Vero细胞HCPELISA试剂盒说明书分析

Vero 细胞HCP（宿主细胞蛋白）

Vero细胞宿主蛋白酶联免疫检测

目录#F500

预期用途

该试剂盒用于检测用Vero 细胞.生产的制品中是否有宿主蛋白残留。仅供研究和工业生产，不能用于人和动物的诊断。

总结与说明

病毒疫苗或其他治疗用蛋白在Vero细胞中表达使商业用大量生产药物原料产品的经济简便方法。生产和纯化这些产品的过程中会残留Vero细胞中的一些蛋白质（称为宿主细胞蛋白，HCPs）而造成污染。这种污染可以减少药物的疗效，引发毒副反应和免疫学反应，因此最好在实际生产制品过程中将HCPs降低到最低水平。

一些利用抗体来除HCPs的免疫学方法，如Western Blot 和ELISA被广泛使用。虽然Western blot是一种检测HCPs的有效方法，但它受到了一些限制。因为它过程复杂且技术依赖性强，需要操作者对结果进行分析解释。而且，它在本质上是一种定性检测，不能定量分析。Western blot的敏感性易受被检测样品量的影响，也受目的产品浓度的干扰。因此Western blot可用来检测纯化上游的蛋白质，而对纯化下游或终产品的检测灵敏度与特异性较低。本试剂盒中用到的ELISA方法克服了Western Blot的缺点，将敏感度提高了100倍。

ELISA操作简单、客观、可获得半定量的结果，是纯化工艺，过程控制，常规质量检测的最佳选择。这个试剂盒可与纯化过程中残留的可独立污染产品的所有HCPs反应，就这个意义上来说，这个试剂盒是通用的。用Vero细胞轻度裂解物获得抗体并经亲和纯化，得到的最终抗体可以与用于生产各种病毒疫苗和蛋白质产品的四种商用细胞系反应。这一分析表明，绝大多数HCP存在于各种Vero细胞系和纯化过程中。如果你需要一个更为敏感和特异性的方法去检测样品中的HCP量，Cygnus Technologies公司为你推荐一个优于2D Western blot的方法，我们将这个方法称为2D HPLC-ELISA。2D HPLC-ELISA相较于2D Western blot 来说敏感性强，特异性高。要想更多了解此方法，请联系我们公司服务部门。

使用特殊的方法制备抗体，以减少低分子量和低免疫原性污染物以及高分子量组分。例如本试剂盒，可以作为一个工艺过程开发的工具来监控去除宿主细胞

污染物的最佳条件，以及确保最终产品发布。

这种敏感性高的酶联免疫吸附试剂盒已被用于检测终产品的HCP，通过对来自不同生长状态和纯化过程的4种疫苗产品的中间产品和最终产品的实际检测来得到结果。我们鼓励该试剂盒的的每个使用者进行类似的验证研究以证明它符合他们的分析需求。这个试剂盒能满足你们的样品需求，不用再运用其他的特异性实验，因为那些实验提供的信息对这个通用的试剂盒来说是重复多余的。但是，如果你的验证研究表明此试剂盒中的抗体与你的样品中的HCP不能充分反应，那就需要同时运用一种特异性的ELISA，且需要特异性强的抗血清。或者，如果该试剂盒中使用的多克隆抗体能提供足够的敏感性和广泛的抗原反应性，可用它替代本试剂盒中经共纯化的污染物制作的标准品，从而在特异的HCP检测过程中达到更好的精确性。使用更多的抗原和抗体所做的特异性分析法的应用理论上具有更好的特异性，但因为它过于特异而不能检测出因为操作不规范或过程改变后产生的一些新的或非典型的污染物。由于这个原因，我们建议用具有广泛反应性的“通用”宿主细胞蛋白检测实验分析最终产品纯度，即使可使用过程特异性分析。如果你认为有必要进行过程特异性分析检测， Cygnus Technologies公司将运用其已经验证的方法开发这种抗体并按顾客要求进行检测。

检测原理

Vero细胞检测是一个双位点酶联免疫检测。样品中包含的Vero Cell HCPs蛋白与标记有抗-Vero Cell抗体的辣根过氧化酶同时反应，反应在之前涂有一层吸附性抗-Vero Cell蛋白抗体的微量滴定板中进行。免疫反构成为夹层结构：固相抗体-HCP-酶标记抗体。反应结束后清洗微量滴定板，去除未结合反应物。添加TMB作用底物反应。微量滴定板读数器上测定水解物浓度，水解物浓度与Vero Cell HCPs蛋白浓度成正比。

试剂&材料（试剂盒提供）

成分产品#

抗-Vero cell:HRP F501

羊抗Vero cell亲和纯化抗体，用辣根过氧化酶标记。

排列在加有防腐剂的试剂盒中，1x12mL

Anti-Vero cell coated微量滴定板F502*

12×8孔装在含有干燥剂的袋子内

Vero cell HCP标准液F503

含有Vero cell HCP、牛血清白蛋白与防腐剂。

规格有0, 2, 8, 25, 75和200ng/mL . 1 mL/瓶

终止液F006 0.5N硫磺酸1x12mL

TMB F005 3,3’,5,5’-四甲基联苯胺. 1x12mL

清洗物（20倍浓缩）F004 含防腐剂的Tris缓冲液1x50ml

*除了#F505，所有成分都可单独购买

储存&稳定性

*为了保持稳定，所有的试剂应储存在2°C至8°C，直到打印所示的截止日期为止

*若作为底物的试剂在450nm吸光度大于0.1，则不要使用

*试剂盒所带的复原液在保质期前都是稳定的

材料和器材（试剂盒不提供）

能在450&650nm对微量滴定板进行读数的分光光度计（如果你微量滴定板不能不提供双波长的分析，你可以读取450nm波长）

移液枪50μL 和100μL

多头或多道移液器100μL

微量滴定板旋转器 150 - 200 rpm

样品稀释液推荐用Cat # 1028

蒸馏水

1L洗涤瓶，用来稀释洗液

警告

*仅供研究和工业使用

*终止液是0.5N硫磺酸，禁止眼睛、皮肤或衣服与之接触。试剂盒的其他试剂均无害

*该试剂盒只能由有资格的技术人员操作

试剂预处理

*将所有试剂放到室温下

*用蒸馏水将浓缩的洗液稀释到1L，在试剂盒上贴上标签，写上组别和失效日期，储存在4°C

注意事项

1.正确洗板，除去过量的未反应试剂对保持实验的重复性和灵敏度是必不可少的。我们强烈建议不要使用自动化或其他手动操作的真空吸尘装置清洗板，因为这样会降低特异性的吸光度，增加非特异的吸光度，使精确度改变。下面介绍的人工清洗程序在一般情况下只造成较低的背景干扰，且特异性的吸光度高，精确度更好。

2.样品中HCP浓度高时可观察到高剂量钩状效应或低水平的线性稀释。高剂量钩效应是由于在纯化上游阶段样品的HCP浓度过高，相对来说抗体较低而引起的。浓度大于1mg/mL 的样品，其吸光度低于200 ng/mL的标准液。当抗体浓度超过HCP浓度时，也会出现钩效应。在这种情况下，未稀释的样品的吸光度可能低于试剂盒最高标准液的吸光度。然而，这些样本不能显示随着稀释度增加，HCP 浓度也增加的线性关系。钩状效应最常出现在纯化上游阶段。如果可能出现钩状效应，我们需要对已稀释的样品进行检测。如果未稀释样品中HCP的浓度低于已稀释样品中HCP的浓度，则可能引起钩状效应。这样的样品至少要稀释到用实验中间品和终成品验证了的需要稀释的最低限度（MRDS）。在保证统计学精确度的情况下，一系列能检测出相同HCP值的样品稀释度中，MRD是第一个符合要求的稀释度。据报道，样品的稀释度与HCP值的关联是在已建立的MRD的基础上修正的。所用稀释剂应该准确回收。首选的稀释剂是我们规格为100ml、500ml或1l/瓶的 Cat# I028。本试剂盒的标准液也是由这种稀释液制备的。当样品用1028稀释时，其稀释模型开始接近标准，从而减少用其他稀释液所造成的任何错误。其他要用的稀释液必须测试非特异性的结合，并用它们回收已稀释的200ng/mL 的标准液，方法如下文所述。

