愈伤组织的大小，决定是继续进行继代培养，还是进行试管苗培养。如果愈伤组织长到直径为1～1.5 cm时，即可以进行试管苗培养，否则还需要进行第二次继代培养。首次培养愈伤组织时，恒温箱的门应该关闭，不必见光，因为在无光条件下愈伤组织长得更快。在愈伤组织进行继代培养期间，可将恒温箱的门打开，让愈伤组织见光。愈伤组织见光后，颜色可以转为绿色，试管苗应该进行见光培养。 答案：C 2.下列关于花药离体培养过程的叙述中正确的是() A.花药培养成功与否与材料选择无关 B.花药培养成幼苗后，一定不能分瓶培养 C.花药培养成幼苗的过程中，除了适宜的温度、pH等，还要注意照光 D.一般地讲，材料选在单核期时花药培养成功率最高 解析：花粉植株能否培育成功受多种因素影响，其中材料的选择与培养基组成是主要影响因素；当培养获得愈伤组织或幼小植株时必须分瓶培养，才能诱导愈伤组织或幼苗分化；从花粉到幼苗阶段，由于无叶绿体，所以不需照光；对一般植物来讲，选择单核期往往成功率最高。 答案：D 3.关于花药培养产生花粉植株的途径，下列叙述错误的是() A.主要由培养基中激素的种类及用量决定途径 B.花粉经脱分化形成胚状体，再分化成丛芽，然后诱导生根 C.产生胚状体是花药离体培养中特有的途径 D.花粉先形成愈伤组织再诱导分化成植株

植物组织培养报告

植物组织培养报告内部编号：（YUUT-TBBY-MMUT-URRUY-UOOY-DBUYI-0128）

大蒜茎尖的组织培养 谢婷婷江宋青万嫣文吕凌宇一、实验目的 掌握植物组织培养的相关理论知识及操作方法； 通过自行设计并完成实验，提高动手能力和思维能力； 利用植物细胞的全能性，使大蒜茎尖经过脱分化作用形成愈伤组织，再分化为有结构的组织和器官，最终增殖培育出大量品质优良的大蒜试管苗。二、实验原理 植物组织培养是利用植物细胞的全能性原理。植物组织培养是在无菌环境下，将离体的植物器官、组织以至单个细胞，在人工配置的培养基上培养，使其能够继续生长，甚至分化发育成一完整植株的过程。植物的组织在培养条件下，原来已经分化停止生长的细胞，又能重新分裂，形成没有组织结构的细胞团，即愈伤组织。这一过程称为“脱分化”。已经脱分化的愈伤组织，在一定条件下，又能重新分化形成输导系统以及根和芽等组织和器官，这一过程称“再分化”。 三、实验材料、试剂和器材 1 供试材料 以购于府前菜场的大蒜为实验材料，实验在丽水学院生态学院组培实验室进行。 2 仪器与设备 超净工作台、培养事、电子天平、烧杯、容量瓶、玻璃棒、量筒、移液

管。 3 试剂 70%酒精、95%酒精、0.1%升汞、蔗糖、琼脂条、6-BA（1.5 mg/L；2.0 mg/L）、2,4-D（2.0 mg/L）、NAA（1.0 mg/L；）、IBA（2.0 mg/L）、10倍的大量元素、100倍的微量元素、100倍的铁盐、100倍的有机物。 四、实验步骤 1.培养基的配制及灭菌 诱导培养基：MS+6-BA 2.0 mg/L+2,4-D 2.0 mg/L 出芽培养基：MS+6-BA 1.5 mg/L+NAA 1.0 mg/L 生根培养基：MS+IBA 2.0 mg/L （1）将MS母液（10倍的大量元素、100倍的微量元素、100倍的铁盐、100倍的有机物）按顺序排列、检查是否失效。 （2）在装有3/4蒸馏水的容器中加入0.7%琼脂和3%蔗糖，加热溶化。（3）依次吸取适量各种母液移到容器中。 （4）用蒸馏水定容到相应体积。 （5）调节pH值(用0.1M的NaOH或HCl调节)至5.8-6.0。 （6）向培养基中加入适量激素。 （7）将配制好的培养基进行分装（20-30ml/瓶）。 （8）用两层称量纸包扎瓶口，并用橡皮筋扎牢，然后在高压灭菌锅中121 ℃下灭菌 20 min 。取出三角烧瓶放在台子上，冷却后备用。接种操作所需的一切用具（烧杯、培养皿、灭菌水等），需同时灭菌。 （9）将灭菌后的培养基于常温下放置一星期，观察有无污染。

