组织培养实验报告记录
组织培养实验报告记录
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3 植物组织培养实验报告
一、实验目的
1．掌握无菌操作的植物组织培养方法；
2．通过配置ms 培养基母液，掌握母液的配置和保存方法； 3．通过诱导豌豆根、茎、叶形成愈伤组织 学习愈伤组织的建立方法；
4．通过诱导豌豆茎、叶形成愈伤组织 学习愈伤组织的建立方法； 5．了解植物细胞通过分裂、增殖、分化、发育, 最终长成完整再生植株的过程, 加深对植物细胞的全能性的理解。
二、实验原理 （一）植物组织培养
植物组织培养是把植物的器官，组织以至单个细胞，应用无菌操作使其在人工条件下，能够继续生长，甚至分化发育成一完整植株的过程。植物的组织在培养条件下，原来已经分化停止生长的细胞，又能重新分裂，形成没有组织结构的细胞团，即愈伤组织。这一过程称为“脱分化作用”，已经“脱分化”的愈伤组织，在一定条件下，又能重新分化形成输导系统以及根和芽等组织和器官，这一过程称“再分化作用”。 （二）植物细胞的全能性
植物细胞的全能性即是每个植物的本细胞或性细胞都具有该植物的全套遗传基因，在一定培养条件下每个细胞都可发育成一个与母体一样的植株。 （三）组织的分化与器官建成
外植体诱导出愈伤组织后，经过继代培养，可以在愈伤组织内部形成一类分生组织即具有分生能力的小细胞团，然后，再分化成不同的器官原基。有些情况下，外植体不经愈伤组织而直接诱导出芽、根。
（四）培养基的组成
培养基中各成分的比例及浓度与细胞或组织的生长或分化所需要的最佳条件相近，似成功地使用该培养基进行组织培养的主要条件。营养培养基一般由无机营养、碳源和能源、维生素、植物激素（生长调节剂）和包括有机氮、酸和复杂物质的添加剂组成。
三、实验器材
高压灭菌锅、超净工作台、烘箱、培养室 镊子、记号笔、橡皮筋、玻
璃器皿、三角烧瓶、烧杯、量筒、剪刀、棉塞、绳子、牛皮纸、酒精灯、喷雾器等。
四、实验材料
豌豆种子
五、实验药品
药品 、70% 酒精、 0.1% 升汞、ms 培养基、蒸馏水、naoh 、 84消毒液、蔗糖、琼脂等。
六、实验步骤
（一）培养基母液的配制
表1.ms 培养基个成分的含量（单位：mg/l ）
表2.ms 培养基所需母液以及扩大倍数
名称 大量元素 微量元素 ca 盐 mg 盐 fe 盐 有机 肌醇 激素
扩大倍数 50 50 50 50 50 100 100 100
定容体积(ml)
500 500 500 500 500 200 200 50
吸取毫升数/l
20 20 20 20 20 10 10 5
（注：吸取毫升数为每升培养基所吸取的母液的体积）
表3.配制母液所需的药品及称取量
（注：根据表1与表2计算各物质的称取量）
药品名称 nh4no3 kno3 kh2po4
称取量（mg ）
41250 47500 4250
药品名称 ki
4 na2mno4?2h2o cuso4?5h2o
称取量（mg ）
20.75 6.25 0.625
cacl2?2h2o 11000 cocl2?6h2o 0.625 mgso4?7h2o 9250 肌醇 2000
feso4?4h2o 695 甘氨酸 40 na-edta 932.5 盐酸硫胺素 8 mnso4?7h2o 557.5 盐酸吡哆醇 10 znso4?7h2o 215 烟酸 10 h3bo3 155
（1） ms 大量元素母液的配制 参考表3称取一定量的下列药品用蒸馏水溶解，定容至500ml 存放于冰箱中备用。
名称
重量（mg ）
名称
重量(mg)
nh4no3 kno3
41250 47500
kh2po4 cacl2·2h2o
4250 11000
（2） ms 微量元素母液 参考表3称取一定量的下列药品用蒸馏水溶解，定容至500ml 存放于冰箱中备用。
名称 ki h3bo3 mnso4·7h2o znso4·7h2o