局限性

*在依靠这种检测来检测宿主细胞残留蛋白之前，每一个实验室都应该验证该试剂盒的抗体和检测程序的特异性、准确性和精确度是否符合要求。可以从我们公司的服务部门或网站获得验证试验的方法。

*在本实验中使用的标准品包括用常规方法在疫苗产品初次收获液中溶解的

Vero细胞HCPs。在该试剂盒中使用的用来分析抗体的1D Western blot可识别经敏感蛋白染色（如银染和胶体金染色）的大多数的PAGE分离的条带。由于Vero 细胞系的大多数HCPS会表现出足够的抗原量，该试剂盒应该有足够的抗体活性与你的细胞系充分反应。但是，我们不能保证该试剂盒能检测出你们生产过程中所有的蛋白质或蛋白质片段。如果你希望用比 western blot 更为灵敏的方法来检测该试剂盒中的抗体与你的HCPs是否充分反应，我们将为你提供经过ELISA 后用2D-HPLC分离HCPs的方法。

*某些样品基质可能会干扰试验。本试剂盒使用的标准品试图模拟典型的样品与基质矩阵。然而，潜在的产品本身或样品基质中的其他成分可能对本实验产生一些正向或负向干扰。高或低的PH值，去垢剂，尿素，高浓度的盐和有机溶剂是已知的干扰因素。建议对所有样品基质进行测试以排除干扰，用经稀释的

200ng/ml标准液，1/4的基质不含或含非常低的HCP。如果要用标准品检测未知样品，则需添加30到50 ng/mL标准品的HCP值。至于如何定量样品基质的值，请咨询公司服务部门。

*避免对含有叠氮化钠（NaN3）的样品进行测定，因为它会破坏辣根过氧化酶的连接活性，测得的HCP值偏低。

实验方案

* 该测定是非常强大的，可通过改变孵育时间、样本大小及它后续反应等实验中的可变因素可提高敏感性，增加分析范围或减少样本基质干扰。在修改我公司推荐的方法之前请联系我们，我们将以最佳方式输入数据以确保达到您期望的目的。

*实验指定使用经认证的微量滴定板振动器或旋转器进行免疫学操作。这些设备可以从大多数实验室购买，不需要在公司买。或者你也可以直接在我们公司购买经验证的，预校准的微量滴定板振动器。如果你没有这样的装置，可以直接在板中孵育，不需要震荡，但要将免疫孵育时间延长到一个小时左右来达到使用振荡器所达到的效果。孵育时的前30min不要振荡，否则会造成背景污染或降低精确度。

*将所有试剂放到室温下。设置板的分光光度计的测试波长为450nm，650nm处的读数为作为参考。

*彻底清洗是保证本实验性能的必不可少的步骤。我们强烈建议不要使用自动化

或其他真空吸尘装置清洗板。本实验推荐的手工清洗方法是保证精确性、敏感性和正确性的首选。关于此方法更详细的信息可以从公司的服务部门或网站获得。*所有标准品、对照品和样品至少应做一次重复实验。

*实验板孔加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应孔的孵育时间一致。

*作一个工作记录，以确定检测时标准品、对照品和样品各自的位置。

*建议您的实验室对每一个过程的对照品进行测试，以确保所有试剂和程序是正确的。强烈要求你用来自所用的细胞系的样品基质和HCP做一个典型样品矩阵作为对照。这些对照品可分装到单次使用的小瓶中，并保存在0度使其长时间保持稳定。

*如果该底物具有明显的蓝颜色，可能是在检测之前已被污染。如果100μL底物的吸光度加上以100μL水为空白对照时的吸光度超过0.1，我们就需要更换新的底物，否则实验的敏感性会受影响。

*应在加入终止液后的30min内读板，因为蛋白质着色会随着时间的推移而褪色。质量控制

*重复样品的精确度用两者的平均百分比计算。在8-200ng／mL的样品范围内，变异系数小于10%，而样品＜8 ng/ml时，变异系数可大于10%。

*当以水为底物进行空白对照时，最佳吸光度应 < 0.1.

*建议各实验室检测每个过程中的的质量控制样品，以确保所有试剂和程序是正确的。

结果计算

标准液可用于制作标准曲线，标准液浓度相当于免疫反应HCP总浓度。根据测定的小孔中标准液吸光值绘制标准曲线。数据分析可以使用计算机选配曲线，例如点到点、三次样本函数或四参数逻辑曲线。不要使用线性回归分析修改样品吸光值，这样会出现显著误差。也可以手工绘图，Y轴标注吸光度，X轴标注浓度。然后根据样品吸光值计算出样品中HCP浓度。

范例

Cygnus Technologies用传统方法对试剂盒性能进行了如下验证。如果需要的话，认证报告可从公司网站获得。此验证在本质上是通用的，并且是为了补

充而不是替换某些用户和产品应该具有的由每个实验室进行的资格验证。但这些实验室必须对他们自己的样本做一次实验矫正。另外，本试验范围内产生的来源于HCPs的任何样品类型均应进行稀释线性以确保检测的准确性，并确定具有足够的抗体与你的HCPs充分反应。每个实验室和技术人员在要求精确性的检测过程中应该具有如下描述的能力。更多的建议做的验证程序可在公司服务部门或网站获得。

敏感度

最低检测限（LOD）定义为比空白对照的平均值高两倍的样品浓度。LOD是~ 0.7 ng/mL.

最低定量限（LOQ）被定义为浓度变化系数（CVS）是小于20%时可测到的最低浓度。 LOQ is <2 ng/mL。

精确度

组内（20个重复）和组间（10个实验）的精确度有3个水平（~ 8ng／ml）、中（~ 25ng/ml）、高浓度（~ 75ng／ml）的检测结果决定。CV百分比为三个水平所测的平均值除以标准偏差再乘以100。

特异性/交叉反应

对4中商用的商业Vero细胞株进行1D Western blot and ELISA分析表明，在所有细胞系中大多数的蛋白质是保守的。因此此方法也可用来检测其他Vero细胞株的HCP。1D/2D Western blot与ELISA无关，且不能用银染或胶体金染色技术对非特异的蛋白进行染色。即使如此，银染结果和western blot结果不一致并不一定意味着没有抗那种蛋白的抗体或用 ELISA 不能检测到那种蛋白质。如果你想在检测试剂盒中抗体与 HCPs的反应时用比western blot更为敏感和特异的方法， Cygnus很高兴能够提供的服务和/或基于2D高效液相色谱法的ELISA分析 HCPs的咨询。这种方法已被证明在检测HCP时具有更高的灵敏度和精确度。同样的用于捕获的抗体和HRP标签可以单独购买如# VC 807-AF。