植物组织培养习题及答案

0．填空 1.根据培养的材料,植物组织培养分:愈伤组织培养、(器官培养、细胞格养、原生质体培养(悬浮培养 2.植物组织培养的发展分为三个阶段:萌芽阶段、奠基阶段，快速发展和快速发展和应用阶段 3，1902年,Haberlandt提出了植物细胞“全能性”学说,1934年, White出版了《植物组织培养手册》培养等类型从而使植物组织培养为一门新兴学科。 一．填空、 1，组织培养实验室必要的设备有超净工作台、高压灭菌器、调机、_天平、显微镜、_蒸馏水，发生器，酸度计 养基成分主要包括①无机营养成分、②有机营养成分)、_③植物生长调节物质、_④碳水化合物、⑤其它物质 3、培养基最常用的碳源是_蔗糖,使用浓度在1%-5%常用3% 4、糖在植物组织培养中是不可缺少的,它不但作为离体组织棱以生长的碳源而且还能维持培养基渗透压 5、在固体培养时琼脂是使用最方便、最好的凝固剂和支持物般用量6-10g/L之间 6.驯化的目的:在于于提高试管苗对外界环境条件的适应性,提高其光合作用的能力,促使试健壮,提高苗的移裁成活 7、生长素/细胞分裂素的高低决定着外植体的发育方向,其比值高:有利于根的形成和愈伤组织的形成:低:有利于芽的形成 8、培养基灭菌一般在108kPa的压力下,锅内温度达_121℃C,维持_20-30min、 9.选择外植体时应选择①选择优良的种质、②选健壮的植株、③选最适的时期和④选取适宜的大小。 10、诱导胚状体比诱导芽的优点:(1)数量多、(2)速度快、_(3)结构完整 11、试管苗的生态环境:高温且恒温、高湿、弱光、无菌 12、培养基中加入活性炭的目的:利用其吸附能力,减少一些有害物质的影响大 13、筛选培养基的方法:单因子试验法、多因子试验法、广谱实验法 14、植物培养技术:灭菌、接种种、培养、驯化四个环节 15、试管苗的驯化注意:基质、温、光、水、肥、气的综合管理 二．填空 1.绝大多数培养植物再生植株时都先经过愈伤组织阶段 2.愈伤伤组织形成大致经历诱导期、分裂期一和分化期三个时期 3、愈用植物生长调节物质时要注意:种类和浓度生长素和细胞分裂素的比值4.愈伤组织的形态发生方式主要有不定芽方式和胚状体方式 5.组织培养细胞再分化包括四个水平:细胞水平的再分化、组织水平的再分化、器官水平的再分化(器宣发生)和植株水平的分化 三．填空: 1.植物器官培养主要是指植物的根、茎、叶、花器和幼小果实的无菌培养。 2、茎尖培养根据培养目的和取材大小分为茎尖分生组织培养和普通茎尖培养两种类型。前者主要是对茎尖长度不超过,最小只有几十微米的茎尖进行培养,目的是获得无病毒植株:后者是对几毫米乃至几十毫米长的茎尖、芽尖及侧芽的培养,目的是离体快繁 3.不定芽产生的途径一是从外植体上直接产生二是从由外植体诱导产生的愈伤组织上产生 4.离体叶培养是指包括叶原基、叶栖、叶鞘、叶片、子吐等叶组织的无菌培养 5.在离体叶培养中,6-BA和KT利于芽的形成;24D利于愈伤组织的形成 四．填空 1、胚胎培养包括幼胚培养、成熟胚培养、胚乳培养、胚珠培养以及子房培养 2、离体胚的培养分为二种类型:。成熟胚培养和_幼胚培养六

植物组织培养基础理论与基本知识

第一章植物组织培养的基础理论与基本知识 第一节植物组织培养的基本概念及类型 一、教学目标： 通过对植物组织培养的概念和植物组织培养的类型的学习,使同学们对植物组织培养技术有大概的了解和认识,让同学们建立起对该学科学习兴趣。 二、教学效果目标： 1、理解、掌握植物组织培养的概念； 2、掌握植物组织培养的类型。 三、教学重点： 1、理解、掌握植物组织培养的概念； 2、掌握植物组织培养的类型。 四、教学难点： 1、理解、掌握植物组织培养的概念； 2、掌握植物组织培养的类型。 五、教学效果评价： 1、为了激发学生的学习积极性和主动性，不宜采用百分制的方法进行评价，而是采用A、B、C、D四个评价等级进行评价。 2、评价标准： A、能用自己的语言对植物组织培养的概念和类型等几个基本概念进行正确的描述，能熟练的判断植物组织培养的类型。能按时按量甚至超量完成

作业，并且无误。 B、能基本用自己的语言植物组织培养的概念和类型等几个基本概念进行正确的描述，能基本会判断植物组织培养的类型。能按时按量完成作业，基本无误。 C、在老师的指引下或参照课本基本用自己的语言对植物组织培养的概念和类型等几个基本概念进行正确的描述，能基本判断植物组织培养的类型。能按时按量完成作业，但错误较多。 D、基本不认真听课，课堂很随意，基本不听老师教导，对所学内容基本不懂，很少作作业。 六、采用理论教学。 七、教学时数： 2学时 教学过程 一、新课导入：约（10分钟） 以同学们感兴趣的动物克隆技术人手，向同学讲述克隆技术基础技术，然后转到植物组织培养技术上来。 二、新课：（约80分钟） 板书： 第一章植物组织培养的基础理论与基本知识

植物组织培养实验报告

植物组织培养实验报告 Modified by JACK on the afternoon of December 26, 2020

院(系、部) 化学与生物工程学院专业生物技术（师范）年级13级学号 姓名组别第二组课程名称植物细胞工程学实验日期 指导老师实验名称植物组织培养综合实验 一、实验目的 1.熟悉MS培养基的组成，掌握贮备液的配制方法 2.学习、掌握植物组织固体培养基的配制和灭菌方法； 3.掌握超净工作台上的接种方法与注意事项，了解接种室的灭菌方法； 4.了解组织培养的基本程序； 5.掌握接种的方法和材料的培养过程； 6.掌握无菌操作技术，包括外植体除菌和接种技术； 7.观察外植体的生长状况、染菌状况，剔除染菌外植体； 8.了解MS培养基和1/2MS培养基的区别 二、实验原理 1.植物细胞的全能性 一切植物都由细胞构成，细胞是构成植物体的基本结构与功能单位。 植物细胞含有全套遗传信息，具有形成完整植物的潜能。 2.植物细胞表现出全能性的条件 1.离体状态； 2.有一定的营养物质，激素和其他外界条件（无菌、温度、pH）； 3.选择性能优良、细胞全能性表达充分的基因型 3.无菌条件