重量(mg) 20.75 155 557.5 215
名称 na2moo4·2h2o cuso4·5h2o cocl2·6h2o
重量(mg) 6.25 0.625 0.625
（3） ms 有机母液 参考表3称取一定量的下列药品用蒸馏水溶解，定容至200ml 存放于冰箱中备用。
名称 肌醇 烟酸 盐酸吡哆醇
重量(mg)
名称 盐酸硫胺素 甘氨酸
重量(mg)
2000 10 10
8 40
（4） ms 铁盐母液的配制 参考表3称取一定量的下列药品用蒸馏水溶解，定容至
500ml 存放于冰箱中备用。
名称 edta 二钠
重量(mg)
932.5
名称 feso4·4h2o
重量(mg)
695
（5） ms 钙盐母液的配制
参考表3称取11000mg 的cacl2?2h2o 用蒸馏水溶解定容至500ml ，保存于冰箱备用。
（6） ms 镁盐母液的配制 参考表3称取9250mg 的mgso4?7h2o 用蒸馏水溶解定容至500ml ，保存于冰箱备用。
（7） ms 肌醇母液的配制 参考表3称取2000mg 的肌醇用蒸馏水溶解定容至200ml ，保存于冰箱备用。
（8） ms 激素母液的配制 各种生长素和细胞分裂素要单独配制，不能混合在一起，生长素类一般要先用少量95%的酒精或1当量的naoh 溶解，细胞分裂素一般要先用1当量的盐酸溶解，然后再加蒸馏水定容。一般取100mg 配成100ml 母液。
（二）培养基的配制
5 以配制1l 的ms 培养基为例进行如下操作：
（1） 取1l 的大烧杯，加入适量的蒸馏水在电磁炉上加热至沸腾；
（2） 分别取（一）中配制的8种母液放入小烧杯中，然后加入，边加边搅拌；
（3） 称取30g 蔗糖加入，边加边搅拌；
（4） 称取8g 琼脂加入，边加边搅拌，知之琼脂粉溶解； （5） 定容至1l ，加入激素母液，用naoh 调ph6.0左右；
（6） 将培养基分别分装于洗好的三角瓶中，塞上棉塞包上牛皮纸用绳子扎紧；
（7） 放入消毒灭菌锅灭菌，灭菌20分钟左右；
（8） 灭菌后从灭菌锅中取出培养基，平放在实验台上令其冷却凝固。
（三）高压蒸汽灭菌锅的使用方法
具体操作步骤：
（1） 高压锅放水至平把架；
（2） 把包扎好的培养基装入高压锅；
（3） 盖上热压锅盖,上紧螺帽(注意对角拧紧螺帽)关上气阀和安全阀； （4） 然后接通电源；
（5） 压力计升至0.05mpa 时，打开放气阀,排除冷空气(此步很重要)；
（6） 排除冷空气后,关闭放气阀，待压力升到0.11mpa 位置时，开始计算灭菌时间，具体方法：当压力锅指针升至0.12mpa 时，关闭电源，待指针下降至0.11mpa 时接通电源，不断重复此操作过程，维持20分钟；
（7） 灭菌时间达到20分钟后，除去电源，打开放气阀(注意要逐渐放气)待篇二：组培实验报告
植 物 组 织 培实 验 报 告 学院：生命科学技术学院 班级：10级生物技术植物班 学号：2010193042 姓名：高学深
养
植物组织培养实验报告
实验一 母液的配制与保存
一 、实验目的
1. 学习母夜的配制方法和母液的保存方式。
2.熟悉掌握制备母液的操作。 二 、实验
原理
培养基中提供植物生长所需的营养成分，才能满足植物正常的生长发育的需求。主要包括水分、有机物质、盐类，而配制母液时将其分为大量、微量、钙盐、镁盐、铁盐、有机和肌醇分别配制。配置培养基时，为了使用方便和用量准确，通常采用母液法进行配置，即按培养基配方中各试剂的用量， 扩大若干倍后再准确称量分别先配制成一系列的母液置于冰箱中保存，使用时按比例吸取母液进行稀释配置即可。
三 、实验材料、试剂和仪器设备 1．试剂
nh4no3 ,kno3 ,kh2po4 ,cacl2·2h2o ,mgso4·7h2o,feso4·7h2o
na2-edta,mnso4·4h2o,znso4·7h2o,h3bo3,ki,na2moo4·2h2o