没有用这个试剂盒对非HCP成分的交叉反应进行广泛的研究。因为存在正向干扰，如交叉反应性和非特异性结合，您应该确定您的样品中的成分。关于负向干扰的研究如下文描述。

矫正/干扰实验

纯化和Vero细胞表达的药物原料的最终配置用到的各种缓冲基质通过已知数量的Vero细胞HCP蛋白质来评价，本试剂盒用该蛋白质制备标准品。因为检测的目的是尽量减少基质干扰，大部分缓冲液产生的可接受的矫正范围定义为80-120%。这个试剂盒使用的标准品包含8mg/ml牛血清白蛋白，目的在于模拟非特异性蛋白去影响大多数样品蛋白或病毒产品。然而某些产品的高浓度可能会干扰测量HCPs的准确性。在一般情况下，PH极端值（<5.0和＞8.5），高浓度盐，高浓度多糖和大多数洗涤剂可造成低矫正率。每个操作者应确保他们的样品基质能得到正确的矫正。这样的实验可以通过稀释试剂盒提供的200ng/ml标准品到样品基质中进行，如“Limitations”部分所述。 Cygnus 可提供HCP的更多浓度梯度(Cat # F503H at 100μg/mL) 用于制备试剂盒标准物，最终为您的样品回收和对照分析做准备。

钩状效应的量

把 HCPs浓度＞200ng/mL的测定作为未知数。钩状效应容量，定义为能

产生吸光度读数大于1000 μg/mL，小于200 ng/mL的浓度范围。

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自己翻译的罗氏tunel检测细胞凋亡试剂盒说明书

罗氏tunel检测细胞凋亡试剂盒说明书 注意：Label溶液含有甲次砷酸盐和二氯化钴，严禁吸入和食入。 反应悬浮物收集于密闭、不易碎、有明确标识的容器中，按有毒废物处理。 需要自己配置的其他物品： 除上表所列试剂外，还需准备以下溶液。下表列出每步所需物品概览：

产品概述： 特异性：TUNEL 反应优先标记凋亡产生的DNA 链断裂，从而辨别凋亡与坏死、以及由抑 制细胞生长的药物或放射线产生的primary DNA 链断裂 实验干扰：假阴性：在某些型式的凋亡细胞中DNA 链断裂可能缺失或不完全。空间位阻， 如细胞外元件可能阻止TdT 到达DNA 断裂处。两种情况均能产生假阴性。 假阳性：在坏死晚期，可能产生大量的DNA 片段 DNA 链断裂也可能在具有高增殖和代谢活动的细胞中出现。两种情况均能产生 假阳性。为确认细胞死亡的凋亡型式，应认真进行每种细胞的形态学检查 凋亡过程中产生的形态学改变尤其特征形式，因此，对于可以结果进行解释时， 细胞形态评估是一项重要的参数 样本：细胞离心涂片和细胞涂片 在chamber slides 上培养的黏附细胞 冰冻或福尔马林固定、石蜡包埋样本 分析时间：2-3小时，除外培养、固定和渗透 检测次数：一个试剂盒50T

步骤和所需材料： 1 流程图： 2 样品准备 黏附细胞、细胞涂片和细胞离心涂片 需准备的其他试剂：Washing buffer：磷酸盐缓冲液（PBS） Blocking buffer封闭溶液：甲醇稀释的3% H2O2 Fixation solution固定溶液：PBS配制的4%多聚甲醛，ph ，新鲜配制 Permeabilisation solution 渗透液：%Triton1）X-100溶于%柠檬酸钠溶液 中，新鲜配制 步骤：下表描述了细胞固定、内源性过氧化物酶封闭和细胞渗透过程。 组织部分 福尔马林-包埋组织 福尔马林包埋组织的预处理：可按4种不同的方式预处理。如用蛋白酶K，不含核酸酶，浓 度、孵育时间和温度应按组织类型优化 注意：只用罗氏应用科学的蛋白酶K，因其经检测不含核酸酶， 核酸酶可导致假阳性。 另外3中替代方法在下表中描述（step 2） 需准备的其他试剂：二甲苯和乙醇（浓度：95%，90%，80%，70%，溶于双蒸水中）

UU核酸检测试剂盒产品使用说明书

解脲脲原体（UU）核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法）说明书 【产品名称】通用名称：解脲脲原体（UU）核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法) 英文名称：Detection Kit for Nucleic Acid of Ureaplasma urealyticum (PCR-fluorescence probing) 【包装规格】 32人份/盒 【预期用途】本试剂盒用于定性检测尿道、生殖道分泌物拭子样本中的解脲脲原体核酸成分，主要用于解脲脲原体感染的临床辅助诊断。根据相关文献研究，解脲支原体有14 株脲原体标准血清型可分为微小脲原体（Ureaplasma parvum，UP）1、3、6、14 和解脲脲原体（Ureaplasma urealyticum，UU）2、4、5、7、8、9、10、11、12、13，其中UP为条件致病菌，致病性与其含量有关，且普通人也有携带少量UP。UU是引起非淋球菌性尿道炎、阴道炎等病症的主要致病菌之一，也是引起输卵管炎、盆腔炎、慢性前列腺炎、流产、产后热等的重要病原菌之一。目前，临床上常用的脲原体检测方法有液体培养和核酸检测，但其并不能鉴别出其病菌是UP还是UU。 【检验原理】本试剂盒选用针对解脲脲原体（UU）特异性基因片段设计特异引物及特异Taqman荧光探针，该探针能与引物扩增区域中间的一段DNA摸板发生特异性结合，在PCR延伸反应过程中，Taq酶的外切酶活性将5′端荧光基团从探针上切割下来，使之游离于反应体系中，从而脱离了3′端荧光淬灭基团的屏蔽，即能接受光刺激而发出可供仪器检测的荧光，从而实现在全封闭反应体系中对解脲脲原体（UU）核酸的自动检测，发出荧光信号的强度与UU-DNA的量呈正相关。 【主要组成成份】 注：不同批号试剂盒中各组份不能互换。 【储存条件及有效期】试剂应储存在-20℃保存，产品有效期为12个月，未使用完的试剂继续冷冻保存不影响其稳定性，但试剂反复冻融不得超过3次。 生产日期、有效期至：见标签字样。 【适用仪器】具有FAM、JOE荧光检测通道的ABI 7300/7500、ABI 7500 Fast、LightCycler 480等实时荧光定量PCR仪。 【样本要求】 1．使用藻酸钙拭子、普通棉拭子或涤纶拭子采集尿道、生殖道部位带柱状上皮细胞的分泌物样本，应当选用国家批准生产的一次性使用的男性拭子或女性拭子，拭子应当包括套管、棉签杆、塞子，棉签杆与塞子都应连接牢固。 1.1尿道：对男性患者，先用生理盐水清洗尿道口，将男用取材拭子插入尿道内1-2cm，稍用力转动，保留数秒钟再取出，以采集到粘膜上皮细胞。 对女性患者，可低着耻骨联合轻轻按摩尿道后，用同男性相似的方法取材。 1.2宫颈：取材前用温水或生理盐水湿润扩阴器，应避免使用防腐剂和润滑剂。如果宫颈口外面的分泌物较多，先用无菌棉拭清除过多的分泌液， 将女用取材拭子插入宫颈管内2-3cm，稍用力转动，保留数秒，采集阴道分泌物。 1.3阴道：对于子宫切除的妇女和青春期前女孩可采用阴道样本。将取材拭子置于阴道后穹窿10-15s，采集阴道分泌物。如果处女膜完整，则从 阴道口取材。