把植物的组织、器官等，使其在人工控制的无菌条件下，使植物在人工培养基上繁殖。用于进行组织培养的组织、器官和细胞称为外植体。在组培中外植体都死带菌的，在接种前必须进行表面消毒，这时取得培养成功的最基本和重要的前体。组织培养的主要过程都是在无菌条件下进行的，所以所有的器材、植物体、接种室都应是无菌的。 4.脱分化与愈伤组织 已有特定结构与功能的植物组织，在一定条件下，其细胞被诱导改变原来的发育途径，逐步逆转其原有的分化形态，转变为具有分生能力的胚细胞的过程称为脱分化。脱分化所用的化学物质与MS培养基的区别是需要激素诱导。所以脱分化培养需在MS培养基上添加激素进行愈伤组织诱导。 5.培养基 植物组织培养常用的培养基为MS培养基。常用的凝固剂是琼脂,它的主要作用是使液体培养基凝固，琼脂本身并不提供任何营养，它只是一种高分予的碳水物从海藻中提取出来，仅溶解于热水，成为溶胶，冷却后(40℃以下)即凝固为固体状凝胶。琼脂的用量一般在4—10克／升之间。琼脂的凝固能力除与原料、厂家的加工方式等有关外，还与高压灭菌时的温度、时间、pH值等因素有关，长时间的高温会使凝固能力下降，过酸过碱加之高温会使琼脂发生水解而丧失凝固能力，存放时间过久，琼脂变褐，也会逐失去凝固能力。MS培养基属于富盐平衡培养基，特点是：无机盐浓度较高，元素间的比例适当，离子平衡性好，具有较强的缓冲性，因而在培养的过程中可维持较好的稳定性；营养丰富，在一般培养中无须额外加

国内外植物组织培养技术的差距

国内外植物组织培养技术的差距 姓名：*** 学号：********* 指导教师：*** 专业班级：生物工程2009级1班 完成日期：2012-06-05

摘要 植物组织培养技术是农业生物技术中最早实现产业化并取得显著经济效益和社会效益的领域，在理论研究和生产实践中具有广泛的应用价值。通过对国内外植物组培的发展概况以及技术差距的分析，指出了我国植物组织培养技术的发展现状、目前存在的主要问题和应采取的措施，并对植物组织培养技术的发展作了展望。 关键词：组织培养概况差距展望 Abstract The plant tissue culture technology is agricultural biotechnology as the first realized industrialization and get a remarkable economic and social benefits of the field, in the theoretical research and production practice has wide application value. Through the domestic and international plant tissue and the development situation of the technology gap analysis, and pointed out the plant tissue culture technology's development present situation, the existing problems and the measures should be taken, and the development of plant tissue culture technology are discussed. Key words：Tissue culture situation gap looking

植物组织培养实验室 组培室 规划设计

植物组织培养实验室组培室规划设计 一、实验室要求理想的组织培养实验室应该建立在安静、清洁、远离污染 源的地方，最好在常年主风向的上风方向，尽量减少污染。规模化生产的组织 培养实验室最好建在交通方便的地方，便于培养产品的运送。实验室的建设均 需考虑两个方面的问题：一是所从事的实验的性质，即是生产性的还是研究性的，是基本层次的还是较高层次的；二是实验室的规模，规模主要取决于经费 和实验性质。无论实验室的性质和规模如何，实验室设置的基本原则是：科学、高效、经济和实用。一个组织培养实验室必须满足3个基本的需要：实验准备(培养基制备、器皿洗涤、培养基和培养器皿灭菌)、无菌操作和控制培养。此外，还可根据从事的实验要求来考虑辅助实验室及其各种附加设施，使实验室 更加完善。在进行植物组织培养工作之前，首先应对工作中需要哪些最基本的 设备条件有个全面的了解，以便因地制宜地利用现有房屋，或新建、改建实验室。实验室的大小取决于工作的目的和规模。以工厂化生产为目的，实验室规 模太小，则会限制生产，影响效率。在设计组织培养实验室时，应按组织培养 程序来没计，避免某些环节倒排，引起日后工作混乱。植物组织培养是在严格 无菌的条件下进行的。要做到无菌的条件，需要一定的设备、器材和用具，同 时还需要人工控制温度、光照、湿度等培养条件。二、实验室组成(一)基本实 验室基本实验室包括准备室、洗涤灭菌室、无菌操作室、培养室、缓冲间，是 组织培养实验所必须具备的基本条件。如进行工厂化生产，年产4万-20万， 需3-4间实验用房，总面积60平方米。1、准备室(化学实验室)功能：又叫化 学实验室，进行一切与实验有关的准备工作：完成所使用的各种药品的贮备、 称量、溶解、器皿洗涤、培养基配制与分装、培养基和培养器皿的灭菌、培养 材料的预处理等。要求：最好有20平方米左右。要求宽敞明亮、以便于放置多个实验台和相关设备，方便多人同时工作；同时要求通风条件好，便于气体交换；实验室地面应便于清洁，并应进行防滑处理。分类：分体式-研究性质实验室，分开的若干房间将准备室分解为药品贮藏室、培养基配制与洗涤室和灭菌 室等，功能明确，便于管理，但不适于大规模生产。通间式-规模化实验室，准备室一般设计成大的通间，使试验操作的各个环节在同一房间内按程序完成。 准备试验的过程在同一空间进行，便于程序化操作与管理，试验中减少各环节 间的衔接时间，从而提高工作效率。此外还便于培养基配制、分装和灭菌的自