cuso4·5h2o,cocl2·6h2o,肌醇，甘氨酸，盐酸硫胺素，盐酸吡哆醇， 烟酸，蒸馏水。
2.仪器设备
电子天平，烧杯（50ml 、100ml 、500ml ）量筒（1000ml 、100ml 、25ml ） ， 容量瓶(1000ml 、500ml 、100ml)，移液管（10ml ，5ml ，
1ml ）试剂瓶，玻璃棒数支，药芍，称量纸等。 四、 实验步骤
1. 、计算：计算各化学成分所需要的量。大量、微量和盐类按扩大50倍，定容500ml
的配制计算。有机和肌醇按扩大100倍，定容200ml 的配制计算。计算后制成配方
表。
2、制定标签：裁取7张适当大小的牛皮纸，用铅笔写上ms ，种类，并标明此类母液所含物质，质量，定容体积，扩大倍数吸取量，制备人，制备日
6 期。。以大量为例如图：
3、大量元素母液的配制 ：先用量筒量取300ml 蒸馏水放入 500ml 烧杯中，按照配方表中用量依次分别称取： nh4no3 ,kno3 , kh2po4 , 待第一种化合物完全溶解后再 加入第二种化合物，溶解过程用玻璃棒搅拌，当最后一种化合物完全溶解后，将溶液转移至 500ml 容量瓶中，并用蒸馏水将烧杯和玻璃棒洗涤3次，每次约50ml ，而后用蒸馏水定容至 500ml ，然后转移至细口试剂瓶中，贴上标签，并置于冰
箱中低温保存备用。
4、微量元素母液的配制按照配方表中用量用电子天平依次称取 mnso4·4h2o,
znso4·7h2o ， h3bo3, ki, na2moo4·2h2o 。cuso4·5h2o 和 cocl2·6h2o 先稀释后用移液管吸取,按制备母液 i 的方法逐个溶 解，转移至容量瓶中，洗涤烧杯，然后定容至 500ml ，转入细口试剂瓶中，贴上标签，注明 母液名称，放大倍数，配制日期，配制人，并置于冰箱中保存备用。
5、 铁盐母液的制备 把 feso4·7h2o 和 na2-edta 分别置于适量蒸馏水中，加热搅拌使之完全溶解，保持加热，把 feso4 倒入 na2-edta 溶液中并搅拌，接近沸腾时停止加热，冷却后调 ph 到 5.5，将溶液转移至 500ml 容量瓶中，洗涤后用蒸馏水定容至 500ml ，转入细口试 剂瓶中，用力振荡 1～2min ，贴上标签，注明母液名称，放大倍数，配制日期， 配制人，并置于冰箱中保存备用。
6、 有机化合物母液的制备按配方表中用量依次称取：盐酸硫胺素,盐酸吡哆醇，烟酸, 甘氨酸，用蒸馏水溶解后，定容200ml 转入细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称，放大倍数，配制日期，配制人， 并置于冰箱中保存备用。
7、植物生长物质母液制备 naa 母液:准确称取 10mg,用少量 1mol/l naoh 溶解后加蒸馏水定容至 100ml,即 配制成 0.1mg/ml 的 naa 母液，转入细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称， 放大倍数，配制日期，配制人，并置于冰箱中保存备用。 6–ba 母液配制方法相似，浓度为 2mg/ml
五、试验结果分析及注意事项
1、kh2po4是吸热溶解，可以把烧杯浸在温水中溶解。
2、制作标签时只能能用铅笔写。 实验二、培养基的制备与灭菌
一 、 实验目的
1、学习母液法配制培养基。
2、学习用牛皮纸包三角瓶口的防污染方法。
3、学习灭菌锅的使用。 二 、 实验原理 为防止组织培养各物质发生反应所以把微量和铁盐混在一起，为了避免物质的反应，所以要迅速倒入沸腾的蒸馏水中，琼脂应慢慢倒入，并边搅拌边倒入。组织培养所用的培养基含有植物生长所必需的各类营养物质， 同时也是微生物繁殖的极好场所，因此必须对培养基灭菌处理，以确保无菌操作的顺利进行。 三 、 实验材料、试剂和仪器设备