迈瑞-BC-5380血液细胞分析仪标准操作程序资料

迈瑞-BC-5380血液细胞分析仪标准操作程序 适用于血液白细胞计数及分类，红细胞计数，血红蛋白，血小板计数，红细胞压积，红细胞体积分布宽度，平均红细胞血红蛋白含量，平均红细胞血红蛋白浓度，平均红细胞体积，血小板体积分布宽度、平均血小板体积和血小板压积等检验。 2 仪器设备试剂 BC-5380血液细胞分析仪专用试剂：M-53D稀释液；M-53LEO(I) 溶血剂；M-53LEO(II) 溶血剂；M-53LH 溶血剂；M-53 清洁液；M-53P 探头清洁液。所有试剂应参照试剂的使用说明进行保存。变质、超过效期的所有试剂不能使用。 3 仪器设备标本 原始样品采集、制备、处理、检验和存放见检验科相关规范。 4 仪器设备性能参数 BC-5380血液细胞分析仪一般资料见附件1；BC-5380血液细胞分析仪性能指标见附件2。 5 仪器设备环境要求，使用安全措施 5.1 仪器设备环境要求 5.1.1 空间安装要求 仪器应安装在稳固工作台上。在仪器两侧各保留至少1米的空间，以方便维护和保养。后部至少要有0.50米的空间，以防止阻碍热气的排放并保证主机后的液路管道不受挤压。将BC-5380血液细胞分析仪安放在通风良好、灰尘少的地方。避免在过热或过冷以及日光直射的环境中使用BC-5380血液细胞分析仪。保证操作台面以及主机下方有足够的空间放置稀释液、废液桶。 5.1.2 运行条件 环境温度要求：10℃～40℃。 环境相对湿度要求：10%～90%。 电源电压要求：100～240VAC，50/60Hz。 仪器设备周围应尽可能无尘、无机械振动、无污染、无大噪音源和电源干扰；仪器附近无强电磁干扰源以及电刷型电机、闪烁荧光灯和经常开关的电接触性设备；不应放在通风条件差、阳光直射的环境中，或热源及风源前。 5.2 仪器安全 在仪器设备上面和周围不要使用可燃性危险品，避免引起火灾和爆炸。 在电源打开状态下，禁止打开仪器前上面、侧面及背面面板，以免损害线路板；禁止触摸BC-5380血液细胞分析仪外壳里面的电子元件，尤其避免湿手触摸，以免造成电击。 仪器设备使用前，必须认真检查设备之间连接及外接线(件)是否正确、正常，电源插头是否正确插接，设备是否处于正常状态。实验过程中如遇水、电故障或中断，应立即关闭影响仪器设备安全的有关开关，并实施安全保护措施。 仪器设备的运输必须按BC-5380血液细胞分析仪使用说明书规定进行搬运，禁止鲁莽装卸，应避免倾斜，振动和碰撞。 如果标本、试剂溢出在分析仪上，立即擦掉并依照检验科相关规范处理。 5.3 人员安全 仪器设备中所有与病人的样品接触或有潜在性接触可能的表面与零件都视污染物。

Annexin V-FITC PI细胞凋亡检测试剂盒

Annexin V-FITC/PI 细胞凋亡检测试剂盒 Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit 一、试剂盒说明 在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸（PS ）只分布在细胞膜脂质双层的内侧，而在细胞凋亡早期，细胞膜中的磷脂酰丝氨酸（PS ）由脂膜内侧翻向外侧。Annexin V 是一种分子量为35~36kD 的Ca 2+依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin V 被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。将Annexin V 进行荧光素FITC 标记，以标记了的Annexin V 作为荧光探针，利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生。 碘化丙啶（Propidium Iodide, PI ）是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但对凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI 能够透过细胞膜而使细胞核染红。因此将Annexin V 与PI 匹配使用，就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。 本试剂盒可应用于培养细胞凋亡检测（不推荐用于检测组织样本）。 二、试剂盒组份 组份 (20 assays) (50 assays) (100 assays) 储存条件 AnnexinV-FITC 100 μL 250μL 500 μL Propidium Iodide 100 μL 250μL 500 μL Binding Buffer 10.0 mL 25 mL 50 mL 注：1、Annexin V-FITC 组份建议按需分装小份冻存于-20 ℃，避免反复冻融； 2、Propidium Iodide 和Binding Buffer 组份不用时可放置于4℃保存，Propidium Iodide 需要避光。 3、Store at -20℃ for 12 months 三、试剂盒以外自备仪器和试剂 流式细胞仪或荧光显微镜、低速离心机、微量移液器 1.5m L Microtube 、载玻片、盖玻片（荧光显微镜观察需用）、PBS 、不含EDTA 的胰酶消化液 四、使用注意事项 1. 微量试剂取用前请离心集液。 2. Annexin V-FITC ，Propidium Iodide （PI ）避光保存及使用。对于Annexin V-FITC 这个组份，建议您在收到产品之后，分装为小份避光保存于-20℃，即用即取。 3. Propidium Iodide （PI ）有毒，操作时要戴手套。 4. 本试剂盒适用于检测活细胞，流式细胞仪检测时，细胞数量不以应低于1×105，不推荐用于检测组织样本。 5. 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞，需用不含EDTA 的胰酶消化，如消化不当，可能引起假阳性，而 用细胞刮子会造成细胞粘连成团，而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA 的PBS 中，防止进一步的损伤。 6. 细胞固定后可能导致荧光的淬灭，请不要固定样品。 7. 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同，因而流式检测的荧光补偿也不同，因此建议每 次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照，进行荧光补偿的调节。 五、 操作方法 1. 悬浮细胞离心（2000rpm 离心5min ）收集；贴壁细胞用不含EDTA 的胰酶消化收集（注：胰酶消化时间不 易过长，否则容易引起假阳性）； -20℃避光 4℃避光 4℃

一步法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒说明书

一步法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒说明书 货号：T2190 规格：20次 保存：-20oC保存，荧光标记液需避光保存。 产品简介： 细胞在发生凋亡时，会激活一些DNA内切酶，这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA。细胞凋亡时抽提DNA进行电泳检测，可以发现180-200bp的DNA ladder。基因组DNA断裂时，暴露的3’-OH可以在末端脱氧核苷酸转移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase,TdT)的催化下加上绿色荧光探针荧光素(FITC)标记的dUTP(fluorescein-dUTP)，从而可以通过荧光显微镜或流式细胞仪进行检测，这就是TUNEL(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)法检测细胞凋亡的原理。 一步法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(One Step TUNEL Apoptosis Assay Kit)为您提供了一种高灵敏度又快速简便的细胞凋亡检测方法。对于经过固定和洗涤的细胞或组织，只要经过一步染色反应，洗涤后就可以通过荧光显微镜或流式细胞仪检测到呈现绿色荧光的凋亡细胞。 TUNEL法特异性检测细胞凋亡时产生的DNA断裂，但不会检测出射线等诱导的DNA断裂(和细胞凋亡时的断裂方式不同)。这样一方面可以把凋亡和坏死区分开，另一方面也不会把射线等诱导发生DNA断裂的非凋亡细胞判断为凋亡细胞。极少数细胞凋亡时没有DNA断裂，此时不适用TUNEL法检测。在个别类型的坏死细胞中也发现TUNEL检测呈阳性。在需要严格判断细胞凋亡的情况下，最好同时检测多个凋亡指标。产品内容： 1.TdT酶100μl 2.荧光标记液900μl 3.TdT酶稀释液(选用)500μl