多肉植物组织培养

多肉植物是指植物营养器官的某一部分，具有发达的薄壁组织用以贮藏水分，在外形上显得肥厚多汁的一类植物。常见的有仙人掌科的仙人掌、仙人球、昙花、蟹爪兰、金琥；番杏科的生石花、肉锥花；百合科的康平寿、玉露、卧牛；大戟科的虎刺梅、彩春锋；景天科的石莲花、长寿花、虹之玉；龙舌兰科的金边龙舌兰、虎尾兰；菊科的翡翠珠等。 肉植物耐干旱，净化空气，具有外观小巧玲珑，植株肥厚多汁，造型特异等特点，是近年来逐渐流行的一类观赏植物。组织培养技术，对保存多肉植物优良的种质资源、繁殖名优珍稀品种、快速繁殖出口需要和园林绿化需要的优良品种。 传统多肉植物可依靠分株、扦插繁殖，分株繁殖如芦荟、仙人球、虎尾兰；扦插繁殖如蟹爪兰、长寿花、落地生根，仙人掌则是分株和扦插繁殖都可以。值得一提的事，生石花在生长中有一个脱皮、分裂的过程。通常在冬末春初，植株中缝逐渐开裂，在开裂处有一个或两三个新的植株逐渐长大，而原有的植株逐渐枯萎，为新株所取代。这个由新植株替代老植株的过程，就是脱皮生长和分裂繁殖过程。 外植体的选择 取优良母株新萌发的幼嫩侧芽、幼嫩枝条；一些没有侧芽的珍稀名贵品种的母株则可等待植株开花期间取其较充实的花梗作为外植体。夏季休眠期，多肉植物外植体在培养基中对激素常反应迟钝，生长静止，不易培养成功。 1.????????? 消毒灭菌 2.1选择合适的培养基的，配置好、调节适当的激素浓度。 2.2制作好的培养基须立即放入高压灭菌锅灭菌，备用。， 2.3外植体材料的消毒：切取多肉植物幼嫩的侧芽或花梗→肥皂水或洗洁精洗涤→在自来水下冲洗→超净工作台中用 75%酒精浸泡数秒→ 0.1%升汞处理 10～30min，→无菌水冲洗 6 遍，→消毒滤纸吸干水分 3.接种 无菌条件下操作→手术刀切取所需的培养材料→无菌操作植入初代诱导培养基中培养。 3.培养

植物组织培养的基本步骤

植物组织培养的基本步骤 成熟细胞离体——（脱分化）——分生细胞——（分裂）——愈伤组织——（再分化）——形态建成————完整植株。 培养基的主要成分 【水分】 【无机盐】1.大量元素：N，P，K，Ca，Mg，S（由相关的无机盐提供） 2.微量元素：Fe，B，Cu，Mn，Mn，Zn，Co 【有机营养成分】1.糖类 2.维生素 3.氨基酸 4.肌醇 5.天然有机物【植物生长调节剂】1.生长素 2.细胞分裂素 3.其他生长调节剂 【凝固剂】琼脂 【其他物质】1.活性炭 2.抗生素 3.抗氧化物质 4.硝酸银 培养基和组织培养用具的灭菌方式 【培养基，无菌水】高压蒸汽灭菌，0.105MPa灭菌15~30分钟 【移栽基质】曝晒，甲醛熏蒸或高压蒸汽灭菌0.14MMPa灭菌1~2h 【接种室，缓冲室】紫外线灯照射30min，或气雾消毒剂 【超净工作台】紫外线灯30min，之后打开风机过滤除菌 【外植体】不同的化学消毒剂浸泡消毒 【接种工具】70%乙醇浸泡或擦拭，之后用火焰灼烧灭菌 【培养室】3%来苏尔喷雾，或甲醛，气雾消毒熏蒸 【皮肤】先用肥皂洗手，接种前用70%乙醇擦拭 【瓶口，管口】70%乙醇擦拭，用火焰封口

【培养瓶表面】70%乙醇擦拭 【台面，桌面】70%乙醇擦拭或喷雾消毒 植物外植体的灭菌方式 【茎尖，茎段，叶片】1. 用70%乙醇浸泡30秒，再用无菌水冲洗1次。 2.用2%次氯酸钠浸泡15min或0.1%升汞浸泡5~10min。 3.若材料有绒毛，最好在消毒液中加入几滴吐温。 4.消毒时要不断震荡，使植物材料与消毒剂充分接触。 5.最后用无菌水冲洗3~5次。 【果实】1.用乙醇迅速漂洗一下，再用无菌水冲。 2.用2%次氯酸钠浸泡10min，用无菌水冲洗2~3次。 【种子】用10%次氯酸钠浸泡20~30min，或0.1%升汞消毒5~10min，然后再用无菌水冲洗3~5次。 【花蕾】1.用70%乙醇浸泡10~15秒，无菌水冲洗一次。 2.在漂白粉中浸泡10min，用无菌水冲洗2~3次。 【根及地下部器官】用0.1%升汞浸泡5~10min 或用次氯酸钠浸泡10~15min，再用无菌水冲洗3~5次。 【消毒后的外植体应及时按照无菌操作技术接种在适宜的培养基上】

植物组培自测题与参考答案(简)