1. 试剂： 琼脂，蔗糖，蒸馏水，1mol/l naoh,各类母液
2.仪器设备：电子天平，烧
杯，量筒，移液管，玻璃棒，药芍，称量纸，ph 试纸，锥形瓶，牛皮纸，棉塞等。
四、 实验步骤
1. 准备 将所需的各种母液按顺序放好，将洁净的各种玻璃器皿放在指定置。
2. .大量的量取 取 50ml 量筒一个，将大量、有机、肌醇、镁盐，篇三：植物组织培养
实验报告
植
组 织 培 养 验 报 告
班级：学号： 2011192017 姓名： 李
鹏
物
实
植物组织培养实验报告
7 实验一 植物组织培养母液的配制
一 、实验目的
1. 了解植物组织培养基本培养基的组分及其作用。
2.学习掌握植物组织培养ms 培养基
的配制方法。 二 、实验原理
培养基是植物组织培养中离体组织赖以生存和发育的条件。大多数培养基的成分是有无机盐、有机化合物（碳源、维生素、肌醇、氨基酸等）、生长调节物质、水分和其他附加物等五大类物质组成。
无机盐类由大量元素和微量元素组成。大量元素中，氮类化合物主要以硝酸类和铵类化合物的形式存在，但在培养基中多用硝酸类，也可以将硝酸类和铵类混合使用；磷和硫常用磷酸盐和硫酸盐来提供；钾是培养基中主要的阳离子；钙、钠、镁的需要量较少。微量元素包括碘、锰、铜、锌、钴、铁。培养基中的铁离子，大多数以螯合物的形式存在，即硫酸亚铁与乙二胺四乙酸二钠的混合。
有机化合物包括碳源、维生素、肌醇、氨基酸等。培养中的植物组织和细胞的光合作用较弱，因此，需要在培养基中附加一些碳水化合物物来提供营养需要。培养基中的碳水化合物通常为蔗糖。蔗糖除了作为培养基的碳源和能源外，对维持培养基的渗透压也起着重要的作用。在培养基中加入维生素有助于细胞的分裂和增长。一般包括vb1、b6、烟酸、生物素、叶酸、泛酸钙、vc 。肌醇在糖类的相互转化、维生素和激素的利用等方面具有重要的催进作用。
常用的植物生长调节物质包括以下三类：①生长素类：吲哚乙酸（iaa ）、萘乙酸（naa ）、二氯苯氧乙酸（2,4-d ）②细胞分裂素：玉米素（zt ）6-苄基嘌呤（6-ba ）和激动素（kt ）。③赤霉素：组织培养中使用的赤霉素只有一种，即赤霉酸（ga3）。
培养基中的其他附加物包括人工合成和天然的有机物附加物。其中最为常见的为酵母提取物。琼脂作为培养基的支持物，也是最常用的邮寄附加物，他可以是培养基呈固体状态，以利于组织和细胞的培养。
植物组织培养是否成功，在很大的程度上取决于培养基的选择之上。目前普遍使用的是ms 培养基。ms 固体培养基可用于诱导遇上组织，或用于胚胎、茎段、茎尖及花药的培养等。ms 培养基的硝酸盐、钾和铵的含量略高于其他的培养基，也是它被普遍使用的原因之一。 三 、实验材料、试剂、配方和仪器设备 1．试剂
nh4no3 ,kno3 ,kh2po4 ,cacl2·2h2o ,mgso4·7h2o,feso4·7h2o
na2-edta,mnso4·4h2o,znso4·7h2o,h3bo3,ki,na2moo4·2h2o
cuso4·5h2o,cocl2·6h2o,肌醇，甘氨酸，盐酸硫胺素，盐酸吡哆醇， 烟酸，蒸馏水。
2.仪器设备
电子天平，烧杯（50ml 、100ml 、500ml ）量筒（1000ml 、100ml 、25ml ） ， 容量瓶(1000ml 、500ml 、100ml)，移液管（10ml ，5ml ，1ml ）试剂瓶，玻璃棒数支，药匙，称量纸等。
3、培养基配方
化合物名称 nh4no3 kno3 kh2po4 化合物名称 mnso4·4h2o znso4·7h2o h3bo3 ki
na2moo4·2h2o cuso4·5h2o cocl2·6h2o 化合物名称 feso4·7h2o na2-edta 化合物名称 肌醇 甘氨酸
烟酸硫胺素 盐酸吡哆醇 烟酸 ms 培养基有机物质母液的配制