YYT核酸扩增检测用试剂盒

YY/T1182-2010 核酸扩增检测用试剂（盒） 1范围 本标准规定了核酸扩增检测试剂（盒）【以下简称“试剂（盒）”】的术语和定义、命名和分类、技术要求、试验方法、标识、标签和说明书、包装、运输和贮存等。 本标准适用于核酸扩增检测试剂（盒）的质量控制。核酸扩增检测试剂（盒）应包括核酸提取、核酸扩增及产物分析试剂组份，如核酸扩增检测试剂（盒）内不含有核酸提取组份，应由生产企业说明或指定提取试剂（盒）。 本标准不适用于基因分型、基因芯片和病毒基因分型/突变检测用试剂（盒）及血源筛查的试剂（盒）。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T21415-2008体外诊断医疗器械生物样品中量的测量校准品和控制物质赋值的计量学溯源性 3术语和定义 以下术语和定义适用于本文件。 3.1聚合酶链反应polymerasechainreaction,PCR 聚合酶链反应或多聚酶链反应是一种对特定的DNA或RNA片段在体外进行快速扩增的方法，由变性-退火-延伸三个基本反应步骤构成。 3.2PCR杂交（膜上、板上）PCRhybridization 具有一定同源序列的两条核酸单链（DNA或RNA）可以通过氢键的方式，按碱基互补配对原则相结合，探针结合于特定核酸序列或PCR产物的杂交过程可以在液相中进行，也可以将其中一个固定在固相载体上进行。 3.3PCR电泳PCRelectrophoresis 根据PCR产物分子质量和所带电荷的不同在电场中进行分离的技术。 3.4实时荧光PCRreal-timepolymerasechainreaction,PCR

BC-5390-CRP血液细胞分析仪标准操作程序

BC-5390 CRP血液细胞分析仪标准操作程序 1 仪器设备检验项目 适用于血液白细胞计数及分类，红细胞计数，血红蛋白，血小板计数，红细胞压积，红细胞体积分布宽度，平均红细胞血红蛋白含量，平均红细胞血红蛋白浓度，平均红细胞体积，血小板体积分布宽度、平均血小板体积和血小板压积等检验。 适用于血液C-反应蛋白的检测。 2仪器设备试剂 BC-5390 CRP血液细胞分析仪专用试剂：M-53D稀释液；M-5LEO(I) 溶血剂；M-5LEO(II) 溶血剂；M-53LH 溶血剂； M-53P 探头清洁液；LC 溶血剂；C-反应蛋白（CRP）测定试剂盒（乳胶免疫比浊法）。所有试剂应参照试剂的使用说明进行保存。变质、超过效期的所有试剂不能使用。 3 仪器设备环境要求，使用安全措施 3.1 仪器设备环境要求 3.1.1 空间安装要求 仪器应安装在稳固工作台上。在仪器两侧各保留至少1米的空间，以方便维护和保养。后部至少要有0.50米的空间，以防止阻碍热气的排放并保证主机后的液路管道不受挤压。将BC-5390 CRP血液细胞分析仪安放在通风良好、灰尘少的地方。避免在过热或过冷以及日光直射的环境中使用BC-5390 CRP血液细胞分析仪。保证操作台面以及主机下方有足够的空间放置稀释液、废液桶。 3.1.2 运行条件 环境温度要求：-10℃～40℃。 环境相对湿度要求：10%～90%。 电源电压要求：100～240VAC，50/60Hz。 仪器设备周围应尽可能无尘、无机械振动、无污染、无大噪音源和电源干扰；仪器附近无强电磁干扰源以及电刷型电机、闪烁荧光灯和经常开关的电接触性设备；不应放在通风条件差、阳光直射的环境中，或热源及风源前。 3.2 仪器安全 在仪器设备上面和周围不要使用可燃性危险品，避免引起火灾和爆炸。 在电源打开状态下，禁止打开仪器前上面、侧面及背面面板，以免损害线路板；禁止触摸BC-5390 CRP血液细胞分析仪外壳里面的电子元件，尤其避免湿手触摸，以免造成电击。 仪器设备使用前，必须认真检查设备之间连接及外接线(件)是否正确、正常，电源插头是否正确插接，设备是否处于正常状态。实验过程中如遇水、电故障或中断，应立即关闭影响仪器设备安全的有关开关，并实施安全保护措施。 仪器设备的运输必须按BC-5390 CRP血液细胞分析仪使用说明书规定进行搬运，禁止鲁莽装卸，应避免倾斜，振动和碰撞。 如果标本、试剂溢出在分析仪上，立即擦掉并依照科室相关规范处理。

凯基TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒

凯基TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒(通用)（BIOTIN标记POD法,适用于细胞、组织样本） 使用说明书 一、TUNEL制品说明 凯基TUNEL细胞凋亡检测试剂盒是用来检测细胞在凋亡过程中细胞核DNA 的断裂情况，其原理是生物素（biotin）标记的dUTP在脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TdT Enzyme）的作用下,可以连接到凋亡细胞中断裂的DNA的3‘－OH末端，并可与连接了的辣根过氧化酶的链霉亲和素（Streptavidin-HRP）特异结合，在辣根过氧化酶底物二氨基联苯胺（DAB）的存在下，产生很强的颜色反应（呈深棕色），特异准确地定位正在凋亡的细胞，因而在普通显微镜下即可观察和计数凋亡细胞；由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有DNA的断裂，因而没有3'-OH 形成，很少能够被染色。 本试剂盒适用于组织样本（石蜡包埋、冰冻和超薄切片）和细胞样本（细胞涂片）的凋亡原位检测。 本试剂盒特点 ●操作简便：使用Ready-to-Use型试剂，并配有Proteinase K 和DAB。 ●高灵敏度：可以单一检出初期的凋亡细胞。 ●高特异性：能特异性染色凋亡细胞。 ●快速操作：整体操作约需3小时。 ●用途广泛：可应用于组织切片、细胞样本等。 ●方便观察：使用光学显微镜观察实验结果。 ●高正确性：有阳性对照片的制备方法，可以确认试剂盒的有效性

使用注意事项 1．使用前请认真阅读本说明书，提前准备好相关试剂。 2．因本试剂盒中组分均为微量，使用前请离心集液。 3．为避免试验误差、降低试剂的损耗，建议使用精密度高的进口微量移液枪及枪头。 4． TdT 酶反应液最好在使用前根椐样本数量集中配制，再分别滴加于各样本片上，避免每个样本单独配制而产生的试剂损耗。 5. 为防止样本脱落，请使用硅烷（Silane）处理的载玻片或采用多聚赖氨酸铺片。 6. 固定好的样本可以在-20℃的70%乙醇中放置30分钟或至过夜，以改善细胞的渗透性。 7. 使用PBS清洗细胞样本时，不要直接加在细胞样本上，以防止细胞样本的脱落。 8. 进行PBS清洗时，以5分钟清洗3次为标准。 9. DAB为固体粉末，使用前加入PBS配制成20×DAB（10 mg/ml）后，按说明书显色使用。 二、TUNEL试剂盒组分 试剂盒以外自备仪器和试剂

invitrogen AnnexinV PI双染试剂盒说明书中文

流式细胞仪 1，使用特定的方法诱导细胞凋亡，设置一个没有处理的control组 2，在一定孵育期后收获细胞，用冰冷的PBS清洗 3，准备1X的annexin结合液，例如，对于10个实验来说，加1ml 5X annexin 结合液（组分C）到4ml 去离子水中 4，准备一个100ug/ml的PI工作液，例如，通过稀释5ul 1mg/ml的PI储存液（组分B）到45ul 1X annexin 结合液中。没有使用的这部分工作液用于以后的实验。 5，再次离心2步骤中洗过的细胞，弃上清用1X annexin 结合液重悬。调整细胞密度，用1X的annexin 结合液稀释到大约1x106/ml，为每个实验准备100ul 足够的体积。 6，加5ul Alexa Fluor 488 annexin V(组分A)和1ul 100ug/ml PI工作液（4步骤中准备的）到每100ul的细胞悬液中。 7，室温孵育细胞15min. 显微镜观察 1，使用特定的方法诱导细胞凋亡，设置一个没有处理的control组 2，在一定孵育期后收获细胞，用冰冷的PBS清洗 3，准备1X的annexin结合液，例如，配置1ml，加200ul 5X annexin 结合液（组分C）到800ul去离子水中 4，准备一个100ug/ml的PI工作液，例如，通过稀释5ul 1mg/ml的PI储存液（组分B）到45ul 1X annexin 结合液中。没有使用的这部分工作液用于以后的实验。 5，再次离心2步骤中洗过的细胞，弃上清用1X annexin 结合液重悬。调整细胞密度，用1X的annexin 结合液稀释到大约1x106/ml，为每个实验准备足够的体积。 6，加5-25ul的annexin V缀合物（组分A）和1-2ul(100ug/ml)PI工作液到100ul 的细胞悬液中。高浓度的annexinV缀合物会产生较好的结果；最佳染色浓度需要凭借经验 7，室温孵育细胞15min 8，1X annexin 结合液清洗细胞 9，用一个合适方法使细胞固定在载玻片上，用一个适当的滤镜观察荧光效果。 细胞应该被分成3组：活细胞，凋亡细胞和死细胞。活细胞在细胞膜上有微弱的annexin V染色，而凋亡细胞在膜上有一个显著亮度，死亡细胞在膜上有annexin染色和核上的PI染色。