第1章复习测试题 二、填空题 1．根据外植体的不同，一般可以将植物组织培养分为：植株培养、胚胎培养、器官培养、组织培养、细胞培养和原生质体培养。 2．在植物组织培养中，外植体脱分化后，再分化形成完整植株的途径有两条：一是器官发生途径，二是胚状体途径。 3．通过器官发生再生植株的方式有三种：第一种最普遍的方式是先分化芽，再分化根；第二种是先分化根，再分化芽，这种方式中芽的分化难度比较大；第三种是在愈伤组织块的不同部位上分化出根或芽，再通过维管组织的联系形成完整植株。 4．体细胞胚发生的途径可分为间接途径和直接途径。 5．植物组织培养的整个历史可以追溯到19世纪末和20世纪初。一个多世纪来，植物组织培养的发展大致可以分为探索、奠基和迅速发展三个阶段。 6．在Schleiden和Schwann所发展起来的细胞学说推动下，1902年德国植物生理学家G．Haberlandt提出了细胞全能性的设想，并成为用人工培养基对分离的植物细胞进行培养的第一人。 7．White、Gautheret和Nobecourt在1939年确立的植物组织培养的基本方法，成为以后各种植物组织培养的技术基础，他们三人被誉为植物组织培养的奠基人。 8．1958年英国人Steward等将胡萝卜髓细胞培养成为一个完整植株，首次通过实验证明了植物细胞的全能性，成为植物组织培养研究历史中的一个里程碑。 9．1960年Cocking等人用酶分离原生质体获得成功，开创了植物原生质体培养和体细胞杂交工作。同年Morel培养兰花的茎尖，获得了快速繁殖的脱毒兰花。其后，国际上相继把组织培养技术应用到兰花的快速繁殖上，建立了“兰花工业”。 10．花药培养在20世纪70年代得到了迅速发展，获得成功的物种数目不断增加，其中包括很多种重要的栽培物种。烟草、水稻和小麦等的花培育种在我国取得了一系列举世瞩目的成就。 三、是非题 （×）1．从理论上说，所有的植物细胞与组织材料都能培养成功，其培养的难易程度基本相同。 （√）2．愈伤组织是一种最常见的培养类型，因为除了茎尖分生组织培养和少数器官培养外，其它培养类型都要经历愈伤组织阶段才能产生再生植株。 （√）3．在组织培养中可采用愈伤组织诱变、花粉培养诱变等方法来进行植物育种等。 （×）4．单倍体育种已成为改良植物抗病、抗虫、抗草、抗逆性、品质等特性的新的重要手段。 （√）5．利用植物组织或细胞大规模培养，可以从中提取所需的天然有机物，如蛋白质、脂肪、糖类、药物、香料、生物碱、天然色素以及其它活性物质。 四、选择题 1．在A中培养物生长过程中排出的有害物质容易积累，由此造成自我毒害，所

多肉植物组织培养那点事

偶尔就能听到关于多肉植物组培的各种传言，组培苗是什么一回事？组培苗到底好不好？为什么有那么多组培苗?如何鉴别组培苗？等等关于多肉植物组培苗的那点事，你都可以在面这篇文章里看到（文字较多，耐心观看），lansemeiyan 什么是组培苗？ 组织培养技术，指代的是利用植物体的某个部分，通过无性营养繁殖来获得新苗（克隆苗）的过程，又叫植物克隆。从广义上来说，利用多肉植物的侧芽、叶插、根插、砍头进行繁殖，都属于组织培养范畴。组培这个概念，很多人一开始可能都误解了。 那么导致市场动荡的“组织培养”到底是指代什么呢？确切的说应该是“离体快速繁殖”，即组织培养技术的一个分支——离体快速繁殖，简称“快繁”。这门技术是从叶插、根插技术演变来的，我们用土壤做叶插和根插，“快繁”则是用人工合成的基质来做，这种人工基质看上去很像果冻，而容器也由花盆变更为玻璃瓶。这就是后来大家在电视上看到的植物组织培养工厂。 为什么在玻璃瓶里的培养基可以实现快速繁殖呢？原因在于优越的外环境和植物激素的作用。快繁实验室的温度、光照和湿度都是恒定的，“培养基”里含有足够的营养和强大的植物激素。这些激素可以按照人为意愿调整植物的生长状态，让它出根还是让它出芽（但这也取决与操作者的学术水平和经验，能够从容操作激素的人在国内是有限的）。 我们平时做叶插和砍头的时候，也会取巧的使用一些激素，其实往叶插和砍头株上滴加激素的行为和“快速繁殖”的性质和道理是一样的，所获得苗也是完全一样的。很多人并没有意识到这点，而觉得不同繁殖方式获得的苗性状会不同，其实差异只在于营养富集度，就是苗的饱满度而已，叶插的总是比砍头的弱一些，

性状呈现晚一些，这是所在部位的内源激素和营养导致的，但是基因组完全一致，不会出现性状漂移。只有嵌合性性状，比如斑锦，才可能在叶插和砍头之间存在“概率学”上的差异。 回头再说大众眼中的“组织培养”（实际上是离体快速繁殖），由于人为操控植物激素的动态变化，使得离体的植物组织可以按照人的意愿出芽，一个两个无数个，因为植物的无性繁殖被认为是无限的，所以在组织培养的“快速繁殖”模式中可以无限的扩增该品种种苗，这也是“危害”市场最致命的地方。不过，必须指出的是，组培苗的无限繁殖也是有成本的，不是像刘谦的魔术一样天上掉下来的，很多人认为组培无成本或低成本，一文不值等等言论，其实都是不了解组培。 如果想获得上万株的种苗，必须有专门的组织培养实验室或工厂，这个运行成本相当巨大，可以说一般的生产商是做不到的。迄今为止，大型的组培工厂都是ZF出资建立的，换句话说大多数搞组培苗生产的人，成本是国家掏腰包的。真正自己掏钱搞组培工厂，是玩不起的。 组培技术早在70年代就出现在欧美，广泛用于种苗繁育和小体型植物的生产。温度、光照、湿度、水、肥等的人工合成、调控技术的成熟，特别是高效植物补光灯的出现推动了组培快速发展。原来只能单层平面日光棚内养植的植物，现在可以在室内人造光环境中，使用多层立体组合栽培方式进行植物的繁育和生产。 “组织培养”（离体快速繁殖）到底好不好呢？ 快繁苗，由于几乎完全是激素调控获得的，这就导致一个问题，操控激素的人是否理解植物的特性、是否熟悉激素的理论和植物生理、是否有足够的经验来