培养基浓度(mg/l) 称取质量(g) 100 2 2 0.2 0.4 8 0.5 10 0.5 10 ms 培养基大量元素母液配制 培养基浓度(mg/l) 称取质量(g) 1650 41.25 1900 47.50 170
4.25 ms 培养基微量元素母液配制 培养基浓度(mg/l) 称取质量(g) 22.3 5
5.7 8.6 21.5
6.2 11.5 0.83 20.75 0.25 6.25 0.0025 0.625 0.0025 0.625 ms 培养基铁盐母液配制 培养基浓度(mg/l) 称取质量(g)
27.8 6.95 37.3 9.32
四、 实验步骤
8 1. 、计算：计算各化学成分所需要的量。大量、微量和盐类按扩大50倍，定容500ml
的配制计算。有机和肌醇按扩大100倍，定容200ml 的配制计算。计算后制成配方
表。
2、制定标签：裁取适当大小的牛皮纸，用铅笔写上ms ，种类，并标明此类母液所含物质，质量，定容体积，扩大倍数吸取量，制备人，制备日期以大量为例如图：
3、大量元素母液的配制 ：先用量筒量取300ml 蒸馏水放入 500ml 烧杯中，按照配方表中用量依次分别称取： nh4no3 ,kno3 , kh2po4 , 待第一种化合物完全溶解后再 加入第二种化合物，溶解过程用玻璃棒搅拌，当最后一种化合物完全溶解后，将溶液转移至 500ml 容量瓶中，并用蒸馏水将烧杯和玻璃棒洗涤3次，每次约50ml ，而后用蒸馏水定容至 500ml ，然后转移至细口试剂瓶中，贴上标签，并置于冰箱中低温保存备用。
4、微量元素母液的配制按照配方表中用量用电子天平依次称取 mnso4·4h2o,
znso4·7h2o ， h3bo3, ki, na2moo4·2h2o 。cuso4·5h2o 和 cocl2·6h2o 先稀释后用移液管吸取,按制备母液 i 的方法逐个溶 解，转移至容量瓶中，洗涤烧杯，然后定容至 500ml ，转入细口试剂瓶中，贴上标签，注明 母液名称，放大倍数，配制日期，配制人，并置于冰箱中保存备用。
5、 铁盐母液的制备 把 feso4·7h2o 和 na2-edta 分别置于适量蒸馏水中，加热搅拌使之完全溶解，保持加热，把 feso4 倒入 na2-edta 溶液中并搅拌，接近沸腾时停止加热，冷却后调 ph 到 5.5，将溶液转移至 500ml 容量瓶中，洗涤后用蒸馏水定容至 500ml ，转入细口试 剂瓶中，用力振荡 1～2min ，贴上标签，注明母液名称，放大倍数，配制日期， 配制人，并置于冰箱中保存备用。
6、 有机化合物母液的制备按配方表中用量依次称取：盐酸硫胺素,盐酸吡哆醇，烟酸, 甘氨酸，用蒸馏水溶解后，定容200ml 转入细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称，放大倍数，配制日期，配制人， 并置于冰箱中保存备用。
7、植物生长物质母液制备 naa 母液:准确称取 10mg,用少量 1mol/l naoh 溶解后加蒸馏水定容至 100ml,即 配制成 0.1mg/ml 的 naa 母液，转入细口试
剂瓶中，贴上标签，注明母液名称， 放大倍数，配制日期，配制人，并置于冰箱中保存备用。 6–ba 母液配制方法相似，浓度为 2mg/ml 五、试验结果分析及注意事项
1、配制母液时注意药品只能出不能进。
2、制作标签时只能能用铅笔写，防止油性笔字迹在高压灭菌后模糊不清。
实验二、培养基的制备与灭菌
一 、 实验目的
1、学习母液法配制培养基。
2、学习用牛皮纸包三角瓶口的防污染方法。
3、学习并熟悉自动化灭菌锅的操作和保护。
二 、 实验原理
为防止组织培养各物质发生反应所以把微量和铁盐混在一起，为了避免物质的反应，所以要迅速倒入沸腾的蒸馏水中，琼脂应慢慢倒入，并边搅拌边倒入。组织培养所用的培养基含有植物生长所必需的各类营养物质， 同时也是微生物繁殖的极好场所，因此必须对培养基灭菌处理，以确保无菌操作的顺利进行。 三 、 实验材料、试剂和仪器设备