碧云天 细胞凋亡-一步法TUNEL检测试剂盒

一步法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒 产品简介： 碧云天生产的一步法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(One Step TUNEL Apoptosis Assay Kit)为您提供了一种高灵敏度又快速简便的细胞凋亡检测方法。对于经过固定和洗涤的细胞或组织，只要经过一步染色反应，洗涤后就可以通过荧光显微镜或流式细胞仪检测到呈现绿色荧光的凋亡细胞。 细胞在发生凋亡时，会激活一些DNA内切酶，这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA。细胞凋亡时抽提DNA进行电泳检测，可以发现180-200bp的DNA ladder。基因组DNA断裂时，暴露的3’-OH可以在末端脱氧核苷酸转移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT)的催化下加上绿色荧光探针荧光素(FITC)标记的dUTP(fluorescein-dUTP)，从而可以通过荧光显微镜或流式细胞仪进行检测，这就是TUNEL(T dT-mediated d U TP N ick-E nd L abeling)法检测细胞凋亡的原理。 注：FITC是fluorescein isothiocyanate的缩写，实际上大多数情况下所谓的FITC即为fluorescein。 本试剂盒有如下优点。(1) 高灵敏度：可以在单细胞水平检测到细胞凋亡，同时由于凋亡早期就有DNA断裂，可以检测到早期的细胞凋亡。(2) 特异性：TUNEL检测时通常更容易标记凋亡细胞，而不容易标记坏死细胞。(3) 快速：仅需约1-2个小时即可完成。(4) 方便：只需一步染色反应，洗涤后即可观察，不必使用二抗等进行多步操作。(5) 应用范围广：可以用于检测冷冻或石蜡切片中的细胞凋亡情况，也可以检测培养的贴壁细胞或悬浮细胞的凋亡情况。 TUNEL法特异性检测细胞凋亡时产生的DNA断裂，但不会检测出射线等诱导的DNA断裂(和细胞凋亡时的断裂方式不同)。这样一方面可以把凋亡和坏死区分开，另一方面也不会把射线等诱导发生DNA断裂的非凋亡细胞判断为凋亡细胞。 极少数细胞凋亡时没有DNA断裂，此时不适用TUNEL法检测。在个别类型的坏死细胞中也发现TUNEL检测呈阳性。在需要严格判断细胞凋亡的情况下，最好同时检测多个凋亡指标。 本试剂盒足够检测20个样品。 保存条件： -20℃保存，荧光标记液需避光保存。 注意事项： 需自备用于洗涤细胞的PBS或HBSS，用于封片的抗荧光淬灭封片液(P0126)，用于固定的4%多聚甲醛或向碧云天订购免疫染色固定液(P0098)，同时需自备含0.1％ Triton X-100的PBS或向碧云天订购免疫染色洗涤液(P0106)。 如果用于石蜡切片的检测，需自备蛋白酶K，二甲苯。蛋白酶K(ST533)可以向碧云天订购。 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 使用说明： 1.对于贴壁细胞或细胞涂片： a.PBS或HBSS洗涤一次。 b.如果细胞贴得不牢，可以干燥样品使细胞贴得更牢。 c.用4%多聚甲醛或碧云天生产的免疫染色固定液(P0098)固定细胞30-60分钟。 d.用PBS或HBSS洗涤一次。 e.加入含0.1％ Triton X-100的PBS或碧云天生产的免疫染色洗涤液(P0106)，冰浴孵育2分钟。 f.转步骤5。 2.对于悬浮细胞或细胞悬液： a.收集细胞(不超过200万细胞)，PBS或HBSS洗涤一次。 b.用4%多聚甲醛或碧云天生产的免疫染色固定液(P0098)固定细胞30-60分钟。为防止细胞聚集成团，宜在侧摆摇床或 水平摇床上缓慢摇动的同时进行固定。 c.用PBS或HBSS洗涤一次。

YY-T1182-2010核酸扩增检测用试剂(盒)

YY/T 1182-2010 核酸扩增检测用试剂（盒） 1围 本标准规定了核酸扩增检测试剂（盒）【以下简称“试剂（盒）”】的术语和定义、命名和分类、技术要求、试验方法、标识、标签和说明书、包装、运输和贮存等。 本标准适用于核酸扩增检测试剂（盒）的质量控制。核酸扩增检测试剂（盒）应包括核酸提取、核酸扩增及产物分析试剂组份，如核酸扩增检测试剂（盒）不含有核酸提取组份，应由生产企业说明或指定提取试剂（盒）。 本标准不适用于基因分型、基因芯片和病毒基因分型/突变检测用试剂（盒）及血源筛查的试剂（盒）。 2规性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 21415-2008 体外诊断医疗器械生物样品中量的测量校准品和控制物质赋值的计量学溯源性 3术语和定义 以下术语和定义适用于本文件。 3.1 聚合酶链反应polymerase chain reaction,PCR 聚合酶链反应或多聚酶链反应是一种对特定的DNA或RNA片段在体外进行快速扩增的方法，由变性-退火-延伸三个基本反应步骤构成。 3.2 PCR杂交（膜上、板上）PCR hybridization 具有一定同源序列的两条核酸单链（DNA或RNA）可以通过氢键的方式，按碱基互补配对原则相结合，探针结合于特定核酸序列或PCR产物的杂交过程可以在液相中进行，也可以将其中一个固定在固相载体上进行。 3.3 PCR 电泳 PCR electrophoresis 根据PCR产物分子质量和所带电荷的不同在电场中进行分离的技术。 3.4实时荧光PCR real-time polymerase chain reaction,PCR

血细胞分析仪操作规程

DIRUI迪瑞 BF-6700 全自动无分类血细胞分析仪操作规程 一、开机程序 1.1开机前的检查、准备 （1）试剂：检查稀释液、溶血剂是否充足，有无过期；试剂管路是否弯折，连接是否可靠。（2）废液桶：废液桶是否有足够的空间盛装废液，如废液桶满，应及时倒掉并清理。（3）打印机：检查打印机是否正确安装，打印纸是否充足。 （4）供电电源：检查电源线是否正确连接。 （5）连接：检查分析仪与计算机主机之间通讯电缆是否正确连接；外置条码扫描仪的电缆线是否与计算机连接就绪。 1.2开机 （1）打开分析仪右侧的电源开关，电源指示灯亮。 （2）打开电脑电源后启动分析仪软件。输入用户名和密码，登录软件。（初始用户名为Admin，初始密码为1。） （3）自检过程结束后，系统进入操作界面。 二、校准 分析仪提供三种校准方式：人工校准、校准物校准和新鲜血校准。 2.1人工校准 在“人工校准”界面直接更改校准系数，点击“保存”键。 2.2校准物校准与新鲜血校准 在校准物校准和新鲜血校准中，所有与校准相关的数学计算都由分析仪自动完成，同一次校准物校准测试需用同一批号的校准物，测试3—5次，建议5次。新鲜血校准测试需3—5各样本，每个样本测5次。校准后得到的校准系数自动保存在“人工校准”界面。 校准物校准步骤： 在校准物校准界面点击【开始计数】键后，封闭进样器仓门自动打开，将校准物放置在封闭进样器3号位上，关闭进样仓门，按分析仪前面板右侧的计数键进行测试，测试结构自动保存，测试5次后点击【保存】键，校准系数自动存入“人工校准”界面的“校准系数”中。