2010-2014植物组织培养高考题汇编(含详解)汇总

1.（2014广东卷）（16分）铁皮石斛是我国名贵中药，生物碱是其有效成分之一，应用组织培养技术培养铁皮石斛拟原球茎（简称PLBs，类似愈伤组织）生产生物碱的实验流程如下： 在固体培养基上，PLBs的重量、生物碱含量随增殖培养时间的变化如图17所示，请回答下列问题： ⑴选用新生营养芽为外植体的原因是，诱导外植体形成PLBs的过程称。 ⑵与黑暗条件下相比，PLBs在光照条件下生长的优势体现在，，。 ⑶脱落酸（ABA）能提高生物碱含量，但会抑制PLBs的生长。若采用液体培养，推测添加适量的ABA可提高生物碱产量。同学们拟开展探究实验验证该推测，在设计实验方案是探讨了以下问题： ①ABA的浓度梯度设置和添加方式：设4个ABA处理组，1个空白对照组，3次重复。因ABA受热易分解，故一定浓度的无菌ABA母液应在各组液体培养基后按比例加入。②实验进程和取样：实验50天完成，每10天取样，将样品（PLBs）称重（g/瓶）后再测定生物碱含量。如初始（第0天）数据已知，实验过程中还需测定的样品数为。 ③依所测定数据确定适宜的ABA浓度和培养时间：当某3个样品（重复样）的时，其对应的ABA浓度为适宜浓度，对应的培养时间是适宜培养时间。

【答案】（1）细胞分化程度低，容易诱导形成PLBs（2分）；细胞的脱分化（2分）（2）生长起始快（2分），快速生长时间较长（2分）；PLBs产量较高（2分）；（3）①灭菌、冷却（2分）；②75（2分）；③PLBs重量和生物碱含量乘积的平均值最大（3分） 【解析】（1）新生营养芽分裂能力强，全能性容易表达；根据题干可知，PLBs类似愈伤组织，外植体形成愈伤组织的过程是脱分化。（2）据图分析，光照下PLBs的重量高于黑暗条件下，原因可能是光照有利于细胞增殖、叶绿体的形成和进行光合作用制造有机物。（3）①由于ABA受热易分解，所以各种液体培养基灭菌后，冷却，再加入不同浓度的ABA ②根据题干可知，实验50天完成，每10天取样，需要取样5次，4个ABA处理组，1个空白对照组，3次重复，因此每次取样需要记录15个样品中的数据，共需要测定样品数75 ③适量的ABA可提高生物碱产量，当样品的平均值最大时，所对应的ABA浓度和时间为最适。 2.（2014江苏卷）（9分）为了获得植物次生代谢产物，先用植物外植体获得愈伤组织，然后在液体培养基中悬浮培养。请回答下列问题： （1）外植体经诱导后形成愈伤组织的过程称为。 （2）在愈伤组织悬浮培养时，细胞干重、蔗糖浓度和pH的变化如右图所示。细胞干重在12d后下降的原因有；培养液中蔗糖的作用是、。 （3）多倍体愈伤组织细胞产生的次生代谢产物量常高于二倍体。二倍体愈伤组织细胞经处理，会产生染色体加倍的细胞。为检测愈伤组织细胞染色体数目，压片前常采用纤维素酶和酶解离愈伤组织。若愈伤组织细胞（2n）经诱导处理后，观察到染色体数为8n的细胞，合理的解释是、。 （4）为了更好地获得次生代谢产物，生产中采用植物细胞的固定化技术，其原理与酵母细胞固定化类似。下列说法正确的有（填序号）。 ①选取旺盛生长的愈伤组织细胞包埋②必须在光照条件下培养

植物组织培养实验报告

如对你有帮助，请购买下载打赏，谢谢！ 院(系、部) 化学与生物工程学院专业生物技术（师范）年级13级学号姓名组别第二组课程名称植物细胞工程学实验日期2016.3-6 指导老师实验名称植物组织培养综合实验 一、实验目的 1.熟悉MS培养基的组成，掌握贮备液的配制方法 2.学习、掌握植物组织固体培养基的配制和灭菌方法； 3.掌握超净工作台上的接种方法与注意事项，了解接种室的灭菌方法； 4.了解组织培养的基本程序； 5.掌握接种的方法和材料的培养过程； 6.掌握无菌操作技术，包括外植体除菌和接种技术； 7.观察外植体的生长状况、染菌状况，剔除染菌外植体； 8.了解MS培养基和1/2MS培养基的区别 二、实验原理 1.植物细胞的全能性 一切植物都由细胞构成，细胞是构成植物体的基本结构与功能单位。植物细胞含有全套遗传信息，具有形成完整植物的潜能。 2.植物细胞表现出全能性的条件 1.离体状态； 2.有一定的营养物质，激素和其他外界条件（无菌、温度、pH）； 3.选择性能优良、细胞全能性表达充分的基因型 3.无菌条件 把植物的组织、器官等，使其在人工控制的无菌条件下，使植物在人工培养基上繁殖。用于进行组织培养的组织、器官和细胞称为外植体。在组培中外植体都死带菌的，在接种前必须进行表面消毒，这时取得培养成功的最基本和重要的前体。组织培养的主要过程都是在无菌条件下进行的，所以所有的器材、植物体、接种室都应是无菌的。 4.脱分化与愈伤组织 已有特定结构与功能的植物组织，在一定条件下，其细胞被诱导改变原来的发育途径，逐步逆转其原有的分化形态，转变为具有分生能力的胚细胞的过程称为脱分化。脱分化所用的化学物质与MS培养基的区别是需要激素诱导。所以脱分化培养需在MS培养基上添加激素进行愈伤组织诱导。 5.培养基 植物组织培养常用的培养基为MS培养基。常用的凝固剂是琼脂,它的主要作用是使液体培养基凝固，琼脂本身并不提供任何营养，它只是一种高分予的碳水物从海藻中提取出来，仅溶解于热水，成为溶胶，冷却后(40℃以下)即凝固为固体状凝胶。琼脂的用量一般在4—10克／升之间。琼脂的凝固能力除与原料、厂家的加工方式等有关外，还与高压灭菌时的温度、时间、pH值等因素有关，长时间的高温会使凝固能力下降，过酸过碱加之高温会使琼脂发生水解而丧失凝固能力，存放时间过久，琼脂变褐，也会逐失去凝固能力。MS培养基属于富盐平衡培养基，特点是：无机盐浓度较高，元素间的比例适当，离子平衡性好，具有较强的缓冲性，因而在培养的过程中可维持较好的稳定性；营养丰富，在一般培养中无须额外加入复杂的有机成分；微量元素种类全，浓度高。这类培养基是目前使用最广泛的培养基。 6.生长调节物质 包括天然植物激素额人工激素类似物。植物激素是一类植物自身合成、同时对其生长发育具有重要调节作用的有机化合物。生长调节物质对于离题培养中的细胞分裂分