1. 试剂： 琼脂，蔗糖，蒸馏水，1mol/l naoh,各类母液
2. 仪器设备：电子天平，烧杯，量筒，移液管，玻璃棒，药芍，称量纸，ph 试纸，锥
形瓶，牛皮纸，棉塞等。 四、 实验步骤
1. 准备 将所需的各种母液按顺序放好，将洁净的各种玻璃器皿放在指定置。 2 .大量
的量取 取 50ml 量筒一个，将大量、有机、肌醇、镁盐，钙盐、按配方表中的用
量依次称取并倒入500ml 烧杯中。
3 .微量铁盐的量取 取 50ml 量筒一个，将微量和铁盐按配方表中的用量称取并倒入100ml 烧杯中。
9 4.培养基配制 取瓷盆一个，加入 1.5l 蒸馏水，置于电磁炉上加热，将称量好的所有母液倒入瓷盆中，用玻璃棒不断搅拌。再称量琼脂 16 克，白砂糖 60 克，依次倒入瓷盆中，边倒入边搅拌，待琼脂和白砂糖完全溶解后，，并定容至 2l 。 5、调ph 用 1mol/l naoh 和1mol ／l hcl 调 ph 至 6.0。
6、 分装 把培养基分装到三角瓶中，每瓶约50ml ，用棉塞塞好再用牛皮纸，细绳包扎好，待灭菌。
7、灭菌 将所有的三角瓶整齐的放在灭菌锅的铁丝篮中，将温度调为121℃灭菌20min 。灭完后摆放在水平的实验桌上勿动。 五、 试验结果分析及注意事项
1、配制培养基前先大致估计一下药品数量，不够时提前配制。
2、三角瓶灭菌时注意要放干净冷空气。
3、加的药品种类较多，切忌加错。
4、注意把三角瓶用棉塞塞好和用牛皮纸包好。
5、灭完菌的三角瓶勿动，等待培养基冷却凝固。
6、琼脂不可加太快，以防加太快琼脂结块。 实验三 无菌植株的建立 一 、 实验目的
1、通过实验，初步掌握外植体材料的消毒。
2、学习超净工作台灭菌方法和操作要求。篇四：植物组织培养综合实验报告模块(2012年3月)
《植物组织培养大实验》综合报告书写说明
植物组织培养这一个综合性很强的大实验，《植物组织培养大实验》课程实验由7个分实验组成：① 实验用具的洗涤和灭菌，② ms 培养基母液的配制，③ ms 培养基的配制和灭菌，④ 植物外植体消毒和接种，⑤ 愈伤组织的诱导（又称原代培养或初代培养），⑥ 愈伤组织的继代培养，⑦ 愈伤组织的生根培养（植株再生）。
实验报告是对实验观察、比较所得结果的真实记载，是科学的记录。实验报告的形式可以根据实验风容的不同而分文字描述、绘图和列表3种形式。为了减少实验报告写作过程中的重复性和减轻学生完成实验报告的负担，《植物组织培养大实验》课程实验报告由5次综合实验报告组成，即：
1、《植物组织培养大实验》综合报告（一）（必做）：实验用具的洗涤和灭菌、ms 培养基母液及ms 培养基的配制和灭菌；
2、《植物组织培养大实验》综合报告（二）（必做）：植物外植体消毒和接种；
3、《植物组织培养大实验》综合报告（三）（必做）：愈伤组织的诱导（又称原代培养或初代培养）；
4、《植物组织培养大实验》综合报告（四）（必做）：愈伤组织的继代培养；
5、《植物组织培养大实验》综合报告（五）（选做）：愈伤组织的生根培养（植株再生）。 学生在写《植物组织培养大实验》综合报告时，实验报告中的实验内容、实验目的、实验原理、仪器设备和试剂等4部分可按照教师拟定的《植物组织培养大实验》综合报告（一）至
（五）中的内容写。实验方法部分可参照教师编写的实验指导。实验结果与分析是学生对自已实验结果的真实记载和分析，思考题是教师为了让学生加深对植物组织培养的原理与技术的理解和掌握而设计的。因此，综合报告中的实验结果与分析、思考题2部分内容，要求学生必需独立完成。
《植物组织培养大实验》综合报告（一）（必做）
【实验内容】 实验用具的洗涤和灭菌、ms 培养基母液及ms 培养基的配制和灭菌
【实验目的】
1、掌握植物组织培养中常用实验用具的洗涤、灭菌方法及注意事项；
2、掌握ms 培养基母液的配制方法和注意事项；
3、掌握ms 培养基的配制、灭菌方法和注意事项。
【实验原理】