新鲜血校准的操作步骤与上述相同。 三、质控程序 每天开机后要先进行质控测试。 3.1质控设置 在“质控”的设置界面下，设置质控品信息。 3.2质控测试 在“质控计数”界面进行质控测试。点击【开始计数】键后，封闭进样器仓门自动打开，将质控品放置在1号位上，关闭进样仓门，按分析仪前面板右侧计数键进行质控测试。可在“质控图”及“质控列表”中查询质控结果。 四、常规操作程序 4.1试剂注册 4.1.1自动扫描 在分析仪软件上点击【服务】，在“维护”栏中点击【试剂注册】，用手持条码阅读器扫描试剂条形码，软件提示“注册成功”。 4.1.2手动输入 如果条形码由于脏污、脱落等原因不能被扫描时，可手工输入条形码信息：在输入框中录入正确的条码信息，点击【确定】键，试剂条码注册成功。 注：更换整瓶/整桶试剂时，注册成功后，在“服务”→“维护”→“更换/灌注”界面下点击【更换】键，软件提示“正在更换……”，当软件提示“操作完成”时，点击【确定】键，即完成试剂的更换。 4.2样本登记 （1）在分析仪软件上点击【样本登记】，然后点击【设置】，可以设置患者信息的输入项目。设置完成后可按此设置内容作为默认项目类型进行样本信息输入。 （2）点击【新增】，在界面左侧编辑区可直接输入样本编号、条码号、病历号、患者姓名、年龄、床号；采样/送检时间可在其右侧的下拉框中直接选择时间；参考值、性别、科室、送检医生均可在其右侧的下拉框中选择，或直接输入预先在“设置”中设置的代码。编辑后点击【保存】键或者按键盘回车键即可进行下一样本的编辑。 注：也可先进行样本测试，测试后在“数据浏览”界面编辑样本信息。

细胞凋亡试剂盒(FITC)

凯基Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒 （Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit） Cat number：KGA For Research Use Only Store at4℃for one year Expire date： 一、试剂盒说明 在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸（PS）只分布在细胞膜脂质双层的内侧，而在细胞凋亡早期，细胞膜中的磷脂酰丝氨酸（PS）由脂膜内侧翻向外侧。Annexin V是一种分子量为35~36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin V 被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。将Annexin V进行荧光素（EGFP、FITC）标记，以标记了的Annexin V作为荧光探针，利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生。 碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但对凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI能够透过细胞膜而使细胞核染红。因此将Annexin V与PI匹配使用，就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。 本试剂盒可应用于培养细胞凋亡检测（不推荐用于检测组织样本）。 二、试剂盒组份 组份Cat: KGA105 (10 assays) Cat: KGA106 (20 assays) Cat: KGA107 (50 assays) Cat: KGA108 (100 assays) 储存条件 AnnexinV-FITC 50μL 100μL 250μL 500μL 4℃避光 Propidium Iodide 50μL 100μL 250μL 500μL 4℃避光 Binding Buffer 5 mL 10.0 mL 25 mL 50 mL 4℃ 三、试剂盒以外自备仪器和试剂 流式细胞仪或荧光显微镜、低速离心机、微量移液器 1.5m L Microtube、载玻片、盖玻片（荧光显微镜观察需用）、PBS、不含EDTA的胰酶消化液 四、使用注意事项 1．微量试剂取用前请离心集液。 2．Annexin V-FITC，Propidium Iodide （PI）避光保存及使用。 3．Propidium Iodide （PI）有毒，操作时要戴手套。 4．本试剂盒适用于检测活细胞，流式细胞仪检测时，细胞数量不以应低于1×105，，不推荐用于检测组织样本。 5．推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞，需用不含EDTA的胰酶消化，如消化不当，可能引起假阳性，而用细胞刮子会造成细胞粘连成团，而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA 的PBS中，防止进一步的损伤。 6．细胞固定后可能导致荧光的淬灭，请不要固定样品。 7．因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同，因而流式检测的荧光补偿也不同，因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照，进行荧光补偿的调节。 五、操作方法 1．悬浮细胞离心（2000rpm离心5min）收集；贴壁细胞用不含EDTA的胰酶消化收集（注：胰酶消化时间不易过长，否则容易引起假阳性）； 2．用PBS洗涤细胞二次（2000rpm离心5min）收集1~5×105细胞；

血细胞分析仪

1.奥巴克斯(Abacus) ： Abacus、Abacus Junior 2. 雅培(Abbott) ： CELL-DYN1200、CELL-DYN 1500、CELL-DYN 1600、CELL-DYN 1700、CELL-DYN 3000、CELL-DYN 3200、CELL-DYN 3500、CELL-DYN 3700、CELL-DYN 1800 3. ABX ： Micros 60、Micros 45、Micros vit、Micros CRP、Pentra60、 Pentra120、Pentra80 4. 拜耳(Bayer) ： Advia 60、Advia 70、Advia 120、Advia 2120 5. 倍爱康(Biochem) ： Spirit 6. 百特(BT) ： 2100 7. Careside ： H2000 8. 库尔特(Coulter) ： Act diff / diff II、Gens、Md2、Maxm、Stks、Act 5Diff、HmX 9. 丹能(Danam) ： Excell 18、Excell 22 10. Hema ： Screen 18、Star II、Star III、Hs Compact 11. HL ： 2200、2400 12. 法国Hycel ： Celly、Hemacell、Diana5 13. MC ： 1200、1200-2 14.日本光电(Mek) ：Mek -5216K、Mek -6108K、Mek -6318K、Mek -8118K、Mek - 7222 15. Medicon ： 4000 16. 麦道尼克 (Medonic) ： CA530、CA570 17. Melet ： Ms4、Ms9、MS9-3H、Ms4-5、Ms9-3 18. 深圳迈瑞(Mindray) ： Bc2000、Bc3000、Bc1800、Bc2200、Bc2800、Bc3200、 Bc2300、Bc5500、Bc2600、Bc2900、Bc5100、Bc5500、Bc2100、Bc5380 19. 日本东亚(Sysmex) ： F800、F820、K4500、Kx21、Poch-100i、Sf3000、Kx21N、 Poch-80i、Xt1800i、Xt200i、Xs800i、Xs1000i

细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒(PI法)