植物组织培养实验室(组培室)规划设计

植物组织培养实验室 (组培室规划设计 2009年 05月 31日星期日 10:18一、实验室要求 理想的组织培养实验室应该建立在安静、清洁、远离污染源的地方, 最好在常年主风向的上风方向, 尽量减少污染。规模化生产的组织培养实验室最好建在交通方便的地方, 便于培养产品的运送。 实验室的建设均需考虑两个方面的问题:一是所从事的实验的性质, 即是生产性的还是研究性的, 是基本层次的还是较高层次的; 二是实验室的规模, 规模主要取决于经费和实验性质。 无论实验室的性质和规模如何,实验室设置的基本原则是:科学、高效、经济和实用。一个组织培养实验室必须满足 3个基本的需要:实验准备 (培养基制备、器皿洗涤、培养基和培养器皿灭菌、无菌操作和控制培养。此外,还可根据从事的实验要求来考虑辅助实验室及其各种附加设施,使实验室更加完善。 在进行植物组织培养工作之前,首先应对工作中需要哪些最基本的设备条件有个全面的了解, 以便因地制宜地利用现有房屋, 或新建、改建实验室。实验室的大小取决于工作的目的和规模。以工厂化生产为目的,实验室规模太小,则会限制生产,影响效率。在设计组织培养实验室时, 应按组织培养程序来没计, 避免某些环节倒排, 引起日后工作混乱。植物组织培养是在严格无菌的条件下进行的。要做到无菌的条件, 需要一定的设备、器材和用具, 同时还需要人工控制温度、光照、湿度等培养条件。 二、实验室组成 (一基本实验室 基本实验室包括准备室、洗涤灭菌室、无菌操作室、培养室、缓冲间,是组织培养实验所必须具备的基本条件。如进行工厂化生产,年产 4万 -20万, 需 3-4间实验用房,总面积 60平方米。

《植物组织培养》试题及答案教学教材

试卷编号NO： 高等函授教育《植物组织培养》试题 学号：姓名： 一名词解释：（10*2分=20分） 1、植物细胞组织培养 2、细胞全能性 3、脱分化 4、外植体 5、试管苗驯化 6、间接不定芽发生 7、双极性 8、微体嫁接 9、人工种子 10、体细胞无性系变异 二填空：（30*1分=30分） 1、目前植物组织培养应用最广泛的方面是 和。 2、由脱分化的细胞再分化出完整植株有两种途径，一种叫做，另一种叫做。 3、培养用具的常用灭菌方法有、、 。 4、某些生长调节物质及抗生素、酶类物质遇热不稳定，对其灭菌时不能进行，而要进行。 5、一般来说，黑暗条件下有利于的增殖，而往往需要一定的光照。 6、植物离体授粉技术通常包括、、 三个方面。 7、一般液体培养的继代时间较短，继代一次；而固体培

养继代时间可以长些，继代一次。 8、外植体器官发生的三种途径包括、、。 9、从再生植株倍性来看，小孢子培养通常产生植株，胚 培养通常产生植株，通常产生三倍体植株。 10、脱毒苗鉴定与检测的主要方法有、、 、。 11、在生长素中，对于许多作物花粉的启动、分裂、形成愈伤组织和胚状体起着决定性作用，但是对却有抑制作用。 12、用平板培养法培养单细胞或原生质体时，常用 来衡量细胞培养效果。 13、用药剂处理是诱导染色体加倍的传统方法。 三计算题（1*10分=10分） 某培养基的配方是MS＋BA 2.0mg/L＋NAA 0.5mg/L＋2.5%蔗糖＋0.7％琼脂粉。MS母液的浓度分别是：大量元素２０倍，微量元素500倍，铁盐100倍，有机物５０倍；BA母液浓度1.0 mg/ml ，NAA母液浓度0.1mg/ml。要配制400ml 该培养基，需要吸取各种母液各多少ml？分别称取蔗糖、琼脂粉各多少克？（要求写出计算步骤）四简答题（5*5分=25分） 1、造成组织培养过程中发生污染的原因有哪些？如何有效控制污染？ 2、简述外植体消毒的一般步骤。