对植物外植体进行离体培养时，培养基提供生长所需的营养成分等。培养基的主要成分包括无机营养物、碳源、维生素、植物生长物质和有机附加物等。
10 配制培养基通常都按配方浓度的若干倍称量，配制成一系列的母液置于冰箱保存，使用时按比例稀释。一般要配下列母液：大量元素母液、微量元素母液、铁盐母液、有机化合物母液、植物生长物质母液。
凡是暴露在(未经处理的)空气中的物体，曾经接触过自然水源的物体都是有菌的。培养基中含有大量的有机物，特别是含糖量较高，是微生物滋生、繁殖的极好场所。而接种材料需要在无菌得件下培养很长的时间，如果培养基被微生物所污染，便达不到培养的预期结果。
因此，培养基的灭菌，是植物组织培养中十分重要的环节。培养基灭菌的方法有多种，本实验田采用高压蒸气灭菌法（即湿热灭菌法，其原理是：在密闭的蒸锅内，其中的蒸汽不能外溢，压力不断上升，使水的沸点不断提高，从而锅内温度也随之增加。在0.10mpa 的压力下，锅内温度达121℃。在此蒸汽温度下，可以很快杀死各种细菌及其高度耐热的芽孢。
【仪器设备和试剂】
1、仪器设备
高压蒸气灭菌锅，电子天平，冰箱，烧杯（100ml ，500ml ，1000ml ），量筒（50ml ，100ml ，1000ml ），试剂瓶（100ml ，500ml ，1000ml ），三角瓶（50ml ，100ml ，250ml ），培养瓶（100ml ，150ml ）或培养皿（d90mm ，d1 20mm ），洗耳球、刻度吸管，ph 试纸，漏斗，玻璃棒，记号笔，线绳，牛皮纸或报纸，石棉网。
2．试剂
重铬酸钾(k2cr2o7)、硫酸(h2so4)、硝酸钾（kno3）、硝酸铵（nh4n03）、硫酸镁（mgs04·7h20）、磷酸二氢钾（kh2po4）、氯化钠（cacl2·2h20）、硫酸锰（mn04·4h20）、硫酸锌（zns04·7h20）、
硼酸（h3bo3）、碘化钾（ki ）、钼酸钠（namo04·2h20）、硫酸铜（cus04·5h2o ）、氯化钴（cocl2·6h20）、乙二胺四乙酸二钠（ na2-edta ）、硫酸亚铁（fes04·7h20）、甘氨酸、盐酸硫胺素（vit·b1）、盐酸吡哆素（vit·b6）、肌醇、2,4-d 、6-ba 、 1 mol ／l 盐酸、1 mol ／l 氢氧化钠、蔗糖、琼脂。
【实验方法】
1、简述玻璃器皿的洗涤和灭菌方法；
2、简述ms 培养基母液（包括大量元素母液、微量元素母液、铁盐母液、有机化合物母液、植物生长物质母液等5种母液）的配制方法；
3、简述ms 培养基配制（按照配制1l 培养基的量进行描述）和灭菌方法。
【思考题】
1、什么是植物组织培养概念？
在含有营养物质及植物生长物质的培养液中，培养离体植物组织（器官或细胞）并诱导使其长成完整植株的技术 植物的组织培养是根据植物细胞具有全能性这个理论，近几十年来发展起来的一项无性繁殖的新技术。植物的组织培养广义又叫离体培养，指从植物体分离出符合需要的组织.器官或细胞，原生质体等，通过无菌操作，在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术。狭义是指组培指用植物各部分组织，如形成层.薄壁组织.叶肉组织.胚乳等进行培养获得再生植株，也指在培养过程中从各器官上产生愈伤组织的培养，愈伤组织再经过再分化形成再生植物。
2、什么是外植体的含义？根据外植体的不同，植物组织培养可以分为几种类型？
外植体 用于离体培养的初始材料称为外植体，如在植物快速繁殖中从母株上切取的、用于消毒培养的茎芽、茎段、叶片或分生组织等。通常外植体的选择与植物组织培养快速繁殖成功与否有着密切联系，在建立植物组织培养快速繁殖体系应首先考虑采用何种外植体来开始培养。决定外植体选择的因素主要是来源、数量、消毒难易程度、以往经验等。在兰花组培中最为常用的
外植体是茎尖和种子。
3、植物组织培养有哪些特点？
形态类似，结构相同，功能相同