细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒(PI法) 产品简介： Leagene细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒(Cell Cycle and Apoptosis Analysis Kit)是一种采用经典的碘化丙啶染色(PI staining)方法进行细胞周期与细胞凋亡分析的检测试剂盒。碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一种可以嵌合到双链DNA和RNA的碱基对中与直接和的荧光染料，无碱基特异性。碘化丙啶与双链DNA结合后可以产生荧光，并且荧光强度和双链DNA的含量成正比。细胞内的DNA被Propidium Iodide染色后，可以用流式细胞仪对细胞进行DNA含量测定，然后根据DNA含量的分布情况，可以进行细胞周期和细胞凋亡分析。 碘化丙啶染色后，假设G0/G1期细胞的荧光强度为1，那么含有双份基因组DNA的G2/M期细胞的荧光强度的理论值为2，正在进行DNA复制的S期细胞的荧光强度为1-2之间。凋亡细胞由于细胞核发生浓缩以及发生DNA片段化(DNA fragmentation)导致部分基因组DNA片断在染色过程中丢失，因此凋亡细胞碘化丙啶染色后呈现明显的弱染，即荧光强度小于1，在流式检测的荧光图上出现所谓的sub-G1峰，即凋亡细胞峰。 细胞凋亡时，流式细胞检测可呈现亚二倍体核型的特征，根据光散射的特点，PI染色可以区分细胞凋亡和细胞坏死的细胞峰型。细胞凋亡时，出现凋亡细胞皱缩、染色质浓缩、核碎裂，产生凋亡小体，使细胞的前向光散射低于正常。在细胞凋亡的早期，细胞对前向角光散射的能力显著降低，对侧向光散射的能力增加或没有变化。在细胞凋亡的晚期，前向和侧向光散射的信号均降低。细胞坏死时细胞多表现为细胞肿胀，因此前向光散射高于正常，对侧向光散射高于正常。 Leagene Cell Cycle and Apoptosis Analysis Kit经常用于培养的贴壁或悬浮细胞的细胞周期与细胞凋亡检测，亦可用于区分细胞凋亡和细胞坏死。该试剂盒检测细胞含量范围一般为0.1～1×106之间。 主要成分：

翻译好的罗氏公司Tunel试剂盒操作说明书

罗氏(R o c h e)公司T u n e l试剂盒操作说明书(Insitucelldeathdetectionkit-POD法) 一、原理： TUNEL（TdT-mediateddUTPnickendlabeling）细胞凋亡检测试剂盒是用来检测组织细胞在凋亡早期过程中细胞核DNA的断裂情况。其原理是荧光素（fluorescein）标记的dUTP在脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TdTEnzyme）的作用下，可以连接到凋亡细胞中断裂DNA的3’-OH末端，并与连接辣根过氧化酶（HRP，horse-radishperoxidase）的荧光素抗体特异性结合，后者又与HRP底物二氨基联苯胺（DAB）反应产生很强的颜色反应（呈深棕色），特异准确地定位正在凋亡的细胞，因而在光学显微镜下即可观察凋亡细胞；由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有DNA断裂，因而没有3‘-OH形成，很少能够被染色。本试剂盒适用于组织样本（石蜡包埋、冰冻和超薄切片）和细胞样本（细胞涂片）在单细胞水平上的凋亡原位检测。还可应用于抗肿瘤药的药效评价，以及通过双色法确定细胞死亡类型和分化阶段。 二、器材与试剂 器材：光学显微镜及其成像系统、小型染色缸、湿盒（塑料饭盒与纱布）、塑料盖玻片或封口膜、吸管、各种规格的加样器及枪头等； 试剂：试剂盒含： 1号（蓝盖）EnzymeSolution酶溶液：TdT10×、 2号（紫盖）LabelSolution标记液：荧光素标记的dUTP1×、

3号（棕瓶）Converter-POD:标记荧光素抗体的HRP； 自备试剂：PBS、双蒸水、二甲苯、梯度乙醇（100、95、90、80、70%）、 DAB工作液（临用前配制，5μl20×DAB+1μL30%H2O2+94μlPBS）、 ProteinaseK工作液（10-20μg/mlin10mMTris/HCl，pH7.4-8）或细胞通透液（0.1%TritonX-100溶于0.1%柠檬酸钠，临用前配制）、 苏木素或甲基绿、DNase1（3000U/ml–3U/mlin50mMTris-HCl，pH7.5，10mMMgCl2，1mg/mlBSA）等。 三、实验步骤 操作流程图：制作石蜡切片→脱蜡、水合→细胞通透→加TUNEL反应液→加converter-POD→与底物DAB反应显色→光学显微镜计数并拍照。 具体操作步骤（石蜡包埋切片的检测）： 1.用二甲苯浸洗2次，每次5min； 2.用梯度乙醇（100、95、90、80、70%）各浸洗1次，每次3min；注：上面两步是针对石蜡切片样本的处理 4.用ProteinaseK工作液处理组织15-30min在21–37°C（温度、时间、浓度均需摸索）如果凋亡细胞染色较弱时，可用高浓度的ProteinaseK（400μg/mL）处理5分钟。其它替代方法：石蜡切片的预处理也可根椐实际情况可采用下述三种替代方法之一，即 蛋白酶K处理的步聚改用下述方法，其余步聚均相同：

迈瑞血细胞分析仪

迈瑞血细胞分析仪 Document number：WTWYT-WYWY-BTGTT-YTTYU-2018GT

BC-3000PLUS血细胞分析仪工作原理及故障分析 摘要：本文主要介绍了BC-3000PLUS血细胞分析仪的工作原理和其常见的一些故障分析与处理方法。 前言 目前我国大型医院在血常规检查时多采用五分类血球仪，但其机器及试剂成本过高，在医院大型体检和乡镇医院，三分类的血细胞分析仪任占有不可取代的地位，迈瑞BC-3000PLUS血细胞分析仪以其价格合理，性能稳定，重复性好等优势，成为市场上占有率最高的三分类血球仪。现将其工作原理和使用过程中可能遇到的问题与分享，介绍如下。 工作原理：该仪器采用库尔特.贝克曼原理对血液中的WBC、RBC、PLT进行计数，并对WBC分类，利用朗伯.比尔定律对HGB进行测量。 常见故障：该血球仪常见的故障主要分为机械故障、液路故障、结果异常等 一机械故障 BC-3000PLUS机械运动部分主要有采样针组件，用其实现标本采集、稀释、混匀等功能；注射器及注射器电机组件，用其实现样本和试剂的定量及机器管路的清洗； 1升降/偏转电机故障 BC3000PLUS血细胞分析仪采用德国进口步进电机，（）上下各一个，上面的控制升降，下面的控制偏转，在工作时，功率驱动板接受CPU板的控制信号，给电机提供驱动电压，带动采样针的上下左右的动作。在特定的位置，装有光耦，用来确定采样针的位置，上面一个长线的为升降电机光耦，下面两个短线

的为偏转电机光耦。若在规定的时间，光耦没有被触发，或者光耦没在规定时间就被触发，则机器报相对应的电机故障。 故障处理方法：若出现这样的报警，先进入服务菜单进行自检，其步骤如下，“菜单——服务——系统检测——升降/偏转电机检测”，如果结果正常，则故障消除。若故障无法消除，检测1温度是否太低2丝杆脏，阻力大3运动过程中是否有东西阻挡运动部件4上下光耦故障5电机故障6驱动板坏。另外，由于升降电机的运动优先于偏转电机，当升降电机故障时可能会导致机器报“偏转电机故障”的警。 维修案例 现象采样针无法正确偏转到计数池上方机器，机器报“偏转电机故障” 处理过程及故障分析进入维修菜单，做偏转电机自检，正常，但是再做标本，故障依旧。因为可以完成自检过程，而且上下左右的运动都比较流畅，可以排除电机自身故障、阻力过大故障、阻挡、驱动板供电不足故障，而且光耦能传递位置信号。再仔细观察计数过程，发现给偏转定位并控制采样针搅拌的那个小孔（在偏转电机上方的一个两层塑料环上）通过右光耦时机器没能控制偏转电机停下，判定是该光耦的问题，拆下擦拭后机器正常。 2注射器电机故障 BC-3000PLUS一共有三个注射器、两个电机，其中10ml注射器由一个电机推动、另外50ul和的注射器由同一个电机推动。电机工作原理跟升降/偏转电机原理相同，每个电机对应一个光耦。当光耦没有按规定被触发时，机器报相应的电机故障。