植物组织培养实验参考答案9

植物组织培养实验复习题 一、名词解释 1、大量元素:指含量占生物总重量万分之一以上的元素，包括C、H、O、N、P、S、K、C、Mg等。 2、微量元素:含量占生物总重量万分之一以下的元素。 3、植物生长调节剂:人工合成的对植物的生长发育有调节作用的化学物质。 4、外植体：把由活植物体上切取下来以进行培养的那部分组织或器官 5、细胞全能性：植物体的每个细胞都含有该植物全部的遗传信息。 6、基础培养基：根据植物营养原理和植物组织离体培养的要求而人工配置的营养基质。 7、愈伤组织:人工培养基上由外植体组织的增生细胞产生的一团不定形的疏松排列的薄壁细胞。 8、褐变:植物组织中多酚氧化酶被激活，使酚类物被氧化成醌类物，可抑制其他酶活性，毒害外植体。 9、茎尖脱毒:茎尖分生区的病毒传播速度很慢，利用茎尖组培获得无病毒苗，来达到脱毒的目的。 10、不定芽：凡从叶、根或芽节间或是离体培养的愈伤组织上等通常不形成芽的部位生出的芽。 11、污染率：污染数除以接种数，再乘以100%。 12、诱导率：愈伤数除以未污染数，再乘以100%。 13、成活率：成活数除以未污染数，再乘以100%。 14、接种：将表面消毒的外植体转接到无菌的培养基上的过程。 15、消毒：消灭材料上的病菌（不损伤植物材料）。 16、灭菌：利用物理或化学的方法，达到组织培养所学的无菌环境。 17、母液：欲配培养液的浓缩液。 18、无病毒苗：指不含该种植物的主要危害病毒，即经检测主要危害病毒在植物内的存在表现为阴性反应的苗木。 19、植物组织培养：在无菌条件下，将离体的植物器官、组织、细胞以及原生质体，培养在无菌培养基上和人工控制的环境中，使其生长、分化、增殖，甚至长出新的植株的过程和技术。 20快速繁殖：采取培养基配制，材料灭菌，无菌培养，幼苗转移到苗床，成苗转至大田栽种五步走的繁殖培养方式 21、继代培养：继代培养是指愈伤组织在培养基上生长一段时间后，营养物枯竭，水分散失，并已经积累了一些代谢产物，此时需要将这些组织转移到新的培养基上的培养方式。 22、生根培养：将长到一定长度的微枝（>10mm）转移到生根培养基上培养。 23、玻璃化现象：试管苗的茎叶变成透明水渍状，生长畸形，增殖系数明显下降，难以诱导生根，即使诱导生根，其根系质量极差，移栽成活率极低。 24、暗培养： 25、液体培养：将所需培养物的悬浮液在液体培养基中培养的方法。 26、脱分化：一个成熟细胞回复到分生状态或胚性细胞状态的现象。 27、分化：由于细胞的分工而导致的细胞结构和功能的改变或发育方式改变的过程。 28、热处理脱毒：利用高温下使植物组织中的病毒部分钝化或完全失去活性的方法。 1 / 6 29、微尖嫁接技术：把极小（<0.2mm）的茎尖作为接穗嫁接到实生砧木上（无菌种子培养获无菌

植物组织培养技术

第2章植物组织培养技术 第二节植物组织培养概述 一、授课章节 第二节植物组织培养概述。 二、学时安排 2学时。 三、教学目标 1．掌握植物组织培养的含义。 2．了解植物组织培养的类型划分。 3．理解植物组织培养的应用原理。 4．掌握植物组织培养的特点和应用。 四、教学重点、难点分析 重点： 植物组织培养的含义、特点和应用。 难点： 植物组织培养的应用原理。 五、教具 电化教学设备，植物组织培养试管苗。 六、教学方法 讲授法，多媒体课件。 七、教学过程 Ⅰ.导入 前面我们学习了有关植物育种的一些知识，今天，请看我给同学们看一样东西(教师拿出试管苗)，问同学们这是什么呢？这就是我们要学的植物组织培养。 II.新课

一、植物组织培养的含义 植物组织培养是指在无菌条件下，将离体的植物器官、组织、细胞以及原生质体培养在人工培养基上，给予适宜的培养条件，使其长成完整植株的过程。由于培养物脱离母株在试管内培养，故又称离体培养、试管培养。 二、植物组织培养的类型 植物组织培养由于分类依据不同可划分为不同的类型。 三、植物组织培养的应用原理 （一）植物细胞全能性 植物细胞全能性，是指植物体上每个具有完整细胞核的植物细胞，都具有该植物体的全部遗传信息和产生完整植株的能力。植物的体细胞一旦脱离所在器官或组织的束缚成为离体状态时，在一定的营养、激素和外界条件作用下，就可能表现出全能性，而生长发育成为完整的植株。

（二）细胞的分化和形态建成 （三）植物的再生功能 四、植物组织培养的特点 （一）研究材料来源单一，无性系遗传信息相同 （二）试验经济，管理方便，工作效率高 （三）培养条件人为控制，可周年连续进行试验或生产 （四）生长快，周期短，繁殖率高 五、植物组织培养的应用 （一）优良品种的快速繁殖 （二）脱毒及脱毒苗的再繁育 （三）植物新品种的培育 （四）种质资源的保存和交换 （五）有用次生代谢产物的生产 III.作业 1.简述植物组织培养的概念和培养类型。 2.植物组织培养技术有哪些特点？ 3.植物组织培养在生产上有哪些方面的应用？ 4.通过学习，你对植物组织培养技术是怎样理解的？ 第二节植物组织培养厂房的设计与构建一、授课章节 第二节植物组织培养厂房的设计与构建。 二、学时安排 2学时。